Bakteri Tahan Asam
Bakteri Tahan Asam
Makiyatul M
Definisi
Bakteri Tahan Asam
= Acid-fast bacilli (AFB)
= are a group of rod-shaped bacteria (bacilli).
= can be seen and counted under the microscope
when smeared on a slide and treated with a special
"acid-fast" staining procedure.
= are Gram-resistant (waxy cell walls), non-motile,
pleomorphic rods
MYCOBACTERI
UM
KARAKTERISTIK :
Batang langsing
Ukuran 0,2 0,4 X 2 10
um
Non motil
Sukar diperiksan dengan
pewarnaan gram
Dapat diperiksa dengan
pewarnaan Tahan Asam
Perbenihan/kultur : tumbuh
lambat
9
KELOMPOK UTAMA
Mycobacterium yang
telah teridentifikasi
lebih dari 100 spesies.
Terbagi atas 2
kelompok Utama :
Mycobacterium
tuberculosis complex
Non Tuberculosis
Mycobacterium (NTMs)
10
M.Bovis BCG
Epidemiologi
Organisme
Habitat
M. tbc
Manusia
M. bovis
Manusia, sapi,
kambing, primata,
kucing, kerbau,
anjing, babi,
kijang dll
-Minum
M. aficanum Manusia
Distribusi
susu sapi
Seluruh
terkontaminasi
dunia
-Inhalasi antar manusia
atau manusia - hewan
Inhakasi antar
manusia
Afrika barat
dan Afrika
timur
13
Slowly growing
Mycobacterium tuberculosis
complex
Mycobacterium tuberculosis co
mplex
(MTBC) members are
causative agents of
human and animal
tuberculosis. Species in
this complex include:
M. tuberculosis, the major
cause of human
tuberculosis
M. bovis
M. bovis BCG
M. africanum
M. canetti
M. caprae
M. microti
M. pinnipedii
Mycobacterium avium
complex
Mycobacterium avium
complex (MAC), is a
group of species that, in
a disseminated infection
but not lung infection,
used to be a significant
cause of death in AIDS
patients. Species in this
complex include:
M. avium
M. avium paratuberculosis,
which has been
implicated in Crohn's
disease in humans and
Johne's disease in cattle
and sheep
M. avium silvaticum
M. avium "hominissuis"
M. colombiense
M. indicus pranii
Mycobacterium gordonae
clade
M. asiaticum
M. gordonae
Mycobacterium kansasii
clade
M. gastri
M. kansasii
Intermediate growth
rate
M. intermedium
Rapidly growing
Mycobacterium
chelonae clade
M. abscessus
M. chelonae
M. bolletii
Mycobacterium
fortuitum clade
M. fortuitum
M. fortuitum subsp.
acetamidolyticum
M. boenickei
M. peregrinum
M. porcinum
M. senegalense
M. septicum
M. neworleansense
M. houstonense
M. mucogenicum
M. mageritense
M. brisbanense
M. cosmeticum
Mycobacterium
parafortuitum clade
M. parafortuitum
M. austroafricanum
M. diernhoferi
M. hodleri
M. neoaurum
M. frederiksbergense
Mycobacterium vaccae
clade
M. aurum
M. vaccae
CF
M. chitae
M. fallax
Ungrouped
M. confluentis
M. flavescens
M. madagascariense
M. phlei
M. smegmatis
M. goodii
M. wolinskyi
M. thermoresistibile
M. gadium
M. komossense
M. obuense
M. sphagni
M. agri
M. brumae
M. canariasense
M. chubuense
M. conceptionense
M. duvalii
M. elephantis
M. gilvum
M. hassiacum
M. holsaticum
M. immunogenum
M. massiliense
M. moriokaense
M. psychrotolerans
M. pyrenivorans
M. vanbaalenii
M. pulveris
Ungrouped
M. arosiense
M. aubagnense
M. caprae
M. chlorophenolicum
M. fluoroanthenivorans
M. kumamotonense
M. novocastrense
M. parmense
M. phocaicum
M. poriferae
M. rhodesiae
M. seoulense
M. tokai
Mycolactone-producing
mycobacteria
M. ulcerans, which causes
the "Buruli", or "Bairnsdale
, ulcer"
M. pseudoshottsii
M. shottsii
Mycobacterium simiae
clade
M. triplex
M. genavense
M. florentinum
M. lentiflavum
M. palustre
M. kubicae
M. parascrofulaceum
M. heidelbergense
M. interjectum
M. simiae
Ungrouped
