TABLA 4. 16 TRATAMIENTO DE CAMPO PARA MUESTRAS DE AGUA. fTipo de Tratamiento Volumen de muestra [Determinaciones que se pueden efectuar Filtrada (filtro de membrana de 0.45 y )y acidificada | HINO3 a pH menor de 3) a lrazon de 3 ml/L 100 ml a 2 litros ‘Aluminio, arsénico, bario, cadmio, calcio, lcromo, cobalto, cobre, hierro, plomo, litio, magnecio, manganeso, molibdeno, niquel, potacio, plata, sodio, estroncio, vanadio, zinc. IFiltrada ( filtro de membrana de |100 ml Boro, cloruro, fluoruro, dureza, s 45 1), sin acidificar. nitrgeno, fosforo, potacio, selenio, silice, sodio, sélidos disueltos, sulfatos. [Acidificada con acido nitrico a [50 a 100 ml Todos tos anteriores [pH menor de 2, a raz6n de Sm lpor cada litro de muestra sin (filtrar, [Sedimentacin sin filtrar. [50 a 100 ml [Acidez, alcalinidad, diéxido de carbono, color y pH. [Bien mezclada sin filtrar 50 a 100 mil [Nitrogeno organico, nitrégeno amoniacal, {fSsforo, DQO, cianuros, sdlidos suspendidos, turbidez. [Tratamiento Especial: (Cloroformo (5 mg por litro de {50 a 100 ml INitrégeno amoniacal, nitratos y nitritos. Imuestra) [Fosforo organico. Mercurio (cloruro de mercurio) |50 a 100 ml Nitrogeno amoniacal, nitratos y nitritos 40 mg por litro de muestra. 'Yoduro de potasio alcalino 1 ml ]50 a 100 ml [Oxigeno disuelto, [por 300 ml de muestra, [Acetato de zinc 2 gr. por litro |50 a 100 ml Sulfuros. ide muestra, IRefiigeracién a 0°C - 4°C 50 @ 100 ml [Nitrogeno amoniacal, nitratos y nitritos Fuente: Cubillos ( 1977 ).WW cos de la Calidad del 3. Métodos de Anilisis para los Pardmetros Fisico - Qui Agua. Los métodos fisicos-quimicos mas usados en la determinacién de la Calidad del agua estan basados en los métodos de anilisis recomendados por el "Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater" y que son utilizados normalmente por los diferentes laboratorios de aguas, ademas se han revisado los procedimientos empledos por: M&AS, 1990, 1991; CEPIS, 1985; Rivas, 1976; Lara, 1974; INOS,S/Fa. 3.1, Determinaciones Fisicas Los anilisis fisicos miden y registran aquellas caracteristicas del agua que pueden ser observadas por los sentidos y que en algunos casos crean problemas de rechazo por parte del piblico consumidor, haciéndola inadecuada para uso doméstico e industrial. Sin embargo estas caracteristicas tiene menor importancia desde el punto de vista sanitario, ellas son: Color, olor, sabor, turbiedad, temperatura, residuos, conductividad especifica a) Color: El método més utilizado en la determinacién del color de una muestra de agua, consiste en Ja comparacién visual de la misma con una serie de patrones de soluciones coloreadas de cloroplatinato de potasio, cloruro de cobalto y Acido clorhidrico. Este método se base en que la combinacién de tales sustancias da colores muy parecidas al color del aguas naturales; es muy itil para medir el color del agua proveniente de materias organicas tales como residuos vegetales, hojas, corteza, raices, humus y turba. No es recomendable para medir el color en aguas industriales con alta concentracién de colorantes, en este caso se deben usar los métodos espectrofotomeétricos. EI método platino-cobalto utiliza como unidad de color aquel producido por 1 mg/l de latino (como K2P, CL,), Se puede emplear para determinar el color aparente y el color real de ‘una muestra de agua. En ambos casos el procedimiento consiste en preparar una solucién madre ccon las sustancias mencionadas anteriormente (cloroplatinado de potasio, cloruro cobaltoso y ‘écido clorhidrico), luego con esta solucién se prepara la serie de patrones de color usando tubos de Nessler de 50 ml, como se observa a continuacion: Solucién Madre (ml) Unidades de Color 0,0 St oO 0,5 ees nat 5 1,0 10 2,0 E20, 3,0 30 4,0 40 5,0 50 6,0 a 60 7,0 7018 ara determinar el color aparente con menos de 70 unidades de color, se colocan 50 mi de la muestra de agua a analizar en un tubo de Nessler de 50 ml y se compara el color con la serie de patrones, anotando aquel que mas coincida, Para un color mayor de 70 unidades se colocan 25 ml ‘© porciones mas pequefias (20 ml, 10 ml, 5 ml) de la muestra original en un tubo de Nessler de 50 ml, hasta poder hacer la comparacién con los patrones correspondientes y luego el color estimado se multiplica por el factor de dilucién, obteniéndose ast el valor del color total. En el caso del color real o verdadero, a la muestra original debe eliminarse la turbiedad antes de la determinacién del color respectivo. Para lo cual se procede a filtrar (Papel Whatman ‘N°4) o centrifugar la muestra de agua en forma usual (3600 R.P.M.). Si se desean efectuar comparaciones entre muestras de color, deben ajustarse a valores del pH iguales, ya que el color varia como funcion del pH. Se sugiere un valor de pH de 8,3, ya que éste es un valor representativo de muchas aguas potables tratadas. b) Turbiedad: La turbiedad de una suspension mide la capacidad de un liquido de diseminar un haz luminoso producido por la presencia de material insoluble, tales como particulas de arcillas provenientes de la erosion del suelo y otras sustancias inorgénicas finamente divididas, o materias similares y organismos microscépicos. La turbiedad es funcién tanto de la concentraci6n como del tamafio de la particula del material y se expresa en "Unidades de Turbiedad" En la determinacién de turbiedad se recomienda el método Nephelométrico que mide la fraccion de la luz que es dispersada 90 grados con respecto a la luz incidente. Este método consiste en un instrumento llamado Nephelémetro y un patron de referencia a base de Polimero Formazina (sulfato de hidrazina, hexametilentetramina y agua destilada), que generalmente tiene una turbiedad de 400 unidades, ain cuando algunos casos se elaboran con 4000 unidades de turbiedad Las suspensiones estindar, para valorar la turbiedad de la muestra, se preparan del patron de referencia por dilucién proporcional directa; por ejemplo para obtener una suspensién esténdar de 40 unidades a partir de la suspensién patrén de 400 unidades, se toman 10 mi de ésta diltima y se diluyen a 100 ml con agua destilada. ‘Otro método muy utilizado para medir la turbiedad es el denominado turbidimetro de bujia (0 de vela) Jackson, que puede ser empleado satisfactoriamente en aguas superficiales, sin embargo es inadecuado para la evaluacién de la calidad del agua potable ya que solamente mide turbiedades mayores de 25 unidades. La medicién con este método se hace introduciendo en forma progresiva, una fraccin de! liquido a analizar en el tubo calibrado 0 turbidimetro Jackson, la lectura minima que no permita ver al otro lado la bujia 0 vela determina la turbiedad buscada. c. Conductancia Especifica: La conductancia conductividad es una medida de la capacidad de un liquido para transmitir la corriente eléctrica; es un pardmetro relacionado con la cantidad de iones presentes en el liquido y con Ia temperatura a la cual se efectiia la determinacién. Esta propiedad se determina indirectamente a partir de la medicién de una resistencia eléctrica en un circuito eléctrico 0 puente Wheatstone con una solucién estandar de cloruro de potasio (0,01 M), la cual tiene una conductividad de 1141,8 micromhos/em a 25C.19 La conductancia se mide a través de un instrumento denominado conductimetro. Los resultados de la muestra del liquido se expresan en milisiemens por metro (ms.m-1) que equivale a 10 micromhos/em (mhos.Cm-1). Frecuentemente la conductividad se relaciona en forma empirica con los sélidos disueltos totales mediante la siguientes expresion: Sélidos disueltos totales = 0,65 x conductividad (mg/1). 4) Sélidos: La determinacién de los sélidos es importante para evaluar la calidad del agua y para controlar los procesos de tratamiento en aguas potables y residuales. Los sélidos se clasifican en filtrables y no filtrables, a su vez, cada uno de éstos se dividen en volatiles y no volétiles. La porcién volatil representa el material organico y la no volatil el material inorganico presente. Los sélidos totales por ser valores absolutos dan muy poca informacion sobre la composicién del liquido a evaluar. El anélisis para obtener los solidos totales consiste en tomar una muestra del agua a analizar (25 - 50 ml), que se coloca en un crisol de platino o porcelana de 100 ml de capacidad y luego se somete a evaporacién a 103°C. Los s6lidos filtrables o disueltos miden la concentracién de solidos disueltos en el agua. Para su determinacién se utiliza un filtro de fibra de vidrio, filtro de membrana, papel de filtro lavado con Acido, o un crisol de fondo poroso etc. Se toma un volumen conocido del filtrado (25 ~ 50 ml) y se repite el procedimiento utilizado para medir el residuo total Los sélidos no filtrables o suspendidos miden los sélidos suspendidos 0 que son susoeptibles de sedimentar al fondo de los cuerpos de agua. La determinacién se hace filtrando a ‘través de un filtro de fibra de vidrio un volumen conocido de agua, luego se seca el filtro a 103 - 105C y se pesa la materia retenida en el mismo. El residuo volétil se determina al calcinar la muestra a 550°C en un horno de mufla. Su medicion es importante puesto que da una medida indirecta de la materia orgénica presente. Los sélidos fijos son aquellos residuos minerales que no se volatilizan cuando la muestra se calcina a temperatura