Manual de Inmunohematología y Medicina Transfusional

INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL
Do d
MANUAL TECNICO
INMUNOHEMATOLOGIA
Y
MEDICINA TRANSFUSIONAL
TMs: Leonor Armanet, Juana Vargas, Amalia Crcamo, Carolina Hernndez
Ste
2012
CURSO 2015
Actualizado por TMs Josefina Barrera y Catalina Salinas
____________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL
INTRODUCCION
La Medicina Transfusional es un rea de la Medicina que ha sufrido
diversos y rpidos cambios a lo largo de su historia, en especial en los ltimos
aos, lo que constituye un constante desafo para los que trabajan en sta
rea. Hemos desarrollado este texto que pretende servir de gua tanto a
estudiantes de la Carrera de Tecnologa Mdica como a profesionales que
trabajan en Servicios de Sangre.
En
el
presente
Manual
se
describen
aspectos
bsicos
de
Inmunohematologa y Medicina Transfusional, se describen las tcnicas y

procedimientos que se utilizan con mayor frecuencia en una Unidad de
Medicina Transfusional y en un Centro de Sangre. Se incorpora un cuestionario
de autoevaluacin al trmino de cada una de las unidades temticas, que
permite que el estudiante pueda conocer el nivel de comprensin y manejo
de las materias que aqu tratamos.
Pretendemos adems hacer reflexionar a quienes se inician en esta
disciplina sobre aspectos relevantes del quehacer del Tecnlogo Mdico en
Medicina Transfusional, en tpicos como control de calidad, metodologas,
registros, etc., con el propsito de lograr en ellos un espritu crtico y autonoma
en
su
quehacer
profesional.
Pretendemos
reforzar
el
aprendizaje
comprensin del texto con talleres dirigidos y discusin de casos, buscando a

travs del trabajo cooperativo las respuestas a las interrogantes que aqu
planteamos, y as tambin fortalecer aspectos que pueden no estar
explcitamente tratados en ste manual.
INDICE
UNIDAD DONACIN DE SANGRE
SELECCION DE UN DONANTE DE SANGRE
1.- INTRODUCCION:
2.- EL LLENADO DE LA FICHA DE DONANTE Y EL CUESTIONARIO:
3.- SELECCION DEL DONANTE:
4.- CONDICIONES DE LA ENTREVISTA DEL DONANTE DE SANGRE
5.- PRINCIPIOS DE UNA ENTREVISTA:
6.- CRITERIOS DE SELECCIN
PREGUNTAS A REALIZAR DURANTE LA ENTREVISTA AL DONANTE
PROCEDIMIENTOS A UTILIZAR EN LA ATENCION Y SELECCION DE UN DONANTE DE SANGRE
I.- DETERMINACION DE Hb UTILIZANDO SULFATO DE COBRE.
II.-DETERMINACION DE HEMOGLOBINA EN DONANTES CON EL METODO HEMOCUE
III.- TECNICA EN LAMINA PARA CONTROLAR ANTIGENOS ABO EN GLOBULOS ROJOS.
IV.- CONTROL DE CALIDAD DEL PROCEDIMIENTO DE EXTRACCION EN UN DONANTE
1.- CULTIVO BACTERIOLGICO DEL SITIO DE PUNCIN.
2.- CULTIVO BACTERIOLGICO DE LAS UNIDADES DE SANGRE.
3.- CONTROL DE CALIDAD DEL VOLUMEN DE SANGRE EXTRADO A CADA DONANTE.
V.- MEDICION DE LA PRESION ARTERIAL
VI.- PREPARACION DE LA ZONA DE PUNCION VENOSA.
VII.- PUNCION VENOSA Y EXTRACCION DE SANGRE.
VIII.- ATENCION DEL DONANTE DESPUES DE LA EXTRACCION
REACCIONES ADVERSAS A LA DONACION DE SANGRE
I.- REACCIONES LOCALES:
II.-REACCIONES GENERALIZADAS:
6
7
7
8
8
8
9
11
12
21
21
22
24
26
26
26
26
27
28
29
31
31
31
32
REGISTROS
34
ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE DE HEMOCOMPONENTES

GESTION DE STOCK EN BANCO DE SANGRE
37
37
UNIDAD INMUNOHEMATOLOGIA
44
INTRODUCCION A LA INMUNOHEMATOLOGIA
REACTIVOS BASICOS A USAR EN INMUNOHEMATOLOGIA Y BANCO DE SANGRE
1.- BUFFER FOSFATO Y BUFFER FOSFATO SALINO
2.- PREPARACION DE SUERO AB INERTE
3.- MEDIO DE BAJA FUERZA INICA (LISS):
4.- EDTA - SALINO
5.- SOLUCION DE ALSEVER MODIFICADA:
6.- CONVERSION DE PLASMA A SUERO
TRATAMIENTO DE MUESTRAS CON COAGULACION INCOMPLETA
PREPARACION DE LECTINAS PARA USO EN INMUNOHEMATOLOGIA
REACCION DE CELULAS POLIAGLUTINABLES CON LECTINAS
LAVADO DE ERITROCITOS Y PREPARACION DE SUSPENSIONES CELULARES
GRADUACION DE LOS RESULTADOS INMUNO-HEMATOLOGICOS
CALIBRACION DE CENTRIFUGAS SEROLOGICAS PARA INMUNOHEMATOLOGIA
CARACTERISTICAS DE LOS SUEROS CLASIFICADORES.
ESPECIFICIDAD:
POTENCIA:
AVIDEZ E INTENSIDAD:
TITULO
CLASIFICACION DEL SISTEMA ABO
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49
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51
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53
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58
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61
DETERMINACION DE ANTIGENOS SOLUBLES ABH Y LEWIS EN SALIVA

FRECUENCIAS GENICAS DE SISTEMAS SANGUINEOS EN DIFERENTES POBLACIONES
CARACTERISTICAS GENERALES DE SISTEMAS SANGUINEOS DE IMPORTANCIA CLINICA
TEST ANTIGLOGULINA HUMANA
TEST ANTIGLOBULINA HUMANA DIRECTO (TAD) TEST DE COOMBS DIRECTO
TEST ANTIGLOBULINA HUMANA INDIRECTO (TAI) TEST DE COOMBS INDIRECTO
PREPARACION DE GLOBULOS ROJOS CONTROL PARA TEST ANTIGLOBULINA HUMANA
CLASIFICACION RH (D): TCNICA EN TUBO
CLASIFICACION DE GRUPO ABO Y RH: TCNICA EN MICROPLACA
DETERMINACION DE GENOTIPO RH
Frecuencia de los haplotipos Rh en poblacin chilena.
ALGORITMO A UTILIZAR EN LA CLASIFICACIN RH D
DETECCION DE ANTICUERPOS IRREGULARES: TCNICA EN TUBO
DETECCION DE ANTICUERPOS IRREGULARES EN PAPAINA
DETECCIN DE ANTICUERPOS EN MEDIO LISS
DETECCIN DE ANTICUERPOS IRREGULARES: TCNICA EN COLUMNA
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
COMPORTAMIENTO SEROLOGICO DE LOS PRINCIPALES ANTICUERPOS IRREGULARES
CALCULO DE PROBABILIDAD:
TECNICA DE IDENTIFICACION DE AC. EN BROMELINA
TITULACION DE ANTICUERPOS
PRUEBA CRUZADA O CROSMATCH
ESTANDARIZACION DEL MEDIO DE BAJA FUERZA IONICA (LISS)
PREPARACION Y ESTANDARIZACION DE SOLUCIONES
USO DE DTT PARA DIFERENCIAR ANTICUERPOS IGM DE IGG
TRATAMIENTO DE ERITROCITOS CON DTT
ABSORCION DE ANTICUERPOS
ELUCION DE ANTICUERPOS
ESTUDIO RH EN CELULAS CON TAD POSITIVO
AUTOADSORCION DE ANTICUERPOS CALIENTES (ZZAP)
ADSORCION DIFERENCIAL EN CALIENTE USANDO ZZAP
DETERMINACION DE ESPECIFICIDAD DE AUTO ANTICUERPOS FRIOS
DEMOSTRACION DE AUTOAGLUTININAS FRIAS (CRIOAGLUTININAS) DE ALTO TITULO
ESTUDIO DE CALIDAD DE UN SUERO ANTIGLOBULINA HUMANA
I.-ESPECIFICIDAD:
II.-EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD ANTICOMPLEMENTO
III.- POTENCIA Y SENSIBILIDAD DEL SUERO AGH:
CARACTERISTICAS GENERALES DE METODOS USADOS EN INMUNOHEMATOLOGIA
ERITROCITOS CONGELADOS PARA FINES DE LABORATORIO
ESTUDIO INMUNOHEMATOLGICO DE UNA MUESTRA
SANGRE Y COMPONENTES SANGUINEOS
PREPARACION Y CONSERVACION DE COMPONENTES SANGUINEOS
CONTENIDO DE LAS SOLUCIONES PRESERVADORAS (g/L)
CAMBIOS BIOQUIMICOS DE SANGRE CONSERVADA CON CPD Y CPDA-1
PREPARACION DE COMPONENTES SANGUINEOS POR CENTRIFUGACIN.
CARACTERISTICAS DE LOS PRINCIPALES COMPONENTES SANGUINEOS
CONTENIDO APROXIMADO DE LEUCOCITOS EN LOS COMPONENTES SANGUINEOS
REDUCCION DE LEUCOCITOS EN LOS COMPONENTES SANGUINEOS:
DATOS BIOLOGICOS DE ALGUNOS FACTORES DE COAGULACION
EFECTOS ADVERSOS DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
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74
75
75
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123
123
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A.- REACCIONES TRANSFUNSIONALES INMEDIATAS

B.- REACCIONES TRANSFUSIONALES RETARDADAS
CUADRO RESUMEN DE LOS EFECTOS ADVERSOS DE LA TRANSFUSIN SANGUNEA
INVESTIGACION DE UNA REACCION TRANSFUSIONAL
ENFERMEDADES DE TRANSMISION SANGUINEA
TESTS SEROLOGICOS EN EL DIAGNOSTICO DE HEPATITIS VIRAL
CAUSAS POSIBLES DE RESULTADOS FALSOS EN TEST ELISA
EVALUACION DE PROCEDIMIENTOS DE TAMIZAJE O SCREENING
BIBLIOGRAFIA
131
135
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142
142
143
145
UNIDAD
DONACIN DE SANGRE
___________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL
SELECCION DE UN DONANTE DE SANGRE
1.- INTRODUCCION:
La seguridad de la transfusin de sangre o de sus componentes comienza con la
apropiada seleccin del donante. Para lograr este objetivo se dispone de una Ficha de
Donante y un Cuestionario para aplicar durante la entrevista a los posibles donantes, con
la que pretendemos lograr una correcta seleccin de ellos, apoyndose adems con
folletos informativos (Ver anexos al trmino de la unidad) acerca de las enfermedades
que se transmiten por la sangre y de la seguridad de la extraccin sangunea. Es
necesario enfatizar tambin la necesidad de ofrecer al donante un proceso seguro y
controlado.
El proceso de atencin de donantes de sangre consta de las siguientes etapas:
a.- Recepcin, identificacin y codificacin del donante: La recepcin debe ser clida.
Solicite la informacin necesaria para identificar con seguridad al donante y carnet de
identidad o documento con RUT y foto, llenando con el mximo de precisin todos los
datos que aparecen en la Ficha de Donante de Sangre, e ingresndolos al sistema
informtico. El sistema asignar un nmero nico de donacin y emitir etiquetas con
cdigo de barras, que debern adherirse a los registros, bolsas y tubos.
b.- Verificacin del estado general del donante: Incluye peso, pulso, presin arterial,
hemoglobina y aspecto general del donante, informacin que tambin debe registrar en
la Ficha de Donante de Sangre.
c.- Entrevista y aplicacin del cuestionario:comprende una serie de preguntas especficas
que tienen por objeto recoger una clara informacin para que determine si el donante
cumple o no con los requisitos exigidos para donar. La duracin de este procedimiento
es de 8 a 10 minutos.
d.- Compromiso del donante: Todo donante debe firmar el Consentimiento Informado
contenido en la Ficha de Donante de Sangre, declarando entender las preguntas
formuladas, que la informacin entregada es verdadera yque autoriza el procedimiento.
e.- Agradecimiento por la donacin e invitacin a ser donante voluntario: Usted debe
incentivar la donacin voluntaria y pedir el consentimiento para ser invitado a donar
sangre en el futuro como donante voluntario.
f.- Prevencin y control de reacciones adversas a la donacin: Debe estar atento a
cualquier reaccin que presente el donante durante o despus de la donacin,
anotando signos, sntomas, incidentes de la venopuncin, momento de la ocurrencia y
otras caractersticas; tambin debe registrar el manejo y la evolucin, y registrarlo en la
Ficha de Donante.
g.- Identificacin del profesional que selecciona y del flebotomista: El responsable de la
entrevista (usted) debe anotar su nombre en el lugar correspondiente de la Ficha de
Donante y del Cuestionario. El tcnico paramdico que realiza la extraccin de sangre
tambin debe firmar.
2.- EL LLENADO DE LA FICHA DE DONANTE Y EL CUESTIONARIO:

a.- Quien: El Tecnlogo Mdico responsable de la seccin.
b.- Como: Preguntando al donante uno a uno los aspectos que contiene la "Ficha de
Donante de Sangre" y el Cuestionario, recogiendo la informacin pertinente, teniendo
presente la importancia de explicar en trminos simples cada punto y de ganar la
confianza del donante para lograr respuestas verdaderas. La entrevista que se realiza
para llenar el cuestionario debe ser confidencial.
c.-Cuando: Una vez que el posible donante ha ledo la informacin acerca de las
infecciones de transmisin sangunea, tendientes a lograr la autoexclusin y se ha
interiorizado sobre el procedimiento de la extraccin (Revisar folletos relativos al tema).
3.- SELECCION DEL DONANTE:

a.- Se entrevistar al donante de sangre, utilizando un cuestionario basado en las normas de
seleccin establecidas en el pas.
b.- Se evaluar la informacin recogida, determinando la aceptacin o exclusin del posible
donante.
c.- En caso de exclusin se explicar al donante en la forma ms clara y completa posible, si
la causa es definitiva o transitoria, se dar las recomendaciones pertinentes, verificando
que el donante ha comprendido la situacin, y se registrar la causa en la ficha del
donante, utilizando el cdigo respectivo.
d.- Si no hay motivos de exclusin, se someter al donante a un examen fsico dirigido la
toma de signos vitales y a revisar especialmente las zonas de puncin. La piel de la zona
de venopuncin en ambos brazos no debe presentar lesiones o signos que indiquen que
es adicto a drogas endovenosas. Lesiones poco importantes de la zona, como dermatitis
y sarna sern causa de exclusin temporal.
4.- CONDICIONES DE LA ENTREVISTA DEL DONANTE DE SANGRE

La entrevista se diferencia de la conversacin corriente en que est dirigida y orientada
hacia un propsito, y tiene una duracin definida (aproximadamente 12 minutos). El
propsito de la entrevista que se realiza al donante de sangre es obtener informacin
fidedigna, lo que requiere un constante entrenamiento ya que la automatizacin de esta
funcin lo puede llevar a cometer errores.
Dos son los ingredientes de una entrevista bien hecha: EL CONTENIDO y LA
DIRECCION. El contenido se refiere a los temas a tratar en la entrevista, y la direccin
corresponde a la forma en que el entrevistador presenta el contenido.
5.- PRINCIPIOS DE UNA ENTREVISTA:

1) Iniciar -CEOR: Cllese, escuche, observe, registre.
En general a las personas les resulta interesante hablar de s mismos, por lo tanto al
aplicar este principio se consigue ms informacin.
Este principio permite que el donante le hable, se explaye. Es importante observar su
comunicacin no verbal (gestos, posiciones, miradas, movimientos). Escuchar
activamente le permitir captar el mensaje, detectar incongruencias o nerviosismo,
que pueden ser una pista para obtener mayor informacin.
Puede obtener informacin a nivel consciente o subconsciente; esta ltima se conoce
con el nombre de tincadas, corazonada, palpito, etc. Debe sondear y luego adquirir
ms informacin, contrastar para as decidir si solo es una idea o realmente es un
antecedente de importancia.
Debe hacer hablar al entrevistado por medio de preguntas abiertas.
2)Mantener el control de la entrevista:
Con una actitud serena, objetiva, clara, conociendo la estructura de la entrevista, no
hay posibilidad de que el entrevistado maneje la situacin.
Frente a un donante agresivo, prepotente, seductor, coqueto, amistoso, lloroso,
angustiado, etc. lo importante es que el entrevistador (usted) no se involucre; hay que
observar su actuacin, ya que todas estas manifestaciones son en su mayora
mecanismos de defensa. Un donante agresivo, prepotente o expansivo es ms fcil
de conocer y de obtener informacin, ya que basta con dejarlo hablar. Por el
contrario, si el donante es evasivo debe confrontarlo ya sea en forma directa o
indirecta (ingenuamente). Frente a un donante alterado emocionalmente, debe darle
tiempo a que se tranquilice pero no involucrarse en su emocin.
3)Escuchar activo:
Significa leer las caractersticas del donante y concentrarse en el foco externo,
observando cuidadosamente su conducta no verbal. Recordar los temas a tratar y as
organizar el orden de la entrevista.
4)Tolerancia:
Es la aceptacin de lo que sea dentro del mbito de la entrevista. No corresponde
que evale moralmente al donante, ya que el propsito de la entrevista es aceptarlo
o excluirlo como donante de sangre. Por consiguiente sus valores y creencias son
irrelevantes en este caso. En esta situacin su autocontrol es importante para no
evidenciar la valoracin positiva o negativa que pueda tener de una respuesta que el
donante le entregue. La prctica de la empata incrementa la tolerancia.
5)Cuidar la comunicacin no verbal:
Es importante vigilar su propia conducta. Durante la entrevista es fundamental
observar la conducta del entrevistado, por lo tanto es importante no coartarla con
comentarios, gestos o expresiones. No conviene decir que bueno, que bien, etc.
Los comentarios positivos hacen que el donante abunde sobre el tema,
sobredimensionando la situacin. Por el contrario los comentarios negativos tienen el
efecto inverso, reduce el tema, le resta importancia, lo minimiza. Sus gestos pueden
modificar la conducta del donante, ya sea incrementndola o cohibindola.
6)Uso del silencio:

Es fundamental para escuchar. Debe hacer un contacto visual laxo, permanecer en
silencio con semi sonrisa, ladear ligeramente la cabeza para intensificar el efecto ya
que es una invitacin a hablar. Si el donante deja de hablar, debe mantener la
posicin de silencio, no interrumpir. Esto hace que el donante se incomode, sube su
ansiedad, y trata de romper el silencio, por lo tanto hablar y entregar informacin.
Los silencios del donante frente a una pregunta por ejemplo de su vida sexual, puede
significar que l est evaluando su respuesta. Es importante estar alerta a los silencios
del donante y debe volver a sondear, preguntar y confrontar. Es importante que
recuerde, el silencio del donante de sangre no significa necesariamente que termin
de hablar, sobre todo si la informacin que le entreg le merece duda, sino que est
organizando el pensamiento.
7)Facilitacin:
Si realiza pequeas intervenciones pueden animar al donante para que hable o
ample un tema en particular. Por ejemplo: Verbal: S, ya, ya veo, hum, aj. Preguntas
cortas: Cmo as? Ud. mencion. Repetir la ltima frase que dijo el donante (con el
fin de que contine el relato), resumir en una frase lo que dijo (tcnica del reflejo
sirve para que ample el tema). No verbal: cabeza, sonrisa, levantar cejas, levantar
hombros.
Cuide especialmente las facilitaciones no verbales, debe administrarlas en momentos
muy precisos ya que pueden llevar implcitamente a una valoracin del tema que
puede inhibir o ampliar la respuesta del donante, recogiendo errores en la respuesta;
es recomendable que no las utilice. Recuerde que durante la entrevista debe
mantener una expresin neutra que no induzca la respuesta del donante. En resumen
debe facilitar que el donante hable pero mantener una expresin neutra.
8) Confrontacin y contrastacin:
Contrastar durante toda la entrevista las inconsistencias y dudas que le merecen las
respuestas del donante, para confrontrselas al final y as obtener respuestas ms
fidedignas. La contrastacin es un ejercicio que debe realizar en forma ntima,
sealando con asteriscos o marcas aquellos aspectos que ameritan ser confrontados.
Es necesario confrontar hasta quedar tranquilo, pero cuidando que no sea molesto o
amenazante para el donante porque entonces l puede entregar una respuesta de
compromiso social. Es recomendable usar la tcnica del ingenuo.
9) Desanimar la comunicacin improcedente:
Cuando el donante le entregue informacin improcedente, tratar de discriminar si es o
no irrelevante porque puede estar entregando informacin indirecta.
Cuando el donante se emociona, desve su atencin empleando preguntas directas a
un tema especfico o confrontndolo. No use el silencio o la facilitacin.
10) Atmsfera adecuada:
Es conveniente ser cordial, clido al inicio y al final de la entrevista. Consolar o
reconfortar si el donante se emociona pero con lmites, no involucrarse. Es importante
dar tambin la posibilidad de que el donante le pregunte. La calidez da seguridad y
con la confianza el sujeto se abre por lo tanto entrega la informacin deseada.
10
6.- CRITERIOS DE SELECCIN

(Basados en la Norma General Tcnica N 0146 2013: Norma que regula el procedimiento
de atencin de donantes de sangre (en sitio fijo o mvil).
1.- EDAD: - entre 18 y 60 aos.
Los donantes regulares que han donado una vez al ao en los ltimos 5 aos se
pueden aceptar hasta los 65 aos, si cumplen con los requisitos de la entrevista y
exmenes pre donacin.
2.- FRECUENCIA DE DONACIN: debe existir un intervalo mnimo entre donaciones de
sangre de 3 meses en los hombres y 4 meses en las mujeres.
3.- PESO: Mnimo 50 kilos. ESTATURA: Verificar que est relacionada con el peso.
Los donantes que pesan 50 Kgs. o ms, pueden donar un mximo de 450 ml +/- 10% de
sangre, es importante que las muestras para la calificacin biolgica de la donacin,
no excedan los 30 ml. La obtencin de ms del 13% de la volemia en un donante de
50 Kgs. puede significar una mayor frecuencia de reacciones adversas en el donante.
El volumen debe ser controlado para asegurar que los componentes sanguneos
obtenidos cumplan con las especificaciones establecidas.
4.- ALIMENTACIN: los donantes que han comido en los horarios habituales, considerando
cuatro ingestas alimentarias por da, pueden donar. Si un donante se ha saltado una
comida se le debe dar a beber algo de lquido antes de la extraccin. Se recomienda
la ingestin de 500 mL de agua antes de la donacin, ya que reduce
significativamente la incidencia de reacciones adversas.
5.- PRESION ARTERIAL: (Tomada en reposo)
- Sistlica: menor a 180 mmHg
- Diastlica: menor a 100 mmHg
6.- PULSO:
lo menos.
Entre 60 y 100 pulsaciones por minuto, regular y palpado por 30 segundos a
7.- HEMOGLOBINA:sobre 13,5 grs/dL en hombres

sobre 12,5 grs/dL en mujeres
8.- MICROHEMATOCRITO: 40% en hombres; 38% en mujeres
7.- REGISTROS EN LA FICHA DE DONANTE Y APLICACION DEL CUESTIONARIO AL POSIBLE DONANTE

DE SANGRE:
Los formularios que se utilicen para seleccionar al posible donante deben estar en
conformidad con las normas del Ministerio de Salud; revisados y actualizados
peridicamente, y se deben aplicar a todo donante de sangre.
A continuacin, usted podr analizar las diferentes partes de un modelo de ficha de
donante y de un cuestionario:
Ficha de donante de sangre
Identificacin del donante
11
Examen fsico
Consentimiento informado
Firma del profesional y del donante
Antecedentes de la extraccin
Caractersticas de la bolsa
Incidentes de la venopuncin
Identificacin del tcnico paramdico
Reacciones adversas
Tipo de donante
Lugar de colecta
Cuestionario
Preguntas
Responsabilidad del donante sobre veracidad de las respuestas
Aprobacin exclusin
ALGUNAS PREGUNTAS A REALIZAR DURANTE LA ENTREVISTA AL DONANTE
HA LEDO Y COMPRENDIDOEL INFORMATIVO?

Dirigida a saber si recibi, ley y comprendi los folletos explicativos que contienen los
requisitos generales establecidos para donar sangre,para protegerlo como donante y
para proteger al paciente/ receptor de ella.
DURMI MNIMO 5 HORAS?

NO:
debe diferirse temporalmente al donante hasta que haya dormido esta
cantidad de horas.
HA BEBIDO ALCOHOL EN LAS LTIMAS 24 HORAS?

Donantes bajo la influencia del alcohol, deben excluirse transitoriamente hasta cumplir 24
horas sin ingesta de alcohol, debido a que generalmente no es posible obtener
antecedentes clnicos fidedignos, la donacin adems puede ser daina para el propio
donante. El donante no debe tener sntomas o signos de intoxicacin por alcohol o
drogas.
Preguntar sobre antecedentes de alcoholismo crnico, dao heptico crnico,
hemorragias digestivas etc. Si existen estos antecedentes, excluir en forma definitiva al
donante.
Una pequea cantidad de alcohol ingerida recientemente, en especial durante las
comidas, no es causa de rechazo ya que en ese caso no existe riesgo para donante ni
receptor.
HA DONADO SANGRE ANTES?

Dirigida a tener antecedentes sobre el lugar y fecha de donaciones previas, con el
objeto de proteger tanto al donante como al receptor.
SI:
NO:
12
Se acepta solo si su donacin fue hace ms de 3 meses.

Se acepta.
SE HA SENTIDO MAL DURANTE O DESPUS DE DONAR SANGRE?:
Dirigida a detectar alteraciones o problemas en donaciones previas. Debe quedar

registrada la caracterstica de la reaccin adversa a la donacin.
SI:
No debe donar si tiene historia de un desmayo severo o 2 desmayos consecutivos.
A CRITERIO:
si se decide aceptar, se requiere una observacin cuidadosa.
NO:
Se acepta como donante.
INFORMACION ADICIONAL:
Una historia de predisposicin a desmayos aumenta las posibilidades de una reaccin
adversa a la donacin Debe excluirse a las personas que en donaciones anteriores,
tuvieron un desmayo severo o en donaciones sucesivas tuvieron desmayos.
HA SIDO RECHAZADO ALGUNA VEZ COMO DONANTE DE SANGRE? POR QU?

Dirigida a conocer alguna causa temporal o definitiva que lo inhabilite como donante.
Enfatizar acerca del conocimiento de resultados alterados de exmenes realizados a su
sangre. Excluir todo donante con antecedentes de exmenes positivos para: Hepatitis,
Chagas, Sida, HTLV-I. En caso de Sfilis depender si hubo tratamiento, aceptndolo si
existi y fue dado de alta hace un ao por lo menos.
Evaluar si el rechazo anterior fue por una causa definitiva o transitoria, en este ltimo caso,
el donante se acepta si el plazo determinado se ha cumplido.
SI:
NO:
Preguntar la causa y verificar si es causal o no de rechazo.

HA TOMADO ASPIRINA O ANTINFLAMATORIOS EN LOS LTIMOS 3 DAS?

La sangre de donantes que hayan ingeridoaspirina o piroxicam los ltimos 3 das o ha
recibido otro AINES en las ltimas 48 horas previas a la donacin, no debe ser utilizada
para preparar concentrados plaquetarios. La aspirina y productos que la contienen (Ewin,
Mejoral, Gluspirin, Cafiaspirina, Cardioaspirina, etc.), inhiben la actividad plaquetaria
durante 1 a 5 das.
SI: Se acepta como donante, rotulando la bolsa "NO PREPARAR PLAQUETAS".
NO:
EN LAS LTIMAS DOS SEMANAS HA TENIDO FIEBRE, RESFRO, VMITOS O DIARREA?

La diarrea es a menudo, un signo de infeccin del aparato digestivo, especialmente de
su segmento intestinal. En este caso puede ser motivado por bacterias, virus, parsitos,
hongos. Estas infecciones pueden traspasar la barrera intestinal y pasar a la sangre
constituyendo "bacteremias" o "viremias". Al momento de la entrevista, al no poder hacer
diagnstico diferencial con aquellas infecciones que no traspasan la barrera intestinal, ni
tampoco con diarreas de causa no infecciosa (como la secundaria a colon irritable), se
debe excluir como donante.
NO:
SI:
Se excluye en forma transitoria hasta que cumpla 1 semanadesde el ltimo
episodio. Sugerirle que consulte un mdico
EN LAS LTIMAS 8 SEMANAS, LE HAN PUESTO ALGUNA VACUNA O INYECCIN?

NO:Se acepta como donante.
SI:
Analizar si es o no causal de rechazo, en caso positivo, explicarle si es definitivo o
transitorio.
13
OBLIGATORIO: no debe donar si han transcurrido menos de 8 semanas de la vacunacin

con microorganismos vivos:
Fiebre amarilla
Parotiditis
Polio oral
Rubeola
Sarampin
Tifoidea oral
A CRITERO: aceptar si la vacunacin se realiza con microorganismos no vivos:

ntrax
Botulismo
Clera
Difteria
Haemophilus influenzae
Influenza
Meningococo
Neumococo
Polio inyectable
Tifoidea inyectable
Coqueluche
CASOS ESPECIALES: consultar NGT 146 para mayores detalles:
Rabia:
si se administr despus de una mordedura animal, no debe donar hasta 12
meses despus de la exposicin.
Ttanos: no debe donar si han transcurrido menos de 4 semanas de la exposicin.
BCG:
no debe donar si el sitio de inoculacin no ha sanado o si han pasado menos de
8 semanas desde la inoculacin.
Viruela: no debe donar si el sitio de inculacin o cualquier sitio de infeccin secundaria
no han sanado completamente, o han transcurrido menos de 8 semanas desde la
inculacin o aparicin de un sitio de infeccin secundario. La vacunacin contra viruela
es con virus vivo, por lo que si no ha sanado completamente existe riesgo de tranmitir el
virus u otra infeccin.
Hepatitis A:no debe donar si han pasado menos de 6 semanas desde la vacunacin o la
admistracin de inmunoglubulina intramuscular.
Hepatitis B: no debe donar si han pasado menos de 12 meses desde la vacunacin.
ltima dosis en el caso de exposicion a riesgo y 7 das si es vacunacin preventiva
INFORMACIN ADICIONAL: las vacunas que utilizan virus o bacterias vivos atenuados
estimulan el sistema inmune, pero normalmente no causan una enfermedad severa. Sin
embargo pueden hacerlo en personas inmunodeprimidas. Al diferir por 8 semanas la
donacin, se evita la transmisin causada por la vacuna, pues esta ya estara controlada.
EN LOS LTIMOS12 MESES HA SIDO OPERADO U HOSPITALIZADO?

DEFINICIN: Ciruga mayor: todo procedimiento quirrgico que requiere una
estada hospitalaria de ms de 5 das.
OBLIGATORIO: no debe donar si
14
La ciruga se debi a un cncer

No han sanado todas las heridas
Hay cualquier infeccin
No se ha restablecido la movilidad normal
Han transcurrido menos de 12 meses de una ciruga mayor
Han transcurrido menos de 7 das de cualquier otra ciruga
Si requiere tratamiento post operatorio o atencin hospitalaria regular
NO:
Acepte al donante
EN LOS LTIMOS 12 MESES SE HA REALIZADO ENDOSCOPIA?

El antecedente de endoscopa, est destinado a detectar donantes en riesgo de
infeccin por hepatitis B o similares, con el uso de endoscopio flexible.
NO:
SI:
SI:
Se acepta como donante

Evaluar segn norma
SE HA REALIZADO EXAMEN DE SANGRE U OTRO TIPO DE EXAMEN?

OBLIGATORIO: no debe donar si:
Est en espera de exmenes o de resultados para una condicin no diagnosticada an y
que podra significar el rechazo de la donacin.
EN LOS LTIMOS 6 MESES HA RECIBIDO ALGN TRATAMIENTO MDICO?
HA TOMADO ALGN MEDICAMENTO EN EL LTIMO TIEMPO? CUL?
En general los medicamentos que toma un donante no son perjudiciales para el receptor.
Pueden ser aceptados como donantes la mayora de las personas que toman
medicamentos, incluso los que lo hacen por indicacin mdica.
Normalmente el rechazo debido a la ingesta de algn medicamento no se debe a las
propiedades de este sino a las caractersticas de la enfermedad que justifica su
administracin. Debe quedar registrado el medicamento que tom el donante y cuando.
NO:
Preguntar cual y en que dosis.Consultar NGT 0146.
No son causa de exclusin:
Anticonceptivos orales, analgsicos comunes, vitaminas, sustitutos hormonales y pastillas
para adelgazar.
La aspirina y productos que la contengan (Ewin, Mejoral, Gluspirin, Cardioaspirina etc.),
inhiben la actividad plaquetaria durante 1 a 5 das. La sangre de donantes que estn
ingiriendo estosmedicamentos hasta3 das antes de la donacin, no debe ser utilizada
para preparar concentrados plaquetarios. Lo mismo se aplica para aquellos que tomaron
Piroxicam.
Se excluyen personas con antecedentes de ingestin reciente (1 semana atrs) o actual
de los siguientes medicamentos:
Antibiticos
Antihistamnicos
Corticoides
Neurolpticos (Antipsicticos y tranquilizantes mayores)
Antiepilpticos - anticonvulsivantes.
VER LISTADO DE MEDICAMENTOS
15
EN LOS LTIMOS 12 MESES HA IDO AL MDICO, MATRONA, DENTISTA U OTRO PROFESIONAL

DE SALUD?
HA TENIDO CNCER ALGUNA VEZ?
TIENE O HA TENIDO ALGUNA ENFERMEDAD AL CORAZN, PULMN, RION, TIROIDE O
TIENE HIPERTENSIN, DIABETES, ALERGIA, TENDENCIA A SANGRAR U OTRA?
Preguntas dirigidas a detectar patologas que lo inhabiliten como donante.

a) Enfermedades Cardiovasculares: Se excluyen: Cardiopatas con insuficiencia cardaca,
Enfermedad reumtica en tratamiento y Enfermedad coronaria (angina, infarto), por la
posibilidad de una nueva crisis.
b) Diabetes: Se excluye quienes estn bajo tratamiento con medicamentos
normoglicemiantes, insulinodependientes. Se aceptan los que controlan su diabetes slo
con rgimen.
c) Hipertensin: Se excluye aquellos que estn en tratamiento. En caso de detectar valores
de presin fuera de los rangos establecidos, se debe esperar 15 minutos y volver a tomar
la presin con el donante acostado.
d) Enfermedades Gastrointestinales: Se excluye las diarreas agudas o crnicas reactivadas.
Se aceptan donantes con antecedentes de lcera pptica asintomticos y sin
tratamientos. Otras patologas como plipos rectales o hemorroides, pueden ser
aceptados como donantes si en el momento del interrogatorio estn asintomticos y sin
tratamiento mdico.
e) Enfermedades Respiratorias: Se excluye las enfermedades broncopulmonares activas,
Tuberculosis activa. Cuadros respiratorios agudos se excluyen hasta su curacin. Se
acepta a las personas que han padecido tuberculosis y que despus de 1 ao de haber
cumplido el tratamiento y dado de alta. Resfros activos se excluyen transitoriamente.
f) Cncer: Se excluye. Se aceptar solo con autorizacin mdica, despus de 5 aos sin
tratamiento.
g) Enfermedades Hematolgicas: Se excluye si ha presentado anemia crnica o
enfermedades oncohematolgicas como Linfomas, Leucemia, etc.
h) Enfermedades Inmunolgicas no alrgicas: Se excluye en forma definitiva a quienes
presenten enfermedades tales como: Lupus Eritematoso Sistmico, Artritis Reumatoidea,
Enfermedad Mixta del Tejido Conectivo, Esclerodermia.
i) Enfermedades Endocrinolgicas: Se excluye en forma definitiva como donante a las
personas que sufran endocrinopatas activas y las que han recibido hormona del
crecimiento de origen humano.
j) Enfermedades Hepticas: Hepatitis ver pregunta N 15. Se excluye en forma definitiva a
quienes sufran Hepatopatas (cirrosis heptica).
k) Malaria: Se excluye por un perodo de 3 aos a quienes hayan sufrido de Malaria, tomado
drogas antimalricas, o quienes han vivido en pases endmicos.
l) Piel: Se excluye a quienes presenten lesiones en la piel especialmente en las reas de
puncin venosa o vecinas. Lesiones poco importantes como dermatitis y sarna sern
causa de rechazo temporal.
m) EnfermedadesRenales: Se excluye personas con enfermedades crnicas. Se excluyen por
2 meses las pielonefritis aguda. No se excluye personas con antecedentes de clculos
renales (Litiasis).
n) Retraso mental:Seexcluye en forma definitiva por no tener discriminacin y por pertenecer
a grupo de riesgo de enfermedades de transmisin sexual.
16
o) Sfilis y Gonorrea: Se excluye por un perodo de 12 meses, ya que pudieran asociarse con
transmisin de VIH.
p) Sangramientos importantes: Consultar causa, frecuencia y temporalidad. Se excluye si es
frecuente, importante y activo.
q) Enfermedades crnicas: Dirigida a detectar patologas que lo inhabiliten como donante.
En caso de exclusin permanente, explicarle que nunca debe donar sangre y por qu.
r) Prdida inexplicable de peso: El peso es el parmetro biomdico de gran importancia. En
el adulto tiende a mantenerse estable en el tiempo. La ganancia de peso por sobre los
valores normales para estatura y sexo se definen como obesidad.
La prdida injustificada de peso (4 - 5 Kg. y ms en los ltimos meses sin causa aparente)
puede constituir un elemento de juicio mdico indicador de enfermedad crnica como:
cncer, SIDA, TBC, hipertiroidismo, anorexia psicgena, etc. Por lo tanto, constituye
motivo de rechazo como donante de sangre. Hace excepcin la baja de peso motivada
por rgimen, asistida por mdico.
EN LOS LTIMOS 12 MESES LE HAN PUESTO SANGRE A USTED O A SUPAREJA SEXUAL?

NO:
Acepte al donante.
SI:
Se excluye hasta cumplir 12 meses desde el momento de la transfusin. Consultar
la causa de la transfusin y registrarla en el cuestionario.
PARA SER RESPONDIDO SOLO POR MUJERES:EN LOS LTIMOS 6 MESES HA TENIDO
EMBARAZO, PARTO O ABORTO?
INFORMACIN ADICIONAL: durante el embarazo, especialmente en los ltimos meses,
una cantidad importante de fierro es transferida de la madre al feto. Es importante dar
tiempo para que este fierro perdido sea reemplazado a travs de la dieta.
OBLIGATORIO: no debe donar si:
Hay embarazo actual
Se trat de embarazo molar invasivo
Se trat de embarazo molar no invasivo que est bajo tratamiento y estudio.
SI:
Diferir por un periodo de seis meses post parto con o sin lactancia.
TIENE ANTECEDENTES DE EPILEPSIA, CONVULSIONES O DESMAYOS?
Dirigido a detectar personas que hayan sufrido desmayos frente a estmulos banales
(stress, extraccin de sangre, etc.), durante su vida adulta, o que estn en tratamiento
por epilepsia.
NO:
Acepte al donante.
SI:Se excluye si ha presentado desmayos frente a estmulos banales (stress, extraccin de
sangre, etc.) y si est en tratamiento por epilepsia.
Se acepta si ha cumplido 3 aos sin crisis y sin tratamiento para la epilepsia.
TIENE O HA TENIDO HEPATITIS DESPUS DE LOS 12 AOS?

Dirigida a detectar antecedentes de hepatitis viral. Es necesario en algunos casos explicar
el trmino hepatitis en base a "ponerse amarillo".
NO:
Se acepta al donante.
SI:Se excluye. Debe instrursele en que nunca puede ser un donante de sangre. Solo se
acepta un donante que refiere ictericia de causa obstructiva comprobada. Si
17
documenta una hepatitis de tipo A, puede ser aceptado como donante, si han pasado
ms de 12 meses de su recuperacin.
HA RECIBIDO TRATAMIENTO CON HORMONA DE CRECIMIENTO ANTES DE 1985?

No debe donar si ha recibido gonadotrofinahipofisaria u hormona de crecimiento de
origen humano.
HA VIVIDO EN INGLATERRA ENTRE LOS AOS 1980 Y 1996 O HA RECIBIDO ALL

TRANSFUSIN DE ALGN COMPONENTE SANGUNEO?
TIENE HISTORIA FAMILIAR DE LA ENFERMEDAD DE CREUTZFELDT JAKOB?

