Dian Yustisia R

Rismauzy Marwan
Rosidah
Yuliana Sandra P
Diagnosa Laboratorium dan Jaminan Mutu Pemeriksaan Virologi

Diagnosis Virus
Secara umum, tes diagnostik dapat dikelompokkan
menjadi 3 kategori. Yaitu :
Pemeriksaan langsung (direct detection)
Pemeriksaan tidak langsung (virus isolasi),
Serologi.

 Dalam pemeriksaan langsung, spesimen klinis diperiksa

langsung untuk kehadiran partikel virus, virus antigen
atau asam nukleat virus.
Dalam pemeriksaan tidak langsung, spesimen ke kultur
sel, telur atau hewan dalam upaya untuk menumbuhkan
virus: ini disebut isolasi virus. Serologi sebenarnya
merupakan jauh sebagian besar pekerjaan dari setiap
laboratorium virologi.

 Diagnosis serologis dapat dilakukan dengan deteksi

peningkatan titer antibodi antara tahap akut dan sembuh
dari infeksi, atau deteksi IgM. Secara umum, sebagian
besar infeksi virus umum dapat didiagnosis dengan
serologi. Spesimen yang digunakan untuk arah deteksi
dan isolasi virus sangat penting.

Pemeriksaan Langsung
Electron Microscopy
mikroskop elektron

morfologi

kekebalan

tubuh

Cahaya mikroskop penampilan histologis - misalnya

badan inklusi
Antigen deteksi imunofluoresensi, ELISA dll
Teknik molekuler untuk deteksi langsung dari genom
virus

Pemeriksaan Tidak Langsung

Kultur Sel - efek sitopatik, haemadsorption, konfirmasi
oleh netralisasi, gangguan, dll imunofluoresensi
Telur pocks di CAM - haemagglutination, badan inklusi
Penyakit hewan atau konfirmasi mati oleh netralisasi

Serologi
Deteksi meningkatnya titer antibodi antara tahap akut dan
sembuh dari infeksi, atau deteksi IgM pada infeksi primer

Pemeriksaan Langsung (Direct)

Metode pemeriksaan langsung sering juga disebut
metode diagnostik cepat karena mereka biasanya dapat
memberikan hasil yang baik dalam yang sama atau hari
berikutnya.
Hal ini sangat berguna dalam kasus-kasus ketika
manajemen klinis pasien sangat tergantung pada
ketersediaan cepat hasil laboratorium misalnya
diagnosis infeksi RSV pada neonatus, atau infeksi CMV
berat pada pasien immunocompromised

Deteksi Antigen
Contoh deteksi antigen
termasuk pengujian
imunofluoresensi dari
aspirasi nasofaring untuk
virus pernapasan misalnya.
RSV, flu A, flu B, dan
adenovirus, deteksi antigen
rotavirus dalam tinja, tes
pp65 CMV antigenaemia,
deteksi HSV dan VZV di
scrappings kulit, dan deteksi
HBsAg dalam serum

Electron Microscopy (EM)

Virus diagnosis dengan mikroskop
elektron bergantung pada deteksi
dan identifikasi virus berdasarkan
morfologi karakteristik mereka.
Keuntungan utama dari virus
diagnosis oleh EM adalah
kemampuan untuk
memvisualisasikan virus. Dengan
mengidentifikasi virus secara
langsung, adalah mungkin untuk
melakukan pemeriksaan tanpa
konsep terbentuk dari agen
etiologi, berbeda dengan orangorang yang membutuhkan tes
probe virus tertentu

Ada 2 jenis IEM, sederhana

IEM, di mana spesimen
diinkubasi dengan antibodi
spesifik sebelum
pewarnaan dengan
harapan bahwa antibodi
akan menggumpalkan
spesimen, dan fase padat
IEM (SPIEM), di mana
copy kotak dilapisi dengan
antibodi spesifik yang
digunakan untuk
menangkap partikel virus
dari spesimen.

