PROTEIN IDENTIFIKASI MENGGUNAKAN FOURIER TRANFORM INFRARED (FTIR)

Luthfiralda Sjahfirdi1, Mayangsari2 & Mohammad Nasikin2

1Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Indonesia,
Depok 16424, Indonesia
2Department Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas Indonesia, Depok 16424 Indonesia
ABSTRAK
Penelitian ini dilakukan untuk mengidentifikasi adanya protein dengan menunjukkan kelompok
amida dan mengukur tingkat dalam makanan melalui kelompok-kelompok tertentu protein
menggunakan FTIR (Fourier Transformed Infrared) metode. Proses scanning dilakukan pada
bilangan gelombang 400-4000 cm-1. Penentuan kelompok fungsional sedang dilakukan dengan
membandingkan bilangan gelombang dari gugus fungsi amida dari sampel protein dengan
standar yang ada. Tingkat protein diukur dengan membandingkan absorbansi kelompok protein
fungsional spesifik untuk absorbansi gugus asam lemak fungsional. Hasil menunjukkan
spektrum FTIR dari semua sampel berada di 557-3381 cm-1 kisaran bilangan gelombang. Para
amida terdeteksi III Amide, IV, dan VI dengan absorbansi antara jejak sampai 0,032%.
Kehadiran protein dapat dideteksi pada hewan sampel dan sayuran keju, mentega, dan susu
melalui kelompok fungsional III amida, IV, dan VI berada di 1240-1265 cm-1, 713-721 cm-1,
dan 551-586 cm -1 bilangan gelombang masing-masing. Urine terdeteksi melalui kelompok
fungsional III dan IV amida berada di 1.639 cm-1 dan 719 cm-1 wavenumber. Tingkat protein
keju hewani, sayur keju, mentega, dan susu adalah 1,01%, 1,0%, 0,86%, dan 1,55% masingmasing.
Kata kunci: amida, FTIR, metode, protein, bilangan gelombang,
1. PENDAHULUAN
Protein merupakan nutrisi penting untuk tubuh manusia tidak hanya sebagai sumber energi tetapi
juga sebagai agen pembangunan. Utama
fungsi protein adalah untuk membangun dan memelihara jaringan tubuh, memproduksi
neurotransmitter untuk otak dan neurofunctions, menghasilkan asam amino dan hormon,
menjaga sistem kekebalan tubuh, menjaga keseimbangan asam-basa dalam cairan sel, juga
bertindak sebagai sumber energi. Protein sangat dibutuhkan oleh tubuh manusia, sehingga
asupan protein yang cukup penting untuk mendukung pertumbuhan tubuh [1].
Mengingat pentingnya protein untuk tubuh manusia, asupan protein harian perlu ditentukan
dengan mengukur kadar protein dalam makanan. Sejauh ini, metode yang digunakan dalam
mengukur kadar protein dalam makanan metode spektrometri konvensional, seperti UV-VIS
spektroskopi atau metode Kjedahl [2, 3]. Metode tersebut memiliki banyak kelemahan dalam

persiapan, proses kerja, dan biaya. Berdasarkan faktor-faktor, metode praktis dalam menentukan
kadar protein dalam makanan perlu dikembangkan.
Salah satu metode yang harus dipertimbangkan tentang adalah Fourier Transform Infrared
(FTIR). Metode ini bekerja berdasarkan spektroskopi absorbansi sesuai dengan radiasi
inframerah perbedaan absorbansi oleh molekul dari suatu hal. FTIR mengidentifikasi kelompok
fungsional tertentu yang membangun suatu senyawa.
FTIR telah digunakan sebagai instrumen universal untuk menganalisa jenis sampel karena
kemampuannya untuk mengidentifikasi gugus fungsional senyawa kimia, seperti karbohidrat dan
ester, serta ikatan atom kimia antar. FTIR memiliki tingkat akurasi yang tinggi dalam
mengidentifikasi proses. Hal ini juga aman, cepat, dan sensitif [4]. FTIR telah digunakan dalam
penelitian untuk menganalisis komponen kimia dari batu empedu [5], sampel darah pasien gagal
ginjal [6], protein plasma dalam darah [7] dan diagnosis kanker payudara [8]. FTIR juga telah
digunakan untuk mendeteksi keberadaan hormon reproduksi. Hormon-hormon reproduksi yang
terdeteksi oleh kehadiran kelompok fungsional tertentu, seperti keton (= O), karboksil (COOH),
dan metil (CH3) [9].
Protein terdiri dari asam amino, masing-masing memiliki struktur kimia tertentu seperti alifatik,
amida hidroksil,, dll FTIR adalah
mampu mendeteksi kelompok-kelompok fungsional untuk menunjukkan keberadaan protein.
Dibandingkan dengan kelompok-kelompok fungsional tertentu protein, amida adalah salah satu
dari kelompok-kelompok fungsional tertentu yang dapat dengan mudah dideteksi. Ada 9 jenis
amida dasar d pada kelompok fungsional: amida I-IX.
Penelitian ini dilakukan untuk mengidentifikasi adanya protein dengan mengidentifikasi
kelompok amida dan mengukur tingkat protein dalam makanan melalui kelompok-kelompok
tertentu protein menggunakan metode FTIR.