Estas preguntas estn enfocadas a prevenir la transmisin de la enfermedad de
Creutzfeldt-Jakob, una alteracin rara, degenerativa y fatal del sistema nervioso. No se ha
demostrado an la transmisin de la enfermedad por la transfusin sangunea, sin
embargo, no hay test para detectar la enfermedad, por lo tanto, se recomienda que no
donen sangre aquellas personas que han recibido hormona del crecimiento de origen
humano, Hormona Pituitaria de origen humano o injertos de duramadre o quienes tienen
algn familiar que padezca de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob.
NO:
SI:
Se excluye en forma definitiva si la hormona recibida es de origen humano o
con historial familiar de la Enfermedad de Creutzfeldt-Jakob.
USTED O SU FAMILIA TIENE(N) ENFERMEDAD DE CHAGAS O HA(N) SIDO PICADO POR UNA
VINCHUCA?
Destinado a pesquisar donantes portadores del agente causal de la enfermedad de
Chagas.
NO: Se acepta como donante
SI:Excluirlo en forma definitiva
HA VIAJADO FUERA DE CHILE EN LOS LTIMOS 3 AOS?
HA TENIDO MALARIA, DENGUE O FIEBRE INEXPLICABLE DURANTE O DESPUS DE UN VIAJE

FUERA DE CHILE?
Estas preguntas estn enfocadas a prevenir la transmisin de enfermedades parasitarias y
otras tales como la Malaria, Babeiosis, y otras infecciones como el Dengue. Las personas
deben detallar su estada en las zonas endmicas para ser diferidas temporal o
definitivamente. La Historia de Babesiosis, Dengue es causal de exclusin definitiva.
NO:
SI:

Se evala la condicin de diferido o excluido.
Para la malaria, se recomienda que aquellos que la han tenido, deben ser diferidos por
tres aosdesde que se vuelven asintomticos, diferir por un ao a aquellos que han
estado en alguna zona endmica para malaria (ver anexo zonas endmicas), y diferir por
tres aos a aquellos que han vivido en una zona endmica. Exposicin al riesgo con o sin
profilaxis, excluir por 3 aos.
18
EN LOS LTIMOS 12 MESES, UD. O SU PAREJA SE HAN REALIZADO ALGN TATUAJE,

PIERCING, ACUPUNTURA, O HA SUFRIDO ALGN PINCHAZO ACCIDENTAL CON AGUJA O
JERINGA CON SANGRE?
Dirigida tambin a la identificacin de personas que pueden estar en fase de incubacin
de VIH, hepatitis u otra infeccin de transmisin sangunea.
Personal de salud no se considera grupo de riesgo, a menos que haya sufrido accidentes
corto-punzantes con material presuntamente contaminado, en los ltimos 12 meses, en
cuyo caso debe excluirse por igual periodo.
NO: Se acepta al donante.
Si:
Tatuajes: se excluye por un periodo de 12 meses
Acupuntura y perforacin auricular: se excluye por un periodo de 12 meses
NOTA: preguntar por tratamientos inyectables con material no desechable, ya que sera
causal de exclusin.
HA COMPARTIDO AGUJA O JERINGA CON OTRA PERSONA?

HA PROBADO ALGN TIPO DE DROGA COMO MARIHUANA, COCANA, PASTA BASE U
OTRA?
SE HA INYECADO DROGAS ILEGALES NO INDICADAS POR UN MDICO?
HA TENIDO RELACIONES SEXUALES CON ALGUIEN QUE ALGUNA VEZ SE HAYA INYECTADO
DROGAS?
Dirigido a detectar personas que estn en riesgo de infeccin por VIH y otras
enfermedades infecciosas que podran ser transmitidas al receptor de productos
sanguneos. Averiguar el tipo de droga, el perodo en que se consumi, excluir en forma
permanente si es drogadicto crnico, drogadicto endovenoso, o si ha tenido conductas
de riesgo en los ltimos 12 meses, producto de su drogadiccin.
ADICCIN Y ABUSO DE DROGAS:
INFORMACIN ADICIONAL: la inyeccin de drogas ha sido vinculada con la transmisin
de muchas infecciones, incluyendo la Hepatitis B y el VIH. Puede que pasen muchos aos
antes de la aparicin de la infeccin y muchos consumidores de drogas no tienen
conciencia que pueden ser transmisores de infeccin aos despus de la ltima vez que
consumieron drogas
OBLIGATORIO: Rechazar si:
ha usado drogas endovenosas ilegales no prescritas por un mdico: rechazo permanente.
HA ESTADO PRIVADO DE LIBERTAD EN LOS LTIMOS 12 MESES?
Los individuos que han estado en una institucin correccional (crcel o prisin), por ms
de 72 hrs. consecutivas, se excluyen como donantes por 12 meses desde la fecha de
ltima detencin, por riesgo de conducta sexual y/o drogas.
NO:
SI:

Se excluye por un periodo de 12 meses.
HA TENIDO ENFERMEDAD DE TRANSMISIN SEXUAL COMO SFILIS, GONORREA U OTRA?

HA TENIDO RELACIONES SEXUALES CON UNA PAREJA NUEVA EN LOS LTIMOS 12 MESES?
HA TENIDO RELACIONES SEXUALES CON MS DE UNA PERSONA EN LOS LTIMOS 12 MESES?
HA PAGADO O RECIBIDO DINERO, DROGA U OTRO, POR TENER RELACIONES SEXUALES EN
LOS LTIMOS 12 MESES?
CREE HABER TENIDO ALGUNA VEZ RIESGO DE INFECTARSE CON VIH?
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Preguntas dirigidas a detectar personas que estn en riesgo de infeccin por VIH y otras
enfermedades infecciosas que podran ser transmitidas al receptor de productos
sanguneos.
NO: Se acepta como donante.
SI: Evaluar el riesgo real y la promiscuidad de la conducta sexual. Si es el caso, excluir
por 12 meses
HA TENIDO CONTACTO SEXUAL CON ENFERMO O PORTADOR CRNICO DE HEPATITIS B o

CEN LOS LTIMOS 12 MESES?
Dirigida a identificar pacientes que pueden estar en fase de incubacin de Hepatitis.
Consultar Norma.
NO:
SI:
Se acepta
Donantes con antecedentes de este tipo de contacto se excluyen por 12 meses.
ANTES DE TERMINAR LA ENTREVISTA, ES NECESARIO INDAGAR SI EL DONANTE:
QUIERE DONAR SANGRE PARA HACERSE EL EXAMEN DEL SIDA

Si es as consultar la razn y enviarlo a los consultorios de CONASIDA en que lo hacen en
forma gratuita.
NO:
SI:

Excluirlo como donante
VIENE A DONAR SANGRE POR DINERO

Dirigida a detectar donantes pagados. Explicar en forma clara y precisa la
inconveniencia de la donacin pagada. Asegurarse que el donante comprendi el
concepto. Se le otorga al donante la oportunidad de aclarar sus motivaciones para
donar sangre.
NO:
SI:

Excluirlo en forma transitoria, asegurndose que l comprendi el concepto.
CONSENTIMIENTO INFORMADO
Dirigido a comprometer la responsabilidad del donante en cuanto a la
comprensin del procedimiento y la veracidad de la informacin por el entregada. Con su
firma autoriza la realizacin de los exmenes para detectar infecciones transmisibles por va
sangunea, de acuerdo a las normas vigentes.
NOTA: Cualquier duda que se le presente frente a las respuestas entregadas por un donante,
y que signifique aplicar un criterio diferente al escrito en este manual, o aparezcan aspectos no
consignados en l deben ser aclarados oportunamente con sus instructores o el mdico a
cargo del servicio de sangre.
20
PROCEDIMIENTOS A UTILIZAR EN LA ATENCION Y SELECCION DE UN DONANTE DE SANGRE

I.- DETERMINACION DE Hb UTILIZANDO SULFATO DE COBRE.
PRINCIPIO:
Se basa en la gravedad especfica. Una gota de sangre introducida en una
solucin de Sulfato de Cobre queda encapsulada por proteinato de cobre, que
evita cualquier cambio de gravedad especfica durante 15 segundos. Si la gota
tiene una gravedad especfica superior a la solucin, caer en 15 segundos. Si
no es as, la gota oscilar, permanecer suspendida o subir hacia la superficie
de la solucin.
Es una prueba cualitativa que demuestra slo si la hemoglobina se encuentra
por encima o por debajo de lmites aceptables.
MUESTRA:
Sangre, obtenida por puncin capilar del pulpejo del dedo, de acuerdo a
procedimiento estandarizado.
MATERIALES:
1-
23456-
Soluciones de Sulfato de Cobre de densidad 1.053 para Hombres, la que

corresponde a una Hb. de 12,5 grs./dl y de 1.052 para Mujeres, que corresponde
a una Hb. de 12,0 grs./dl. Para preparar estas soluciones pese 89 grs. de sulfato
de cobre y agregue agua destilada csp 1000cc.Mida la densidad y ajstela a
1.053 agregando ms agua o sulfato segn corresponda. Para preparar una
solucin de densidad 1052 agregue a un litro de solucin preparada de la forma
anterior 40 cc. de agua destilada y ajuste la densidad. Estas soluciones deben
almacenarse a T ambiente y en recipientes cerrados para evitar su
evaporacin.
Dos vasos pp. de 6-10 cm. de alto.
Lancetas estriles.
Trulas de algodn.
Alcohol Yodado.
Capilares heparinizados.
PROCEDIMIENTO:
1.Coloque 75-80 ml. de cada solucin en 1 vaso pp. que tenga 6-10 cms. de alto,
limpio y seco. Estos vasos deben estar rotulados HOMBRES o MUJERES segn
corresponda. Cambiar las soluciones cada vez que haya cambio de turno o
despus de 30 determinaciones. Antes de usar las soluciones mezclarlas bien.
2.-
Limpie la zona de la piel donde se va a efectuar la puncin (pulpejo del dedo)

con alcohol yodado, deje secar. Pinche el dedo firmemente, cerca del extremo
distal y ligeramente lateral, con una lanceta estril. Descarte la lanceta en el
recipiente destinado al material cortopunzante. Es importante un buen flujo libre
de sangre. No comprimir repetidamente el dedo, ya que esto puede diluir la
gota de sangre con un exceso de lquido tisular y dar resultados falsamente
bajos.
3.-
Recoja la sangre en un tubo capilar con anticoagulante impidiendo que penetre

aire en su interior.
21
4.-
Deje caer suavemente del tubo capilar 1 gota de sangre desde una altura de
aproximadamente 1 cm. sobre la superficie de la solucin de Sulfato de Cobre.
5.-
Observe durante 15 segundos. Si la gota de sangre se va al fondo, el nivel de Hb.

est sobre el mnimo aceptable para donar sangre. Si la gota queda en la
superficie o bien cae y luego se devuelve, significa que el nivel de Hb. est bajo
el mnimo aceptable para donar sangre. Compruebe esto haciendo un
microhematocrito.
REGISTRO DE RESULTADOS:
Los resultados quedarn registrados en la Ficha de Donante.
CONTROL DE CALIDAD:
1.- Realcelo cada vez que se prepare una nueva solucin de Sulfato de Cobre.
2.- Seleccione muestras de sangre tomadas con anticoagulante y de Hb. conocidas,
que estn entre 0,5 - 1,0 gr./dl bajo y sobre el rango aceptado respectivamente.
3.- Lleve a cabo la tcnica de acuerdo a lo detallado en el procedimiento.
4.- Anote sus resultados en el registro de control de calidad.
NIVELES MINIMOS DE HEMOGLOBINA Y HEMATOCRITO EN DONANTES DE SANGRE
ORIGEN DE LA
MUESTRA
DEDO
O
VENA
METODO
NIVEL MINIMO
HOMBRES
MUJERES
Hb
125 g/l
12.5 g/dl
120 g/l
12.0 g/dl
Hto
0,38
38%
1.050
0,36
36%
1.052
Sulfato de cobre
NOTA: Puede presentarse resultados falsos debido a un exceso de protenas o a un alto

recuento de leucocitos en la muestra.
II.-DETERMINACION DE HEMOGLOBINA EN DONANTES DE SANGRE CON EL METODO HEMOCUE

PRINCIPIO
Este mtodo determina la concentracin de hemoglobina como metahemoglobina, a dos
longitudes de onda (570 y 880 mm) sin necesidad de dilucin de la muestra. Para la
realizacin de esta tcnica se cuenta con microcubetas que contienen el reactivo
(desoxicolato sdico) seco y un fotmetro destinado a la lectura de la muestra, el que est
calibrado sobre la base del mtodo internacional de referencia para la determinacin de
Hb que es la hemocianhemoglobina (HiCN)
INSUMOS NECESARIOS
1. Fotmetro para lectura de HemoCue
2. Cubeta control de HemoCue
22
3.
4.
5.
6.
7.
Microcubetas HemoCue para determinacin

Lancetas desechables
Algodn
Desinfectante
Caja de descarte de material cortopunzante
CONTROL DE CALIDAD
Realizar cada da al iniciar el trabajo:
Chequee en N de serie del equipo y de la cubeta de control
Coloque en ON el aparato
Tire el porta cubeta hacia la posicin de insercin de la muestra. La pantalla mostrar las
letras "Hb".
Despus de 6 segundos aparece la palabra "READY" en la pantalla
Coloque la cubeta roja standard de control en el porta cubeta y empjelo hacia la
posicin de medicin. La pantalla mostrar la palabra "MEASURING".
Despus de 10-15 segundos se completa la medicin y el fotmetro muestra el valor en
g/dL. En el registro de control de calidad anote este valor, el N de serie de la cubeta, el
valor standard de la cubeta de control utilizada y el N de lote de las microcubetas que
utilizar en las determinaciones de los donantes. El valor del control no debe desviarse del
valor standard ms de +/-0.3 g/dL.
Si el standard est fuera de rango aceptable, limpie el porta cubeta, squelo
completamente y vuelva a realizar la determinacin del estndar. Si continua fuera del
rango aceptable, informe al TM. Jefe.
Si el equipo no puede ser calibrado, utilice el mtodo alternativo determinado para estos
casos.
MANEJO DE LAS MICROCUBETAS DEL HEMOCUE
1. Coloque la fecha al set de microcubetas cada vez que este se abre por primera vez
Las microcubetas son estables por 90 das a partir de la apertura del set.
2. Retire solo las microcubetas que utilizar para los test inmediatos
3. Los reactivos incluidos en la microcubeta son sensibles a la humedad por lo que debe
guardarlas con un desecador.
4. COLOQUE LA TAPA INMEDIATAMENTE DESPUES DE HABER RETIRADO CADA MICROCUBETA
DEL CONTENEDOR.
5. Las microcubetas que no se ha usado deben permanecer en el contenedor original.
6. Debido a que este es un mtodo fotocolorimtrico, es importante no tomar las
microcubetas por el lado donde se realizar la lectura
7. Mantenga las microcubetas almacenadas entre 15 a 30C. No refrigerar.
PROCEDIMIENTO
1. Coloque el fotmetro en ON. Asegrese que el portacubeta est afuera (para colocar la
microcubeta). Cuando parpadea la palabra READY en la pantalla, el fotmetro est listo
para usar. El aparato muestra en la pantalla la sigla Hb durante 2 segundos cuando est
funcionando.
2. Utilice siempre guantes mientras realiza la puncin capilar y manipula las microcubetas.
Cmbiese guantes entre cada donante.
3. La forma y partes de la cubeta se observa en la figura N1.
4. Saque una microcubeta nueva del contenedor, tomndola por el lado de sostn y no de
lectura.
5. Realice la puncin capilar de acuerdo a lo descrito en el procedimiento en este Manual
6. Asegrese de lograr una gota de sangre que llene completamente la cubeta.
23
7. Tomar la cubeta por la parte posterior y poner en contacto con la sangre la porcin
donde se encuentran los reactivos de manera de llenarla completamente por
capilaridad. Evite contaminar el ojo ptico. No rellene la cubeta. Si hay burbujas de aire
en el ojo ptico de la cubeta debido a un lleno inadecuado de la cubeta, debe
descartarla y utilizar una nueva para realizar el test.
8. Una vez llenada completamente, limpie el exterior de la cubeta con un papel absorbente
limpio. No tocar la ranura de la microcubeta.
9. Coloque la cubeta en el portacubeta del fotmetro.
10. Empuje el portacubeta hacia adentro. Una vez que el brazo alcanza la posicin de
lectura, aparece en pantalla el mensaje MEASURING.
11. Despus de 30-50 segundos se logra el estado estable de la reaccin qumica y el
fotmetro muestra en pantalla el resultado. El valor aparece durante 5 minutos si la
cubeta ha permanecido en la posicin de lectura. Despus de 5 minutos la pantalla
muestra la sigla Hb.
12. Una nueva lectura puede realizarse si se lleva hacia fuera el porta cubeta, se espera que
aparezca en pantalla la palabra READY, se coloca una nueva muestra y se vuelve el
portacubeta a la posicin de lectura. Estas nuevas lecturas demorarn solo 10-20
segundos para mostrar el resultado en la pantalla.
13. Registre el valor de hemoglobina obtenido en el lugar correspondiente del cuestionario al
donante.
14. Realice una segunda lectura de la muestra y antela en el registro correspondiente.
15. Elimine las microcubetas en el contenedor de desechos una vez finalizada la tcnica.
16. Si la segunda lectura de una muestra se diferencia de la primera en ms de +/-0.3 g/dL,
la lectura no es vlida. Repita el mtodo desde el paso 5. Si nuevamente los resultados no
son vlidos, notifique al TM. jefe para recibir instrucciones.
17. Si aparece un cdigo de error en el procedimiento, siga el siguiente procedimiento:
18. Apague el equipo. Si el fotmetro tiene bateras recargables, mantngalas en el
cargador mientras no est en uso.
19. Limpie el porta cubeta todos los das con alcohol o una solucin jabonosa suave,
retirndolo del fotmetro. Es importante que el portacubeta est completamente seco
antes de volver a colocarlo en el equipo.
20. Guarde y traslade el fotmetro dentro de su caja
III.- TECNICA EN LAMINA PARA CONTROLAR ANTIGENOS ABO EN GLOBULOS ROJOS.(No debe
usarse como tcnica para definir ABO en donantes o pacientes)
PRINCIPIO:
Se basa en la deteccin de antgenos A y B presentes en el glbulo rojo
mediante antisueros especficos.
MUESTRA.
Sangre obtenida por puncin capilar del pulpejo del dedo, segn lo descrito en
el procedimiento estandarizado.
MATERIALES.
- Lanceta estril
- Trulas de algodn
- Desinfectante
- Lmina de vidrio
- Sueros clasificadores para ABO
- Fuente de luz para lectura
24
- Baguetas
PROCEDIMIENTO.
1.-Coloque en una lmina limpia y seca una gota de cada uno de los antisueros, primero
anti-A, despus anti-B y finalmente anti-AB.
2.- Proceda a realizar una puncin capilar en el pulpejo del dedo segn el procedimiento
estandarizado, obteniendo una suficiente cantidad de sangre. Aada a cada gota de
antisuero una gota de la muestra de sangre, teniendo cuidado de dejarla caer
libremente sin contaminar el capilar con antisuero.
3.- Mezcle bien utilizando baguetas diferentes, los antisueros con la sangre. La mezcla debe
esparcirse en un rea de aproximadamente 20 mm. de dimetro.
4.- Balancee suavemente la lmina durante 2 min.
5.- Observe la lmina en busca de aglutinacin frente a una fuente de luz. La aglutinacin
de los glbulos rojos en presencia de cualquier antisuero para la tipificacin ABO,
constituye un resultado positivo. Una suspensin uniforme de los glbulos rojos es un
resultado negativo. Realice la interpretacin de acuerdo al siguiente esquema:
GRUPO ABO
AB-I
A-II
B-III
O-IV
anti-A
+
+
-
anti-B
+
+
-
anti-AB
+
+
+
-
6.- Despus de usar las lminas, pngalas en una solucin de Cloro al 0,5% por 30 minutos
antes de lavarlas.
CONTROL DE CALIDAD:
1.- Observe diariamente el aspecto de los sueros clasificadores. Los antisueros debern ser
claros y transparentes, si se observa turbidez o cambio de color no deben usarse.
2.- Diariamente deber realizar controles positivos y negativos:
ANTISUERO
anti-A
anti-B
anti-AB
3.-
CONTROL +
G.R. A2
G.R. B
G.R. A2B
CONTROL G.R. B
G.R. A1
G.R. O
Anote los resultados en el registro de Control de Calidad.
NOTA: Este mtodo no debe considerarse til para informar un grupo sanguneo, dada su
baja sensibilidad y el alto porcentaje de error que presenta, solo puede ser usado
para tamizaje.
25
IV.- CONTROL DE CALIDAD DEL PROCEDIMIENTO DE EXTRACCION EN UN DONANTE DE SANGRE.

1.- CULTIVO BACTERIOLGICO DEL SITIO DE PUNCIN.
Debe realizarlo una vez al mes o segn lo establezca el manual de procedimientos del
servicio, para lo cual elegir un donante al azar, efectuando el siguiente procedimiento:
1.-Usando una trula estril tome una muestra del brazo del donante, en el sitio elegido
para realizar la flebotoma, antes de limpiar la zona.
2.- Tome otra muestra despus de realizada la limpieza de esta zona.
3.- Enve ambas muestras al laboratorio de bacteriologa para su cultivo.
En el laboratorio de bacteriologa las muestras se cultivarn por 48 horas en un medio de
agar sangre. El resultado ( de la muestra post limpieza) del cultivo debe ser negativo, de
lo contrario deber investigar y corregir la causa. Los resultados obtenidos quedarn
anotados en un registro especial para estos fines.
2.- CULTIVO BACTERIOLGICO DE LAS UNIDADES DE SANGRE.

Debe realizarlo una vez al mes, eligiendo al azar una bolsa de sangre que sea no reactiva
para las enfermedades de transmisin sangunea. Preferentemente elegir bolsas que
tengan ms de 15 das de extraccin y de aspecto dudoso.
Esta bolsa ser enviada al laboratorio de bacteriologa donde ser cultivada en caldo de
tioglicolato en una proporcin de 1:10 (use una muestra de sangre de por lo menos 10
ml.).
Las muestras debern incubarse a 37C durante 7 das, al tercer y quinto da se harn
subcultivos.
Los resultados obtenidos se anotarn en el registro dispuesto para estos fines. De acuerdo
a los resultados deben tomarse las medidas correspondientes.
3.- CONTROL DE CALIDAD DEL VOLUMEN DE SANGRE EXTRADO A CADA DONANTE.
Debe controlar el 1% de todas las unidades de sangre. Controlar dos aspectos:
a) Que el volumen de sangre extrado a cada donante en tubos pilotos, ya sea para
uso del Banco de Sangre u otros laboratorios, no exceda, bajo ningn concepto los 30 ml.
b) Que el volumen de sangre extrado en cada bolsa, sea de 450 +/- 50 ml. Esto lo
deber controlar el TM. responsable de la unidad, pesando diariamente 6 bolsas de
sangre, tomadas al azar (3 en el turno de maana y 3 en el turno de tarde). El peso de las
bolsas vacas debe ser determinado para cada marca comercial por el TM. responsable
de la unidad.
DETERMINACIN DEL PESO DE LAS BOLSAS:

Considere que 1 ml. de sangre pesa 1,052 grs. (suponiendo una Hb. de 12,0 gr./dl). Por
lo tanto cada bolsa debe pesar:
473 +/- 52 grs. + PESO DE LA BOLSA CON ANTICOAGULANTE
Debe anotar los resultados en un registro especialmente dispuesto para estos fines. En
caso de detectar anomalas debe tomar las medidas correspondientes para corregir el
error.
26
V.- MEDICION DE LA PRESION ARTERIAL

La medicin de la presin arterial se obtiene mediante el uso de un manmetro de
mercurio y/o sistema digital automatizado. Al utilizar el manmetro se persigue
auscultar los ruidos del latido arterial mediante un estetoscopio.
SELECCIN DEL MANGUITO:
El tipo de manguito a utilizar depender del grosor del brazo de la persona a
examinar. Una cmara de goma de un ancho no apropiado a la circunferencia del
brazo del paciente entrega mediciones de PA con un error sistemtico. Si la cmara
es muy ancha, la presin se subestima; por el contrario, si la cmara es muy angosta,
la presin se sobreestima, esto es frecuente cuando se usa el manguito de adulto
estndar en personas obesas. El ancho de la cmara de goma debe corresponder al
40% de la circunferencia del brazo; dicho de otra forma, el ancho de la cmara
multiplicado por 2.5 define la circunferencia de brazo para el cual es adecuado ese
manguito en particular: para una circunferencia braquial de 30 cm es adecuada
una cmara de un ancho de 12 cm manguito adulto estndar). Para medir la
circunferencia de brazo, determine la distancia entre el acromium y el olcranon y
marque el punto medio; en ese lugar realice la medicin. En un adulto con una
circunferencia de entre 26-30 cm, utilice el manguito estndar de adulto.
PROCEDIMIENTO:
1. El donante debe estar en posicin sentada, con el brazo a la altura del corazn,
apoyado en una mesa. Relajado, sin ejercicio exagerado ni emociones fuertes
minutos previos al examen.
2. Libere el brazo a examinar de prendas de vestir que puedan ejercer presin adicional
a la del esfingomanmetro.
3. Apoye el antebrazo sobre la mesa, incluyendo el codo. El eje del antebrazo con el
brazo puede quedar en semiflexin.
4. Disponga el manguito alrededor del brazo ajustado y firme, y de modo que el borde
inferior de este quede a 2.5 cm sobre el pliegue del codo. Asegure que el baln
neumtico est ubicado en la cara interna del brazo.
5. Ubique la arteria radial por palpacin. Insufle aire al manguito hasta dejar de percibir
dicho pulso radial (presin sistlica palpatoria). Proceda a desinflar el manguito,
bajando aproximadamente 3 mm Hg/ segundo. Espere 30 segundos antes de re
inflar.
6. Disponga la membrana del estetoscopio sobre la arteria braquial previamente
ubicada. Vuelva a insuflar el manguito 20 a 30 mmHg ms que la medicin hecha en
el punto anterior, lo que constituye el nivel mximo de insuflacin.
7. Libere el aire de la cmara a una velocidad aproximada de 2 a 4 mm Hg por
segundo. EL PRIMER RUIDO que se ausculta corresponde a la PRESION SISTOLICA, siga
auscultando cuidadosamente y notar que los ruidos se debilitan y terminan por
desaparecer. La desaparicin de ruidos marca el punto de la PRESION DIASTOLICA.
8. Registre la presin sistlica y diastlica en nmeros pares e identifique en qu brazo
efectu la medicin.
9. Espere 1 a 2 minutos antes de una nueva medicin en el mismo brazo.
10. Si la presin sistlica o diastlica esta fuera de los rangos establecidos en las normas,
el donante debe ser excluido temporalmente hasta ser evaluado por un mdico.
PRECAUCIONES:
Brazalete ubicado a nivel del corazn. Paciente relajado para que no influya sobre
gasto cardaco y resistencia perifrica. Bajar presin con velocidad uniforme. Registrar
en que brazo se tom la presin y en qu posicin.
27
VI.- PREPARACION DE LA ZONA DE PUNCION VENOSA.

La sangre debe extraerse de una vena grande y firme, en un rea libre de lesiones. Es
aconsejable inspeccionar ambos brazos y aplicar torniquete con una presin de 40-60
mm de Hg. para hacer las venas ms prominentes. Una vez seleccionada la mejor
vena, se liberar la presin y preparar la zona para la puncin.
No existe ninguna forma completamente asptica de preparar una zona de
venopuntura, pero se pueden conseguir condiciones higinicas que garanticen al
mximo la obtencin de una unidad estril empleando varios mtodos.
METODO 1:
Prepare un rea de 6 cm de dimetro a partir del sitio de puncin previsto, utilizando en
todo momento material estril.
1. Limpie vigorosamente la piel del rea de puncin con jabn acuoso o solucin
detergente no alcohlica al 15 % (Zefirol o Kabacilin 1: 10.000) durante un mnimo
de 15 seg. para eliminar grasa, suciedad, clulas cutneas y otros. Hacerlo en un
solo sentido (de abajo hacia arriba o de dentro hacia afuera).
2. Elimine el jabn con acetona al 10% en alcohol isoproplico al 70% (1 parte de
acetona y 9 partes de alcohol) y deje secar.
3. Aplique tintura de yodo al 3% (PVP en alcohol etlico al 70%) que acta como
antisptico rpido; dejar secar por solo unos minutos. Mantener la tintura de yodo
en frasco oscuro y bien cerrado para evitar evaporacin. Altas concentraciones de
yodo pueden provocar reaccin cutnea.
4. Elimine el yodo con acetona al 10% en alcohol isoproplico al 70%. Dejar secar la
superficie.
5. Si la puncin no se realiza inmediatamente, cubra el rea con gasa estril.
6. NO VOLVER A PALPAR EL REA!
Para donantes sensibles al yodo se puede establecer otro mtodo:
METODO 2
Prepare un rea de 6 cm de dimetro a partir del sitio de puncin previsto, utilizando en
todo momento material estril.
1.
Limpie con una solucin jabonosa acuosa al 0.7% en compuesto iodforo (complejo
PVP-Yodo o polmero - yodo). Eliminar el exceso de espuma pero no dejar secar el
brazo antes del paso siguiente.
2.
Aplique solucin de complejo iodforo al 10%. y dejar por 30 seg. Esta solucin slo
contiene un 1% de yodo libre y no debe eliminarse antes de la puncin.
3.
Si la puncin no se realiza inmediatamente, cubra el rea con gasa estril.

NO VOLVER A PALPAR EL REA!
28
___________________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y BANCO DE SANGRE
VII.- PUNCION VENOSA Y EXTRACCION DE SANGRE.

1. Compruebe que la bolsa de extraccin, registro, tubos de anlisis y otros, tengan la
misma identificacin entre ellos y el donante (nombre, nmero etc.).
2. Inspeccione la bolsa en busca de defectos. Aplique presin para verificar que no
tiene fallas. La solucin de anticoagulante debe ser clara y transparente.
3. Deposite la bolsa a un nivel inferior al del brazo del donante. Asegure el control de
la cantidad de sangre a extraer.
4. Clausure temporalmente el ingreso de aire a la bolsa pinzando la tubuladura (tripa)
y deje un nudo suelto.
5. Seleccione la vena y prepare la zona a puncionar segn el mtodo establecido en
el manual de procedimientos, que garantice al mximo la obtencin de una
unidad estril.
6. Una vez realizado el procedimiento anterior, aplique nuevamente el torniquete (4
dedos sobre el pliegue del codo) sin tocar el rea desinfectada. Solicite al donante
que abra y cierre la mano para hacer ms prominente la vena previamente
seleccionada.
7. Descubra la aguja estril y puncione inmediatamente con el bisel hacia arriba. Slo
puede usar una vez cada equipo. Fije con tela adhesiva para mantener la aguja en
su sitio y cubra con gasa estril.
8. Abra el cierre provisional y solicite al donante que abra y cierre la mano suave y
lentamente
9. Observe y atienda al donante durante toda la extraccin a fin de pesquisar en
forma oportuna cualquier reaccin adversa.
10. Mezcle suavemente la sangre con el anticoagulante, ya sea en forma
con agitador mecnico.
manual, o
11.Controle cada cierto tiempo que se mantenga un buen flujo sanguneo para evitar
coagulacin. La extraccin no debe demorar ms de 10 minutos.
12. Controle el volumen de sangre extrado.
Si se utiliza un sistema de balanza: 1 ml de sangre pesa como mnimo, 1.052 grs., la
gravedad especfica mnima admisible para mujeres donantes. Una cifra adecuada
para usar es 1.062 grs.; una unidad de 405- 495 ml deber pesar 425-520 grs., ms el
peso de la bolsa y anticoagulante.
13. Una vez completado el volumen: Libere la presin del torniquete a 20 mm. de Hg.
Cerrar el nudo o sellar la tubuladura ms cerca de la puncin.
14. Recolecte las muestras de sangre para anlisis mediante un sistema que evite la
contaminacin de stas y de la unidad extrada. Existen varios mtodos, uno de
ellos puede ser:
29
- Obturar la tubuladura ms cerca de la puncin por sobre el nudo sellado, con una
pinza hemosttica.
- Cortar la tripa por sobre el nudo, asegurndose antes que este pinzada, de modo
que la bolsa quede sellada.
- Introducir el extremo de la tubuladura que viene del brazo del donante, en el tubo
para anlisis, abrir la pinza, llenarlo y volver a pinzar.
15. Desinflar y retirar el torniquete. Retirar la aguja del brazo y ejercer presin sobre la
gasa por algunos minutos. Desechar la aguja y el resto en un recipiente de paredes
duras para evitar lesiones y contaminacin del personal.
16. Solicitar al donante que eleve el brazo (codo recto) manteniendo firme la gasa
sobre la flebotoma con la otra mano.
17. Exprimir la tubuladura que lleva la sangre hacia dentro de la bolsa, empezando en
el punto de sellado y en forma rpida para evitar coagulacin. Invertir la bolsa
varias veces y dejar que la tubuladura se llene de sangre con anticoagulante
18. Sellar la tubuladura en varios segmentos numerados de manera clara y fcil de
leer.
19. Inspeccionar de nuevo la bolsa por si hay defectos.
20. Volver a comprobar la identificacin de la bolsa, tubos de anlisis y registros con el
donante (nombre, nmero etc.)
21. Dejar la unidad en refrigerador a 4C., excepto si est destinada a preparar
concentrados plaquetarios.
21. Examinar el brazo del donante para verificar que no sangra, colocar un apsito y
fijar con tela adhesiva.
ETAPAS DE LA EXTRACCIN DE SANGRE
IDENTIFICAR AL DONANTE
INSPECCIONAR EL EQUIPO
SELECCIONAR DE LA MEJOR VENA
REALIZAR DESINFECCION
FLEBOTOMIA
TERMINAR DE LA EXTRACCION
ENTREGAR RECOMENDACIONES
AL DONANTE
OFRECER UN REFRIGERIO
AGRADECER DONACION
30
VIII.- ATENCION DEL DONANTE DESPUES DE LA EXTRACCION

1. El donante debe permanecer acostado en el silln de donacin por unos 5 minutos
ms, bajo la observacin directa del personal de la sala de extraccin.
2. Puede sentarse, previa autorizacin de quien lo atendi, y esperar algunos minutos
antes de ponerse de pie; cuando lo haga y camine hasta el rea de observacin,
debe estar acompaado por personal de la unidad de donante.
3. Indicarle ciertas normas o cuidados que debe observar despus de la extraccin:
-
No marcharse sin que algn miembro del CS/ UMT lo autorice.

Beber ms lquido del acostumbrado en las 4 hrs. siguientes.
No es recomendable beber alcohol.
No fumar durante las 2 hrs. siguientes.
Si contina sangrando por el sitio de puncin, presionar sobre ste y levantar el
brazo.
Si siente vrtigo o mareo, recostarse o sentarse y poner la cabeza entre las
rodillas. Si alguno de los sntomas persiste, volver centro de sangre/ UMT, o
consultar un mdico.
Puede reanudar la actividad normal despus de 1 hr. si se siente bien. Si realiza
determinado tipo de trabajo que supone riesgo o esfuerzo, se recomienda
esperar 12 hr. antes de reanudar su actividad normal.
Indicar retirar el apsito pasado algunas horas.
4. Ofrecer de beber leche, jugos u otro refrigerio segn lo establecido por cada banco
de sangre.
5. Agradecer la donacin; animarle a hacer una nueva donacin despus de
transcurrido el intervalo de tiempo recomendado entre una y otra (tres meses).
6. Registrar en el expediente del donante, cualquier reaccin que ste haya sufrido.
REACCIONES ADVERSAS A LA DONACION DE SANGRE

Es muy importante saber cmo proceder frente a una reaccin adversa a la
extraccin.Las reacciones adversas que puede presentar un donante de sangre se
clasifican en generalizadas o localizadas en el sitio de puncin.
I.- REACCIONES LOCALES:
a) Hematomas.
Es el escape de sangre de la vena hacia el tejido circundante y puede resultar de
una mala tcnica de puncin, traspaso de la vena, sacar la aguja teniendo ligado
el brazo, no aplicar suficiente presin cuando se retira la aguja al finalizar la
extraccin. El hematoma produce dolor y posteriormente cambio de color en la
zona por la destruccin de los glbulos rojos los que liberan hemoglobina. Para una
reabsorcin ms rpida de un hematoma ya instalado, puede colocarse
compresas tibias sobre l.
Si el donante presenta un hematoma Ud. debe proceder de la siguiente forma:
31
Suelte la ligadura y retire la aguja

Coloque dos trulas limpias de algodn sobre el hematoma y haga
presin con los dedos por 7 minutos.
Puede colocar hielo en la zona por 5 minutos.
Si sospecha que ha puncionado una arteria:
Desligue y saque la aguja de inmediato.

