Prosedur kloning

Ligase
Fresh produc PCR
10x ligation buffer
PET Sumo Vector
T4 DNA ligase
Steril Water

2 L
1 L
2 L
1 L
1 L
+

Plasmid DNA

10 L

Inkubasi 15 oC, 4 jam/12 oC O/N, dibiarkan dalam suhu ruang selama 30 menit
NB: Taruh ligation pada suhu -20 oC sampai siap untuk transformasi
Transformasi
a.
b.
c.
d.
e.
f.
g.
h.
i.

Ambil tabung tutup coklat (BL 21)

Add 5-10 ug plasmid DNA (mix dengan tip, tapi tidak boleh dipipetting)
Inkubasi selama 30 menit dalam es
Heat-shock cell 30 detik 42 oC (50 detik 42 oC)
Segera taruh tabng dalam es
Add 250 ul SOC medium
Tutup tabung dengan erat dan inkubasi 37 oC selama 1 jam dengan getar (200 rpm)
Tambahkan seluruh reaksi transformasi sampai 10 ml LB yang mengandung 50 ng/ml
kanamisin (dan 1% glukosa, jika diinginkan)
Inkubasi 37 oC, selama 24 jma.