2. METODOLOGI
Protein makanan yang mengandung diuji dalam penelitian ini adalah hewan dan sayur keju, susu,
mentega, dan manusia dan sapi
urin.

a. Padat sampel persiapan

Penelitian ini menggunakan sampel dari masing-masing keju 0,5 mg hewan, keju sayuran, dan
mentega. Mereka sampel padat hancur denda menggunakan mortar dan alu. Kalium Bromida
kemudian ditambahkan ke setiap sampel halus dan dicampur merata. Setelah itu, campuran
ditempatkan dalam cetakan kemudian ditekan oleh 7-8 ton pers mekanik selama 3 menit. Hasil
akhir sebagai pelet yang ditempatkan pada panci sampel, siap untuk dianalisis.
b. Liquid sampel persiapan
Sekitar 0,5 ml masing-masing urin sapi, urin manusia, dan susu dijatuhkan pada satu Zinc bagian
jendela Selenium (ZnSe) menggunakan pipet. Bagian lain dari Jendela ZnSe diletakkan di atas
yang pertama, sehingga cairan merata di permukaan jendela. Jendela kemudian diletakkan pada
dudukan, siap untuk dianalisis.
c. Analisis FTIR
Analisis telah dilakukan melalui proses pemindaian dengan FTIR jenis IR-21 Shimadzu Prestige.
Proses scanning dilakukan pada bilangan gelombang 400-4000 cm-1 dengan resolusi 4 cm-1.
Hasil pemindaian adalah persentase absorbansi pada bilangan gelombang yang spesifik untuk
setiap kelompok fungsional amida dalam setiap sampel. Amida masing-masing memiliki
kelompok penanda spesifik (Tabel 1).
Penentuan kelompok fungsional sedang dilakukan dengan membandingkan bilangan gelombang
dari gugus fungsi amida dari sampel dengan standar yang ada. Tingkat protein diukur dengan
membandingkan absorbansi kelompok protein fungsional spesifik untuk absorbansi gugus asam
lemak fungsional dalam setiap sampel. Asam lemak absorbansi dari sampel masing-masing harus
dibandingkan dengan absorbansi asam lemak dalam susu.
Tabel 1. Amida kelompok penanda spesifik [10]
Amida Jenis penanda spesifik kelompok bilangan gelombang (cm-1)
3. HASIL
Para spektrum FTIR dari semua sampel berada di 557-3381 cm-1 kisaran bilangan gelombang
(Gambar 1). Para amida terdeteksi III Amide, IV, dan VI dengan absorbansi antara jejak sampai
0,032% (Tabel 2). Karbonil kelompok sebagai penanda asam lemak yang terdeteksi pada 1.746
cm-1 wavenumber. Para absorbencies asam lemak dalam sampel setiap digunakan sebagai
pembanding untuk menentukan tingkat protein relatif dalam sampel. Protein Sampel kisaran
tingkat relatif pada 0,36-1,84. Tabel 3 menunjukkan adanya jenis amida yang berbeda dalam
setiap sampel. III dan IV amida ditemukan di setiap

