Anda di halaman 1dari 15

LONG-ECHO TIME PADA MR SPEKTROSKOPI UNTUK DETEKSI

ASETILKARNITIN OTOT SKELETAL

Model hewan menunjukkan bahwa produksi asetilkarnitin sangat penting untuk


menjaga fleksibilitas metabolisme dan sensitivitas insulin. Karena metode saat ini untuk
mendeteksi asetilkarnitin melibatkan biopsi dari jaringan, alternatif non-invasif untuk
mengukur konsentrasi asetilkarnitin dapat memfasilitasi pemahaman kita tentang relevansi
fisiologis pada manusia. Di sini, kami menyelidiki penggunaan long-echo time (TE) proton
magnetic resonance spectroscopy (1H-MRS) untuk mengukur konsentrasi asetilkarnitin otot
rangka pada scanner klinis 3T. Kami menerapkan long-TE 1H-MRS untuk mengukur
asetilkarnitin pada daya tahan tubuh atlet, subjek kurus menetap dan obesitas, dan diabetes
melitus tipe 2 (DMT2) pasien untuk mencakup sensitivitas insulin spektrum yang luas. Suatu
Protokol long-TE 1H-MRS dilaksanakan untuk deteksi asetilkarnitin otot rangka pada
individu-individu. Ada perbedaan dalam sensitivitas insulin, yang diukur dengan klem
hyperinsulinemic-euglycemic, dan fungsi mitokondria otot rangka, yang diukur dengan
fosfor-MRS (31p-MRS), diseluruh kelompok. Sensitivitas Insulin dan fungsi mitokondria
yang tertinggi pada atlet terlatih dan terendah pada pasien DMT2. Konsentrasi asetilkarnitin
Otot rangka menunjukkan distribusi timbal balik, dengan konsentrasi asetilkarnitin yang
berhubungan dengan mean sensitivitas insulin pada masing-masing kelompok. Hasil ini
menunjukkan bahwa mengukur konsentrasi asetilkarnitin dengan 1H-MRS adalah layak pada
scanner klinis MR dan mendukung hipotesis bahwa pasien DMT2 ditandai dengan
pembentukan penurunan asetilkarnitin, mungkin mendasari penurunan sensitivitas insulin.
Pendahuluan
Penggunaan proton magnetic resonance spectroscopy (1H-MRS) pada otot rangka
manusia telah berperan dalam membangun pentingnya akumulasi lemak ektopik dalam
pengembangan jenis Diabetes mellitus 2 (DMT2). Ini ditemukan di sejumlah besar penelitian
bahwa lipid intramiosellular (IMCL) kadarnya berbanding terbalik terkait sensitivitas insulin.
Namun, metodologi yang sama juga mengakibatkan identifikasi paradoks yang disebut atlet:
daya tahan atlet yang terlatih, meskipun sangat sensitif insulin, juga ditandai dengan tingkat
IMCL tinggi. Temuan ini telah menyebabkan pengembangan hipotesis baru untuk
menjelaskan relasi antara akumulasi lemak pada otot dan sensitivitas insulin.

Salah satu hipotesis yang menarik dan menunjukkan peran untuk metabolisme
karnitin. Telah lama diketahui bahwa karnitin memungkinkan mitokondria dari asam lemak
rantai panjang untuk - oksidasi berikutnya. Namun, baru-baru ini telah diketahui bahwa
karnitin juga mungkin memainkan peran regulasi penting di substrat pengganti dan
homeostasis glukosa. Asetilkarnitin terbentuk dalam kondisi di mana pembentukan asetilCoA, baik sebagai produk akhir dari glikolisis atau -oksidasi, melebihi masuknya ke siklus
trikarboksilat (TCA). Karnitin bebas dapat bertindak sebagai wadah untuk kelompok
kelebihan asetil dalam reaksi reversibel dikatalisasi oleh enzim karnitin asetiltransferase.
Asetilkarnitin, seperti ester asilkarnitin lain, mudah dapat diekspor dari mitokondria (Gambar
1).
Pembentukan asetilkarnitin membantu untuk menjaga rasio rendah asetil-CoA / CoA
bebas di mitokondria. Suatu rasio asetil-CoA rendah / CoA bebas diperlukan untuk menjaga
aktivitas piruvat dehidrogenasi (PDH), yang dikenal untuk mengontrol tingkat oksidasi
aerobik karbohidrat. Kapasitas dikompromikan untuk menghasilkan asetilkarnitin, baik
karena aktivitas CRAT dikurangi atau konsentrasi karnitin rendah, dapat mengurangi aktivitas
PDH, sehingga mengurangi degradasi oksidatif glukosa, menjadi perhatian utama dalam otot
untuk resisten insulin. Dikompromikan piruvat tercermin fleksibilitas masuk ke mitokondria
dan menyebabkan metabolisme menurun, fitur deteksi dini resisten insulin pada otot.
Memang, tikus Crat-KO, yang dapat mengkonversi asetil-CoA untuk asetilkarnitin, ditandai
oleh penurunan toleransi glukosa. Di sisi lain, eksperimen dari Crat di Myotubes primer
manusia menunjukkan peningkatan penghabisan asetilkarnitin dan aktivitas PDH tinggi.
Demikian pula, ketersediaan karnitin bebas berkurang yang disebabkan oleh overfeeding
lemak tinggi pembentukan asetilkarnitin terhambat pada tikus, dan suplemen karnitin mampu
membalikkan disregulasi mitokondria terkait makanan , termasuk pemulihan aktivitas PDH.
Selanjutnya, pembentukan asetilkarnitin meningkat dengan peningkatan kadar karnitin bebas
dalam otot rangka tikus dan di Myotubes rangka utama manusia. Untuk menguji relevansi
asetilkarnitin resistensi insulin dan DMT2 pada manusia, itu adalah kunci untuk mengukur
tingkat asetilkarnitin dalam jaringan.
Asetilkarnitin sebelumnya telah divisualisasikan noninvasif menggunakan short-echo
time (TE) 1H-MRS dengan mengurangkan spektrum pre dan post. Karena puncak tidak
terlihat pada spektrum sisanya, hanya sinyal perbedaan latihan dapat diukur pada 2,13 ppm.
Baru-baru ini, pengamatan dari puncak resonansi alternatif asetilkarnitin di 3,17 ppm telah
dilaporkan di 7T. Namun, karena tumpang tindih dengan puncak amonium trimetil lainnya
(TMA), puncak ini juga tetap hanya dihitung setelah latihan, ketika itu meningkat pesat.