Presione con dos trulas limpias la zona por 10 minutos
Coloque un vendaje compresivo
b) Nervio daado.
No es frecuente, pero cuando ocurre el donante manifiesta tener un dolor agudo
en todo el brazo el que permanecer por bastante tiempo. Si sospecha que esto ha
ocurrido, retire inmediatamente la aguja del sitio de puncin y siga las instrucciones
dadas por el mdico jefe del Servicio. Es conveniente puncionar venas superficiales,
para evitar daar algn nervio.
II.-REACCIONES GENERALIZADAS:
a) Sndrome vaso-vagal
Se produce por factores squicos. Los sntomas pueden ser: debilidad, palidez,
ansiedad, piel fra y sudorosa, con o sin prdida del conocimiento, puede haber
tambin nauseas, vmitos y relajacin de esfnteres. La presin y el pulso bajan.
Si el donante presenta signos como palidez sudoracin, desmayo o fatiga durante
la donacin:
1.-Suspenda la extraccin.
2.- Colocar al donante tendido de espaldas y con los pies ms altos que la cabeza.
3.- Asegurarse que l tiene las vas areas expeditas.
4.-El donante debe inhalar sales de amonaco. El TM. que lo atiende debe inhalarlas
primero para comprobar la intensidad del aroma, ya que si es demasiado fuerte
puede afectar las membranas nasales y si es excesivamente suave no es
efectivo; deben provocar la tos del donante, lo que elevar su tensin arterial.
5.-Deje reposar al donante en la camilla por un tiempo prudente hasta que se
recupere, (15 minutos como mnimo).
6.- Debe permanecer en estricta vigilancia del Tecnlogo Mdico a cargo. En caso
de agravarse la situacin, d aviso al mdico del servicio, o siga las instrucciones
entregadas por l.
Si el donante presenta signos de un sndrome vaso-vagal despus de la donacin:
1.-Coloque al donante tendido de espalda y con los pies ms altos que la cabeza.
2.- Sultele el cinturn, la corbata u otra prenda de ropa ajustada.
3.- Verifique que las vas areas estn expeditas
4.- Aplique compresas fras sobre la frente
5.-Hgalo inhalar sales de amonaco, teniendo igual precaucin que las ya
descritas.
6.- Es muy importante calmarlo y no demostrar nerviosismo
7.- Vigile su estado hasta que el donante se reponga totalmente.
8.- En caso de agravarse la situacin del donante, siga las instrucciones entregadas
por el mdico del Servicio para esta situacin.
32
Si el donante presenta vmitos o nauseas:

1.- Procure calmarlo y que est cmodo.
2.- Recomindele que respire lenta y profundamente (inspirando por la nariz y
botando el aire la boca).
3.- Aplique compresas fras en la frente y/o la nuca.
4.- Vulvale la cabeza hacia un lado, para evitar que pueda aspirar su propio
vmito.
5.- Si el donante vomita, proporcinele un recipiente adecuado y toallas de papel.
Asegrese de mantener la cabeza hacia un lado para evitar que aspire vmito.
6.- Pdale que permanezca tendido hasta que se haya recuperado.
7.- Mantenga al donante bajo continua vigilancia hasta que se haya recuperado
totalmente.
8.- Ofrzcale agua para enjugarse la boca.
b) Tetania (temblores y espasmos musculares):
Cuando el donante se encuentra ansioso y nervioso, puede comenzar a respirar
rpidamente y profundamente, esta hiperventilacin trae como consecuencia una
prdida excesiva de CO2 generando un estado de alcalosis, que produce ligeros
temblores musculares y espasmos tetnicos de las manos y la cara, pudiendo llegar
a presentar convulsiones e inconsciencia.
Observe al donante durante la extraccin procurando mantenerlo siempre
calmado, y para detectar la aparicin de alguno de estos sntomas. Si el donante
est hiperventilando puede interrumpir el proceso con algn tema de conversacin
para distraer su atencin.
Si el donante de sangre presenta los sntomas descritos, proceda como sigue:
1. Suspenda la extraccin.
2. Haga que el donante respire durante un rato dentro de una bolsa
de
papel.
3. Espere que se relaje (no forzar el brazo).
4. Si presenta convulsiones pida ayuda para evitar que se lastime.
5. Mantenga al dador bajo vigilancia directa y controle pulso y
presin.
6. No administrar oxgeno.
c) Convulsiones verdaderas (epilepsia)
1. Pida ayuda para evitar que se lastime.
2. Impida que se muerda la lengua, colocando una gasa estril
3. Avise de inmediato al mdico jefe del servicio.
bajo la lengua.
d) Problemas cardacos.
Se pueden observar con muy poca frecuencia, pero si sospecha que el donante
presenta problemas cardacos avise de inmediato al mdico jefe del servicio.
33
________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL
REGISTROS
Uno de los elementos ms importantes de un sistema de Garanta de Calidad son los registros.
Ellos pueden ser de diverso tipo y cumplir varios objetivos. A continuacin mostramos algunos
ejemplos de registros a usar en la unidad de donante de sangre
CONTROL BACTERIOLOGICO DEL SITIO DE PUNCION
FECHA
N
DADOR
FLEBOTO
MISTA
RESULTADO
MUESTRA
PREVIA
RESULTADO
MUESTRA
POSTERIOR
COMENTARIOS
CONTROL DE VOLUMEN DE SANGRE EXTRAIDA AL DONANTE

FECHA
34
N
DADOR
PESO DE LA
BOLSA
VOLUMEN
EXTRADO
FLEBOTOMISTA
COMENTARIO
TRANSPORTE DE SANGRE
Para estos fines es indispensable contar con un programa de control de calidad que
garantice que la sangre a usar en transfusiones, desde este punto de vista es segura.
Es muy importante vigilar la integridad de las bolsas de sangre, es recomendable realizar
cultivos si se observa que el aspecto de la sangre y de los componentes no es normal, o si
el paciente experimenta una reaccin adversa que clnicamente pueda ser debida a
algn tipo de contaminacin en la sangre del donante. Las tcnicas elegidas para el
cultivo de la sangre deben seleccionarse cuidadosamente para obtener un buen
rendimiento, y el Banco de Sangre debe verificar que se han realizado de forma
adecuada.
Algunos aspectos a considerar son:
READMISION DE UNIDADES DE SANGRE
La sangre devuelta al Banco no debe destinarse nuevamente a la transfusin, hasta que
no se hayan comprobado los siguientes puntos:
El cierre de la bolsa no debe haber sido abierto ni manipulado de ninguna forma. Esto
garantiza que se ha mantenido la esterilidad.
La sangre debe en todo momento haberse mantenido entre 1 y 10_C, preferentemente
entre 1 y 6 _C. El hecho de que la sangre alcance temperaturas superiores a estos valores,
aunque se enfre posteriormente, tiende a acelerar el metabolismo de los eritrocitos,
provoca la hemlisis y puede permitir el crecimiento bacteriano en la unidad. Muchos
servicios de transfusin no consideran vlidas las unidades de sangre que hayan
permanecido fuera de un refrigerador controlado por ms de 30 minutos.
Si la sangre cumple las normas establecidas para ser utilizada, al menos un segmento
sellado del tubo de conexin con el donante debe permanecer adosado a la bolsa,
para ser usado en las pruebas cruzadas.
Los registros deben indicar que la sangre ha sido readmitida y considerada apta para ser
utilizada y que ha sido inspeccionada previamente. Debe existir un TM. responsable de
este hecho.
TRANSPORTE DE LA SANGRE Y COMPONENTES SANGUINEOS

La temperatura de la sangre y de los concentrados de eritrocitos debe mantenerse en
todo momento entre 1 y 10C durante el transporte. Esto se puede conseguir empleando
cajas resistentes y bien aisladas y/o, que contengan suficiente material refrigerante,
siendo el ms recomendado para la mayora de los envos, el hielo hmedo en
recipientes impermeables, como bolsas plsticas. Sin embargo los cubitos de hielo
excesivamente fros, el hielo envasado y el hielo seco, no deben emplearse para
transportar o almacenar sangre total o eritrocitos ya que pueden hacer bajar tanto la
temperatura en el recipiente que se produzca la hemlisis de los eritrocitos ms prximos.
La sangre transportada por va area puede congelarse si se transporta en un
compartimento no presurizado. Los compartimentos de carga de los autobuses y
camiones alcanzan a menudo temperaturas superiores a los 38C. La temperatura de la
35
sangre y de los componentes debe controlarse rigurosamente durante el transporte con

algn sistema de registro de temperatura y tambin en el momento de la recepcin.
El hielo debe colocarse encima de la sangre, ya que el aire fro se mueve hacia abajo.
Durante los viajes largos con altas temperaturas, el hielo y la sangre deben estar en
contacto directo, ya que si quedan separados por una lmina de cartn o una franja de
aire se produce un aislamiento interno que no permite que el hielo proteja
adecuadamente la sangre de las altas temperaturas del entorno. Es necesario colocar
hielo hmedo encima y debajo de la sangre si el tiempo es muy caluroso o si el viaje dura
varias horas. El hielo hmedo utilizado en cubos es mejor que en lminas o en trozos
porque se derrite ms lentamente. En las cajas enviadas a grandes distancias o en
condiciones ambientales de elevada temperatura, el volumen de hielo debe ser, como
mnimo, igual al de la sangre. En un recipiente aislado se puede considerar que la
temperatura est entre 1 y 6C mientras que quede hielo sin derretir.
El control de la temperatura de la sangre y los eritrocitos durante el transporte puede
poner de manifiesto la necesidad de mejorar el aislamiento de los recipientes o de
colocar en ellos una mayor cantidad de hielo. En los envases debe peridicamente
colocarse controles para el registro de las temperaturas. Los registros de temperatura
deben ser completados y remitidos a su origen por el personal del Banco de Sangre que
recibe el envo, para poder saber si el aislamiento es correcto y si la cantidad de hielo es
adecuada. El personal encargado de enviar o distribuir la sangre, tiene la responsabilidad
de garantizar que los sistemas de envo puedan mantener durante el transporte la
temperatura de la sangre por debajo de 10C.
La decisin sobre la utilizacin de la sangre que ha estado expuesta a temperaturas
superiores a los 10C debe tomarla, preferentemente, el personal de Tecnlogo Mdico
calificado. Deben tenerse en cuenta factores como el tiempo y el tipo de transporte, los
grados en que la temperatura ha sobrepasado los 10C, la presencia de hielo residual en
los envases y la aparicin de hemlisis. El personal encargado de efectuar los envos
debe ser informado si se registran temperaturas elevadas que no son aceptables.
UNIDADES MOVILES DE RECOLECCION
Si la sangre se enva desde una unidad mvil de recoleccin a un centro donde se
procesa y se preparan diversos componentes, debe mantenerse en fro a la temperatura
anteriormente indicada, excepto en el caso de que est destinada a la obtencin de
plaquetas, en que no debe bajar de 20C, ya que stas se separan mejor de la sangre
total a temperatura ambiente. Estas unidades deben transportarse desde el rea de
recoleccin hasta el lugar de procesamiento lo antes posible, y en el caso de la
obtencin de plaquetas no deben pasar ms de 8 horas entre la recoleccin y la
centrifugacin.
La sangre almacenada entre 1 y 6C alcanza los 10C o ms si permanece
aproximadamente 30 minutos a temperatura ambiente, por este motivo la sangre debe
enviarse al centro en un perodo no superior a los 30 minutos.
36
ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE DE HEMOCOMPONENTES
COMPONENTE
ALMACENAMIENTO EN
BANCO DE SANGRE
TRANSPORTE
Glbulos rojos en AS-5, 1-6C, en refrigerador con No puede permanecer por

Tambin
leucorreducidos registro de temperatura, ms de 30 minutos fuera de
en circuito cerrado
hasta 42 das
un refrigerador con registro
de temperatura.
Glbulos rojos o sangre 1-6C, en refrigerador con La temperatura de la
y
de
los
total en CPD, Tambin registro de temperatura, sangre
concentrados de eritrocitos
leucorreducidos en circuito hasta 21 das
debe mantenerse en todo
cerrado
momento entre 1 y 10C
Glbulos rojos o sangre 1-6C, en refrigerador con durante el transporte
total en CPD-A, Tambin registro de temperatura,
leucorreducidos en circuito hasta 35 das
cerrado
Glbulos rojos lavados o 1-6C, en refrigerador con
circuito abierto
registro de temperatura,
hasta 24 horas despus del
lavado
Concentrado de Plaquetas 20-22C
en
agitacin
preparados de sangre total constante hasta 5 das.
o por afresis
Expiran 4 horas despus de
realizar un pool
Plasma fresco congelado
-18C o menos en freezer

hasta 1 ao. Expira en 4
horas despus de hacer
pool
*El da de expiracin corresponde a la medianoche del da final de almacenamiento.
GESTION DE STOCK EN BANCO DE SANGRE

La gestin del stock de productos sanguneos en un banco de sangre es un punto
administrativo crtico, que necesita de una acuciosa coordinacin y que involucra
diferentes elementos:
a)
b)
c)
d)
e)
Adquisicin
Corresponde a la disponibilidad de componentes sanguneos, lo ideal para estos
fines es disponer de un sistema de Captacin de Donantes Voluntarios, lo que
permite programar y manejar el nmero de productos disponibles
Tratamiento de la sangre
Se refiere a las decisiones de fraccionamiento
Transporte
Disponibilidad en el momento y lugar preciso
Almacenamiento
Contar con condiciones satisfactorias de almacenamiento en todos los procesos
Utilizacin
37
Disponer de un sistema que garantice una utilizacin adecuada de cada

componente sanguneo.
ESTUDIOS PREVIOS PARA GESTIONAR STOCK.
Para realizar una adecuada gestin de stock, cada Banco de Sangre debe evaluar los
siguientes elementos:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Requerimientos de cada componente sanguneo, de acuerdo a grupo ABO y Rh D.

Conocer los recursos humanos, fsicos y financieros que dispone.
Conocer el sistema administrativo de gestin de pedidos y su frecuencia.
Sistema de Identificacin y etiquetado de los productos.
Sistemas de controles.
Mecanismos a seguir cuando se tiene stock mnimo y emergencias inesperadas.
Mecanismos para notificar acerca de dficit.
Acciones a seguir cuando las solicitudes no pueden ser cumplidas.
Procedimientos y registros de distribucin, almacenamiento, transporte, productos no
conformes, solicitud y entrega de pedido.
10. Clculo de reservas para afrontar impacto inicial de desastres y catstrofes.
11. Determinar frecuencia de control de estado de inventario.
METODOS DE ESTIMACION DE REQUERIMIENTOS DE HEMOCOMPONENTES (STOCK)

1.
2.
3.
4.
Correspondera al 2-5% de la poblacin del rea.

50 unidades de sangre por 1000 habitantes y por ao.
6-7 unidades de sangre por cama de agudos y por ao.
Uso histrico por grupo y por componente sanguneo.
FACTORES A CONSIDERAR PARA CALCULAR STOCK PTIMO

1. Distancia entre el Centro de Sangre y las Unidades de Medicina Transfusional que
abastece. (distancias cortas 15-20%).
2. Condiciones de trnsito y climticas.
3. Espacio de almacenamiento en los refrigeradores-y freezer.
4. Personal disponible, carga y distribucin de trabajo.
5. Frecuencia de las peticiones
6. Vencimiento de componentes sanguneos
7. Dficit de productos
8. Tipo de cirugas que se realizan en el hospital: traumatologa, oncologa. (15-20%)
9. Indicacin de Transfusin.
10. Relacin prueba de compatibilidad hecha / transfusiones realizadas.
11. Satisfaccin de la demanda transfusional.
12. Postergacin de cirugas
13. Ingresos y egresos de componentes sanguneos de y a otros hospitales
14. Desarrollo previsto del establecimiento.
PROCEDIMIENTO PARA CALCULAR SOLICITUR DE COMPONENTES SANGUNEOS DE UMT AL CS.
1.
38
Conocer previamente el stock mnimo y ptimo semanal y diario

sanguneo.
por grupo
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Determinar las existencias disponibles por grupos sanguneos al momento del

pedido.
Determinar las reservas disponibles.
Estar en conocimiento de cirugas y procedimientos programados durante el
perodo que cubrir el pedido.
Considerar eventos y fechas con mayores riesgos en el rea. Ejemplo: fiestas,
eventos, etc.
Calcular las unidades ptimas de componentes sanguneos por grupo segn
perodo a cubrir.
Restar a las unidades ptimas calculadas, las existencias disponibles.
Analizar si corresponde un aumento extra segn anlisis. (puntos. 1 y 8)
MANEJO DE STOCK EN CENTRO DE SANGRE

El Centro de Sangre es el encargado de la captacin de donantes, el procesamiento de la
sangre y la distribucin de los componentes sanguneos, para ello es fundamental conocer
y manejar algunas variables que influirn en su stock disponible.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Nmero de donantes que concurren diario, semanal y mensualmente, y sus

variaciones estacionales.
Potencial de captacin de donantes voluntarios y frecuencias prevista de las
donaciones
Calcular los stocks mnimos y ptimos.
Conocer stock de UMTs (inventario externo).
Conocer stock disponible y no disponible del C.S. (inventario interno)
Comparar stock ptimo con el existente.
Relacionar el stock no disponible con el disponible y colecciones programadas.
Hacer solicitud a unidad de fraccionamiento y donantes de acuerdo a las
necesidades.
REGISTROS DE DESPACHO DE PRODUCTOS DEL C.S.

Los registros son un punto crtico de calidad en la gestin de stock, ellos deben contener
como mnimo:
1. Detalle de la entrega con N de donacin, tipo de componente, grupo.
2. Resumen del total de entrega con firma de la persona que despacha y de la que
retira.
3. Solicitud desde UMT a CS.
4. Control de Stock.
5. Solicitud de CS a seccin de fraccionamiento.
ESTRATEGIAS PARA EVITAR VENCIMIENTOS
Para una correcta gestin de stock de componentes sanguneos, es importante cautelar la
sobre o sub demanda de productos. Existen varios aspectos que entregan evidencias sobre
la calidad de este manejo, entre ellas:
1. Solicitudes de emergencias (fuera de las fechas establecidas de distribucin). Si las
unidades solicitadas en forma extraordinaria no se utilizan, esto debe tenerse presente.
2. Buena comunicacin entre UMTs para intercambiar componentes de grupos
sanguneos escasos, de conservacin limitada, etc.
3. Normas claras que establezcan como debe elegir la unidad a transfundir.
4. Normas de indicacin de transfusin. (Relacin PC/transfusin).
39
5. Pautas de solicitud transfusional para ciruga segn diagnstico.

6. Revisin diaria de stock, por fecha de vencimiento de todos los tipos de componentes
sanguneos.
7. Criterios de distribucin bien establecidos.
8. Control sobre el uso e indicacin de componentes sanguneos.
ANALISIS Y EVALUACION
Este proceso debe estar sujeto a permanente anlisis y evaluacin, para ello debe
conocer ciertos indicadores como:
1. ndice de caducidad de los componentes debe ser menor a 7%
2. ndice de Dficit de productos debe ser igual o menor 1%.
3. Frecuencia de envos de emergencias.
4. Postergacin de transfusiones.
5. Cumplimiento de pedidos de componentes.
6. Stock por mes, grupo, tipo de componentes.
7. Unidades no conformes.
8. Unidades intercambiadas.
9. Cumplimiento de captacin de donantes y de produccin.
40
CLCULO SEMANAL DE STOCK MNIMO HEMOCOMPONENTES = _________

EJ.:
grupo
O+
A+
B+
AB+
O-
semana
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
Total
transf= a
Valor ms alto
transf=b
c=a-b
c/25
stock mn.
semanal
Stock ptimo = stock mnimo + X %
X = Porcentaje calculado en base otros factores ( )
A-
B-
AB-
G.R.
O+
4
15
0
16
15
0
7
12
5
4
24
10
11
13
13
10
10
8
9
10
10
14
13
12
11
8
264
24
c=240
240/25
9.6
41
U.M.T. HOSPITAL CARLOS VAN BUREN
FECHA.
HORA:
REGISTRO DE EXISTENCIA / PEDIDO

CONDICION
O+
TRA
RET
DISP
A+
TRA
RET
DISP
B+
TRA
RET
DISP
AB+
TRA
RET
DISP
O-
TRA
RET
DISP
A-
TRA
RET
DISP
B-
TRA
RET
DISP
AB-
TRA
RET
DISP
HEMO
O+
S
GR
EXISTENCIA
GLR
PFC
PSF
CPP
PLQ
SOLICITAMOS NOS REMITAN LOS SIGUIENTES HEMOCOMPONENTES EN EL DA DE HO Y

PEDIDO : DE
/
/
A
/
/
GRUPO
ABO / D
A+
B+
AB+
OABABS
E
S
E
S
E
S
E
S
E
S
E
S
GR
GLR
PFC
PSF
CPP
PLQ
NOTA
PRODUCTO
G.R/GSL
PFC/PSF
CPP
PLQ
T.M: EVE
TOTAL
N UNIDADES
ENTREGADO POR:
FECHA:
HORA:
RECIBIDO POR:
TRANSPORTADO POR:
HORA:
Manejo de Stock ha sido escrito con la colaboracin de la Sra. M Cecilia Lyng Falcone, TM
Supervisora del Centro de Sangre Valparaso.
42
UNIDAD
INMUNOHEMATOLOGIA
Ag Duffy
43
UNIDAD INMUNOHEMATOLOGIA
INTRODUCCION A LA INMUNOHEMATOLOGIA
El Sistema Inmune est compuesto por la piel, rganos linfoides primarios (Timo, Mdula sea),
rganos linfoides secundarios (Bazo y ganglios linfticos), las clulas y protenas asociadas a la
defensa del organismo contra lo no propio y lo propio transformado.
Podemos dividir a la respuesta inmune segn su especificidad en Innata y adaptativa. La
Respuesta Inmune Innata (RII) est dirigida contra patrones moleculares comunes a diversos
microrganismos o clulas, su diversidad es limitada asociada a lneas germinales y no presenta
respuesta de memoria. Es la primera en reaccionar ante noxas y su funcin es activar y dirigir a
la respuesta inmune adaptativa y mantener una respuesta localizada y controlada mediante
citoquinas y quimioquinas. La RII est compuesta por elementos celulares (clulas dendrticas y
clulas natural killer) y componentes sricos (citoquinas y protenas del complemento). La
Respuesta Inmune adaptativa (RIA)est dirigida contra antgenos pertenecientes a estructuras
especficas de microrganismos o clulas diferentes a las propias, siendo muy diversa en su
respuesta, con capacidad para generar memoria inmunolgica, lo que permite que su
intensidad ante un segundo estmulo sea ms rpida y especfica. La RIA est compuesta por
linfocitos (B y T) y componentes sricos (citoquinas y anticuerpos.
La Inmunohematologa estudia los procesos inmunolgicos asociados a la respuesta a
elementos sanguneos, siendo las ms importantes aquellas dirigidas a antgenos eritrocitarios
pertenecientes a los diferentes grupos sanguneos. Otros elementos que pueden iniciar una
respuesta inmune son los antgenos leucocitarios, plaquetarios y sricos (ejemplo factores de la
coagulacin).
Los antgenos eritrocitarios son molculas presentes en la superficie eritrocitaria capaces de
iniciar y activar una respuesta inmune (inmungenos). Estos se caracterizan por ser productos
gnicos derivados de variantes allicas, por lo que no todos los individuos presentan una misma
composicin antignica. Ante una transfusin eritrocitaria heterloga, el ingreso de eritrocitos
del donante a circulacin aportar una gran cantidad de molculas que podrn ser
reconocidas por el sistema inmune como no propias, activando una respuesta inmune
principalmente humoral del tipo IgM y/o IgG. Esta respuesta depender del grado de
inmunogenicidad del antgeno y del estado inmunolgico del receptor. Las respuestas ms
importantes son aquellas asociadas a antgenos del grupo sanguneo ABO y Rh.
El grado de gravedad de las respuestas depender principalmente de los anticuerpos
involucrados y las caractersticas de estos en cuanto al isotipo, ttulo, afinidad,avidez, y
activacin del complemento. Por ejemplo: una reaccin a antgenos eritrocitarios mediada
por IgM en alto ttulo, podra asociarse a precipitacin de complejos inmunes o a la activacin
de la va clsica del complemento. Si esta ltima llega hasta la formacin del complejo de
ataque a membrana (MAC), se producir una hemlisis intravascular, con todos los riesgos que
esto conlleva. Una reaccin mediada por IgG, dependiendo del isotipo, opsonizar al
antgeno, permitiendo su reconocimiento por el sistema monoctico-macrofgico, asocindose
principalmente a una hemlisis extra-vascular (Recordemos que solo los isotipos IgG 1 y 3
activan complemento).
La respuesta humoral se caracteriza por la expansin clonal de todos aquellos linfocitos B que
reconozcan al inmungeno presente, es decir todos aquellos linfocitos cuya regin variable
reconozca zonas de una misma molcula reconocida como no propia. Como las molculas
presentan distintos sitios de reconocimiento, siempre que hablemos de una reaccin mediada
44
por anticuerpos ante una molcula completa, es decir, ante distintos antgenos de una misma
molcula, debemos pensar en una reaccin policlonal. Cuando nos refiramos a un proceso
caracterizado por la presencia de un solo tipo de anticuerpos, hablaremos de una respuesta
monoclonal. Este proceso ocurre in vitro o por biologa molecular donde se selecciona y
expande un solo clon de linfocitos antgeno especfico. Esta estar caracterizada por la
presencia de anticuerpos dirigidos contra un solo epitopo, es decir con la misma regin variable
y provenientes de un clon nico de linfocitos B.
El diagnstico inmunohematolgico previo a la transfusin es clave para la prevencin de
reacciones post- transfusionales a antgenos eritrocitarios. Siempre buscaremos la
compatibilidad entre el receptor y el donante. Para esto deberemos testear tanto antgenos (es
decir eritrocitos) como anticuerpos (suero del paciente o antisueros comerciales) mediante
reacciones de inmunoaglutinacin o activacin del complemento. Es fundamental que exista
un gran dominio en los trminos de inmunologa bsica, de tal forma de poder conocerlos y
aplicarlos al trabajo diario de una Unidad de medicina transfusional.
45
Glosario bsico de trminos inmunolgicos e inmunohematolgicos:

Trmino
Antgeno
Inmungeno
Epitopo
Paratopo
Idiotipo
Isotipo
Avidez
Afinidad
Ttulo
Alognico
Respuesta Autloga
Respuesta Heterloga
Suero Monoclonal
Suero Policlonal
Significado
Secuencia molecular reconocida por el sistema inmune. Puede
ser de distintas naturalezas (glicosilada, lipdica o proteica)
Antgeno capaz de activar una respuesta inmune adaptativa.
Regin del antgeno reconocida por la regin variable del
anticuerpo. Puede ser lineal o conformacional.
Regin del anticuerpo que reconoce y une al epitopo. Se ubica
en la fraccin Fab (antigen binding fragment).
Regin del anticuerpo caracterizada por la fraccin variable (Fv).
Est formada por la regin variable de la cadena liviana y
pesada. Contiene al paratopo.
Regin del anticuerpo caracterizada por la fraccin cristalizable
(Fc) del anticuerpo. Est formado por la cadena pesada. Es
determinado genticamente.
Fuerza de interaccin no covalente con la que el paratopo une
al epitopo.
Sumatoria de interacciones que unen a un antgeno con el
anticuerpo. Depende de la afinidad y valencia de las
interacciones.
Concentracin srica del anticuerpo. Se cuantifica mediante
diluciones seriadas del suero.
Refiere a la respuesta inmune a estructuras variables dentro de
una misma especie.
Respuesta inmune a estructuras moleculares propias. Asociada a
una respuesta autoinmune.
Respuesta inmune a estructuras moleculares variables entre
individuos de una misma especie. Es secundaria a la presencia de
molculas de otro individuo que generen activacin de la
respuesta inmune.
Antisuero que contiene anticuerpos provenientes de un solo clon
linfocitario, por lo tanto todos tendrn la misma regin variable
dirigida a un epitopo especfico.
Antisuero que contiene anticuerpos provenientes de distintos
clones
linfocitarios
dirigidos
hacia
distintos
epitopos
pertenecientes a una misma molcula
REACTIVOS BASICOS A USAR EN INMUNOHEMATOLOGIA Y SERVICIOS DE SANGRE

1.- GENERALIDADES:
A.- Definiciones generales:
1.- Mol, peso molecular en gramos: Es el peso, en gramos, de una sustancia igual al peso
molecular de la sustancia (sumatoria de los pesos atmicos).
2.- Solucin molar: Una solucin 1 molar (1M) contiene 1 mol de soluto en 1 litro de
solucin. Si no se indica lo contrario, el solvente siempre debe suponerse que es agua
destilada.
46
3.- Solucin molal: Una solucin molal contiene 1 mol de soluto por Kg. de solvente. Si el
solvente es agua, hay poca diferencia prctica entre solucin molar y molal.
4.-Equivalente gramo: El peso, en gramos, de una sustancia que producir o reaccionar
con 1 mol de in hidrgeno.
5.- Solucin normal: Una solucin 1 normal (1N) contiene el peso de un equivalente
gramo de soluto en 1 litro de solucin.
6.- Soluciones porcentuales: El porcentaje de una solucin da el peso o volumen de
soluto presente en 100 unidades de solucin total. El porcentaje puede expresarse como:
- Peso/peso (p/p), dando gramos de soluto en gramos 100 gramos de solucin.
- Volumen / volumen (v/v), dando mililitros de soluto en 100 ml de solucin.
- Peso / volumen (p/v), dando gramos de soluto en 100 ml de solucin.
Si no se indica lo contrario, se supondr que una solucin expresada en porcentaje
corresponde a p/v.
B.- Dilucin de suero:
En las pruebas serolgicas, suele emplearse suero diluido para determinar entre otros
aspectos, la concentracin de un anticuerpo en dicho suero. Normalmente se expresa el
volumen de suero diluido en unidades (1), indicando 1 parte de suero contenido en el
nmero total de partes de la dilucin. Por ejemplo si se desea diluir 10 veces un suero,
debe hacerse una dilucin 1/10, mezclando 1 parte de suero concentrado con 9 partes
de diluyente, por lo tanto 1/10 no es 1+10 sino 1+9, de manera que el volumen final es 10.
Cada una de las 10 partes de la dilucin contendr un dcimo (1/10 o 0.1) del suero.
Puede prepararse fcilmente una dilucin mayor a partir de una menor, aadiendo la
cantidad necesaria de diluyente. La frmula para calcular la cantidad de diluyente a
aadir para obtener la nueva dilucin mayor deseada es:

=

EJEMPLO:
Se tiene un ml de suero diluido 1/2 y se le aadieron 4 ml de solucin salina Cul ser la
dilucin final?
2
1
= = 10
1
5
10
C.- Dilucin de soluciones expresadas en porcentaje:
Puede preparase diluciones a partir de soluciones ms concentradas expresadas en %
utilizando la siguiente frmula:
1 1 = 2 2
47
V1 X C1 = V2 X C2, donde V1 y C1 representan el volumen y concentracin original, y V2

y C2 representan el volumen y la concentracin final.
D.- Clculo de la fuerza centrfuga relativa en g:

= 28,38 R
1.000
*=
Radio del rotor de centrfuga en pulgadas.
Los tiempos incluyen el tiempo de aceleracin pero no el de deceleracin. Son slo
aproximados. Debe evaluarse cada centrfuga para la preparacin de cada
componente sanguneo y de cada mtodo de laboratorio.
E.- Rangos de temperaturas aceptados en inmunohematologa:
Cuando se establece en un mtodo una temperatura especfica de incubacin, los
rangos aceptados son:
TEMPERATURA
ESTABLECIDA
4C
AMBIENTE
37C
56C
RANGO ACEPTADO
2-8 C
20-24 C
36-38 C
54-58 C
F.- Tiempos de incubacin aceptados en inmunohematologa:

Debe cumplirse estrictamente los tiempos de incubacin establecidos en cada mtodo.
Es aconsejable seguir las instrucciones de cada fabricante de antisueros e incluir controles
positivos y negativos en cada metodologa.
INCUBACION
ESTABLECIDA
CENTRIFUGACION
INMEDIATA
1-5 MINUTOS
5-30 MINUTOS
30-120 MINUTOS
RANGO ACEPTABLE
INMEDIATAMENTE
1-10 MINUTOS
5-60 MINUTOS
30-180 MINUTOS
1.- BUFFER FOSFATO Y BUFFER FOSFATO SALINO

1.-
2.-
3.-
48
Preparar una solucin madre cida (solucin A) disolviendo 22.16 g de NaH2PO4 x

H2O en 1 litro de agua destilada. Esta solucin 0.16 M de la sal fosfato monobsico
tiene un pH de 5.0,
Preparar una solucin madre alcalina (solucin B), disolviendo 17.2 g de Na2HPO4
en 1 litro de agua destilada. Esta solucin 0.16 M de la sal de fosfato dibsico tiene
un pH de 9.0.
Preparar soluciones de trabajo del buffer al pH deseado, mezclando volmenes
adecuados de ambas soluciones. Por ejemplo:
pH
5.5
7.3
7.7
4.5.-
Solucin A
94 ml
16 ml
7 ml
Solucin B
6 ml
84 ml
93 ml
Comprobar el pH de la solucin de trabajo antes de usarla. Aadir pequeos

volmenes de la solucin a o b para alcanzar el pH deseado.
Para preparar el BUFFER FOSFATO SALINO (PBS) a un pH deseado, aadir un
volumen de buffer fosfato a ese pH a nueve volmenes de solucin salina normal
(suero fisiolgico).
2.- PREPARACION DE SUERO AB INERTE

El suero AB inerte tiene mltiples usos en inmunohematologa, desde suero control
negativo de reacciones serolgicas hasta diluyente de anticuerpos en titulaciones. Tiene
las ventajas de ser barato, fcil de preparar y de tener las mismas caractersticas de los
sueros a estudiar, lo que lo convierte en el control negativo ideal.
Es preferible usar suero en vez de plasma en los test serolgicos, ya que el fibringeno
puede formar pequeos cogulos que eventualmente se confunden con aglutinacin.
Al calentar un plasma a 56C durante 1 hora, el fibringeno se denatura, precipitando y al
mismo tiempo se inactiva el complemento.
MATERIALES:
- Plasma AB de un donante con serologa negativa.
- Bao termorregulado a 56C
- Centrfuga adecuada.
PROCEDIMIENTO:
1.Separe una bolsa de plasma fresco grupo AB, compruebe que el donante no
posee anticuerpos irregulares en ningn medio, haciendo los estudios a 4C, 22C
y 37C.
2.Ponga la bolsa transfer bien sellada en un bao a 56C durante 1 hora.
3.Centrifugue a alta velocidad y transfiera el sobrenadante a una bolsa limpia.
4.Deje la bolsa durante toda la noche a 4C.
5.Centrifugue nuevamente a alta velocidad por lo menos durante 10 minutos.
6.Filtre el suero y gurdelo a - 30C en alcuotas.
7.Compruebe la ausencia de aglutinacin con un panel a 4, 22 y 37C.
3.- MEDIO DE BAJA FUERZA INICA (LISS):
1.2.3.4.5.-
PREPARACIN:
En un matraz volumtrico de 1 litro agregue 1.75 g de NaCl y 18 g de glicina.
Prepare un buffer fosfato, combinando 11.3 ml de KH2PO4 0.15M, y 8.7 ml de
Na2HPO4 0.15M.
Agregue 20 ml de este buffer al matraz dispuesto en pto. 1.
Agregue agua destilada hasta completar 1 litro.
Ajuste a pH 6.7 con NaOH. Agregue 0.5 g de azida de sodio como preservativo.
NOTA: Al agregar esta cantidad de azida de sodio, la fuerza inica sube de 0.0355
a 0.043. Esto no establece diferencias prcticas en la reactividad serolgica de los
anticuerpos.
49
4.- EDTA - SALINO(para suspender GR testigos A y B)

Los anticuerpos anti-A y Anti-B causan directamente aglutinacin y/o lisis de los GR. El uso
de EDTA en el medio de suspensin, produce quelacin del Ca++, quien es esencial para
la integridad de la molcula C1 del sistema del complemento. De esta forma se inhibe la
lisis celular.
REACTIVOS:
- EDTA dipotsico dihidratado(K2EDTA x 2H2O):
- Hidrxido de sodio(Na OH):
- Salino normal 0.85% o Cloruro de sodio 0.9%:
25 g
2g
1 litro
PROCEDIMIENTO:
1.Mezcle el EDTA con el salino normal en un matraz apropiado.
2.Agregue el NaOH y mezcle sobre un agitador magntico.
3.Deje la mezcla durante toda la noche para que se estabilice.
4.Mezcle nuevamente y realice control de calidad correspondiente (pH). Coloque
nombre y fecha al reactivo.
NOTAS:
1.Antes de usar cada lote de EDTA hay que comprobar pH y que inhibe la lisis
celular en presencia de anti-A y anti-B hemolticos.
2.La osmolaridad del EDTA salino debe ser 450 mOsm/kg y su pH 6.7 +/- 0.2.
5.- SOLUCION DE ALSEVER MODIFICADA:
Esta solucin permite almacenar eritrocitos "in vitro" para uso de laboratorio a 4C por
varias semanas. Contiene antibiticos que retarda el crecimiento bacteriano.
REACTIVOS:
- Cloranfenicol:
- cido ctrico monohidratado:
(C6H8O7 x H2O)
- Dextrosa:
(C6H12O6
- sulfato de neomicina:
- Cloruro de sodio:
(NaCl)
- Citrato trisdico:
(C6H5Na3O7 x 2H2O)
0.33 g
0.5 g
19.0 g
0.5 g
4.2 g
8.0 g
PROCEDIMIENTO:
1.- Disolver en aproximadamente 600 ml de agua destilada el cido ctrico, dextrosa,
cloruro y citrato de sodio.
2.- Agregue el cloranfenicol, y neomicina; mezcle bien.
3.- Diluya hasta completar 1 litro con agua destilada.
4.- Guarde a 4C.
5.- Para su uso mezcle 1 volumen de esta solucin con 1 volumen de sangre total.
Tambin puede preparar soluciones al 3-5% en solucin Alsever. Guardar a 4C.
50
6.- CONVERSION DE PLASMA A SUERO

Es preferible usar suero a plasma en tests serolgicos, porque el fibringeno que hay en el
plasma puede formar pequeos cogulos que conducen a error en la lectura al ser
confundidos con aglutinacin.
Tcnica por calor.
Al calentar el plasma a 56C por 60 min. se denatura el fibringeno, el que precipita, y al
mismo tiempo se inactiva el complemento.
MATERIALES:
- Bao termorregulado a 56C.
- Centrfuga adecuada.
- Tubos de vidrio adecuados.
MTODO:
1.Centrifugar la muestra a altavelocidad y separar el plasma de los elementos
celulares.
2.Colocar el plasma a un envase de vidrio preferentemente, y volver a centrifugar a
alta velocidad para eliminar toda contaminacin celular.
3.Depositar el plasma en un tubo limpio y dejar incubar a 56C por una hora.
4.Centrifugar el plasma tratado con calor y transferir a un tubo limpio (idealmente
estril).
5.El suero puede necesitar ms centrifugacin y/o filtrado antes de su uso.
TRATAMIENTO DE MUESTRAS CON COAGULACION INCOMPLETA
En muestras que no han completado el proceso de la coagulacin, puede continuar
generndose fibrina una vez separado el suero de los GR, especialmente durante su
incubacin a 37C. Este proceso hace que las protenas atrapen eritrocitos, haciendo
muy difcil la lectura y la evaluacin de la aglutinacin. La sangre obtenida de pacientes
que estn en tratamiento con heparina, puede no coagular, y aquella obtenida de
pacientes con actividad fibrinoltica excesiva, puede licuarse, o contener fragmentos que
interferirn en la lectura en busca de aglutinacin.
MATERIALES:
- Trombina: humana/bovina seca o solucin de trombina (50 unidades/mL en salino)
- Baguetas de vidrio
- Sulfato de protamina: 10 mg/mL en salino
- Acido epsilon aminocaproico (EACA): 0.25 g/mL en salino
PROCEDIMIENTO:
1.Para acelerar el proceso de coagulacin pueden utilizarse diferentes tcnicas:
a)
Agregar a la sangre total o al suero obtenido la cantidad de trombina seca que se
adhiera a una bagueta seca, o 1 gota de la solucin de trombina por mL de
sangre.
b)
Agitar suavemente el suero obtenido en un tubo con una bagueta de vidrio,
mientras se incuba a 37C por varios minutos. Centrifugue y use el suero
sobrenadante.
2.Para neutralizar la heparina, agregar 1 o ms gotas de la solucin al 1% de sulfato
de protamina (10 mg/mL) en salino a 4 mL de sangre total.
51
3.-
Para inhibir la actividad fibrinoltica, agregue 0.1 mL de EACA a 4 ml de sangre

total fresca.
NOTAS:
1.-Use la protamina con precaucin, ya que usada en exceso causa formacin de
rouleaux, y en gran cantidad acta inhibiendo la coagulacin.
2.-La trombina de origen humano puede estar contaminada con anti-A y anti-B.
PREPARACION DE LECTINAS PARA USO EN INMUNOHEMATOLOGIA
Los extractos salinos de las semillas pueden servir como reactivos en Inmunohematologa y
son altamente especficos en diluciones apropiadas. Son fciles de preparar y de usar pero
pueden ser difciles de obtener.
Los ms usados son el extracto de Dolichos Biflorus, que aglutina glbulos rojos A1 y A1B, y
el de Hulex Europeus que reacciona con clulas con actividad antignica H en forma
proporcional a la cantidad existente.
Existen otras lectinas que se utilizan para la tipificacin de antgenos M y N, y para el
estudio de los fenmenos de poliaglutinacin.
PREPARACIN:
1.- Muela la semilla hasta que quede como arena gruesa. Puede usar un mortero o bien
usar la semilla entera.
2.- Coloque en un vaso o en tubo las semillas molidas y agregue 3 o 4 veces ms su
volumen de suero salino. (Para 1 gr. de Hulex Europeus utilizar 10 ml de salino)
3.- Incube a temperatura ambiente por 4 - 12 horas agitando de vez en cuando.
4.- Centrifugue durante 5 minutos a 3500 rpm el sobrenadante. Fltrelo.
5.- Determine la actividad del extracto con las clulas apropiadas.
PARA DOLICHOS BIFLORUS:
1.- Coloque 1 gota de extracto a cada uno de 3 tubos marcados A1, A2 y 0. Pueden
usarse eritrocitos B, A1B y A2B.
2.- Agregue a cada tubo una gota de eritrocitos correspondientes suspendidos en salino
al 3%
3.- Centrifugue el tiempo estandarizado para lectura en salino en su centrfuga.
4.- Observe los tubos en busca de aglutinacin y anote los resultados.
5.- La lectina debe aglutinar los eritrocitos A1 y A1B pero no los 0, A2 y A2B. A menudo el
extracto nativo aglutina todos los eritrocitos estudiados, por lo que hay que buscar la
dilucin adecuada en cada caso. (Buscar la dilucin que de una reaccin de 3+ o 4+
con A1 y A1B pero no con los otros grupos.
PARA ULEX EUROPAEUS:
1.- Enfrente la lectina con glbulos rojos A1, A2, A1B, A2B, y O.
2.- La fuerza de la aglutinacin deber ser en la siguiente secuencia: O, A2, B, A1, A1B
3.- Diluya con salino si fuera necesario de manera que los eritrocitos O aglutinen 3+ o 4+,
con A2 de una intensidad menos y reaccin negativa o muy dbil con A1 y A1B.
4.- Guarde el extracto en el refrigerador por varios das o en freezer por perodos ms
largos, que pueden ser indefinidos.
5.- Al usar la lectina use siempre controles positivos y negativos.
52
REACCION DE CELULAS POLIAGLUTINABLES CON LECTINAS

______________________________________________
LECTINA
T
Tn
Tk
Cad
______________________________________________
Arachis hypogoea +
+
Salvia sclarea
+
Salvia horminum
+
+
Glycine Soya
+
+
+
Dolichos Biflorus
+
+
LAVADO DE ERITROCITOS Y PREPARACION DE SUSPENSIONES CELULARES

Los eritrocitos lavados son necesarios en la mayora de las tcnicas inmunohematolgicas.
Los eritrocitos deben ser lavados al menos 1 vez para eliminar el plasma, ya que este
puede inducir resultados falsos positivos en los mtodos utilizados al generarse pequeos
cogulos o interferir con la reaccin Ag-Ac. Tambin las sustancias de grupo sanguneo
presentes en el plasma pueden producir reacciones falsas negativas debido a la
neutralizacin del anticuerpo.
Para los test Inmunohematolgicos se usan generalmente suspensiones globulares dbiles
ya que la proporcin suero/clulas afecta directamente la sensibilidad de la mayora de
los test, para producir aglutinacin o ser detectados por medio del test antiglobulina
humano indirecto (TAI), debe existir un mnimo de molculas de anticuerpo recubriendo los
eritrocitos para que la reaccin se observe como positiva.
MATERIALES
- Muestra de sangre o eritrocitos
- Buffer fosfato salino (PBS) o salino tamponado
- Tubos de Khan
- Centrfuga para Inmunohematologa
METODO
1.- Coloque la cantidad deseada de eritrocitos en un tubo Khan (noms de 0.5 ml).
2.- Llene el tubo hasta 1 cm del borde superior
3.- Centrifugue a la velocidad y el tiempo estandarizado para lavado de clulas.
4.- Elimine cuidadosamente el sobrenadante.
5.- Agite el tubo para resuspender en el lquido residual, los eritrocitos que han quedado
adheridos a la pared del tubo. Esto constituye 1 lavado, repita los pasos 1 - 5 las veces
que estipule cada procedimiento.
6.- El ltimo lavado siempre debe presentar un sobrenadante claro, sin signos de hemlisis.
7.- Para hacer una suspensin al 5%, agregue 1 volumen de eritrocitos concentrados a 19
volmenes de PBS.
8.- Para hacer una suspensin al 3%, agregue 1 volumen de eritrocitos concentrados a 32
volmenes de PBS.
NOTA: Salino tamponado se refiere a una solucin de NaCl al 0.85%, cuyo pH se ha
ajustado a 7. Los eritrocitos se suspenden en salino o PBS a no ser que se establezca lo
contrario.
53
GRADUACION DE LOS RESULTADOS INMUNO-HEMATOLOGICOSEN TUBO:

Una reaccin positiva se manifiesta por medio de aglutinacin o hemlisis. Debe
estandarizarse la graduacin de la intensidad de reaccin de los resultados de los test
inmunohematolgicos, entre los miembros de un servicio de Banco de Sangre, con el fin de
uniformar criterios y reproductibilidad de los resultados. La graduacin puede ser en cruces
o en puntaje segn sea el caso.
MATERIAL
- Centrfuga serolgica para aglutinacin.
- Lector de aglutinacin
- Eritrocitos y anticuerpos especficos
METODO
1.- Luego de una centrifugacin estandarizada para lectura, agite suavemente el tubo
hacindolo rotar hacia adelante y hacia atrs por varias veces.
2.- Observe la forma como los eritrocitos se liberan del botn producido por la
centrifugacin previa.
3.- Registre los resultados de acuerdo a lo establecido en el esquema de la pgina
siguiente.
NOTAS:
1.- Despus de la centrifugacin debe examinarse el sobrenadante en busca de hemlisis,
la que debe registrarse como un resultado positivo.
2.- Signos de la tabla:
Grumos= Aglutinacin Macro= Macroscpico Micro= Microscpico GR= Glbulos rojos
54
FUERZA
4+
3-1/2+
3+
GRADO
C
4+w o 3+s
3+
PUNTAJE
12
11
10
2-1/2+
3+w o 2+s
APARIENCIA
Botn nico, sin clulas libres
Reaccin fuerte. Numerosos aglutinados
grandes
2+
2+
2+w
2+w
1-1/2+
1+s
1+
1+
1+w
1+w
1/2+
+/- Macro
Trazas o
Micro
Dudoso
0
(+)
Micro
(OR)
0
2
1
0
Grumos grandes en un mar de grumos

pequeos. Sin GR libres
Muchos grumos medianos y pequeos sin GR
libres
Muchos grumos medianos y pequeos. Con GR
libres
Muchos grumos pequeos en un mar de GR
libres
Muchos grumos muy pequeos con muchos GR
libres
Granularidad dbil en la suspensin de GR
Algunos grumos macro y muchos micro.
Macro -, Algunos grumos de 6-8 GRS en muchos
campos
Raros grumos micro
No se detectan grumos
GRADUACION DE LOS RESULTADOS INMUNO-HEMATOLOGICOS COLUMNA (TARJETA):

Esta tcnica consiste en una tarjeta plstica con 6 a 8 microcolumnas, las cuales tienen
una cmara de reaccin en la parte superior y en la parte inferior tienen un gel
transparente o microesferas de vidrio, los que pueden contener suero anti-globulina
humana o cualquier otro antisuero dependiendo de lo que se quiera determinar(tambin
pueden ser neutros).
La determinacin de aglutinacin en por medio de esta tcnica se basa en la separacin

de los eritrocitos en un gel poroso o microesferas de vidrio en relacin a su tamao,
posterior a una centrifugacin, donde los de mayor tamao debido a la aglutinacin,
quedarn atrapados en la regin superior de la columna y los de menor tamaos, y que
por lo tanto no han aglutinado, o lo han hecho en menor grado, quedan atrapados a lo
largo de la columna o pasan al fondo de esta.
Esta tcnica tiene como objetivo estandarizar el uso de rectivos y la lectura de la reaccin
antgenos anticuerpo con facilidad y repetitividad, permitiendo de esta forma disminuir la
influencia del operador.
MATERIALES:
-Pipeta automtica y puntas desechables.
-Tubos de vidrio.
55
-Centrfuga para tarjetas.