de 550C y son considerados de naturaleza inorganica. Los sélidos sedimentables miden el volumen de Ia materia que se deposita en el fondo de los cuerpos de agua y son utiles para determinar Ia eficiencia de ciertos sistemas de tratamiento de aguas residuales. La determinacién se realiza en un Cono Imhoff, el cual consiste en un recipiente de forma cénica graduado en volumen (ml), en donde se coloca un litro del liquido a evaluar, se deja en reposo durante 30 minutos o una hora y luego se lee el volumen sedimentado, expresindolo en ml/. . ©) Temperatura Normalmente las mediciones de temperatura pueden efectuarse con cualquier buen termbmetro centigrado de mercurio. Debe ser siempre registrada en el campo y hasta obtener una lectura constante. Este parametro afecta fundamentalmente los sistemas de tratamiento biolégico de las aguas debido a su efecto sobre el metabolismo bacterial; también afecta la solubilidad de los ‘gases, lo cual es muy importante ya que un aumento de la misma, disminuye la solubilidad del20 oxigeno en el agua. desfavoreciendo Ia aireaci6n del sistema. Por otro lado la temperatura afecta la velocidad de sedimentacién de tos sélidos. £) Olor y Sabor: Generaimente estas propiedades no se determinan a nivel de laboratorio, limitindose a establecer si las mismas son 0 no objetables por parte del publico consumidor. No obstante, existen pruebas que permiten estimar tales caracteristicas del agua en forma mas precisa y objetiva, En el caso del olor se requiere la preparacién de agua inodora diluida mediante filtracion por un lecho de carbén activado. Luego se determina el "Niimero de Olor Incipiente" (N.O.1.), es decir, la proporcién en la cual la muestra a analizar debe ser diluida con agua inodora para que el olor de Ia misma pueda apenas detectarse: N.O.1.= — mimuestra + ml de agua inodora ml de muestra Durante la prueba la temperatura se conserva en 60°C (prueba caliente) o en 40°C (prueba normal). Para una mayor precision se usa un grupo de observadores (5 6 mas) que dardn su opinion sobre la clasificacién del agua por su olor. La determinacién del "sabor incipiente" se realiza slo de muestras aceptables para agua potable, y el procedimiento es parecido a la prueba de olor, es decir, se requiere la preparacién de agua insipida (filtracién con lecho de carbon activado), dilucién de la muestra con agua insipida y al uso de un grupo de catadores. Las pruebas deben efectuarse a 40°C ya que ésta es la temperatura mas cercana a la del cuerpo. 3.2. Determinaciones Quimicas: Los anilisis quimicos tienen como objetivo fundamental, determinar la concentracion de las sustancias de naturaleza mineral y orgénica que pueden afectar Ia calidad de agua, proporcionando informacion sobre posible contaminacién o mostrando las variaciones producidas por el tratamiento a que pueden ser sometidos las mismas. Los resultados de los anilisis quimicos normalmente se indican en partes por millon (PP.m), es decir, kilogramos de la sustancia indicada por millon de litros de agua. También se puede indicar en miligramos de sustancia o elemento por litro de muestra. El pH se expresa en cifras absolutas de 0 a 14, con un decimal ‘A continuacién se presentan los andlisis més comunes de los parametros quimicos que afectan la calidad del agua a) Elementos Téxicos. Mercurio: Generalmente se mide sélo el mercurio total. Su determinacién se hace a través del método de absorcién atémica por vapor frio, para lo cual se procede primero a la oxidacién por permanganato seguida por persulfato, a objeto de asegurar que los compuestos orgénicos de2 mercurio, si los hubiera, sean oxidados al ion mercirico, forma ésta ultima en que se hace la ‘medicién correspondiente con la técnica de absorcién atomica, Plomo: Puede ser determinado por un método colorimétrico de Ditizona o por espectrofotometria de absorcién atémica En el método colorimétrico de Ditizona, es necesario la eliminacién de la interferencia proveniente de la mayoria de los metales que forman ditizonatos, para lo cual se procede a la extracci6n doble con tetracloruro de carbén a pH controlado. En el método de absorcién atémica, el plomo debe extraerse con Acido Pirrolidina itiocarbamato amoniacal en metil isobutil_cetona antes de aspirarlo a la llama del espectrofotémetro. Cadmio: Puede ser determinado por el método colorimétrico de ditizona o por espectrofotometria de absorcién atémica, En este ultimo se recomienda la extraccién con ditiocarbamato de Pirrolidina amoniacal en metil isobutil cetona o con Acido ditiocarbénico de Pirrolidina en cloroformo. Bario: Puede ser determinado por espectrofotometria de absorcién atémica, usando una ama de 6xido nitroso y acetileno. Cobre: El método mas utilizado en Ia determinacién de este elemento consiste en la aplicacién del reactivo de cuprethol, el cual hace que los iones de cobre formen un compuesto amarillo soluble. Con este método debe controlarse el pH entre 5 - 6, para lo cual se usa acido clorhidrico y el acetato de sodio como amortiguador. El pirofosfato anula la posible interferencia del hierro, Arsénico: Puede ser determinado por el método de espectrofotometria de absorcién atémica, que puede estimar concentraciones de 2 microgramosilitro 0 més. En este método se debe reducir primero el arsénico de la muestra a la forma trivalente, usando cloruro de estaiio y luego se convierte a arsina (A,H,), usando Zine. El hidruro gaseoso se aspira a la llama de argén-hidrégeno de un espectrofotémetro de absorcién atémica para efectuar la medicién correspondiente. Cianuro: En muestras con concentracién mayor de 1 mg/l generalmente se usa el método volumétrico con nitrato de plata usando un indicador de P-dimetilamino-bensal-rodanino. Para niveles menores de 1 mg/l se debe usar el método colorimétrico con Pirazolono de Pirimidina o Acido barbitirico. La naturaleza del tratamiento preliminar, en ambos métodos, depende de las sustancias interferentes que puedan estar presentes. Por ejemplo el sulfato, acidos grasos y los agentes de oxidacion, entre otros, interfieren en el proceso. Los sulfatos se eliminan con la adicién de carbonato de plomo en polvo, previa alcalinizacién de la muestra a pH 12. Los acidos grasos por extraccién con iso-octano, hexano 0 cloroformo a un pH de 6 a 7. Los agentes oxidantes por titulacién con sulfato de sodio o por la adicién de cristales de Acido ascérbico. La mayoria de la otras sustancias que interfieren son climinadas por destilacion; ademas, éste dltimo proceso convierte a la mayoria de complejos de22 cianuro en cianuro de sodio, que puede ser facilmente medido por analisis volumétrico o prueba colorimétrica, Cromo: El cromo total puede determinarse por espectrofotometria de absorcién atémica 0 por el método colorimétrico de difenilcarbazida, En este ltimo debe oxidarse primero el cromo trivalente existente a cromo hexavalente. Si la medicin a efectuar es solamente de cromo hexavalente puede usarse el método colorimétrico de difenilcarbazida o bien se extrae la forma hexovalente con Pirrolinida ditiocarbamato amoniacal en metil isobutil cetona 0 con Acido Pirrolinida ditiocarbénico en cloroformo, antes de efectuar la espectrofotometria de absorcién atémica, Selenio: Se puede utilizar por el método colorimétrico con diaminobenzidina 0 por el método de espectrofotometria de absorcién atémica, Este tiltimo es més recomendable por su sencillez y el menor tiempo que requiere para la obtencién de los resultados. El método de absorcién atomica es un método de hidruro gaseoso que requiere llama de Argén-hidrégeno. b) Metales Nocivos. Niguel: Se usa el método colorimétrico con heptoxina (cicloheptano-dionadioxima). Este método se basa en que después de separar el niquel de los otros se iones por extraccién del complejo niquel-heptoxima con cloroformo, se reextrae a la fase acuosa con acido clorhidrico y se determina colorimetricamente en la solucién acida con heptoxima en presencia de un oxidante. El color resultante es proporcional a la concentracién de nique! presente y se mide comparando con tuna serie de patrones previamente elaborados. Zine: Este metal al igual que otros 19 més son capaces de reaccionar con la Gifeniltiocarbazona (Ditizina), para producir compuestos coloridos (Ditizonatos), que se pueden extraer con disolventes orgénicos como el tetracloruro de carbono, De aqui que el método cominmente utilizado es el colorimétrico con ditizona, ain cuando también puede ser determinado por espectrofotometria de absorcién atémica Para la determinacién del zinc, mediante el método colorimétrico de ditizona, se deben anular las posibles interferencias de los metales con la adicién de tiosulfato de sodio. Luego se procede a la extraccién del zinc con la ditizona y con el tetracloruro de carbono. Al igual que en el caso anterior el color resultante es proporcional a la concentracién de zinc presente y se mide comparandolo con una serie de patrones previamente preparados. Manganeso: Se usa el método colorimétrico con Persulfato de amonio, pero también puede ser determinado por espectrofotometria de absorcién atémica. El método colorimétrico se basa en los compuestos manganosos solubles son oxidados por el Persulfato de amonio, en presencia del ion palta, a la forma de permanganato; el color resultante es directamente proporcional a la concentracién de manganeso presente. El color es medido visualmente comparéndolo con una serie de patrones previamente preparados, para lo cual se usan los tubos Nessler de 100 ml El sulfato mercirico evita la posible interferencia del cloruro.23 Aluminio: Puede ser determinado por el método colorimétrico empleando el cianuro de Eriocromo R. También se utiliza la espectrofotometria de absorcién atomica cuando los niveles de aluminio son superiores a Img/I; debe usarse llama de dxido nitroso y acetileno. La interferencia por cloruros se puede corregir por el uso de curvas especiales de correccién o por la adicién de cantidades iguales a las muestras estandar de aluminio, Hierro: La determinacién de hierro se hace por el método colorimétrico con fenantrolina 0 por la espectrofotometria de absorcién atémica. El primero se usa cuando no hay interferencia de sustancias © iones metilicos por lo que en caso contrario se recomienda el método espectrofotométrico. El método de la fenantrolina se basa en el hecho que el hierro ferroso reacciona con 1,10 fenantrolina en solucién acuosa para formar un complejo rojo anaranjado que puede ser facilmente medido por comparacién visual Plata: Puede ser determinado por el método colorimétrico de ditizona 0 por espectrofotometria de absorcién atémica, Este ultimo por ser sencillo, rapido y menos susceptible a errores por interferencia es el mas recomendable. c) Detergentes Ani6nicos: jeneralmente se utiliza el método de azul de metileno. Este método se basa en la formacién de una sal de color azul, al reaccionar los agentes aniénicos de activacién superficial (Getergentes) con el azul de metileno. Los agentes activos superficiales incluyen al alquil sulfonato de benceno (ASB), de degradacién lenta, y iiltimamente el alquil sulfonato lineal, que tiende a biodegradarse mucho mas répidamente. La sal formada es soluble en cloroformo y la intensidad del color es proporcional a la concentracién del agente de activacién superficial ara la eliminacion de interferentes (sulfatos orgénicos, sulfonatos, carboxilatos, fosfatos, fenoles, cloruros, nitratos, etc.), se puede utilizar el método de absorcién con carbono activado y luego se cuantifica el agente de activacion por el método de azul de metileno. 4d) Nutrientes: ‘Nitrogeno Amoniacal: Se determina por destilacién directa de la solucién basica en acido borico, seguida por la medicién del amoniaco por anilisis volumétrico con cido sulfurico normal, colorimétricamente por Nesslezacién o por Potenciométricamente por el electrodo de amoniaco. El método de destilacién se basa en que el nitrogeno amoniacal libre se puede recuperar cuando la mezcla se mantiene a unt pH cercano a 7,4, y luego se procede a la absorcién con aicido bérico. El amoniaco aislado se puede determinar por nesslerizacién o por titulacién, con una solucién valorada de un acido mineral fuerte. La determinacién colorimétrica por Nesslezacién se basa en Ia serie de colores, del amarillo al café, que se produce por la reaccién Nessler-amoniaco, por lo que la medicién fotométrica de la concentracién de nitrogeno amoniacal se puede hacer en un mbito considerable.24 Nitrogeno Oreénico: El método clisico de Kjeldahl determina al nitrégeno ligado orgénicamente en estado trivalente, Puede ser calculado como la diferencia entre el nitrogeno Kjeldhl total y el amoniaco. ara determinar el nitrogeno Kjeldhal total se digiere la muestra en acido sulfirico, sulfato de potasio y sulfato de mercurio para convertir el amoniaco y el nitrogeno organico en bisulfato de amonio. Después se procede a la descomposicién del complejo formado (complejo mercurio-amonio) por digestién con tiosulfato de sodio; para luego destilar el amoniaco en un medio alcalino y absorberlo en acido bérico. El amoniaco se determina por nesslerizacién 0 titulacién con Acido sulfirico normal Para la determinacién directa del nitrégeno organico se usa el mismo procedimiento bisico, excepto que es necesario Ia eliminacién previa de! amoniaco. Nitratos: Se puede determinar por el método de Brucina (sulfato de brucina y Acido sulfanitico), el cual se basa en que al reaccionar el nitrato y la brucina se produce un color amarillo que puede ser usado para Ia estimacién colorimétrica del nitrato. La interferencia producida por el cloro residual se puede eliminar mediant arsenito de sodio; en el caso de nitritos su interferencia se anula con el acido sulfani El método espectrofotométrico ultravioleta también se utiliza para la determina nitratos, por su rapidez y por que no requiere reactivos, sin embargo requiere la preparacion de ccurvas de correccién individuales para eliminar las interferencias por nitritos, cromo hexavalente y surfactantes; la interferencia de la materia organica puede minimizarse por dilucién. Ia adicién de Nitritos: La determinacién de nitritos se basa en que en medio acido el ion nitrito como Acido nitroso reacciona con el acido sulfanilico para formar la sal de diazonio, Esta dltima bajo condiciones de acidez se une a la N-(I-naftil)- etilenediamina para producir un compuesto de color purpura rojizo, el cual es directamente proporcional a la concentracién de nitrito presente que se puede leer en un espectrofotémetro. Fésforo: El andlisis de ortofosfato es la base para determinar todas las formas de fosforo. La selecci6n del método analitico depende principalmente de la concentracién de ortofosfato. EI método de dcido vanadomolibdico se utiliza para anélisis de rutina en la escala de 1-20mg Pf, el método de cloruro estafioso es més adecuado para niveles de 0,01 a 6 mg. P/L El fésforo total se determina indirectamente convirtiendo todas las formas fosforicas a ortofosfato mediante digestion con persulfato y luego se mide el ortofosfato con algunos de los métodos antes mencionados. Las formas de fésforo disueltas ¢ insolubles pueden separarse mediante filtracion de la muestra a través de un filtro de membrana de 0,45 micrones antes de efectuar la digestion y determinacién colorimétrica. ©) Aniones. Alcalinidad: Se determina fa capacidad de un agua para neutralizar el Acido titulandose con un Acido fuerte a los puntos de equivalencia del acido carbénico y bicarbonato, La alcalinidad de un liquido se clasifica como alcalinidad total o consumo de acido para alcanzar el pH = 4,5 y la alcalinidad fenoltaleinica o consumo de dcido para alcanzar el pH = 8,3.25 Esta ultima corresponde a la fraccién de alcalinidad por el hidréxido y Ia mitad del carbonato, la determinacién colorimétrica del punto final se efectia normalmente mediante un indicador de fenoltaleina. La alcalinidad total corresponde al hidréxido, bicarbonato y carbonato. El valor de equivalencia del pH depende de la concentracién total de alcalinidad (como CaCo3) en la siguiente forma: pH 5,1 para alcalinidad total de 30 mg/l, pH 4,8 para 150 mg/l y 4,5 para S00 mg/l. Para la deteccion colorimétrica del punto final a pH menos de 4,6 es més efectivo el anaranjado de metilo, mientras que para valores de pH mayores a 4,6 es recomendable una mezcla de indicadores (verde de bromocresol y rojo de metilo. Cloruro: Se determina generalmente por titulacién del ion cloruro en medio acido con solucién de nitrato merctirico para formar cloruro mercirico soluble. el punto final de titulacion es indicado por la formacién de un complejo de color pirpura que forma la fenilcarbazona con el exceso de ion mercirico a un pH 2,3 a 2,8. Para lograr un ajuste del pH a 2,5 + 0,1 se agrega un mezcla de Acido nitrico y difenilcarbazona, Los cloruros también se pueden determinar mediante anilisis volumétrico con un potenciometro (medidor de pH), con una solucién de nitrato de plata usando un electrodo de vidrio y otro de plata. El punto final del andlisis volumétrico es la lectura del instrumento en la cual haya ocurrido el mayor cambio de voltaje. Eluoruros: El principio de la determinacién se basa en el efecto "blanqueador" del ion fluoruro en un color previamente formado por la accién entre el ion circonio y el colorante alizarina. La accién decolorante es directamente proporcional a la concentracién del ion fluoruro. Sulfatos: Se determinan por métodos gravimétricos y el turbidimétrico. Para concentraciones superiores a 10 mg/l se considera que el método gravimétrico de calcinacion (800C) es el més exacto. El método turbidimetrico es recomendable para niveles por debajo de los 10 mgf. El método gravimétrico se basa en que el ion sulfato tiende a precipitar en un medio de ‘icido clorhidrico, como sulfato de bario por la adicién de cloruro de bario. La precipitacion se verifica a un punto cercano a Ia ebullicién, y después de un periodo de digestion el precipitado se filtra, se lava con agua hasta que quede libre de cloruros, se caleina o seca y se pesa como sulfato de bario El método turbidimétrico se basa en que el ion sulfato se precipita con cloruro de bario, en tun medio de Acido clorhidrico, en condiciones que permitan la formacién de cristales de sulfato de bario de tamafio uniforme. Se mide la absorbancia de la suspension de sulfato de bario por medio de un nefelémetro 0 turbidimétro y luego se determina la concentracion del ion sulfato por comparacion de la lectura con la curva de calibracién preparada a partir de la solucion patron. 