Mycobacterium
M. branderi
parafortuitum clade
M. cookii
M. parafortuitum
M. celatum
M. austroafricanum
M. bohemicum
M. diernhoferi
M. haemophilum
M. hodleri
M. malmoense
M. neoaurum
M. szulgai
M. frederiksbergense
M. leprae, which causes
Mycobacterium vaccae
leprosy
clade
M. lepraemurium
M. aurum
M. lepromatosis, another (less
M. vaccae
significant) cause of leprosy,CF
described in 2008
M. chitae
M. africanum
M. fallax
M. botniense
Ungrouped
M. chimaera
M. confluentis
M. conspicuum
M. flavescens
M. doricum
M. madagascariense
M. farcinogenes
M. phlei
M. heckeshornense
M. smegmatis
M. intracellulare
M. goodii
M. lacus
M. wolinskyi
M. marinum
M. thermoresistibile
M. monacense
M. gadium
M. montefiorense
M. komossense
M. murale
M. obuense
M. nebraskense
M. sphagni
M. saskatchewanense
M. agri
M. scrofulaceum
M. aichiense
M. shimoidei
M. alvei
M. tusciae
M. arupense
M. xenopi
M. brumae
I
M. canariasense
Intermediate growth rateM. chubuense
M. intermedium
M. conceptionense
Rapidly growing
M. duvalii
Mycobacterium chelonae M. elephantis
clade
M. gilvum
Ungrouped
M. abscessus
M. hassiacum
M. arosiense
M. chelonae
M. holsaticum
M. bolletii
M. immunogenum M. aubagnense
M. caprae
Mycobacterium fortuitumM. massiliense
M. chlorophenolicum
clade
M. moriokaense
M. fortuitum
M. psychrotolerans M.
fluoroanthenivorans
M. fortuitum subsp.
M. pyrenivorans
M. kumamotonense
acetamidolyticum
M. vanbaalenii
M. novocastrense
M. boenickei
M. pulveris
M. parmense
M. peregrinum
M. phocaicum
M. porcinum
M. poriferae
M. senegalense
M. rhodesiae
M. septicum
M. seoulense
M. neworleansense
M. tokaiens
M. houstonense
M. mucogenicum
M. mageritense
Mycobacterial
cell wall: 1-outer
lipids
2-mycolic acid
3-polysaccharides (
arabinogalactan)
4-peptidoglycan
5plasma membrane
6lipoarabinomannan
(LAM)
7phosphatidylinositol
mannoside
8-cell wall skeleton
Anonymous
Atipical
Unclassified
Unknown
Tuberculoid
Environmental
Opportunistik
MOTT (Mycobacterium other than tubercle bacilli)
NO
I
Nama
Photochromogen
Mycobacterium kansasii
Mycobacterium asiaticum
Micobacterium marinum
Mycobacterium intermedium
II
Runyon
classification
of NTMs
III
Scotochromogen
Mycobacterium
Mycobacterium
Mycobacterium
Mycobacterium
Nonphotochromogen
Mycobacterium
Mycobacterium
Mycobacterium
Mycobacterium
complex
IV
cookii
kubicae
gordonae
bohemicum
gasti
simiae
cenopi
avium
Rapid growers
Deskripsi
Koloni berpigmen muncul
setelah ditumbuhkan dalam
gelap, kemudian dipaparkan
sinar
Waktu tumbuh lebih dari 7 hari
Koloni berpigmen muncul
setelah ditumbuhkan dalam
gelap ataupun terang
Waktu tumbuh lebih dari 7 hari
3
1. Photochromogen
2. Scotochromogen
3. Non photochromogen
21
Rapid growers
Potensial pathogen
Mycobacterium
mucogenicum
Mycobacterium agri
Mycobacterium smegmatis
Mycobacterium murale
Mycobacterium septicum
Mycobacterium phei
Mycobacterium alvei
Mycobacterium shagni
Mycobacterium
immunogenum
22
METODE PEWARNAAN
ZIEHL-NEELSEN
Program Penanggulangan TB
Nasional
23
Latar Belakang
BTA
: Merah
Non BTA : Biru
Paul Ehrlich
Pewarnaan tahan asam :
Anilin
Fuchsin
Deklorisasi : Asam Nitrat
BTA : Merah
Non BTA: Biru
Pewarnaan : Karbol
Fuchsin
Deklorisasi : HCl-Alcohol
Penutup : Methylen Biru
Modifikasi Ziehl
Neelsen
Spesimen
Pulmonary specimens
Sputum (spontan)
Transtracheal aspirasi
Aspirasi bronchus
dll
Spesimen yang baik merupakan discard dari cabang bronkhial dengan minimum
material yang berasal dari mulut dan hidung.
