Anda di halaman 1dari 2

1.

Setelah mendapatkan jaringan beku, sebaiknya dibekukan


dalam nitrogen cair. Penting bahwa jaringan harus dibekukan
secepat mungkin untuk menghindari pembentukan kristal es
pada jaringan.
2. Pastikan cryostat adalah pada suhu operasi yang tepat -20 C
hingga -30 C Tempatkan sejumlah kecil OCT atau embedding
media bagian beku lain yang sesuai pada disk objek cryostat
(pastikan disk pada suhu kamar. Sebelum pemasangan
spesimen).
3. Posisikan spesimen beku di tengah obyek disk dan
menempatkan disk pada cryobar dalam cryostat untuk
memulai proses pembekuan cepat
4. Menggunakan "Histo-Freeze" atau aerosol pendingin lainnya
yang sesuai, semprot sekitar pinggiran objek disk, sebagai
OCT membeku akan mulai berbalik dari gel yang jelas untuk
zat padat putih.
5. Sebelum disk dibekukan add cukup padat OCT untuk
menutupi bagian atas spesimen dan cepat menempatkan
extractor panas di atas spesimen. Ekstraktor panas melayani
dua tujuan, (1) cepat membeku OCT dan jaringan dan (2)
menghasilkan permukaan tertanam datar untuk memotong
mudah.
6. Semprot
dengan
pendingin
jika
diperlukan
untuk
mempercepat proses pembekuan
7. Tempatkan disk objek dalam pemegang objek disk yang
mikrotom dan mengencangkan sekrup set atau penjepit.
8. Pastikan bahwa ada cukup clearance antara blok dan pisau
mikrotom.
9. .Pindahkan blok ke arah ujung pisau. Pastikan ratchet terlepas
dari gigi mikrometer. Putar roda gila dengan tangan kanan dan
mulai memutar bruto menyesuaikan roda (pada stoke bawah)
perlahan-lahan dengan tangan kiri. Menghadapi off cukup
Oktober sampai bagian penuh spesimen terlihat.
10.
Melibatkan ratchet pada gigi mikrometer, memotong
dan membuang dua atau tiga bagian pertama.
11.
Memiliki fiksatif yang tepat (95% ETOH untuk H & E) dan
slide siap. Hidupkan roda gila dengan tangan kanan. Sebagai
blok datang dalam kontak dengan pisau tepi bagian akan
bergerak ke bawah pisau dan mulai menggulung. Tahan
bagian bawah dengan sedikit kekuatan mungkin dan
membimbing di sepanjang pisau menggunakan cat unta
rambut kuas di tangan kiri. Lanjutkan dipotong sampai bagian
spesimen penuh telah diperoleh, namun berhenti sebelum
melewati Oktober tersisa. Salah satu tepi bagian diadakan
datar dengan semak cat dan yang lainnya dengan ujung
pisau.
12.
Mengambil
slide
dengan
tangan
kanan
dan
mengubahnya sehingga sisi atas menghadap ke arah pisau.

13.
13. Hati-hati menurunkan slide ke pisau, menjaga
paralel geser ke bagian. Sebagai jaringan datang ke dalam
kontak dengan slide OCT dan jaringan akan mencair
menyebabkan jaringan untuk mematuhi slide.
14.
14. Tempatkan slide dalam fiksatif. Jika pewarnaan H & E
bagian, menggunakan 95% ETOH dan memperbaiki selama 30
detik.

Spesimen diletakkan pada gamit metal dan dibekukan secara cepat pada suhu sekitar
o
-20 C. Pada suhu ini, semua jaringan akan mengeras.
Selanjutnya dipotong beku dengan microtome yang merupakan bagian cryostat
Potongan itu diletakkan pada slide kaca dan diwarnai (biasanya dengan hematoxylin
dan eosin).
Persiapan sampel sangat cepat dibandingkan teknik histologi tradisional (sekitar 10
menit).