PEDOMAN KHUSUS

UNTUK
LABORATORIUM
MIKROBIOLOGI

*MENUJU AKREDITASI

M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

ACUAN
ISO/IEC 17025 :2005
Persyaratan
y
Manajemen
j
(Elemen 4.1-4.15)
Persyaratan Teknis
(Elemen 5.1-5.10)

M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

FAKTOR FAKTOR YANG MENENTUKAN

FAKTOR-FAKTOR
KEBENARAN DAN KEHANDALAN PENGUJIAN

Faktor Manusia (5.2)

Kondisi Akomodasi dan Lingkungan
(5.3)
Metode Pengujian (5
(5.4)
4)
Peralatan (5.5)
Ketertelusuran pengukuran (5.6)
Pengambilan Contoh (5
(5.7)
7)
Penanganan Barang yang diuji (5.8)
Jaminan
J i
M
Mutu
t Hasil
H il Uji (5
(5.9)
9)
M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

PERSONIL
Kecukupan jumlah personel penguji
Mempunyai kompetensi yang memadai:
pendidikan, pelatihan, pengalaman untuk
masing masing tingkatan: pengawas
masing-masing
pengawas,
penguji, penandatangan
sertifikat/pemberi
f
/
interpretasi/pendapat
/
Memiliki uraian tugas personil : tugas
dan tanggung jawab serta wewenang
Rekaman
R k
personil:
il CV
M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

KONDISI AKOMODASI DAN

LINGKUNGAN
Fasilitas : - fasilitas pengujian
- fasilitas pendukung
Pengaturan akses ke ruangan
Kecukupan penerangan, sumber energi
Program Kebersihan/hygiene dan pemantauan
cemaran MO
Pengendalian
P
d li d
dan rekaman
k
kkondisi
di i ruangan: suhu,
h
kelembaban
Pencegahan
P
h agar tid
tidak
k tterjadi
j di kkontaminasi
t i
i silang
il
Tata tertib laboratorium
Pengelolaan
P
l l
kkerumahtanggaan
ht
yang b
baik
ik
M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

METODE PENGUJIAN

Metode standar
Metode standar yang dimodifikasi
Metode non standar
Metode yang dikembangkan sendiri
Validasi dan verifikasi metode
pengujian
M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

PERALATAN
Pemeliharaan & penyimpanan
- Menghindari kontaminasi silang
- Pemeliharaan khusus: alat LAF, autoklaf,
i k b t N
inkubator,
Neraca, d
dsb.
b
Kalibrasi
a b as da
dan verifikasi
e
as kinerja:
e ja p
program,
og a ,
frekuensi, dan jarak waktu

M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

Peralatan Utama
IInkubator
k b t
Waterbath
Autoclave
Oven
Laminar air flow
Stomacher/blender
pH meter
Plastik dan peralatan gelas

M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

Inkubator
Monitor suhu internal dengan
yang
g dikalibrasi
termometer y
H
Hasilil monitoring
it i h
harus
didokumentasikan

M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

Waterbath
Suhu kritis : 44,5 0,1oC atau 45,5
, oC
0,1
Distribusi suhu merata
Monitoring
M it i suhu
h air
i
Uj
Uji pe
pertumbuhan
tu bu a ba
bakteri
te pada EC
C
medium
E.
E coli : terbentuk gas
E. aerogenes : tidak terbentuk gas
M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

Laminar Air Flow

Cek terjadinya kontaminasi udara : PCA
- Terbuka 1 jam
jam, inkubasi 361 oC selama 24-48
24 48 jam,
jam
tidak boleh ada koloni
- Jika masih ada ulang:
g tidak berfungsi
g atau kesalahan
analis
Kebersihan Permukaan : RODAC metod
Laju alir udara (0,45
(0 45 20% m/s),
m/s) lubang pada filter
Jumlah Partikel 0.5 m dan 5.0 m
Efektifitas lampu
p UV
- Spread plate 0.5 ml E. aerogenes (200-250 koloni)
- Diamkan 2 menit dibawah lampu UV dan lampu
biasa inkubasi 361 oC,
biasa,
C 24-48
24 48 jam
- Lampu biasa : 200-250 koloni
- Penurunan kurang dari 80 %, UV harus diganti
M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

