Wawasan baru ke peritrofik Matrix Sintesis, Arsitektur, dan Fungsi

Kata Kunci
kitin, protein yang mengikat kitin, glikosilasi, mucin, struktur

Abstrak
Matriks peritrofik (PM) adalah lapisan kitin dan glikoprotein yang melapisi midgut
invertebrata. Meskipun secara struktural berbeda, secara fungsional mirip dengan
sekresi lendir saluran pencernaan vertebrata. PM adalah barier fisik, yang
melindungi epitel midgut dari partikel makanan yang abrasif, enzim pencernaan,
dan patogen infeksius per os. Hal ini juga merupakan barier biokimia, eksekusi dan,
dalam beberapa kasus, menonaktifkan racun yang dicerna. Akhirnya, PM
mengkompartemenkan proses pencernaan, sehingga memungkinkan untuk akuisisi
nutrisi yang efisien dan penggunaan kembali enzim hidrolitik. PM terdiri dari kisi
fibril kitin yang terorganisir yang berjalan bersama protein kitin yang mengikat.
Glycans mengisi ruang interstitial, menciptakan saringan molekuler, sifat-sifat yang
tergantung pada isi dari ion dan pH. Dalam ulasan ini, Peneliti secara terintegrasi
memberikan informasi struktural dan fungsional yang baru untuk menciptakan
model yang holistik untuk PM. Peneliti juga menunjukkan bagaimana informasi ini
dapat menghasilkan teknologi baru untuk digunakan dalam pengendalian hama
serangga.

PENDAHULUAN
Sebuah selubung membungkus bolus makanan larva lepidopteran dicatat oleh
Lyonet (63) dan pertama disebut sebagai membran peritrofik oleh Balbiani (6).
Istilah matriks peritrofik (PM) telah berkembang sebagai konvensi umum; Namun,
pelapis peritrofik adalah istilah tepat digunakan diusulkan oleh Peters (77) mungkin
kurang polemik. Vignon (116) menyediakan pertama review penelitian PM, dan
kompilasi laporan histologi pada pembentukan PM dijabarkan oleh Wigglesworth
(125). Pada tahun 1957 ulasannya, Waterhouse (124) berspekulasi tentang peran
PM pencernaan serangga. Karakteristik dari PM yang digariskan oleh Richards &
Richards (83), yang memberikan penjelasan mengenai mekanisme yang digunakan
oleh serangga taksa yang berbeda untuk mensintesis PM.
Fungsi dikaitkan dengan PM telah meningkat terus, dan hubungan antara PM
struktur dan fungsi telah menjadi subyek dari beberapa ulasan (59, 103, 109).
Komponen utama dari PM yaitu protein, kitin, dan karbohidrat. Studi PM blowfly
sheep Australia, Lucilia cuprina, menghasilkan protein PM-terkait yang pertama,
glikoprotein kecil yang mengikat kitin (30). Status protein PM terakhir diperbaharui
oleh Tellam et al. (107). Wang & Granados (122) menyediakan model molekul
pertama dari PM lepidopteran.

Ulasan ini meliputi upaya untuk mengungkap biokimia PM Tipe I (terutama studi di
larva Lepidoptera dan dipteran dewasa) dan Tipe II (terutama di larva dipteran) dan
menyediakan model molekul terbaru dari arsitektur PM. Peneliti membahas
hubungan antara struktur dan fungsi dan menyimpulkan dengan visi tentang
bagaimana pengetahuan ini dapat menghasilkan strategi pengendalian hama yang
baru.

Pembentukan Matrix Peritrofik

Kebanyakan serangga mengeluarkan PM (77); Namun, PM umumnya tidak ada pada
Hemiptera, Capsicum, dan Lepidoptera dewasa, dan PM terbentuk pada spesies lain
hanya ketika mereka makan (misalnya, nyamuk betina setelah makan darah) (59).
Sebagai pengganti PM, beberapa serangga menghasilkan membran microvillar
eksternal kedua yang mungkin memiliki fungsi analog, membran perimicrovillar,
yang berasal dari tunas vesikula dari aparat Golgi (97). Gel peritrofik ditemukan di
Bruchidae dan beberapa spesies lain mungkin merupakan pembuktian baru
memancarkan bahan PM, tetapi kurangnya terdeteksi kitin menunjukkan bahwa itu
adalah jenis yang berbeda dari sekresi (109).
PM dapat dibentuk baik oleh epitel midgut (Tipe I) atau kardia (Tipe II). Dalam PM
Tipe I, delaminasi konsentris lamellae terjadi sepanjang midgut. Jenis PM ditemukan
dalam
Coleoptera,
Dictyoptera,
Ephemeroptera,
Hymenoptera,
Odonata,
Orthoptera, Phasmida, larva Lepidoptera, dan Diptera hematophagous dewasa (77,
124); Namun, perbedaan yang signifikan ada. Pada larva lepidopteran, PM
diproduksi sepanjang seluruh midgut panjang dan membentuk "seperti" bahan
dengan tebal 0,5-1,0 pM (65). Pengecualian adalah larva Heliothis virescens, di
mana PM disintesis oleh cincin diskrit sel antara foregut dan midgut (85) yang
samar-samar yang mengingatkan mekanisme yang digunakan oleh larva dipteran.
Pembentukan PM di Locusta migratoria, Periplaneta americana, dan Diabrotica
undecimpunctata (59, 77, 84) membuat PM dengan beberapa lamellae konsentris.
Pada awal pupasi, midgut posterior larva coleopteran menghasilkan bahan seperti
PM yang diekstrusi dan digunakan kepompong untuk berputar (114).
PM Tipe II lebih terorganisir dan terdiri dari satu sampai tiga lapisan laminasi. Hal ini
dibentuk oleh jaringan khusus di anterior midgut (kardia) dan ditemukan dalam
susunan yang primitif (misalnya, Dermaptera dan Isoptera), tetapi juga di
Embiodea, beberapa Lepidoptera, dan larva Diptera (77, 125). Lapisan individu
muncul dari kelompok yang berbeda dari sel-sel yang melapisi lipatan annular dari
cardia disebut zona pembentukan (13, 78). Sebagai PM yang tumbuh kea rah
posterior, pelapis makanan melewatinya. PM dari dermapteran Forficula auricularia
terdiri dari dua lapisan dengan karakteristik dari kedua Tipe I dan Tipe II PM (78).
Lapisan luar terdiri dari beberapa lembar fibril terstruktur disekresikan dari lipatan
annular terpisah dari daerah di mana lapisan dalam disintesis. Lapisan dalam
sangat terorganisir dan mirip dengan struktur seperti kisi beberapa PM tipe I (14,
44).
Pengendalian produksi PM kurang dipahami. Pada nyamuk, konsumsi darah
menginduksi produksi PM (77), tetapi apakah efek ini langsung (makanan di midgut)

