Tugas Ujian Akhir Semester

Praktikum Fitokimia II
Review Jurnal
THE IDENTIFICATION OF CHLOROPHYLL AND ITS DERIVATIVES IN
THE PIGMENT MIXTURES:HPLC-CHROMATOGRAPHY, VISIBLE AND
MASS SPECTROSCOPY STUDIES

OLEH :
NAMA

: WA ODE MARFIAH SAFITRI

NIM

: F1F1 12 130

KELAS

: FARMASI C

JURUSAN FARMASI
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS HALU OLEO
KENDARI
2014

Teknologi canggih

1(1) (2012), 16-24

THE IDENTIFICATION OF CHLOROPHYLL AND ITS DERIVATIVES IN

THE PIGMENT MIXTURES:HPLC-CHROMATOGRAPHY, VISIBLE AND
MASS SPECTROSCOPY STUDIES

Sanja M. Milenkovi, Jelena B. Zvezdanovi, Tatjana D. Andjelkovic.

Dejan Z. Markovi
Fakultas Teknologi, Universitas Ni, Leskovac, Serbia
Fakultas Ilmu, Departemen Kimia, Universitas Nis di Nis, Serbia
ABSTRACK
Spectrometry analisis untuk identifikasi klorofil dan turunannya,
pheophytindan chlorophyllide, dalam campuran dimurnikan mereka
(klorofil,
pheophytin
dan
fraksi
chlorophyllide,
masingmasing). Klorofil, pheophytin dan kloroform fraksi phyllide diperoleh
dengan
menggunakan
ekstraksi
pigmen
dari
tanaman
bahan (Spinacia oleracea L),
ditambah
dengan
kromatografi
kolom. Komponen utama dalam klorofil, pheophytin dan chlorophyllide
pecahan diidentifikasi sebagai klorofil a &b, Pheophytin a & bdan
chlorophyllide a Spektrofotometri ditentukan rasio konsentrasi utama
pigmen diidentifikasi, klorofil cchl a / cChl b (di fraksi klorofil), cPheo a /
cPheo b (dalam fraksi pheophytin) dan c cChli a / cChlid b (di fraksi
chlorophyllide) adalah: 4.95 / 1, 1,05 / 1 dan 6.89 / 1, berturut-turut.
Keywords: chlorophyll, pheophytin, chlorophyllide, VIS, HPLC, ESIMS.

Pengantar
Klorofil termasuk dalam kelompok yang paling penting dalam molekul
bioorganik; mereka adalah pigmen utama dalam fotosintesis, mampu menyerap
energi cahaya dan mengubahnya menjadi "energi kimia" dengan pembentukan
senyawa kimia yang kaya akan energi (diperlukan untuk biosintesis karbohidrat
dan senyawa lain dalam fotosintesis organisme seperti tanaman, alga dan bakteria
fotosintesis pigmen utama fotosintesis, klorofil (Chl) adalah klorin (porfirin
derivatif) dalam hal kimia, sebuah tetrapyrrole siklik dengan isocyclic cincin

siklopentanon, menyatu

di tepi

kanan-dasar

air pirol

cincin

[1- 2],

Gambar 1. Klorofil (A), pheophytin (B) dan chlorophyllide (C)

struktur. C-atom numerated menurut IUPAC aturan tata nama. Dalam berbagai
fotosintesis "mata pelajaran" (tanaman, alga, bakteri), klorofil sering disertai
dengan tekanan yang ence berbagai turunannya, seperti pheophytins (Pheo),
chlorophyllides (Chlid), dan banyak lainnya.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mewakili salah satu metode untuk
cepat dan sederhana isolasi, persiapan dan identifikasi klorofil dan turunannya
(pheophytin dan chlorophyllide) dari bahan tanaman (seperti bayam dari pasar
lokal) dengan menggunakan metode ekstraksi dan kromatografi kolom serta VIS,
HPLC dan E (elektron) S (Semprot) I (Ionisasi) - pengukuran MS.
Eksperimental
Semua percobaan dilakukan di bawah cahaya redup selama mungkin, dan di
dalam wadah dan peralatan ditutupi dengan aluminium foil atau kain hitam,
mencegah pigmen terpapar cahaya.
Ekstraksi pigmen tumbuhan Ekstraksi pigmen tanaman dari daun bayam,
Spinacia oleracea L. (ditemukan di pasar lokal), dilakukan pertama-tama Daun