Stomacher/blender
Stomacher
Melepaskan
p
sel bakteri
Tidak perlu sampai hancur

Blender
Atur kecepatan blender
Cek visual: jika masih kasar,
kasar kecepatan dan
waktu perlu ditambah
M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

Autoclave
Kalibrasi : suhu dan tekanan
Siklus Sterilisasi : tergantung alat
Warming up : mencapai 121oC
Sterilization : waktu pada 121oC, 15 psi,
15
15
Cooling down : suhu turun sampai 80oC
Label : membedakan yang disteril atau tidak
Indikator mikrobiologi (Sterilisasi)
B.
B stearothermophilus

M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

Oven
Sterilisasi : gelas dan metal
Monitoring suhu internal
Holding time dan temperatur
Heating up : 1 jam
Holding
g : 160oC ((45 menit);
); 170oC ((18
menit); 180oC (7,5 menit); 190oC (1,5 menit)
Cooling down : 2 jam

M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

pH meter
K
Kalibrasi
lib i : L
Larutan
t b
buffer
ff pH
H4
4,7
7d
dan 10
Efisiensi elektrode
Bersihkan setelah dipakai : air hangat untuk media
agar, acetone untuk lemak
Penyimpanan tergantung jenis elektrode (petunjuk
alat).
Gelas disimpan
p dalam larutan buffer p
pH 7 atau dalam
larutan sedikit asam
Reference disimpan dalam 0,1 M KCl
Kombinasi disimpan dalam campuran 50% lar buffer pH 7
dan 50% 0,1 M KCl

M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

Plastik/Peralatan gelas
Plastik
Tidak dapat diautoclave: polyethilene, styrene, polystyrene,
polyvinylchlorida
Dapat
D
t di
diautoclave:
t l
polypropylene,
l
l
polycarbonate,
l
b
t nylon,
l
PTFE
(Teflon), polyallomer, TPX (methylpentene polymer)

Peralatan
P l t gelas
l
Pipet: 1-10 ml
Botol p
pengencer:
g
McCartney
y 14 ml,, 28 ml
Tabung reaksi: 4 ml (127 x 12,5 mm); 5-10 ml (152 x 16 mm);
10-15 ml (152 x 19 mm); 20 ml (178 x 25 mm);
Jarum inokulasi: tidak lebih dari 3 mm
Tabung durham: 25-30 x 5-6 mm
cover glass: ketebalan 16 mm
M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

MEDIA QUALITY CONTROL

Penerimaan

Penyiapan

Umur

media

dan penggunaan

simpan dan kondisi penyimpanan

Mutu

media

M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

Penerimaan Media
Pemeriksaan
Administrasi : nama media,, pemasok,
p
,
kesesuaian, tanggal penerimaan, masa
kadaluarsa dll
Visual: abnormalitas, kebocoran,
penggumpalan dll
penggumpalan,

M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

Penyiapan dan Penggunaan

Titik kritis: mutu air
TPC maks. 103 CFU/ml
Bebas dari logam beracun, bakterisida
pH

Catat penyiapan media pada log book

Nama media,, sumber,, nomor batch,, nama penyiap,
p y p,
tanggal, jumlah, volume, pH, tekanan, suhu, dan
waktu

Pengukuran pH: pH meter bukan kertas pH

Atur p
pH dengan
g 0,11N HCl atau 0,1N NaOH
M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

