BIOETANOL DARI LIMBAH NANAS

Abstrak
Ada minat yang besar dalam memproduksi bioetanol dari biomassa dan ada
banyak penekanan pada
pemanfaatan sumber lignoselulosa, dari limbah
tanaman melalui tanaman yang kaya energi. Beberapa aliran limbah,
bagaimanapun, mengandung selulosa dan gula non-selulosa. Ini termasuk
limbah dari pengolahan nanas. Limbah nanas diproduksi dalam jumlah besar di
seluruh dunia dengan pengalengan industri. Limbah ini kaya akan gula
intraseluler dan dinding sel tanaman yang terutama terdiri dari selulosa,
hemiselulosa dan zat pectic.Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menyelidiki
potensi untuk mengubah residu tersebut menjadi etanol setelah sakarifikasi
enzimatik dinding sel tanaman, dan fermentasi gula sederhana yang dihasilkan
dengan menggunakan Saccharomyces cerevisiae NCYC 2826 regangan. Tiga
mode fermentasi berbeda, fermentasi langsung, hidrolisis dan fermentasi
terpisah, dan sakarifikasi dan fermentasi simultan dari biomassa diuji dan
dibandingkan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa gula utama yang diperoleh
dari limbah nanas adalah: glukosa, asam uronic, xylose, galaktosa, arabinosa
dan manosa. Hasil etanol tertinggi dicapai setelah 30 jam sakarifikasi dan
fermentasi simultan, dan mencapai hingga 3,9% (v / v), sesuai dengan 96% dari
hasil teoritis.

2. Bahan dan Metode

2.1 Substrat
Nanas diperoleh dari pasar lokal di Norwich, Inggris. Untuk tujuan analitis, nanas
itu dibagi menjadi empat bagian: mahkota (bagian atas), kulit, pulp dan inti
(bagian dalam). Dalam penelitian ini hanya kulit dan inti digunakan untuk tes
fermentasi.
2.2 Ragi
Saccharomyces cerevisiae NCYC 2826 diberikan oleh Koleksi Nasional Budaya
Ragi, sebuah BBSRC-didukung Kemampuan Nasional berdasarkan pada Institute
of Food Research di Norwich ketegangan itu dipelihara pada media YM agar
(ekstrak ragi 3 g / L, ekstrak malt 3 g / L, pepton 5 g / L, glukosa 10 g / L) pada 4
C. Untuk membawa keluar tes S. cerevisiae ditumbuhkan semalam pada 30 C
pada rotary shaker (INNOVA 44, Inkubator Shaker Series, New Brunswick
Scientific) pada 200 rpm, di tabung yang berisi media YM 20 ml.
2,3 Eksperimental Set-up
Tes fermentasi dilakukan dalam 2,5 L bets fermentor (LH fermentasi 2000
Series). Fermentor dilengkapi dengan satu turbin rushton empat berbilah, dan
sistem kontrol yang umum: suhu, pH, CO2 detektor dan meter aliran massa gas.
Limbah nanas, yang terdiri dari kulit buah dan inti, yang homogen dalam blender
buah. Homogenat yang dihasilkan, dengan kandungan bahan kering 14% (b / b),
diencerkan dengan air untuk bahan kering 9%, dalam volume kerja 1,5 L dan
segera dirawat di 100 C selama 10 menit di bawah pencampuran terus
menerus untuk menonaktifkan enzim endogen dan www.ccsenet.org/jfr Journal of
Food Research Vol. 3, No. 4; 2014 62 mengurangi pembusukan mikroba. Tidak
ada prosedur sterilisasi lanjut diadopsi. Tiga proses yang berbeda yang
digunakan untuk mendapatkan bioetanol: fermentasi langsung (DF) dari