bayam segar n dicuci dengan air dingin. Campuran ekstraksi dan re-ekstraksi yang
methanol dan petroleum eter dalam rasio 2: 1, dan petroleum eter dan dietil eter
(1: 1), berturut-turut. Metanol kembali menggerakkan air dari material tanaman
dan petroleum eter mengambil pigmen sebelum mengalami reaksi ary kedua.
Dietil eter meningkatkan kelarutan pigmen dalam fase organik. Ekstrak terakhir
adalah campuran pigmen yang mengandung sejumlah besar berbagai bentuk
klorofil, serta pigmen aksesori, karotenoid (karoten dan xanthophylls).
Fraksi klorofil. Fraksi klorofil campuran yang dimurnikan dari berbagai bentuk
klorofil (misalnya CHL dan Chl b) - diisolasi dari ekstrak pigmen dengan
menggunakan kromatografi kolom dengan silika gel sebagai adsorben (silika gel
60, Merck, 0,063-0,200 mm) dan n -hexane / ACE campuran nada sebagai eluen
[15, 18]. N-heksana rasio / aseton diubah dari awal 1: 0 untuk akhir 1: 1, untuk
memungkinkan elusi lebih mudah dari fraksi polar. Fraksi klorofil dielusi pada
komposisi eluen 1: 0.1 (n-heksana / aseton, masing-masing), dan kemudian
ditransfer dalam aseton.
Fraksi pheophytin. Fraksi pheophytin - campuran dari berbagai bentuk
pheophytin (misalnya Pheo dan Pheo b) - dibuat dari fraksi klorofil dikumpulkan
dengan penambahan drop-bijaksana 1,0 M HCl. Perubahan dari klorofil ke
pheophytin selesai pada sekitar 2 jam dalam gelap, diamati sebagai perubahan
warna dari hijau menjadi coklat zaitun. Baru dibuat Pheo-hal kemudian
diekstraksi dengan n-heksana dan kemudian dilarutkan dalam aseton.
Ekstraksi chlorophyllides. Ekstrak chlorophyllides diperoleh dari daun bayam
kering (pertama habis dari pertengahan tulang rusuk). Ekstraksi chlorophyllides
dilakukan oleh aksi enzim chlorophyllase endogen pada klorofil, dengan
menginkubasi 5 g bayam kering dengan 100 mL aseton / 0,2 M Tris-HCl
penyangga (pH 8,0, 1: 1 v: v) selama 2 jam di gelap pada 40 0C. Ekstrak
chlorophyllide terakhir adalah campuran pigmen yang mengandung ing jumlah
besar berbagai bentuk chlorophyllide, serta turunannya, dalam jumlah yang lebih
kecil.
Fraksi Chlorophyllide. Fraksi chlorophyllide - campuran dimurnikan dari bentuk
chlorophyllide (misalnya Chlid a dan Chlid b) - diisolasi dari ekstrak