-Incubador para tarjetas.
MUESTRA BIOLGICA :
- Glbulos rojos
- suero con anticuerpo especfico
RECTIVOS:
-Tarjetas para aglutinacin en columna.
-Solucin salina o PBS
METODOS:
1. .Aplicar a cada columna de los eritrocitos debidamente diluidos y los anticuerpos
especficos .
2. Centrifugar la tarjeta de geles segn indicaciones del fabricante.
3. Observar cmo se distribuyen los eritrocitos a travs de cada columna.
4. Registrar los resultados en cruces segn la siguiente imagen.
CALIBRACION DE CENTRIFUGAS SEROLOGICAS PARA INMUNOHEMATOLOGIA

Cada centrfuga debe ser calibrada al recibirla o despus de un ajuste o reparacin. La
calibracin de una centrfuga evala el comportamiento de las clulas en soluciones de
diferente viscosidad por lo que cada procedimiento debe estandarizarse teniendo esto
presente.
A.- Calibracin para lectura:
1.- Utilice un suero que contenga un anticuerpo que produzca una aglutinacin
macroscpica de 1+.
2.- Seleccione eritrocitos positivos y negativos para el Ag en cuestin y prepara
suspensiones frescas en las concentraciones utilizadas rutinariamente en el laboratorio,
por ejemplo 2 y 3%:
a.- Para anticuerpos activos en salino: Utilice suero Anti-A diluido en albmina al 6%, hasta
dar una reaccin macroscpica de 1+. (3 ml de albmina al 22% + 1 ml salino =
albmina al 6%).
b.- Para anticuerpos reactivos en medios de alto contenido proteico: Utilice 1 parte de AntiD diluido con 25 a 30 partes de albmina al 22 - 30% hasta dar una aglutinacin
macroscpica de 1+.
3.- Para cada set de prueba (punto a y b), prepara 5 tubos Khan para reacciones positivas
y 5 para reacciones negativas. Agregue el suero y las clulas correspondientes justo
antes de centrifugar.
56
4.- En parejas, un positivo con un negativo, centrifugue los tubos a una misma velocidad
pero durante tiempos diferentes y observe en busca de aglutinacin. Anote los
resultados en su registro de acuerdo al siguiente ejemplo:
CRITERIO
Sobrenadante claro
Botn celular claramente
delimitado
Clulas se resuspenden
fcilmente
Aglutinaciones
Control negativo
TIEMPO EN SEGUNDOS
15
20
30
NO
SI
SI
NO
SI
SI
10
NO
NO
45
SI
SI
SI
SI
SI
SI
NO
+
-
+
-
1+
-
1+
-
1+
+
5.-El tiempo ptimo de centrifugacin para lectura, es el tiempo mnimo necesario para
cumplir con todos los criterios establecidos. En el ejemplo corresponde a 20 segundos.
B.- Calibracin para lavado de clulas:
El lavado es una fase fundamental de la tcnica de Antiglobulina Humana, por lo que
es fundamental establecer claramente las condiciones de centrifugacin para lavado y
lectura de este mtodo. Puede determinarse en un solo procedimiento las condiciones
ptimas de lavado y lectura para el test AGH.
MATERIALES
1.- Suero antiglobulina humana
2.- Control positivo: Una suspensin al 2-4% en salino de eritrocitos D + incubados durante 15
minutos a 37C, con un suero anti-D que presente una reaccin de 1+ al agregarse
suero AGH.
3.- Control negativo:Una suspensin al 2-4% en salino de los mismos eritrocitos D +,
incubados durante 15 minutos a 37C con una solucin de albmina al 6%
4.- PBS.
METODO
1.- Prepare dos bateras de 5 tubos Khan, una para los controles positivos y la otra para los
negativos y mrquelos de acuerdo al tiempo elegido
2.- Agregue a cada tubo los eritrocitos que correspondan.
3.- Llene los tubos con suero salino y centrifugue los pares por el tiempo estipulado.
CRITERIO
Lnea de eritrocitos en la
pared del tubo
delimitado
1
NO
TIEMPO EN MINUTOS
1,5
2
2,5
NO
SI
SI
3
SI
NO
NO
SI
NO
SI
4.- Observe cuidadosamente los eritrocitos despus de la centrifugacin, ellos deben estar
en el fondo del tubo, formando un botn delimitado. No debe haber eritrocitos en la
57
pared formando una lnea que atraviesa a lo largo del tubo. En el cuadro anterior se
seleccionara el Tiempo de 2,5 Minutos.
5.- Lavar TODOS los tubos tres veces ms por el tiempo seleccionado (2,5 minutos segn el
ejemplo)
6.- Elimine el salino sobrenadante por inversin de todos los tubos, evitando perder
eritrocitos y el botn debe quedar seco.
7.- Agregue 1 o 2 gotas de suero AGH a cada tubo y centrifugue por diferentes tiempos (de
acuerdo al cuadro de lectura).
8.- Seleccione el tiempo ptimo aplicando los criterios descritos en los puntos 4 y 5 del
procedimiento de calibracin de lectura.
CRITERIO
Sobrenadante claro
delimitado
Clulas se resuspenden
fcilmente
Aglutinaciones
Control negativo
10
NO
NO
TIEMPO EN SEGUNDOS
15
20
30
NO
SI
SI
NO
SI
SI
45
SI
SI
SI
SI
SI
SI
NO
+
-
+
-
1+
-
1+
-
1+
+
CARACTERISTICAS DE LOS SUEROS CLASIFICADORES.

La confiabilidad de todo examen de laboratorio depende, entre otras variables, de la
calidad de los reactivos utilizados, por lo tanto, es fundamental conocer su origen,
composicin, modo de preparacin, uso y conservacin.
De igual importancia es seguir estrictamente las instrucciones dadas por el fabricante y
efectuar control de calidad, para comprobar si renen los requisitos mnimos que otorgarn
seguridad a los resultados obtenidos. En un Servicio de Banco de Sangre, dadas las
caractersticas propias de su quehacer, esto adquiere especial importancia para lograr
seguridad transfusional en beneficio del paciente.
REQUISITOS:
Los sueros clasificadores de grupo sanguneo deben cumplir ciertos requisitos mnimos.
1. Ausencia de hemlisis, grasas, precipitado.
2. Ausencia de contaminacin bacteriana.
3. Ausencia de formacin de rouleaux, fenmeno de prosona, poliaglutinacin y de
aglutinacin inespecfica.
4. Ausencia de anticuerpos irregulares.
5. Libre de enfermedades infecciosas de transmisin sangunea.
6. Especificidad.
7. Potencia.
8. Avidez.
ESPECIFICIDAD:
Es la reactividad selectiva de un anticuerpo con su antgeno especfico. Se puede
determinar estudiando el suero reactivo con glbulos rojos de 4 diferentes muestras que
contengan el antgeno especfico y con igual nmero de muestras conocidas que
carezcan de l.
58
El suero en estudio debe dar reacciones intensas de aglutinacin (sin hemlisis) con los
glbulos rojos que poseen el antgeno especfico y no deben reaccionar con aquellos que
carecen de l.
MUESTRA:
Suero clasificador en estudio.
MATERIAL:
- Tubos de vidrio 12 x 75 mm. (Kahn)
- Pipetas Pasteur con capuchn de goma.
- Centrfuga para inmunohematologa previamente calibrada.
- Fuente luminosa para lectura.
REACTIVOS:
- Buffer salino fosfatado PBS
- EDTA al 5%
- Glbulos rojos de grupo A1, A 2, B, A1B, A 2B, O, previamente lavados.
- Glbulos rojos de grupo A,B,O r'r (Cde/cde)
O r0r (CdE/cde)
O r"r (cdE/cde)
O r r (cde/cde)
METODO:
1.- Preparar una suspensin al 3% en EDTA 5% de glbulos rojos de grupo A1, A 2, B, A1B, A2B,
O. (4 de c/u).
2.- Marcar igual nmero de tubos de Kahn por cada suero en estudio.
3.- Agregar a cada tubo 1 gota de la suspensin de glbulos rojos correspondiente.
4.- Agregar a cada tubo 2 gotas del suero en estudio.
5.- Mezclar y centrifugar inmediatamente, segn tiempo y velocidad estandarizados.
6.- Efectuar lectura macroscpica verificando la presencia o ausencia de aglutinacin y
hemlisis. Anotar los resultados.
POTENCIA:
Fuerza del anticuerpo que se mide test de avidez, intensidad y titulacin. La avidez es
influenciada por: fuerza del antgeno presente en los glbulos rojos reactivos, el medio y
concentracin de la suspensin y la temperatura.
AVIDEZ E INTENSIDAD:
Medida de capacidad de unin y rapidez con que el Ac. se combina
correspondiente Ag.
con su
MATERIAL:
- Lmina y baguetas de vidrio
- Pipetas Pasteur con capuchn de goma
- Cronmetro
REACTIVOS:
- Buffer salino fosfatado PBS
- Glbulos rojos de grupo A1, A 2, B, A1B, A 2B, O.
- Suero clasificador en estudio.
MTODO:
59
1.- Depositar en una lmina de vidrio a temperatura ambiente, 2 gotas del suero en estudio
sin diluir, ms 1 gota de glbulos rojos al 40% en suero homologo y que posean el
antgeno especfico.
2.- Mezclar con bagueta de vidrio y describir un crculo de 2,5 cm de dimetro.
3.- Cronometrar el tiempo transcurrido a partir de la mezcla y el inicio de la reaccin y el
grado de aglutinacin al cumplirse 1 min.
TITULO
Medida de fuerza del Ac, obtenida por dilucin seriada del suero que lo contiene y en
contacto con su Ag. especfico.
MTODO:Efectuar tcnica de titulacin de Ac. IgM.
REQUISITOS MINIMOS EXIGIDOS PARA SUEROS CLASIFICADORES ABO

________________________________________________________________
* AVIDEZ
* INTENSIDAD
________________________________________________________________
AABB OMS MINSAL
AABB OMS MINSAL
ANTI A
GR A1
15"
10"
10"
4+ 4+ 3+ 4+ s/d
GR A2
30"
20"
20"
3+ 3+ 3+
s/d
GR A2B 45"
30"
30"
1+ 2+ 2+
s/d
ANTI B
GR B
15"
10"
10"
4+ 4+ 3+ 4+ s/d
________________________________________________________________
* Mtodo en lmina
___________________________________________
TITULO
___________________________________________
AABB OMS MINSAL
ANTI A
GR A1
256
64
128
GR A2
128
32
64
GR A2B
64
8
32
ANTI B
GR B
256
64
128
___________________________________________
60
CLASIFICACION DEL SISTEMA ABO

TCNICA EN TUBO
MUESTRA
Sangre completa con o sin anticoagulante
MATERIAL
- Pipetas Pasteur
- Tubos Khan (11x75)
- Gradillas para tubos Khan
- Centrfuga para Inmunohematologa
- Lector de aglutinacin
REACTIVOS
- Sueros anti-A y anti-B si utiliza reactivos monoclonal.
- Eritrocitos testigos A1 y B lavados y suspendidos al 2-4% en EDTA o PBS (1 volumen de
eritrocitos y 32 volmenes de diluyente). Ellos deben ser frescos e idealmente Rh
negativos. La suspensin debe prepararse diariamente.
- EDTA al 1,5% en suero fisiolgico.
- PBS o suero fisiolgico tamponado
METODO
1.- Numerar las muestras a clasificar y colocarlas ordenadamente en una gradilla
apropiada.
2.- Colocar en la gradilla 5 tubos previamente marcados con las letras A, B, GRA, GRB, PA,
bajo cada muestra a clasificar.
3.- Deposite en un tubo previamente marcado una alcuota de eritrocitos de la muestra en
estudio, y proceda a lavarlos por al menos 1 vez con PBS.
4.- Colocar 2 gotas de suero anti-A en el tubo marcado A; 2 gotas de suero anti-B en el
tubo marcado B; 1 gota de GR testigos A1 en el tubo marcado GRA; 1 gota de GR
testigos B en el tubo marcado GRB.
5.- Agregar a los tubos marcados GRA, GRB y PA, 2 gotas del suero de la muestra.
6.- Agregar a los tubos marcados A, B, y PA 1 gota de la suspensin al 3% de los eritrocitos
de la muestra.
7.- Mezclar y centrifugar todos los tubos por el tiempo estandarizado para lectura en su
centrfuga.
8.- Girar suavemente hacia adelante y atrs el tubo, y ayudndose con un lector de
aglutinacin proceda a registrar los resultados en intensidad de cruces.
NOTA:
1.- El punto 7 puede ser reemplazado por una incubacin de 1 hora a temperatura
ambiente y luego lectura sin centrifugar.
2.- Cuando se desea clasificar un gran nmero de muestras, puede en vez de lavar como
lo indica el punto 4, proceder a resuspender los eritrocitos en suficiente cantidad de PBS
como para lograr una suspensin al 2-3%.
INTERPRETACION
En el cuadro siguiente se presentan los resultados esperados, correspondiendo a los
fenotipos ABO ms frecuentes.
61
Reaccin de clulas con

Reaccin del suero con clulas
Interpretacin
antisueros
testigo.
GRUPO
Anti-A
Anti-B
Clulas A
Clulas B
0
0
+
+
O
+
0
0
+
A
0
+
+
0
B
+
+
0
0
AB
0= no aglutinacin
+= aglutinacin
Cuando los resultados entre ambas pruebas no concuerdan, existe una discrepancia, la
que debe ser investigada antes de informar el grupo ABO. Si la discrepancia se presenta en
una unidad de sangre donada, sta debe mantenerse aparte y no transfundirla hasta
resolver el problema. Cuando la discrepancia se presenta en un paciente que requiere
una transfusin, l puede ser transfundido con eritrocitos concentrados del grupo O, Rh
compatible, para solucionar la emergencia, teniendo la precaucin de obtener
previamente una muestra suficiente como para resolver el caso.
Las discrepancias en una clasificacin ABO pueden deberse a:
1- Errores tcnicos
- Material sucio.
- Contaminacin bacteriana de las muestras.
- Contaminacin de reactivos, sueros y clulas.
- Proporcin incorrecta de la relacin suero/clulas
- Exceso o falta de centrifugacin
- Falta de adicin de reactivos y muestra
- Temperatura de incubacin incorrecta
- Prdida de actividad de los reactivos
- Empleo inadecuado de reactivos y clulas testigos
- Presencia de hemlisis en la muestra
- Identificacin incorrecta de la muestra, tubos.
- Registros mal llevados e incompletos.
- Etc.
2- Problemas inherentes a las clulas

- Presencia de gelatina de Wharton en muestras de cordn
- Pacientes recientemente transfundidos.
-Autosensibilizacin de los GR del paciente (autoanticuerpos) o EHRN
- Poliaglutinacin
- Antgenos dbiles de A y/o B
-Pacientes que sufren de patologas infecciosas importantes (Ag. B adquirido) u otras
patologas malignas.
-Presencia de altas concentraciones de sustancias de grupo sanguneo en el plasma.
- Etc.
3- Problemas inherentes al suero
-Presencia de anticuerpos irregulares fros
-Patologas que se caracterizan por alto contenido de protenas plasmticas
- Pacientes que estn recibiendo expansores plasmticos de alto peso molecular
- Pacientes que carecen de anticuerpos, o los presentan en ttulos muy bajos.
62
- Etc.
CONTROL DE CALIDAD:
a.-Tipificacin de antgenos: GR A2, A2B, B, O y autocontrol.
b.-Deteccin de anticuerpos: Suero AB inerte
c.-Chequear los GR. testigos
Estos controles deben incluirse en cada serie de tests.
PREGUNTAS A RESPONDER:
1.- Cul es la causa de cada uno de los factores de error descritos?
2.- Cmo interfieren en la clasificacin ABO los factores de error descritos?
3.- Producen resultados falsos positivo o negativo?
4.- Existen otras causas de error en la clasificacin ABO que no aparezcan en este listado?
5.- Cmo se resuelve cada una de las discrepancias indicadas?
6.- Elabore un esquema a aplicar en el laboratorio en que se describa paso a paso lo que
debe realizarse en la resolucin de una discrepancia.
Existen subgrupos de A y B, que corresponden a expresiones fenotpicas ms dbiles de los
antgenos habituales y que en el laboratorio pueden investigarse apoyndose en el siguiente
esquema:
63
SUBGRUPO
A1
Aint
A2
A3
Ax
Ael
Am
B
B3
Bx
REACCION CON
ANTISUEROS
Anti Anti Anti Anti
A AB A1 H
4+ 4+ 4+ 0
4+ 4+ 2+ 3+
4+ 4+ 0
2+
2+# 2+# 0
3+
0/ 2+ 0
3+
0
0
0
4+
0/ 0/ 0
4+
0 4+
0
0
0 2+# 0
4+
0 0/2+ 0
4+
*: ocasionalmente forman anti-A1
REACCION CON
ERITROCITOS
A1 A2 B O
0 0
0 0
0* 0
0* 0
2+ 0
2+ 0
0 0
4+ 4+
4+ 4+
4+ 4+
4+
4+
4+
4+
4+
4+
4+
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
ANTIGENOS EN
SECRECION
SALIVA
AyH
AyH
AyH
AyH
H
H
AyH
ByH
ByH
H
#: campo mixto. : frecuentemente forman anti-A1.
TECNICA DE AGLUTINACIN EN COLUMNA ( TARJETA):

Para realizar una determinacin ABO con esta tcnica, debemos utilizar una tarjeta que
contenga columnas con Anticuerpos anti-A, anti-B, y 2 columnas neutras para realizar la
preuba inversar con suero o plasma del paciente y glbulos rojos testigos A1 y B.
MUESTRA
-Sangre completa con anticoagulante.
MATERIALES
-Pipeta automtica.
-Puntas desechables para pipeta.
-Tubos Khan.
-Gradilla para tubos Khan.
-Centrifuga para tarjetas.
REACTIVOS
-Tarjetas de gel para tipificacin ABO.
-Solucin salina.
-Eritrocitos testigos anti- A1y anti- B.
METODO
-Numere las muestras a clasificar y colocarlas ordenadamente en una gradilla apropiada.
-Colocar tras cada muestra un tubo khan numerado igual que la muestra.
-Preparar en el tubo Khan una suspensin de hematesen medio Salino(segn instrucciones
del fabricante).
-Aadir la suspensinde glbulos rojos previamente hecha a las columnas identificadas
como A, B y Ctl.
- Aadir los GR testigos A1 a la columna identificada como NA1 y los GR testigos B a la
columna identificada como NB.
-Aadir plasma de la muestra a las columnas marcadas como NA1y NB l.
-Centrifugar la tarjeta por el tiempo estandarizado.
-Leer la tarjeta segn ubicacin de los eritrocitos a lo largo de la columna.
64
INTERPRETACIN
La interpretacin de la determinacin de grupo ABO al igual que en tubo se realiza en
cruces de 1 a 4.
DETERMINACION DE ANTIGENOS SOLUBLES ABH Y LEWIS EN SALIVA

En Chile aproximadamente el 83% de la poblacin presenta antgenos solubles del sistema
ABO en la saliva, y por lo tanto poseen el gen Se, quien es el responsable de su presencia en
este y otros fluidos corporales.
RECOLECCION DE LA SALIVA
1.- Obtenga entre 5 a 10 ml de saliva en un tubo ancho, de preferencia enjuagndose la
boca previamente con abundante agua. La mayora de los individuos puede acumular
esta
cantidad en varios minutos. Para fomentar la salivacin, el paciente puede
mascar cera especial, lmina de parafina o cinta de goma, pero no chicle ni cualquier
material que contenga azcar o protenas.
2.- Centrifugue la saliva a alta velocidad durante 10 minutos. Transfiera el sobrenadante a un
tubo limpio.
3.- Coloque el tubo con la saliva en un bao Mara hirviendo por 10 min para inactivar las
enzimas salivares.
4.- Obtenga en otro tubo el sobrenadante claro y transparente, descartando la parte slida
y opaca. Diluya la saliva con un volumen igual de salino.
5.- Refrigere si el test no se realizar en las prximas horas. Si este no se realiza en el da de
coleccin, congele la muestra la que permanecer estable por varios aos.
REACTIVOS:
-(seleccione el reactivo de acuerdo al antgeno que desee detectar)
-Anti-A y anti-B policlonal (humano).
-Lectina anti-H de Ulex europeus.
-Anti-Lea policlonal (conejo/cabra).
-GR testigos A1 y B, de iguales caractersticas a los utilizados en la clasificacin ABO.
-GR grupo O, Lea +, con las caractersticas de los usados en deteccin de anticuerpos
irregulares
PROCEDIMIENTO:
A.- Seleccin de la dilucin del antisuero:
1.- Prepare diluciones seriadas del anticuerpo seleccionado. Puede usar lectina anti-H para
ABO y anti-Lea para el sistema Lewis.
2.- Coloque en tubos previamente rotulados con la dilucin correspondiente una gota de
dilucin y una gota de la suspensin al 2-5 % en salino de los eritrocitos apropiados.
3.- Centrifugue y observe en busca de aglutinacin macroscpica.
4.- Seleccione para el test la menor dilucin que presente una aglutinacin de 2+.
B.- Estudio de la condicin de secretor:
1.- Marque 4 tubos como: control+, control-, test y control de dilucin.
2.- Agregue a cada uno de los tubos ya marcados, una gota del antisuero apropiado y
previamente seleccionado de acuerdo al procedimiento descrito en A.
3.- Agregue al tubo marcado control+ una gota de saliva control de un individuo no
secretor, al tubo control- una gota de saliva de un individuo secretor, al tubo test una
gota de la
saliva en estudio y al tubo control dilucin una gota de suero salino.
4.- Mezcle los tubos e incbelos por 10 minutos a temperatura ambiente.
65
5.- Agregue una gota de suspensin al 3% en salino de eritrocitos que posean el antgeno
para el antisuero que se est utilizando.
6.- Mezcle el contenido del tubo e incube 30 a 60 minutos a temperatura ambiente.
7.- Centrifugue el tiempo estandarizado para lectura en salino en su centrfuga, y observe los
tubos en busca de aglutinacin macroscpica. Registre los resultados.
INTERPRETACION DEL TEST DE SALIVA
Compare sus resultados con la siguiente tabla:
Saliva Test
Saliva Se
Saliva no SE
2+
-
2+
2+
Control
Dilucin
2+
2+
Interpretacin
No Secretor
Secretor
1.- La aglutinacin de los GR testigos en el tubo test indica ausencia del correspondiente Ag
en la saliva.
2.- No aglutinacin de los GR testigos en el tubo test indica presencia del Ag
correspondiente en la saliva.
3.- Ausencia de aglutinacin en el tubo control dilucin indica que el reactivo (Ac)
empleado est demasiado diluido. Debe repetir el paso A de este procedimiento.
NOTA: Este test puede ser adaptado para hacer mediciones semicuantitativas de actividad
de grupo sanguneo al estudiar diluciones seriadas en salino de la saliva. Mientras ms
alta sea la dilucin necesaria para eliminar la actividad neutralizante, mayor cantidad
de antgeno ABH soluble existe.
CLASIFICACION Rh (D):
TCNICA EN TUBO
MUESTRA:
Sangre con o sin anticoagulante.
MATERIAL:
- Pipetas Pasteur
- Tubos Khan (11x75)
- Gradilla para tubos
- Lector para inmunohematologa
- Bao termo regulable
- Centrfuga para Inmunohematologa.
REACTIVOS:
- Suero anti-D: Existen sueros de alto contenido proteico, qumicamente modificados de bajo
contenido proteico, o mezclas IgM + IgG de bajo contenido proteico. Debe seguir
cuidadosamente las instrucciones de uso del fabricante y hacer los ajustes pertinentes.
- Suero Antiglobulina Humana
- Suero fisiolgico tamponado o PBS
- Suero control Rh (solo si es necesario).
- Clulas control AGH (eritrocitos sensibilizados)
66
METODO:
1.- Enumerar las muestras a tipificar.
2.- Lavar por lo menos una vez una alcuota de eritrocitos de la muestra con PBS, y preparar
con ellos una suspensin al 2-4% en salino, suero AB inerte u otro. (Puede usar la misma
suspensin preparada para la clasificacin ABO).
3.- Depositar 1 gotas de suero anti-D en un tubo Khan previamente marcado D.
4.- Colocar una gota de suero Rh control en otro tubo marcado, o albmina al 30% si usa
reactivos con alto contenido proteico (como control negativo).
5.- Agregar una gota de la suspensin de eritrocitos preparada en el punto 2 a ambos
tubos.
6.- Centrifugar el tiempo establecido para lectura en la estandarizacin de su centrfuga.
6.- Girar suavemente el tubo y observar si existe o no aglutinacin macroscpica frente a
una buena fuente de luz.
7.- Si el resultado es negativo, incubar por un mnimo de 15 minutos y un mximo de 1 hora
a 37C. (de acuerdo con las instrucciones del fabricante).
8.- Proceder igual que en los puntos 6 y 7.
INTERPRETACIN:
-
Si hay aglutinacin = o > a 2+ en el tubo test, y no se observa en el control, la persona

presenta el antgeno D en los eritrocitos, por lo tanto es D+ (Rh positiva).
Si la aglutinacin es < de 2+ o negativa en el tubo test, no debe interpretarse como Rh +
sino que debe continuarse el estudio en busca de expresiones dbiles o variantes del
antgeno D, para definir as el grupo Rh.
Si el tubo control Rh presenta aglutinacin, no informar antes de verificar con otro tipo
de reactivo el grupo Rh de la muestra.
Investigacin de antgeno D dbil:

9.- Incubar ambos tubos cuya lectura fue negativa por 15 a 30 minutos a 37C.
10.- Centrifugar y leer igual que en los puntos 5 y 6.
11.- Si el resultado es positivo en el tubo test y negativo en el control, la persona es Rh
positivo. Si la lectura es negativa proceder como sigue:
12.- Lavar los eritrocitos de ambos tubos con abundante PBS por 4 veces.
13.- Despus del ltimo lavado, eliminar tanto salino como sea posible dejando los eritrocitos
resuspendidos en el salino residual adherido a las paredes.
14.- Agregar una gota de suero Antiglobulina Humana.
15.- Centrifugar y leer de la forma descrita en los puntos 5 y 6.
16.- Registrar los resultados en cruces.
17.- Si el resultado del test es positivo, ste debe ser validado por un test Antiglobulina
Humana directa de los eritrocitos de la muestra. NOTA: En caso de utilizar un suero anti-D
que requiere el uso de un control Rh trabajado en paralelo, el TAD puede ser
reemplazado por el TAI que se realiza con este ltimo suero, ya que este asegura que
estn representados todos los componentes de la reaccin que pueden causar
resultados falsos positivos.
INTERPRETACIN:
Si el resultado de esta segunda fase es negativo, se puede decir que no hay antgeno D en
los eritrocitos y por lo tanto la persona es Rh negativo, si al agregar clulas control AGH se
obtiene un resultado positivo.
67
En aquellos casos en que se obtiene un resultado positivo en el punto 17, y el test AGH
directo (que se usa para confirmar que el anticuerpo adherido a los eritrocitos en estudio
corresponde al anti-D agregado y no a un anticuerpo previamente adherido), es negativo,
se debe informar como Rh +.
Si el AGH directo es positivo, no se puede informar Rh, si se trata de un receptor de
transfusin debe usarse sangre Rh negativa mientras se estudia su Rh.
Es incorrecto informar una muestra como Rh - Du +, la nomenclatura actual se refiere al Du
como un antgeno dbil pero Rh positivo, lo que implica presencia de l en los eritrocitos.
El cuadro siguiente muestra algunos posibles resultados:

ANTI-D
CONTROL Rh
+
+
-
+
-
INV. D DEBIL
(Du)
+
+
TAD
INFORME
Rh positivo
Rh negativo
Rh positivo
En aquellos casos en que no se puede informar el Rh (?), se debe utilizar otro tipo de reactivo
Rh y eventualmente aplicar otras tcnicas como elucin y absorcin.
CONTROL DE CALIDAD:
Todos los resultados son vlidos si se usan en cada serie de tests, controles adecuados
usando clulas con antgenos dbiles y negativos para el antgeno en estudio, ej.: GR R1r y rr
para anti-D, y se validan los resultados de AGH negativos con clulas control de AGH.
RESULTADOS FALSOS:
Las causas de que se produzcan reacciones falsas en la determinacin del grupo Rh,
pueden asociarse a:
1.- Uso de reactivos de alto contenido proteico: Por su contenido pueden causar
reacciones falsas positivas si los hemates del paciente estn recubiertos de anticuerpos.
La incubacin de los GR y el antisuero durante un tiempo excesivo, antes de efectuar la
lectura de la prueba, puede tener como consecuencia que el reactivo con alto
contenido proteico provoque la formacin de rouleaux, confundindose con
aglutinacin.
2.- Utilizacin inadvertida de reactivos errneos: Para evitar errores el CFR americano
autoriza el uso de un cdigo de colores en las etiquetas de algunos reactivos
empleados en la determinacin de grupos sanguneos. En el sistema Rh el color
aprobado para el anti-D es gris, rosa para el anti-C, caf para el anti-E, azul para el antic, verde para el anti-e y naranja para el anti-CDE. A pesar de estas medidas, es
importante leer la etiqueta cada vez que se utilice ya que fiarse solo del color no es
suficiente para tener la seguridad de que ha elegido el reactivo correcto.
3.- Presencia en el reactivo de un anticuerpo irregular con especificidad distinta. Los
fabricantes prueban la especificidad de cada reactivo con eritrocitos que poseen los
antgenos ms comunes en la poblacin (ms de 1% en la poblacin), y con el mtodo
descrito, por lo que cambios en los mtodos pueden dar lugar a resultados falsos. En
casos crticos es recomendable hacer la tcnica por duplicado con dos reactivos de
diferente origen.
68
4.- Hemates poliaglutinables pueden ser aglutinados por cualquier reactivo que contenga
suero humano, pero rara vez existe este error ya que la edad, dilucin y los diferentes
pasos del proceso de fabricacin, tienen tendencia a eliminar estos anticuerpos.
5.- Contaminacin bacteriana de los reactivos, o con sustancias extraas, o con reactivos
provenientes de otros frascos. Es recomendable nunca sacar a la vez el cuentagotas de
ms de un reactivo, y debe inspeccionarse peridicamente los frascos en busca de
deterioro. Es importante recordar que en los reactivos de alto contenido proteico, la
contaminacin bacteriana puede no producir una turbidez detectable, ya que el ndice
de refraccin de las bacterias es similar al del propio material.
6.- No se ha aadido el antisuero al tubo. Un buen habito es fomentar el colocar en primer
lugar el antisuero al tubo, controlar su presencia y luego colocar la suspensin de
hemates.
7.- Un antisuero especfico no reacciona con un antgeno variante o deprimidos.
8.- Es posible que un antisuero que contenga un anticuerpo dirigido principalmente contra
un antgeno compuesto Rh no presente una reaccin detectable con los hemates
portadores de antgenos individuales como producto de genes independientes. Esto
ocurre ms frecuentemente con los sueros anti-C, cuyas reacciones con el antgeno C,
casi invariablemente son ms fuertes cuando este ha sido producto de R1 o r'.
9.- No se siguen las instrucciones de los fabricantes y en consecuencia se ha usado
incorrectamente el antisuero.
10.- Si se realiza una agitacin demasiado enrgica al resuspender el botn de hemates
despus de la centrifugacin, puede dispersarse una aglutinacin dbil.
11.- Reactivo inactivo por falla en su manipulacin y almacenamiento. El anti-D
qumicamente modificado es especialmente sensible a la destruccin del IgG por
enzimas proteolticas que podran producir las bacterias.
TCNICA DE AGLUTINACION ENCOLUMNA
MUESTRA
Sangre completa con anticoagulante.
MATERIAL
Micropipetas
Puntas para micropipetas
Tubos khan.
Gradilla para tubos khan.
Incubador para tarjetas.
Centrifuga para tarjetas
REACTIVOS
Tarjetas para aglutinacin en columna que contengan anticuerpos anti-D.
Solucin salina.
METODO
1. Identificar las muertras a analizar
2. Marcar los tubo khan de la misma forma que hizo con las muestras y ubicarlos tras estas
3. Preparar en cada tubo khan suspensiones de hemates segn las indicaciones del
fabricante a partir e las muestras a analizar.
4. Abrir los pocillos del cassette a utilizar.
5. Aadir a los pocillos la suspensin de hemates segn indicaciones del fabricante.
6. Centrifugar la tarjeta segn el tiempo estimado por el proveedor .
7. Leer aglutinacin en las tarjetas.
8. Las muestras que parezcan ser D negativo o presenten una intensidad de aglutinacin
69
menor a 2+ deben ser confirmadas.