1) Otras Determinaciones. Dureza: La dureza de! agua es debida a iones metilicos bivalentes que son capaces de reaccionar con el jabén para formar precipitados y con ciertos aniones presentes en el agua para formar incrustaciones. Los principales iones bivalentes son el calcio y magnesio.26 En algunos casos es importante conocer las cantidades de dureza célcica y dureza magnésica presentes en el agua, Por ejemplo, es necesario conocer la dureza magnésica para calcular la cantidad de cal requerida para el ablandamiento del agua La dureza célcica y la dureza magnésica pueden ser determinadas partiendo del anilisis, quimico completo, calculando la dureza debido a cada ion en particular, para lo cual se multiplica la concentracién de cada catién por el factor apropiado, que permite obtener as concentraciones equivalentes de carbonato de calcio. La sumatoria de ambas concentraciones nos daria la dureza total; en el caso de existir otros cationes productores de dureza deben también incluirse en este célculo. Para obtener el equivalente de CaCo3 (mgf) de los siguientes cationes, se multiplica la concentracién encontrada (mg/l) por el factor respectivo: Cation Factor CaCI ao 2,497 ‘Magnesio .. w A116 Estroncio . 1,142 Hierro 1,792 Aluminio 3,710 Zine 1,531 ‘Manganeso 1,822 El otro método para la determinacién de la dureza es por medio de basa en que el indicador Eriocromo Negro T a pH 10 + 0,1 a ser agregado a una solucion acuosa que contenga iones de calcio y magnesio, se forma un complejo de color rojo vino. Si entonces se agrega Acido etilendiaminotetracético y sus sales de sodio (EDTA) como titulador, se forman complejos de calcio y magnesio y el color de la solucién viraré del rojo vino al azul que es el punto final de fa titulacién, Calcio: Pueden usarse tanto el método de andlisis volumétrico EDTA como el de absorcién atomica. El primero por su rapidez y simplicidad lo hacen adecuado para aplicaciones rutinarias y de control EI método volumétrico se basa en que cuando el ADTA se agrega @ un agua que contenga tanto calcio como magnesio, se combina en primer lugar con el calcio que se tiene presente. El calcio se puede cuantificar directamente con el EDTA, cuando el pH se eleva 2 12-13 a fin de que la mayor del magnesio se precipite como hidréxido y cuando se use un indicador (Purpurato de amonio 0 indicador de murexina) que solo se combine con el calcio. ‘Magnesio: En la mayoria de los casos se determina como la diferencia entre la dureza total y la determinacién de calcio. Si se desea una medicién directa del magnesio puede usarse el método gravimétrico 0 el de absorcién atomica. pH: Es el logaritmo de la reciproca de ta concentracién del ion hidrégeno, 0 mas precisamente, de la actividad del ion hidrégeno, en moles por litro. En el agua un nimero constante de moléculas se ionizan de manera que el producto de las concentraciones de los iones (H+) y (OH) es 10-" (Ki), la cual es Ia constante de disociacién del agua. En agua pura existe el27 mismo niimero de iones (H+) y (OH-) 0 sea 10-’. La adicién de acidos 0 bases desplaza este equilibrio hacia uno u otro sentido, el pH mide esta caracteristica del agua. La escala practica del pH comprende del 0, muy acido a 14, muy alcalino, con el valor medio de 7 que corresponde a la neutralidad. La medicién del pH se realiza por el método electrométrico usando un electrodo de vidrio en combinacién con el potencial de referencia dado por un electrodo saturado de calomel, El sistema de electrodo de vidrio esté basado en que, a 25°C, un cambio de una unidad de pH produce un cambio eléctrico de $9,1 milivoltios. La determinacion de pH debe ser realizada preferiblemente en el campo; si no es posible, Ja medicién de laboratorio debe hacerse unas pocas horas después de la captacién de la muestra Acidez: La acidez del agua puede ser definida como su capacidad para neutralizar bases. Generalmente es debida, en condiciones naturales, a la presencia de bidxido de carbono y varios Acidos organicos, tales como acido ténico y himico, En aguas industriales puede estar presente cualquier acido o sal hidrolizable. La acidez se determina por titulacién con solucién 0,02N de hidréxido de sodio, con la presencia de un indicador que permita apreciar los diferentes puntos de equivalencia. Para el caso de la acidez total, la titulacién se realiza con fenoltaleina como indicador; Ia acidez. por acidos minerales se realiza con el indicador anaranjado de metilo y para la acidez de acidos minerales y sulfatos de hierro y aluminio la titulacién se efectia a temperatura de ebullicién usando fenoltaleina como indicador. Cloro: En los sistemas de tratamiento de agua potable es importante determinar el cloro libre residual, ya que por su fuerza de desinfeccién puede asegurar la eliminacién de organismos coliformes cuando se encuentra en concentraciones entre 0,2 a 0,3 mg/l Su determinacién puede efectuarse por varios métodos, pero el mas recomendable por su exactitud y precision es el de DPD (reactivo de color, N-N-dietil-P-Fenilenediamina), el cual puede realizarse colorimétricamente o titulométricamente, El primero tiene mejor aplicacién en el campo con un comparador, mientras que el segundo es preferible para el andlisis de laboratorio. ‘Ambos métodos pueden distinguir entre cloro combinado ¥ libre. Fenoles: Para su determinacién se recomienda el método colorimétrico de 4-aminoantipiridina con destilacion. Antes de efectuar la medicidn, los tintes del compuesto formado se deben extraer con cloroformo o éter dietilico, Aceites y Grasas: En la determinacién de grasa de cuantifica un grupo de substancias con caracteristicas fisicas similares, que se basan en su mutua solubilidad en el disolvente usado. Aqui se incluyen las grasas, ceras, aceites y otros materiales no volitiles que se extraen con el hexano de una muestra acidificada de aguas residuales o industriales, En la medicion de aceites y grasas se recomiendan los métodos de extraccién con un aparato soxhlet, extraccién por embudo de separacién y por espectrofotomettia infrarrojo El método de extraccién de soxhlet se basa en que los hidrocarburos relativamente no volatiles, tales como, aceites vegetales, grasas animales, ceras, jabones, grasas y materia organica afin, se hidrolizan por acidificacién (pH 1,0) con acido clorhidrico. Las grasas sélidas o viscosas, que se absorben en el auxiliar de filtracién, (suspension de auxiliar de filtraci6n de silice de28 diatomeas) se separan por filtracién, Luego se extrae la grasa en un aparato soxhler, usando hexano como disolvente, y el residuo remanente después de 1a evaporacién del hexano, se pesa para determinar el contenido de grasa de la muestra, EI método de extraccién por embudo de separacién es aplicable a Ia misma clase de aceites y grasas que en el método anterior. El solvente recomendado para la extraccién es el 1,2,2triclo-1,2,2 trifluoetano o también el éter de petrdleo. Este método cubre al igual que el de extraccién de soxhlet, la escala entre 5-1000 mg/l. La extraccién se efectita con un embudo de separacién y el contacto entre el disolvente y la grasa se fuerza mecénicamente con un agitador de cristal El método infrarrojo se utiliza para medir concentraciones de 0,2 a 1000 mg/l, y materiales orgénicas volatiles como la mayoria de combustibles de petréleo ligero. Oxigeno Disuelto: Los dos métodos mas usados para medir el oxigeno disuelto (OD) son: el Método de WINKLER (0 yodométrico) y sus modificaciones y el Método de Electrodo de Membrana, (De Giner, 1988; Gonzales, 1992; Cubillos, 1985), Las muestras de agua deben ser analizadas lo mas pronto posible, porque el contenido de oxigeno varia con el tiempo y ademas debe evitarse la posible entrada o salida de gases del envase que la contiene, La preservacién, en todo caso, puede hacerse agregando acido sulfirico concentrado y solucién de nitrato de sodio. EI método Winkler determina en forma indirecta el oxigeno disuelto en un liquido mediante reacciones de oxido-reduccién. Consiste en agregar el ion manganoso a la muestra y en caso de presencia de oxigeno libre, éste lo oxida bajo condiciones alcalinas a un estado de valencia mayor y en este estado el manganeso es capas de oxidar el ion yoduro (I-), que se agrega, a iodo libre (1,) en condiciones dcidas. Asi la cantidad de iodo libre que se forma es equivalente al oxigeno disuelto originalmente presente; para lo cual se mide por titulacin con solucién de Tiosulfato de sodio usando almidén como indicador del punto final, al virar de azul a incoloro, EI método de electrodo de membrana se recomienda en muestras que contienen materiales ‘ue interfieren con el método anterior, tales como: nitritos, dextrosa, sulfites, cloro, sales férricas etc, Ademas el método de electrodo es menos costoso, no destruye la muestra, ni requiere personal muy especializado, presenta mayor facilidad para determinaciones de oxigeno disuelto en tun mayor nimero y menor tiempo. El electrodo de membrana consiste en dos electrodos, uno de plomo (énodo) y el otro de plata (cétodo), ambos aislados por una membrana permeable solamente al oxigeno molecular. Los dos electrodos se encuentran en una solucién hidrolitica de carbonato acido de potasio para favorecer la conductividad eléctrica; entre ambos se encuentra un micro amperimetro que mide la corriente eléctrica que se produce en Ia reaccién de oxido reduccién, cuando el oxigeno al atravesar la membrana y legar al 4nodo, oxida el plomo. La corriente eléctrica registrada es proporcional a Ia oxidacién del plomo y por lo tanto a la cantidad de oxigeno disuelto. Demanda Bioquimica de Oxigeno: La Demanda Bioquimica de Oxigeno (DBO) de un muestra de agua, es la cantidad de oxigeno molecular consumida por los microorganismo: principalmente bacterias, para oxidar la materia carbonada susceptible a biodegracién en periodo de 5 dias y a una temperatura de 20C + IC.29 La DBO se utiliza para determinar la demanda de oxigeno en cuerpos de agua, Ia carga orgnica aplicada a plantas de tratamiento y la eficiencia de esos sistemas en la remocién de DBO. Ademés se usa como parémetro de disefio de sistemas de tratamiento de liquidos residuales y como base de investigaciones sobre cinética microbiana y procesos biologicos de tratamiento EI ejercicio de la DBO se leva a cabo en dos etapas bien definidas; la primera etapa representada por la demanda que ejercen los compuestos nitrogenados o etapa nitrificante. (Ver figura 1). La estabilizacion completa de la materia orgénica se realiza en un periodo més largo de tiempo, sin embargo se aceptan 5 dias para estandarizacién de la prueba, porque durante este tiempo alrededor del 70 por ciento de la materia organica carbonacea se ha estabilizado La determinacién de la DBO de una muestra de agua con materia orgénica (Residuos con requerimiento de oxigeno), se realiza generalmente por e! Método de Winkler modificado o por el Método Respirométrico. En ambos casos, para que el anilisis sea representativo de la masa de agua a analizar y se lleve a cabo sin ningun tipo de interferencia, por tratarse de un proceso netamente biologico, se deben cumplir las condiciones siguientes: = No debe haber posibilidad de reaereacion en las muestras, - No deben existir sustancias téxicas en concentraciones que it microorganismos. ~ El pH debe ser adecuado para el desarrollo de los microorganismos. ~ Debe existir los nutrientes necesarios para el crecimiento bacterial, tales como, nitrogeno y fosforo y micro nutrientes como hierro, magnesio etc - Si el residual no tiene una poblacién biolégica capaz de oxidar la materia orgénica, se hace necesario la inoculacién. El material de inoculacién normal es agua tipicamente doméstica, sedimentada, aireada continuamente durante 15 dias y mezclada en forma creciente con porciones del iquido residual a analizar iban la actividad de los Winkler Modifi alent : Este método se puede usar con muestras de agua cuya DBO no exceda de 7 mg/l, es decir, que sean pocos contaminadas como rios limpios, lagos, ete. Consiste en lenar dos botellas de Winkler con la muestra bien aireada, a una de ellas se le mide el oxigeno disuelto inmediatamente, y la otra se incuba a 20C durante 5 dias, al término de los cuales se le determina el Oxigeno Disuelto (O.D.) La diferencia entre ambas medidas de O.D. es la DBO. Para muestras con una DBO mayor de 7 mg/l, tales como residuos domésticos ¢ lustriales, efluentes tratados y las aguas superficiales contaminadas, es necesario diluirlas antes de la incubacién; de forma que el oxigeno disuelto que puede tener el agua sea suficiente para el proceso de degradacién, Como la fuerza contaminante del liquido residual no se conoce a priori, debe prepararse una serie de diluciones que abarque un rango considerable. En la tabla 5 se presentan diluciones a utilizar segiin la DBO esperada Solo es confiable estadisticamente valores de DBO en diluciones que produzcan un agotamiento de oxigeno entre el 40 por ciento y el 70 por ciento, que se puede expresar que el oxigeno disuelto final (ODF) debe ser mayor de 1 mg/l y la diferencia entre Oxigeno Disuelto Inicial (ODI) y ODF debe ser mayor de 2 mg/l, Para el andlisis final de la DBO se debe obtener el promedio de los diferentes DBO en cada dilucién, que cumplan la norma antes sefialada30 FIGURA 1 EJERCICIO DE LA DBO EN EL TIEMPO. Demanda Carbonacea + Nitrogenada DBO. (mg/) Demanda Carbonacea Tiempo en dias FUENTE: Elaboracion propia31 TABLA 5. DILUCIONES RECOMENDABLES SEGUN LA DBO ESPERADA. (AGREGANDO DIRECTAMENTE EN LAS BOTELLAS WINKLER DE 300 ML) Miililitros de Muestra Rango DBO 0,02 a 30,000- 105,000 0,05 secunennnneinas — 12,000- 42,000 0,10 : : 6.000- 21.000 0,20 peat oe 3,000- 10,500 0,50 1.200 - 4.200 1,0 600 - 2.100 2,0 300 - 1.050 5.0 120- 420 10,0 e 60 - 210 20,0 30- 105 50,0 treet 12- 42 100,0 6 21 FUENTE: DE GINER (1988). Método Respirométrico para el célculo delaDBO: Se basa en colocar la muestra del liquido bajo estudio en una atmésfera de aire en un sistema cerrado, manteniendo condiciones de agitacién y temperatura constantes, El oxigeno utilizado es medido en cualquier instante por los, cambios de presion observados, a través de un manémetro el cual tiene un liquido de densidad conocida, Con esta técnica la muestra no queda inutilizada al hacer el anilisis de la DBO, como en el caso del método de Winkler. Sin embargo esta ultima es la técnica estandar y para propésitos de normas se debe recurrir a ella. Demanda Quimica de Oxigeno: Esta representa el oxigeno requerido para la oxidacion quimica de los constituyentes orgénicos e inorgénicos presentes en una muestra de agua. La oxidacion se lleva a cabo con dicromato de potasio en una solucién de acido sulfirico a temperatura de reflujo. Se usa sulfato de plata como catalizador y sulfato de mercurio para climinar a interferencia de! cloruro, el exceso de dicromato se titula con sulfato ferroso amoniacal, usando un complejo ferroso de ortofenatrolina como indicador. La DQO se utiliza principalmente en el analisis de desechos industriales, establecer nes con la DBO, conocer la carga orgénica impuesta a un sistema de tratamiento y contaminantes. rel determinar la eficiencia de los mismos en la remocién de las sustar32 Pesticidas: El andlisis de pesticidas en las aguas y aguas de desecho es sumamente complejo, por lo que se requiere del uso de equipos especializados y de personal altamente capacitado, Existen una serie de métodos para la determinacién y cuantificacién de pesticidas, sin embargo los mas extendidos son el anilisis por cromatografia de gases segun la extraccién Tiquido- liquido de las muestras de agua y el método de cromatografia de gases/espectrometria de masas. (APHA-AWWA-WPCE, 1992) Los métodos de cromatografia de gases son procedimientos microanaliticos altamente sofisticados. Para su aplicacién microanaliticos altamente sofisticados. Para su aplicacién se necesita una fase movil (un gas portador) y una fase estacionaria (columna de relleno o recubrimiento de columnas capilares) para separar los compuestos individuales. El gas portador suele ser nitrOgeno, argon-metano, helio 0 hidrégeno; para la columna del relleno, la fase estacionaria consiste en un liquido recubierto por un sélido inerte granular denominado relleno de columna que se conserva en un conducto de vidrio de borosilicato. La columna se instala en un horno cuya boca de entrada esta conectada a un bloque inyector calentado y la de salida @ un detector, Cuando se introduce una solucién muestra en la columna, los compuestos organicos se vaporizan y se mueven a través de la columna mediante el gas portador, hasta llegar a los detectores que permitan identificar los compuestos presentes, Existen varios tipos de detectores de compuestos para su uso en los sistemas de cromatografia de gases, entre los cuales tenemos: Detectores de conductividad electrolitica: Suelen utilizarse en el anilisis de halocarburos, pesticidas, herbicidas, productos farmacéuticos y nitrosaminas, Estos detectores identifican a los ‘compuestos presentes por la contrastacién de la diferencia de conductividad entre un electrodo de referencia que contiene el disolvente adecuado (halégeno, nitrégeno, azufre o nitrosamina), y el electrodo analitico que contiene el disolvente, el gas portador y los productos de la reaccién Detectores de captura electronica: Se utiliza para analizar compuestos que posean altas afinidades electronicas, como es el caso de los pesticidas clorados, los medicamentos y sus metabolitos, Son altamente sensibles a las moléculas que contengan grupos electronegativos, halogenos, peréxidos, quinonas y grupos nitrogenados. La identificacién de los compuestos se realiza por comparacién de la intensidad de corriente que se produce al introducir la muestra en el detector y la intensidad de una corriente de referencia. Detector de ionizacién de lama: Se utiliza para la deteccién de compuestos orgénicos que contengan carbono. Consiste en una llama de dif sion de hidrégeno- aire que prende en el extremo de un quemador y cuando un compuesto organico penetra en ella, se forman productos intermedios eléctricamente cargados, cuya corriente resultante se amplifica y se mide con un electrémetro Detector de fotoionizacién: La fotoionizacién se produce cuando una especie molecular absorbe un fot6n de energia luminosa y se disocia en un ion asociado y un electron. El detector de fotoionizacion esta dotado de una fuente de luz ultravioleta que emite fotones, los cuales llegan a una cémara de ionizacién son absorbidos por los compuestos presentes, produciéndose Ia ionizacién de los mismos. Los iones resultantes son acelerados hacia un electrodo de toma de33 muestras; Ia