atau tidak langsung (melalui jalur endokrin) tidak diketahui. Penerapan hormon
perkembangan mengubah tingkat normal pembentukan PM dan struktur. Misalnya,
20-hydroxyecdysone meningkatkan PM produksi pada orang dewasa erythrocephala
Calliphora, sedangkan hormon remaja saya menekan itu (12). Dalam larva
Mamestra configurata, sebaliknya mungkin benar sebagai pembentukan PM
berhenti pada awal dari bersamaan meranggas dengan downregulation gen yang
mengkode protein PM. Pola ini terjadi dengan gen yang ditekan oleh 20hydroxyecdysone (96 dan referensi di dalamnya).

SEKRESI DAN Penjabaran Dari Jaringan FIbril

Studi histologis awal menunjukkan bahwa PM serangga jauh lebih terorganisasi
daripada bahan mucilaginous amorf yang melapisi saluran pencernaan vertebrata.
Mikroskop elektron mengungkapkan bahwa PM tipe I sering mengambil bentuk kisi
ortogonal yang sangat tersusun rapih (14, 44, 78). Mercer & Day (65) mengusulkan
bahwa jaringan ini dibentuk pada mikrovili sel kolumnar dari mana PM berasal.
Korelasi antara diameter microvillar dan jarak antara mikro bundel fibril mendukung
gagasan ini (59), seperti halnya studi mikroskopis menunjukkan bahwa delaminasi
PM dari mikrovili di bawah (78).
Protein dikirim ke PM oleh sekresi apokrin (16), dan gen yang dikodekan faktor yang
terlibat dalam proses ini, yaitu gelsolin dan annexin, yang dinyatakan dalam
Tenebrio molitor mikrovili (32). Dalam Diptera, sel-sel di dalam zona pembentukan
PM yang dimodifikasi untuk mengakomodasi sekresi sejumlah besar polisakarida
dan protein. Seperti kelenjar ludah, mereka memiliki inti polytenic dan retikulum
endoplasma halus dan kasar yang luas (ER). Vesikel sarat dengan polisakarida,
mungkin dalam bentuk monomer kitin atau glikoprotein, tunas dari Golgi dan
sekering dengan membran plasma apikal sebelum melepaskan isinya ke dalam
ruang interstitial antara mikrovili (29). Sebaliknya, sel-sel katup jantung termasuk
mikrotubulus, glikogen, dan ER halus. Fitur tersebut memudahkan pulsasi cardial,
memberikan energi, dan melumasi lapisan PM via sekresi lipid yang berasal dari ER
halus (13).
Kitin, polimer dari - (1,4) -N-asetil-d- glucosamine (GlcNAc), dianggap sebagai
komponen struktural utama dari PM; Namun, teknik yang digunakan untuk
menentukan konten kitin tidak dapat membedakan antara kitin dan polisakarida di
glikoprotein (3, 77). Tellam & Eisemann (104) menyimpulkan bahwa PM larva
L.cuprina mengandung tidak lebih dari 5,3% kitin dan bahwa isi kitin rendah
bertanggung jawab atas ketidakmampuan kitinase dan sintesis kitin inhibitor
mengganggu PM. Kitin dapat menjadi komponen yang lebih besar dari PM pada
serangga lain, seperti inhibitor sintesis kitin dapat mengganggu pembentukan PM
(20) dan kitin tertentu mengikat senyawa yang dapat menggangu integritas PM
(121, 127).
Kitin disintesis oleh kitin sintase (CS) melalui penambahan berurutan dari unit
GlcNAc ke pengurangan pemanjangan akhir dari rantai yang tumbuh. Asosiasi
Rantai kitin sebagai antiparalel () atau paralel () fibril mikro atau beberapa
kombinasi dari keduanya () (52). agregat fibril mikro menjadi bundel besar yang

memberikan kekuatan tarik yang besar (77). -kitin lebih termodinamika stabil dan
juga lebih umum di PM normal. PM khusus digunakan untuk membentuk
kepompong adalah dari -jenis (114), mencerminkan sifat physiochemical yang
berbeda (52).
Serangga CSS dikodekan oleh dua gen, CHS-A dan CHS-B (5, 15, 48, 106), dan
ekspresi gen CHS-B dibatasi untuk usus sel epitel yang memproduksi PM (5). CSS
memiliki daerah transmembran yang memungkinkan integrasi ke dalam plasma dan
membran vesikel (66). Pada Lepidoptera, midgut CS diungkapkan hanya dalam
larva stadium menengah dan lokal ke puncak microvillar, sangat berimplikasi dalam
PM sintesis kitin (128). Gen Aedes aegypti CS dinyatakan hanya setelah makan
darah (56), menyarankan beberapa jenis kontrol hormonal, tetapi aktivitas CS juga
tergantung pada pembelahan proteolitik (17, 128).