chlorophyllide dengan kromatografi kolom dengan silika gel sebagai adsorben

(silika gel 60, Merck, 0,063-0,200 mm) dan campuran N-heksana / aseton sebagai
eluen. rasio N -heksana / aseton berubah dari awalnya 1: 0 untuk akhir 1:10, untuk
memungkinkan elusi lebih mudah dari fraksi polar. Fraksi chlorophyllide dielusi
pada komposisi eluen 1: 3.3 (n-hex- ane / aseton, masing-masing).
VIS spektroskopi. Pengukuran spektrofotometri dilakukan pada spektrofotometer
Varian Cary-100 dilengkapi dengan sel quartz 1,0 cm. Semua spektrum direkam
350-800 nm dengan 1,0 bandwidth. Spektrum semua senyawa dicatat dalam
aseton. Isi pigmen diselidiki dalam pecahan klorofil, pheophytin dan
chlorophyllide ditentukan seperti yang dilaporkan [22, 23], dalam aseton.
Konsentrasi pigmen dalam aseton berada di kisaran antara 10 -4 dan 10-5 mol / dm3
an rasio molar pigmen diselidiki: cchl a / cChl b (di fraksi klorofil), cPheo a /
cPheo b (dalam fraksi pheophytin) dan c cChli a / cChlid b (di fraksi
chlorophyllide) adalah: 4.95 / 1, 1,05 / 1 dan 6.89 / 1, berturut-turut.
Analisis HPLC. Analisis kromatografi cair tekanan tinggi dari fraksi klorofil,
klorofil dan pheophytin terisolasi dilakukan di bawah kondisi isokratik pada
aparatur: Agilent 1100 Series, Waldbronn, Jerman, kolom: Zorbax Eclipse XDBC18, dengan menggunakan detektor iode array yang diatur pada panjang
gelombang deteksi (det.): 430 dan 660 nm; kondisi isokratik adalah: fase gerak
asetonitril / metanol / etil asetat dengan perbandingan 60:20:20, masing-masing,
laju alir - 0,5 cm3 / min, dan suhu: 25 0C. Konsentrasi pigmen berada di kisaran
antara 10-4 dan 10-5 mol / dm3.
ESI-MS spektrometri. Fraksi pigmen yang telah dianalisis oleh aliran-injeksi
metode

ESI-MS

MS

(spektrometri

Electronspray

massa

ionisation),

menggunakan metanol sebagai fase pembawa. ESI-MS / MS pemeriksaan telah

dilakukan pada LCQ Deca Ion trap Mass Spectrometer (Thermo Finnigan, USA)
dengan peralatan tambahan, dengan kemungkinan menggunakan tuning otomatis
pada setiap ion molekul dalam keadaan yang bisa; nilai energi tabrakan meningkat
20-35% hingga fragmentasi terlihat dari nilai-nilai yang lebih kecil dari m / z,
sehingga awalnya "Induk" ion masih bisa dilihat dalam spektrum. Optimasi
parameter sumber ESI- dilakukan untuk mengakui aspirasi detektor cahaya

dicapai oleh aliran gas memobilisasi (10 L / min), diangkut di bawah tekanan 30
psi. Usia voltase terendah (50 V) diterapkan untuk memastikan transportasi yang
efisien ion yang dihasilkan ke modul analisis.
Hasil dan Diskusi
Penyerapan (VIS) spektrum klorofil, pheophytin dan chlorophyllide fraksi.
Spektrum penyerapan klorofil (A), chlorophyllide (B) dan pheophytin (C) tion
fraktur di aseton ditunjukkan pada Gambar 2.
Klorofil sebagai turunan porfirin memiliki dua pita penyerapan utama
dalam kisaran terlihat, karena diperpanjang -delokalisasi di tepi tetrapyrrole
siklik (pita '' merah '' (Q) dan pita ''biru' '(Soret atau B-)
"Merah" dan "biru" band Chl sebuah (ditugaskan sebagai Qy- dan Soret-)
terletak di 662 dan 430 nm untuk larutan aseton, masing-masingseperti yang
ditunjukkan pada Gambar 2A untuk klorofil fraksi (terdiri dari Chl a dan Chl b
dalam rasio 4,95 / 1) di aseton. Band yang sesuai (Soret- dan Qy-) untuk Chl b
dalam aseton terletak di 645,5 dan 456,9 nm, masing-masing. Kecil "bahu" di 457
nm (mungkin karena adanya Chl b dalam campuran) hadir dalam spektrum
penyerapan fraksi klorofil dalam aseton (Gambar 2A). Di sisi lain, rasio intensitas
absorbansi untuk Soret- dan Qy-band (A Soret /AQy) adalah 1,23 untuk Chl a, dan
2,82 untuk Chl b; sesuai rasio ASoret/AQy untuk fraksi klorofil dalam aseton adalah
1,30 (Gambar 2A).
Penyerapan Maksimal Soret- dan Qy-band terletak di 409,5 dan 665,5 nm
untuk Pheo di aseton, mirip dengan yang ditunjukkan pada Gambar 2B untuk
fraksi pheophytin (terdiri dari Pheo a dan Pheo b rasio 1,05 / 1) dalam aseton.
Dibandingkan dengan klorofil, "merah" maksimum penyerapan ab dari
pheophytins dalam aseton digeser ke panjang gelombang yang lebih panjang.
Namun, maximum dalam "biru" daerah spektral dialihkan ke panjang gelombang
yang lebih pendek. Suatu rasio dari Soret- dan Qy- penyerapan band (A Soret/AQy)
jauh lebih tinggi daripada yang ke klorofil. Untuk Pheo a dan Pheo b dalam