Selanjutnya, karena penurunan resolusi spektral, puncak ini tidak diselesaikan dan karena itu
tetap tidak terdeteksi pada klinis tersedia sistem 3T MR. Kami berhipotesis bahwa meskipun
strategi akuisisi menggunakan TE panjang akan menghasilkan informasi berharga tentang
konsentrasi asetilkarnitin in vivo. Puncak asetilkarnitin pada 2,13 ppm biasanya tertutup oleh
resonansi lipid luas di TE singkat. Perolehan strategi menggunakan TE panjang menyebabkan
penekanan relatif resonansi lipid luas ini atau Sinyal relaksasi metabolit waktu pendek
transversal (T2) secara umum. Penggunaan TE panjang akan meningkatkan visibilitas puncak
asetilkarnitin terlepas kekuatan medan magnet tanpa terbatas peningkatan latihan.
Kami di sini mengembangkan strategi akuisisi TE lama untuk mengukur tingkat
asetilkarnitin saat istirahat di satu scan pada scanner klinis 3T MR. Mendeteksi tingkat
asetilkarnitin noninvasif memberikan kesempatan untuk mempelajari tingkat asetilkarnitin
dalam kaitannya dengan kondisi patologis seperti disfungsi mitokondria, resistensi insulin,
dan diabetes. Untuk mengevaluasi relevansi fisiologis dari pengukuran tingkat asetilkarnitin
otot rangka, kami menerapkan Metodologi TE lama 1H-MR di otot rangka dari daya tahan
atlet terlatih, subjek menetap kurus, obesitas tetap subjek, dan pasien DMT2. Hasil kami
menunjukkan bahwa Konsentrasi asetilkarnitin lebih tinggi berhubungan dengan peningkatan
sensitivitas insulin dan lebih baik dalam fungsi mitokondria vivo, yang diukur dengan fosforMRS (31p-MRS), dan bahwa tidak ada paradoks atlet yang ada untuk tingkat asetilkarnitin.

Hasil
Karakteristik subjek. Daya tahan atlet terlatih dan subjek yang kurus serta subjek
obesitas dan pasien DMT2 cocok untuk usia dan BMI. Umur dan BMI yang berbeda antara
daya tahan atlet terlatih / subjek yang kurus dan subjek pasien obesitas DMT2 (P <0,01).
Persentase lemak juga menunjukkan distribusi yang sama, tidak ada perbedaan yang
signifikan antara atlet yang terlatih dibandingkan subjek kurus dan subjek menetap obesitas
dibandingkan pasien DMT2, tetapi dengan persentase lemak secara signifikan lebih tinggi
dalam subjek obesitas dan kelompok pasien DMT2 jika dibandingkan dengan kelompok atlet

subjek dan daya tahan terlatih (P <0,01). Maksimal penyerapan oksigen (VO2 max) tertinggi
pada daya tahan atlet terlatih, dan ini secara signifikan berbeda dari subjek yang kurus
menetap, subjek obesitas menetap, dan kelompok pasien DMT2 (P <0,01 untuk semua
perbandingan). VO2 max juga secara signifikan lebih tinggi dalam kelompok subjek kurus
menetap jika dibandingkan dengan baik subjek obesitas menetap atau kelompok pasien
DMT2 (P <0,01), sedangkan tidak ada perbedaan yang signifikan antara dua terakhir (P =
0,87). Semua karakteristik subjek dirangkum dalam Tabel 1.
Spektrum TE Panjang. Visibilitas ditingkatkan dari asetilkarnitin yang puncak dalam
spektrum TE panjang dari otot vastus lateralis, dibandingkan dengan spektrum TE pendek
konvensional, jelas dari Gambar 2. Jumlah waktu scan per spektrum adalah 2 menit.
Dengan panjang TE, puncak asetilkarnitin di 2.13 ppm bisa ditugaskan oleh inspeksi
visual sederhana. Sebaliknya, dengan TE singkatnya, puncak hampir tidak terlihat karena
resonansi lipid yang luas di wilayah tersebut 2,0-2,5 ppm menutupi puncak. Juga sangat
karakteristik untuk spektrum TE panjang adalah penampilan tajam, tunggal, dan simetris dari
total creatine (t-Cr) puncak pada 3,03 ppm. Puncak ini relatif luas dan asimetris dalam
spektrum TE pendek. Sinyal sisa air dalam spektrum TE panjang relatif rendah tanpa aplikasi
teknik penekanan air yang canggih.
T2

dari asetilkarnitin ditemukan 265 45 ms (270 29 ms untuk subjek kurus

dibandingkan 262 37 ms untuk subjek obesitas,P = 0,88), yang kira-kira 10 kali lebih lama
dari T2 yang dari air pada 3T (lihat juga Gambar 1 Tambahan; tambahan bahan tersedia secara
online dengan artikel ini; doi: 10,1172 / JCI74830DS1). T2 t-Cr ditemukan 162 4 ms (157
3 ms untuk subjek kurus dibandingkan 166 6 ms untuk subjek obesitas, P = 0,24), yang
dalam korespondensi dengan komponen peluruhan panjang seperti yang dilaporkan dalam
penelitian sebelumnya.
Hasil dari percobaan phantom digambarkan dalam Gambar 3. MR berbasis
kuantifikasi, dengan protokol TE panjang, berkorelasi sempurna dengan konsentrasi
asetilkarnitin dikenal pada percobaan phantom (r Pearson = 0,99, R2 = 0.99, P <0,01).
Referensi internal. Sebagai sinyal air yang tidak menekan digunakan secara luas
sebagai referensi internal dalam 1H-MRS, penggunaan t-Cr sebagai referensi internal
dibandingkan dengan air sebagai referensi internal. Intensitas puncak air ditentukan dari
tambahan yang diperoleh dari spektrum TE pendek. Rasio asetilkarnitin diatas air dan rasio
asetilkarnitin lebih t-Cr yang dihitung dan diplot pada Gambar 4, dan korelasi yang sangat
kuat ditemukan antara 2 rasio (r Pearson = 0,96, R2 = 0.91,P <0,01, n = 2 1).

Gambar 1. Ketika formasi asetil-CoA melampaui penggunaan oleh siklus TCA, karnitin dapat berfungsi
sebagai wadah untuk kelebihan kelompok asetil didalam mitokondria, dengan demikian pemebntukan
asetilkarnitin. Reaksi reversibel ini merupakan dikatalisasi oleh enzim CRAT dan mengarah untuk pelepasan
dari CoA bebas. Formasi dari asetilkarnitin dapat membantu untuk menjaga asetil-CoA/CoA bebas pada
mitokondria dengan rasio rendah, dimana ini esensial untuk mempertahankan siklus TCA dan aktivitas PDH.
Asetilkarnitin dapat berubah kembali ke asetil CoA atau dapat diekspor ke luar mitokondria. Proton
mengkontribusi ke resonansi dari asetilkarnitin pada 2.13 ppm dalam 1H-MRS ditandai dalam struktur molekul.
CPT1, karnitin palmitoiltranferase 1;FFA, asam lemak bebas; LCFA, asam lemak rantai panjang.

Sensitivitas insulin. Sensitivitas insulin berbeda secara signifikan antara kelompokkelompok (tingkat glukosa infus [GIR]: 76,8 5,1 umol /min / kg pada daya tahan atlet
terlatih, 61,9 5,4 umol / min / kg dalam subjek kurus menetap, 30,3 4,6 umol / min / kg di
subjek obesitas menetap, dan 23,6 2,7 umol / min / kg pada pasien DMT2; P <0,01,
Gambar 5A). Analisis Post-hoc menunjukkan bahwa GIR dari subjek menetap daya tahan
terlatih dan kurus secara signifikan lebih tinggi bila dibandingkan dengan nilai yang
diperoleh di subjek obesitas menetap dan pasien DMT2 (P <0,01).
Dalam fungsi mitokondria vivo. Kami bertekad fungsi mitokondria in vivo dengan
menentukan pemulihan kinetika fosfokreatine (PCr) setelah latihan. Tingkat pemulihan PCR
konstan secara signifikan yang berbeda antara kelompok-kelompok, dengan pemulihan

tercepat pada daya tahan atlet dan pemulihan lambat pada pasien DMT2 (daya tahan atlet:
20,7 3,4 s; bersandar subjek menetap: 27,9 0,6 s; subjek obesitas menetap: 29,9 1,7 s;
Pasien DMT2: 36,5 2,4 s; P <0,01, Gambar 5B). Fungsi mitokondria secara signifikan lebih
rendah pada pasien DMT2 dibandingkan dengan daya tahan terlatih, kurus, dan subjek
obesitas (P <0,01, P <0,01, dan P = 0,04 masing-masing), seperti yang ditunjukkan oleh
analisis post-hoc.
Konsentrasi Asetilkarnitin (1H-MRS). Dua perwakilan spektrum TE panjang, dari
seorang daya tahan atlet terlatih dan pasien DMT2, masing-masing, yang digambarkan pada
Gambar 6. Spektrum yang ditingkatkan untuk puncak t-Cr untuk memastikan bahwa
perbedaan dalam puncak intensitas asetilkarnitin yang jelas dengan inspeksi visual.
Secara keseluruhan, konsentrasi asetilkarnitin berbeda secara signifikan antara
kelompok, dengan nilai tertinggi pada daya tahan atlet terlatih dan nilai terendah pada pasien
DMT2 (daya tahan atlet: 1.58 0.30 mmol / kg berat basah (kgww); bersandar subjek
menetap : 1.28 0.22 mmol / kgww; subjek obesitas menetap: 0.70 0,22 mmol / kgww;
Pasien DMT2: 0.42 0.19 mmol / kgww;P <0,01, Gambar 7A). Analisis post-hoc
mengungkapkan bahwa perbedaan ini dalam konsentrasi asetilkarnitin mencapai signifikansi
statistik antara pasien DMT2 dan daya tahan atlet terlatih (P = 0,01).

Gambar 2. Perbandingan spektrum TE pendek (TE=37 ms) dan TE panjang (TE=350 ms) dari otot
vastus lateralis. Karena kerelatifan T2 panjang dari asetilkarnitin (pada 2.13 ppm) ketika dibandingkan dengan
resonansi lipid yang berlebihan, visibilitas puncak sangat tinggi meningkat pada spektrum dengan TE panjang.
Karena kerelatifan T2 pendek dari air, bukan tekanan air yang diaplikasi ke spektrum TE panjang. Terlebih lagi,
karena TE panjang, puncak t-Cr (saat 3.03 ppm) menunjukan sebagai puncak tunggal dan tajam.

Korelasi yang signifikan dari konsentrasi asetilkarnitin individu dengan BMI (r Pearson =
-0,56, R2 = 0,31, P <0,01), usia (R Pearson = -0,55, R 2 = 0,30, P <0,01), VO2 max (Pearson
r = 0,57,R2 = 0,32, P <0,01), dan persentase lemak (r Pearson = -0,45, R 2 = 0,20, P <0,01).
Tingkat Asetilkarnitin dan pemulihan PCr berkorelasi dekat signifikansi (r Pearson = -0,30,
R2 = 0,09, P = 0,08).
Metabolisme karnitine dalam materi otot manusia. Untuk lebih memeriksa mekanisme
molekuler yang mendasari perbedaan kelompok di tingkat asetilkarnitine, kami mengambil
biopsi otot setelah semalam dari 11 daya tahan atlet terlatih, 6 subjek kurus, 5 subyek
obesitas, dan 9 pasien DMT2. Kami pertama kali ditentukan kromatografi-massal berbasis
spektrometri (berbasis LC-MS) tingkat dari asetilkarnitin (daya tahan atlet: 593,4 106,3
pmol / kg jaringan; bersandar subjek menetap: 585,1 111,4 3 pmol / kgjaringan; subjek
obesitas menetap: jaringan 336,0 76,7 pmol / kg; Pasien DMT2: 341,0 73,2 pmol/kg
jaringan; P = 0,129) dan jumlah karnitin (daya tahan terlatih atlet: 3.758,2 48 7,8
pmol/kgjaringan; bersandar subjek menetap: 3.311,0 72 7,8 pmol / kg jaringan; subjek
obesitas menetap: jaringan 2.584,0 496,0 pmol / kg; pasien DMT2 : 258 7.0 555,3 pmol /
kg jaringan; P = 0.355), yang tidak berbeda secara signifikan antara kelompok-kelompok,
meskipun dalam kedua kasus, Pola konsentrasi meningkat pada daya tahan atlet terlatih yang
ditemukan. Asetilkarnitin yang diukur dengan 1H-MRS tidak signifikan berkorelasi dengan
konsentrasi asetilkarnitin berbasis LC-MS (R Pearson = 0,28, R2 = 0,08, dan P = 0,131)
maupun dengan total konsentrasi karnitin yang diukur dalam biopsi (Pearson r = 0,101, R 2 =
0,01, dan P = 0.58 7).
Namun, karena diketahui bahwa tingkat asetilkarnitin bisa berfluktuasi setiap hari,
kami juga menentukan aktivitas CRAT, yang merupakan enzim yang paling bertanggung
jawab dalam pembentukan asetilkarnitin. Menariknya, aktivitas CRAT signifikan lebih tinggi
pada daya tahan atlet terlatih saat dibandingkan dengan kelompok lain (atlet terlatih: 91,9
7,5 nmol / mg protein / menit; bersandar subjek menetap: 65,4 3,8 nmol / mg protein /
menit; subjek obesitas menetap: 53,4 3,5 nmol / mg protein / menit; Pasien DMT2: 52 .6
4,7 nmol / mg protein / menit; P <0,01). Selain itu, MR yang berasal konsentrasi asetilkarnitin
berkorelasi dengan aktivitas CRAT (Pearson r = 0,3 7, R2 = 0,134, dan P = 0,04).
Hubungan antara asetilkarnitin dan sensitivitas insulin. Sebuah korelasi yang
signifikan antara konsentrasi asetilkarnitin berbasis MR dan sensitivitas insulin ditemukan
(Pearson r = 0,59, R2 = 0.35, P <0,01) berdasarkan data individu. Ketika kami melakukan
analisis korelasi per-kelompok (Gambar 7B), korelasi antara kelompok konsentrasi
asetilkarnitin berarti dan kelompok sensitivitas insulin berarti sangat kuat dan sangat

