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Universidad Autnoma de Baja

California

Cdigo
L1 N3- 006

Revisin
2

Referencia
6.3, 7. 5.1, 7.6

Facultad de Medicina
Tijuana

Instruccin de Trabajo ESPECTROFOTMETRO

1. Objetivo: Definir la metodologa para el uso, calibracin y verificacin de linealidad y de
longitud de onda del ESPECTROFOTMETRO.
2. Alcance: Aplica al uso, mantenimiento, verificacin de la calibracin y linealidad del
Espectrofotmetro.
3. Definiciones
Absorbancia: termino usado para expresar la extensin de absorcin lumnica
cuando la energa radiante pasa a travs de una solucin.
Longitud de onda: Longitud de onda a la cual un filtro u otro monocromador exhibe
su mxima transmisin.
Monocromador : Dispositivo que produce luz monocromtica(con un solo color)
nm: Unidad de longitud equivalente a la milmillonsima parte de un metro.
RPBI: Residuos peligrosos biolgico infecciosos.
4. Instruccin de Trabajo
ESPECTROFOTOMETRO:
Preparacin previa:
Realice la reaccin qumica de la prueba de acuerdo al mtodo recomendado en
los insertos del mismo, incluya:

Revisin

Fecha

Descripcin

16/11/04

26/04/05

Se cambia la referencia a 7.5.1, se anexa el cdigo del archivo electrnico de la

verificacin de calibracin y sensibilidad LC-N4-053.
Se hacen ajustes al procedimiento y a las referencias.
Cambio en l titulo, se quita la marca. Cambio en los Registros se incluye
almacenamiento y proteccin, Recuperacin, tiempo de retencin y disposicin. Se
quita la Bitcora de control de pacientes y servicios. Se anexan los procedimientos de
Inspeccin de Proceso LC-N2-02 y Control de producto no conforme LC-N2-003 en la
seccin de proceso analtico y en Referencias.
Se quita la verificacin de la linealidad ya que es un procedimiento externo.
Se corrige el Cdigo a L1-N3-006

Elabor

Revis

Autoriz

Aux. de Laboratorio: Claudia

Tiznado Vazquez.

Q.F.B. Ma. de la Luz Ibarra Arias

Responsable de Laboratorio

Dra. Sara Corts Bargall

Directora

Cdigo: GC-N4-002, Rev. 0

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Instruccin de Trabajo ESPECTROFOTMETRO

Tubo/ Blanco
Tubos / Calibrador. ( puede omitir si tiene curva de calibracin)
Tubo(s) de control
Tubo problema. ( muestra biolgica)
Continu con la siguiente instruccin Para obtener sus lecturas y posteriormente las
concentraciones del analito.

2.
3.
4.
5.
6.
7.

MEDICIONES EN EL ESPECTROFOTOMETRO
Utilice la imagen del anexo para identificar las partes del espectrofotmetro.
1. Encienda el equipo cuando el botn de encendido este en transmitan ca,
espere 15 min. antes de usarlo.
Seleccione la longitud de Onda en el botn de ajuste longitud de onda
a. Inserte el filtro apropiado
Seleccione la cubeta (celda) apropiada para cada una de las lecturas en el
espectrofotmetro. Siempre limpie el exterior de la cubeta con papel (kimwipes), NO
toque las reas del tubo por la que pasa el haz de luz)
Prepare una cubeta con Agua destilada. Presione el botn ZERO SET mientras ajusta
con el control ZERO hasta que aparezca 0.0.
En otra cubeta deposite la solucin blanco ( reactivo) Inserte la cubeta y ajuste a 100
de tramitan ca en el botn 100T/0 A
Una vez ajustado gire el botn de encendido a la marca A y ajuste a 0 de
absorbancia con el botn 100T/0a.En este momento el aparato esta listo para
hacer las mediciones.
Proceda a la lectura de soluciones ( Blanco, Calibradores, Controles o problemas,
segn sea

el caso) utilizando cubetas apropiadas.

8.

Peridicamente ajuste con la sol. Blanco el 0 de D.O.

9.

Registre las lecturas obtenidas.