Umur Simpan dan Kondisi

Penyimpanan
Masa Kadaluwarsa
Media dan bahan kimia tertera pada label
Penyimpanan
Sesuai label
Umumnya sejuk, kering dan terhindar dari matahari
Faktor yang mempengaruhi penyimpanan
Volume media : penyusutan maks. 10%
Wadah dan suhu penyimpanan : agar pada petri 2
minggu, pada botol 3 bulan pada suhu 4oC
Sifat media : media selektif dapat
p kehilangan
g
selektifitasnya jika disimpan terlalu lama
petunjuk : tidak semua sama untuk media, reagen, dll
ikuti petunjuk sesuai metode uji
M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

Mutu Media
Fisik : Kering, dapat larut (tidak semua)
Uji pertumbuhan
Media isolasi dan media selektif
T
Tumbuhkan
b hk kultur
k lt bakteri
b kt i (positif
(
itif d
dan negatif)
tif)
pada media

Media identifikasi
Uji karakteristik bakteri

M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

Mikroorganisme Acuan
Posedur Penanganan & Pemeliharaan
PJ MO acuan
Kemampuan telusur/ketelusuran : dari koleksi nasional
atau internasional----- COA, surat keterangan
Persediaan acuan
- ISO 11133-1: kultur acuan dapat di subkulturkan sekali
untuk membuat persediaan acuan
- pengecekan kemurnian
- liofilisasi
Tidak boleh dibekukan ulang atau digunakan ulang
setelah dicairkan.
Kultur Kerja
- Hendaknya tidak di subkultur
R k
Rekaman
proses sub
b kultur
k lt sampaii pemusnahan
h kultur
k lt
dipelihara
M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

PENGAMBILAN CONTOH
Lab. tidak bertanggungjawab untuk
melakukan sampling primer thd bahan uji
Jika melakukan pengambilan contoh maka
harus memiliki jjaminan mutu untuk sampling
g
Transpor dan penyimpanan contoh
di pantau dan dikendalikan
dikendalikan, mempertahankan
keutuhan sample
Pengujian dilakukan secepat mungkin setelah
sampling
Dilakukan oleh personil yang kompeten
M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

Penanganan dan identifikasi sampel

Rekaman kondisi penerimaan sampel di pelihara
Sampel diidentifikasi sedemikian rupa
Sampel di simpan sesuai kondisi untuk meminimalkan
perubahan pada setiap populasi mikroba yang ada
Sampel dikemas sedemikian rupa sehingga terjaga dari
kontaminasi dan deteorisasi
Sub sampling
p g dilakukan sesuai dengan
g standar yyang
g
ditetapkan dengan memperhitungkan mikroorganisme
yang tidak merata
Pemusnahan direkam dan sampel yang telah
terkontaminasi hendaknya didekontaminasi sebelum di
b
buang
meminimalkan
i i lk kkontaminasi
t i
i lilingkungan
k
M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

Jaminan Mutu

Pengendalian mutu Internal

Penggunaan mikroorganisme acuan
Replikat pengujian
Pengendalian mutu eksternal
Partisipasi uji banding/uji profisiensi
Audit oleh customer

M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

Jaminan Mutu
Uji profisiensi
TUJUAN
Pemeriksaan mutu data uji secara external
Dukungan komitmen untuk mempertahankan mutu data
Memberikan motivasi untuk memperbaiki unjuk kerja dalam
pengujian
p
g j
tersebut
Mendukung peningkatan mutu sesuai standar, untuk
keperluan akreditasi dan sebagainya
Membantu
mengidentifikasi
adanya
penyimpangan
masalah
Unjuk kerja laboratorium yang bersangkutan dapat
dibandingkan terhadap unjuk kerja laboratorium lain
Merupakan cara QC yang baik pada keadaan dimana
bahan acuan/reference materials tidak tersedia
M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

UJI BANDING/UJI PROFISIENSI

(LANJUTAN)
Membantu pelatihan staf laboratorium peserta
Menjaga reputasi laboratorium dari hasil uji yang
kurang bermutu
Meningkatkan kompetensi/kemampuan laboratorium
(laboratorium menjadi lebih kompetitif)
Menunjang dalam hal pemasaran jasa pengujian

M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

TERIMA KASIH

M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

dalam bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo