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UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD

Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Medio Ambiente


Contenido didctico del curso Propagacin y Micropropagacin de Plantas

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA


ESCUELA DE CIENCIAS AGRCOLAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO
AMBIENTE

30161- PROPAGACIN Y MICROPROPAGACIN DE PLANTAS


JUAN CARLOS PADILLA OSORIO
Director Nacional

PEREIRA, RISARALDA
ao 2010

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30161- PROPAGACIN Y MICROPROPAGACIN DE


PLANTAS

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ASPECTOS DE PROPIEDAD INTELECTUAL Y VERSIONAMIENTO

El contenido
didctico
del
curso acadmico:
PROPAGACIN Y
MICROPROPAGACIN DE PLANTAS fue diseado inicialmente en el ao 2005
por el Ingeniero Agrnomo Gabriel Orlando Pardo Rodriguez.
Actualmente, el mdulo es actualizado por el Ingeniero Agrnomo Juan Carlos
Padilla Osorio, del CCAV Eje cafetero, zona Occidente quien es Especialista en
Pedagoga para el Desarrollo del Aprendizaje Autnomo (UNAD) y que
actualmente cursa el doctorado en Desarrollo Sostenible con la Universidad
Catlica de vila, Espaa.

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INDICE DE CONTENIDO

UNIDAD 1. LA PROPAGACIN SEXUAL

10

CAPTULO 1. LA SEMILLA - GENERALIDADES

10

Leccin 1. La reproduccin sexual

12

Leccin 2. Morfologa de la semilla.

13

Leccin 3. Germinacin de la semilla.

15

Leccin 4. Factores que afectan la germinacin.

17

Humedad.
La temperatura.
El Oxgeno.
La luz.

19
19
20
21

Leccin 5. Latencia de la semilla.

24

Tipos de latencia.
Mtodos para superar la latencia.

26
28

CAPTULO 2. ANLISIS DE SEMILLAS

32

Leccin 6. Vigor.

32

Leccin 7. Pruebas de vigor.

34

34
35
35

Pruebas directas.
Pruebas Indirectas.
Pruebas de vigor recomendadas.

Leccin 8. Anlisis de semillas.

38

38
39
39
40
41

Anlisis de Pureza.
Anlisis de peso.
Anlisis de germinacin
Germinacin por peso.
Valor real

Leccin 9. Ejercicio de aplicacin.

42

Leccin 10. Envigoramiento.

44

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CAPTULO 3. LOS VIVEROS.

45

Leccin 11. Tipos de viveros y criterios para su establecimiento.

46

46
46
46

Vivero temporal.
Vivero permanente.
Criterios para el establecimiento de un vivero.

Leccin 12. Construccin de un vivero.

49

49
49
49
50

El ambiente de propagacin.
Factores atmosfricos.
Factores edficos.
Factores biticos.

Leccin 13. Tipos de estructuras para la propagacin.

51

51
51
53

Ambientes completamente controlados.


Ambientes semicontrolados.
Ambientes mnimamente controlados.

Leccin 14. Sistemas de siembra en los viveros.

54

55
58

Germinadores.
Produccin a raz desnuda.

Leccin 15. Otros aspectos para construccin de viveros.

59

Actividades de Autoevaluacin de la Unidad 1

63

UNIDAD 2. LA PROPAGACIN ASEXUAL.

65

CAPTULO 4. MTODOS DE PROPAGACIN ASEXUAL (INJERTOS)

65

Leccin 16. Generalidades de la propagacin asexual.

65

66

Mutaciones.

Leccin 17. El Injerto generalidades.

68

69
69
70
72
73

Condiciones para realizar un injerto.


Afinidad.
Compatibilidad.
Influencia entre las partes injertadas.
Produccin de plantas madre.
5

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Seleccin de plantas madre.


Recomendaciones para tener xito en la realizacin de un injerto.

74
74

Leccin 18. Principales tcnicas de injertacin (Parte 1).

75

75
75
76

Injerto doble.
Injerto de escudete o yema.
Injerto en T invertida.

Leccin 19. Principales tcnicas de injertacin (Parte 2).

78

78
79
80

Injerto en forma de parche o chapa.