Kualitas spesimen ditunjukkan dengan adanya spesimen yang mukoid atau
mukopurulen dengan volume yang cukup.
Idealnya volume sputum 5-10 ml, atau volume yang lebih sedikit asalkan kualitasnya
baik
Before Starting TB
examination
1. Laboratory safety gawn,
handschoen, mask
2. Reagents and equipment proper
place
3. Sputum specimen good quality
4. Minumum required information (RR)
APUSAN DAHAK
PENGERINGAN
FIKSASI
PEWARNAANPEWARNAAN BTA
PEMANASAN
PENCUCIAN
DEKOLORISASI
PENCUCIAN
PEWARNAAN LATAR
PENCUCIAN
PENGERINGAN
PEMBACAAN SEDIAAN
PENCATATAN DAN PELAPORAN
Program Penanggulangan TB
Nasional
31
32
Rak pewarnaan
Pinset/ Penjepit kayu
Air mengalir/ botol semprot air
Lampu spritus/ sulut api
Rak pengering
Pengatur waktu
Reagensia ZN
Program Penanggulangan TB
Nasional
33
Pembuatan Sediaan
PENOMORAN SEDIAAN
Tulis pada bagian frosted
Kode:
XX / YY / ZZZ . A
(sesuai tata cara
penomoran sediaan)
Program Penanggulangan TB
Nasional
34
APUSAN DAHAK
Ambil dengan lidi
sampel dahak pada
bagian yang purulen
Sebarkan secara spiral
kecil-kecil dahak pada
permukaan kaca
sediaan dengan ukuran
2 x 3 cm
Program Penanggulangan TB
Nasional
35
3 cm
2
cm
Gerakan coil
berulang
Sebaran yang
tepat
PENGERINGAN
Keringkan pada
temperatur kamar
Masukkan
lidi bekas
ke dalam wadah
berisi desinfektan
Program Penanggulangan TB
Nasional
38
Fiksasi
Dengan pinset
sediaan kaca
dijepit dan fiksasi
2-3 kali melewati
api bunsen.