10. Una vez realizadas las lecturas, vierta en recipiente apropiado de RPBI
11. Las concentraciones de los analitos se obtienen elaborando previamente una curva
de calibracin o aplicando la siguiente ecuacin
[P] = X = Abs p / Abs st x [St] dnde:
[P] = Concentracin del problema
Abs p = Absorbancia del problema
[St] = Concentracin del estndar
Abs st = Absorbancia del estndar

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VERIFICACIN:
1. Despus de obtener las concentraciones, verifique que los valores del o los
Controles, estn dentro de los rangos de desviacin standard aceptables y
se encuentren dentro de los limites de los valores de referencia que
proporciona el fabricante y que estn anotados en el Inserto de los Sueros
Control. Proceda de acuerdo al procedimiento de Inspeccin de proceso
LC-N2-002 y Control de Producto NO conforme LC-N2-003.
2. En caso contrario la prueba se invalida y deber verificar:
1. Recalibre y repita el proceso.
2. Cambie la solucin reactiva y repita el proceso.

VERIFICACIN ANUAL DE LA CALIBRACIN DE LA LONGITUD DE ONDA:

1. Prepare una solucin de Cloruro de cobalto con 2.2 g/dl en cido
clorhdrico 0.1 N.
2. Realice mediciones con el cloruro de cobalto a intervalos de 10 nm
desde 450 hasta 550 nm, ajustando el espectrofotmetro a cero(0) con
agua destilada.
3. Anote las absorbancias de la solucin de cloruro de cobalto y regstrelas
electrnicamente en el archivo verificacin de espectrofotmetro que
se localiza en el laboratorio.
4. Grabe la informacin como ve (verificacin de espectro) y la fecha de
la verificacin, da/mes/ao ejem. ve06/10/02
5. Observe en sus resultados cual es la longitud de onda (LO) de la mxima
absorbancia.
6. Si obtiene la mxima absorbencia a 510 nm y esta corresponde a
lecturas que se encuentren entre 0.43 a 0.46 el espectrofotmetro esta
calibrado y con sensibilidad adecuada.
7. Si la a la que se obtienen la absorbencia mxima es diferente a la
indicada el instrumento esta descalibrado.
8. Si el instrumento da una absorbencia diferente a la esperada, no tiene
sensibilidad adecuada, proceda a notificar al responsable de
laboratorio para que solicite mantenimiento correctivo del
espectrofotmetro. (AD-N4-013)
9. Registre en la bitcora de Calibracin y verificacin de equipo LC-N4-006

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MANTENIMIENTO:
1. Mantenga cubierto el espectrofotmetro cuando no este en uso.
2. Realice la limpieza externa.
3. Realice la limpieza interna y verificacin de la linealidad y de la
calibracin de la longitud semestralmente.
4. Servicio de Limpieza externa: Con un pao limpio, quite el polvo y/o
manchas del exterior del espectrofotmetro, de arriba hacia abajo, y en
un solo sentido. (puede utilizar pao hmedo)
5. Limpieza interna: Con una pistola de aire (puede usar de las de secar el
pelo) elimine el polvo que cubre la lmpara y el rea interna del
espectrofotmetro. Una vez realizada la limpieza interna proceda a la
verificacin de la linealidad.

5. Registros.
Bitcora de mantenimiento de equipo AD-N4-014
Archivo electrnico de la verificacin de calibracin y sensibilidad LC-N4-053.
Identificacin
Bitcora de
Mantenimiento de equipo.
AD-N4-014
Bitcora de verificacin
de Calibracin y
sensibilidad del
espectrofotmetro.
LC-N4-053. (archivo
electrnico)

Almacenamiento y
proteccin.

Recuperacin

Tiempo de
retencin

Gaveta o archivero del

laboratorio 1

Por Cdigo y fecha en

archivo

1 ao en Lab. 1
2 aos archivo
muerto SGC.

Gaveta o archivero del

laboratorio 1

Por Cdigo y fecha en

archivo

1 ao en Lab. 1
2 aos archivo
muerto SGC.

Disposicin
Destruccin
mecnica.
Destruccin
mecnica.

6. Referencias
Manual del fabricante del Espectrofotmetro.
Insertos de Reactivos, calibradores y controles.
LC-N2-002 Procedimiento de Inspeccin de proceso
LC-N2-003Procedimiento de control de producto NO conforme.
LC-N2-004 Procedimiento de Calibracin y verificacin de equipos.
LC-N2-005 Procedimiento de mantenimiento de equipos
LC-N2-006 Procedimiento de manejo interno de R.P.B.I.
NOM- 166 SSA1-1997
NOM-O87-ECOL SSA1-2002

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7. Anexos.
DIAGRAMA DEL ESPECTROFOTMETRO

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