Injerto de hendidura simple.
Injerto de doble hendidura.

Leccin 20. Principales tcnicas de injertacin (Parte 3).

82

82
83
85
85
85

Injerto ingls.
Injerto de corona.
Injerto de enchapado lateral.
Injerto de aproximacin lateral
Injerto de aproximacin en puente.

CAPTULO 5. MTODOS DE PROPAGACIN ASEXUAL


(ACODOS Y ESTACAS)

89

Leccin 21. Principales tcnicas de acodo (Parte 1).

89

89
90

Acodo areo.
Acodo de punta.

Leccin 22. Principales tcnicas de acodo (Parte 2).

92

92
93

Acodo subterrneo simple.


Acodo en montculo.

Leccin 23. Propagacin por estacas (Parte 1).

95

Ventajas e inconvenientes del estacado.


Criterios para la seleccin de estacas.

95
95

Leccin 24. Propagacin por estacas (Parte 2).

97

97
97
98

Estacas de madera dura.


Estacas de madera suave.
Estacas de hojas
6

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Leccin 25. Enraizamiento de estacas.

99

99

Aspectos que influyen en el enraizamiento de estacas.

CAPTULO 6. MTODOS DE PROPAGACIN ASEXUAL


(TALLOS MODIFICADOS).

101

Leccin 26. Propagacin vegetativa por tallos modificados (Parte 1).

101

101

Bulbos.

Leccin 27. Propagacin vegetativa por tallos modificados (Parte 2).

103

103

Cormos.

Leccin 28. Propagacin vegetativa por tallos modificados (Parte 3).

105

105

Tubrculos.

Leccin 29. Propagacin vegetativa por tallos modificados (Parte 4).

106

106

Rizomas.

Leccin 30. Propagacin vegetativa por tallos modificados (Parte 5).

107

107
107

Seudotallos.
Estolones

Actividades de Autoevaluacin de la Unidad 2

108

UNIDAD 3. MICROPAGACIN DE PLANTAS.

109

CAPTULO 7. ASPECTOS BSICOS DEL CULTIVO DE TEJIDOS


VEGETALES (PARTE 1)

109

Leccin 31. Generalidades del cultivo de tejidos.

109

109
111

Historia del cultivo in vitro.


Definicin del cultivo de tejidos.

Leccin 32. Constitucin de un laboratorio de cultivo de tejidos.

113

113
113

Area de preparacin.
Area de lavado y esterilizacin.
7

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Area de transferencia.
Area de incubacin.
Area de adaptacin
Equipo y elementos necesarios para el montaje de un laboratorio

113
113
114
114

Leccin 33. Los medios de cultivo.

116

117

Composicin de los medios de cultivo.

Leccin 34. Preparacin de un medio de cultivo (Parte 1).

123

125
126

Preparacin de un medio partiendo de soluciones stock.


Clculo de soluciones stock.

Leccin 35. Preparacin de un medio de cultivo (Parte 2).

129

129
129
129
130

Clculo de concentraciones hormonales.


Clculo de ppm y mg/l.
Ejercicio de aplicacin.
Clculo en mM y M

CAPTULO 8. ASPECTOS BSICOS DEL CULTIVO DE


TEJIDOS VEGETALES (PARTE 2).

131

Leccin 36. Control preventivo de la contaminacin (Parte 1).

131

131
132

Los tejidos.
El rea de trabajo.

Leccin 37. Control preventivo de la contaminacin (Parte 2).

133

133
133

Los instrumentos.
El investigador.

Leccin 38. La Esterilizacin y sus mtodos.

134

134
135

El autoclave.
Filtracin.

Leccin 39. Posibles respuestas en el cultivo de tejidos vegetales (Parte 1).

136

136
136
136

Sin respuestas.
Cultivo infectado.
Oxidacin del explante.

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Leccin 40. Posibles respuestas en el cultivo de tejidos vegetales (Parte 2).

138

138
138
138

Formacin de callo.
Callo ms regeneracin directa.
Vitrificacin.

CAPTULO 9. LA MICROPROPAGACIN DE PLANTAS.

137

Leccin 41. Generalidades de la micropropagacin.