Mikroskop Cahaya
Virus mereplikasi sering menghasilkan perubahan
histologis pada sel yang terinfeksi. Perubahan ini
mungkin karakteristik atau non-spesifik. Tubuh virus
inklusi pada dasarnya koleksi mereplikasi partikel virus
baik di dalam inti atau sitoplasma.
Contoh badan inklusi meliputi badan negri dan badan
inklusi cytomegalic ditemukan di rabies dan infeksi CMV
masing-masing. Meskipun tidak sensitif atau spesifik,
histologi tetap berfungsi sebagai tambahan yang
berguna dalam diagnosis infeksi virus tertentu.

Viral Genom Deteksi

Metode berdasarkan deteksi genom virus juga sering dikenal
sebagai metode molekuler. Hal ini sering mengatakan bahwa
metode molekuler adalah arah masa depan diagnosis virus.
Namun dalam prakteknya, meskipun penggunaan metode ini
memang meningkat, peran yang dimainkan oleh metode
molekuler di laboratorium virus diagnostik rutin masih kecil
dibandingkan dengan metode konvensional. Sudah pasti
bahwa meskipun peran metode molekuler akan meningkat
pesat dalam teknik molekuler dekat future.Classical seperti
dot-blot dan Southern blot-tergantung pada penggunaan
probe DNA / RNA spesifik untuk hibridisasi.

Pemeriksaan Tidak Langsung /

Indirect (Isolasi Virus)
Kultur sel, telur, dan hewan dapat digunakan untuk
isolasi. Namun telur dan hewan yang sulit untuk
menangani dan laboratorium diagnostik yang paling viral
bergantung pada kultur sel saja. Ada 3 jenis kultur sel:
Sel primer
Sel semi-kontinyu
Sel terus menerus

Identifikasi Perkembangan Virus

Keberadaan virus berkembang biasanya terdeteksi oleh:
Sitopatik Effect (CPE) - mungkin khusus atau nonspesifik misalnya HSV dan CMV menghasilkan CPE
tertentu, sedangkan enterovirus tidak.
Haemadsorption - sel memperoleh kemampuan untuk
menempel sel darah merah mamalia. Haemadsorption
terutama digunakan untuk mendeteksi influenza dan
parainfluenzaviruses

Masalah dengan kultur sel

Masalah utama dengan kultur sel adalah jangka waktu
yang panjang (hingga 4 minggu) diperlukan untuk
hasilnya akan tersedia. Juga, sensitivitas yang rendah
dan tergantung pada banyak faktor, seperti kondisi
spesimen, dan kondisi lembar sel. Kultur sel juga sangat
rentan terhadap kontaminasi bakteri dan zat-zat beracun
dalam spesimen. Terakhir, banyak virus tidak akan
tumbuh dalam kultur sel sama sekali misalnya Hepatitis
B dan C, virus diare, parvovirus dll.

Rapid kultur teknik

Salah satu kontribusi paling signifikan untuk diagnosis
cepat telah penerapan budaya sentrifugasi untuk
diagnosis virus. Selama beberapa tahun, telah diakui
bahwa kecepatan rendah sentrifugasi spesimen ke
monolayers sel meningkatkan infektivitas virus tertentu
serta klamidia. Kultur sel ternoda oleh antibodi
monoklonal untuk kehadiran antigen virus spesifik 24-48
jam kemudian

Serologi
Serologi membentuk andalan diagnosis virus. Inilah yang
terjadi dalam respon imun humoral utama untuk antigen.
Setelah pemaparan, antibodi pertama yang muncul adalah
IgM, yang diikuti oleh titer jauh lebih tinggi dari IgG.
Dalam kasus reinfeksi, tingkat IgM spesifik baik tetap sama
atau naik sedikit. Tapi IgG tunas dengan cepat dan jauh
lebih awal dari pada infeksi primer. Banyak jenis tes
serologi yang tersedia. Dengan beberapa tes seperti EIA
dan RIA, satu dapat melihat khusus untuk IgM atau IgG,
sedangkan dengan tes lain seperti CFT dan HAI, satu
hanya dapat mendeteksi antibodi total, yang terdiri
terutama IgG.