signifikan (r Pearson = 0,99, R2 = 0.99, P <0,01). Selanjutnya, kegiatan CRAT berkorelasi


positif dengan sensitivitas insulin (R Pearson = 0,74, R2 = 0,55, P <0,01 untuk CRAT).

Gambar 3. Lima phantom dipersiapkan dengan asetilkarnitin 0, 0.5, 1.0, 2.0, dan 5.0 mM. Puncak asetilkarnitin
saat 2.13 ppm untuk konsentrasi berbeda ditunjukan pada A. MR berbasis konsentrasi dari asetilkarnitin di plot
versus konsentrasi asetilkarnitin yang diketahui pada B. Pengukuran konsentrasi dalam kecocokan dengan
konsentrasi phantom yang diketahui, sebagai indikasi oleh sangat kuatnya korelasi (Pearson r= 0.99, R 2 = 0.99,
P< 0.01).

Sebuah analisis regresi linier bertahap dengan BMI, usia, persentase lemak, dan VO2
max dan sensitivitas insulin mungkin penentu asetilkarnitin dilakukan pada data individu dan
mengungkapkan bahwa semua variabel, selain sensitivitas insulin, dikeluarkan dari model,
lanjut menggambarkan hubungan antara tingkat asetilkarnitine dan sensitivitas insulin
(termasuk variabel: sensitivitas insulin, P <0,01; variabel dikecualikan : BMI, P = 0,416; usia,
P = 0,157; persentase lemak, P = 0,606; Tingkat pemulihan PCr, P = 0,803; VO2 max, P =
0,7 56).
Gambar 4. Perbandingan antara penggunaan t-Cr dan air sebagai referensi internal. Data dikemukakan
sebagai T2 rasio yang belum dikoreksi dari asetilkarnitina pada referensi metabolit. Lima garis berjarak jauh
melalui aslinya (garis bulat). Korelasi antara kedua rasio kuat dan signifikan tinggi.

Pembahasan
Potensi in vivo 1H-MRS di otot
rangka belum dieksploitasi sepenuhnya.
Karena rentang pergeseran kimia kecil
di mana metabolit bergema, banyak dari
resonansi

metabolit

yang

tumpang

tindih, sehingga menghalangi kehadiran


mereka. Di sini, kita menunjukkan
bahwa penggunaan TE panjang dapat membantu untuk meningkatkan visibilitas metabolit
dengan T2 panjang relatif, seperti asetilkarnitin. Dalam spektroskopi TE pendek
konvensional, puncak asetilkarnitin di 2.13 ppm ditutupi oleh resonansi lipid yang luas, tapi
itu jelas dari spektrum kita yang asetilkarnitin muncul sebagai puncak tunggal, tajam, dan
simetris ketika TE panjang digunakan di 3T. Pendekatan TE panjang yang kami usulkan di
sini menciptakan kesempatan untuk mengukur tingkat asetilkarnitin noninvasif pada otot
sistem MR klinis yang tersedia, yang dapat meningkatkan penelitian ke dalam pemahaman
kita dari relevansi (pato) fisiologis metabolit ini. Untuk menyelidiki peran potensi dalam
sensitivitas insulin, kami bertekad konsentrasi asetilkarnitin dalam 4 kelompok, mencakup
berbagai nilai sensitivitas insulin. Kami berhati-hati dengan kelompok fenotip ini dalam hal
sensitivitas insulin dan dalam fungsi mitokondria vivo dan memang ditemukan peningkatan
sensitivitas insulin dan dalam fungsi mitokondria vivo seluruh kelompok dari pasien DMT2
subyek terlatih. Dengan pendekatan kami TE panjang, kita memang mampu kokoh mengukur
perbedaan dalam konsentrasi asetilkarnitin otot rangka antara 4 kelompok. Sensitivitas
insulin sangat terkait dengan mengukur konsentrasi acetylcarnitine otot rangka, dengan
konsentrasi yang lebih tinggi asetilkarnitin pada subyek dengan sensitivitas insulin yang lebih
tinggi.
Selain visibilitas ditingkatkan dari puncak asetilkarnitin, pendekatan TE panjang
menawarkan keuntungan tambahan dibandingkan dengan metodologi TE pendek
konvensional. Puncak Metil t-Cr terlihat sebagai puncak tajam tunggal di spektrum TE
panjang, membuat referensi internal senyawa yang sangat baik. Spektroskopi TE pendek , ini
puncak t-Cr di 3.03 ppm terkontaminasi oleh lipid extramyocellular (EMCL) sinyal sekitar
2.95 ppm dan dipengaruhi oleh kopling dipolar sisa. Sebuah lagi hasil TE dalam interferensi