biomassa dicampur diikuti dengan penambahan enzim; hidrolisis terpisah dan

fermentasi (SHF); sakarifikasi simultan dan fermentasi (SSF). Untuk DF dari
biomassa dicampur, dengan kandungan bahan kering 9,2%, 20 ml S. inokulum
cerevisiae (107 sel per ml) ditambahkan ke medium. Pengujian dilakukan pada
30 C bawah pencampuran kontinyu pada 200 rpm. pH adalah sebelumnya
disesuaikan dari 3,8 hingga 4,5 menggunakan 2 M NaOH. Setelah 12 jam media
itu dilengkapi dengan 20 ml / g bahan kering DepolTM 740 L dan 250 ml / g
bahan kering dari Accellerase 1500 enzim, menjaga parameter fermentasi
yang sama.
Untuk fermentasi SHF, sakarifikasi 8,5% biomassa bahan kering, dilakukan
dengan menggunakan sel-dinding yang sama merendahkan enzim, seperti di
atas, selama 2 jam pada 50 C dan pH 5, disesuaikan dengan menggunakan
NaOH 2 M, dengan pengadukan konstan pada 500 rpm. Setelah 6 jam dicerna
substrat didinginkan sampai 30 C dan pengadukan menurun menjadi 200 rpm.
pH pada 4,5 tidak lanjut dikoreksi dengan penambahan alkali. Fermentasi dimulai
dengan penambahan 20 ml S. inokulum cerevisiae, sebagai sebelumnya.
Fermentasi SSF dilakukan bersama-sama menambahkan enzim dan kultur ragi
untuk substrat. Fermentasi parameter yang 30 C, pH 4,5, disesuaikan seperti di
atas, dan pengadukan konstan pada 200 rpm. Biomassa awal bahan kering
adalah 9%. Evolusi CO2 diukur selama semua tes fermentasi menggunakan ADC
Infra Red CO2 Analyzer dan duplikat sampel kaldu ditarik dari bejana reaksi
menggunakan jarum suntik 20 ml: sampel untuk analisis etanol segera
dibekukan pada -18 C sampai analisis; sedangkan sampel untuk penentuan
kelembaban, larut dan gula larut dipanaskan pada 100 oC selama 6 menit untuk
menonaktifkan enzim dan kemudian dibekukan pada -18 C sampai dianalisis.
Semua fermentasi dilakukan sampai tidak ada fluktuasi CO2 lanjut diamati. pH
tidak dikontrol dengan penambahan alkali selama fermentasi.
2.4 Bahan Kimia
Bahan kimia yang disediakan oleh Sigma Aldrich, kecuali untuk asam
galacturonic dan glukosa yang disediakan oleh Fluka Biokimia dan gliserol
disediakan oleh Fisher Scientific. Komersial solusi enzim yang tersedia DepolTM
740 L (esterase ferulic acid), yang disediakan oleh biocatalysts Ltd, Cefn Coed,
Wales, Inggris dan Accellerase 1500 (endoglukanase), yang disediakan oleh
Genencore digunakan. Keduanya mereka ditambahkan ke media pada dosis yang
direkomendasikan. Kegiatan dinyatakan berada 36 U / g dan 2200-2800 CMC U /
g masing-masing (1CMC U = unit kegiatan membebaskan 1 umol mengurangi
gula, dinyatakan sebagai setara glukosa per menit pada 50 C dan pH 4.8).
2,5 Residu Alkohol-larut (AIR) Persiapan
Mengudara dibuat dari pulp dan residu sebelum analisis untuk gula dinding sel.
Limbah nanas fermentasi basah sampel, setelah pencairan, yang dihomogenisasi
selama 1 menit pada kecepatan max di Janke & Kunnel, Ika-Werk Ultra-Turrax
homogenizer pada suhu kamar. 30 ml setiap sampel kemudian dituangkan ke
dalam etanol mendidih, untuk mendapatkan campuran akhir dengan konsentrasi
EtOH 85% (v / v), mengingat kadar air sampel. 50 ml dari 70% EtOH membasuh
dan mengumpulkan partikel sampel dari homogenizer yang digunakan. The larut
residu tetap setelah pengobatan ini ditemukan oleh filtrasi vakum melalui 5m
nilon penyaring NYBOLT menggunakan corong Buchner. Setelah lebih 2 ekstraksi
berurutan di mendidih 85% ethanol (v / v) residu adalah diekstrak di mendidih
etanol absolut (300 mL selama 5 menit), kemudian dicuci dengan etanol absolut
dingin (150 mL). The Filtrat akhir dikeringkan dengan Bchi Rotary Evaporator