Keterbatasan diagnosis serologi

Untuk virus seperti rubella dan hepatitis A, timbulnya gejala klinis

bertepatan dengan perkembangan antibodi. Deteksi IgM atau
meningkatnya titer IgG dalam serum pasien akan menunjukkan
penyakit aktif.
Namun, banyak virus sering menghasilkan penyakit klinis sebelum
munculnya antibodi seperti pernapasan dan virus diare. Jadi dalam
hal ini, setiap diagnosis serologis akan retrospektif dan oleh karena
itu tidak akan berguna.
Ada juga virus yang menghasilkan bulan penyakit klinis atau tahun
setelah terinfeksi HIV misalnya dan rabies. Dalam kasus virus ini,
kehadiran hanya antibodi yang cukup untuk membuat diagnosis
definitif.

Uji Fiksasi di microtiter piring. Baris 1 dan 2

pameran fiksasi komplemen diperoleh
dengan spesimen serum fase akut dan
sembuh, masing-masing. (Pengenceran
serum 2 kali lipat yang digunakan) diamati
peningkatan 4 kali lipat signifikan dan
menunjukkan infeksi.

Lempeng ELISA: sumur berwarna

menunjukkan reaktivitas. Semakin gelap
warnanya, semakin tinggi yang reaktivitas

Antibodi dalam CSF

Pada orang yang sehat, harus ada sedikit atau tidak ada
antibodi dalam CSF. Mana ada meningitis virus atau
ensefalitis, antibodi dapat dihasilkan terhadap virus oleh
limfosit dalam CSF. Temuan antibodi dalam CSF
dikatakan signifikan ketika rasio antara titer antibodi
dalam serum dan bahwa dalam CSF kurang dari 100.

Quality Control di Virologi Klinis

Kontrol kualitas di laboratorium klinis terdiri dari satu set
prosedur yang dirancang untuk membantu memastikan
pengiriman kepada staf medis hasil laboratorium yang
konsisten dan akurat. Hasil ini harus diberikan secara
tepat waktu sementara data masih relevan secara.
Sebuah laboratorium virologi klinis harus dirancang
sedemikian sehingga klinis Biohazard yang risiko untuk
personil
laboratorium
dan
masyarakat
umum
diminimalkan dan bahwa budaya dilindungi dari
pencemaran lingkungan.

Transpotasi Spesimen

Spesimen untuk isolasi virus sering diadakan untuk

jangka waktu yang lama sebelum mencapai
laboratorium. Virus menyelimuti seperti RSV dan CMV
sangat bertanggung jawab untuk suhu kamar dan
freeze-thaw siklus sedangkan virus non-menyelimuti
seperti enterovirus mentolerir kondisi ini dengan baik.
Sebagai aturan umum, spesimen virus diadakan untuk
jangka pendek harus didinginkan, sedangkan untuk
waktu yang lebih lama dapat dibekukan pada -20 atau
-70o C.

Kultur Jaringan dan Media

Kultur jaringan tetap andalan non-serologis diagnosis virus. Oleh

karena itu, kontrol kualitas yang memadai untuk komersial dibeli
atau untuk persiapan di rumah sel kultur jaringan sangat penting.
Dalam garis sel tertentu, mungkin ada variasi yang signifikan
dalam sensitivitas untuk isolasi virus yang mungkin tergantung
pada subline sel tertentu atau clone dan nomor ayat.
Informasi tentang garis sel tertentu harus dicatat ngotot
termasuk sumber, jenis, jumlah bagian, confluency dan kondisi
sel. Hilangnya garis sel rutin passaged untuk digunakan dapat
menyebabkan gangguan parah alur kerja dan karena itu,
ketentuan harus dibuat untuk sel back-up dalam acara
kontaminasi atau laboratorium kecelakaan.

Sistem back-up meliputi;

Pembekuan dan penyimpanan sel bagian rendah pada
-70 C. Gunakan dari termos saham dipasangkan. Ketika
termos mencapai confluency, hanya satu yang
passaged, sedangkan labu kedua diadakan sebagai
back up sampai menampilkan termos baru pertumbuhan
yang baik.
Membawa satu set paralel termos saham menggunakan
satu set terpisah reagen kultur jaringan dan gelas.

TERIMA KASIH