destruktif perbedaan fase diperkenalkan oleh kopling sisa dipolar di puncak t-Cr (13) dan dari
sinyal EMCL. Penggunaan TE panjang juga berkurang kebutuhan untuk menekan air. Dalam
pengukuran TE pendek, sinyal air adalah sekitar 103 untuk 105 kali melimpah seperti sinyal
metabolit lain dan dapat mengaburkan resonansi jauh lebih kecil, yang hadir dalam kisaran
millimolar. Biasanya, metode penekanan air canggih yang digunakan yang tak terhindarkan
mendistorsi sinyal dekat resonansi air. Air intrinsik memiliki T 2 pendek, yang mengarah ke
sinyal yang sangat rendah dengan TE panjang. Hal ini juga harus disebutkan bahwa
penggunaan TE panjang mengarah ke spektral penyederhanaan dan dasar datar, yang
membuat pas prosedur sederhana.
TE pendek biasanya disukai dalam 1H-MRS, karena membantu meminimalkan efek
relaksasi T2, sehingga menghasilkan sinyal rasio lebih tinggi (SNR). Dalam protokol kami,
kami menggunakan voxel yang ukuran relatif besar untuk mengkompensasi hilangnya SNR
dengan TE panjang. Menggunakan voxel lebih besar tidak menyebabkan peningkatan
tumpang tindih dari puncak asetilkarnitin dengan resonansi lain dan inheren menyebabkan
rata-rata jaringan yang lebih baik. Dalam pengalaman kami, ini adalah protokol yang kuat
untuk mendapatkan spektrum dengan SNR wajar dalam waktu yang relatif singkat.

Gambar 5. Sensitivitas insulin perifer dan tingkat pemulihan PCr per kelompok. (A). Sensitivitas insulin
diberikan sebagai GIR (mol/kg/min). Ada perbedaan signifikan antara daya tahan atlet/subjek kurus dan subjek
obes/ pasien DMT2. (B). Fungsi mitkondria disebut sebagai tingkat pemulihan PCr. Tingkat tersebut signifikan
tinggi pad apasien DMT2 ketika dibandingkan dengan atlet, subjek kurus, dan subjek obes. T: daya tahan atlet;
S: subjek kurus; O: subjek obes; DMT2: pasien DMT2.

Air telah secara luas digunakan sebagai referensi internal pada MR Spektroskopi
untuk otot rangka. Dalam penelitian ini, maka kami membandingkan penggunaan puncak tCr dengan penggunaan air sebagai referensi internal. Sinyal air diukur dalam secara terpisah
dicatat spektrum TE pendek. Kami menemukan korelasi yang sangat kuat antara rasio

asetilkarnitin / t-Cr dan asetilkarnitin / air. Ini menunjukkan bahwa puncak t-Cr adalah
referensi internal yang handal dan bahwa perbedaan ditemukan antara kelompok tidak dapat
dijelaskan oleh penggunaan referensi internal yang berbeda. Hal ini memungkinkan untuk
mengukur konsentrasi asetilkarnitin di scan tunggal. Untuk menghitung konsentrasi mutlak
dalam otot rangka, kami menggunakan T2 tetap kedua asetilkarnitin dan t-Cr dalam semua
subjek, seperti pengukuran relaksasi T2 tidak berbeda antara subjek kurus dan obesitas .
Selain itu, disarankan agar pola modulasi komponen ada untuk puncak t-Cr karena kopling
dipolar, sehingga menimbulkan kerusakan komponen pendek dan panjang (pembusukan
pendek kisaran 0-35 ms). Ketika mengoreksi intensitas puncak t-Cr berdasarkan pada T2
eksponensial fungsi peluruhan tunggal , ini bisa menyebabkan sistematis konsentrasi
asetilkarnitin terlalu tinggi diukur. Untuk menghindari hal ini, kami menggunakan faktor
koreksi tetap untuk komponen peluruhan pendek, dan kami melaporkan konsentrasi
asetilkarnitin 1,3-1,6 mmol / kgww pada subjek kurus (menetap dan dilatih), yang sesuai
dengan saat ini dan sebelumnya. Hasil penelitian biopsi, melaporkan konsentrasi sebanding
asetilkarnitin bila dikonversi ke mmol / kgww (mulai dari ~ 0,5-1,6 mmol / kgww).

