Anda di halaman 1dari 3

DETERMINATION OF METHEMOGLOBIN

BY SPECTROPHOTOMETRY
APA ITU HEMOGLOBIN?
Hb berfungsi dalam membawa oksigen dan karbon dioksida.
Terdiri atas 4 rantai polipeptida (globin) yang melindungi 4 subunit pigmen
(heme). Setiap heme mengandung besi / ferrous (Fe2+) yang dapat mengikat O2.
APA ITU METHEMOGLOBIN?
Bentuk abnormal hemoglobin, sehingga kehilangan kemampuan membawa O2.
Methemoglobin terbentuk ketika Ferrous (Fe2+) dioksidasi menjadi Ferric (Fe3+).
Sedangkan Ferric tidak dapat mengikat oksigen.
Bagaimana menghasilkan methemoglobin? Adanya substansi yang dapat
mengoksidasi ion ferro baik secara endogen atau eksogen.
KADAR METHEMOGLOBIN?
Normalnya, kadar methemoglobin adalah 0-1%.
Jalur metabolisme!

Reduksi enzimatik dari produk glikolitik NAD menjadi NADH.

NADH  berperan sebagai donor elektron dalam mereduksi Ferric


(Fe3+) menjadi ferrous (Fe2+).

Enzim NADH methemoglobin reductase  reduksi NAD &


methemoglobin
METHEMOGLOBIN DIDALAM ERITROSIT!
Reduksi enzimatik methemoglobin  Reduksi NADP yang diproduksi melalui
hexosa monophosphat
NADPH  sebagai agen pereduksi.
Metilen biru  reduksi methemoglobin, dipacu oleh adanya donor elektron
eksogen.

Metilen biru diadministrasikan  Metilen biru mengalami konversi


menjadi agen pereduksi (Leukomethylene biru) Leukomethylene
biru bereaksi dengan methemoglobin  terjadi reduksi
methemoglobin  menjadi hemoglobin.
OBAT-OBAT & TOXIC YANG DAPAT MENGKONVERSI HEMOGLOBIN
MENJADI METHEMOGLOBIN!
Nitrat
Klorat
Quinine
Phenacetin
Sulfonamide
Pewarna aniline
Anastesi lokal (Procaine, Benzocaine, Lidocaine)

yudaherdantoproduction

06/195395/KU/11829

MEKANISME TOKSIK!
Oksidasi langsung
Pembentukan oksigen & radikal bebas peroxida  Oksidasi hemoglobin
Nb: Perkembangan methemoglobinemia tidak hanya melalui paparan substansi oksidative
secara per oral. Namun bisa juga dengan paparan pada kulit dari volatile nitrit.

ONSET METHEMOGLOBINEMIA
Kebanyakan agen, memberikan onset methemoglobin sekitar 1-2 jam.
Dapsone & Nitroethane, onset methemoglobin tertunda
GEJALA KLINIS SESUAI KADAR METHEMOGLOBIN!
<10%  Asymtomatic
15-20%  Cyanosis, darah arteri coklat
20-50%  Kelelahan, kelemahan, pusing, cemas, bingung, dyspnea, tachycardia
50-70%  Lethargy, pingsan, asidosis, koma, kejang, aritmia
>70%  Kematian
BAGAIMANA PRINSIP PRAKTIKUM!
Nilai absorbansi spectrum methemoglobin itu kecil (sekitar 630-635nm)

+ Cyanamide  Mengeliminasi puncak spectrum absorbansi


dengan mengkonversi methemoglobin menjadi cyanmethemoglobin.
Nilai absorbansi spectrum oxyhemoglobin itu sangat kecil (>600nm)

Jika ditemukan, sulfhemoglobin pada hemolysate  terjadi


peningkatan kurva absorbsi sekitar 600-620nm.

Sulfhemoglobin plateau tidak berefek dengan cyanida..


SPESIMEN YANG DIGUNAKAN DALAM PRAKTIKUM!
Darah segar yang diberi anti-koagulan (heparin, EDTA, Acid-Citrate-Dextrosa)
Tidak perlu dilakukan penambahan cairan ataupun puasa.
REAGEN YANG DIGUNAKAN!
Hemoglobin standard 13%
Potassium Ferricyanide (K3Fe(CN)6)
Potassium fosfat buffer
Potassium cyanide

yudaherdantoproduction

06/195395/KU/11829

PROSEDURE KERJA!
Cuvet C1
+ 1,5 ml phosphate buffer
+ 1,5 ml air suling
Cuvet C2 & C3
Cuvet C2
Cuvet C3
0,1 ml darah
0,1 ml darah
3 ml air suling
3 ml air suling
0,4 ml Potassium phosphate buffer
0,4 ml potassium phosphat buffer
3 ml hemolysate
3 ml hemolysate
0,1 ml Potassium Ferricyanide
Lapisi dengan parafilm
Campur (bolak-balik tabung 3x)
Diamkan 2 menit
Hitung absorbansi pada 630 nm, cantumkan sebagai A2a & A3a
0,1 ml KCN (2 tetes pipet)
0,1 ml KCN (2 tetes pipet)
Campur (bolak-balik tabung 3x)
Campur (bolak balik tabung 3x)
Diamkan 5 menit
Hitung absorbansi pada 630 nm, cantumkan sebagai A2b & A3b
PERHITUNGAN!
Methemoglobin (Persentase dari pigmen total):
(A2a A2b / A3a A3b) x 100%
Nilai normal  0 1%
TAMBAHAN!
Larutan hemoglobin itu mudah mengeruh, namun kekeruhan tidak berubah
dengan penambahan Potassium Ferricyanide atau KCN.
Nilai absorbansinya sama untuk pembacaan pada tiap cuvet.
Metode ini cukup memuaskan untuk pengujian methemoglobin jika pengujian
sulfhemoglobin tidak diperlukan.

yudaherdantoproduction

06/195395/KU/11829