corriente que se produce es medida con un electrometro y es proporcional a la concentracién de las sustancias a analizar. Expectrometro de masas: Con este detector se pueden identificar una amplia gama de compuestos y deducir las estructuras de éstos a partir de unos modelos de fragmentacién, El espectrometro de masas detecta los compuestos mediante la ionizacién de las moléculas. Los iones cargados de diferentes tamafios, se separan en funcién de la relacién carga-masa (ligada al peso molecular), por medio del detector, que utiliza campos variables eléctricos y de radio-frecuencia. Cuando abandonan el detector, los iones son atraidos hacia el multiplicador de electrones, y dado que los campos eléctricos y de radio-frecuencia poseen un caricter ciclico de algunos segundos se puede obtener un modelo de fragmentacién. La mayoria de las sustancias quimicas poseen un modelo tinico de fragmentacién llamado "Espectro de Masa"; por lo cual la ‘identificacién de las mismas puede ser posible con la obtencién de modelos de fragmentacion a través de la espectrometria de masas. Cromatrografi iin_ta_Extraccién liquido-liquido. Este procedimiento de cromatografia de gases es adecuado para determinar cuantitativamente los compuestos siguientes BHC, lindano, heptaclor, aldrin, epéxido de heptaclor, dieldrin, endrin, captan, DDE, DDD, DDT, metoxiclor, endosulfan, dicloran, mirex, pentacloro, nitrobenceno, estrobano, toxafeno, clordano, paratién, metilparatién, malatién, herbicidas clorado, fenoxiicidos y sus esteres, ete. EI método consiste en extraer los pesticidas con un disolvente mixto, ya sea diet éter/hexano o cloruro de metileno/hexano. El extracto se concentra por evaporacién, y luego se determinan los compuestos mediante una cromatografia de gases, Al pasar cada componente a través del detector, se mide un cambio cuantitativamente proporcional en sefial eléctrica sobre un grifico registrador, observandose en éste iltimo un pico para cada componente detectado. La relacién altura del pico/érea de! pico es proporcional a su concentracién, El detector utilizado en este método es un detector de captura electronica, sin embargo si se dispone de suficiente pesticida para la detecci6n, es recomendable la espectrometria de masas Cromatografia_de_Gases/Espectrometria de Masas Depuracién de Ciclo Cerrado. Este procedimiento es adecuado para analizar la presencia de un amplio espectro de compuestos orginicos en el agua, tales como: Tricloroetano, tricloroeteno, diclorobromometano, clorobenceno, tetracloroeteno, etilbenceno, xileno, bromoformo, bromobenceno, diclorobenceno, hexacloroetano, naftaleno, hexaclorobenceno, antraceno, pireno, crisemo, benzoantraceno, ete. En la depuracién de ciclo cerrado, los compuestos orgénicos volatiles de peso molecular intermedio se depuran mediante una corriente ciclica de aire, Las sustancias orgénicas se retienen en un filtro de carbono activado y se extraen de este filtro con disulfuro de carbono. El extracto se inyecta en una columna capilar cromatdgrafo de gases -espectrometria de masas para identificar el compuesto orginico segin el tiempo de retencién y la correspondencia del espectro; la cuantificacion se realiza por integracién de una corriente de iones simples. Radiactividad: La determinacién de !a radiactividad, como la de los pesticidas, es una actividad especializada que no se efectiia rutinariamente en la mayoria de los laboratorios de calidad de agua. Sin embargo, debido a Ia presencia de contaminantes radiactivos en abastecimientos de agua y en las descargas de desechos, se ha creado la necesidad de desarrollar34 métodos para el muestreo, preparacién de las muestras, y medicién de la radiactividad en el agua y materiales afines. Por lo que se recomienda que en cada pais exista por lo menos un centro laboratorio en donde puedan realizarse examenes radiol6gicos simples. En el caso de la recoleccién de muestras para andlisis radiactivos se debe tener cuidado de evitar la deposicién de la radioactiviadad en las paredes de la cristaleria y del equipo, ya que puede inducir a pérdidas en su determinacin y posibles contaminantes de las subsiguientes muestras. En este sentido se recomienda el uso de recipientes de polietileno, las cuales presentan menor tendencia a la contaminacién con respecto a la mayor parte de los radionuclidos La medicién del grado de radiactividad se realiza a través de instrumentos especiales de lectura, dentro de los cuales los mis usados son los "Contadores Internos Proporcionales", que permiten determinar la actividad alfa (radiacién emitida por el Uranio, Radio, Torio), la actividad beta de radionuclidos especificos, tales como estroncio total, estroncio -90, yodo 131, entre otros. Los instrumentos contadores consisten, basicamente, en un detector y un medidor de intensidad 0 un cantador electrénico (escalimetro). Cada instrumento exige el uso de un tipo especifico de gas y de accesorios de lectura, asi como ajustes especiales para la sensibilidad y la verificacion de instrumentos para su operacion adecuada. Las técnicas para el examen radiologico van a depender del tipo de radiactividad, asi - La actividad alfa global puede ser determinada por la técnica de evaporar completamente Ja muestra justamente abajo de la temperatura de ebullicién y luego proceder al conteo. Esto lihtimo debe efectuarse con un contador proporcional interno, La actividad beta global puede ser determinada, al igual que la alfa, por la técnica de evaporar la muestra por completo y luego contar, por medio de un contador proporcional interno La diferencia con la actividad alfa, radica en que el volumen de la muestra evaporada sea tal que la capa s6lida que quede en el fondo del recipiente no exceda de 10 mg por centimetro cuadrado, cn el area contada; mientras que en Ia mediciOn de la actividad alfa dicha capa no exceda de 5 mg/om2 del fondo del recipiente. ~ El estroncio total radioactivo se determina agregando una cantidad conocida de iones inactivos de estroncio, en la forma de nitrato de estroncio, para que acttie como acarreador de los radionuctidos del estroncio. Estos ultimos junto con el "acarreador", se separan de los otros elementos radiactivos y de los sélidos inactivos de la muestra por precipitacién como nitrato de estroncio en una solucién concentrada de Acido nitrico. El conjunto de is6topos radiactivos del estroncio (incluyendo el acarreador), se precipita finalmente como oxalato de estroncio monohidratado, mediante la adicién de solucién saturada de oxalato de amonio. Luego el precipitado se seca y se pesa, y en el cual cuantifica la radiactividad, a través de un contador proporcional interno. La concentracién maxima del estroncio radiactivo en el agua es de 8 PCi/. - Cesio Radiactivo: Si la actividad del cesio es alta, puede determinarse directamente el cesio radiactivo mediante el conteo gamma de una muestra liquida de 4 litros o bien puede evaporarse hasta total sequedad y contarse, En muestras bajo nivel, como las que ocurren en el medio ambiental natural, se afiade el portado de cesio a una muestra acidificada y se recoge el cesio en forma de fosfomolibdato, que se purifica y precipita como Cs2Ptcl6 para el conteo correspondiente. Si el radiocesio total determinado supera el valor de 30 Pci, se mide el Cs" y35 Cs'"" mediante espectrometria gamma, El limite de deteccién recomendado para el Cs es de 10 Pei -Yodo Radiactivo: El yodo radiactivo resulta de los dispositivos de ensayos nucleares o se libera durante el uso y tratamiento de combustibles nucleares. Los productos de fisién pueden contener desde yodo 129 hasta yodo 135. En la actualidad en I” presenta probabilidades de encontrase en el agua. Cuando se ingiere o se inhala, se concentra en Ia glandula tiroides y puede provocar cancer de tiroides El método més utilizado para su determinacién es el de precipitacion, debido a su sencillez y al menor gasto de tiempo que requiere en su aplicacién, Consiste el método en afiadir el portador de yodo a una muestra acidificada, y después de la reduccién con sulfito de sodio 0 yoduro, se precipita el I"! con nitrato de plata. El precipitado se disuelve y se purifica con polvo de zine y Acido sulfirico, y se vuelve a precipitar la solucién como yoduro de paladio para conteo mediante un contador beta de baja radiacién de fondo. El maximo nivel de contaminacién de I”! en el agua potable es de 3 Pei -Radio: El radio tiene cuatro isdtopos producidos de forma natural = Radio 223, radio 224, radio 226 y radio 228. Los tres primeros isotopos son emisores alfa mientras que el iltimo (radio 228) es emisor beta. La determinacién det radio por precipitacién es el més utilizado para los isdtopos de radio ‘emisores alfa; es una técnica aplicable a las aguas potables, aunque también se puede usar en residuos industriales y cloacales, con previa eliminaci6n de la materia organica y de estos iones interfirientes, Para la determinacién del radio 228 se utiliza el método de precipitacion secuencial, también se usa para determinar la combinacién de radio 228 y 226. EI método de precipitacién se basa en que debido a la diferencia existente en las vidas medias de los niclidos, en las series que incluyen los isstopos de radio emisores alfa, estos is6topos pueden identificarse por Ia tasa de crecimiento interior y la desintegracién de sus descendientes en un precipitado de sulfato de bario, Se utilizan como portadores el nitrato de plomo y el cloruro de bario, los cuales se afiaden a la muestra que contiene citrato alcalino, luego se agrega dcido sulfurico para precipitar radio, bario y plomo en forma de sulfatos, El precipitado se purifica mediante lavado con cido nitrico, disolucién en Etilen-doaminotetraacetato disédico alcalino y nueva precipitacién como sulfato de radiobari para el conteo correspondiente con un contador proporcional intemo © contador de centelleo alfa. El nivel maximo de contaminacién para radio 226 y 228 es de 5 PCiI, y de 3 PCI para el radio 226, El método secuencial de precipitacién consiste en concentrar el radio 228 y el radio 226 presentes en el agua, luego separarlos por coprecipitacion con bario y plomo en forma de sulfatos y purificar por quelacién con Etilen-diaminotetraacetato disédico, Después de un periodo de ‘crecimiento (36 horas) se transporta mediante oxalato de itrio realizéndose un conteo beta sobre i (radio 228), El radio 226 se precipita en forma de sulfato, se purifica y se efectiia sobre él un conteo alfa. Si no se desea el anilisis de radio 226 puede terminarse el procedimiento de radio 228 mediante un conteo beta de! precipitado de oxalato de itrio, con una precipitacién complementaria de sulfato de bario, -Tritio: El tritio existe en el ambiente como resultado de la produccion natural de radiacion césmica y de los ensayos con armas nucleares. El nivel maximo de contaminacién se36 sitia en 20,000 PCiA. Para su determinacién se utiliza el método espectrométrico de centelleo liquido, el cual consiste en tratar la muestra por destilacién de permanganatos alcalinos para retener la mayor parte de los materiales de amortiguamiento, como el yodo y el carbono radiactivos. Se mezcla una submuestra del destilado con solucién de centelleo (1,4 dioxano, naftaleno; 1,4-di-2-(5-Feniloxazolil) benceno; 2,5-difeniloxazol) y se mide la actividad beta en un espectrémetro de centelleo liquido. -Uranio: Es una mezcla de tres isétopos radiactivos: Uranio 238, Uranio 235 y Uranio 234. La mayor parte de las fuentes de agua potable, en especial las aguas de superficie, contienen carbonatos y bicarbonatos que pueden formar complejos de uranio y mantenerlos en solucién. El nivel de contaminacién en las aguas es de 10 PCi/. Los métodos para la determinacién del uranio en las aguas son el método radioquimico y el fluorométrico. El método radioquimico consiste en acidificar la muestra con écido clorhidrico y se hierve para eliminar los iones carbonato y bicarbonato. El uranio se coprecipita con hidroxido férrico y se separa a continuacion, El hidréxido fértico se disuelve, pasa a través de una columna de intercambio aniénico y se lava con écido, mientras que el uranio después de agregarle acido clothidrico se evapora hasta sequedad casi total, fa sal residual se convierte a la forma de nitrato afiadiendo porciones de Acido nitrico concentrado y se mide la actividad alfa con un instrumento de centelleo, EI método fluorométrico consiste en filtrar porciones de la muestra a analizar y luego ‘evaporar hasta que se seque. Después se afiade solucién patron de uranio y se evapora totalmente, Se funde el residuo en un fundente de fluoruro de sodio-carbonato de potasio. El material se solidifiea y produce fluorescencias debidas al uranio, que se miden bajo luz ultravioleta en un fluorémetro de alta sensibilidad 4, Métodos de Aniflisi Hasta fos actuales momentos no existen andlisis que se realicen en forma répida y que garanticen en grado razonable la presencia o ausencia de microorganismos patogenos en el agua. Algunos procedimientos que se usan para el aislamiento, identificacién y enumeracién son dificiles, y complicados, ademas de que requieren mayor volumen de muestra y mayor tiempo de procesamientos. Por estas razones se han adaptado procedimientos indirectos, a través de los amados indicadores biologicos, para definir la calidad bacteriolégica del agua. Los indicadores biologicos mas usados para éstos fines son los llamados organismos coliformes, cuya presencia, ademas de estar asociada con posibles riesgos para Ia salud, es utilizada como indicador de la eficiencia del tratamiento al cual es sometida el agua. El estimado o determinacién de los organismos coliformes se realiza empleando la técnica de los tubos miltiples de fermentacién y el contaje total de colonias, 4.1. Contaje Total de Colonias. Tiene por objeto determinar el contenido bacterial de la muestra de agua por unidad de volumen (ml) bajo condiciones definidas de cultivo. Es utiizado como un anilisis auxiliar en el control de la potabilidad del agua y puede dar informacién importante cuando se evalita la calidad de un sistema de distribucién y Ia efectividad de los procedimientos de purificacién Esta téonica consiste en transferir una cierta cantidad de muestra (1 ml) a una placa de petri estéril, en el caso de aguas de desecho o aguas no tratadas se siembran volimenes de37 diluciones decimales. Luego se agrega a la placa una cantidad establecida de medio de cultivo (12 - 15 ml) de Agar Standard, a una temperatura de 45°C (aproximadamente), después se incuban a 35°C por un periodo de 48 horas + 3. El conteo de las colonias se realiza directamente cuando no son muy numerosas y se multiplica por la dilucién respectiva; cuando son muchas las colonias se utiliza el contador de colonias. Miiltipl Ferment El andlisis bacteriolégico por esta técnica consiste en determinar la densidad del grupo coliforme expresada en términos del "Nimero Mas Probable" (NMP). Por 100 ml de muestra Este NMP debe entenderse como un indice del nimero de bacterias coliformes que tienen mayor probabilidad sobre cualquier otro nimero y no es la enumeracién real de coliformes presentes. En la aplicacion de esta técnica, se utilizan volimenes determinados de la muestra y nameros definidos de proporciones de cada volimen analizado. Se recomienda utilizar por lo menos cinco porciones de 10 mi de cada muestra, cuando son aguas tratadas, pero en definitiva el iiimero de diluciones se selecciona de acuerdo al rango previamente estimado de coliformes. Dentro de la técnica de los tubos miltiples de fermentacidn se incluyen tres pruebas: presuntiva, confirmativa y completa 6 complementaria a) Prueba Presuntiva. Para el caso de aguas para consumo humano se inocula una serie de 5 tubos de fermentacién que contiene 20 ml de caldo lactosado estéril con 10 ml de muestra. Luego se incuban a la temperatura de 35°C + 0,5°C, durante 24 horas y 48 horas, al cabo de estos tiempos se examinan los tubos. La presencia de cualquier cantidad de gas en los tubos de Ja serie, constituye una prueba presuntiva positiva; 1o contrario es un prueba negativa En aguas ligeramente 0 muy contaminadas, se inoculan series de 5 tubos de fermentacién que contengan 10 mi de caldo lactosado estéril. Se incuban durante 24 horas a la temperatura de 35°C + 0,5°C y se examinan los tubos, y si no se ha producido gas se examinan al cabo de 48 horas. La presencia de gas en los tubos de la serie constituye una prueba Presuntiva Positiva, b) Prueba Confirmativa: Se emplean tubos de fermentacién con caldo lactosado con bilis y verde brillante, este medio es selectivo para los miembros del grupo coliforme e inhibidor para la flora restante. Los, tubos positivos de la prucba anterior se inoculan en una serie de 5 tubos con el medio de cultivo antes mencionado, se incuban a 35°C 4 0,5°C por 48 horas. La presencia de gas en los tubos de fermentacién, constituye una prueba confirmativa positiva. Para separar los coliformes de origen fecal de los no fecales, se procede a la inoculacién de los tubos positivos de la prueba confirmativa, en tubos con caldo lactosado y se incuban a 35°C durante 24 horas, de los tubos positivos se inoculan en una serie de 5 tubos con medio EC y se incuban en bafio de maria a 44,5°C + 0,5°C de 6 a 24 horas. La presencia de gas se considera una reaccién positiva que indica presencia de organismos coliformes de origen fecal. En la figura 2 se presenta un diagrama esquematico de las pruebas antes descritas. ©) Prueba Completa: Esta prueba generalmente no se efectiia como andlisis de rutina, pero puede hacerse para el control de calidad de agua potable o para comprobar la validez de la prueba confirmativa. La38 FIGURA N° 2 DIAGRAMA ESQUEMATICO PARA DETECTAR COLIFORMES TOTALES Y COLIFORMES FECALES MUESTEA DE AGUA NATURAL { I ‘RLO0 LaURIL TRIPTOSE LPRUERR PRESWWTI¥A) | — sn bas (1 a8 (9) | ESceeeeee-eeeeeeeeererererrseaeaT INCUBAR 24 ORAS & ESD { Medio: is + i nh | Verde Brillante eee eee —_—_ 1 \ PRUEBR DE TENPERATURE | ELEUDH (EC) | 1 SIN 688 (-) Bas U4) I INCUBAR 24 HORAS. (ERO NBRIA) I AAS? (20.5) COLIFORNES AUSENTES | rd CcaLOO LacTosaDa IN a5 SILIS J COLIFORNES FECALES AUSERTES SRIRLANTE INCUBA 24-98 HORAS A 35°C . | LL gas - coLiFoenes i FECALES PRESEMTES i CRLOULAR NMP Feces eee eee was I SIN 6aS PRUEA NEGATIVA PRUERA POSITI¥ COLIFORNES AUSENTES . CALCULAR MNP CONF TRNADE Fuentes INOS (8/F2). Matual Ge Laboratorio Fisico-Quinico y Secterueléqicn.39 prueba completa consiste en inocular Placas de Eosina Azul de Metileno o Agar de Endo a partir de los tubos confirmados positivos, luego se incuban a 35°C 4 0,5°C durante 24 