sampel, sedangkan VI amida ditemukan di setiap sampel kecuali urin. The bilangan gelombang
dari semua jenis kelompok fungsional amida seluruh sampel berada di 557-1639 cm-1 dengan
absorbansi 0,012-0,032% kecuali untuk urin.
Absorbansi%, wavenumber
Gambar 1. Khas FTIR Spektrum sampel (susu)
Tabel 2. Amida jenis dan tingkat sampel protein
Tabel 3. Amida jenis sampel
Tingkat protein relatif dalam setiap sampel pada Tabel 2 kemudian dibawa ke rata-rata untuk
mendapatkan tingkat protein dalam setiap sampel. Persentase tingkat protein sampel ditentukan
dengan membandingkan tingkat protein relatif terhadap asam lemak mutlak dalam sampel susu
(1746 cm-1). Tabel 4 menunjukkan bahwa sampel kadar protein berada di 0,06-1,55%, dengan
tingkat tertinggi dalam sampel susu.
Tabel 4. Protein tingkat sampel
4. PEMBAHASAN
Tabel 1 menunjukkan jenis amida dalam sampel protein. Amida adalah protein termudah
kelompok penanda yang diidentifikasi dalam
protein sampel. Oleh karena itu, untuk menentukan kandungan protein dari sampel, cara
termudah adalah dengan mendeteksi amida di dalamnya. Berbagai jenis amida menunjukkan
kelompok fungsional tertentu dalam sampel protein yang berbeda. Semua amida harus telah
diidentifikasi oleh FTIR karena kelompok tertentu fungsional. Namun, tumpang tindih atau
melemahnya absorbansi kelompok fungsional yang sama bisa terjadi sehingga hanya amida
beberapa FTIR bisa mendeteksi seperti yang ditunjukkan pada Tabel 3.
Penelitian ini menggunakan sampel yang mewakili protein, seperti keju baik hewani dan nabati,
mentega, dan susu. Susu dipilih karena dianggap sebagai asam lemak, yang kemudian bertindak
sebagai tingkat asam lemak kontrol dengan sampel lainnya. Urin yang digunakan dalam
penelitian ini diambil dari manusia normal dan sehat dan hewan, sehingga mengandung protein
tidak. Protein dalam urin menunjukkan gejala proteinuria, yang merupakan selisih dari serum
protein dalam urin.
Tabel 2 menunjukkan hasil dari sampel yang dianalisis dengan FTIR. Hal ini menunjukkan
bahwa sebagian besar sampel menunjukkan protein, kecuali urin, baik manusia dan hewan. Para
amida terdeteksi III amida, IV, dan VI untuk semua sampel, kecuali untuk urin yang hanya
terdeteksi amida III dan IV (Tabel 3). Amida III terdeteksi pada bilangan gelombang 1240-1639
cm-1 yang cocok untuk Fen et al 's. (1994) hasil pada bilangan gelombang 1.200-1.350 cm-1. IV
amida terdeteksi pada bilangan gelombang 713-721 cm-1 yang dekat dengan hasil Morgera pada

bilangan gelombang 610-710 cm-1 dari bakteri [11]. Tingkat protein relatif bahwa setiap sampel
telah ditentukan dengan membandingkan absorbansi setiap absorbansi asam lemak dalam setiap
sampel. Protein relatif tingkat di setiap sampel kemudian dibandingkan dengan susu asam lemak
untuk mendapatkan tingkat protein dalam setiap sampel.
Tabel 4 menunjukkan bahwa keju hewan (1,01%) memiliki tingkat protein yang sedikit lebih
rendah dibandingkan dengan keju sayuran (1,10%). Susu memiliki tingkat protein tertinggi dari
semua sampel yang diuji (1,55%), sedangkan mentega memiliki tingkat protein terendah
(0,86%). Beberapa penelitian menunjukkan bahwa susu memiliki tingkat protein tertinggi setelah
daging dan kacang-kacangan di antara makanan lainnya seperti sayuran, ikan, telur, dll Butter
umumnya memiliki tingkat protein maksimal 1% dalam setiap substansi g 100 [13]. Oleh karena
itu, FTIR menunjukkan bahwa mentega memiliki tingkat protein lebih rendah dibandingkan
dengan sampel lainnya.
Umumnya, protein dalam keju hewan lebih tinggi dari sayur keju karena tingkat protein lebih
tinggi pada hewan [14]. Namun, FTIR menunjukkan tingkat protein lebih rendah dalam keju
hewan dibandingkan dengan sayur keju. Hal ini mungkin disebabkan oleh bahan yang digunakan
untuk membuat keju. Menurut beberapa susu, penelitian yang terbuat dari kacang kedelai dan
saga memiliki tingkat protein lebih tinggi dibandingkan dengan susu sapi.
Suhu juga dapat mempengaruhi tingkat protein dalam keju. Hal ini karena protein akan
denaturised pada 60oC. Faktor lain adalah waktu yang digunakan dalam proses pembuatan.
Semakin lama waktu yang dibutuhkan dalam proses pembuatan keju, protein lebih denaturised.
Meskipun tingkat protein yang diberikan oleh FTIR berada di bawah tingkat protein yang
diberikan oleh metode lain seperti Kjeldahl, Dumas, FTIR mampu memberikan gambaran yang
tepat berdasarkan perbandingan komposisi protein dalam sampel.
5. KESIMPULAN
1. Kehadiran protein dapat dideteksi dengan FTIR dalam sampel:
Hewan dan sayur keju, mentega, dan susu melalui kelompok fungsional III amida, IV, dan VI
berada di
1240-1265 cm-1, 713-721 cm-1, dan 551-586 cm-1 bilangan gelombang masing-masing.
Manusia dan urine sapi melalui kelompok fungsional III dan IV amida berada di 1.639 cm-1
dan 719 cm-1
wavenumber masing.
2. Tingkat protein keju hewani, sayur keju, mentega, dan susu adalah 1,01%, 1,0%, 0,86%, dan
1,55%
masing.