PROTEIN TERKAIT DENGAN MATRIX peritrofik

Perkiraan jumlah protein PM bervariasi, dari beberapa banyak (3, 73). Tahap
perkembangan, diet, dan bahkan kelompok mempengaruhi jumlah diamati tetapi
penentu utama adalah prosedur ekstraksi yang digunakan. Tellam et al. (107)
mengusulkan empat kelas PM protein berdasarkan kemudahan yang mereka dapat
dihapus dari PM. Kelas protein dihilangkan dengan buffer fisiologis dan merupakan
protein longgar terkait, enzim pencernaan kemungkinan dan sisa-sisa makanan.
Kelas protein II yang diekstraksi dengan deterjen ringan, seperti natrium dodesil
sulfat, yang mengganggu interaksi ionik yang lemah, sedangkan protein Kelas III
yang dirilis hanya dengan denaturan kuat, seperti urea. Protein kelas IV tidak dapat
dihapus dengan cara apapun dan cenderung kovalen terkait dengan protein atau
kitin lainnya.
Peneliti awal diduga bahwa jenis protein yang berhubungan dengan integumen dan
PM mungkin mirip karena keduanya mengandung kitin. Sebuah motif umum disebut
Rebers dan Riddiford konsensus hadir di lebih dari 70% dari semua protein kutikula
(55). Domain membentuk struktur lapisan- dengan rantai samping hidrofobik
berorientasi sehingga mereka dapat berpartisipasi dalam interaksi kitin. Oksidatif
konjugasi katekol menyebabkan protein silang dan kutikula sclerotization (98).
Meskipun modus PM yang berbeda dengan Tipe I dan Tipe II yang disintesis,
komponen protein mereka adalah sama dan banyak penelitian telah diarahkan
kearah sekelompok protein PM Kelas III yang dikenal sebagai peritrophins. Rebers
dan Riddiford mengungkapkan motif tidak ditemukan di antara peritrophins; bukan,
register dari 6, 8, atau 10 residu sistein, disebut sebagai peritrophin A, B, atau C
domain, masing-masing, yang terlibat dalam interaksi kitin (107). Lembar- dalam
domain mengikat peritrophin kitin (CBD) yang dihubungkan oleh jembatan disulfide
antara sistein untuk membuat saku mengikat di mana dilestarikan residu hidrofobik
membentuk ikatan hidrogen dengan kitin (Gambar 1). Spesifisitas tertentu dari CBD
dapat di PM struktur pengaruh, karena beberapa kitin protein yang mengikat dapat
berinteraksi hanya dengan spesifik konformasi c kitin. Jumlah peritrophins ditandai

sampai saat ini masih terbatas (Supplemental Tabel 1; mengikuti link Tambahan
Bahan dari Tahunan Ulasan halaman rumah di http://www.annualreviews.org) tetapi
mencukupi untuk memungkinkan pembagian menurut ketidakhadiran (nonmucin
peritrophins) atau kehadiran (mucin usus invertebrata) dari domain yang sangat
glikosilasi, karena fitur ini menanamkan sifat unik untuk protein tersebut.

Peritrophins Nonmucin
Fraksi urea-diekstraksi dari L. cuprina larva PM berisi enam protein utama mulai 3395 kDa (30). Peritrophins 44 dan 48 adalah pertama fi PM protein dilaporkan, dan
masing-masing berisi peptida sinyal, menyiratkan mereka dikeluarkan, diikuti oleh
lima DBM berurutan sesuai dengan CX13-20 CX5-6 CX9-19 CX10-14 CX4-14 C
peritrophin-A konsensus. Mereka mengikat kitin dan ekspresi gen mereka terbatas
pada kardia larva, dengan hanya tingkat jejak di epitel midgut atau pada orang
dewasa (30, 90, 118). Para penulis akurat menyebut mereka sebagai glikoprotein
karena asparagin diduga (N) situs glikosilasi -linked hadir, namun tingkat dan jenis
glikosilasi yang sangat berbeda dari peritrophins musin-seperti dibahas di bawah.
Sel midgut Lepidopteran mengungkapkan peritrophins yang mengandung saluran
panjang DBM, dengan terbesar dilaporkan memiliki 19 DBM. Namun, situs
pembelahan tripsin terletak terakhir di setiap CBD yang memungkinkan untuk
diproses menjadi concatamers kecil pada penggabungan ke PM (32, 96, 123).
Midgut dari gonifly, Mayetiola destructor, larva mengungkapkan peritrophin kecil
dengan dua DBM (69). Peritrophins dengan beberapa DBM mungkin menarik
bersama-sama rantai kitin yang baru lahir ke fibril mikro dan bundel. Ini disarankan
untuk Ag-Per1, protein dengan dua DBM yang disekresikan dari sel-sel epitel
bersama dengan Ag-Per14 di Anopheles gambiae setelah mengonsumsi darah (25,
95). Peritrophins dengan satu CBD telah diidentifikasi (29, 126) dan dapat
melindungi ujung rantai kitin dari serangan kitinase endogen (15). Namun, protein
dengan satu CBD diekspresikan dalam Glossina morsitans morsitans kardia setelah
konsumsi trypanosome, menyarankan mereka juga dapat melindungi midgut dari
invasi patogen (43).
Kehadiran peritrophin seperti CBD tidak selalu menunjukkan hubungan dengan PM.
The Drosophila melanogaster genom encode banyak protein dengan peritrophin-A
domain yang tidak dinyatakan dalam saluran pencernaan, dan peritrophin-seperti
protein disajikan dalam jaringan Ctenocephalides felis yang tidak menghasilkan PM
(37). Protein dengan DBM nonkanonik juga dapat mengaitkan dengan PM.

Gambar 1
Struktur peritrophin-A kitin mengikat domain (CBD). (A) Perbandingan struktur
primer dan sekunder dari DBM dari Mamestra configurata peritrophin, McPM1, dan

musin usus invertebrata, McIIM. Residu sistein dilestarikan (latar belakang hitam)
yang membentuk disulfide jembatan (garis hitam) dan residu aromatik yang terlibat
dalam interaksi kitin (oranye) ditandai. Juga ditampilkan adalah residu sistein
tambahan (tiga garis bawah) di CBD karboksi-terminal McIIM yang dapat
membentuk intra atau antarmolekul disulfide jembatan. Struktur sekunder
diprediksi termasuk loop (bar putih), -sheet (bar kuning), -helix (bar merah), dan
ternyata jepit rambut (garis merah) yang diberikan di atas. (B) struktur tersier dari
tachycitin, protein antimikroba dari kepiting tapal kuda, Tachypleus tridentatus,
yang berisi peritrophin seperti CBD. Residu sistein dilestarikan dengan peritrophin-A
CBD (oval biru) dengan sesuai disulfide jembatan (garis biru) dan residu aromatik
yang terlibat dalam interaksi kitin (oranye) akan ditampilkan. N, terminus amino; C,
terminus
karboksi.
Gambar
yang
diadaptasi
dari
PDBSum
(http://www.smb.ucl.ac.uk/).