ALGORITMO A UTILIZAR EN LA CLASIFICACIN Rh D
MUESTRA SANGRE
con o sin anticoagulante
Suspensin eritrocitos
al 3% en PBS
GR 3% + anti-D
POSITIVO
Controles OK
NEGATIVO
INFORME
Rh Positivo
AGH DE Rh
o test Du
NEGATIVO
Controles OK
POSITIVO
INFORME
Rh negativo
NO
INFORMAR
REALIZAR
TAD
TAD
NEGATIVO
INFORME
Rh POSITIVO
D DEBIL
TAD
POSITIVO
ELUCION
del Ac.
Usar anti-D
salino
TAD negativo
repetir Rh
Controles OK
Controles OK
INFORMAR
INFORMAR
70
CLASIFICACION DE GRUPO ABO Y Rh: TCNICA EN MICROPLACA

Las tcnicas en microplacas pueden usarse para investigar antgenos ABO en los glbulos
rojos y anticuerpos en el suero. La microplaca es una matriz de 96 tubos de ensayo, en los
cuales puede visualizarse hemaglutinacin con sueros clasificadores diluidos y en bajo
volumen.
Las microplacas pueden ser flexibles o rgidas, con microcubetas en forma de U o V. Las ms
usadas son las en forma de U porque permiten la lectura de los resultados despus de
centrifugar la placa y observar las caractersticas de los GR resuspendidos o analizar el
patrn de flujo de las clulas cuando se inclina la placa, pudiendo finalmente estimar la
intensidad de la aglutinacin.
MUESTRAS:
-Adultos: sangre con EDTA
-Recin nacidos: sangre de cordn.
MATERIALES:
-Microplacas con fondo en U
-Pipetas Pasteur.
-Tubos de Kahn.
-Gradillas.
EQUIPOS:
-Centrfugas con soporte para microplacas.
-Agitador.
-Lector.
REACTIVOS:
-Sueros clasificadores anti-A y anti-B monoclonales diluidos, segn estandarizacin hecha
previamente.
-Suero clasificador anti-D, diluido segn estandarizacin.
-Glbulos rojos A-1,A-2, B, O R1r y O rr suspendidos al 1% en EDTA.
-PBS pH 7.3.
TCNICA:
-Identificar las microplacas de acuerdo al siguiente esquema. Cada columna corresponde a
una muestra, Las columnas 11 y 12 se ocupan para control de calidad.
1
anti- A
anti- B
anti - AB
anti- D
anti- D
P.A.
g.r. A
g.r. B
A
B
C
D
E
F
G
H
10
C+
11
A2
B
R1r
C12
B
A1
rr
71
1. Repartir los sueros de la siguiente forma: una gota de anti-A en todos los pocillos de la
primera fila, una gota de anti-B en la segunda fila , una gota de anti-AB en la tercera
fila, una gota de anti -D en la cuarta y quinta fila y una gota de PBS en la sexta fila.
2. Repartir las muestras de la siguiente manera: una gota de suero en los pocillos G y H.
3. En un tubo aparte prepare una suspensin de GR de la muestra a estudiar al 1% en PBS,
reparta una gota de esta suspensin en los pocillos A al F.
4. Reparta una gota de la suspensin de GR A1 en los 10 primeros pocillos de la fila G.
5. Reparta una gota de la suspensin de GR B en la fila H.
6. Reparta 1gota de las suspensiones de GR control segn se muestra en el esquema
anterior.
7. Centrifugue las placas a 1400 r.p.m. durante 20 segundos.
8. Agite las placas durante 20 seg. Con el agitador en alta revolucin y 20 seg. Con el
agitador en baja revolucin.
9. Lleve las placas al lector para ver presencia o no de aglutinacin. Registre el resultado
en el protocolo correspondiente en intensidad de cruces, siguiendo el mismo criterio
que en la clasificacin en tubo.
Si existe alguna discrepancia en la clasificacin se debe repetir en tubo. Del mismo modo,
todas las muestras que resulten negativas con anti-D, se deben clasificar en tubo.
ABO
Rh
B
+
A
+
A
+
A
+
O
+
O
+
A
+
O
+
O
+
B
+
AB
+
A
+
DETERMINACION DE GENOTIPO RH
Las pruebas de rutina para determinar el grupo sanguneo de donantes y pacientes solo
comprende la determinacin del antgeno D. Las pruebas para determinar otros antgenos
Rh se realizan en caso de que existan razones especiales que lo justifiquen, por ejemplo:
investigacin de paternidad, estudios de enfermedad hemoltica del recin nacido, apoyo
en identificacin de anticuerpos, preparacin de un panel de clulas detectoras de
anticuerpos y clulas para realizar control de calidad de las tcnicas inmunohematolgicas.
En la seleccin de sangre compatible para un paciente que en el suero tenga un anticuerpo
Rh comparativamente dbil, la determinacin de los hematies negativos respecto de un
antgeno, mediante tcnicas que emplean antisueros reactivos, es ms fiable que el
resultado negativo obtenido en la prueba cruzada.
MUESTRA:
Sangre con o sin anticoagulante
METODO:
Se utilizan sueros anti-D, anti-C, anti-c, anti-E, y anti-e, los que se enfrentan a una suspensin
de los eritrocitos en estudio de acuerdo estrictamente a las instrucciones del fabricante de
los antisueros, siguiendo rigurosamente los tiempos y temperaturas de incubacin. Es
necesario incluir controles positivos para cada antisuero, que deben corresponder a clulas
heterocigotos para el antgeno en estudio, y controles negativos con clulas que no poseen
el antgeno.
CALCULO DE GENOTIPO MS PROBABLE:
72
Para realizar este clculo debemos recurrir a la frecuencia de los haplotipos Rh en la

poblacin chilena y basarnos en el equilibrio de Hardy-Weinberg. Si se desea calcular por
ejemplo la frecuencia en Chile del genotipo CDe/cde, debe calcularse 2 X (CDe)(cde) = 2
(0.500 X 0.2192) = 0.22
Frecuencia de los haplotipos Rh en poblacin chilena.
CDE (Rz)
CDe (R1)
cDE (R2)
cDe (Ro)
CdE (Ry)
Cde (r')
cdE (r'')
cde (r)
0.0132
0.5001
0.2259
0.0255
0.0000
0.0064
0.0097
0.2192
REFERENCIA:
Rev. Med. de Chile 116: 28-33. 1988.
NUMERO DE SITIOS ANTIGENICOS DE ACUERDO AL GENOTIPO CELULAR

GENOTIPO
R1R1
R1r
R1R2
R2R2
Rr
Rr
D
14.500
19.300
9.900
14.600
23.000
31.000
15.800
33.300
12.000
20.000
-
C
46.000
56.000
21.000
40.000
25.000
40.000
-
ANTIGENO
E
15.000
25.000
c
37.000
53.000
37.000
53.000
70.000
85.000
70.000
85.000
70.000
85.000
e
18.200
24.000
18.200
24.000
13.400
14.500
18.200
24.000
18.200
24.000
ORDEN DE FUERZA DEL Ag. D

cDE/cDE > CDe/cDE > CDe/CDe > cDE/cde > CDe/cde
R2/R2
R1/R2
R1/R1
R2/r
R1/r
NOMENCLATURA ACTUALMENTE UTILIZADA PARA REFERIRSE AL Ag.D

D
D dbil
D parcial
D parcial dbil
D aumentado
Ag D comn, todos los epitopos presentes

Ag. D presente en menor cantidad, anteriormente llamado Du.
Ausencia de algunos epitopos del Ag. D, los otros presentes en
cantidad normal o reducida.
Ag. D parcial presente en cantidad considerablemente reducida,
muy dbil para categorizarlo. Se reconoce solo por la presencia
de anti-D.
Ag. D normal presente en cantidad considerablemente
aumentada.
73
FRECUENCIAS GENICAS DE SISTEMAS SANGUINEOS EN DIFERENTES POBLACIONES

SISTEMA
MIXTA
CHILENA
ESPAOLA
MAPUCHES AYMARAE ATACAME

S
OS
NEGRA
ABO
A
B
O
N:
0.1824
0.0698
0.7477
321
0.2864
0.0670
0.6465
20000
0.018
0.000
0.9820
148
0.0549
0.0160
0.9286
183
0.0562
0.0027
0.9407
182
0.1780
0.1143
0.7077
858
Duffy
Fya
No Fya
N:
0.5805
0.4195
379
0.3966
0.6034
1988
0.7080
0.2920
141
0.7823
0.2177
654
0.7008
0.2990
180
0.0607
0.9393
365
Rh
CDE
CDe
.cDE
.cDe
CdE
Cde
.cdE
.cde
N:
0.0093
0.4999
0.2224
0.0230
0.0000
0.0089
0.0139
0.2223
679
0.0008
0.4036
0.1670
0.0186
0.0000
0.0049
0.0029
0.3820
8297
0.0320
0.6930
0.2550
0.0210
0.0000
0.0000
0.0000
0.0000
258
0.0267
0.3657
0.5757
0.0329
0.0000
0.0000
0.0000
0.0000
183
0.0465
0.4727
0.4340
0.0267
0.0000
0.0000
0.0000
0.0198
181
0.0000
0.0256
0.0427
0.7395
0.0000
0.0707
0.0000
0.1184
644
CARACTERISTICAS GENERALES DE SISTEMAS SANGUINEOS DE IMPORTANCIA CLINICA
74
NOMBRE
SIMBOL
O
N
Ag
NOMBRE
DEL GEN
ESTRUCTURA
DE MEMB
ASOCIADA
H de C
001
ABO
ABO
002
MNSs
004
GEN
CLONAD
O
SI
CROMOSOM
A
MS
38
GPA/GPB
GYPA/GYP
B
RHD/RHCE
SI
Rh
RH
45
Protena
SI
005
Lutheran
LU
18
006
Kell
KELL
21
008
Duffy
FY
009
Kidd
JK
019
Kx
XK
Superfamilia
de Igs de
memb.
Glicoproten
a
Receptor de
quimokinas
(ECR)
Transporte
de urea
Glicoproten
a
LU
SI
19
KELL
SI
FY
SI
JK
POSIBLE
18
XK
SI
ABO
TEST ANTIGLOGULINA HUMANA
El test Antiglobulina Humana (AGH) o test de Coombs, se basa en principios elementales

simples:
Las molculas de anticuerpos y los componentes del complemento son globulinas.
Al inyectar a un animal globulina humana, se estimula la produccin de anticuerpos frente a
esta protena extraa.
Se remueven del suero las protenas y anticuerpos no deseados dejando solamente el
ANTICUERPO ANTIGLOBULINA HUMANA.
Este suero AGH reaccionar especficamente con globulinas humanas tanto si estn unidas
a eritrocitos como libres en el suero.
La porcin Fab de la molcula AGH reaccionar con la porcin Fc del anticuerpo unido a
cada glbulo rojo por separado produciendo la aglutinacin.
Las globulinas libres no unidas, pueden neutralizar el AGH si no se eliminan completamente y
causar resultados negativos falsos.
Es uno de los test de laboratorio ms usados en inmunohematologa, se utiliza 2 tipos de test
AGH
1.
2.
- El test Antiglobulina Directo TAD.

- El test Antiglobulina Indirecto TAI.
TEST ANTIGLOBULINA HUMANA DIRECTO (TAD) TEST DE COOMBS DIRECTO

TCNICA EN TUBO
El TAD se utiliza para demostrar anticuerpos IgG y/o complemento (C3dg), que se han unido
"in vivo" a los eritrocitos del paciente. Se utilizan directamente los eritrocitos lavados del
paciente y el suero AGH.
MUESTRA:
Sangre obtenida con EDTA como anticoagulante, para evitar la unin de complemento "in
vitro" que puede ocurrir en muestras sin anticoagulante.
REACTIVOS:
Suero Antiglobulina Humana: Existen sueros AGH poliespecficos que detectan tanto IgG
como Complemento, sueros monoespecficos anti-IgG, anti-C3d, anti-C4, anti-C3dg, etc...
Los mtodos de rutina usan sueros AGH poliespecficos. Es muy importante leer
cuidadosamente las instrucciones del fabricante al comenzar a trabajar con cada lote de
SAGH.
PBS
PROCEDIMIENTO:
1.- Prepare cuidadosamente una suspensin de eritrocitos del paciente al 2-4% en su propio
plasma.
2.- Lave 1 gota de la suspensin anterior de eritrocitos del paciente por 4 veces con PBS.
Despus del ltimo lavado, elimine totalmente el sobrenadante e inmediatamente
agregue 1 o 2 gotas del suero AGH poliespecfico.
3.- Centrifugue el tiempo y velocidad estandarizado para lectura de AGH, y examine en
busca de aglutinacin. Regstrela en intensidad de cruces. La lectura es muy importante
en este test para lo cual rote suavemente el tubo hasta lograr que se desprendan todos
los eritrocitos del fondo.
75
4.- Si al usar suero AGH poliespecfico o anti-C3d la reaccin es negativa, incube por 5
minutos a temperatura ambiente el tubo y proceda igual que en el punto 3. Esto le otorga
mayor sensibilidad a la deteccin del complemento, especialmente en anemias
hemolticas autoinmune. Esta segunda lectura jams puede reemplazar a la lectura
inmediata ya que la reaccin del anticuerpo IgG puede hacerse dbil o negativa.
5.- Agregue 1 gota de clulas control de AGH (GR sensibilizados con IgG) a todo test cuyo
resultado es negativo.
6.- Proceda igual que en el punto 3. Si los eritrocitos de la muestra no fueron
adecuadamente lavados, quedando Igs libres, el suero AGH se neutralizar obteniendo
en esta fase un resultado negativo. Para que el resultado del TAD sea vlido, el resultado
de esta etapa debe ser positivo.
INTERPRETACIN:
1.- El TAD es positivo cuando se detecta aglutinacin desde la centrifugacin inmediata o
despus de la incubacin de 5 minutos a temperatura ambiente. Las reacciones por IgG
se observan en la centrifugacin inmediata y el complemento generalmente se presenta
mejor luego de la incubacin a temperatura ambiente. Es necesario el uso de SAGH
monoespecficos para confirmar el tipo de globulinas presentes.
2.- El TAD es negativo cuando no se observa aglutinacin en la centrifugacin inmediata,
luego de la incubacin a temperatura ambiente, y si aparece la reaccin positiva al
agregar los eritrocitos sensibilizados con IgG en la ltima fase.
NOTA: Un test con resultado negativo no necesariamente indica ausencia de globulinas
sensibilizando los eritrocitos, los sueros AGH poliespecficos y anti-IgG, detectan
aproximadamente 200-500 molculas de IgG por eritrocito, se han publicado casos de AHAI
con un nmero inferior de anticuerpos por clula y por lo tanto con un TAD negativo.
TECNICA DE AGLUTINACIN EN COLUMNA ( TARJETA):
MUESTRA
-Sangre obtenida con EDTA.
REACTIVOS
-Tarjetas para aglutinacin en columna.
-Solucion salina.
PROCEDIMIENTO
1. Prepare una suspensin de eritrocitosen medio salino segn indicaciones del fabricante.
2. Los hemates obtenidos de cordon umbilical o procedentes de pacientes con protenas
sericas anormales se deben labar como minimo una vez con solucin salina fisiolgica.
3. Marcar la tarjeta con la muestra que se va a analizar.
4. Abrir la tira de aluminio exponiendo nicamente las columnas que se van a utilizar.
Agregar la suspencin de eritrocitos a las columnas.
5. Centrifugar las tarjetas.
6. Leer la aglutinacin en cruces.
76
TEST ANTIGLOBULINA HUMANA INDIRECTO (TAI) TEST DE COOMBS INDIRECTO
TCNICA EN TUBO
El Test Antiglobulina Indirecto (TAI) se utiliza para comprobar el recubrimiento "in vitro" de los
eritrocitos por anticuerpos y/o complemento, mediante incubacin del suero (Ac) con
hemates (Ag) que posteriormente se lavan para eliminar las globulinas no adheridas. El
hecho de que se produzca aglutinacin despus de aadir el reactivo AGH indica que el
suero contiene anticuerpo(s) que reacciona(n) con antgeno (Ag) presente en el glbulo
rojo.
Se utiliza para deteccin, identificacin y titulacin de anticuerpos, pruebas cruzadas,
determinacin de grupos sanguneos con ciertos antisueros.
TAI USANDO GLOBULOS ROJOS SUSPENDIDOS EN SALINO
MUESTRA:
Sangre total sin anticoagulante.
MATERIALES:
Tubos Kahn (11 x 75mm).
Gradilla para tubos Kahn.
Centrfuga para inmunohematologa.
Fuente de luz.
Pipetas Pasteur con capuchn de goma.
REACTIVOS:
- PBS o Suero fisiolgico tamponado pH 7.3
- Suero antiglobulina humana poliespecfico.
-Glbulos rojos grupo O de al menos 2 donantes distintos que en suma posean los Ags. de
importancia clnica. (D, C, E, c, e, Fya, Fyb, MNSs, JKa, JKb, K). Cada clula debe
enfrentarse por separado al suero en estudio, el uso de pool de clulas da resultados falsos
negativos.
- Clulas control AGH
- Suero control que posea un anticuerpo IgG dbil (reaccin de 2+ en AGH)
METODO
1. Marcar los tubos con la identificacin: paciente, suero control.
2. Depositar 2 gotas del suero en estudio y del suero control en los tubos correspondientes.
3. Agregar 1 gota de suspensin al 5% en salino de glbulos rojos reactivos al tubo
correspondiente y mezclar.
4. Centrifugar y leer de la forma previamente estandarizada.
5. Incubar los tubos a 37C por 60 min.
6. Centrifugar el tiempo establecido segn estandarizacin de la centrfuga.
7. Leer en busca de hemlisis y/o aglutinacin, rotando suavemente el tubo frente a una
fuente de luz. Anotar los resultados tubo en mano.
8. Un resultado positivo de aglutinacin o hemlisis en estas
etapas no debe ser
interpretado como producido por recubrimiento por IgG o Complemento.
9. Lavar los tubos dbilmente positivos y negativos por 4 veces con PBS, eliminando al
mximo el sobrenadante del ltimo lavado.
10. Agregar a cada tubo 2 gotas del suero AGH.
11. Mezclar y centrifugar segn punto 4.
77
12. Leer en busca de hemlisis y/o aglutinacin, rotando suavemente el tubo frente a una
fuente de luz. Anotar los resultados tubo en mano.
13. Confirmar los resultados negativos, agregando 1 gota de clulas control AGH (Coombs) a
los tubos en que el resultado del test fue negativo.
14. Centrifugar y leer segn punto 4.
INTERPRETACIN:
Se considera que un TAI es positivo cuando se detecta aglutinacin despus de agregar
AHG. Esta positividad significa presencia de anticuerpo(s) de tipo IgG y/o de anticuerpo(s)
que se manifiesta a travs de la fijacin de Complemento.
Para que el test se considere vlido, el tubo con suero control positivo debe presentar un
resultado positivo y el resultado de las clulas control AGH debe ser positivo.
NOTA: Puede acortarse el tiempo de incubacin si en el punto 3, los eritrocitos se suspenden
en medio de baja fuerza inica (LISS), teniendo la precaucin de utilizar los tiempos y
volmenes previamente estandarizados para este reactivo.
TCNICA DE AGLUTINACIN EN COLUMNAS ( TARJETA):
MUESTRA
-Sangre total
REACTIVOS
-Solucion salina o PBS
- Potenciador de la tcnica
-Tarjetas para aglutinacin en columnas.
-Globulos rojos grupo O de al menos 2 donantes diferente que en suma posean los Ags.de
importancia clnica.
METODO
1. Marcar las tarjetas segn la muestra a identificar.
2. Abrir la tira de aluminio nicamente en las columnas que se van a utilizar para la
reaccin.
3. Aadir a las columnas ambas suspencines de los glbulos rojos segn indicaciones del
fabricante.
4. Aadir suero de la muestra a las correspondientes columnas segn indicaciones del
fabricante.
5. Incubar.
6. Centrifugar la tarjeta.
7. Leer microplacas buscando aglutinacin o hemolisis.
FACTORES QUE AFECTAN LA SENSIBILIDAD DE UN TAGH

1.2.3.4.-
Temperatura
Fuerza inica del medio
Proporcin suero/clulas
Tiempo de incubacin
Para fines didcticos puede considerarse que el TAGH tiene diferentes fases, en cada una
de las cuales existen causas de error que deben manejarse para un correcto resultado del
test:
78
FASE 1: Seleccin de los eritrocitos de prueba:

1.Deben ser grupo O Rh positivo y contener todos los antgenos de importancia clnica.
2.Usarse por separado, nunca en pool.
3.Prepararse una suspensin al 2-4% en PBS, y 1,5 - 2% en LISS
FASE 2: Sensibilizacin de los eritrocitos:
1.- Proporcin correcta suero/clulas:
para TAI en salino = 2:1 a 4:1
para TAI en LISS = 1:1
2.- Tiempo de incubacin:
Para TAI salino = 45 minutos a 1 hora
Para TAI LISS = 15 a 20 minutos, segn la estandarizacin del test.
FASE 3: Lavado de las clulas:
1.- Trabajar con centrfugas calibradas.
2.- Uso de 4 lavados con abundante PBS.
3.- No interrumpir el proceso de lavado en ningn momento ya que los anticuerpos pueden
eluirse.
4.- Mezclar bien los GR despus de cada lavado, cuidando de soltar todas las clulas del
fondo del tubo.
5.- Remocin de todo el sobrenadante del ltimo lavado, idealmente secando el borde del
tubo con papel absorbente muy limpio.
6.- Uso de clulas control AGH (sensibilizadas con IgG o Complemento, segn corresponda)
FASE 4: Lectura:
1.- Agregar la cantidad suficiente de suero AGH.
2.- Cuidar que el suero AGH en uso sea de calidad ptima conocida y que las condiciones
de almacenamiento y uso sean las adecuadas.
3.- La lectura debe realizarse inmediatamente despus de haber terminado el ltimo
lavado.
4.- Calibrar la centrifugacin para lectura.
5.- lectura macroscpica: Agitacin suave del tubo, idealmente Tip and Roll (rotacin
suave del tubo hasta desprender todas las clulas del fondo).
6.- Lectura microscpica: Observar el tubo colocado en forma horizontal bajo aumento
lupa, o transferir su contenido a un porta objeto, colocar un cubre objeto y luego
examinar con aumento 10X y 40X. En este caso sonimportantes los controles positivos y
negativos (clulas de prueba solas), como as mismo la experiencia en este tipo de
lectura.
Es muy importante para obtener resultados confiables el uso en paralelo con los tubos
test de un suero control conocido que presente una reactividad dbil en AGH (2+) con
los eritrocitos de prueba usados en el test.
PREPARACION DE GLOBULOS ROJOS CONTROL PARA TEST ANTIGLOBULINA HUMANA

En el test AGH, la presencia de suero residual despus del ltimo lavado puede llevar a
neutralizacin parcial del reactivo AGH, que implicara reacciones ms dbiles o negativas
del test. Se recubren eritrocitos grupo O Rh positivo con IgG anti-D de modo que den una
reaccin de ++ a +++ al ser agregados a los test Antiglobulina Humana negativos.
METODO I:
MATERIALES:
79
- Eritrocitos grupo O Rh positivo (pool de 4 clulas R1r, con TAD negativo y con menos de 3
semanas de almacenamiento)
- Anti-D con ttulo 32 o 64.
METODO:
1.- Lave los eritrocitos seleccionados por 3 veces con abundante PBS.
2.- Coloque 10 ml de PBS en un tubo y agregue 10 gotas del suero anti-D. Agregue una
cantidad suficiente de los eritrocitos O previamente lavados como para obtener una
concentracin al 3% (aprox. 150 microlitros)
3.- Mezcle e incube a 37C durante 30-60 minutos.
4.-Lave los glbulos rojos 4 veces con PBS y resuspendalos hasta alcanzar una concentracin
final del 2-3%.
5.- Realice un TAD a los eritrocitos tratados con el suero Antiglobulina Humana que Ud. utiliza
de rutina en su Banco de Sangre. Debe obtener una reaccin de +++.
6.- Estos eritrocitos pueden ser guardados a 4C por 48 hrs.
METODO II
MATERIALES:
- Eritrocitos grupo O Rh positivo (pool de 4 clulas R1R1, con TAD negativo y con menos de 3
semanas de almacenamiento)
- Anti-D con ttulo = o superior a 128 (1 UI/ml)
METODO:
Se colocan 2 ml de GR concentrados, con 4 ml del suero anti-D; incubar durante 1 hora a
37C, centrifugar, eliminar sobrenadante y lavar por 4 veces con PBS. Para guardar use 1 ml
de eritrocitos sensibilizados y 2 ml de sol. Alsever, puede guardarse durante 10 a 15 das a
4C, cuidando de mantener la esterilidad. Para uso diario, almacenar en alcuotas de 2 ml.
Para su uso, suspender los eritrocitos a una concentracin del 3% en PBS.
DETECCION DE ANTICUERPOS IRREGULARES:
TCNICA EN TUBO
Los anticuerpos irregulares representan una inmunizacin a antgenos eritrocitarios de los
otros sistemas sanguneos y son distintos de los anticuerpos "naturales" anti-A y anti-B.
La inmunizacin a estos antgenos eritrocitarios puede estar desencadenada por embarazo
o transfusin, o por inyeccin deliberada de material inmungeno. En algunos casos, el
causante es desconocido.
Los anticuerpos dirigidos contra antgenos eritrocitarios del propio individuo se denominan
autoanticuerpos, a diferencia de los aloanticuerpos que reaccionan contra antgenos
eritrocitarios de otros individuos de la misma especie.
La determinacin y seleccin de estos anticuerpos se realiza mediante tcnicas de hemlisis
y aglutinacin principalmente, capaces de pesquisar Ac. clase IgM e IgG en el suero
sanguneo. Las caractersticas fsico-qumicas de los anticuerpos involucrados hacen
necesario la utilizacin de medios y temperaturas ptimas y diferentes para cada tipo, como
tambin eritrocitos reactivos con fenotipo adecuado.
80
MUESTRA:
- Sangre sin anticoagulante, con no ms de 48 hrs .de extrada.
MATERIALES:
-
Tubos de Khan (vidrio 12x 75 mm)

Pipetas Pasteur con capuchn de goma.
Gradillas para tubos.
Centrfuga para inmunohematologa previamente calibrada.
Lector para Inmunohematologa.
REACTIVOS:
- Suero salino isotnico tamponado pH 7.0,o PBS.
- Eritrocitos reactivos de grupo O Rh +,con las siguientes caractersticas:
1.- Provenientes como mnimo de 2 donantes diferentes, uno R1R1 y el otro R2R2. Marcarlos
como I y II.
2.- En conjunto posean los antgenos eritrocitarios de importancia clnica: D, C, E, c, e, M, N,
S, s, Fya, Fyb, JKa, Jkb, Lea, Leb, P1.
3.- Que posean los antgenos que presentan efecto de dosis en estado homocigoto.
- Clulas control de test AGH.
- Suero AB inerte.
- Suero control positivo dbil.
MTODO:
1.
Marcar 3 tubos con las siglas I, II , PA. Depositar en cada uno 2 gotas del suero en
estudio.
2. Agregar al tubo I, 1 gota de la suspensin al 2-4% en salino de eritrocitos reactivos
seleccionados como I (lavado previo 4 veces).
3. Agregar al tubo II, 1 gota de la suspensin al 2-4% en salino de eritrocitos reactivos
seleccionados como II (dem).
4. Agregar al tubo PA, 1 gota de la suspensin al 2-4% en salino de los eritrocitos de la
muestra en estudio (dem).
5. Mezclar y centrifugar al tiempo y velocidad establecida en la estandarizacin de la
centrfuga.
6. Leer, frente a una fuente luminosa, rotando suavemente el tubo en busca de hemlisis
y/o aglutinacin macroscpica. Anotar los resultados en el protocolo.
7. Incubar por 15 min. a temperatura ambiente y proceder luego como en los puntos 3 y 4.
8. Incubar en un bao Mara a 37C, por 45 min. y luego proceder como en los puntos 3 y
4.
9. Lavar los tubos negativos o dbilmente positivos por 4 veces con salino tamponado o
PBS para realizar la prueba de AGH.
10. Despus de eliminar totalmente el sobrenadante del ltimo
lavado, agregar 1 gota
de suero AGH poliespecfico y proceder como en los puntos 3 y 4.
11. En los tubos que resultaron negativos, agregar 1 gota de
clulas control AGH y
proceder como en los puntos 3 4.
81
NOTA:
a)
b)
si se dispone de un set de eritrocitos comercial, utilizar segn las indicaciones del

fabricante.
El tiempo de incubacin puede acortarse si en el punto 2 los eritrocitos se suspenden
en medio de baja fuerza inica, LISS, teniendo la precaucin de utilizar los tiempos
previamente establecidos en la estandarizacin del reactivo, por ej.: 10-15 min a 37C y
los reactivos en proporcin volumen a volumen.
INTERPRETACIN:
Se considera como positiva una deteccin de anticuerpos irregulares, cuando en cualquiera
de sus fases se observa aglutinacin o hemlisis. Este mtodo proporciona adems las
caractersticas de reaccin, medio y temperatura ptimos del anticuerpo pesquisado, as
como tambin la condicin de alo o autoanticuerpo.
EJEMPLOS:
Aloanticuerpo
S
37
AGH
S
37
AGH
I
-
II
1+
PA
-
Auto + Aloanticuerpo
I
II
1+
4+
PA
1+-
Crioaglutininas
S
37
AGH
I
3+
-
S
37
AGH
I
1+
2+
II
3+
-
PA
3+
+/-
II
1+
2+
PA
1+
2+
Autoanticuerpo
CONTROL DE CALIDAD:
1.-En cada set de tests debe incluirse en paralelo como control positivo un suero que posea
un anticuerpo dbil, con una reaccin de 1+ o 2+ en AGH y un control negativo con
suero AB inerte.
2.-Si utiliza LISS debe tener las precauciones establecidas para este medio.
TCNICA EN COLUMNAS (TARJETAS).
La deteccin de anticuerpos irregulares en gel utiliza glbulos rojos diluidos solos o con
plasma para el uso en TAD, TAI como tambin en pruebas cruzadas. El fundamento de esta
tcnica se basa en una reaccin de Coombs dentro del tubo de la tarjeta de gel, la cual se
82
incuba junto a los glbulos rojos y plasma a probar para observar aglutinacin. Luego de un
proceso de centrifugacin, las clulas que den reaccin negativa (no aglutinacin) pasaran
por la matriz de gel
hasta el fondo del tubo, en cambio las reacciones positivas
(aglutinacin) quedaran atrapadas en la matriz con diferentes intensidades segn sea la
reaccin.
MUESTRAS:
- Suero o plasma obtenido de muestras de sangre tomadas con EDTA.
MATERIALES
- Pipetas automticas de 25 y 50 microlitros.
- Puntas de pipetas desechables.
- Gradillas.
EQUIPOS:
- Centrfuga con soporte para geles.
- Incubador a 37C.
REACTIVOS
- Glbulos rojos comerciales para la deteccin de Acs. Irregulares
al 1% en medio de Baja Fuerza Inica.
- Tarjeta Gel Coombs.
(Pool I y II), diluidos
METODO
1. Identifique las columnas de gel segn corresponda. Debe utilizar dos columnas para cada
muestra en estudio.
2. Dispense en los pocillos de incubacin de los microtubos (columna de gel)
correspondientes 50 microlitros de glbulos rojos del Pool I y del Pool II respectivamente.
3. Aada 25 microlitros de suero o plasma del paciente.
4. Incube por 15 minutos a 37 C.
5. Centrifugue las tarjetas de geles.
6. Lea e interprete los resultados.
Se recomienda una lectura inmediata de los resultados despus de la centrifugacin de las
tarjetas, sin embargo se pueden leer hasta 24 horas despus, si se conservan en posicin
vertical, refrigeradas y selladas con parafilm, para evitar la evaporacin del sobrenadante.
INTERPRETACIN DE RESULTADOS. (Figura 1)
Reaccin negativa:
Banda de hemates en el fondo de la columna, resto de la columna sin aglutinados visibles.
Reaccin positiva:
+/- : Escasos aglutinados de pequeo tamao en la mitad inferior de la columna.
1+ : Algunos aglutinados de pequeo tamao en la columna.
2+ : Aglutinados de tamao pequeo o mediano a lo largo de la columna.
3+ : Banda superior de aglutinados, de tamao mediano en la mitad superior de la columna.
4+ : Banda de Hemates aglutinados en la parte superior de la columna.
83
Doble poblacin: Doble banda de hemates, en el fondo y en la parte superior de la

columna.
Hemlisis: Sobrenadante y columna de color rosa.
Figura 1
DETECCION DE ANTICUERPOS IRREGULARES EN PAPAINA

Tcnica enzimtica en dos etapas
REACTIVOS:
- Papana al 1%
- PBS
- Eritrocitos de prueba seleccionados igual que en el mtodo anterior
- Suero AB inerte
- Suero control de reactividad dbil.
A. Preparacin de los eritrocitos papainizados.
1.- Descongelar 2 alcuotas de papana al 1%
2.- Agregar a cada una 0.9 ml. de PBS y marcarlos con las siglas I y II respectivamente.
3.- Adicionar a cada solucin de Papana al 0.1%, 250 ul de eritrocitos reactivos
seleccionados como I y II, previamente lavados y concentrados, en el tubo
correspondiente.
4.- Incubar a 37C segn los minutos establecidos al estandarizar la tcnica con cada lote
de papana. Ej. : 16 min.
5.- Centrifugar, eliminar el sobrenadante y lavar las clulas por 2 veces con PBS.
6.- Resuspenderlas al 2% en PBS. Mantener en refrigeracin a 4C. En estas condiciones
duran 48 hrs.
7.- Efectuar los controles necesarios para el uso de papana.
METODO
1.- Marcar dos series de 4 tubos cada una con las siglas I y II, + y -.
2.- Depositar en los tubos I y II, 2 gotas del suero en estudio, 2 gotas de suero reactivo dbil
en el tubo + y 2 gotas de suero AB inerte en el tubo marcado -. Agregar a todos los
tubos de la primera serie 1 gota de los eritrocitos papainizados I y a la segunda serie 1
gota de los eritrocitos papainizados II.
3.- Incubar 1 hr. a 37C no centrifugar y leer en la forma estandarizada.
84
INTERPRETACIN
La presencia de anticuerpos se visualiza en forma de aglutinacin o hemlisis en los tubos I
y/o II. Para un resultado vlido, el tubo + debe resultar positivo y el - debe ser negativo.
CONTROL DE CALIDAD:
- Uso de tcnicas enzimticas previamente estandarizadas.
- Uso de controles positivos y negativos diarios en cada set de tests.
- Solo lecturas macroscpicas.
- Controlar las condiciones de almacenamiento de la solucin stock de enzima (- 30C) y de
las clulas papainizadas (duracin mxima 24 horas a 4C).
DETECCIN DE ANTICUERPOS EN MEDIO LISS
Se usa para evidenciar la presencia de un anticuerpo dirigido contra algn sistema
sanguneo, en un medio de baja fuerza inica o LISS, lo que permite acortar el tiempo de
incubacin y favorecer la aglutinacin a algunos anticuerpos que presentan constantes de
asociacin a su antgeno relativamente bajas.
Al usar este tipo de medio es muy importante hacer una estandarizacin previa y trabajar con
control positivo (anticuerpos dbilmente reactivos) y control negativo (suero AB inerte). Revisar
las limitaciones del mtodo.
REACTIVOS:
- Suero salino isotnico tamponado pH 7.0,o PBS.
- Eritrocitos reactivos de grupo O Rh +, con iguales caractersticas que las descritas en la
tcnica de deteccin de anticuerpos irregulares.
- Clulas control de test AGH.
- Suero AB inerte.
- Suero control positivo dbil.
- Medio LISS.
MTODO:
1.- Marcar 3 tubos con las siglas I, II, PA.
Depositar en cada uno 2 gotas del suero en estudio.
2.- Agregar al tubo I, 2 gotas de la suspensin al 2% en LISS de eritrocitos reactivos
seleccionados como I (hacer un lavado previo con PBS por 3 veces, eliminar todo el
sobrenadante y suspender las clulas en LISS).
Agregar al tubo II, 2 gota de la suspensin al 2% en LISS de eritrocitos reactivos
seleccionados como II (preparados igual que las clulas I)
Agregar al tubo PA, 2 gota de la suspensin al 2% en LISS de los eritrocitos de la muestra en
estudio (preparados igual que las clulas I).
NOTA: si se dispone de un set de eritrocitos comercial, dispensar segn las indicaciones del
fabricante.
3.- Mezclar y centrifugar al tiempo y velocidad establecida en la estandarizacin de la
centrfuga.
4.- Leer, frente a una fuente luminosa, rotando suavemente el tubo en busca de hemlisis y/o
aglutinacin macroscpica. Anotar los resultados en el protocolo.
5.- Incubar por el tiempo establecido en la estandarizacin del medio LISS, a 37C y proceder
luego como en los puntos 3 y 4.
85
7.- Lavar los tubos negativos o dbilmente positivos por 4 veces con salino tamponado o PBS
para realizar la prueba de AGH.
8.- Despus del ltimo lavado, eliminar totalmente el sobrenadante, agregar 1 gota de suero
AGH poliespecfico y proceder como en los puntos 3 y 4.
9.- En los tubos que resultaron negativos, agregar 1 gota de clulas control AGH y proceder
como en los puntos 3 y 4.
NOTA: Al utilizar LISS debe tener las siguientes precauciones:
a) Uso de una proporcin suero/clulas 1/1. Esto es obligatorio.
b) Los eritrocitos deben lavarse previamente en PBS, para luego suspenderlos en LISS.
c) Dejar que las clulas alcancen temperatura ambiente antes de su uso, ya que de lo
contrario puede inducirse reacciones falsas positivas.
d) La suspensin de clulas en LISS se asocia con un acelerado deterioro de algunos
antgenos como Fya, Fyb, S, s, por lo que ellos no deben ser usados ms all de 24 horas.
e) Puede utilizarse azida de sodio como preservativo, para evitar contaminacin.
f) Debe usarse un mtodo previamente estandarizado, para determinar los tiempos de
incubacin, segn el mtodo descrito en este manual.
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Los aloanticuerpos irregulares son anticuerpos distintos a los anticuerpos naturales anti-A y antiB. Estos aloanticuerpos se encuentran en aproximadamente un 0.3 - 2% de la poblacin,
segn sea el grupo estudiado y la sensibilidad del mtodo utilizado.
Una vez detectada la presencia de un anticuerpo irregular, debe determinarse su
especificidad y su significacin clnica. Un anticuerpo clnicamente significativo es aquel que
acorta la sobrevida prevista de los hemates incompatibles transfundidos, o que se asocia con
enfermedad hemoltica del recin nacido (EHRN). No obstante el grado de significacin
clnica es variable. Algunos anticuerpos producen la destruccin de los G.R. en pocas horas e
incluso minutos, mientras que otros acortan la sobrevida prevista en solo unos pocos das. Por
lo tanto, puede utilizarse la experiencia documentada de un anticuerpo con la misma
especificidad para evaluar la significacin clnica de un anticuerpo dado.
COMPORTAMIENTO SEROLOGICO DE LOS PRINCIPALES ANTICUERPOS IRREGULARES
AC
M
N
S
S
U
Lua
Lub
K
K
Fya
Fyb
Jka
Jkb
Dia
Dib
86
LISIS
In vitro
No
No
No
No
No
No
No
No
No
No
No
Alg
Alg
No
No
SALINO
4C
22C
May
Alg
May
Pocos
Pocos
Alg
0
Pocos
0
Pocos
Alg
May
Pocos
Pocos
Pocos
Pocos
Raros
Raros
Pocos
Pocos
Alg
AGH
Pocos
Ocas
May
May
May
Pocos
May
May
May
May
May
May
May
May
May
ENZIMA
37C
AGH
0
0
0
0
May
Pocos
Pocos
Alg
Alg
0
0
Alg
Alg
Alg
Alg
May
Pocos
Pocos
May
May
0
0
Si
Si
Si
Si
ASOCIADO A
EHRN
RPT
Pocos
Pocos
Raros
Si
Si
Si
Si
Si
Si
No
Mod
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
alg= algunos; may= mayora; ? = desconocido; O = negativo

No existen datos concretos de algunos anticuerpos, por lo que se considera que un
anticuerpo es clnicamente significativo, si l es activo a 37C y en test AGH.
La determinacin de la especificidad de un aloanticuerpo es importante para valorar la
necesidad de seleccionar para la transfusin, sangre antgeno negativa.
PRINCIPIO DEL TEST:
Usando las condiciones bajo las cuales el anticuerpo fue originalmente detectado, se mezcla
el suero con cada tipo celular del panel de identificacin, observando la presencia o
ausencia de lisis o aglutinacin y comparando el patern de reactividad con el perfil
antignico de las clulas.
PROCEDIMIENTO GENERAL
MUESTRA:
Idealmente 10 ml de sangre total sin anticoagulante
MATERIALES:
Tubos Khan
Gradilla para tubos Khan
Bao termorregulable
Centrfuga para Inmunohematologa
Pipetas Pasteur
Lector para test inmunohematolgicos.
REACTIVOS:
Suero antiglobulina humana poliespecfica.
PBS o suero fisiolgico tamponado pH 7.0
Panel de clulas para identificacin de anticuerpos.
Clulas control para test AGH.
Suero AB inerte.
METODO:
1.Leer cuidadosamente las instrucciones del panel a usar.
2.Numerar tantos tubos de Khan como muestras tenga el panel a usar,
agregue
un
tubo ms para el autocontrol.
3.Agregue a cada tubo, incluyendo el autocontrol 2 gotas del
suero
en
estudio,
usando una pipeta Pasteur.
4.Coloque en cada tubo 1 gota de eritrocitos del correspondiente frasco del panel de
identificacin. Ej.: En el tubo N1 agregar 1 gota de las clulas del frasco N1 y as
sucesivamente. En el tubo destinado al autocontrol, coloque 1 gota de clulas del
paciente suspendidas al 3% en salino o en solucin diluyente de clulas.
5.Mezclar y centrifugar el tiempo estandarizado para lectura
en su centrfuga.
6.Lea en busca de hemlisis o aglutinacin en cada tubo y anote los resultados en cruces,
tubo en mano.
7.Incubar por 45 minutos a 37C todos los tubos.
8.Proceda igual que en los puntos 5 y 6.
87
9.-
10.11.12.13.-
Lave con abundante PBS todos los tubos cuyo resultado sea dbilmente positivo o
negativo, por cuatro veces, cuidando de eliminar bien el sobrenadante del ltimo
lavado.
Agregue a cada tubo una gota de suero antiglobulina humana poliespecfico.
Proceda igual que en los puntos 5 y 6.
En los tubos cuya prueba de AGH fue negativa, agregue 1 gota de clulas control AGH,
centrifugue y lea.
Interprete los resultados en la tabla del panel.
NOTA: Existen varios tipos de paneles (fros, calientes, tratados con enzimas, etc.) en que el
procedimientos para realizar este test vara de acuerdo a las caractersticas de cada tipo de
panel.
Puede usarse LISS como medio de suspensin de cada clula del panel, teniendo la
precaucin de lavarlas por lo menos 1 vez con LISS y luego resuspenderlas en ese reactivo al
2%. De esa forma puede disminuirse el tiempo de incubacin.
CONTROL DE CALIDAD:
- Uso de paneles de clulas de reactividad conocida y probada.
- Validacin de los resultados AGH negativos con clulas control
- Uso de suero AB inerte como control negativo.
- Uso de prueba autloga.
AGH.
CONSIDERACIONES EN LA INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS SEROLOGICOS

Los aloanticuerpos de ciertas especificidades de grupo sanguneo muestran a menudo
caractersticas serolgicas constantes (ver tabla anterior). Al interpretar los resultados de los
estudios serolgicos, es importante buscar estas caractersticas y examinar los fenotipos tanto
de las muestras de hemates reactivos como no reactivos. Deben considerarse los puntos
siguientes:
a.b.c.d.-
Cules son los efectos de la temperatura, medio de suspensin o enzimas proteolticas

sobre la reaccin?
Hay alguna variacin de intensidad de la aglutinacin observada entre las muestras de
hemates reactivos?
Hay hemlisis?
Los hemates autlogos son o no reactivos?.
A continuacin se detalla una serie de puntos a seguir para interpretar los resultados de las
pruebas de identificacin de aloanticuerpos y seleccionar pruebas adicionales necesarias
para la confirmacin:
1.- AUTOCONTROL: Evaluar las reacciones del autocontrol. Si son negativas, se excluye la
presencia de autoanticuerpos. Si son positivas, considerar la presencia de autoanticuerpos o
aloanticuerpos producidos en respuesta a una transfusin previa reciente.
2.- HEMATIES REACTIVOS: No considerar inicialmente los antgenos presentes en las muestras no
reactivas.
3.- HEMATIES AUTOLOGOS: No considerar anticuerpos contra antgenos presentes en los
hemates autlogos.
4.- HEMATIES TRATADOS CON ENZIMAS: Examinar los fenotipos (Ej.: S, Fya) de las muestras que
reaccionan con los hemates no tratados, pero no son reactivas (o ms dbiles) frente a
hemates tratados con enzimas.
88
5.- PATRON DE REACCION: Examinar los patrones de reaccin en cada fase de la prueba,
recordar las posibles especificidades implicadas y considerar posibles especificidades en
relacin a la fase de la prueba y el tipo de especificidad (Ej.: aglutinacin con anti-P1,
hemlisis a 37C con anti Lea, falta de reactividad con anti-Fya y hemates tratados con
enzima)
6.- PRUEBAS ADICIONALES: Analizar un nmero suficiente de muestras de hemates de fenotipo
adecuado para obtener un valor p (probabilidad) inferior a 0.05 para cada anticuerpo
sospechado. Analizar el suero frente a hemates con dosis doble de antgeno contra los cuales
el suero puede tener anticuerpos, si estos no se encontraban presente en las muestras
anteriormente no reactivas. Analizar hemates autlogos con antisueros adicionales (en caso
necesario) para demostrar la ausencia de todos los antgenos contra los cuales el suero tiene
anticuerpos.
CALCULO DE PROBABILIDAD:
Para la identificacin definitiva del anticuerpo, debe realizarse un N suficiente de muestras de
hemates que carezcan del antgeno frente al cual el anticuerpo parece mostrar especificidad,
y un N suficiente de hemates que contengan dicho antgeno. Es necesario comprobar que el
patrn de reactividad observado no es producto del azar. La tabla siguiente muestra las
probabilidades de diversas combinaciones de pruebas reactivas y no reactivas calculadas
segn el mtodo exacto de Fisher para estimar probabilidades.
Los valores de probabilidad (p) que se muestran en la tabla siguiente son el resultado de
pruebas estadsticas que demuestran la probabilidad de que un conjunto dado de resultados
sea producto nicamente del azar. Un valor de p de 0.05 indica que los mismos resultados se
obtendran por azar en 1 de 20 estudios parecidos; las posibilidades de que la interpretacin de
los datos sea correcta es de 19:1 (95%). Una p de 0.05 es el valor mnimo aceptado en el que
una interpretacin se considera estadsticamente vlida. Debido a estos requisitos estadsticos,
para confirmar la especificidad del anticuerpo, la mayora de los paneles de hemates tienen
una capacidad limitada para identificar de forma concluyente algunos anticuerpos.
VALORES DE PROBABILIDAD
N muestras
analizadas
6
6
7
7
8
8
8
8
9
9
9
10
10
10
10
10
N muestras
positivas
4
3
5
4
7
6
5
4
8
7
6
7
9
8
6
5
N muestras
negativas
2
3
2
3
1
2
3
4
1
2
3
3
1
2
4
5
P
0.067
0.050
0.048
0.029
0.125
0.036
0.018
0.014
0.111
0.028
0.012
0.008
0.100
0.022
0.005
0.004
89
CALCULO:
Los niveles de probabilidad para la identificacin de anticuerpos se
calculan construyendo tablas de 2x2 en las que la presencia y ausencia
de reactividad srica se relaciona con la presencia o ausencia de un
antgeno concreto en las muestras de hemates analizadas. Una tabla 2x2
se construye como sigue:
HEMATIES
REACCIONES
SERICAS
POSITIVO
Ag PRESENTE
Ag AUSENTE
TOTAL
A+B
NEGATIVO
C+D
TOTAL
A+C
B+D
A: N de reacciones positivas observada con clulas Ag positivas.

B: N de reacciones positivas observada con clulas Ag. negativas
C: N de reacciones negativas ob. con clulas Ag. positivas
D: N de reacciones negativas ob. con clulas Ag. negativas
N: N total de muestras de hemates analizadas.
La frmula para calcular la probabilidad (p) a partir de una tabla 2X2 es la siguiente:
p=
(A+B)! x (C+D)! x (A+C)! x (B+D)!

N! x A! x B! x C! x D!
NOTA:
!: smbolo de factorial, que es el producto de todos los nmeros enteros desde 1 hasta el
nmero en cuestin. Ej.: 6!: 6x5x4x3x2x1= 720
3!: 3x2x1= 6
1!: 1
0!: 1
EJEMPLO DE CLCULO:
Para un suero reactivo con 3 muestras de clulas E+ y no reactivo con 3 muestras E-, la tabla
2X2 es:
REACCIONES
SERICAS
POSITIVO
Ag PRESENTE
E+
3
HEMATIES
Ag AUSENTE
E0
NEGATIVO
TOTAL
p:
90
3! x 3! x 3! x 3!
=
6! x 3! x 0! x 3! x 0!
36 =
720
1 =
20
TOTAL
3
0.05
Esto indica que hay una probabilidad de 1 en 20 de que un anticuerpo distinto de anti-E
pudiera, debido al azar, haber ocasionado las reacciones observadas. Este nivel de
probabilidad es el mnimo aceptable para la significacin estadstica. La prueba del suero
frente a 10 muestras de hemates, 6 E- y 4 E+, mejora drsticamente el nivel de probabilidad
para anti-E.
TECNICA DE IDENTIFICACION DE AC. EN BROMELINA
MUESTRA:
Suero en estudio
REACTIVOS:
1.- Solucin stock bromelina al 0.5%
-Pesar 0.5 gr de bromelina en polvo (con al menos 2 cristalizaciones de pureza 2x).
-Disolver homogenizando en 90 ml de suero fisiolgico (no agitar bruscamente ni agitar con
bagueta, demora aprox. 1 o 2
horas).
-Agregar 10 ml de buffer Soerensen 15 molar pH 5.5.
-Centrifugar o dejar decantar.
-Almacenar el sobrenadante en alcuotas y congelar a -30C, es estable por 2 - 3 meses.
2.- Buffer Soerensen 15 molar pH 5.5:

Solucin A:
KH2PO4
0.91 gr
H2O csp
100ml
Solucin B:
Na2HPO4 + 2H2O
1.2 gr
H2O csp
100 ml
Mezclar 97 ml de solucin A con 3 ml de solucin B.
Ajustar pH con las mismas soluciones.
3.- Bromelina al 0.1% :

-Diluir 1/4 bromelina al 0.5% recin descongelada con buffer
Soerensen diluido 1/10 con
suero fisiolgico, si no se dispone de buffer podra diluirse en fisiolgico.
-Panel de clulas para identificacin.
-Suero AB inerte
-Suero AGH poliespecfico
-Clulas control AGH.
METODO:
1.Marcar 11 tubos y agregar a cada uno el glbulo rojo correspondiente del panel de
identificacin, ms una prueba autloga.
2.Agregar a cada tubo 1 o 2 ml de suero fisiolgico (no PBS), centrifugar y eliminar todo el
sobrenadante, secando muy bien el borde del tubo.
3.Agregar a cada tubo 1 gota de bromelina al 0.1% recin preparada y agitar.
4.Incubar a temperatura ambiente por 5 minutos.
5.Inmediatamente agregar a cada tubo 2 gotas del suero en estudio, agitar.
6.Incubar a 37C por 20 minutos.
7.Centrifugar el tiempo estandarizado para lectura.
8.Leer contra controles positivos y negativos.
9.Terminar el test en AGH si es necesario.
91
TITULACION DE ANTICUERPOS
La titulacin es una forma semicuantitativa de medir la cantidad de anticuerpos presentes
en una muestra a estudiar.
Una de las aplicaciones ms tiles de la titulacin es el seguimiento de muestras de
pacientes embarazadas, con anticuerpos que pueden causar Enfermedad Hemoltica del
Recin Nacido. Para que los resultados sean significativos es importante titular en paralelo y
bajo las mismas condiciones, las muestras tomadas en las distintas etapas de la gestacin.
Los ttulos tambin puede ayudar a identificar la especificidad de los anticuerpo en una
mezcla, cuando el suero se titula contra clulas de fenotipos diferentes; a determinar la
fuerza relativa de un antgeno dado en diferentes muestras celulares (ej.: el ttulo de un
anticuerpo anti-M ser ms alto con clulas MM que con clulas MN); y a revelar la
presencia de anticuerpos de "alto ttulo, baja avidez" (ATBA).
Al proceder a titular un anticuerpo es necesario conocer previamente su medio, tiempo y
temperatura ptima de reaccin y utilizar estas mismas condiciones en la tcnica de
titulacin.
MATERIALES:
- Tubos de Kahn (vidrio 12x 75 mm).
- Pipeta automtica de 1 ml y de 100ul.
- Puntas desechables para pipeta automtica.
- Centrfuga para inmunohematologa calibrada previamente.
- Gradilla para tubos Kahn.
- Fuente luminosa para lectura.
REACTIVOS:
- Suero en estudio.
- Suspensin celular de fenotipo adecuado.
- Medio de suspensin adecuado al anticuerpo en estudio.
MTODO:
Se preparan diluciones madres dobles en la siguiente forma:
1. Marcar 10 tubos del 1 al 10; colocar a partir del tubo n 2 un volumen constante (ej.:
0.5ml) del diluyente apropiado (suero AB inerte, PBS, etc.). El tubo 1 corresponde al
suero sin diluir.
2. Depositar en los tubos 1 y 2, igual volumen de suero en estudio al usado para diluir (ej.:
0.5ml). Mezclar varias veces el contenido del tubo 2 con una punta de pipeta limpia,
evitando la formacin de burbujas. Se obtendr en este tubo una dilucin de 1 en 2.
3. Tomar del tubo 2 igual volumen elegido (0.5ml) y agregarlo al tubo 3. Mezclar en forma
similar al punto 2. Se obtendr una dilucin 1 en 4.
4. Repetir el proceso utilizando cada vez una punta de pipeta limpia para cada dilucin,
hasta terminar la corrida de tubos. En el tubo n 10 obtendr una dilucin 1 en 1024.
Retirar un volumen del suero diluido del ltimo tubo y guardarlo para realizar nuevas
diluciones si fuera necesario.
5. Marcar nuevamente 10 tubos del 1 al 10.
6. Depositar 100ul de cada dilucin madre en los tubos correspondientes y agregar 50ul
de la suspensin en salino al 4% de las clulas apropiadas. Puede utilizar la misma
punta si se dispensa primero la dilucin mayor (ej. desde el tubo 10).
92
7. Efectuar la tcnica que haya sido seleccionada de acuerdo a las caractersticas de

reaccin ptima del anticuerpo a titular (ej.: salino, TAI, 37C)
8. Examinar macroscpicamente las reacciones, evaluar y registrar los resultados. Como
el fenmeno de prozona puede producir reacciones ms dbiles o negativas en las
diluciones menores, es preferible empezar la lectura por el tubo que contiene la mayor
dilucin.
INTERPRETACIN:
El ttulo es recproco a la mayor dilucin que presenta aglutinacin de 1+, o hemlisis,
ej.: si la dilucin 1/64 da una reaccin positiva pero la dilucin siguiente 1/128 es
negativa, el ttulo es 64.
En estudios comparativos, una diferencia mayor a 2 diluciones entre dos sueros se
considera significativa. Las variaciones de la tcnica y del operador, puede hacer que
los resultados de las pruebas duplicadas se diferencien hasta +/- una dilucin.
Una mejor idea de la fuerza del anticuerpo, est dada por el score o puntaje de
reaccin. Por ejemplo, cuando se comparan dos sueros de la misma especificidad:
Suero
X
1/1
4+
12
4+
12
3+
10
1/8
2+
8
4+
12
4+
12
4+
12
3+
10
Dilucin
1/16
1/32
1+
1+
5
5
3+
10
2+
8
1/64
1+
5
1/128
0
1/256
0
1+
5
Score
55
71
Ambos sueros tienen el mismo ttulo de 64 ; el suero Y contiene el anticuerpo ms potente

con un score de 71, comparado con el suero X que muestra un score de 55. Una diferencia
mayor de 10 en el score es significativa. Para mejor interpretacin del clnico, es conveniente
informar ttulo y score.
NOTAS:
1.- Es esencial una tcnica de pipeteo cuidadosa. Se recomienda el uso de pipetas
automticas con puntas desechables, las que deben cambiarse despus de efectuar
cada dilucin.
2.- Deben utilizarse siempre los tiempos, temperaturas de incubacin y centrifugacin
considerados ptimos.
3.- La edad, fenotipo y concentracin de la suspensin de GR puede influir en los
resultados. Cuando haya que comparar los ttulos de diferentes muestras de un
anticuerpo, todos los sueros debern ser enfrentados a una muestra de hematies del
mismo donante. Si no es posible, se debe emplear GR del mismo fenotipo. Cuando
vaya a analizarse un mismo suero frente a distintas muestras de GR, las muestras de
suero deben extraerse y conservarse en las mismas condiciones, y diluirse a la misma
concentracin antes de su uso.
4.- Es imposible la interpretacin de los resultados si las muestras a comparar no se titulan
en paralelo, bajo las mismas condiciones de trabajo. Un ejemplo es el seguimiento de
muestras de pacientes embarazadas, con anticuerpos que pueden causar
Enfermedad Hemoltica del Recin Nacido. Para que los resultados sean significativos
es fundamental titular en paralelo y bajo las mismas condiciones las muestras tomadas
en las distintas etapas de la gestacin.
5.- En las pruebas de un suero nico frente a distintos tipos de GR, debe usarse la misma
muestra o suero diluido en todas ellas.
93
6.- Las determinaciones son ms exactas si se emplean mayores cantidades de suero en

las diluciones, por lo que se debe trabajar con dilucin madre, ya que da resultados
ms confiables que las diluciones individuales.
7.- Para tener resultados confiables es necesario usar en paralelo, como control de
calidad, un suero standard de referencia para compararlo con los resultados de la
muestra en estudio.
PRUEBA CRUZADA O CROSMATCH
El objetivo de la prueba cruzada o crosmatch es seleccionar, para cada receptor, la unidad
de sangre total, glbulos rojos u otro componente sanguneo que, una vez transfundidos,
tendrn una sobrevida aceptable, no experimenten destruccin clnicamente significativa y
no afecten los hematies del receptor.
Se han descrito 2 tipos de prueba cruzada: mayor y menor.
La prueba cruzada mayor es la ms importante y se aplica rutinariamente en los Bancos de
Sangre, ya que permite detectar en el receptor, anticuerpos clnicamente significativos que
pueden producir acortamiento de la sobrevida o destruccin de los hemates a transfundir.
La prueba cruzada menor, consiste en detectar anticuerpos presentes en el componente a
transfundir que pudieran destruir los eritrocitos del receptor. Se usa solo en ocasiones muy
especiales.
PRUEBA CRUZADA (mayor):
TCNICA EN TUBO
MUESTRA:
- Sangre total sin anticoagulante, que represente bien el estado inmunolgico del
receptor en el momento de realizar la transfusin.
MATERIALES:
- Pipetas Pasteur con capuchn de goma.
- Tubos Kahn de vidrio (12x75mm)
- Centrfuga para inmunohematologa.
- Bao termo regulable.
- Gradillas para tubos Kahn.
- Fuente de luz.
REACTIVOS:
- Suero Antiglobulina Humana poliespecfica.
- Suero fisiolgico tamponado o PBS.
- Medio de baja fuerza inica.(LISS)
- Suero control de reactividad dbil
- Suero AB inerte.
- o en su defecto controles comerciales
MTODO:
1.- Marque un tubo con el n de la unidad a transfundir. Prepare en l, una suspensin al
2% en LISS de los eritrocitos a transfundir, previamente lavados( 2 veces) y
concentrados. El ltimo lavado debe ser en LISS.(0.5ml.de LISS + 10microltde GR)
94
2.- Marque un tubo con el N de la unidad a transfundir y las iniciales del receptor.
Deposite 2 gotas del suero del receptor y 2 gotas de la suspensin de eritrocitos a
transfundir.
3.- Mezcle, centrifugue a velocidad y tiempo establecidos. Lea en busca de hemlisis o
aglutinacin, rotando suavemente el tubo frente a una fuente de luz. Anote los
resultados tubo en mano
4.- Incube a 37C por 10 -15 min; segn tiempo establecido en estandarizacin de LISS.
5.- Proceda igual al pto. 3.
6.- Lave los tubos negativos 4 veces con abundante PBS. Elimine totalmente el
sobrenadante del ltimo lavado.
7.- Agregue 1 gota de suero antiglobulina humana poliespecfico.
8.- Proceda igual al puntoN 3.
9.- Agregue a los tubos que dieron resultados negativos, 1 gota de clulas control AGH
(Coombs).
10.- Proceda igual al punto N 3.
INTERPRETACIN
Las pruebas cruzadas con resultados negativos en todas sus etapas (excepto clulas
control), indican que las unidades estudiadas son compatibles.
CONTROL DE CALIDAD:
1.- Junto con cada prueba cruzada es necesario realizar un autocontrol o prueba
autloga, bajo las mismas condiciones de trabajo que la muestra.
2.- El control de calidad, realizado diariamente y en cada turno, consta de un control
positivo que se obtiene contactando suero con Ac. dbil pero clnicamente
significativo y eritrocitos con el ag. respectivo; y de un control negativo utilizando
suero AB inerte sin Ac. irregulares y los eritrocitos adecuados.
3.- Al utilizar PBS o salino en la suspensin de los hemates, incubar por 60 min. en
proporcin 2 de suero / 1 de suspensin.
4.- Al usar LISS la proporcin suero/clula es 1/1.
PRUEBA CRUZADA(mayor): TCNICA EN GEL
MUESTRAS:
- Suero o plasma obtenido de muestras de sangre tomadas con EDTA.
- Glbulos Rojos obtenidos de la tubuladura de la unidad a utilizar.
MATERIALES
- Pipetas automticas de 25 y 50 microlitros.
- Puntas de pipetas desechables.
- Gradillas.
EQUIPOS:
- Centrfuga con soporte para geles.
- Incubador a 37C.
REACTIVOS
REVISAR
- Tarjeta Gel Coombs.
- solucin diluyente de GR segn inserto
METODO
1. Seleccionar una unidad de donante compatible.
95
2. Identifique las columnas de gel segn corresponda, con el nmero de la unidad

seleccionada y las iniciales del paciente. Debe utilizar una columna para cada
muestra en estudio.
3. Obtener una alcuota desde la tubuladura en un tubo Khan (preparar suspensin
segn indicaciones del inserto).
4. Dispense en otro tubo Khan, 200 ul
5. Tomar 5 ul de GR lavados, y traspasarlo al tubo con la solucin diluyente (GR 1%).
6. Dispense en los pocillos de incubacin de los microtubos (columna de gel)
correspondientes, 50 microlitros de glbulos rojos diluidos.
7. Aada 25 microlitros de suero o plasma del paciente.
8. Incube por 15 minutos a 37 C.
9. Centrifugue las tarjetas de geles.
10. Lea e interprete los resultados.
Se recomienda una lectura inmediata de los resultados despus de la centrifugacin de
las tarjetas, sin embargo se pueden leer hasta 24 horas despus, si se conservan en
posicin vertical, refrigeradas y selladas con parafilm, para evitar la evaporacin del
sobrenadante.
INTERPRETACIN RESULTADOS: Pgina 104
ESTANDARIZACION DEL MEDIO DE BAJA FUERZA IONICA (LISS)

Previo al uso de un medio LISS, ms an si es preparado en el propio laboratorio, es
necesario realizar una acuciosa estandarizacin para determinar el tiempo ptimo de
incubacin necesario para revelar de buena forma la presencia de un anticuerpo irregular.
MUESTRA:
- LISS a estandarizar
MATERIALES:
- Tubos Khan
- Centrfuga y lector para inmunohematologa.
- Pipetas pasteur y micropipetas.
- Bao termo-regulable.
- GR frescos R1r, Fy(a+b+), Kk. (heterocigotos para los antgeno involucrados).
- Anticuerpos controles anti-D, anti-Fya, anti-K, que presenten una reaccin dbil 1+ a
2+ en AGH.
- Suero AGH poliespecfico.
- Suero AB inerte.
- Clulas control AGH
METODO:
A.- Seleccin del tiempo de ptimo incubacin:
1.- Preparar 4 bateras de tubos marcados con diferentes tiempos de incubacin: 5,
10, 15, 20 y 25 minutos. Ellas son para el anti-D, anti-Fya, anti-K y suero AB inerte.
2.- Preparar una suspensin al 2% en el LISS que se est probando de los eritrocitos de
prueba.
96
3.- Colocar en cada tubo una proporcin idntica (1:1) de suero y de eritrocitos
apropiados.
4.- Incubar a 37C por los tiempos previamente establecidos y marcados en cada
tubo. Conviene iniciar la incubacin por el tiempo mayor, para procesar
posteriormente en forma simultnea todos los tubos.
5.- Hacer un test AGH a todos los tubos.
6.- Validar los resultados negativos con clulas control AGH.
7.- Registrar los resultados en intensidad de cruces.
INTERPRETACIN:
El tiempo de incubacin a elegir es el mnimo que muestre una aglutinacin igual o superior
a la lograda al incubar el mismo suero durante 1 hora en medio NISS (fuerza inica normal), y
en AGH.
Ejemplo:
MEDIO Y
TIEMPO DE
REACCION
LISS - 5'
LISS - 10'
LISS - 15'
LISS - 20'
LISS - 25'
NISS -1 Hr
AGH INDIRECTO
ANTI-D
1+
1+
2+
2+
2+
2+
ANTI-Fya
+/1+
1+
1+
ANTI-K
+/1+
1+
+/1+
AB INERTE
-
En este caso el tiempo de incubacin a elegir es 20 minutos.

B.- Otros parmetros a medir:
1.- pH entre 6.6 y 6.8
2.- Conductividad entre 3.4 y 3.8 mOhm/cm a 23C
3.- Osmolaridad entre 280 y 305 mosmol/Kg.
NOTAS:
1.- Los parmetros aqu indicados deben aplicarse a cada lote nuevo de reactivo o
cada vez que se prepara en el laboratorio.
2.- El control diario de su uso incluye trabajar en paralelo con la muestra problema,
sueros que posean anticuerpos de reactividad dbil y suero AB inerte.
3.- Revisar las recomendaciones para trabajar con medios LISS, en la tcnica
correspondiente.
PREPARACION Y ESTANDARIZACION DE SOLUCIONES ENZIMTICAS PARA USO EN

INMUNOHEMATOLOGIA
Las enzimas proteolticas modifican los antgenos de los eritrocitos de tal forma que
incrementan la reactividad de algunos sistemas antgeno-anticuerpo (Rh, Kidd) y, deprimen
la expresin antignica de otros (M, N, Fya y Fyb). El tratamiento enzimtico tambin
modifica las propiedades fsicas de la suspensin celular y puede causar agregacin
espontanea de las clulas. Las preparaciones enzimticas usadas en Banco de Sangre
pueden variar de lote a lote, de tal forma que cada vez que se prepara una solucin, debe
97
estandarizarse su actividad y tiempo de incubacin para garantizar una ptima funcin del
mtodo.
MATERIALES Y REACTIVOS:
1. -Papana tipo II Sigma Chem.
2. -Alfa Cistena Hydrocloride (C3 H7 NO2 S HCl)
3. -Buffer de Soerensen: (pH: 5.4) o PBS pH 5.5.
El Buffer Soerensen se prepara:
a) Fosfato potsico dihidrogenado (KH2 PO4) 8.83 gr
b) Fosfato disdico hidrogenado
x 12 H2O
x 2 H2O
anhidro
c) H2O destilada c.s.p.
1000 cc
4. - NaOH 1N
0.72 gr
0.36 gr
0.29 gr
PREPARACION DE LA SOLUCION STOCK: (Papana al 1%)

1.- Moler en un mortero 0.5 gr de papana, con unos pocos ml de buffer de Soerensen
pH 5.4, o PBS pH 5.5.
2.- Lave la suspensin de papana en un matraz de 250 ml, con 25 ml de buffer de
Soerensen pH 5.4, o con 190 ml de PBS pH 5.5.
3.- Agregue 0.219 gr de L - Cistena, llevar a 50 ml con ms buffer de Soerensen. Si ha
usado PBS, agregue 0.6 g L-cysteine hydrocloride disuelta en 10 ml de agua
destilada y neutralizada con NaOH 1N.
4.- Incube a 37C durante 1 hora. El tiempo de incubacin debe considerarse a partir
del momento en que la solucin alcance los 37C.
5.- Centrifugue la solucin, conserve el sobrenadante y descarte la papana no
disuelta.
6.- Guarde la solucin de papana activada a = o< de -20C en alcuotas de 0.1 ml.
Esta solucin no es estable a 4C. Una vez que la solucin es descongelada debe
eliminarse el resto al terminar el da, conservndola en vidrio. La solucin puede
guardarse hasta por 6 meses.
ESTANDARIZACIN DEL PROCEDIMIENTO:
Para un test enzimtico en dos etapas, el tiempo y condiciones de incubacin y la
dilucin ptima, debe determinarse para cada lote nuevo de solucin stock.
MATERIALES:
1.-Solucin stock de papana (al 1%).
2.-Varios sueros sin anticuerpos irregulares
3.-Sueros anti-D dbiles, que aglutinen solamente eritrocitos tratados con enzima.
4.-Sueros anti Fya de reactividad moderada o fuerte.
5.-Eritrocitos D y Fya positivos.
6.-Suero AB inerte.
7.-PBS pH 7.3
METODO:
1.- Diluya 1 volumen (0.1 ml) de solucin stock de papana (1%), con 9 volmenes (0.9
ml) de PBS pH 7.3.
2.- Marque varios tubos con diferentes tiempos de tratamiento enzimtico: 5, 10 y 15
minutos.
98
3.- Agregue a cada tubo 1 ml de papana al 0.1% y 0.25 ml de eritrocitos adecuados,

concentrados y previamente lavados.
4.- Mezcle e incube a 37C el tiempo indicado en el tubo. La incubacin es fcilmente
controlada si se comienza con el de 15 minutos , luego el de 10 y 5 minutos, de tal
forma que todos los tubos cumplen juntos su tiempo.
5.- Inmediatamente centrifugue, elimine el sobrenadante y lave los eritrocitos por 3
veces con cantidad adecuada de PBS.
6.- Resuspenda los eritrocitos al 3% en PBS.
7.- Marque 4 tubos para cada suero a investigar: sin tratar, 5, 10 y 15 minutos.
8.- Agregue a cada tubo 2 gotas del suero correspondiente. (anti-D, etc.)
9.- Agregue a todos los tubos 1 gota de la suspensin de eritrocitos que corresponda.
10.- Mezcle e incube por 15 minutos a 37C.
11.- Centrifugue y examine en busca de aglutinacin de la forma previamente
estandarizada.
12.- Lave las clulas por 3 o 4 veces con PBS y realice un AGH.
INTERPRETACION:
Posibles resultados de este test:
GR+ENZIMA
Sin tratar
37C
AGH
5 minutos
37C
AGH
10 minutos
37C
AGH
15 minutos
37C
AGH
SUERO AB INERTE
0
0
0
0
0
0
0
w+
ANTI-D
0
1+
1+
2+
2+
2+
2+
2+
ANTI-Fya
0
3+
0
1+
0
0
0
w+
En este caso el tiempo ptimo de incubacin es de 10 minutos. La incubacin por 5 minutos

no elimina totalmente la actividad Fya, ni incrementa al mximo la expresin del anti-D. La
incubacin por 15 minutos causa reacciones falsas positivas en AGH con suero AB inerte. Si la
incubacin de 5 minutos muestra un sobre tratamiento de los eritrocitos, es mejor usar una
dilucin de la enzima que acortar el tiempo de incubacin, ya que es difcil su monitoreo.
NOTA:
1.- La estandarizacin tambin puede realizarse efectuando diluciones seriadas de los
anticuerpos seleccionados (D, E, c, Fya y 2 muestras sin anticuerpos), los que se
someten a eritrocitos papainizados por diferentes tiempos de incubacin,
seleccionando el tiempo de tratamiento en que funciona mejor la enzima.
EVALUACION DEL TRATAMIENTO DE LOS ERITROCITOS:

Despus de haber establecido los tiempos ptimos de incubacin para un nuevo lote de
enzima, debe evaluarse los eritrocitos antes de ser usados para demostrar que ellos has sido
tratados adecuados y no excesivamente. Un tratamiento adecuado produce eritrocitos que
son aglutinados por un anticuerpo que se manifiesta solo en AGH con clulas no tratadas, y
no son aglutinadas o agregadas en presencia de suero inerte.
99
PROCEDIMIENTO:
1.- Seleccione un Ac. que aglutine solo eritrocitos tratados enzimticamente, y que de
reaccin positiva con clulas no tratadas solo en la fase AGH.
2.- Coloque 2 gotas del suero previamente seleccionado a un tubo marcado "positivo".
3.- Coloque 2 gotas de suero AB inerte en un tubo marcado "negativo".
4.- Agregue a cada tubo 1 gota de la suspensin al 3% de los eritrocitos previamente
tratados.
5.- Mezcle e incube durante 15 min. a 37C
6.- Centrifugue y observe en busca de aglutinacin , segn su tcnica estandarizada.
INTERPRETACION:
Debe aparecer aglutinacin solo en el tubo marcado "positivo". Si aparece aglutinacin en
el "negativo", los eritrocitos fueron tratados en forma excesiva.
USO DE DTT PARA DIFERENCIAR ANTICUERPOS IgM DE IgG
Los anticuerpos IgM, cuya estructura presenta 5 subunidades unidas por enlaces de azufre,
llamados enlaces intersubunidades. cada subunidad consta de 2 cadenas livianas y 2
cadenas pesadas que estn unidas por puentes disulfuros, llamados intracatenarios.
Los reactivos tiol pueden romper enlaces disulfuros, los enlaces intersubunidades son
afectados ms rpidamente que los intracadenas. Los enlaces intercatenarios de los
anticuerpos IgG e IgA, no son escindidos fcilmente por los reactivos tiol.
El tratamiento de los anticuerpos IgM por reactivos tiol anula las propiedades de
aglutinacin y fijacin de complemento. El tratamiento con reactivos tiol es til para
determinar la clase de Ig a la que pertenece un anticuerpo presente en el suero. Tambin
pueden usarse para anular la actividad de los anticuerpos IgM y permitir la deteccin de
anticuerpos IgG coexistentes.
MUESTRA:
2 ml de suero a tratar
REACTIVOS:
- PBS a pH 8.0
- Ditiotreitol (DTT) 0.01 M, preparado disolviendo 0.154 g de DTT en 100 ml de PBS pH 8.0
. Conservar a 4C.
PROCEDIMIENTO:
1.- Colocar 1 ml de suero a tratar en 2 tubos de ensayo.
2.- Agregar en uno de los tubos rotulados como control 1 ml de PBS pH 8.0.
3.- Agregar al otro tubo rotulado como test 1 ml de DTT 0.01 M.
4.- Mezclar e incubar a 37C durante 30 minutos a 2 horas. Las muestras que se
procesen deben investigarse despus de 30 minutos y luego a los 60 minutos, para
detectar si se ha producido gelificacin. Las muestras gelificadas no pueden usarse
para estudio de anticuerpos ya que el tratamiento ha denaturado todas las
protenas sricas.
5.- Estudie la actividad de anticuerpo mediante titulacin, en paralelo utilizando la
muestra tratada y la sin tratar.
NOTAS:
1.- Puede usarse 2-mercaptoetanol en vez de DTT para este propsito.
100
2.- Los reactivos tiol usados en baja concentracin pueden deprimir ciertos antgenos
del sistema Kell.
3.- Puede observarse una gelificacin del suero o plasma durante el tratamiento con
DTT. Esto puede ocurrir si se ha preparado incorrectamente el DTT 0.01M, y debe tener
una concentracin superior a 0.01M. Tambin puede aparecer por incubaciones
prolongadas en presencia de DTT.
4.- Estudie una alcuota de suero tratado con DTT a los 30 minutos de incubacin. Si el
test muestra que la actividad de IgM ha desaparecido, no es necesario seguir la
incubacin.
INTERPRETACION:
Se hace de acuerdo al siguiente esquema.
MUESTRA
SUERO+DTT
(AGH)
SUERO+PBS
SUERO+DTT
SUERO+PBS
SUERO+DTT
(AGH)
SUERO+PBS
DILUCION
1/16
1/32
1+
0
1/2
3+
1/4
2+
1/8
2+
INTERPRETACION
IgG
3+
0
2+
0
2+
0
1+
0
0
0
falta de incubacin
IgM
3+
2+
2+
1+
2+
0
1+
0
0
0
IgG+IgM
3+
2+
2+
1+
TRATAMIENTO DE ERITROCITOS CON DTT

El DTT es uno de los agentes reductores ms eficientes que se conocen. Puede reducir en
forma irreversible los enlaces disulfuro en grupos sulfhidrilos libres, producindose la ruptura
de la estructura terciaria de la protena. Sin la estructura terciaria, las protenas que tienen
actividad antignica, no pueden unirse a su anticuerpo especfico, y se elimina por
consiguiente la reactividad serolgica.
Los eritrocitos tratados con DTT no reaccionan con anticuerpos del sistema Kell, ni con antiLW, Yta, Ytb, Doa, Dob y muchos anticuerpos con caractersticas de baja avidez y alto ttulo
(BATA). Esta tcnica puede ser til en la identificacin de alguno de estos anticuerpos, o en
determinar si existen conjuntamente otros anticuerpos.
MUESTRA:
Eritrocitos a tratar
REACTIVOS:
- PBS
- Ditiotreitol (DTT) 0.2 M, pH 8.0
PROCEDIMIENTO:
1.- Lave 1 volumen de clulas test con PBS. Elimine todo el sobrenadante. Tambin trate
clulas k+ como control, tambin puede usarse otros Ag. Kell como control.
2.- Agregue 4 volmenes de DTT 0.2M, pH 8.0.
3.- Incube a 37C por 30-45 minutos.
101
4.- Lave las clulas por 4 veces con PBS. Puede aparecer una leve hemlisis, si ella es
excesiva utilice eritrocitos frescos y baje la concentracin del DTT.
5.- Resuspenda los eritrocitos a una concentracin del 3% en PBS.
6.- Estudie los eritrocitos tratados con el suero apropiado, y los eritrocitos control con el
suero anti Kell correspondiente.
INTERPRETACIN:
1.- Las clulas control deben dar un resultado negativo, si esto no ocurre, no han sido
tratadas adecuadamente
2.- Este tratamiento es ptimo para denaturar todos los antgenos de los sistemas Kell,
Cartwright, LW y Dombrock, y muchos antgenos BATA.
ADSORCION DE ANTICUERPOS
Un anticuerpo puede ser removido del suero por medio de la unin con eritrocitos
apropiados que contengan el antgeno especfico, formndose un complejo antgenoanticuerpo, permitiendo que al separar el suero sobrenadante, lo obtengamos libre del
anticuerpo que permanece unido a su antgeno.
Las tcnicas de adsorcin son usadas en diferentes situaciones:
- Remocin de autoanticuerpos de forma tal que permita la deteccin de aloanticuerpos
coexistentes en el suero.
- Confirmar la presencia de antgenos dbiles en los eritrocitos, por medio de su habilidad
para remover su anticuerpo especfico.
- Remocin de un anticuerpo no deseado de un suero clasificador.
- En combinacin con las tcnicas de elucin, permtela separacin de anticuerpos
mltiples presentes en un suero, para una posterior identificacin.
- Etc.
MUESTRA:
Sangre sin anticoagulante
MATERIAL:
- Eritrocitos de fenotipo apropiado (que contengan el antgeno para el anticuerpo que
se quiere remover del suero)
- PBS
- Suero AGH poliespecfico.
PROCEDIMIENTO:
1.- Realice un TAD a los eritrocitos seleccionados, el que debe ser negativo.
2.- Lave los eritrocitos seleccionados con abundante PBS por 4 veces. Despus del ltimo
lavado elimine todo el sobrenadante que sea posible. Se recomienda centrifugar
nuevamente y retirar el sobrenadante introduciendo un papel filtro hasta absorber la
capa remanente de suero, esto es necesario para evitar la dilucin del anticuerpo.
3.- Separe los eritrocitos en 3 alcuotas de 1 ml cada una.
4.- Mezcle volumen a volumen el suero a absorber y los eritrocitos ya seleccionados y
previamente marcados como alcuota 1.
5.- Incube a la temperatura ptima para el anticuerpo a absorber durante un mnimo de
60 minutos. La absorcin ser ms efectiva si el rea entre los reactantes es mayor,
por lo que se recomienda usar tubos de boca ancha y mezclar cada 10 minutos
aproximadamente.
102
6.- Centrifugue a 3.500 rpm por 10 minutos e idealmente a la misma temperatura que
utiliz en el punto 5.
7.- Transfiera el suero sobrenadante a un tubo limpio y previamente marcado para ser
estudiado. Si es necesario realizar una segunda o tercera absorcin debe utilizar las
alcuotas de eritrocitos marcados como 2 y 3. Este sobrenadante es el suero
absorbido.
8.- Estudie el suero absorbido para investigar la efectividad de su mtodo.
9.- Guarde los eritrocitos post absorcin, si desea utilizar tcnicas de elucin.
ELUCION DE ANTICUERPOS
El objetivo de toda elucin es interferir con la fuerzas no covalentes que mantienen unido el
complejo Ag-Ac. Estas interferencias pueden ser fsicas (calor, ultrasonido, congelamiento y
descongelamiento, detergentes o solventes orgnicos), o una accin qumica directa sobre
las fuerzas de unin del complejo, usando alteracin del Ph o concentraciones de sal.
En inmunohematologa la elucin se utiliza principalmente para remover anticuerpos de la
superficie de un eritrocito, que se han unido a l ya sea "in vivo" o "in vitro". El anticuerpo
obtenido es estudiado con diferentes fines.
El resultado de estos estudios son una parte importante del diagnstico de laboratorio de la
destruccin inmune de eritrocitos, debido a la presencia de autoanticuerpos, aloanticuerpos
producidos en respuesta a transfusiones recientes, incompatibilidad materno fetal y
fenmenos inducidos por drogas.
En combinacin con tcnicas de absorcin, la elucin es usada en el laboratorio para
purificar anticuerpos de grupo sanguneo, detectar antgenos dbiles, concentrar
anticuerpos, o retirar anticuerpos de una mezcla de ellos.
En otras circunstancias, la elucin se usa para retirar anticuerpos y dejar eritrocitos libres de
ellos (TAD -), y as poder estudiar las clulas no sensibilizadas.
Existen mltiples mtodos de elucin, por lo que no hay uno que sea eficaz en todos los
casos. Es importante por lo tanto elegir en forma adecuada la tcnica de acuerdo al tipo de
anticuerpo que se quiere eluir.
ELUCION POR CALOR:
Se aplica preferentemente en el estudio de la enfermedad hemoltica del RN por ABO, y en
la elucin de anticuerpos IgM de los eritrocitos.
En cada mtodo la solucin salina sobrenadante del ltimo lavado se analiza en paralelo
con el eluido, para determinar si la reactividad encontrada en este ltimo representa la
recuperacin de anticuerpos de la superficie celular, o es el resultado de la contaminacin
por suero residual , como puede ocurrir si los lavados previos a la elucin no fueron realizados
correctamente. Sin embargo puede encontrarse reactividad en el sobrenadante del ultimo
lavado si el anticuerpo unido a las clulas es de baja afinidad para su antgeno y se eluye
durante el proceso de lavado.
MUESTRA:
Sangre con anticoagulante. (EDTA, Citrato de Na)
103
MATERIAL:
- Albmina de bovino al 6%, preparada diluyendo albmina al 22-30
- PBS
% en PBS.
PROCEDIMIENTO:
1.- Lavar 2 ml de eritrocitos concentrados por 6 veces con abundante PBS.
2.- Retirar completamente el sobrenadante cada vez y cuidar de guardar el
sobrenadante del ltimo lavado como control negativo, para ser procesado en
paralelo con el eluado. Es aconsejable secar bien las paredes con papel absorbente.
3.- Mezclar volmenes iguales de eritrocitos concentrados lavados y albmina de bovino
al 6% en un tubo previamente marcado.
4.- Colocar el tubo a 56C durante 10 minutos. Agitar de vez en cuando durante este
perodo.
5.- Centrifugar el tubo a alta velocidad durante 2 minutos (1.000 g), preferentemente en
una centrfuga calentada.
6.- Transferir inmediatamente el sobrenadante a un tubo limpio y analizarlo en paralelo
con el sobrenadante del ltimo lavado.
ELUCION POR CLOROFORMO:
La elucin por cloroformo se usa en el estudio de un TAD asociado con anticuerpos reactivos
en caliente (IgG), ya sean auto o alo anticuerpos. En conjunto con tcnicas de absorcin,
sirve para separar mezclas de anticuerpos IgG presentes en un suero.
MUESTRA:
Sangre con anticoagulante
MATERIALES:
- Cloroformo (debe ser de muy alto grado)
- Albmina de bovino al 6%.
- PBS Ph 7.2 - 7.3
PROCEDIMIENTO:
3.- Prepare una suspensin al 50% en albmina al 6% de los eritrocitos previamente
lavados.
4.- Agregue un volumen igual de cloroformo.
5.- Tape el tubo con un tapn, y muvalo vigorosamente durante 15 a 20 segundos.
Posteriormente mezcle por inversin durante 1 minuto.
6.- Retire cuidadosamente el tapn y coloque el tubo en un bao a 56C, exactamente
por 5 minutos. (no debe exceder los 5 minutos a 56C). Mueva vigorosamente el
contenido del tubo con una bagueta durante este perodo.
7.- Centrifugue fuertemente el tubo (1.000 g) durante 5 minutos.
8.- Transfiera el eluado sobrenadante a un tubo limpio, y estdielo en paralelo con el
sobrenadante del ltimo lavado.
NOTA
El uso de LISS como diluyente de elucin y LISS como medio de suspensin de las clulas del
sistema de deteccin puede facilitar enormemente la deteccin del anticuerpo eluido.
104
ELUCION ACIDA
Este mtodo es aplicable en los mismos casos descritos para cloroformo, adems se usa en
el tratamiento de eritrocitos recubiertos por IgG para realizar posteriormente autoabsorcin.
MUESTRA:
Sangre con anticoagulante
MATERIALES:
- Solucin de elucin:
cido ctrico monohidratado
KH2PO4
Salino csp
(almacenar a 4C)
- Solucin de neutralizacin:
Na3PO4
H2O destilad csp
(almacenar a 4C)
- PBS
1.3 g
0.65 g
100 ml
13.0 g
100 ml
PROCEDIMIENTO:
3.- Mantenga todos los reactivos en hielo a 4C.
4.- Coloque 1 ml de eritrocitos concentrados y previamente lavados en un tubo
marcado.
5.- Agregue 1 ml de solucin de elucin y tome el tiempo.
6.- Tape el tubo y muvalo por inversin exactamente por 90 segundos.
7.- Remueva el tapn y centrifugue rpidamente a alta velocidad (1.000 g) por 45
segundos.
8.- Transfiera el sobrenadante a un tubo limpio y agregue 5 a 6 gotas de la solucin de
neutralizacin. Guarde los eritrocitos para absorciones si es necesario.
9.- Controle el pH, ajstelo a pH 7.0 si es necesario, agregando ms solucin de
neutralizacin.
10.- Centrifugue a igual velocidad que en 7 durante 2-3 minutos, para eliminar los
precipitados que se forman despus de la neutralizacin.
11.- Recupere el eluido sobrenadante y analcelo en paralelo con el sobrenadante del
ltimo lavado.
NOTAS:
1.
2.
Los eritrocitos obtenidos en el paso 8 pueden ser usados para estudiar fenotipo si el
TAD es negativo, salvo para el sistema Kell, ya que su expresin antignica se ve
disminuida despus del tratamiento con cido ctrico.
Los eritrocitos obtenidos por la elucin con cido ctrico pueden ser tratados con
proteasas y luego usados en estudios de autoabsorcin.
ESTUDIO Rh EN CELULAS CON TAD POSITIVO
105
Cuando las clulas estn muy sensibilizadas con IgG, el estudio de antgenos que se revelan
con AGH o con reactivos de alto contenido proteico es impracticable. Es necesario disociar
el complejo Ag-Ac por medio de elucin, sin daar la integridad de la membrana celular o
alterar la expresin antignica.
REACTIVOS:
- Sueros anti Rh de bajo contenido proteico
- Suero control Rh
- Suero AB inerte
- GR Ag.+ que sirva como control de dao en la reactividad celular.
- PBS o salino
PROCEDIMIENTO:
1.- Coloque en un tubo 1 volumen de eritrocitos sensibilizados concentrados,
previamente lavados y 3 volmenes de PBS. Haga lo mismo con los GR control.
2.- Incube los tubos a 45C por 10-30 minutos, con agitacin frecuente. El tiempo de
incubacin es directamente proporcional a la intensidad de la sensibilizacin.
3.- Centrifugue para separar los GR del salino. Descarte el sobrenadante.
4.- Realice un TAD a las clulas obtenidas. Si este TAD continua +, repita los pasos 1 a 3.
5.- Estudie los antgenos Rh en las clulas test y control, con los antisueros apropiados.
NOTA:
1.- Puede hacerse la elucin durante 3 minutos a 56C, sometiendo los tubos test y
control a este procedimiento.
AUTOADSORCION DE ANTICUERPOS CALIENTES (ZZAP)