Gambar 6. Spektrum tipikal TE panjang didapat dari daya tahan seorang atlet terlatih dan pasien
DMT2. Spectrum diskala menjadi puncak t-Cr. Kebanyakan muncul perbedaan antara intensitas puncak
asetilkarnitin pada kedau spektrum. Sinyal EMCL tinggi pada pasien DMT2, telah diperkirakan.

Gambar 7. Konsentrasi asetilkarnitin otot skeletal per kelompok dan hubungan antara mean kadar
asetilkarnitin dan mean sensitivitas insulin. (A). Konsentrasi asetilkarnitin diberikan dalam mmol/kgww.
Analisis post-hoc menunjukan konsentrasi asetilkarnitin yang signifikan rendah pada pasein DMT2
dibandingkan dengan daya tahan atlet terlatih. (B). Korelasi antara kelompok mean konsetrasi asetilkarnitin
(diberikan dalam mmol/kgww) dan GIR (mol/kg/min). *P<0.05, dibandingkan dengan daya tahan atlet terlatih.
Semua hasil diekspresikan sebagai mean SEM.

Metode
Subjek
Tingkat

asetilkarnitin istirahat diukur dalam 38 subjek, yang masing-masing

dikategorikan dalam 1 dari 4 kelompok yang berbeda. Kelompok-kelompok ini sengaja


meliputi berbagai di seluruh tubuh dan sensitivitas insulin otot rangka : daya tahan terlatih
atlet (12 subjek), subjek kurus (9 orang), subjek obesitas normoglycemic menetap (8 subyek)
dan pasien T2DM (9 orang). Tak satu pun dari subyek memiliki riwayat penyakit
kardiovaskular atau telah kehilangan lebih dari 3 kg massa tubuh selama 6 bulan sebelum
penelitian.
Subjek atlet dan kurus semua memiliki BMI dari kurang dari 25 kg / m 2. Subyek
dianggap ketahanan dilatih saat VO2 max mereka melebihi 55 ml min-1kg1, telah aktif dalam
kegiatan latihan ketahanan kompetitif setidaknya 3 kali seminggu selama 2 tahun terakhir,
dan memiliki tingkat yang stabil dari pelatihan selama 6 bulan terakhir. Untuk kelompok
kurus, subjek yang termasuk ketika VO2 max mereka di bawah 45 ml min -1kg-1 dan ketika
mereka dipamerkan gaya hidup di mana mereka tidak berpartisipasi dalam aktivitas fisik
lebih dari 1 jam per minggu untuk setidaknya 2 tahun terakhir.
Ketahanan atlet terlatih dan subjek kurus adalah usia dan BMI cocok (Tabel 1). Pasien
dengan DMT2 didiagnosis setidaknya 1 tahun sebelum memulai penelitian, yang non-insulin
dependent, diabetes terkontrol dengan baik selama minimal 6 bulan (HbA1c <7.8%), dan
tidak komorbiditas terkait diabetes. Semua pasien DMT2 diperlakukan dengan metformin.
Subjek kontrol obesitas tidak punya riwayat keluarga diabetes dan tidak mengambil obat apa

pun. Dalam sebuah penelitian tambahan, 7 subjek kurus (2 laki-laki / 5 wanita, usia 28 6
tahun, BMI 20,3 0,7 kg / m2, VO2 max 45,4 8,2 ml / menit / kg) dan 7 subyek obesitas (7
subjek laki-laki, usia 57 7 tahun, BMI 31,5 1,0 kg / m 2. VO2

max 2 7.7 1,6 ml /

menit / kg) dimasukkan untuk menentukan in vivo T 2 t-Cr dan asetilkarnitin di otot vastus
lateralis manusia, yang yang digunakan dalam penelitian ini untuk menghitung konsentrasi
mutlak.
Desain Eksperimental
Pada hari yang terpisah, sebelum eksperimen lain, VO2 max dan maksimal beban
kerja (W max) dari semua mata pelajaran yang ditentukan oleh rutinitas Tes bersepeda
tambahan pada sepeda stasioner. Selanjutnya, komposisi tubuh ditentukan oleh dual-energi xray absorptiometri scan.
Selain hari-hari tes skrining, subyek dilaporkan ke universitas di 2 kesempatan yang
berbeda. Pada hari pertama, asetilkarnitin yang dan pengukuran pemulihan PCr yang
berturut-turut dilakukan di sore. Semua subjek yang mengkonsumsi makan siang pukul 12.00
siang dan tetap berpuasa dan menahan diri dari latihan berat untuk berikut 5 jam. Subyek
ditempatkan di scanner MR pada pukul 5:00, dan Spektrum TE panjang 1H-MR diakuisisi
untuk mengukur asetilkarnitin. Langsung setelah pengukuran asetilkarnitin,

31

p-MRS

dilakukan untuk mengukur tingkat pemulihan PCr, yang merupakan ukuran dari fungsi
mitokondria in vivo .