137

137

Ventajas y desventajas de la micropropagacin.

Leccin 42. Etapas de la micropropagacin.

141

141
141
141
143
144
145

Etapa 0: Preparacin del material vegetal.


Etapa 1: Establecimiento del cultivo.
Etapa 2: Multiplicacin.
Etapa 3: Enraizamiento.
Etapa 4: Endurecimiento
Factores que influyen en la micropropagacin.

Leccin 43. Fases de laboratorio.

148

148
148
148

Fase de aislamiento.
Fase de inoculacin.
Fase de repicado.

Leccin 44. Propagacin por segmentos de hoja y por meristemos.

149

149
149
150
152

Propagacin por segmentos de hoja.


Propagacin por meristemos.
Aplicaciones.
Los explantes.

Leccin 45. Segmentos nodales.

153

Actividades de Autoevaluacin de la Unidad 3

157

BIBLIOGRAFA

158

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UNIDAD 1. PROPAGACIN SEXUAL


CAPITULO 1. LA SEMILLA GENERALIDADES
INTRODUCCIN
Toda planta crece y desarrolla durante su ciclo de vida , dentro del cual
reproduccin hace posible su perpetuacin.

la

Las clulas vegetales contienen una serie de instrucciones (localizadas en los


genes) que controlan la forma como se desarrollan y dividen dentro de la planta.
Durante el crecimiento normal de la planta, las clulas se dividen, y las nuevas
clulas generadas contienen idnticos caracteres e informacin gentica a las
clulas madre; este tipo (le divisin se llama Mitosis y ocurre permanentemente
durante la vida de la planta.
Cuando llega la poca de reproduccin, sta suele sucederse de dos diferentes
maneras: en la primera se separa una parte del cuerpo vegetal y se desarrolla
como nueva planta. A este tipo de reproduccin se le llama asexual o vegetativa y
su estudio y aplicacin prctica, ser ampliado ms adelante.

El segundo tipo de reproduccin considerado el ms importante es el que se


conoce como reproduccin sexual.
Un zigoto resultante de la fertilizacin o de la unin de los gametos masculinos y
femeninos se convierte en la estructura reproductiva por excelencia de una
planta, que es la semilla obtenida a travs de un proceso sexual.
Una semilla es esencialmente un embrin o una planta joven en la etapa de
quietud o inactiva. En este estado, el embrin tiene una tasa metablica
extremadamente baja.
La mayora de las semillas pueden sobrevivir con sus reservas almacenadas por
perodos prolongados. La semilla es la forma primaria por la cual una planta se
reproduce en el momento en que las condiciones son las ms convenientes.

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Durante la fertilizacin, los genes que controlan caractersticas de la planta


regeneran y recombinan de muchas diversas maneras, dando por resultado las
semillas que pueden o no ser similares a sus padres.
Las semillas que resultan de la auto-polinizacion pueden producir especmenes
muy homogneos, mientras que no lo son aquellos que resultan de la
polinizacion cruzada que generalmente proporcionan la diversidad gentica para
la obtencin y la seleccin de los nuevos cultivares (variedades cultivadas) y son a
menudo fuentes de variabilidad y diversidad en las plantas.

La regeneracin de la semilla es la manera ms econmica de obtener una gran


cantidad de plantas. La mayora de las especies de plantas cultivadas se
reproducen por semillas.

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Leccin 1. La reproduccin sexual


Durante el proceso de floracin, las plantas superiores producen dos tipos de
clulas especializadas que al unirse realizan la fecundacin, como iniciacin al
ciclo de reproduccin.

En las flores masculinas, se producen sobre las anteras, las clulas de polenclulas reproductoras masculinas-, las cuales en el proceso de polinizacin se
trasladarn a las flores femeninas para unirse con los vulos, que son las clulas
reproductivas femeninas, producidas en el saco embrionario. Cada vulo
fecundado tiene la posibilidad de desarrollarse para conformar una semilla y sta a
su vez, puede originar una nueva planta.