pada 40 C, pulih dalam air dan diuji untuk sisa larut gula. Residu larut dicuci
dengan 2 volume aseton dan setelah penghapusan oleh hisap, kering konstan
Berat pada 40 C (Waldron & Selvendran, 1990;. Mandalari et al, 2005).
2,6 Moisture Penentuan Bobot kering
kedua limbah nanas dan fermentasi sampel segar, dihitung sebagai beban stabil
setelah 2 jam pada 110 C menggunakan Mettler PM 200 dilengkapi dengan
saldo Mettler LP16 IR.
2.7 Penentuan Gula
Gula dibebaskan dari sampel AIR oleh Saeman hidrolisis oleh dispersi sampel di
72% H2SO4 selama 3 jam pada suhu kamar diikuti oleh hidrolisis dalam 1 M
H2SO4 selama 1 jam pada 100 C. Hidrolisat yang diderivatisasi sebagai asetat
alditol mereka dan dianalisis dengan GC menggunakan Perkin-Elmer Autosystem
XL(Perkin Elmer, Seer Green, UK), dilengkapi dengan deteksi ionisasi nyala dan
RTX-225 (Restek, Bellefonte,www.ccsenet.org/jfr Journal of Food Research Vol. 3,
No. 4; 2014 63 USA) kolom (Blakeney, Harris, Henry, & Stone, 1983). Analisis
fraksi supernatan mengikuti protokol yang sama, tapi mulai dari hidrolisis dalam
1 M H2SO4. Total kandungan asam uronic di hidrolisat gula spektrofotometri
ditentukan dengan menggunakan glukuronat asam sebagai standar mengikuti
metode Blumenkrantz dan Asboe- Hansen (1973), dimodifikasi oleh Rae dkk.
(1985). Semua sampel dianalisis dalam rangkap tiga.
2.8 Penentuan Etanol
Etanol diukur dengan HPLC. 500 sampel ml supernatan dari limbah nanas
fermentasi disentrifugasi selama 10 menit pada 500 rpm dan 20 C dalam 96
dalam piring juga menggunakan Eppendorf Centrifuge 5810 R, kemudian
disaring melalui AcroPrepTM 0,2 m GHP Membran 96 Nah Filter Pelat menjadi 96
dalam piring koleksi juga untuk lebih lanjut 10 menit pada saat yang sama
kecepatan. Setelah piring sentrifugasi ditutupi oleh tutup karet dan dimuat
langsung ke Seri instrumen 200 LC (Perkin Elmer, Seer Green, UK) dilengkapi
dengan detektor indeks bias. Analisis dilakukan dengan menggunakan Aminex
HPX-87P kolom (Bio-Rad Laboratories Ltd, Hemel Hempstead, Inggris) dengan
pencocokan kolom guard beroperasi pada 65 C dengan air ultra murni pada laju
alir 0,6 mL / menit sebagai fase gerak. 2,9 Perhitungan Teoritis hasil (TY) dalam
penelitian ini dihitung sebagai hasil etanol max dalam kaitannya dengan bahan
kering: 0,511 g alkohol per 1,0 g bahan kering.
4. Diskusi
Jumlah yang signifikan dari bahan yang kaya karbohidrat dibuang di pabrik
pengalengan nanas membuat limbah ini sumber yang menarik untuk produksi
etanol. Menurut dengan Abdullah dan Mat (2008) dan Huang et al. (2011), gula
utama, dihitung biomassa kering awal, yang glukosa dan xilosa, diikuti oleh asam
uronic, arabinosa, galaktosa dan mannose, dengan jumlah yang lebih kecil dari
rhamnose dan fucose, mengungkapkan bahwa limbah nanas yang terutama
terdiri dari selulosa, zat pectic dan hemiselulosa. Kehadiran polimer yang
berbeda zat dalam dinding sel membenarkan kebutuhan pra-treatment limbah
ini.
DF memunculkan sebuah EY 0,07%, karena penggunaan glukosa larut oleh ragi.
Setelah penambahan enzim ke media, serat mulai dicerna dan yield etanol naik
menjadi 3,4%, sesuai dengan 86% dari TY. Pengujian dilakukan di SHF dan SSF
memunculkan 3,7% dan 3,9% dari EY, sesuai dengan 89% dan 96% dari TY

masing-masing, dihitung atas dasar bahan kering. Meskipun EY diperoleh muncul

agak rendah, karena tentu saja dengan kadar gula rendah, ini bisa menjadi
menarik karena TY, dihitung kerugian bahan kering, berada di kisaran sekitar 9096%, membuat limbah ini sangat baik baku bahan untuk produksi etanol oleh S.
cerevisiae NCYC 2826, dibandingkan dengan studi sebelumnya pada jus atau
nanas busuk (Ban-Koffi & Han 1990; Nigam, 1999a; Nigam, 2000; Hossain &
Fazliny, 2010). Tes awal yang dilaporkan dalam makalah ini menunjukkan
pentingnya pretreatment enzimatik nanas limbah untuk meningkatkan tingkat
gula mash untuk fermentasi alkohol. Ini harus menunjukkan bahwa SHF dan SSF
menunjukkan tren yang sama, baik pada serat sakarifikasi dan gula pemanfaatan
oleh S. cerevisiae. Ini berarti bahwa aktivitas enzim tidak terpengaruh oleh
parameter fermentasi yang digunakan.
Bahkan, sakarifikasi sebelumnya digunakan dalam mode SHF, pada 50 C, pH 5
dan 500 rpm, tidak diikuti oleh lebih tinggi degradasi dinding sel dibandingkan
dengan modus SSF, di mana enzim dan ragi ditambahkan bersama-sama untuk
substrat pada 30 C, pH 4,5 dan 200 rpm. Ini memfasilitasi set up proses
fermentasi berdasarkan penambahan simultan budaya ragi dan enzim, untuk
mengurangi baik waktu proses dan biaya total. Bahkan produksi etanol di SSF
mulai 3 jam sebelum lakukan di SHF. Oleh karena itu, SSF mungkin modus
fermentasi yang paling nyaman dan cocok digunakan dalam penelitian ini.
Semua sampel bahan dicerna yang ditandai dengan peningkatan larut xylose,
arabinosa, galaktosa, asam galacturonic dan glukosa. Hal ini disebabkan tentu
saja untuk sakarifikasi enzimatik dinding sel nanas. Accellerase 1500 aktivitas
mungkin ditingkatkan dengan DepolTM 740L sejak, sesuai dengan literatur,
dinding sel nanas yang ditandai dengan ferulic acid, diesterifikasi untuk
glucuronoarabinoxylans (Smith & Harris, 1995; Smith & Harris, 2001). Rilis
enzimatik jumlah yang signifikan dari xilosa dan arabinosa poin ke menggunakan
kultur campuran dan ragi rekombinan, atau dalam pengembangan strain kuat
yang akan secara simultan heksosa fermentasi dan gula pentosa untuk produksi
etanol. Ini akan diharapkan untuk meningkatkan etanol akhir konsentrasi dan
produktivitas, karena jumlah yang signifikan dari gula pentosa dibiarkan tidak
digunakan di hidrolisat Media fermentasi.Semua fermentasi dilakukan dalam
penelitian ini ditandai dengan hilangnya bahan kering sekitar 70%. Ini berarti
bahwa 30% dari substrat tetap yang tidak digunakan.
Hal ini bisa disebabkan pH menurun selama fermentasi periode. Bahkan nilai pH
tampak stabil di kisaran 3,3-3,5. Penurunan pH yang signifikan mungkin
disebabkan oleh produksi catabolites ragi dan pelepasan asam D-galacturonic
dari pektin, memiliki nilai pKa 3.51 (Filippov, Shkolenko & Kohn, 1978). Diamati
penurunan pH dapat menyebabkan penurunan pada enzimatik aktivitas dan
berhenti akibat serat sakarifikasi. Pemeriksaan lebih lanjut, dilakukan dengan
kontrol pH yang ketat selama proses, bisa meningkatkan pemanfaatan bahan
kering dan produksi akibatnya etanol. Selain itu, perbaikan EY mungkin juga
dicapai baik oleh mengembangkan metode pra-perawatan yang lebih efisien
(mekanik dan / atau enzimatik) dan dengan menambah substrat dengan sumber
nitrogen yang berbeda untuk mengurangi lag fase dan meningkatkan biomassa
ragi.