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Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas


Garcia Felipe Ignacio Gerardo
Grupo 4QM1 Seccin 3

Practica No. 9
REACCION DE
TRANSAMINACION Y SU
RECONOCIMIENTO POR
MEDIO DE
CROMATOGRAFIA EN
PAPEL
INTRODUCCION
Una reaccin de transaminacin es la
primera etapa de la desasimilacin de los
aminocidos, y sirve para encauzar los
grupos amino hacia el -cetoglutarato,
para transformarlo en glutamato que
posteriormente ser sometido a una
reaccin de desaminacin oxidativa,
catalizada por la glutamato
deshidrogenasa, formndose un in
amonio que ser utilizado para generar
urea.

actividad de una transaminasa


presente en un extracto crudo de
hgado empleando un mtodo
cromatogrfico y otro
espectrofotmetrico
RESULTADOS
Tabla 1 Curva tipo acido glutmico
Acido
glutmic
o (l)
Absorbe
ncia
Acido
glutmic
o
(moles)

10

15

20

25

0.38
4
0.1

0.35
2
0.2

0.51
1
0.3

0.54
3
0.4

0.65
7
0.5

Grafica 1 Curva tipo acido glutmico

La reaccin catalizada por las


transaminasas es la siguiente:

Problema=|testigo||Problema|

aminocido (1) + -cetocido (1) <==> cetocido (2) + aminocido (2)

Problema=2.4200.840

En las clulas existen muchos tipos de


transaminasas que utilizan el cetoglutarato como aceptor del grupo
amino, pero se diferencian entre ellas por
la especificidad respecto al aminocido
utilizado. Las reacciones catalizadas por
tales enzimas son fcilmente reversibles
(su constante de equilibrio, de hecho,
est muy cercana a 1).

y=mx +b

OBJETIVO
El alumno realizar un mtodo
cuantitativo para medir la

Problema=1.580

y=0.737 x +0.2683

x=

y0.2683
0.737

x=

1.5800.2683
=2.5078
0.737

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Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas
Garcia Felipe Ignacio Gerardo
Grupo 4QM1 Seccin 3

resultados no hay gran discrepancia


entre la alanina y el testigo.
Las muestras que utilizamos del papel
Whatman, se fragmentan para cuantificar
la concentracin de los analitos por el
mtodo espectrofotomtrico.
Las muestras de acido glutmico a
diferentes concentraciones, sirven para
realizar la curva tipo, esta nos permite
compara nuestra prueba. En este caso la
prueba tiene una gran concentracin de
acido glutmico, lo que evidencia el
efecto de la transferasa sobre la alanina
y el acido -cetoglutaric

Grafica 2 Curva tipo acido glutmico


con Problema

CONCLUSIONES

Tabla 2 Rf. Cromatograma


MUE
STRA

2
5

2
0

1
5

1
0

Rf

.
5
6
6

.
5
1
7

.
5
7
3

.
5
7
6

.
5
7
8

.
6
4
8

.
6
6
9

H
2
O
-

DISCUSIONES
A partir de una preparacin cruda de
transaminasa, se comprob el efecto
sobre la Alanina y el acido cetoglutarico. Sabiendo que la
transferasa en la alanina va a transferir
su grupo -amino, al carbono de la cetoglutarato con la intervencin del
piridoxal fosfato como coenzima,
formando as el glutamato y el cetoalaninato.
Para corroborar esto se efectu una
cromatografa en papel Whatman,
poniendo de manifiesto el acido
glutmico en diferentes cantidades,
adems de colocar la muestra problema
con su respectivo testigo, y una muestra
de alanina, esta es para identificar la
muestra que no reacciono con el testigo.
El problema nos determinara la actividad
enzimtica con los sustratos y el testigo
nos permitir saber la concentracin de
alanina que reacciono y que no
reacciono. Como lo vemos en nuestros

A
L
A
.
6
9
1

La transferasa, transfiere un
grupo amino de un
aminocido a un -cetoacido
aceptor; dando como
resultado la formacin de un
nuevo aminocido y un nuevo
cetoacido.

BIBLIOGRAFIA
Vejar Rivera Eva Irma, Prcticas de
Bioqumica descriptiva, 2da Edicin,
Editorial UNISON, Mxico 2005, pp.
152,153.