Una secuencia general caracterstica de la reproduccin sexual en plantas


superiores, se inicia con la aparicin de clulas reproductivas especializadas
denominadas microsporas y megasporas: por meiosis dando lugar el grano de
polen y al vulo respectivamente.
La clula madre de la megaspora, mediante divisiones sucesivas, origina la
nucela, que es el tejido en el cual se ubica el vulo y los tegumentos que le
brindan proteccin su separacin se denomina micropilo y es el lugar por donde
penetra el grano de polen durante la fertilizacin; el vulo es llamado gametofito
femenino.

La clula madre de la microspora origina en la flor los granos de polen-gametofito


masculino- los cuales se unirn con los vulos para conformar un proembrin
(zigoto), el cual se multiplica formando el embrin, elemento fundamental de la
semilla: esta a su vez germina y origina una nueva planta.

Despus de la fertilizacin, el ncleo del zigoto permanece en reposo por un corto


tiempo. El ncleo del endospermo se divide rpidamente y posteriormente solo
despus de la divisin del endospermo ocurre la divisin del ncleo del zigoto que
forma un filamento conformado por 2-4 clulas , que al elongarse y continuar
dividiendose forman el suspensor que soportar al embrin en el endospermo y
por procesos de divisin continua se conforma finalmente el embrin.

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Leccin 2 Morfologa de la semilla

Se consideran dos clases en las plantas que producen semillas


, las
angioespermas en las que sus semillas llevan sus vulos dentro del ovario, y las
gimnospermas en las que la estructura que los contiene es muy diferente, pues
no constituye una verdadera flor y las semillas se ubican en pares en la base de
las escalas de los conos.

Entre las angioespermas, las plantas que tienen dos cotiledones se clasifican
como dicotiledoneas
y las que cuentan con un solo cotiledn como
monocotiledoneas. Las gimnospermas pueden tener hasta 15 cotiledones.
La mayora de las semillas consisten en tres porciones: embrin, una planta
miniatura dentro de la semilla; endospermo, reservas almacenadas del alimento
para el embrin creciente; y la cubierta de la semilla (testa), que abarca y protege
el embrin y el endospermo contra el dao, prdida de exceso de agua, y otras
condiciones desfavorables. El embrin tiene unas o ms hojas miniatura de la
semilla (cotiledones), un vstago embrionario (plumula o epicotilo), una raz
embrionaria (radcula), y una hipocotilo, la zona de la transicin entre el vstago
embrionario y raz.

El endospermo contiene las reservas almacenadas del alimento integradas por


carbohidratos, protenas, aceites, y otras sustancias bioqumicas. Todas las
semillas contienen reservas almacenadas de alimento en el endospermo, aunque
en ciertas especies. Se pueden encontrar
reservas del alimento en los
cotiledones.
En algunas, la cantidad de reservas puede ser absolutamente pequea,
generalmente, cuanto ms grande es la reserva del alimento, mayor es el vigor de
la planta en el semillero. Las semillas de mayor tamao tienen generalmente ms
reservas del alimento que las semillas pequeas .
Hay cerca de 250.000 diversas plantas con semilla en el mundo. Cada especie
tiene sus el propios morfolgico la forma nica de semilla, que se puede identificar
por su tamao, forma, color, y su estructura externa.

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Figura 1. Semilla de maz. Semilla con nutrientes en el endospermo

Figura 2. Semilla de frjol. Semilla con nutrientes almacenados en los cotiledones

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Leccin 3. Germinacin de la semilla


El proceso de la germinacin comienza con el proceso de imbibicin que consiste
en la toma de agua por la semilla. La velocidad y forma como se da este proceso
depende esencialmente de la composicin de la semilla, la permeabilidad de su
cubierta, la temperatura del suelo y la duracin del proceso .
El segundo proceso ocurre cuando se presenta la activacin enzimtica que
permite el ablandamiento de tejidos, especialmente de las sustancias de reserva ,
facilitando el transporte de nutrientes hacia al embrin y estimulando las
reacciones qumicas que reducen o sintetizan compuestos asimilables por el
embrin. Aqu participan las hormonas de crecimiento vegetal del grupo de las
citokininas. incluyendo la
kinetina , actuando en unin con las auxinas
promoviendo la divisin clular y el crecimiento lateral .
Posteriormente se inicia el crecimiento del embrin , donde generalmente, la
radcula emerge primero de la capa de semilla ablandada o rota, crece hacia
abajo, y se convierte en el sistema primario de la raz. Mientras la plumula crece
hacia arriba para formar el vstago o brote.

Luego se presenta la ruptura de la cubierta y la emergencia de la plntula y como


ltimo paso el establecimiento de la misma donde ocurre la fotosntesis a un nivel
capaz de alimentar la planta, generalmente cuando se forman las primeras hojas
verdaderas. En esta etapa, se termina la germinacin.
n algunos casos, el cotiledn o los cotiledones no permanecen debajo de la
superficie de la tierra, lo que se conoce como germinacin epigea (ver figura 3)
,aunque en la mayora de las especies , los cotiledones permanecen en el suelo
en el interior de la cubierta seminal (germinacin hipgea) . (figura 4)

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Figura 3 Germinacin epgea del frijol.

Figura 4 Germinacin hipgea de la arveja

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Leccin 4. Factores que afectan la germinacin.


Cada especie de planta tiene sus propios requisitos para que ocurra el proceso de
germinacin, siendo los ms importantes los siguientes
Humedad
La necesidad de la humedad es el requisito previo ms importante para activar la
germinacin. Mientras que algunas semillas requieren poca humedad para la
germinacin, otras, tales como la Nymphaea spp. (lirio del agua) y otras plantas
acuticas, se deben sumergir totalmente en agua.
Las semillas con capas de semilla duras o impermeables pueden requerir un
tratamiento especial (el ablandar o escarificacin) para permitir la toma eficiente
del agua. Generalmente, el agua alcanza la semilla a travs de contacto con el
medio que por lo general es el suelo. Una vez que el proceso de la germinacin
comience, un nivel adecuado de la humedad se debe mantener ,la baja humedad
temporal puede dar lugar a la muerte de la semilla o de la planta de semillero.
Demasiada humedad puede hacer que el suelo se sature de agua y prive a la
semilla del oxgeno, conduciendo a la muerte.
Tabla 1. Contenido de humedad necesaria para que ocurra la germinacin de
algunas semillas de especies cultivadas.
Cul t i vo

Co nt e ni d o d e hume d a d

Ma z ( Z e a ma ys)

30.5%

So ya ( G l ycin e ma x)

50.0%

Re mo l a ch a ( Be t a ssp . )

31.0%

Al g o d n ( G o ssypiu m sp p . )

50-55.0%

Hi g u eri lla ( Ri ci n u s co mu n i s)

32-36.0%

Ar r o z ( O r yza sa ti va )

32-35.0%

Ave n a ( Ave n a sa ti va)

32-36.0%

Ma n ( Ar a chi s h yp o ga e a )

50-55.0%

Adaptado de Burck, B. and J. C. Delouche. 1959.


seeds. Proc. AOSA 49:142

17

W ater absorption by

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La toma de agua por las semillas durante el proceso de germinacin se puede


describir usando el siguiente modelo en tres etapas:
Figura 5.Etapas de la toma de agua por la semilla

Las semillas secas en la etapa I (imbibicin) tienen un alto potencial negativo del
agua debido a las caractersticas coloidales de la capa de semilla.
Las superficies de protenas, de la celulosa, del almidn, y de otras sustancias
deben primero hidratarse. La toma o la imbibicin del agua en la etapa I es fsica,
dando por resultado el ablandamiento o ruptura de la cubierta de la semilla y un
aumento en el volumen de la semilla. (ver figura 2)

La toma de agua contina en la etapa II (metabolismo e hidrlisis activos) se


activan las enzimas almacenadas y estimula la sntesis de nuevas sustancias .
Estas enzimas hidrolizan y transforman algunas de las reservas almacenadas que
se usarn para la produccin de ms clulas y tejidos finos. Estos procesos
metablicos bajan el potencial del agua del embrin y de los tejidos finos
circundantes.
La etapa II parece ser una fase relacionada con la toma de agua y el crecimiento.
Durante esta etapa, el ndice de la absorcin del agua es gobernado por el
potencial osmtico interno.

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El crecimiento rpido de la etapa III (germinacin visible) de la radcula y de la


plmula define la tercera etapa. ( ver figura 5)
La temperatura

Cuando la humedad es adecuada, la temperatura es el requisito siguiente en


importancia para la germinacin.
La temperatura afecta el nivel en la cual el agua es imbibida y el ndice de
procesos metablicos tales como el desplazamiento de alimentos y las hormonas,
divisin y alargamiento de clulas, y otros procesos fisiolgicos y bioqumicos.
Los cambios que ocurren durante la germinacin comprenden procesos
metablicos que se producen en estrecha relacin con la temperatura, y su efecto
se expresa en la capacidad germinativa o en la velocidad de germinacin.
Las temperaturas cardinales para la germinacin de las semillas se clasifican en
temperatura ptima, mxima y mnima, donde el intervalo trmico en el que las
semillas germinan son caractersticas sujetas a la seleccin natural. Por esto, con
frecuencia se presentan como adaptaciones muy claras a los hbitat en los que
las plantas se desarrollan, y hay diferencia entre las especies, incluso entre
distintas poblaciones de la misma especie de acuerdo con su distribucin
geogrfica.
Muchos fisilogos han considerado que las temperaturas cardinales son
parmetros fisiolgicos muy tiles en el estudio de la germinacin. Sin embargo,
pueden presentarse dificultades al tratar de fijar en forma precisa las temperaturas
cardinales de una especie, ya que con frecuencia stas varan segn el estado de
maduracin de las semillas o son difciles de detectar debido a la lentitud de la
germinacin a ciertas temperaturas.

La temperatura es un factor importante de la regulacin de la sincronizacin de la


germinacin, debido a su papel en el control de la inactividad y germinacin de la
semilla, adems de su adaptacin al clima.

Generalmente, las altas temperaturas inducen o refuerzan la inactividad; mientras


las bajas temperaturas superan la inactividad. La mayora de las semillas pueden
tolerar el tiempo clido prolongado si se mantienen secas, y algunas pueden
soportar incluso mayores temperaturas extremas.
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Temperatura mnima. Por debajo de esta temperatura los proces os


de germinacin no se pueden detectar visualmente, dentro de un
perodo razonable de tiempo.
Bajas temperaturas pero por encima del punto de congelacin no son
letales a las semillas.
Temperatura mxima. Es la t emperatura por encima de la cual los
mecanismos de germinacin no operan y por lo tanto no se da creci miento del embrin. En contraste con la temperatura mnima, la m xima es fcil de determinar ya que temperaturas superiores a la
mxima causan daos irreversibles a las semillas (excepcin a es ta
regla son las semillas que entran en latencia a altas temperat uras).
Temperatura ptima. Esta se puede definir como la temperatura a la
cual se da el porcentaje mximo de germinacin en un mnimo de
tiempo.
Como ejemplo, a continuacin , se referencian algunas especies
sus temperaturas de germinacin:

T abla 2.T emperaturas de germinacin de algunas especies vegetales.


Cultivo

T emperatura

T emperatura

mnima (C)

ptima (C)

T emperatura
mxima (C)

Arroz

10-12

30-37

40-42

Ma z

8-10

32-35

40-44

T rigo

3-5

15-31

30-43

Tomate
Soya

20
8

20-35
32

35-40
40

El oxgeno
La mayora de las semillas requiere una fuente adecuada de oxgeno durante la
germinacin. El oxgeno se requiere para el proceso de respiracin que permite
oxidar los almidones, las grasas, y otras reservas de alimento, y su utilizacin es
proporcional a la cantidad de la actividad metablica.