Dalam D. melanogaster, anggota keluarga kaya protein sistein yang dinyatakan

dalam kardia dan dengan kesimpulan mungkin berada dalam PM (57). Juga, midgut
lepidopteran dan PM mengandung protein dengan kitin domain deacetylase-seperti
itu mungkin baik PM protein struktural (41) atau enzim yang memodifikasi kimia
kitin dan PM struktur (112). Protein Microvillar dapat dilepaskan untuk menjadi
bagian dari komponen protein PM dan fungsi dalam cara yang tidak diketahui dalam
pembentukan PM (33, 91).

Usus Mucin Invertebrata

Istilah musin awalnya digambarkan sebagai protein glikosilasi di sekresi lendir yang
melapisi saluran pencernaan mamalia dan diklasifikasikan sebagai membran-terikat
atau disekresikan mucin (76). Mucin sama, serangga juga telah dikeluarkan (PM
terkait) dan mucin membran-terikat (microvillar terkait). Wang & Granados (120)
adalah pertama untuk mengidentifikasi protein usus serangga yang sangat
glikosilasi, secara khusus protein PM di Trichoplusiani, yang mereka menciptakan
istilah musin usus invertebrata (IIM). IIM terdiri dari kelompok struktural beragam
namun fungsional kongruen protein dengan sifat dari kedua peritrophins dan mucin.
T. ni IIM berisi lima DBM, satu di masing-masing amino dan termini karboksi dan
sisanya di cluster ketat dekat tengah protein. Cluster interior lebih mengarah oleh
domain kaya prolin, serin, treonin dan, yang mirip dengan domain musin vertebrata.
Sebuah serupa ke konfigurasi yang diamati dengan IIM dari Plutella xylostella (88)
dan M. configurata (96). Domain mucin mereka mengandung mengulangi kelompok
asam amino (4-27 residu) yang lebih besar dari 80% dari asam amino hidroksil
tunduk O-linked glikosilasi. Memang, karbohidrat dapat terdiri hingga 50% dari
massa molekul IIMS ini (96). Residu prolin diselingi antara residu glikosilasi
berkontribusi dengan urutan- dengan struktur sekunder. Hal ini menyebabkan
gugus karbohidrat untuk proyek luar, menyediakan arsitektur botolnya. Glycans dan
tulang punggung peptida berinteraksi untuk menstabilkan struktur sekunder,
menghasilkan konformasi kaku yang mungkin penting untuk ketahanan untuk
menjadi tuan rumah dan protease patogen. Dalam lepidopteran IIM, sistein

tambahan Kompi yang karboksi-terminal CBD dan mungkin merupakan CBD unik
atau berpartisipasi dalam interaksi antarmolekul.
Dalam Diptera, IIM ditemukan di PM Tipe I dan Tipe II, meskipun mucin kurang DBM
yang mengasosiasikan dengan mikrovili melalui daerah transmembran dikenal (93).
L. cuprina Peritrophin memiliki lima tandem peritrophin-A DBM dengan domain
musin di karboksi terminus (105), dan Peritrophin-55 memiliki CBD tunggal
sebelumnya domain mucin (19). Lima DBM juga hadir dalam Ae. aegypti Ae-Aper50,
dengan domain mucin kecil memisahkan DBM (91). Induksi AeIMUC1 oleh logam
berat di Ae. larva aegypti dapat menyinggung fungsi IIM kecil ini yang memiliki tiga
DBM dan domain musin tunggal (82).

MODEL MOLEKUL DARI MATRIX peritrofik

Model asli untuk PM Tipe I (122) dan Tipe II (90) telah berdiri dengan sejalannya
waktu waktu, meskipun identifikasi dari banyak PM protein baru dan pemahaman
yang lebih baik dari fungsi PM. Model PM Tipe II menggambarkan peritrophins
berinteraksi dengan fibril kitin yang teratur untuk membentuk laminasi
glikosaminoglikan anionik. Struktur dan jumlah laminasi tergantung pada asal
mereka dalam kardia (13, 78). Sangat terorganisir, jaringan orthogonal dalam
beberapa PM tipe I (65) yang lebih baik mengakomodasi pengembangan model dua
dimensi yang sederhana (96). Dalam kedua - dan -chitin, dua residu GlcNAc
dalam konformasi heliks membuat 10.34 Sebuah pengulangan (~ 1 nm) Unit (52).
Fibril mikro kental memiliki diameter 2 sampai 6 nm dan mengandung 20-400 rantai
kitin yang merakit ke bundel sekitar 20 nm (77, 78). Mikrovili 145 12 nm lebar di
puncak mereka, dan ruang interstitial dari PM kisi 125 14 nm (44, 78). Hal ini
menunjukkan bahwa sekitar 150 unit berulang, atau 300 residu GlcNAc,
menjalankan antara node kisi (Gambar 2).

Gambar 2
Model diagram dari arsitektur molekul serangga Tipe I AM. Kitin fibril mikro yang
terdiri dari 20-400 rantai kitin merakit menjadi bundel untuk membentuk perancah.
Mucin usus serangga digambarkan dengan glycans O-linked memproyeksikan ke
dalam ruang interstitial. Residu sistein tambahan hadir dalam kitin domain
mengikat karboksi-terminal (CBD) dapat membentuk jembatan antarmolekul
disulfide. DBM juga ditampilkan berinteraksi dengan - (1,4) -N-asetil-d-glukosamin
dimer pada inti glycans N-linked untuk menghasilkan interaksi antarmolekul
tambahan. Deacetylase kitin mengubah kitin menjadi kitosan dan dalam proses
melepaskan gugus asetil. Chitosan tidak diakui oleh DBM. Diadaptasi dari Shi et al.
(96).

