prosedur atau proses pembuatan preparat mikroskopis. Mikroteknik
juga merupakan ilmu yang mempelajari cara pembuatan sediaan histologik yg dapat diamati di bawah mikroskop. Sediaan histologi bertujuan untuk mendapatkan sediaan irisan dimana struktur jaringan sedapat mungkin dipertahankan sesuai keadaan aslinya, diperoleh irisan tipis dan rata, diperoleh kontras yg baik. Objek yangg diamati biasanya bentuk dan
ukuran sel, sitoplasma,
nukleus, membran sel, dan bagian khusus misal silia, mikrovilli.
Macam sediaan histologik tersebut terdiri dari sediaan segar dan sediaan permanen. Sediaan segar disebut juga sediaan hidup. Sediaan hidup merupakan sediaan yang langsung diamati dibawah mikroskop. Pengadaan sediaan hidup bertujuan untuk mengamati keadaan alamiah sediaan, baik itu warna, bentuk, jumlah komponen jaringan, dan adanya gerakan. Dalam pengadaan sediaan hidup terdapat beberapa kerugian atau kekurangan, diantaranya yaitu mudah rusak, dan kontras antara bagian-bagian sediaan tidak nyata. Sediaan permanen terdiri dari sediaan utuh, sediaan apus, dan sediaan irisan. Pengadaan sediaan permanen irisan bertujuan untuk memperoleh irisan yang tipis sekali dan rata juga dapat diamati di bawah mikroskop, yaitu struktur jaringan yang mirip dengan aslinya,
dan
kontras
antara
bagian-bagiannya
jelas.
Cara
pembuatan sediaan irisan yaitu dengan cara parafin, caracelloidin,
&
irisan
beku(frozen
section).
Tahapan
pembuatan
sediaan
histologis ( cara parafiin) yaitu dengan pengambilan contoh jaringan
fiksasi,
dehidrasi,
penjernihan,pemancangan
pemotongan, penempelan, dan pewarnaan.
(embedding),
Pengambilan contoh jaringan dilakukan dengan cara jaringan
diambil sekecil mungkin, tetapi mewakili struktur keseluruhan dengan tebal jaringan kurang dari 5 mili meter. Fiksasi bertujuan untuk membuat unsur-unsur jaringan stabil, dan tahan terhadap perlakuan berikutnya. Terdapat dua macam fiksatif, yaitu fiksatif sederhana dan fiksatif campuran. Fiksatif sederhana terdiri dari satu macam zat seperti formalin dan etanol. Sedangkan fiksatif campuran merupakan fiksatif yang terdiri dari lebih dari satu macam zat seperti larutan helly, dan larutan zenker. Volume cairan fiksatif minimal 20x volume jaringan. Waktu fiksasi tergantung pada tebal jaringan, macam fiksatif, & konsistensi jaringan. Dehidrasi bertujuan untuk mengambil semua air dalam jaringan, dehidrasi
dan membersihkan sisa-sisa fiksatif. Bahan untuk
berupa
etanol
dari
konsentrasi
70%-100%.
Waktu:
tergantung pada volume jaringan (6-24 jam).
Penjernihan bertujuan untuk
mengambil etanol sesudah
dehidrasi. Bahan yang digunakan untuk penjernihan berupa zat yg
dapat bercampur dengan bahan dehidrasi seperti xylol, toluol. Pemancangan (embedding) bertujuan untuk mengganti bahan penjernih dalam jaringan dengan parafin cair disertai pengerasan sehingga jaringan mudah dipotong menjadi irisan tipis. Tahap-tahap pemancangan yaitu impregnasi (peresapan), kemudian parafin masuk
ke
sela-sela
jaringan,
selanjutnya
embedding
dan
membentuk balok parafin di sekeliling jaringan.
Pemotongan dilakukan dengan cara memotong jaringan dalam balok parafin dipotong dengan mikrotom (alat pemotong mekanis) dengan tebal irisan: 5-12 m.
Penempelan dilakukan dengan cara menempelkan irisan pada
kaca
objek
yang
sudah
diolesi
albumin-gliserin
kemudian
dikeringkan pada suhu 2-5 C di bawah titik lebur parafin ( sekitar 40
C). Pewarnaan atau deparafinisasi (membersihkan sisa parafin) bertujuan supaya unsur-unsur jaringan tampak jelas dan dapat dibedakan bagian-bagiannya di bawah mikroskop. Jenis pewarna yangg sering digunakanberupa hemaktosilin-eosin (HE). Setelah pewarna dilakukan tahap dehidrasi, penjernihan, penutupan sediaan dengan balsem kanada dan kaca penutup, dikeringkan.