aseton, ASoret / AQy = 2.26 dan 5.30, masing-masing dan untuk fraksi
pheophytin dalam aseton, sesuai rasio ASoret/AQy 2.33 (Gambar 2B).

Gambar 2. Spektrum penyerapan klorofil (A), pheophytin (B) dan chlorophyllide

(C) fraksi dalam aseton. Posisi dari maksimal penyerapan (Soret dan Qy)
ditampilkan dalam spektrum yang sesuai. Posisi beberapa band penyerapan kecil
yang diamati (antara Soret- dan Qy-) juga ditampilkan dalam spektrum yang
sesuai. Konsentrasi Chl dan turunannya dalam pecahan yang sesuai adalah di
kisaran 10-4-10-5 mol / dm3. Spektrofotometri ditentukan rasio konsentrasi
pigmen utama dalam fraksi (CHL a & b di Chl-, Pheo a & b di Pheo- dan Chlid a

& b di fraksi Chlid- juga ditampilkan pada Gambar 2 (A, B dan C, masingmasing).
Chlorophyllide juga memiliki sistem chlorin ditandai dengan pita absorpsi
di sekitar 440 dan 660 nm (dalam pelarut organik) dari intensitas hampir sama (
100.000) [3, 5-6, 8], sama dengan yang ditunjukkan pada Gambar 2C untuk
fraksi chlorophyllide (terdiri dari Chlid dan Chlid b rasio 6.89 / 1) di aseton.
Karena phytil ekor - faktor struktural utama yang membedakan CHL dan Chlid
memiliki kontribusi penyerapan yang sangat diabaikan dibandingkan dengan
struktur klorin, posisi maksimum penyerapan (A Qy dan ASoret) yang hampir sama 662,0-664,0 nm dan 431 nm aseton, untuk "merah" Qy- dan "biru" band Soret-,
masing-masing, untuk kedua Child a & Chlid sebuah. Pita yang sesuai (Soret- dan
Qy-) Untuk Child b di aseton terletak di 457,5 dan 645,7 nm, masing-masing.
Kecil "shoulder" pada 460 nm (mungkin karena hadirat dari Chlid b dalam
campuran) hadir dalam spektrum penyerapan fraksi chlorophyllide dalam aseton
(Gambar 2C). Rasio intensitas absorbansi untuk Soret- dan Qy- Band (A Soret/AQy)
adalah 1,14 Untuk child a pada aseton dan 1,46 untuk fraksi chlorophyllide dalam
aseton (Gambar 2C). Band kecil yang diamati terletak di kisaran spektral antara
Soret- dan Qy- band untuk fraksi chlorophyllide dalam aseton (di 581 nm dan 614
nm - Gambar 2C) yang sesuai dengan data literatur yang sesuai Untuk child yang
dilarutkan dalam aseton
Analisis HPLC-VIS klorofil, klorofil dan pheophytin fraksi. Bagian ini
menggambarkan kemungkinan menerapkan HPLC berbasis silika (dengan silika
oktadesil, atau C-18 kolom) ditambah dengan pengukuran penyerapan, untuk
pemisahan dan identifikasi, Chl, Pheo dan Anak, di campuran yang sesuai,
klorofil,

pheophytin

dan

chlorophyllide

fraksi,

masing-masing.