Los autoanticuerpos calientes pueden enmascarar la presencia de aloanticuerpos
concomitantes de importancia clnica en el suero. Al absorber el suero con GR autlogos,
pueden retirarse del suero los autoanticuerpos, permitiendo la deteccin de aloanticuerpos
enmascarados. Sin embargo los GR autlogos circulantes generalmente estn recubiertos
de autoanticuerpos.
La autoabsorcin de anticuerpos calientes se hace ms efectiva si se retiran primero los
autoanticuerpos, y luego se tratan las clulas con enzimas. Al dejar los sitios antignicos libres
ser ms fcil unir los autoanticuerpos libres del suero. El tratamiento enzimtico favorece el
proceso de adsorcin.
El mejor procedimiento es usar reactivo ZZAP, que es una mezcla de enzima proteoltica y un
reactivo tiol. El tratamiento de los Ac. IgG con tiol, aumenta su susceptibilidad a la digestin
con proteasas. Cuando se tratan los eritrocitos recubiertos con IgG con el reactivo ZZAP, las
molculas de Igs pierden su integridad y se disocian de la superficie de la clula.
Simultneamente los GR son tratados con enzimas para aumentar su capacidad de
absorber anticuerpos.
La autoabsorcin no debe realizarse si el paciente ha sido recientemente transfundido, ya
que los eritrocitos transfundidos circulantes pueden absorber los aloanticuerpos libres
MUESTRA:
Muestra con y sin anticoagulante (EDTA), con autoanticuerpo
106
REACTIVOS:
- Papana al 1% activada con cistena o Ficina al 1%. Revise el
mtodo de
preparacin de las enzimas.
- PBS pH 6.5 y pH 8.0.
- DTT 0.2M preparado disolviendo 1 g de DTT en 32.4 ml de PBS pH 8.0. Guarde a -20C
en alicuotas de 3 ml
- GR R1R1, R2R2 y rr
PROCEDIMIENTO:
1.- Prepare el reactivo ZZAP mezclando 0.5 ml de papana al 1% activada, con 2.5 ml de
DTT y 2.0 ml de PBS pH 6.5. Alternativamente puede usar 1 ml de ficina al 1%. 2.5 ml de
DTT y 1.5 ml de PBS pH 6.5. Controle pH y ajuste a 6.5 si es necesario.
2.- Lave 1 ml de los eritrocitos de prueba por 1 vez con abundante salino.
3.- A los eritrocitos lavados y concentrados, agregue 2 ml de solucin de ZZAP. Invierta el
tubo varias veces para mezclar.
4.- Incube por 20-30 minutos a 37C, mezclando el tubo peridicamente.
5.- Saque los tubos y proceda a lavar las clulas por 3 veces con gran cantidad de PBS.
Elimine lo ms posible el sobrenadante del ltimo lavado, para prevenir diluciones del
suero. Separe los eritrocitos obtenidos en 3 alicuotas iguales.
6.- A 1 volumen de clulas tratadas con ZZAP agregue un volumen igual de suero del
paciente.
7.- Mezcle e incube a 37C por 20-45 minutos, mezcle ocasionalmente.
8.- Centrifugue a alta velocidad (1.000 g) durante 5 minutos y obtenga el suero
sobrenadante.
9.- Los puntos 6-8 deben repetirse usando el suero previamente absorvido, y frente a
diferentes alicuotas de eritrocitos tratados con ZZAP.
INTERPRETACION:
Generalmente con 2 absorciones se retiran del suero una cantidad suficiente de
autoanticuerpos permitiendo que la reactividad de aloanticuerpos pueda manifestarse. Si
todo el panel es positivo, deben hacerse un nmero mayor de autoabsorciones.
NOTAS:
1.- No es necesario lavar las clulas previo a su tratamiento con ZZAP.
2.- Ocasionalmente el tratamiento de eritrocitos con ZZAP puede ocasionar gelificacin,
esto puede deberse a un gran contenido de glbulos blancos.
3.- El tratamiento de los eritrocitos con ZZAP, hace que ellos pierdan los antgenos Kell,
MNSs, Duffy, Gerbich; muchos de los antgenos LW, Cartwright y Dombrock, y otro Ag
que se destruyen por accin enzimtica.
ADSORCION DIFERENCIAL EN CALIENTE USANDO ZZAP
El tratamiento de los eritrocitos con ZZAP, hace que ellos pierdan los antgenos Kell, MNSs,
Duffy, Gerbich; muchos de los antgenos LW, Cartwright y Dombrock, y otro Ag que se
destruyen por accin enzimtica. La adsorcin del suero con GR seleccionados con
fenotipo conocido, removern los autoanticuerpos y dejaran libres anticuerpos para muchos
sistemas sanguneos. La especificidad de los Ac. que quedan en el suero luego de la
adsorcin, puede ser confirmada con un panel de identificacin de anticuerpos.
107
Este mtodo se usa para retirar autoAc. del suero de un individuo que presenta
autoanticuerpos calientes, para determinar si l presenta adems aloanticuerpos de
importancia clnica. Este procedimiento se usa si el paciente ha sido recientemente
transfundido o no se consiguen suficientes GR autlogos y se desconoce el fenotipo del
paciente.
MUESTRA:
Muestra con y sin anticoagulante (EDTA)
REACTIVOS:
- Papana al 1% activada con cistena o Ficina al 1%. Revise el
preparacin de las enzimas.
- PBS pH 6.5 y pH 8.0.
- DTT 0.2M preparado disolviendo 1 g de DTT en 32.4 ml de PBS pH
20C en alicuotas de 3 ml
- GR R1R1, R2R2 y rr
mtodo de
8.0. Guarde a -
PROCEDIMIENTO:
1.- Prepare el reactivo ZZAP mezclando 0.5 ml de papana al 1% activada, con 2.5 ml de
DTT y 2.0 ml de PBS pH 6.5 . Alternativamente puede usar 1 ml de ficina al 1%. 2.5 ml
de DTT y 1.5 ml de PBS pH 6.5. Controle pH y ajuste a 6.5 si es necesario.
2.- Lave 1 ml de los eritrocitos de prueba por 1 vez con abundante salino.
3.- A cada alcuota de eritrocitos lavados y concentrados, agregue 2 ml de solucin de
ZZAP. Invierta el tubo varias veces para mezclar.
4.- Incube por 20-30 minutos a 37C, mezclando el tubo peridicamente.
5.- Saque los tubos y proceda a lavar las clulas por 3 veces con gran cantidad de PBS.
Elimine lo ms posible el sobrenadante del ltimo lavado, para prevenir diluciones del
suero.
6.- A 1 volumen de clulas tratadas con ZZAP agregue un volumen igual de suero del
paciente.
7.- Mezcle e incube a 37C por 30-60 minutos, mezcle ocasionalmente.
8.- Centrifugue a alta velocidad (1.000 g) durante 5 minutos y obtenga el suero
sobrenadante.
9.- estudie el suero absorbido frente a GR de igual fenotipo que los usados para la
absorcin, si la reaccin es positiva, repita los pasos 6 a 9 con una nueva alcuota de
GR tratados con ZZAP, hasta que el resultado sea negativo. El suero absorbido, puede
ser usado luego para identificacin de el o los anticuerpos remanentes o para
crossmatching.
NOTAS:
1.- Si el autoanticuerpo es muy potente deben prepararse 3 o ms alicuotas de clulas
tratadas.
2.- Para facilitar la remocin de anticuerpos puede aumentarse la cantidad de GR
tratados en relacin al suero.
3.- Los GR. deben estar lo ms concentrados posible para evitar la dilucin de
anticuerpos que queden en el suero.
4.- Agitar la mezcla durante el proceso de absorcin para aumentar la superficie de
contacto.
108
DETERMINACION DE ESPECIFICIDAD DE AUTO ANTICUERPOS FRIOS

Puede determinarse la especificidad de un autoanticuerpo fro si este se pone en contacto
con una batera de clulas con antgenos relevantes para este tipo de inmunoglobulinas.
REACTIVOS:
1.Suero en estudio. La muestra debe ser colocada a 37C para inducir la
coagulacin. El suero debe ser separado a esa temperatura.
2.Eritrocitos de prueba:
a) G.R. adultos grupo O I+, de 2 donantes.
b) G.R. del paciente (autlogos).
c) G.R. del mismo grupo sanguneo del paciente, si no es grupo O. Use eritrocitos del
mismo subgrupo A, si es A o AB.
d) Eritrocitos grupo O I+, tratados con ficina o papana.
e) Eritrocitos de cordn grupo O I(-)
PROCEDIMIENTO:
1.- Prepare una serie doble de diluciones del suero en salino. EL rango de dilucin debe ir
desde 1/2 hasta 1/4096 (12 tubos), y el volumen en cada tubo no debe ser inferior a 1
ml.
2.- Mezcle 3 gotas de cada dilucin con 1 gota de una suspensin al 5% en salino de
cada tipo de eritrocitos seleccionados.
3.- Incube a temperatura ambiente durante 15 min., centrifugue y examine
macroscpicamente en busca de aglutinacin.
4.- Transfiera los tubos a 4C e incube a esta temperatura durante 1 hora. Centrifugue y
examine los eritrocitos en busca de aglutinacin. Registre los resultados.
INTERPRETACION:
En la siguiente tabla se presentan las reacciones de los anticuerpos que comnmente se
encuentran como autoanticuerpos fros. El anti-I se presenta comnmente en la enfermedad
de aglutininas fras. Las especificidades anti-i y anti-Pr tambin pueden presentarse. Algunos
ejemplos de anti-I muestran preferencia por eritrocitos con fuerte expresin del antgeno H
(O Y A2), estos anticuerpos se llaman anti-IH. La reactividad de todos los autoanticuerpos
con especificidad relacionada al sistema Ii, se ve incrementada al usar eritrocitos tratados
con enzimas.
REACCIONES PARA DEMOSTRAR ESPECIFICIDAD DE AUTOANTICUERPOS FRIOS

GR
ANTI-I
ANTI-i
ANTI-H
ANTI-IH
ANTI-Pr
Oi adulto
Oi cordn
A
OI trat/enz
Autlogo
0/<
0/<
=
>
=
>
>
=
>
=
=
=/<
<
>
<
<
<
<
>
<
=
=
=
*
=
0 : No reactivo
> : Ms fuerte que G.R. OI
< : Ms dbil que G.R. OI
= : Igual que G.R. OI
* : Igual o ms dbil que G.R. OI
109
NOTAS:
1.- Cuando existen autoanticuerpos fros muy potentes, la especificidad puede no ser
aparente cuando se realizan estudios de titulacin a 4C o ambiente. En tales
circunstancias la incubacin del test debe ser hecha a 30 - 37C, o prolongar los
tiempos de incubacin y examinar posteriormente los tubos sin centrifugar.
2.- Se puede usar este procedimiento para realizar ttulo y especificidad.
DEMOSTRACION DE AUTOAGLUTININAS FRIAS (CRIOAGLUTININAS) DE ALTO TITULO
Esta metodologa se usa para demostrar un aumento de crioaglutininas con importancia
clnica. Se hacen diluciones seriadas del suero para determinar la fuerza de la autoaglutinina
fra. la fuerza expresada en ttulo es de utilidad diagnstica.
REACTIVOS:
- Plasma en estudio obtenido de una muestra con anticoagulante (EDTA), que se ha
dejado por 15 minutos a 37C, invirtindola peridicamente.
- Glbulos rojos O, I positivos, lavados y suspendidos al 1% en salino. Los eritrocitos deben
obtenerse de una muestra tomada con ACD o CPD como anticoagulante y con no
ms de 7 das de conservacin.
- PBS, Ph 7,3
PROCEDIMIENTO:
1.- Diluya el plasma en estudio 1/5 en salino.
2.- Prepare dos series de diluciones , en salino, del suero ya diluido. Use volmenes de 0,5
ml. para hacer estas diluciones. El rango final de diluciones debe estar entre 1/10 y
1/20.480 (12 tubos).
3.- Agregue a cada tubo 0,5 ml de la suspensin al 1% de eritrocitos OI.
4.- Mezcle e incube durante toda la noche a 4C.
5.- Examine macroscpicamente los tubos sin centrifugar, en busca de aglutinacin.
Anote la intensidad de cruces y su puntaje.
INTERPRETACION:
El ttulo es el valor recproco de la mxima dilucin en que se observa aglutinacin
macroscpica. Con esta tcnica, se consideran elevados los ttulos sobre 40. Sin embargo, la
AHAI por anticuerpos fros no se ve normalmente con ttulos bajo 640. Los ttulos inferiores a
640 pueden obtenerse cuando el autoanticuerpo tiene especificidad anti-i. En esta situacin
deben usarse eritrocitos I-negativos (i-cord o i-adult) en vez de los OI para la titulacin.
NOTA:
Es importante usar pipetas distintas para preparar cada dilucin del suero, ya que si se usa una
pipeta nica o la misma punta desechable para todas las diluciones, pueden obtenerse
resultados falsamente elevados por arrastre del suero de un tubo a otro. Pueden aparecer
diferencias como un ttulo aparente de 100.000 usando una pipeta nica en lugar del ttulo
real de 4000 cuando se usan pipetas separadas. Diluciones ms exactas del suero se logran
al usar mayores volmenes en las diluciones (ej.: 0.5 ml).
ESTUDIO DE CALIDAD DE UN SUERO ANTIGLOBULINA HUMANA
El control de calidad de un reactivo AGH poliespecfico consta de 4 partes: Especificidad,
Actividad, Sensibilidad y Potencia.
110
I.-ESPECIFICIDAD:
Debe controlarse cuidadosamente los niveles de anti-complemento que contienen los
sueros AGH, es especial la cantidad de anti-C4d y anti-C3d, ya que pequeas cantidades
de ellos se acumulan en GR normales guardados a 4C lo que podra llevar a resultados
falsos positivos en pruebas de compatibilidad. Debe controlarse tambin la presencia de Ac.
heteroespecficos.
a.-Determinacin de falsos positivos debido a complemento:
METODO:
1.- Preparar las siguientes suspensiones celulares: Seleccione 5 bolsas de sangre
almacenadas por 20-35 das a 4C extradas con CPD o CPD-A, de los distintos grupos
sanguneos (A,B,AB y O)
2.- Lave una cantidad de eritrocitos obtenidos de la tripa de la bolsa por 4 veces con
PBS.
3.- Prepare suspensiones al 3% en PBS y al 1.5% en LISS de cada tipo de eritrocito
seleccionado.
4.- Prepare un pool de sueros frescos compatibles con los eritrocitos seleccionados.
5.- Para cada uno de los sueros AGH a evaluar, prepare la siguiente serie de tubos, de
acuerdo con este ejemplo:
a.Eritrocitos seleccionados:
grupo A+ de 28 das de almacenamiento
grupo B+ de 20 das de almacenamiento
grupo O+ de 35 das de almacenamiento
grupo O- de 20 das de almacenamiento
grupo A- de 23 das de almacenamiento
b.Sueros seleccionados:
Grupo AB fresco.
SUERO
AB
AB
AB
AB
AB
GR
A+
B+
O+
O-
A-
SERIE I
SERIE II
SUSPENSION EN
SALINO
SUSPENSION EN
LISS
6.- Colocar 2 gotas de suero compatible (en el ejemplo AB)a cada uno de los tubos de
ambas series.
7.- Agregar 1 gota de los GR correspondientes suspendidos en salino para la serie I y en
LISS para la serie II.
8.- Centrifugar de la forma estandarizada para lectura, y observar los tubos en busca de
aglutinacin y/o hemlisis.
9.- Incube todos los tubos de la serie II durante 15-20 minutos a 37C (el tiempo
previamente estandarizado para LISS), y la serie I por 45 minutos a 37C.
10.- Lave todas las clulas y realice un test AGH de acuerdo a las indicaciones del
fabricante.
11.- Examine en busca de aglutinacin macroscpica. Registre los resultados.
12.- Incube todos los tubos por 5 minutos a temperatura ambiente.
13.- Centrifugue los tubos y lea en busca de aglutinacin o lisis.
111
14.- Controles a usar: Todos los TAD de las clulas empleadas deben ser negativos previo
a la incubacin con el suero fresco. Debe hacerse en paralelo con un suero AGH de
referencia.
INTERPRETACION:
Todas las reacciones deben ser macroscpicamente negativas.
Eventualmente
pueden
aparecer
pequeos
aglutinados
al
microscopio; si bien ellos no son deseables, son aceptados.
II.-EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD ANTICOMPLEMENTO

Se evala la actividad anti-C3d, C3b y C4.
REACTIVOS:
1.- Solucin stock de buffer fosfato para preparar las soluciones A,B,C y D:
Solucin I:
Fosfato dipotsico 1M
K2HPO4 -3 H2O
228 g
H2O destilada csp
1000 ml
Solucin II:
Fosfato potsico dicido 1M
KH2PO4
136.1 g
H2O destilada csp
1000 ml
2.- Buffer fosfato pH 6.1:
Solucin A:
Solucin II
H2O destilada csp
Solucin B:
Solucin I
H2O destilada csp
5 ml
1000 ml
0.5 ml
100 ml
La solucin A se coloca en un recipiente de 1000 ml, sobre un

agitador magntico donde se pueda medir pH. Se agrega lentamente
solucin B hasta lograr un pH de 6.1.
3.- Solucin sucrosa-fosfato:
Sucrosa
92.4 g
Buffer fosfato pH 6.1
1000 ml
Guardar congelado a -20C en alicuotas de 10 ml.
4.- HCl 0.05 N:
Diluir 2.5 ml de HCl 1N hasta completar 50 ml con H2O destilada.
5.- Tripsina al 1%: (Sigma N Cat. T8253)
Tripsina cristalizada
HCl 0.05 N csp
0.1 g
10 ml
Disolver mezclando suavemente, guardar congelada a -20C en

alicuotas de 0.1 ml.
6.- Buffer fosfato pH 7.7 0.1 M:
Solucin C:
Solucin I
H2O destilada csp
Solucin D:
Solucin II
112
5 ml
50 ml
1 ml
H2O destilada csp
10 ml
A la solucin C se le agrega la solucin D hasta obtener un pH de 7.7.

Guardar congelado a -20C en alicuotas de 1 ml.
7.- Tripsina al 0.1%:
A 0.1 ml de tripsina al 1% agregar 0.9 ml de buffer fosfato 0.1 M pH 7.7 .
Mezclar cuidadosamente. Debe prepararse solo previo a su uso.
8.- Na3 EDTA 0.2 M:
Solucin E:
Solucin F:
Na2 EDTAx2H2O
H2O destilada csp
Na4 EDTAx4H2O
H2O destilada csp
7.45 g
100 ml
9.05 g
100 ml
Agregar un volumen de solucin E a un volumen de solucin F.

Guardar a 4C.
9.- Sucrosa al 10%:
Sucrosa
H2O destilada csp
25 g
250 ml
Guardar a 4C o congelar a -20C.

10.- Albmina al 2%:
Diluir albmina al 20-30% en PBS pH 7.3, almacenar a 4C. Preparar solo
la cantidad necesaria. Si se va a almacenar por mucho tiempo,
agregar azida de sodio al 1%.
11.- PBS pH 7.3:
Preparar de la forma habitual.
PROCEDIMIENTO:
A: PREPARACION DE GR RECUBIERTOS CON C3b - C4b:
1.- Marcar 1 tubo nuevo: C3b y C3d.
2.- Colocar en cada uno de los tubos:
Glucosa fosfato
8.5 ml
GR O suspendidos al 50% en PBS
1.0 ml
Suero Humano fresco compatible
0.5 ml
3.- Mezclar cuidadosamente e incubar por 30 minutos a 37C, agitando suavemente
cada 10 minutos durante la incubacin.
4.- Centrifugar y eliminar el sobrenadante.
5.- Lavar los GR por 4 veces con PBS
6.- Preparar una suspensin al 3% en PBS con los GR del tubo 1. Guardarlas a 4C si es
necesario.
7.- Los GR del tubo 2 se tratarn con tripsina para obtener C3d-C4d.
B: OBTENCION DE GR RECUBIERTOS CON C3d - C4d:
113
8.- Agregar 1 ml de tripsina al 0.1%, Recin preparada a 0.5 ml de GR lavados y

concentrados, ya recubiertos con C3b-C4b. Corresponde al tubo 2 del procedimiento
anterior.
9.- Mezclar cuidadosamente e incubar por 30 minutos a 37C. Invertir 3 veces durante la
incubacin.
10.- Centrifugar y eliminar el sobrenadante
11.- Lavar los GR por 4 veces con PBS.
12.- Preparar una suspensin al 3% en PBS con los GR. Guardarlas a 4C si es necesario.
C: PREPARACION DE GR RECUBIERTOS CON C4:
1.- Colocar en un tubo de centrfuga nuevo:
10 ml de sucrosa al 10%
0.15 ml de Na3 EDTA 0.2 M
0.5 ml de suero humano fresco compatible
0.5 ml de G.R. concentrados, lavados y frescos.
2.- Mezclar cuidadosamente e incubar por 5 minutos a 37C, mover 2 -3 veces durante la
incubacin.
3.- Centrifugar y eliminar el sobrenadante
4.- Lavar los GR por 4 veces con PBS.
5.- Preparar una suspensin al 3% en PBS con los GR. Guardarlas a 4C si es necesario.
TEST CON LOS ERITROCITOS PREVIAMENTE PREPARADOS:
1.- Hacer diluciones seriadas de los sueros AGH en estudio (400ul).
2.- Agregar 50ul de las suspensiones celulares a tubos previamente marcados, y 50 ul de los
sueros AGH en estudio, de acuerdo al procedimiento del fabricante (las clulas ya
estn lavadas).
3.- Preparar en paralelo sueros controles de referencia.
4.- Centrifugar todos los tubos el tiempo estandarizado para lectura. Incubar 15 segundos
despus de agregar el SAGH.
5.- Leer inmediatamente, rotando suavemente el tubo.
6.- Preparar una serie de diluciones madres, de cada uno de los sueros AGH en estudio.
Ellas se enfrentarn a los eritrocitos recubiertos con C3b, C3d y C4 por separado. Se
preparan de la siguiente forma:
a) Colocar 300 microlitros de albmina al 2% en PBS a cada uno de
los tubos previamente marcados: s/d, 2, 4, 8, 16, 32.
b) Agregar igual cantidad de suero AGH en estudio a los tubos marcados sin diluir y 2.
c) Mezclar suavemente el contenido del tubo 2 y proseguir de acuerdo a la tcnica
estndar de titulacin. Guardar la alcuota obtenida del ltimo tubo.
7.- Colocar en 3 series de tubos previamente marcados 50 microlitros de dilucin del AGH y
50 microlitros de los eritrocitos recubiertos correspondientes.
8.- Centrifugar todos los tubos el tiempo estandarizado para lectura.
9.- Leer inmediatamente, rotando suavemente el tubo. Registrar los resultados.
10.- Hacer una segunda lectura despus de 5 min de incubacin.
NOTA:
Se recomienda agregar los GR de cada serie, luego centrifugar y leer para no tener
diferencias con respecto al tiempo que permanecen en contacto las clulas con el suero
AGH.
114
INTERPRETACION:
1.- Se define el ttulo como el valor recproco de la mxima dilucin del suero en la cual se
observa 1+ de aglutinacin.
2.- Anti-C3b: ttulo no mayor de 8 ni menor de 2
3.- Anti-C3d: ttulo no mayor de 4 ni menor de 2
4.- Anti-C4: ttulo no superior de 4.
5.- Estos resultados deben ser equivalentes a los obtenidos con los sueros de referencia.
III.- POTENCIA Y SENSIBILIDAD DEL SUERO AGH:
A: SELECCION DE UN SUERO ANTI-D: (Ac. IgG dbil)
Es el suero con que se sensibilizarn los eritrocitos de prueba.
1.- El suero sin diluir no debe aglutinar directamente eritrocitos R1r en
suspensin al 3%, y debe tener un ttulo de 16-32 en AGH de referencia.
2.- No se recomienda usar anti-D comercial, sino obtenido de una persona
sensibilizada.
3.- Es recomendable usar los mismos GR y el mismo suero anti-D cada vez
que se realice control de calidad.
4.- Idealmente usar 2 marcas de AGH para definir el ttulo del anti-D
PROCEDIMIENTO:
1.- Preparar diluciones madres seriadas del anti-D, usando albmina al 1% en PBS como
diluyente.
2.- Hacer una batera de tubos con 1 volumen (100 microlitros) de dilucin y 1 volumen de
suspensin de GR R1r, (preparada usando un pool de 4 dadores de ese genotipo).
3.- Mezclar e incubar por 45 minutos a 37C
4.- Lavar las clulas por 4 veces y agregar 2 gotas del suero AGH.
5.- Centrifugar y leer de la forma estandarizada. Registrar los resultados.
INTERPRETACION:
El suero anti D ideal ser el que presente un ttulo de 16-32 en AGH.
B.-RECUBRIMIENTO DE LOS GR CON ANTI-D:
1.- Preparar diluciones seriadas hasta 64 con el suero anti-D previamente seleccionado.
2.- Preparar 1 ml de cada dilucin de anti-D.
3.- Agregar a cada una de las diluciones de anti-D 1 ml de la suspensin de GR R1r al 3%
4.- Incubar por 45 minutos a 37C, con agitacin ocasional.
5.- Lavar las clulas por 4 veces y resuspender hasta lograr una dilucin al 3%. Controlar
sensibilizacin.
6.- Hacer un tubo control en paralelo, utilizando PBS en vez de anti-D.
NOTA:
Debe sensibilizarse GR con anti-D y otros GR con anti-Fya (Ttulo 8-16 con clulas
heterocigotas) para hacer en paralelo 2 tableros de ajedrez.
C.-PREPARACION DE LAS DILUCIONES DEL SUERO AGH:
1.- Preparar diluciones seriadas hasta 512 del suero AGH en estudio y del suero de
referencia. Usar albmina al 2% en PBS como diluyente. Trabajar con volmenes de 2
ml.
D.-EVALUACION DE LA POTENCIA Y SENSIBILIDAD DEL AGH:
(tablero de ajedrez).
115
Preparar un tablero para cada tipo de eritrocitos sensibilizados: anti-D y anti-Fya.

1.- Trabajar de acuerdo al siguiente esquema:
GR SENSIBILIZADOS
2
4
8
16
32
64
DILUCIONES DEL SUERO AGH

8
16
32
64
128
256
1
9
17
25
33
41
2
10
18
26
34
42
3
11
19
27
35
43
7
15
23
31
39
47
8
16
24
32
40
48
4
12
20
28
36
44
5
13
21
29
37
45
6
14
22
30
38
46
2.- Colocar en cada tubo de cada fila una gota de la suspensin de GR sensibilizados
Ej.: GR sensibilizados con una dilucin 1/2 de anti-D se coloca en los tubos marcados
1, 2,3,4,5,6,7 y 8. As sucesivamente.
3.- Agregar a cada tubo 2 gotas de la dilucin del suero AGH, siguiendo el esquema
descrito.
4.- Centrifugar inmediatamente y leer cada fila.
5.- Repetir el procedimiento para cada fila.
INTERPRETACION:
Un suero AGH se considera adecuado si se obtiene una reaccin equivalente a un suero
AGH de referencia, por ejemplo.
1.2.-
116
Ttulo de suero AGH: El suero a evaluar debe dar una reaccin 1+ en la dilucin
1/128 del suero AGH, contra GR sensibilizados con anti-D 1/2 (tubo 7).
Sensibilidad: El suero evaluado debe dar al menos 1+ con los eritrocitos
sensibilizados con anti-D en dilucin 1/32, contra el suero AGH diluido 1/2 (tubo 33).
INFORME CONTROL DE CALIDAD SUERO AGH: ACTIVIDAD ANTI-IgG
MARCA
TIPO
Ac.
G. ROJOS
SD
S.
A
G
H
LOTE
Anti-D
4
8
SD
Ac.
16
G. ROJOS
32
SD
S.
A
G
H
FECHA VENC.
2
4
16
16
32
32
64
64
128
128
TITULO:
32
SD
SENSIBILIDAD:
Anti- Fya (anti-K)

2
4
8
16
SENSIBILIDAD:
SCORE:
TITULO:
FECHA:
FECHA:
T.M.
T.M.
SCORE:
OBSERVACIONES:
117
CARACTERISTICAS GENERALES DE METODOS USADOS EN INMUNOHEMATOLOGIA

CARACTERISTICA
TRADICIONAL
GEL
FASE SOLIDA
REACCION
Tubo
Aglutinacin
Tubo
Aglutinacin
MATRIZ DE
REACCION
Ninguna
GR/suero o
plasma
DETECCIN
AGH
Gel dextranacrilamida
inmunolgicame
nte inerte.
AGH
SI
NO
SI
NO
SI
SI
SI
Cuantitativa
1+ a 4+, CM
Cuantitativa
1+ a 4+, CM
ESTABILIDAD DE
REACCION
NO
SI 2-3 das
Semicuantitativa
+fuerte, +, - , no
CM
SI 2 das
Semicuantitativa
+fuerte, +, - , no
CM
SI 7 das
C. de CALIDAD
+ y -; CCC
N lote tarjeta y
diluyente.
+y-
CC recubiertas
de IgG
NO
SI
SI
SI
NO
SI
NO
LAVADO
CENTRIFUGACIO SI
N
LECTURA
EQUIPOS ESP.
AUTOMATIZACIO NO
N
APROB x FDA
Microplaca
Inmuno
adherencia
De fase slida
Microplaca de
poliestireno,
qumicamente
modificado
GR recubiertos
por anti-IgG
COLUMNA
AFINIDAD
Inmuno
adherencia
Gel de sefarosa
inmunoreactivo
Protena G y A
ERITROCITOS CONGELADOS PARA FINES DE LABORATORIO

Los eritrocitos pueden ser guardados usando glicerol, que por medio de aumentar la
tonicidad de las clulas, los protege contra la deshidratacin excesiva y contra la
formacin de cristales de agua durante el congelamiento y descongelamiento.
TCNICA A
REACTIVOS:
1.- Solucin de glicerol al 40%, para congelar clulas:
Citrato trisdico
118
60.0 gr
Citrato monosdico
Citrato disdico
Glicerol
H2O destilada
6.2 gr
5.6 gr
800 ml
1200 ml
El reactivo se prepara de la siguiente forma:Disolver los 60 gr de

citrato trisdico en 100 ml de agua destilada precalentada a 56C,
agregue los otros reactivos y lleve a 1200 ml de agua; disuelva
completamente y adicione 800 ml de glicerol tibio (45C), guardar
a 4C.
2.- Soluciones de descongelacin:
A) Citrato trisdico al 5% : 250 gr citrato trisdico 5 litros de agua
destilada
B) Solucin 12% : A 1760 ml de solucin A agregue 240 ml de
glicerol y 0.2 gr de azida de sodio.
C) Solucin 6% : A 1880 ml de solucin A agregue 120 ml de
glicerol y 0.2 gr de azida de sodio.
D) Solucin 2% : A 96 ml de solucin A agregue 120 ml de glicerol,
0.2 gr de azida de sodio y 1000 ml de agua destilada.
PROCEDIMIENTO:
1.- Lavar las clulas a congelar por 6 veces con salino
tamponado.
2.- Mezclar volumen a volumen las clulas lavadas y concentradas con la solucin de
glicerol al 40%.
3.- Congelar en alcuotas.
4.- Para descongelar, proceder a colocar las clulas en
soluciones decrecientes de
glicerol : 40 - 12 - 6 - 2% , agregando siempre igual volumen del glicerol que
corresponde y de clulas a descongelar. Dejar 5min en cada paso.
5.- Una vez terminado este procedimiento, lavar las clulas una vez con PBS.
119
ESTUDIO INMUNOHEMATOLGICO DE UNA MUESTRA
CON ANTICUERPOS FRIOS
Muestra de sangre con y sin anticoagulante

obtenida a 37C
Eritrocitos
Muestra con anticoagulante
Realizar Clasificacin
ABO y Rh
TAD
Uselos paraRealizar
autoabsorcin
si es necesario
Suero o Plasma
Realizar
Clasificacin ABO a 37C
Deteccin Ac.
Estudio Crioaglutinina
Aglutinina fria
de bajo rango trmico
120
Aglutinina fria
de amplio rango de T
reaccin en diferentes
medios
PA positiva
PA negativa
Estudio de
Ttulo
Rango trmico
Especificidad
Estudie frente
a eritocitos O
de adulto y RN
Negativo con
eritrocitos A,B y AB
Estudio del suero

luego de autoabsorcin
o absorcin diferencias
segn antecedentes de T
Realice
Autoabsorcin en frio
si no ha sido
transfundido
Probable
anti-IH
ESTUDIO DE MUESTRAS CON TAD POSITIVO
TAD positivo
Realizar: Estudio Acs irregulares

Identificacin de anticuerpos
Paciente NO transfundido
Autoabsorcin para
identificar Ac libre
enmascarado
Usar eritrocitos obtenidos

en muestra con
anticoagulante
Paciente transfundido en los ltimos 3 meses
Elucin
Calor (56x 1' o 45x 1hr)
ZZAP
Difosfato Cloroquina, eter
Fenotipar GR paciente
Realizar un TAD
diferencial
Separar eritrocitos
autlogos de homlogos
Absorcin diferencial
Estudio del eluado
Fenotipar GR paciente
Elucin
Estudio del suero

Estudio del Eluado
Deteccin Acs.
Identificacin Acs.
Paralelo con suero nativo
Estudio del eluado
Deteccin Acs.
Identificacin Acs.
Prueba de compatibilidad
Deteccin Acs.
Identificacin Acs.
Todos los GR (-)
Algunos GR +
Todos los GR +
AHAI por drogas?
Aloanticuerpo?
Titulacin Diferencial
Revisar historia clnica del paciente y obtener muestra suficiente para pruebas inmunohematolgicas
1.-Auto o AloAc. contra

Ag. de alta
incidencia
2.-Absorcin incompleta
Anticuerpos pueden ser eliminados al realizar absorcin diferencial
121
SANGRE Y COMPONENTES SANGUINEOS
122
PREPARACION Y CONSERVACION DE COMPONENTES SANGUINEOS

Los anticoagulantes y soluciones preservadoras(ver tabla) que en la actualidad se aaden a la
sangre del donante hacen posible su conservacin por perodos ms prolongados; esto junto al
uso de sistemas cerrados de recoleccin que llevan adosados otras bolsas satlites de forma
integral, permite la separacin asptica de los componentes sanguneos.
Las condiciones ptimas de velocidad, tiempo y temperatura requeridos tanto para la
preparacin como conservacin y rendimiento de estos componentes, son diferentes para
cada uno y deben estar determinadas para cada centrfuga y cada laboratorio en particular y
revisarse peridicamente (ver tabla).
CONTENIDO DE LAS SOLUCIONES PRESERVADORAS (g/L)
CONTENIDO
Citrato trisdico
cidoctrico
Dextrosa
Fosfato de Sodio
adenina
ACD-A
22.00
8.00
24.50
CPD
26.30
3.27
25.50
2.22
CP2D
26.30
3.27
51.10
2.22
CPDA-1
26.30
3.27
31.90
2.22
0.275
CAMBIOS BIOQUIMICOS DE SANGRE CONSERVADA CON CPD Y CPDA-1
VARIABLES
CPD
SANGRE
CPDA-1
ST
0
100
Dias conservacin
0
21
% cel. viables a las 24
100
80
horas
pH a 37C
7.2
6.84
7.6
% ATP (del valor
100
86
100
inicial)
2,3DPG (del valor
100
44
100
inicial)
K+ plasma *
3.9
21.0
4.2
Na+ plasma *
168.0
156.0
169.0
Hb plasmtica
17.0
191.0
82.0
* = mmol/L ; & =el plasma total de estas unidades es 70 ml.
GR
0
100
ST
35
79
GR
35
71
7.55
100
100
6.98
56+/16
<10
6.71
45+/12
<10
5.1
169.0
78.0
27.3
155.0
461.0
78.5 &
111.0
658.0
PREPARACION DE COMPONENTES SANGUINEOS POR CENTRIFUGACIN.