PM memiliki konsistensi keras tetapi elastis, tidak seperti gel peritrofik berlendir.
Sangat mungkin bahwa protein CBD multi, seperti M. configurata PM1 (96), T. ni
CBP1 dan CBP2 (123), dan peritrophins cuprina L. (30, 90), mengatur dan tahan

kaku fibril dan bundel . Memang, DBM protein ini sering diapit oleh residu prolin,
termasuk mengulangi prolylproline, yang akan memaksa DBM berturut menjadi
konformasi melingkar erat melilit kitin tersebut. Interaksi ionik antara residu
dibebankan dalam wilayah spacer singkat dapat berfungsi untuk lebih menstabilkan
pengaturan ini. Selain itu, situs pembelahan tripsin dan kimotripsin umumnya
terletak di dalam CBD dan dengan demikian tidak dapat diakses untuk protease
(123). Unsur-unsur spacer sering mengandung asparagin yang diprediksi akan Nglikosilasi. Dalam lepidopteran, glycans N-linked tersebut adalah dari jenis mannose
tinggi, yang sesuai dengan analisis kimia dari karbohidrat PM. Pada inti dari glycan
N-linked dua residu GlcNAc dihubungkan oleh - (1,4) obligasi seperti di kitin. Ini
mungkin sterik tersedia untuk interaksi antarmolekul dengan DBM. Peritrophins
dengan CBD tunggal (29, 126), atau bentuk dipotong dari protein yang lebih besar
diamati pada PM lepidopteran, mungkin baik melindungi ujung rantai kitin atau void
fill yang tersisa setelah fi bril / bundel perakitan.
IIMS memiliki fitur yang melibatkan mereka di kedua pemeliharaan PM arsitektur
dan perlindungan PM dari lingkungan lumen. Tingkat tinggi mereka glikosilasi harus
menanamkan kualitas kental dengan PM dan berfungsi melindungi epitel dari
kerusakan fisik, serta dari proteolitik dan lingkungan kaustik atau asam dari usus
seperti dalam sistem vertebrata (76). IIM sangat tahan terhadap serangan
proteolitik dari protease midgut endogen (120). Setidaknya 30 protease serin yang
berbeda yang hadir dalam lingkungan yang sangat alkali dari M. configurata
midgut, sebagian makhluk trypsins dan chymotrypsins (46). domain IIM yang terasa
kurang dalam bermuatan (arginin dan lisin) atau polar yang besar (histidin, leusin,
metionin, fenilalanin, triptofan, dan tirosin) asam amino, mendekati tingkat tinggi
pada resistensi terhadap ini protease usus endogen. Susunan ketat dari triad CBD
internal lepidopteran IIM menyerupai hal yang ada di PM1 dan dapat berfungsi
untuk sangat affix protein ke fibril mikro, dengan domain mucin memproyeksikan
luar ke lumen. Residu sistein tambahan dalam domain karboksi-terminal dapat
menyebabkan musin multimerization melalui pembentukan antarmolekul disulfide
obligasi seperti yang diamati dengan mucin vertebrata (76). Beberapa bentuk
interaksi antarmolekul kovalen sangat mungkin mengingat bahwa sebagian besar
protein PM tidak dapat dilarutkan bahkan setelah perawatan keras (107).

FUNGSI MATRIX Peritrofik

Penerapan pendekatan biologis dan biokimia molekul selama dekade terakhir telah
menghasilkan pemahaman yang cukup baik tentang bagaimana PM terbentuk dan
dari jenis dan konstitusi protein struktural yang terus utuh. Meski masih agak
sederhana, model baru telah mulai mengatasi hubungan antara PM struktur dan
fungsi pada tingkat biokimia dan biofisik. Di sini, Peneliti mencoba untuk
mengintegrasikan pemahaman kita tentang struktur kimia dari PM dengan fungsi
biologis utama, organisasi spasial pencernaan, perlindungan dari racun yang
dicerna, dan sebagai barier fisik untuk patogen.

Organisasi spasial Proses Pencernaan

Fungsi anatomi utama dari PM adalah untuk memisahkan rongga midgut menjadi
tiga komponen fungsional: ruang endoperitrophic (lumen usus termasuk bolus
makanan), ruang ectoperitrophic (antara PM dan epitel), dan PM itu sendiri.
Pemisahan endo dan ruang ectoperitrophic tidak mutlak, karena fungsi PM sebagai
saringan molekul selektif permeabel, sifat fisik dan kimia yang telah dijelaskan (59).
Studi dari porositas (9) PM terganggu ke mana karena konsentrasi ion dan H +
potensi midgut bervariasi baik sepanjang saluran pencernaan dan antara
kompartemen (31, 46), kondisi yang sulit untuk meniru di vitro. Juga, perancah
sufisien chitin-protein elastis bahwa usus mengalami distensi tekanan hidrolik yang
meningkatkan porositas dan aliran melintasi PM.
Referensi ke PM sebagai barier selektif permeabel cocok untuk gagasan bahwa
transporter substrat spesifik ada. Meskipun sistem spesifik belum diidentifikasi di
PM, kendali transportasi kemungkinan disediakan oleh sifat-sifat N-linked dan
terutama O-linked glycans yang menempati ruang antara fibril. Sebanyak 50% dari
massa molekul beberapa IIM adalah karbohidrat (96, 120), dan kepadatan glycan
tinggi dapat berfungsi untuk mempromosikan van der Waals dan interaksi ionik
untuk membentuk barier yang efektif. Dengan demikian, setiap perubahan dalam isi
ion proksimat atau pH akan mempengaruhi kekuatan-kekuatan interaktif yang
lemah dan mengubah karakteristik PM. Mekanisme tersebut digunakan untuk
menjelaskan peningkatan porositas G. m. morsitans PM di hadapan kalsium (67).
PM menyediakan pemisahan spasial proses pencernaan. Makromolekul (misalnya,
protein, karbohidrat kompleks, dan lipid) yang terbatas ke ruang endoperitrophic, di
mana mereka dicerna sebagian untuk melepaskan peptida, gula, dan asam lemak.
Produk-produk ini pencernaan, ditambah air dan garam, bergerak melalui PM ke
ruang ectoperitrophic. Di sini, enzim, seperti amino dan carboxypeptidases (36, 53),
glukoamilase (54), trehalase (87), dan alkali fosfatase (102), yang terlibat dalam
tahap final pencernaan terjadi. Berbeda dengan enzim bebas di ruang
endoperitrophic, enzim ini sering secara fisik terikat ke sel epitel dengan membranspanning daerah atau jangkar lipid. Ada beberapa bukti bahwa enzim pencernaan
juga terkait dengan PM (34, 79), tetapi ini mungkin telah menjadi terperangkap di
dalamnya. Beberapa enzim, seperti lipase usus ditemukan di M. configurata,
memerlukan perawatan yang ekstrim untuk menghilangkan dan pm terkait enzim
asli (112).

Masalah yang signifikan, namun belum terselesaikan, adalah bagaimana enzim

pencernaan, yang disekresi oleh epitel usus tengah, berhasil menembus PM untuk
mencapai ruang endoperitrophic. Beberapa mekanisme mungkin terlibat, termasuk
(a) pelepasan beberapa enzim sebelum PM terbentuk (nyamuk?), (B) gerakan
melalui PM tidak lengkap terbentuk, (c) pori-pori khusus yang memungkinkan
migrasi dari enzim, dan (d) sementara pori-pori yang memungkinkan fl ow periodikmelalui enzim. Pada nyamuk dewasa, tidak adanya PM meningkatkan laju hidrolisis
protein, menunjukkan bahwa gerakan enzim hidrolitik ke ruang endoperitrophic
dibatasi oleh PM (117). Beberapa enzim pencernaan yang disekresikan oleh salah

eksositosis atau apokrin sekresi dari sel-sel epitel di daerah anterior midgut mana
PM mungkin tidak sepenuhnya terbentuk (18, 22, 74). Dalam spesies lain, pori-pori
atau saluran dalam PM dianggap cukup besar, di urutan 7 sampai 8 nm, untuk
memungkinkan bagian dari enzim kecil seperti tripsin dan amilase (34, 35, 87).
Ukuran pori berkisar 17-36 nm yang dapat mengakomodasi molekul yang cukup
besar juga telah dilaporkan (9,27). Sebuah kitinase menyatakan setelah makan
darah nyamuk diusulkan untuk sebagian menurunkan PM dan peningkatan lebih
lanjut porositas (94). Demikian juga, PM-terkait kitin deacetylase ditemukan di M.
configurata (112) dapat membuat pori-pori sementara lokal dengan mengganggu
chitin-PM protein interaksi.
Rendahnya tingkat kehilangan enzim dalam bolus relatif terhadap gerakan dan
terjadinya gradien
konsentrasi
enzim
sepanjang
midgut menyebabkan
pengembangan model menarik untuk partisi enzim dan daur ulang (108, 111).
Sebagai bolus makanan bergerak menuju midgut posterior, produk pencernaan dan
enzim melewati ke ruang ectoperitrophic. Di sini, sekresi air oleh midgut posterior
dan penyerapan oleh caeca drive counter-saat mengalir di sepanjang ruang
ectoperitrophic menuju midgut anterior. Model ini didukung oleh penelitian dengan
pewarna yang dicerna (110) dan dengan adanya enzim yang terlibat dalam fi nal
tahap pencernaan di caeca dan anterior daerah midgut (18, 74). Serangga yang
kurang caeca juga dapat menghasilkan counter-flow di midgut, seperti gangguan
PM di Spodoptera frugiperda menghancurkan gradien konsentrasi enzim (16).
Selanjutnya, studi histologis di Erinnyis Ello memiliki diidentifikasi struktur
microvillar khusus yang memungkinkan penyerapan air oleh anterior dan midgut
menengah dan sekresi oleh daerah posterior (86). Pengusiran periodik isi sekum
disarankan sebagai sarana untuk kembali enzim untuk ruang endoperitrophic (108);
Namun, tidak diketahui bagaimana enzim menyeberangi PM. Agaknya, mekanisme
(s) akan sama dengan yang digunakan untuk transportasi awal mereka setelah
sekresi dari sel epitel.

Perlindungan dari Racun yang dicerna

Abedi & Brown (1) menemukan bahwa jumlah berlebihan PM diekskresikan oleh Ae.
larva aegypti yang resisten terhadap DDT sarat dengan insektisida. Merintis ini
menyebabkan gagasan bahwa PM mungkin memainkan peran dalam eksekusi dan
mungkin detoksifikasi xenobiotik yang dicerna lainnya. Larva akuatik sangat sensitif
terhadap kehadiran polutan, dan pembentukan PM di jentik nyamuk terganggu oleh
tembaga dan kadmium. Toksisitas dapat diimbangi oleh musin usus serangga,
AeIMUC1, diproduksi oleh epitel usus tengah dalam menanggapi logam berat (82).
Pada nyamuk dewasa, heme yang mengandung besi dilepaskan selama proses
degradasi hemoglobin dapat menghasilkan spesies oksigen reaktif beracun. Untuk
mencegah akumulasi metabolit beracun seperti, heme terikat oleh PM dan
diekskresikan, properti dikaitkan dengan domain peritrophin-A yang kaya sistein di
AeIMUC1 (24). Ini adalah kepentingan tertentu karena mucin mamalia juga
mengandung daerah yang kaya sistein yang tidak terlibat dalam ikatan kitin.

Tanaman dilengkapi dengan allelochemicals dan senyawa beracun lain yang harus
tidak aktif atau dimetabolisme oleh serangga fitofag. Misalnya, asam tanat bereaksi
dengan protein, lipid, dan ion logam polivalen dalam saluran pencernaan serangga
dengan pH usus basa membentuk kompleks besar yang tidak dapat menembus PM.
Proses ini telah disebut ekstraktif yang ultra infiltrasi (8). Allelochemicals lipofilik,
seperti digitoksin, agregat dengan lipid membentuk misel campuran dalam usus
yang juga dieliminasi oleh PM-dimediasi infiltrasi (7). Asam tannic dan pro-oksidan
lainnya dimetabolisme dalam foregut dan anterior midgut melalui aksi peroksidase,
dalam proses melepaskan hidrogen peroksida dan radikal oksigen reaktif.
Sementara beberapa dari senyawa ini beracun dinonaktifkan oleh enzim antioksidan
(58), PM juga berfungsi sebagai "pengorbanan antioksidan" (10). Karbohidrat dan
asam amino tertentu (fenilalanin, triptofan, histidin, dan tirosin) terkait dengan atau
hadir di PM protein dapat secara efektif mengais spesies oksigen reaktif (100).

Barrier mekanik
Konsensus umum bahwa PM berfungsi untuk melindungi epitel midgut dari
kerusakan oleh bahan makanan abrasif; Namun, satu-satunya bukti langsung untuk
ini tampaknya dari mori mutan Bombyx biasa yang tidak memiliki PM dalam tahap
larva. Midgut epitel makan larva mutan yang sangat terkelupas dan tubuh membran
dibebaskan dari permukaan ke dalam bolus (99). Lehane (59) menegaskan bahwa
peran utama dari PM adalah untuk melindungi epitel dari patogen, karena ia
mencatat korelasi antara tingkat kontaminasi bakteri dari diet dan kehadiran PM.
Usus larva serangga yang memakan materi membusuk yang berisi berbagai macam
bakteri, yang dapat membantu pencernaan atau melayani secara langsung sebagai
nutrisi, tetapi juga bisa menjadi patogen oportunistik (62). Dalam Ae. aegypti, PM
bentuk meconial sekitar merosot larva midgut epitel selama pupation. Ini diusir oleh
orang dewasa yang muncul, dan dalam proses, membersihkan saluran pencernaan
dewasa (72).
Gangguan PM memiliki efek mendalam pada kemampuan racun bakteri
ekstraseluler dan virus untuk mengakses epitel midgut. Racun kristal besar yang
dihasilkan oleh Bacillus thuringiensis yang terperangkap oleh PM melalui interaksi
dengan gugus glycan (45). Derksen & Granados (23) pertama mengakui bahwa
konsumsi tubuh oklusi dari baculoviruses tertentu mengakibatkan PM rapuh dan
kehilangan PM protein utama. Hal ini disebabkan faktor Ditambahkannya virus
(suatu enhancin) yang kemudian terbukti metaloprotease a. Pada Lepidoptera,
enhancin menurunkan mucin usus in vitro (119); Namun, bentuk utuh dari M.
configurata IIM resisten terhadap degradasi selama infeksi MacoMNPV, sedangkan
bentuk sebagian glikosilasi yang terdegradasi (96). Degradasi protein struktural
menyebabkan PM gangguan dan peningkatan permeabilitas PM, yang
memungkinkan virus untuk mengakses epitel yang mendasari (75). Enhancins
ditemukan di beberapa baculoviruses (40) dan patogen enterik bakteri (42),
meskipun cara lain dapat digunakan untuk mengacaukan PM. Sebagai contoh,
anggota-spindle dari beberapa entomopoxviruses sangat mengganggu PM struktur,
yang mungkin berhubungan dengan kegiatan mengikat kitin mereka (68).

Beberapa parasit mamalia hidup di serangga hematophagous untuk bagian dari

siklus hidup mereka. Setelah menelan dalam makanan darah, parasit harus
melanggar PM sebelum mereka dapat menyerang epitel. Leishmania dan
Plasmodium spesies mensekresi chitinases yang mengganggu PM dan memfasilitasi
perjalanan mereka melalui itu (2, 92). Invasi dari midgut epitel oleh Plasmodium
falciparum ookinetes membutuhkan lampiran glycans dari reseptor aminopeptidase
N-membran-terkait (26). Dalam hal ini, protein PM dapat berfungsi sebagai ligan
alternatif untuk reseptor glycan ookinete selain menjadi barier fisik untuk invasi.

MATRIX peritrofik SEBAGAI TARGET DALAM PENGELOLAAN SERANGGA HAMA

Karena keterlibatan secara intim dalam proses pencernaan dan berperan sebagai
garis pertama pertahanan terhadap patogen yang dicerna, PM adalah target yang
menarik bagi strategi pengelolaan hama. Senyawa yang berinteraksi dengan PM
memiliki potensi untuk mempengaruhi sifat physiochemical dan biologisnya. Efek
mungkin halus, seperti penurunan pencernaan efisiensi dengan menghambat
serapan hara atau decompartmentalizing proses pencernaan. gangguan PM secara
massif akan memiliki efek yang lebih parah dan kemungkinan akan meningkatkan
efficacy racun dan patogen yang harus melintasi PM untuk mengakses epitel
midgut. Bagian ini menguraikan beberapa pendekatan yang telah diperiksa dan
komentar pada konsep masa depan yang melibatkan PM dalam mengembangkan
langkah-langkah pengendalian hama baru.
Lektin sangat spesifik karbohidrat protein yang membentuk bagian dari repertoar
pertahanan tanaman dan beracun untuk phloemfeeding serangga (89) mengikat.
Serangga seperti umumnya tidak menghasilkan PM ketika makan, dan toksisitas
lektin mungkin berhubungan dengan efek sistemik lainnya. Dalam serangga yang
menghasilkan PM, seperti larva cuprina L., PM permeabilitas berkurang setelah
menelan lektin spesifik untuk gula hadir dalam kitin atau PM glycans, yaitu GlcNAc
(gandum kuman agglutinin) dan glukosa nonreducing / mannose (lentil lektin dan
Concanavalin A ). Lektin mengikat dapat menghalangi pori-pori atau saluran dan
dapat mengganggu penyerapan nutrisi dan pencernaan efisiensi. Hal ini mungkin
menjelaskan penurunan pertumbuhan atau kematian larva diberi makan
konsentrasi rendah atau tinggi lektin tersebut, masing-masing (28). Toksisitas lektin
mungkin juga beragam, seperti larva lepidopteran dipamerkan mengurangi tingkat
pembentukan PM serta rusak brush border mikrovili setelah menelan bibit gandum
agglutinin (49). Apakah kerusakan mikrovili adalah akibat langsung dari lektin
mengikat atau karena enzim pencernaan lewat dari ruang endoperitrophic tidak
diketahui.
Seperti lektin, antibodi juga sangat diskriminasi dari ligan mereka mengakui.
Diakuisisi perlawanan terhadap ektoparasit serangga pada hewan sebelumnya
terinfeksi kutu adalah pertama dilaporkan oleh Trager (113). Di sini, regurgitasi isi
usus dapat menyajikan sistem kekebalan tubuh dengan antigen yang biasanya
tersembunyi. Memang, nyamuk dewasa makan darah dari host diimunisasi dengan
bahan usus pameran berkurang pembentukan PM (80) dan fekunditas (101) dan