31

p pengukuran dilakukan setelah pengukuran asetilkarnitin untuk

memastikan bahwa konsentrasi asetilkarnitin tidak dipengaruhi oleh latihan (Gambar 8). Pada
suatu hari terpisah, setelah semalam cepat,klem hyperinsulinemic-euglycemic dilakukan
untuk mengukur sensitivitas insulin. Sebelum awal klem, biopsi otot diambil dari m. vastus
lateralis.
VO2 max dan Komposisi Tubuh
Sebuah tes bersepeda rutin tambahan pada sepeda stasioner digunakan untuk menentukan
kapasitas maksimal latihan seperti yang dijelaskan sebelumnya. Komposisi tubuh ditentukan
dengan DXA (DXA, penemuan A; Hologic).
Klem Hyperinsulinemic-euglycemic
Semua peserta menjalani 2 langkah, 6 jam klem hiperinsulinemia-euglycemic (10 dan 40 mU
m2/ min). Setelah puasa semalam, peserta tetap beristirahat di tempat tidur selama 2 jam.
Insulin infus dimulai dengan konsentrasi rendah (10 mU / m 2 / min) selama 2 jam sampai

steady state tercapai, setelah pengambilan sampel darah dilakukan selama 30 menit. Setelah
itu, infus insulin konsentrasi tinggi dimulai (40 mU / m2/ min) selama 2 jam, setelah itu
keadaan stabil tercapai dan darah lagi sampel selama 30 menit. Di sini, kami melaporkan
yang GIR (umol / kg / min) ditentukan selama infus insulin konsentrasi tinggi, sebagai
ukuran sensitivitas insulin perifer.
Biopsi Otot
Biopsi otot diambil dari vastus lateralis yang otot di bawah anestesi lokal (2%
lidokain), seperti yang dijelaskan sebelumnya. Jaringan otot langsung membeku di lelehkan
isopentan dan disimpan pada -80 C sampai diproses lebih lanjut.
Sampel jaringan yang diolah dan dianalisis oleh Sarah W.Stedman Nutrisi dan
Metabolisme metabolomik / biomarker inti laboratorium. Pengukuran Asilkarnitin dibuat
menggunakan aliran tandem injeksi MS dan persiapan sampel metode sebelumnya dijelaskan.
Homogenat seluruh jaringan dibuat dari sampel biopsi dengan cara pengenceran 20 kali lipat
(massa: vol) di CelLytic MT (SigmaAldrich). Setelah homogenisasi, sampel disentrifugasi
pada 18.000 g untuk mengendapkan protein tidak larut dan aktivitas CRAT dinilai
menggunakan 0,01 mg larut lisat protein dalam 50 mM Tris, pH 7,4, 1 mM EDTA, 0,1 M
DTNB, 1,0 mM asetil-CoA, dan 5 mM l-karnitin pada 25 C.
31

p-MRS (Pemulihan PCr)

Semua percobaan MR dilakukan pada 3T MRI scanner seluruh tubuh (Mencapai 3T-X;
Philips Healthcare). Pemulihan PCr diukur di semua peserta menggunakan

31

p-MRS untuk

menentukan in vivo mitokondria berfungsi sebagai dijelaskan sebelumnya. Sebuah protokol


lutut ekstensi dilakukan pada ergometer MR-kompatibel kustom-dibangun dengan sistem
katrol dalam scanner MR. Latihan lutut ekstensi dilakukan selama 4 menit dengan berat yang
sesuai dengan 50% sampai 60% dari yang telah ditentukan subjek maksimal kapasitas lutut
ekstensi. Sebuah coil 6-cm permukaan ditempatkan di atas tengah otot vastus lateralis.
Gambar MR diperoleh dengan menggunakan coil tubuh untuk mengkonfirmasi posisi
kumparan dan untuk menentukan volume shimming.
1

H-MRS (asetilkarnitin)

Subyek diposisikan terlentang di bore magnet, dengan kaki kiri sejajar dengan medan magnet
utama dan dengan kaki dibatasi oleh 2 karung pasir. 2 kumparan elemen permukaan fleksibel
ditempatkan di atas otot vastus lateralis. T2 berputar turbo gambar gema diperoleh, yang

terdiri dari 3 irisan transversal dan FOV sama dengan 250 2 10 mm, ketebalan irisan sama
dengan 0,9 mm, TR / TE sama dengan 2000/100 ms, dan faktor turbo 20.

Gambar 8. Outline pengukuran MR. Subjek dipuasakan 5 jam sebelum pemeriksaan konsentrasi
asetilkarnitin saat istirahat, menggunakan protokol TE panjang 1H-MRS setelah pengukuran asetilakrntitin,
suatu ergometer diletakan pada scanner untuk memperlihatkan latihan selama
pengukuran

31

31

P-MRS. Waktu latihan dari

P-MRS diberikan lebih rinci. Subjek ditunjukan selama 4 menit pada scanner, setelah dimana

puncak pemulihan PCr dipantau selama 5 menit

Anda mungkin juga menyukai