Centrifugacin a "alta velocidad
Concentrado de Glbulos Rojos
Concentrado de Plaquetas.
Plasma
Plasmafresis
Crioprecipitado
Centrifugacin "suave"
Plasma rico en plaquetas
estandarizar cada centrifuga

Ej.: 5000 x g, 7 minutos
estandarizar cada centrifuga

Ej.: 2000 x g, 3 minutos.
123
METODOS
A. CONCENTRADO DE GLOBULOS ROJOS.
1.
Extraer sangre en bolsa doble o triple y mantenerla en

refrigeracin a 4C hasta ser procesada.
2. Centrifugar a "alta velocidad" y a 5C.
3. Colocar la bolsa principal que contiene la sangre centrifugada en
un compresor de plasma y soltar el muelle, dejando que la placa
del compresor entre en contacto con la bolsa.
4. Obturar el tubo entre la bolsa primaria y las satlites con una pinza
o hacer un nudo flojo. Si hay 2 bolsas satlites, colocar una pinza
para que el plasma entre a slo una de ellas.
5. Marcar las bolsa satlites con la misma identificacin que la bolsa
principal (N donante, fecha de preparacin, tipo de
componente ) y romper el sello. La eliminacin de 225-250 ml de
plasma dar lugar a unos hemates residuales con 70- 80% de Hto.
6.- Volver a pinzar cuando haya entrado en la bolsa satlite la
cantidad de plasma deseada. Sellar la tubuladura entre ambas
bolsas en dos lugares y cortar en esa zona.
7.- Almacenar los componentes sanguneos obtenidos a temperatura
adecuada para cada uno.
Si se extrae sangre en bolsa nica: despus de dejar la bolsa en
el compresor, colocar una pinza en la tubuladura de la bolsa de
trasferencia estril, insertar en condiciones aspticas la cnula de
la bolsa transfer en el orificio de salida de la bolsa de sangre,
aflojar la pinza y continuar el procedimiento antes sealado. Esta
unidad preparada en "circuito abierto" debe ser transfundida
dentro de las 24 hrs.
B. CONCENTRADO DE GLOBULOS ROJOS POBRE EN LEUCOCITOS (bolsa invertida)
1.- Utilizar sangre con no ms de 6 horas de extrada.
2.- Centrifugar la bolsa en forma invertida a "alta velocidad" y 5C.
3.- Colgar de un soporte la bolsa primaria que contiene la sangre
centrifugada y continuar el procedimiento igual al anterior a partir
del punto 4. Traspasar a la bolsa satlite o transfer estril solo los
dos tercios de los glbulos rojos eliminado as cerca del 75 % de
leucocitos.
Si se extrae sangre en bolsa nica: seguir las indicaciones
arriba expuestas.
C. PLASMA FRESCO CONGELADO (PFC)
1.- Extraer sangre en bolsa doble o triple, mantenerla en refrigeracin
a 4C y procesarla antes de 6 hrs de extrada.
2.- Proceder igual a mtodo A.
3.- Congelar el plasma a -20C o ms, de modo tal que ste quede
congelado en estado slido en un plazo de 6 hrs. desde la extraccin.
4. Almacenar el PFC a -20C .
NOTA: el plasma debe estar libre de glbulos rojos
124
D. CRIOPRECIPITADO DE GLOBULINA ANTI HEMOFILICA(AHF) O FACTOR VIII.

1.- Extraer sangre en bolsa doble o triple, mantenerla en refrigeracin
a 4C y procesarla antes de 6 hrs de extrada.
2.- Proceder igual a mtodo A
3.- Congelar el plasma en forma rpida antes de 1 hr, esto se logra
con congeladores de aire forzado o congeladores mecnicos
capaces de mantener temperaturas de -65C o menos, hielo seco
o un bao de etanol-hielo seco.
4.- Dejar descongelar el plasma a 1-6C colocando la bolsa en un
refrigerador a 4C.
5.- Centrifugar el plasma a "alta velocidad" y 5C una vez
descongelado.
6.- Colocar la bolsa en una prensa de plasma y dejar pasar a la
bolsa satlite el 90% del plasma sobrenadante sin factor VIII
dejando 10 a 15 ml de plasma para resuspender el crioprecipitado
al momento de usar.
7.- Pinzar la tubuladura, comprobar que cada bolsa tenga la
identificacin correcta (N donante, fecha elaboracin, tipo de
componente). Sellar la tubuladura entre ambas bolsas en dos
lugares y cortar en esa zona.
8.- Congelar rpidamente el crioprecipitado a -65C y almacenar a 20C. En estas condiciones dura 12 meses a partir de la fecha de
extraccin.
Almacenar el plasma sin F VIII a - 20C o 4C
E. CONCENTRADO DE PLAQUETAS DE DONANTE AL AZAR:
1.- Extraer sangre en bolsa doble o triple, mantener a temperatura
ambiente (22C) antes de separar el plasma rico en plaquetas de
los hemates. Procesar dentro de 6 hrs de extraccin.
2.- Centrifugar mediante centrifugacin "suave" a 20C para obtener
plasma rico en plaquetas.
3.- dem mtodo A, puntos 3 - 4 -5
4.- Traspasar el plasma rico en plaquetas a la bolsa satlite prevista
como "Concentrado de Plaquetas" (CP). Evitar la contaminacin
con glbulos rojos. Sellar la tubuladura en dos puntos entre la bolsa
primaria y bolsa satlite CP y cortar entre ellos. Refrigerar los
hemates a 4C.
5.- Centrifugar el plasma rico en plaquetas a 20C y "alta velocidad".
6.- Traspasar el plasma sobrenadante pobre en plaquetas a otra
bolsa satlite; dejar en el concentrado de plaquetas 50-60ml de
plasma. Sellar el tubo en dos puntos ente ambas bolsa y cortar
entre ellos.
7.- El concentrado plaquetario debe permanecer quieto a
temperatura ambiente por 1 hr; luego colocar en el agitador de
plaquetas a 20C. El plasma pobre en plaquetas puede
congelarse rpidamente y conservar como plasma fresco
congelado.
125
CARACTERISTICAS DE LOS PRINCIPALES COMPONENTES SANGUINEOS

COMPONENTE
CONSERVACION
VOLUMEN
CONTENIDO
(DIAS)
(ML)
GLOBULOS
CPD: 21
250
GR: 65-80%
ROJOS
CPD-A: 35
a
PLASMA:
CONCENTRAHEPARINA: 2
300
20-35%
DOS
C.A.: 24 hr
ALGUNAS:
T:2-6C
plaquetas y
GB
G.R. POBRES
C.C.: igual
175
GR: 80-95%
EN LEUCO
GR
a
PLASMA:
C.A.: 24 Hr
245
5-20%
GB: < 30%
T:2-6C
PLAQUETAS
Dadores al
Azar
3-5
depende del
plstico
24 Hrs
(C.A.)
50 -65
PLAQUETAS:
5.5 x 1010
PLASMA:
50-65ml
GB:
T:22C
PLAQUETAS
Donante
nico
24 Hrs
(C.A.)
3 -5 depende del
plstico
300
a
500
PLASMA
fresco
congelado
1 ao congelado
6-24 hr lquido
150
a
250
PLAQUETAS:
3.0 x 1011
PLASMA:
300-500 ml
GB: *
PLASMA:
todos los F. de
coagulacin
F.I: 400 mg
T: -20C
PLASMA
Conservado
CRIOPRECIPITADO
5 aos
congelado
lquido: 5
dasms que
sangre
T: -20C
Congelado:
1 ao
Descongelad
6-8 hr
En pool:
4 hr
t:-20C
126
150
a
250
10-30
PLASMA:
Solo F.
estables
F.VIII C:
80-150 mg
F.XIII:
20-30% del
nivel st.
FIBRINOGENO
150-250 mg
F.VW:
40-70% del
nivel st.
CONTROL DE CALIDAD
- Hto: < 80%
-Cultivo
bacteriano
segn
programa de
Con.Cal.
-Recuperacin:
70-80% GR
-Remocin:
70% GB
(< 5x108 GB)
-Hto:>o= 80%
-Recuento: &
5.5x1010 Plaq.
-pH: 6.0 o mas
al fin de su
conservacin
-Preparacin:
antes de 6 hrs. de
extraccin
-Volumen: 50-65 ml
-Recuento: &
3.0x1011 Plaq.
-pH: 6.0 dem
-Preparacin:
antes de 6 hrs. de
extraccin
-Conservacin:
< 18C
- Descongelar:
30-37C
-Conservacin:
< 18C
- 80 UI F.VIII
en el 75% de las
unidades
estudiadas.
(1 vez al mes)
-Descongelar a
37C.
C.A.: Circuito abierto, C.C.: Circuito cerrado

GR:Glbulos rojos, GB: Glbulos blancos
&: en el 75% de las unidades estudiadas.
CALIBRACION DE CENTRIFUGA PARA OBTENCION DE PLAQUETAS.
1.- Recoger un tubo de sangre del donante con EDTA. Realizar recuento de
plaquetas. Si es inferior a 133 X 103/ ul no debe utilizar esta unidad para
calibracin.
2.- Calcular el N de plaquetas en la unidad de sangre total:
recuento de plaq/ul X 1000 X ml de sangre = N de plaq en la unidad de
sangre total.
3.- Centrifugar la unidad de sangre a velocidad y tiempo seleccionado ej.: 1200
rpm, 10 min.
4.- Obturar temporalmente la tubuladura de una bolsa satlite. Traspasar el
plasma rico en plaquetas (PRP) segn tcnica. No retirar el obturador
temporal hasta el paso siguiente.
5.- Exprimir la tubuladura varias veces hacia dentro de la bolsa para que
contenga una muestra representativa del PRP.
6.- Sellar un segmento del tubo y desconectarlo de manera que la bolsa de PRP
siga siendo estril.
7.- Realizar recuento plaquetario de esta muestra y calcular el N de plaquetas
en la bolsa de PRP:
Recuento plaquetas/ul x 1000 x ml de PRP = N de plaquetas en el PRP
8.- Calcular el porcentaje de recuperacin:
N de plaquetas en PRP
X 100 = recuperacin (%)
N plaquetas en sangre total
9.- Repetir el procedimiento anterior 3 o 4 veces con distintos donantes, utilizando
centrfugas, velocidades y tiempos distintos. Comparar los rendimientos de
cada ensayo
10.- Seleccionar el tiempo ms corto y velocidad menor que d el mayor
porcentaje de recuperacin de plaquetas en PRP con un nivel aceptable de
contaminacin de rojos.
11.- Proceder a la preparacin del concentrado plaquetario(CP) en la forma
habitual, dejando un segmento largo de tubuladura conectado al
concentrado.
12.- Despus de resuspender las plaquetas, exprimir varias veces la tubuladura
mezclando bien su contenido con el de la bolsa para obtener una muestra
representativa. Sellar un segmento del tubo y desconectarlo de manera que
la bolsa de CP siga siendo estril.
13.- Realizar recuento plaquetario. Calcular el N de plaquetas en CP:
Recuento plaquetas/ul x 1000 x ml del CP = N de plaquetas en CP
14.- Calcular porcentaje de recuperacin:
N de plaquetas en CP
N plaquetas en PRP
X 100 = recuperacin (%)
127
15.- Repetir los pasos 11 a 14 con distintas centrfugas, velocidades y tiempos

distintos. Comparar los rendimientos de cada conjunto de condiciones de
centrifugacin.
16.- Seleccionar el tiempo ms corto y velocidad menor que den mayor
porcentaje de recuperacin de plaquetas en el concentrado.
Una vez calibrada la centrfuga, no es necesario volver a hacerlo a no ser que
se presente un problema de funcionamiento o que disminuya el rendimiento
de los concentrados.
CONTENIDO APROXIMADO DE LEUCOCITOS EN LOS COMPONENTES SANGUINEOS
COMPONENTE SANGUINEO
Sangre total
Concentrado de eritrocitos
Eritrocitos lavados
GR congelados y desglicerolizados
Plaquetas por afresis
Concentrados plaquetarios
LEUCOCITOS POR UNIDAD

109
108
107
106 - 107
106 - 108
107
REDUCCION DE LEUCOCITOS EN LOS COMPONENTES SANGUINEOS:

DEFINICIONES:
Leucocitos/ul:
N de clulas en un volumen de 1 ul, se determina
por mtodo de conteo microscpico directo.
Leucocitos/ml:
Para determinar leucocitos por ml, multiplique el N
de leucocitos/ul por 1000. (1000ul = 1 ml)
Contenido residual (efluente):
Se define como en N total de
leucocitos que permanecen en la unidad despus de la filtracin.
Tambin se llama contenido efluente y se puede calcular :
Leucocitos/ul X 1000 X volumen de la unidad (ml).
Log (logaritmo) de reduccin
Es la reduccin de leucocitos que se
logra por filtracin, expresada en logaritmo. Log es el poder en
que el nmero 10 debe aumentar en orden de producir un
nmero dado. Ejemplo: log de 1000 = log 103 = 3; log de 10000 =
log 104 = 4
FORMULAS:
Eficiencia porcentual de reduccin de leucocitos:
Se ha usado para indicarla fraccin o porcentaje de leucocitos
que se retiran durante la filtracin. Disponiendo de un mtodo de
recuento apropiado y seleccionado, la eficiencia porcentual de
reduccin de leucocitos se calcula:
Eficiencia % de reduccin = 1 (leuco efluentes/ul) *
(leuco iniciales/ul)
100 de leucocitos
EJEMPLO:
1.-Volumen de la unidad: 350 ml
2.-Recuento inicial (antes de la filtracin):
1.750.000.000 (1.75x109) leucocitos inicial/unidad o
5.000.000 (5 x 106) leucocitos/ml o
128
5.000 (5 x 103) leucocitos/ul

3.-Recuento residual (efluente): 5 leucocitos/ul
4.-Clculo:
a.-Eficiencia % de reduccin de leucocitos:
(1 5/5000)
100
= 99.9%
b.-Log de reduccin:
log 10leucocitos iniciales/ul
leucocitos residuales/ul
log 105000 = 3.00
5
c.-Contenido residual:
leucocitos/ul * 1000 * Volumen de la unidad(ml)
5 * 1000 * 350 = 1.75 * 106 leuco/unidad
DATOS BIOLOGICOS DE ALGUNOS FACTORES DE COAGULACION
FACTOR
FIBRINOGENO
PROTROMBINA
F-V
F-X
F - VII
F - VIII
F - IX
F - XI
F - XIII
Von
WILLEBRAND
CONCENTRA
APROX.
PLASMA
(mg/ml)
2.8
0.13
0.068
0.012
0.0005
0.00024
0.005
0.006
0.029
0.006
VIDA MEDIA
(Horas)
99+/-3
73+/-7
12-36
33
5
13+/-3
23+/-2
61
282
20-40
NIVEL
RECOMEND
PARA
CIRUGIA
1mg/ml
40-50%
10-30%
10-40%
10-20%
30-100%
20-60%
20-30%
10%
20-50%
FRACCION
INTRAVASCULAR
RECUPERACION
72%
58%
22%
83%
51%
100%
80-100%
24-54%
100%
50%
73%
129
UNIDAD
130

INTRODUCCION:
La transfusin de sangre y sus componentes generalmente es una
forma segura y eficaz de corregir dficit hematolgico, sin embargo no
est libre de riesgo debido a diferentes causas: ser un trasplante de un
tejido liquido presencia de nuevas enfermedades transmisibles,
incompatibilidades no pesquisable, donante en periodo de ventana
de una enfermedad transmisible y no detectada por las actuales
tcnica de laboratorio, falla inherente a toda actividad humana etc.
Los efectos adversos que pueden presentarse con la administracin de
sangre involucran aspecto y problemas ms amplios que la comn
mente llamado " reacciones transfusionales". Alrededor de un 10% de
los receptores transfundidos presentan reacciones; algunas son
evitables pero otras no.
El conocimiento de los efectos adversos a la transfusin es necesario y
obligatorio para el Tecnlogo Mdico que ejerce en un servicio de
sangre, para su prevencin, reconocimiento precoz, investigar las
causas y adoptar las medidas correctoras correspondientes.
A.- REACCIONES TRANSFUNSIONALES INMEDIATAS
Las reacciones transfusionales inmediatas generalmente ocurren dentro
las dos primeras horas de la transfusin, son de varios tipos y pueden
deberse a causas inmunolgicas y no inmunolgicas.
Las causas inmunolgicas incluyen incompatibilidad del receptor con los
eritrocitos del donante, glbulos blancos, plaquetas o componentes
plasmticos.
En la mayora de los casos, las reacciones agudas se deben a la
presencia de anticuerpos del receptor dirigidos contra antgenos
presentes en el producto transfundido. Menos frecuentemente puede
ocurrir por anticuerpos incompatibles en el plasma del donante.
Las reacciones transfusionales no inmunolgicas pueden resultar de
sobrecarga circulatoria, contaminacin bacteriana, accin de
citoquinas liberada en la sangre almacenada etc.
La observacin del paciente durante la transfusin permitir pesquisar las
reacciones adversas tempranas y tomar las medidas apropiadas para
limitar el dao. Pulso, temperatura y presin sangunea deben registrarse
antes de iniciar la transfusin, 15 minutos despus y repetir cada 30
minutos.
131
REACCION TRANSFUSIONAL HEMOLITICA

Es causada por la reaccin antgeno - anticuerpo que activa el
complemento, los sistemas de coagulacin y una respuesta endocrina,
provocando un aumento de la destruccin de los eritrocitos.
La hemlisis puede ser predominantemente intravascular, debida a
anticuerpos IgM que fijan y activan la va clsica del complemento
hasta C9 provocando la ruptura de las clulas en el torrente sanguneo
y liberacin de hemoglobina al plasma.
Los anticuerpos IgG que no activan complemento (ej.: anti-Rh) o solo
parcialmente hasta la etapa C3 (ej.: anti Kell), causan hemlisis
extravascular, mediada por fagocitosis o citotoxicidad de los eritrocitos
por las clulas del sistema retculo endotelial (SRE) en el hgado y bazo.
Otras causas de hemlisis son el dao osmtico de eritrocitos por
inyeccin
accidental
de
agua
en
la
circulacin,contaminacinbacteriana, sobrecalentamiento etc.
REACCION TRANSFUSIONAL HEMOLITICA AGUDA
Es causada por anticuerpos IgM dirigidos contra antgenos eritrocitarios
produciendo hemlisis intravascular; generalmente son el resultado de
incompatibilidad ABO aunque ocasionalmente otros anticuerpos IgM
pueden originarla.
Signos y sntomas de una reaccin hemoltica
Fiebre
Calofros
Dolor torcico
Hipotensin
Nausea
Disnea
Enrojecimiento facial
Hemoglobinuria
Shock
Hemorragia generalizada
Oliguria o anuria
Dolor lumbar
Dolor en zona de puncin
Hemoglobinemia
TRANSFUSIONES ABO INCOMPATIBLES

La incompatibilidad ABO es principalmente el resultado de una
incorrecta identificacin del receptor, ya sea en la muestra de sangre
usada para realizar los exmenes pre transfusionales o en el momento
de administrar la transfusin.
Los signos clnicos seguidos a una transfusin ABO incompatible se
presentan en los primeros minuto; bastan solo 5 a 20 ml de infusin
para desencadenar la reaccin. Algunos pacientes presentan los
signos clsicos y ms caractersticos como son: disnea,
dolor
precordial, angustia, dolor en la regin lumbar. Otros se quejan de
132
dolor o malestar en el sitio de puncin, enrojecimiento facial o leve

alza de la temperatura.
En pacientes que se encuentran anestesiados durante la transfusin,
dos importantes signos revelan este tipo de reaccin: hipotensin a
pesar de una adecuada reposicin de fluidos, y
sangramiento
anormal.
Los efectos clnicos varan grandemente. Por un lado, menos del 10%
de los pacientes con esta incompatibilidad, desarrollan hemlisis
intravascular aguda, seguida de falla renal y muerte; mientras en
otros, los efectos clnicos no son fcilmente reconocibles.
Es difcil establecer la frecuencia exacta con que ocurre este
fenmeno; sin embargo es lejos la causa ms comn de reaccin
hemoltica aguda y de muerte inmediata despus de la transfusin.
REACCION FEBRIL NO HEMOLTICA
A.- Por anticuerpos HLA
Es causada por anticuerpos HLA del receptor que reaccionan
con el correspondiente antgeno ubicado en los glbulos blancos
del donante. El
complejo antgeno - anticuerpo activa
complemento y
se une a
monocitos activado liberando
citoquinas con propiedades pirognicas.
Se produce en alrededor de 10 % de las transfusiones sanguneas,
caracterizndose por un estado febril con calofros. Es ms
frecuente en multparas y en pacientes politransfundidos. La
reaccin febril se produce generalmente dentro de los 60 - 80
minutos de producida la transfusin, no es fatal y generalmente
provoca gran malestar al paciente.
B.- Por citoquinas
Fiebre y calofros pueden ocurrir por accin de citoquinas tales
como IL-1 y TNF presentes en productos sanguneos conservados.
Las citoquinas son producidas por los glbulos blancos del
donante ; su efecto puede prevenirse usando
productos
depletados de glbulos blancos antes del almacenamiento.
REACCIN CAUSADA POR PROTEINAS: Anticuerpos a IgA .
Una de las complicaciones ms comunes es la urticaria, producida por
un alergeno del receptor contra las protenas plasmticas del
donante, generalmente por anticuerpos Ig E.
La reaccin anafilctica severa puede aparecer inmediatamente
caracterizada por broncoespasmo, tos, cianosis, inestabilidad
muscular, nauseas, shock, prdida de conciencia; es producida por
anticuerpos Ig A.
133
TRANSFUSION DE GLOBULOS ROJOS CONTAMINADOS

Los glbulos rojos contaminados con bacterias se reconocen por la
presencia de hemlisis y la decoloracin de ellos. Los efectos txicos
inmediatos que produce esta sangre al ser transfundida provocan a
veces un dao mayor que las otras reacciones hemolticas.
La contaminacin de la sangre no es frecuente, pero ocurre por las
siguientes razones:
- Bacteremia asintomtica en donantes aparentemente sanos
con un pequeo nmero de bacterias, como por ej. Yersinia
enterocoltica.
- Contaminacin de la unidad de sangre durante la recoleccin
con bacterias de la flora normal de la piel del donante (ej.:
staphylococcus epidermis, micrococcus o sarcina spp)
- solucin anticoagulante contaminada
- Contaminacin de los sellos de las bolsas de crioprecipitado o
plasma congelado, al descongelarlos en agua infectada
comnmente con pseudomonas.
FALLA PULMONAR AGUDA (TRALI)
Esta reaccin es poco usual, pero potencialmente fatal. Ocurre
inmediatamente despus de la transfusin debido a anticuerpos
leucocitarios del donante contra leucocitos del receptor o viceversa,
producindose una leucoaglutinacin .
El paciente puede presentar sntomas de distress respiratorio, fiebre,
calofros, cianosis hipovolemia y edema pulmonar agudo.
HEMOLISIS CAUSADA POR LINFOCITOS PASAJEROS
rganostrasplantados contienen linfocitos que pueden montar una
respuesta inmune contra los antgenos del husped.
Algunos receptores de grupo A, B o AB, que reciben un rgano de
dadores del grupo O, pueden sufrir hemlisis a la semana del
trasplante como resultado de la produccin de anti A, o anti B por
linfocitos pasajeros del rgano donado, estimulado por los antgenos A
o B de receptor.
Esta hemlisis se ha observado en pacientes que
trasplantados de rin, corazn, mdula sea y pulmn.
han
sido
En estos casos hay una inesperada baja de la hemoglobina en el post

trasplante a pesar de la transfusin sangunea.
134
HEMOLISIS CAUSADA POR UN EFECTO OSMOTICO

Inyeccin accidental de agua en la circulacin , conduce a una
reaccin hemoltica . Esto se presenta generalmente en operados de
prostactectomia transuretral.
HEMOLISIS CAUSADA POR DAO FSICO DE LA SANGRE
A.- Sobre calentamiento
En algunas ocasiones es preciso entibiar la sangre para
transfundirla, si la temperatura excede los 37C puede producirse
hemlisis de la unidad.
Aparte de considerar las razones clnicas para entibiar la sangre,
es necesario utilizar el equipo apropiado para esta operacin, y
verificar el control de temperatura de ste.
En caso de utilizar un bao Mara, controlar la temperatura con un
termmetro durante todo el proceso.
B.- Congelacin
La unidad de sangre puede congelarse por almacenamiento en
refrigerador no diseado para esta funcin o dejada en el
congelador en forma accidental por desconocimiento de las
normas establecidas.
C.- Administracin a presin
Transfundir la sangre y/o glbulos rojos a presin y/o por una aguja
de calibre muy pequeo como las utilizadas para infundir suero,
provocan hemlisis de los eritrocitos.
B.- REACCIONES TRANSFUSIONALES RETARDADAS
Estas se presentan das o meses despus de la transfusin y tienen
diversas etiologas tanto inmunolgicas como no inmunolgicas. Se
considera
tambin en esta clasificacin
a las complicaciones
infecciosas de la transfusin
REACCION TRANSFUSIONAL HEMOLITICA RETARDADA
Se debe a la accin de aloanticuerpos IgG clnicamente significativos
(ej.: anti-D, anti Jka) presentes en el paciente y que pueden provocar
hemlisis extravascular de eritrocitos incompatibles del donante.
Existen dos tipos de reaccin hemoltica retardada.
El primero se produce semanas despus de la transfusin como
resultado de una aloinmunizacin primaria. La produccin de
anticuerpos comienza 7 o 10 das post transfusin y a medida que
135
aumenta el ttulo y avidez de ste se produce la hemlisis de los

eritrocitos
El segundo tipo tiene lugar en sujetos ya inmunizados, pero la
concentracin de anticuerpos
es tan baja que no puede ser
detectada por los tests pre transfusionales; o bien se produce una
respuesta anamnstica, elevndose la concentracin de anticuerpos
3 das ms tarde.
Sntomas y signos ms comunes de esta reaccin
Fiebre
Ictericia leve
Descenso de la Hemoglobina
Hemoglobinuria
ENFERMEDAD INJERTO VERSUS HUESPED

Es una complicacin no habitual y tiene lugar en pacientes
inmunodeprimidos, en los cuales los linfocitos inmunocompetentes del
donante, anidan y se multiplican, reaccionando contra los tejidos
extraos del husped.
El sndrome clnico puede incluir fiebre, erupcin cutnea, diarrea,
supresin de la medula sea.
PURPURA POST TRANSFUSIONAL
Se presenta casi exclusivamente en mujeres multparas. Producto de
anticuerpos anti plaquetarios, que provocan una cada vertiginosa de
plaquetas, dando lugar a un prpura generalizado aproximadamente
una semana despus de la transfusin.
136
CUADRO RESUMEN DE LOS EFECTOS ADVERSOS DE LA TRANSFUSIN SANGUNEA

EFECTOS INMEDIATOS
EFECTOS INMUNOLOGICOSETIOLOGIA HABITUAL
Hemlisis sintomtica
G. Rojo Incompatibles
Febril no Hemoltica
Granulocitos Donante
Anafilctica
Ac Anti Ig A
Urticaria
Ac Anti Protenas Plasma
Edema Pulmonar no cardiolgico
Ac. Anti Leucocitos o Activacin del C
EFECTOS NO INMUNOLOGICOS
Alza Febril-Shock
Contaminacin Bacteriana
Insuficiencia Cardiaca Congestiva
Sobrecarga de lquidos
Hemlisis Sintomtica
Destruccin fsica de la sangre
137
EFECTOS RETARDADOS
EFECTOS INMUNOLOGICOSETIOLOGIA HABITUAL
Hemlisis sintomtica
Ac.
Anamnsicos
eritrocitarios
Reaccin injerto / husped
Prolif. Linfocitos funcionales del donante
Prpura post transfusional

Aloinmunizacin contra ag. de eritrocitos
Leucocitos, plaquetas, protenas plasma
Anticuerpos anti plaquetarios
antgenos
Exposicin a antgenos del donante
EFECTOS NO INMUNOLOGICOS
Sobrecarga de hierro
Mltiples transfusiones
Hepatitis
Virus hepatitis B, C
Sndrome inmunodeficiencia adquirida
VIH - I, VIH-II
Infeccin por protozoos
Malaria, Chagas
138
frente
INVESTIGACION DE UNA REACCION TRANSFUSIONAL
En toda UMT o Banco de Sangre o Servicio de Transfusiones, las reacciones

transfusionales adversas se presentan de tiempo en tiempo, porque aunque el
donante es compatible, no es posible tener todos los antgenos eritrocitarios,
leucocitarios y plaquetarios, idnticos con el receptor.
Las reacciones alrgicas y febriles son las ms comunes y en muchos casos
inevitables, al menos inicialmente. Las reacciones hemolticas tardas ocurren con
cierta frecuencia pero no siempre son fciles de detectar o prevenir
Las pruebas cruzadas solo sirven para reducir considerablemente la posibilidad de
que ocurra una reaccin hemoltica mayor; pero no para eliminar errores
administrativos.
Cualquier sntoma o signo fsico que se presente durante o inmediatamente
despus de la transfusin de sangre o productos sanguneo debe considerarse
como una potencial reaccin hemoltica hasta que se demuestre lo contrario y
deben tomarse las siguientes medidas:
A.- Junto al paciente
1. 2. 3. 4. 5. 6.
Detener la transfusin.
Mantener abierta la va venosa
Notificar al mdico tratante y a la UMT
No eliminar la unidad ni el infusor.
No transfundir otras unidades destinadas al paciente
Comprobar datos del paciente con etiquetas, formularios, y
unidad(s) destinada al paciente:
Nombres y apellidos
N de historia clnica
Indicacin de transfusin y tipo de producto sanguneo
Sala - N cama
Grupo sanguneo ABO y RhD
7. - Tomar muestras de sangre con anticoagulante (EDTA) y sin

anticoagulante, evitando la hemlisis mecnica y en lo posible de
otra va venosa .
8. - Recolectar muestra de orina fresca a las 0, 6 y 12 hrs para
investigar Hb libre. La presencia de glbulos rojos intactos en las
muestra de orina debido a hematuria del tracto urinario y su
posterior hemlisis in vitro , puede falsear el examen.
9. - Enviar al Banco de Sangre la unidad sospechosa, el infusor, las
muestras de sangre del paciente y el protocolo de reaccin con
los datos requeridos
B.- En la UMT o Banco de Sangre
Registrar fecha y hora de llegada del protocolo de reaccin adversa.
139
Observar las condiciones de las unidades devueltas y filtro utilizado

1.
- Efectuar investigacin administrativa comprobando los datos
del paciente y de la (s) unidad (es) con:
-
los registros existentes en el banco de sangre

muestra post transfusin
muestra pre transfusin
unidad (s)transfundida (s)
informe de reaccin adversa
etiquetas de la unidad transfundida
resultado de la prueba cruzada
Si hay discrepancia en este punto, en especial en la identificacin

nominal y/o de grupo sanguneo, avisar inmediatamente al
mdico tratante
y descartar que no estn otros pacientes
involucrados, verificando las transfusiones hechas cercanas al
caso en cuestin.
4. - Iniciar investigacin serolgica
a)
b)
Comparar color y aspecto del plasma de la muestra pre y

post transfusin para detectar hemlisis. La manipulacin y
centrifugacin de las muestras debe ser cuidadosa, evitando
provocar hemlisis mecnica que falsee el resultado. Una
coloracin rosada o roja solo del plasma post transfusin
significa Hb libre. En muestras tomadas 4 a 10 hrs post
transfusin, el color amarillo o caf proviene de aumento de
bilirrubina y productos de degradacin de la Hb.
Realizar Test Antiglobulina Directa a ambas muestras. Un
resultado 1+ dbil con campo mixto , se puede encontrar en
muestras tomadas en los inicios de la reaccin , en especial
tratndose de una reaccin hemoltica aguda
TAD negativo puede producirse por rpida destruccin
intravascular de los eritrocitos ej.: incompatibilidad ABO
c)
Repetir clasificacin ABO y Rh y pruebas cruzadas, en pre,

post y unidad (s) transfundidas.
d) Identificar anticuerpo irregular
5. -Utilizar tcnicas de deteccin ms sensibles s la situacin lo amerita
como por ejemplo: aumento proporcin suero/clulas
6. -Cultivo microbiolgico s los sntomas del paciente indican
bacteriana del producto transfundido
7. - Conocer resultado resiente de uro anlisis del paciente y presencia
de eritrocitos, hemoglobina o estroma y pos transfusional.
8. - Registre los resultados de cada paso de la investigacin y
analcelos cuidadosamente.
140
ENFERMEDADES DE TRANSMISION SANGUINEA
NOTA: En todos los procedimientos de deteccin de enfermedades de transmisin sangunea

debe seguirse cuidadosamente TODAS las instrucciones del fabricante. A continuacin se
entregaran algunos ejemplos de kit comerciales usados para estos fines.
141
TESTS SEROLOGICOS EN EL DIAGNOSTICO DE HEPATITIS VIRAL

AGENTE
REACTIVIDAD DEL TEST
HBsAg
Anti-HBc
AntiHBeAg
Tot. IgM
HBs
VIRUS B
+
+/+/+/-
Virus D
Virus A
Virus E
AntiHBe
-
+
-
+
+
+
+
+
+/-
+/-
+/-
+/-
"
+
Anti-delta
+
+
"
+
Anti VHA
Total
Anti-HBc
+
+
Vacunado o
Recuperado
Recuperado
?
HD aguda o crnica
Recuperado
Anti-VHC
(Screening)
+
+
+
-
HA aguda
Vacunado o
recuperado
Ags. Recombinantes
C-100-3 5-1-1 C22-3 C33-c
+
+
+
+
Anti VHE
Total
IgM
+
+
+
+
-
+
+
-
+
+
-
+
-
+
-
CAUSAS POSIBLES DE RESULTADOS FALSOS EN TEST ELISA

1.- Dos resultados no coincidentes:
PROBLEMAS TECNICOS:
Lavado incorrecto
Mala preparacin del sustrato/conjugado
142
HB aguda
antes de sntomas
HB aguda
Convales.
o posible portador
crnico
Portador
Crnico &
Recuperado
IgM
+
+
Virus C
INTERPRETACION
HC aguda o crnica
Probable HC
crnica
HC aguda?
Falso positivo?
HE aguda
Recuperado
incubacin a temperatura incorrecta

Material sucio
Mantener los reactivos en forma incorrecta
Omisin de la muestra
Registros incorrectos
Error humano
Mantencin y calibracin adecuada de los equipos
2.- Repetidamente reactivos:

Baja de especificidad en el reactivo
Presencia de Ac contra HLA-DR (en VIH)
Ac. de reaccin cruzada con contaminantes del cultivo celular o
epitopos virales?
Pacientes con niveles elevados de Igs.
Acs adquiridos pasivamente
Receptores de vacunas
3.- Caractersticas de la muestra:
Lipemia
Hemlisis
Contaminacin
EVALUACION DE PROCEDIMIENTOS DE TAMIZAJE O SCREENING

Sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y negativo
Las pruebas de tamizaje utilizadas en Banco de Sangre para detectar en los

donantes de sangre enfermedades de transmisin sangunea, deben cumplir con
condiciones bsicas de sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y valor
predictivo negativo, que nos permiten conocer cuales son sus mrgenes de error.
Ellos pueden calcularse de acuerdo a los resultados expresados en una tabla
cuadricelular:
PRUEBA
POSITIVA
PRUEBA
NEGATIVA
TOTAL
ENFERMOS
SANOS
TOTAL
A
Verdaderos positivos
C
Falsos negativos
A+C
Total de enfermos
B
Falsos positivos
D
Verdaderos negativos
B+D
Total de sanos
A+B
Total de positivos
C+D
Total de negativos
A+B+C+D
Total
La sensibilidad
Es la proporcin de enfermos cuya prueba de screening resulta positiva
(verdaderos positivos) en relacin al total de enfermos (A+C). Corresponde a
la relacin A/A+C. Define la capacidad de la prueba de identificar a los
enfermos.
143
La especificidad
Es la capacidad de la prueba de dar un resultado negativo en personas que
no presentan la enfermedad en el momento del estudio. Corresponde a la
relacin del nmero de verdaderos negativos sobre el total de sanos D/B+D.
La concordancia
Es la suma de los verdaderos positivos y los verdaderos negativos en el total de
personas estudiadas. Corresponde a A+D/A+B+C+D.
El valor predictivo positivo(VPP)

Corresponde a la proporcin de enfermos que existen en el total de personas
con prueba positiva. Se calcula relacionando A/A+B.
El valor predictivo negativo (VPN)

Expresa la proporcin de sanos en el conjunto de personas cuyo resultado
fue negativo. Se calcula relacionando los verdaderos negativos con el total
de negativos, D/C+D.
El poder predictivo de una prueba depende de la frecuencia del dao a la
salud. Cuando la prevalencia es alta aumenta el VPP y disminuye el VPN y
viceversa a medida que baja la prevalencia de la enfermedad.
La deteccin de enfermedades de transmisin sangunea en dadores en el
Banco de Sangre, presenta caractersticas especiales por lo que
generalmente se privilegia la sensibilidad sobre la especificidad, esto implica
necesariamente el uso de mtodos de confirmacin para las pruebas de
screening empleadas.
144
BIBLIOGRAFIA
12.3.4.5.6.7.8.-
9.10.11.12.13.14.15.15.16.17.18.19.20.-
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Medina Lois Ernesto. Mtodos epidemiolgicos en clnica y en Salud Pblica. 2 edicin.
Escuela de Salud Pblica. Universidad de Chile. 1987.
145

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Manual de Inmunohematología y Medicina Transfusional

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INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL

____________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL

Inmunohematologa y Medicina Transfusional, se describen las tcnicas y

comprensin del texto con talleres dirigidos y discusin de casos, buscando a

ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE DE HEMOCOMPONENTES

____________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL

DETERMINACION DE ANTIGENOS SOLUBLES ABH Y LEWIS EN SALIVA

A.- REACCIONES TRANSFUNSIONALES INMEDIATAS

____________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL

___________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL

SELECCION DE UN DONANTE DE SANGRE

____________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL

2.- EL LLENADO DE LA FICHA DE DONANTE Y EL CUESTIONARIO:

3.- SELECCION DEL DONANTE:

4.- CONDICIONES DE LA ENTREVISTA DEL DONANTE DE SANGRE

___________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL

5.- PRINCIPIOS DE UNA ENTREVISTA:

____________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL

6)Uso del silencio:

___________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL

6.- CRITERIOS DE SELECCIN

Entre 60 y 100 pulsaciones por minuto, regular y palpado por 30 segundos a

7.- HEMOGLOBINA:sobre 13,5 grs/dL en hombres

7.- REGISTROS EN LA FICHA DE DONANTE Y APLICACION DEL CUESTIONARIO AL POSIBLE DONANTE

____________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL

ALGUNAS PREGUNTAS A REALIZAR DURANTE LA ENTREVISTA AL DONANTE

HA LEDO Y COMPRENDIDOEL INFORMATIVO?

DURMI MNIMO 5 HORAS?

HA BEBIDO ALCOHOL EN LAS LTIMAS 24 HORAS?

HA DONADO SANGRE ANTES?

Se acepta solo si su donacin fue hace ms de 3 meses.

SE HA SENTIDO MAL DURANTE O DESPUS DE DONAR SANGRE?:

___________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL

Dirigida a detectar alteraciones o problemas en donaciones previas. Debe quedar

HA SIDO RECHAZADO ALGUNA VEZ COMO DONANTE DE SANGRE? POR QU?

Preguntar la causa y verificar si es causal o no de rechazo.

HA TOMADO ASPIRINA O ANTINFLAMATORIOS EN LOS LTIMOS 3 DAS?

EN LAS LTIMAS DOS SEMANAS HA TENIDO FIEBRE, RESFRO, VMITOS O DIARREA?

EN LAS LTIMAS 8 SEMANAS, LE HAN PUESTO ALGUNA VACUNA O INYECCIN?

____________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL

OBLIGATORIO: no debe donar si han transcurrido menos de 8 semanas de la vacunacin

A CRITERO: aceptar si la vacunacin se realiza con microorganismos no vivos:

EN LOS LTIMOS12 MESES HA SIDO OPERADO U HOSPITALIZADO?

___________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL

La ciruga se debi a un cncer

EN LOS LTIMOS 12 MESES SE HA REALIZADO ENDOSCOPIA?

Se acepta como donante

SE HA REALIZADO EXAMEN DE SANGRE U OTRO TIPO DE EXAMEN?

____________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL

EN LOS LTIMOS 12 MESES HA IDO AL MDICO, MATRONA, DENTISTA U OTRO PROFESIONAL

Preguntas dirigidas a detectar patologas que lo inhabiliten como donante.

___________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL

EN LOS LTIMOS 12 MESES LE HAN PUESTO SANGRE A USTED O A SUPAREJA SEXUAL?

TIENE O HA TENIDO HEPATITIS DESPUS DE LOS 12 AOS?

____________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL

HA RECIBIDO TRATAMIENTO CON HORMONA DE CRECIMIENTO ANTES DE 1985?

HA VIVIDO EN INGLATERRA ENTRE LOS AOS 1980 Y 1996 O HA RECIBIDO ALL

TIENE HISTORIA FAMILIAR DE LA ENFERMEDAD DE CREUTZFELDT JAKOB?

HA VIAJADO FUERA DE CHILE EN LOS LTIMOS 3 AOS?

HA TENIDO MALARIA, DENGUE O FIEBRE INEXPLICABLE DURANTE O DESPUS DE UN VIAJE

Se acepta como donante

___________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL

EN LOS LTIMOS 12 MESES, UD. O SU PAREJA SE HAN REALIZADO ALGN TATUAJE,

HA COMPARTIDO AGUJA O JERINGA CON OTRA PERSONA?