peningkatan mortalitas (4). Anti-midgut sera juga mencegah invasi parasit malaria,
meskipun ini disebabkan pemblokiran membran terkait aminopeptidase N-reseptor
ulang epitel (26). Dalam sistem lain, imunisasi ternak dengan PM protein
memperlambat pertumbuhan larva cuprina L. yang menyebabkan kulit myasis
dengan membatasi PM permeabilitas untuk nutrisi (19,21). Tanaman transgenik
mengekspresikan anti-PM antibodi protein, atau lebih mungkin satu-rantai antibodi,
juga dapat menunjukkan beberapa tingkat kontrol terhadap hama serangga fitofag.
Strategi ini dapat dianggap sebagai bentuk imunisasi pasif.
Brighteners optik dan senyawa yang mengikat kitin lainnya mengganggu kitin fi
brillogenesis (47). Wang & Granados (121) juga menunjukkan bahwa Calcofluor,
turunan stilben, infeksi baculovirus ditingkatkan dengan mengganggu pembentukan
PM. Senyawa ini dapat mengikat baru disintesis kitin, menghambat baik perakitan
fibril kitin dan hubungan mereka dengan protein PM (127).
Parasit serangga dan patogen menghasilkan enzim hidrolitik, seperti protease dan
chitinases, yang memfasilitasi PM penetrasi (23, 50,81). Li et al. (60) melaporkan
bahwa AcMNPV rekombinan mengekspresikan MacoNPV enhancin memiliki nilai
LD50 secara signifikan lebih rendah untuk instar kedua larva T. ni. Menanggapi
kerusakan oleh serangga herbivora, tanaman juga memproduksi enzim yang
menargetkan PM dan mencegah makan serangga. garis resisten Zea mays terhadap
S. frugiperda dan beberapa lepidopteran lainnya memicu protease sistein, Mir1-CP,
yang terganggu integritas PM dan mengurangi makan larva (70). Tanaman
transgenik konstitutif mengekspresikan lektin, chitinases, dan proteinase adalah
pendekatan yang layak untuk ketahanan rekayasa serangga (38, 61). Potensi
sinergi antara pendekatan kontrol transgenik dan biologi ada, karena gangguan PM
integritas meningkatkan aktivitas patogen (39, 51) dan patogen yang diturunkan
racun (71). Strategi seperti yakin untuk membantu menghindari masalah dengan
penumpukan perlawanan terhadap ukuran kendali tunggal.
Sebuah pendekatan baru yang sangat menarik adalah penggunaan interferensi RNA
(RNAi) untuk memberikan resistensi terhadap serangga. Konsep ini muncul dari
penemuan bahwa doublestranded molekul RNA dapat bertahan hidup lingkungan
biokimia bermusuhan usus serangga. Mereka diambil oleh sel-sel epitel usus
tengah, di mana mereka mengaktifkan mekanisme RNAi, yang menghilangkan
transkrip dari gen target dan akibatnya mengurangi kadar protein (115). RNA untai
ganda juga dapat dihasilkan di planta, dan gen yang mempengaruhi kerentanan
terhadap allelochemicals telah ditargetkan (11, 64). Pendekatan ini juga bisa
diterapkan untuk gen yang mengkode protein PM utama untuk mengganggu
pembentukan PM dan mensinergikan kegiatan pertahanan tanaman endogen dan
patogen serangga.

POIN RINGKASAN
1. PM adalah kitin dan glikoprotein lapisan yang melapisi midgut invertebrata
dan fungsional mirip dengan sekresi lendir saluran pencernaan vertebrata.

2. PM terdiri dari kisi terorganisir fibril kitin yang diselenggarakan bersama oleh
kitin protein yang mengikat.
3. PM adalah barier fisik, melindungi epitel midgut dari partikel abrasif
makanan, enzim pencernaan, dan patogen infeksius per os, dan barier
biokimia, eksekusi dan, dalam beberapa kasus, menonaktifkan racun yang
dicerna.
4. PM mengkompartemenkan proses pencernaan, sehingga memungkinkan
untuk defisiensi nutrisi akuisisi ef dan penggunaan kembali enzim hidrolitik.
5. Beberapa protein PM telah ditandai dan model holistik berkaitan PM struktur
fungsinya disajikan.

ISU MASA DEPAN

1. Pemahaman tentang bagaimana fibril kitin dan protein berkumpul untuk
membentuk PM eksternal untuk mikrovili yang kurang.
2. Pasukan biokimia dan biofisik yang memungkinkan PM berfungsi sebagai
saringan molekul semiselective tidak dipahami dengan baik.
3. PM sedang diselidiki sebagai target mungkin untuk teknologi baru untuk
digunakan dalam pengendalian hama serangga.