HPLC-

kromatogram dari fraksi klorofil, pheophytin dan chlorophyllide ditunjukkan pada

Gambar 3 (A, B dan C), masing-masing. Spektrum penyerapan senyawa utama
dalam campuran eluen (fasa gerak) diamati dalam HPLC-kromatogram pada
waktu retensi, tret = 13,6 & 9 min (ditugaskan sebagai CHL a & b), 30,5 & 19
menit (ditugaskan sebagai Pheo sebuah & b) dan 2,7 menit (ditugaskan sebagai
Chlid a), ditunjukkan dalam kelipatan Gambar 3 (A, B dan C), masing-masing.

Kromatografi cair tekanan tinggi (HPLC) telah dianggap sebagai yang

tercepat, metode yang paling sederhana dan paling direproduksi untuk
menganalisis campuran kompleks pigmen dalam makanan dan sumber-sumber
lain. Misalnya, pemisahan klorofil dan turunannya oleh re- berpengalaman fase
HPLC menggunakan silika oktadesil (C-18) kolom dan 100% metanol sebagai
elusi pelarut diusulkan.
Tabel 2. Tinjauan paralel data spektral yang paling penting yang diperoleh dari
spektrum penyerapan yang sesuai dari senyawa yang diamati (Chl a & b, Pheo a
& b dan Chlid a) - dari HPLC-VIS sistem (kiri) dan literatur yang sesuai data
yang dilaporkan untuk senyawa yang sama (kanan).

HPLC-kromatogram dari fraksi klorofil menunjukkan empat puncak

diselesaikan baik di waktu retensi, 9.0, 9.8, 13.6, dan 16.0 menit (Gambar 3A).
Dua puncak utama di tret. 9,0 dan 13,6 menit sesuai dengan Chl b dan CHL,
masing-masing. Penggantian-CH3 kelompok (pada CHL) dengan -CHO
kelompok (pada Chl b) pada posisi C-7 (Gambar 1A) meningkatkan polaritas b
klorofil [26]; sejak lebih polar dari CHL a, b Chl muncul pada waktu retensi lebih
pendek, mengingat sebagian besar non-polar C-18 jenis kolom. Spektrum
penyerapan senyawa yang sesuai dalam fase gerak (diambil dari puncak di tret
yang = 9,0 dan 13,6 menit dengan menggunakan HPLC-VIS - fotodioda
pengukuran ray - kenaikan Gambar 3A) menunjukkan kesepakatan yang baik
dengan data literatur untuk Chl b dan Chl, masing-masing [30-31, 34-35] serta
dengan data literatur yang diberikan dalam Tabel 2. dua komponen yang diamati
lain di retensi kali 9,8 dan 16 menit adalah C-132 epimer dari Chl b dan - Chl b
'dan a'.

Demikian pula untuk diamati HPLC-kromatogram dari fraksi klorofil

(Gambar 3A), kromatogram HPLC- dari fraksi pheophytin juga terdiri dari empat
ulang baik diselesaikan puncak (tetapi pada waktu retensi lebih lama daripada
yang diamati untuk Chl-fraksi) di 19,0, 21,7, 30,5 dan 34,0 menit, diharapkan
pada non-polar C-18 jenis kolom, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3 (A, B).
Dua peak utama di tret. 19,0 dan 30,5 menit sesuai dengan Pheo b dan Pheo a,
masing-masing. HPLC-kromatogram dari fraksi chlorophyllide menunjukkan dua
puncak diselesaikan baik pada waktu retensi 2,7 menit dan 3,0 menit (Gambar
3C). Puncak pertama (2,7 menit) adalah Chlid a dan kedua (di 3.0) bisa menjadi
Chlid a'- spektrum penyerapan kedua senyawa dalam fase gerak (diambil dari
sistem HPLC-VIS) adalah sama, yaitu arang - acteristic dari epimer

Gambar 3. Profil HPLC klorofil (A), pheophytin (B) dan chlorophyllide (C)
fraksi. Isi pigmen dinyatakan sebagai rasio konsentrasi senyawa utama dalam
fraksi, cchl a / b cChl (pada fraksi klorofil), cPheo a / b cPheo (dalam fraksi
pheophytin) dan cChli a / b cChlid (dalam fraksi chlorophyllide) adalah: 4.95 / 1,
1,05 / 1 dan 6.89 / 1, masing-masing. Deteksi dilakukan pada 660 nm. Kondisi
kromatografi dijelaskan di bagian Eksperimental. Spektrum serapan yang sesuai
dari Chl a & b, Pheo a & b dan Chlid dalam fase gerak, diambil dari puncak pada
waktu retensi 9,0 & 13,6, 19,0 & 30,5 dan 2,7 menit (dari data photodiode array),
yang ditampilkan dalam kelipatan Gambar 3 (A, B dan C), masing-masing.
Chlorophyllide dengan kelompok asam propionat unesterified pada C-17
Gambar 1C jauh lebih polar daripada klorofil yang sesuai; mereka pertama dielusi
dari non-polar C-18 kolom (Gambar 3). Chlorophyllide sebuah (puncak pada 2,7
menit) adalah dominan dalam fraksi chlorophyllide, seperti yang ditunjukkan pada
Gambar 3C. Data spektral (dari spektrum penyerapan senyawa dalam fase gerak
di tret ini. = 2,7 menit) telah menunjukkan kesepakatan yang baik.
MS spektrum klorofil, pheophytin dan fraksi kloroform phyllide.
Electronspray-ionisasi spektrometri massa, ESI-MS digunakan untuk
deteksi dan karakterisasi dari satu atau lebih spesies ion dalam larutan, dan
dikonfirmasi sebagai sangat berguna dalam studi tentang berbagai system. ESIMS memungkinkan akuisisi spektrum massa langsung dari sampel cair.
Tergantung pada muatan ion dalam larutan, modus ion positif atau negatif dapat
diterapkan (ESI + atau ESI-, masing-masing) untuk mendapatkan hasil optimates
ibu. Jika ada ambiguitas dalam interpretasi spektrum, sebuah spektrometri massa
resolusi tinggi dan analisis MS / MS mengarah ke identifikasi hampir tegas. Di
sisi lain, komposisi larutan mengalami analisis dikondisikan oleh keterbatasan
yang signifikan: tidak menerapkan kekuatan ion yang tinggi karena bahkan
relativitas konsentrasi relatif rendah komponen mudah menguap (misalnya ion Na
+) dapat mengganggu.
Dalam MS spektrum klorofil, pheophytin dan chlorophyllide pecahan (tidak
ditampilkan), puncak molekuler di nilai m / z yang sesuai dengan berat molekul

dari senyawa yang ditemukan dari hasil HPLC-VIS yang diamati: CHL a (893,8),
Pheo a (871,7), Chlid a (614,2) antara Chl b, Pheo b dan Chlid b. Radikal ion
molekul cals, [M] +, untuk semua campuran pigmen yang digunakan dalam
pekerjaan ini (pecahan Chl-, Pheo-, dan Chlid-) yang diamati dalam spektrum
massa ion positif. MS / MS spektrum Chl sebuah, Pheo dan Chlid dari fraksi
klorofil, pheophytin dan chlorophyllide ditunjukkan pada Gambar 4 (A, B dan C),
masing-masing. Ion-ion fragmen yang paling melimpah di positif spektrum massa
ion klorofil dan turunannya spond biasanya corre- untuk fragmentasi dengan
hilangnya kelompok dari C-17 dan C-132 posisi (Gambar 1) [26, 30, 39, 42- 43].
Mantan orang dapat menjadi hasil dari hilangnya rantai phytil (sebagai
phytadiene, C20H38) atau kelompok CH3COOC20H39 - (C-17 posisi pada
Gambar 1) - yang muncul dalam spektrum massa pada m nilai / z yang sesuai
dengan [M -C20H38]

= [M 278]

dan [M-CH3COOC20H39]

= [M-338] +.

Yang terakhir dapat hasil dari hilangnya CH3OH (di C-133 posisi) atau seluruh
ester-kelompok (COOCH3 di C-132 posisi) - (Gambar 1) - yang muncul dalam
spektrum massa pada m / z sesuai dengan [M-CH3OH] = [M-32]
COOCH3] = [M-59] +.

dan [M

Gambar 4. Full scan MS / MS spektrum yang sesuai [M] + ion dari klorofil a (A),
pheophytin a (B) dan chlorophyllide a (C) diambil dari MS spektrum klorofil,
pheophytin dan fraksi chlorophyllide, masing-masing.
Dalam spektrum massa fraksi klorofil, puncak diamati pada m / z 893,8
ditunjuk sebagai ion-peak molekul Chl (tidak ditampilkan). Fragmentasi kedua
puncak yang sama ditemukan pada m / z 893,8 memberi spektrum MS / MS khas
untuk CHL, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4A. Dalam spektrum massa
yang sesuai dari Chl, dua-ion fragmentasi yang paling penting yang jelas diamati:
pada m / z 555,7 dan 639,0, di antara yang paling melimpah, molekul ion-puncak

pada 893,8 (Gambar 4A). Puncak pada m / z 555,7 sesuai dengan fragmentasi Chl
molekul di C-17 posisi (Gambar 1A) dengan hilangnya CH3COOC20H39 ([M
338] +) yang sesuai dengan literatur [26]. Yang kedua, ion fragmen lebih
berlimpah dalam spektrum massa Chl sebuah diamati pada m / z 639,0, sesuai
dengan [M - (C20H38) + Na]

+:

kehadiran Na

di ESI-MS fragmentasi bukan

merupakan fenomena yang tidak biasa.

Adanya puncak pada m/z 871,7 (ditugaskan untuk ion molekul Pheo a) dan
tidak adanya m / z 893,8 (untuk CHL a ) dalam spektrum massa fraksi pheophytin
(tidak ditampilkan). Fragmentasi kedua puncak yang sama ditemukan pada m / z
871,7 memberi spektrum MS / MS khas untuk Pheo, seperti yang ditunjukkan
pada Gambar 4B.
Dalam spektrum massa fraksi chlorophyllide, puncak diamati pada m / z
614,2 ditugaskan sebagai puncak ion- molekul Chlid (tidak ditampilkan).
Fragmentasi kedua puncak yang sama ditemukan pada m / z 614,2 memberi
spektrum MS / MS khas untuk Chlid, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4C.
Ion fragmen sesuai dengan [M - CH30H] + dan [M - COOCH3] +, di 583,1 dan
555,2 m / z masing-masing ditemukan.
Kesimpulan
Penggunaan VIS spektrometri, HPLC-VIS dan analisis ESI-MS / MS
digunakan

untuk

identifikasi

klorofil

dan

turunannya

pheophytin

dan

chlorophyllide dalam campuran murni mereka (fraksi klorofil, pheophytin dan

chlorophyllide, masing-masing). Seperti yang diharapkan, komponen utama
dalam pecahan klorofil, pheophytin dan chlorophyllide diidentifikasi sebagai
klorofil a & b, pheophytin a & b dan chlorophyllide, masing-masing.