horas, Al cabo de este tiempo, las colonias formadas se replican en caldo Lauryl y tubos de Agar Nutritivo. Después del Periodo de incubacién, se preparan frotis para la tincién de Gram, que permite identificar los ‘organismos Gram positivos y los Gram negativos (organismos coliformes). El célculo y registro de NMP, tanto de la prueba presuntiva, confirmativa o completa, se efectiia en base a la combinacién del nimero de tubos positives y negativos, para lo cual se utilizan tablas apropiadas para este fin (ver tabla 6 ).TABLA 6. Indice NMP y de resultados positivos cuando son usados 5 tubos por 40 tes de confianza del 95% para varias combinaciones (10 mi, 1 ml, 0.1 ml. ) [Combinacién] indice ] Limitesde confianza [Combinacién] Indice | Limites de confianza detubos |NMP por] del 95% detubos |NMP por] del 95% positives | 100 ml |limite inferior limite superior| positives | 100 ml {limite inferior limite superior ooo | <2 - = 4-2-0 | 2 9 36 0-0-1 2 1 10 4-2- 26 2 5 0-1-0 2 1 10 4-3-0 | 27 2 67 o-2-0 | 4 1 B 4-3-1 | 33 15 71 1-0-0 [ 2 1 im 4-4-0 | 34 16 80 1-0-1 4 1 15 3-0-0 | 23 9 86 rio | 4 i 15 3-0-1 | 30 10 1 Vil 6 2 18 3-0-2 | 40 20 140 1-2-0 6 2 18 S-1-0 | 30 10 120 2-0-0 | 4 1 7 5-1 50 20 150 2-0-1 7 2 20 s-1-2 | 6 30 180 2-1-0 7 2 21 5-2-0 | 50 20 170 2-1-1 9 3 24 5-2-1 | 7 30 210 2-2-0 9 3 25 s-2-2 | 94 40 250 2-3-0 | 2 5 29 3-3-0 | 79 30 250 3-0-0 | 8 3 24 s-3-1 | no 40 300 3-0-1 | 4 29 3-3-2 |_140 @ 360 3-1-0 | 4 29 $-3-3 | 180 80 10 3-1-1 | 6 35 3-4-0 | 10 50 390 3-2-0 | 6 35 3-4-1 | 170 70 480 3-2-1 | 17 7 40 3-4-2 | 220 100 580 4-0-0 | 3 5 30 3-4-3 | 280 120 690 cor [| 1 i 45 S.4-4 | 350 160 820 4-1-0 | 7 7 46 5-5-0 | 240 100 940 ei | a 9 33 3-5-1 | 350 100 13300 4-1-2 | 26 12 6 3-5-2 | 540 200 2,000 5-5-3 | 920 300 2.900 S-5-4 | 1.600 600 3.300 5-3-5 | 2400 - 5 Fuente : M.S.A.S. (1992 ). Manual de Laboratorio41 4.3 Métodos RApidos Para Determinar la Calidad del Agua. En casos de desastres o fenémenos naturales en los cuales se producen interrupciones del suministro de agua debido a fallas en los sistemas de tratamiento y/o rupturas en las tuberias de distribucién 0 en casos de epidemias de enfermedades de origen hidrico, es de suma importancia la consecucién de resultados rapidos y efectivos en Ia determinacién de la calidad sanitaria del agua, para garantizar la salud de la poblacién afectada. En tales situaciones de emergencia, es posible contar con una serie de métodos de laboratorio, que de manera cualitativa, puedan cumplir con esta finalidad Estos métodos estan basados en la deteccién de organismos del grupo coliforme mediante técnicas convencionales modificadas y en la deteccién de colifagos 0 bacteriéfagos que infectan y se multiplican en las bacterias del grupo coliforme. (Pimentel, 1991). A continuaci6n se describen os métodos mas usados: a) Presencia o Ausencia (P-A) Anilisis de Coliformes Este método es una modificacién simplificada del método de tubos multiples de fermentacién, obteniéndose los resultados en menos de 48 horas, ademas de que permite efectuar grandes cantidades de andlisis por unidad de tiempo. Consiste en inocular una porcion de 100 ml de muestra en una botella con medio de cultivo a base de caldo P-A (Caldo Lactosado, Caldo Lauril Triptosa, Purpura de Bromocresol y agua destilada) y después de mezclar por medio de agitacion, se incuba a 35°C + 0,5°C durante 25 y 48 horas. En estos periodos de tiempo se observa con el fin de detectar un viraje en el color, indicativo de una reaccién cida (coloracién amarilla), debido a la fermentacion de la lactosa, Luego se procede a observar la produccion de gas, que se manifiesta en la formacién de espuma en la superficie del medio de cultivo, cuando se agita levemente el frasco contentivo de Ia muestra, La presencia de gas, requerira la realizacion de la prueba de confirmacién en el Caldo Bilis verde Brillante (BGLB), para lo cual se inocula en este medio de cultivo y se procede a su incubacién bajo las condiciones de tiempo y temperatura antes mencionadas. La produccién de gas a las 48 horas confirmard la presencia de organismos coliformes en la muestra baja estudio, b) Anilisis Directo de Coliformes Fecales en 24 Horas (A-1) Este método se basa en la seleccién de los organismos coliformes, por medio de elevadas temperaturas, en coliformes totales y coliformes fecales. El procedimiento consiste en inocular 10 ml de muestra en tubos con medio de cultivo a base de caldo A] (Lactosa, Triptona, Cloruro de Sodio, Salicin, Triton X-100 y agua destilada), de igual manera como se efectiia para los eximenes de rutina, luego se incuban por 3 horas a temperatura de 35°C £ 0,5°C, y se transfieren posteriormente al bafio de maria a'44,°C 4 0,5°C e incubar por un periodo adicional de 21 horas, La produccién de gas en cualquier tubo indica la presencia de organismos coliformes en la muestra de agua; asi mismo se puede determinar el NMP de coliformes fecales utilizando la combinacién de tubos positivos y negativos, como se efectia en las pruebas de rutina, c) Analisis de Colift les por el Mé ete Horas. Este método es similar al de la membrana filtrante, pero con la utilizaci6n de un medio de cultivo diferente y una temperatura de incubacién mas elevada que permite la obtencién de resultados en un tiempo de 7 horas. El medio de cultivo utilizado es el Agar FC M-7 hy, el cual esta integrado por las siguientes sustancias: Proteosa Peptona N°3 o Polipeptona, extracto de42 levadura, lactosa, d-Manitol, cloruro de sodio, sodio lauril sulfato, desoxicolato de sodio, pirpura de Bromo-eresol, rojo fenol, agar y agua destilada. El procesamiento consiste en filtrar un volumen apropiado de la muestra a través de una membrana filtrante, colocar la membrana sobre la superficie del medio de cultivo e incubar por 7 horas a una temperatura de 41,5°C. Si hay Ia presencia de colonias de coliformes fecales aparecera una coloracién amarillenta en el medio, como resultado de la fermentacion de la lactosa 4) Determinacién de Colifagos: Debido a la estrecha relacion existente entre los organismos del grupo coliforme y la presencia de colifagos en el agua, estos tltimos se han venido utilizando como indicadores de la calidad sanitaria del agua potable, Ademés de que los colifagos son més resistentes a la accién desinfectante del cloro, la cual los coloca en situacién ventajosa como indicadores de contaminacién fecal, con respecto a los organismos coliformes. Actualmente existen dos métodos para la deteccién de bacterdfagos: ‘Metodologia segiin el Standard Methods: En la aplicacion de este método se utiliza la Escherichia coli como huésped y los siguientes medios de cultivo; 1) Agar Tripticasa soya (TSA), cl cual se prepara con Triptona, Soytone o Peptona de la soya, cloruro de sodio, agar y agar destilada. 2) Caldo Triticasa soya (TSB) el cual se prepara con Triptona, Soytone o Peptona de la soya, dextrosa, cloruro de sodio, fosfato acido de potasio y agua destilada. 3) Agar Tripticasa soya modificado (MTSA), que se prepara con el medio de TSA, nitrato de amonio, nitrato de estrontium y agar, 4) Glicerina y 5) 2,3,5-Trifenil tetrazolium cloro (TPT2). El procedimiento consiste en aftadir el organismo huésped a un volumen apropiado de la muestra a analizar, Iuego se procede a mezclar bien con los medios de cultivos antes sefialados y se vierte en placas de Petri para su incubacién a 35°C por 4 0 6 horas. Al final de este periodo se cuentan las placas formadas y se estima el nimero de coliformes totales y fecales en la muestra, aplicando las siguientes expresiones: coliformes totales log y = 0,627 (log X) + 1,864. coliformes fecales log yl = 0,805 (log X) + 0,895. rmes totales/100ml coliformes fecales/100m, X = colifagos/100ml -Metodologia segin Atlantic Research Cooperation: Para la aplicacién de este método se utiliza el mismo huésped (Eschericha Coli) que en el caso anterior y los siguientes medios de cultivo: 1) caldo nutritivo y cloruro de sodio. 2) Agar semisdlido y 3) Agar en placas. El procedimiento consiste en mezclar el organismo huésped en un volumen apropiado de Ja muestra a analizar, y los medios de cultivos antes mencionados, luego se vierten en placas dea3 Petri para su incubacién a 37°C durante 4 a 6 horas, Al final de este periodo se cuentan las placas formadas y se estima el nimero de coliformes totales y fecales presentes en la muestra, aplicando las formulas presentadas en el método anterior (Standard Methods), ©) Otosmé a Existen otros métodos que permiten determinar répidamente la calidad sanitaria de! agua, pero que requieren del uso de técnicas y personal altamente especializados, estos son’ Quimioluminicencia: Que se basa en la deteccién y registro, por medio de circuitos de luz visible que se producen cuando reaccionan el peréxido de hidrdgeno, luminol y microorganismos. Inmunofluorescencia: Se basa en que las bacterias en el agua pueden ser detectadas por su reaccién con anticuerpos y después se visualizan por medio de tinciones. Técnicas enzimiticas: Se basan en que las bacterias y virus pueden ser detectados indirectamente por la presencia de ciertas enzimas que son comunes entre los organismos ppatégenos, las cuales pueden ser detectadas por medio del luminol. ‘Sonda genética’ Se basa en la dete organisms especificos. i6n de pequefias cantidades de material genético de