Pastikan apusan
menghadap ke atas
Program Penanggulangan TB
Nasional
39
Terlalu tebal
Terlalu tipis
Group 2009
ProgramCore
Penanggulangan
TB
Nasional
Baik
40
Pewarnaan
Atur sediaan diatas
rak jangan terlalu
rapat, buat jarak
41
Pemanasan
Panaskan sediaan
dengan api sampai
keluar uap (jangan
sampai mendidih),
dinginkan selama
minimal lima
menit
Program Penanggulangan TB
Nasional
42
Pencucian
Buang CF
perlahan-lahan
satu per satu
43
Dekolorisasi
Tuangkan Asam
alkohol 3% sampai
tidak tampak warna
merah
44
Pewarnaan Latar
Tuangkan 0.3%
methylene blue
hingga menutupi
seluruh sediaan dan
biarkan 10-20 detik
45
Pencucian
Bilas dengan air
mengalir
Keringkan sediaan
pada rak pengering
Program Penanggulangan TB
Nasional
46
Enam Unsur
Penilaian Sediaan Dahak
1. Kualitas Spesimen
2. Pewarnaan
3. Ukuran
4. Kerataan
5. Ketebalan
6. Kebersihan
Lekosit PMN
Pewarnaan
Ukuran Sediaan
Tersebar rata dalam bentuk spiral
atau lingkaran kecil-kecil
Berukuran 2x3 cm
Ukuran terlalu kecil
Tidak rata
Kerataa
n
Baik
Sediaan harus rata
tidak boleh ada daerah
kosong
Terlalu tebal sehingga
terkelupas
Difiksasi sebelum kering
Pencucian langsung pada
apusan
Tidak rata
Tidak diratakan dengan
membuat spiral-spiral kecil
Program Penanggulangan TB Nasional
Ketebala
n
Sebelum
pewarnaan
Baik
Jelek/terlalu tipis
Jelek/terlalu tebal
Kebersihan
Baik
Endapan kristal
atau
Sisa zat warna
Program Penanggulangan TB Nasional
Sediaan
Dahak
yang Baik
Ukuran 2X3 cm
Letak di tengah
Ketebalan baik, rata,
bersih
Program Penanggulangan TB
Nasional
Pewarnaan
baik
54
Karakteristik BTA
M tuberculosis
dengan pengecatan
ZN
Program Penanggulangan TB
Nasional
(pembesaran
1000x)
Program Penanggulangan TB
Nasional
56
SKALA IUATLD
Negatif
1+
2+
3+
Program Penanggulangan TB
Nasional
57
Perbenihan Mycobacterium
Dilakukan untuk penegakkan
diagnosis definitif penyakit
tuberculosis
Menggunakan medium pertumbuhan
buatan untuk perbenihan in vitro
58
Macam-macam medium
Pembenihan tb
1.
2.
3.
Penyimpanan sediaan
dahak
Hilangkan minyak imersi dengan
cara menempelkan permukaan yg
berisi minyak dg tissue
Simpan sediaan dalam kotak
sediaan secara berurutan sesuai
dengan nomor register lab TB 04
Program Penanggulangan TB
Nasional
60
Number of AFB
ZN stain
(1000x magnification)
Number of AFB
Fluorochrome stain
Report
(1000x magnification)
No AFB
1-2/300 fields
1-2/70 fields
Doubtful request
another specimen
1-9/100 fields
2-18/50 fields
1+
1-9/10 fields
4-36/10 fields
2+
1-9/fields
4-36/fields
3+
>9/field
>36/field
4+
Perbenihan Mycobacterium
Dilakukan untuk penegakkan
diagnosis definitif penyakit
tuberculosis
Menggunakan medium pertumbuhan
buatan untuk perbenihan in vitro
64
Macam-macam medium
Pembenihan tb
1.
2.
3.
Organisme
Hari
tumbuh
Pigmentasi
gelap
terang
Morfologi koloni
pada LJ
M chelonae
3-7
buff
buff
M fortuitum
3-7
buff
buff
M avium
complex
10-21
Buffkuning
Buff-kuning
M kansaii
10-21
kuning
buff
Halus meninggi,
kadang2 kasar
M scrofulaceum
10-14
kuning
kuning
M tuberculosis
12-28
Buff
Buff
M xenopi
28-42
kuning
kuning
Report
No growth
Negative
1-19 colonies
20-100 colonies
Positive (1+)
100-200 colonies
Positive (2 +)
Positive (3 +)
Positive (4 +)
Contaminated
Contaminated
Figure 1. Colony
morphology on
Lwenstein-Jensen slants
(A) Colonies of M.
tuberculosis are rough,
thick, wrinkled, have an
irregular margin, and are
faintly buff-colored.
(B) Colonies of M. canetti
exhibits smooth, white
and glossy colonies
Tes Niacin
Reduksi Nitrate
Tes katalase
Tween Hidrolysis
Reduksi tellurite
Test PNB (paranitro-benzoic acid)
Arylsulfatase--- pathogenic rapid growers
Inhibisi pertumbuhan dengan TCH
(Thiophene-2-carboxylic acid hydrazide)
SUMMARY IDENTIFICATION
OF M tuberculosis
TERIMAKASI
H