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As, un medio de germinacin debe ser flojo, friable, y bien aireado. Las semillas
sembradas en suelos pesados pueden germinar mal, especialmente durante
estaciones hmedas , cuando el suelo se satura y carece a menudo del suficiente
oxgeno.
Profundizar la semilla al plantarla es desfavorable porque la fuente del oxgeno
puede ser restringida o puede suceder que las plantas de semillero no puedan
alcanzar la superficie, especialmente si el suelo o el medio es duro.
La luz
Si las condiciones de humedad y temperatura son adecuadas, la mayora de las
semillas germinan en condiciones de oscuridad, particularmente las semillas de la
mayora de las plantas agrcolas.
Otras son inhibidas parcialmente o totalmente por la luz o la requieren para
germinar.
El estudio del efecto de la luz sobre la germinacin se ha mantenido en el primer
plano del inters de los fisilogos y de los ecofisilogos durante mucho tiempo.
Actualmente, la cantidad de informacin disponible en este campo es muy grande.
La fotoinduccin o fotoinhibicin de la germinacin es uno de los casos ms claros
del control de un proceso fisiolgico por un factor ambiental.
No se sabe cuntas especies de plantas superiores presentan semillas
fotoblsticas (germinacin regulada por la luz), ya que la fisiologa de las semillas
de la gran mayora de las plantas no ha sido investigada; sin embargo, existen
evidencias que indican que el porcentaje de especies con semillas fotoblsticas es
particularmente alto entre las plantas anuales.
Las interacciones entre la luz y la temperatura se saben para algunas clases de
semilla. Por ejemplo, la fotosensibilidad puede ser superada alternando altas y
bajas temperaturas.
Son tres las principales bandas del espectro lumnico que tienen accin sobre la
germinacin, y corresponden a la franja de 660 nanmetros (rojo), 730
nanmetros (rojo lejano) y la luz comprendida entre 400 y 500 nanmetros (azul),
aunque con efectos mucho menos claros.

Tanto el rojo como el rojo lejano son absorbidos por un compuesto denominado
fitocromo, que es una cromoprotena que acta como sensor. Este pigmento en su
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forma activa es inductor de la germinacin e interviene en procesos de


permeabilidad, activacin de enzimas y expresin gentica. La conversin del
fitocromo inactivo (Pr) a fitocromo activo (Pfr) por lo general se lleva a cabo bajo el
efecto de la luz roja, y la reaccin opuesta ocurre bajo el efecto del rojo lejano.
Estas dos formas del fitocromo corresponden a cada uno de sus picos de
absorcin de luz. Esta reaccin de conversin en ambos sentidos est relacionada
con la induccin y la inhibicin de la germinacin, y puede ser modificada o
controlada por otros factores ambientales como la temperatura o el termoperiodo.
La intensidad de la luz, el fotoperiodo y la cantidad de rojo en relacin con el rojo
lejano presente (denominada relacin R:RL) modulan la respuesta de las semillas
a la luz a travs de este pigmento. La cantidad de fitocromo activo presente en
una semilla en el momento de su liberacin determina si sta puede germinar en
la oscuridad o si requerir luz para iniciar el proceso.
En los lugares cubiertos de vegetacin la luz que llega al suelo es pobre en rojo y
rica en rojo lejano, mientras que en los lugares abiertos ambas longitudes de onda
llegan en igual proporcin, debido a que la luz no ha sido filtrada por un dosel
vegetal. El mecanismo de captacin de la luz del fitocromo es sensible
principalmente a la calidad de luz, lo que permite a las semillas detectar, en
particular, la proporcin de R:RL que llega al suelo.
De esta manera, algunas semillas de plantas de sol pueden permanecer latentes
cuando son dispersadas hacia lugares que estn densamente cubiertos de
vegetacin y que no seran propicios para su establecimiento. La hojarasca que
cubre al suelo tambin modifica la relacin R:RL, as como otras propiedades
fsicas del suelo.

Este tipo de latencia regulada por la luz es muy comn en semillas que
permanecen latentes en la oscuridad, enterradas en el suelo, hasta que son
expuestas a la luz durante las prcticas agrcolas. Cuando estas semillas alcanzan
la superficie del suelo quedan expuestas a la luz y germinan.
En las semillas pequeas la conversin del fitocromo normalmente se realiza a
muy bajas intensidades de luz; sin embargo, la temperatura y el fotoperiodo tienen
influencia directa en el resultado final del proceso, expresado en porcentaje y
velocidad de germinacin.
En ocasiones el proceso fisiolgico que induce la germinacin necesita la luz, y la
germinacin total slo se obtiene cuando la luz y la temperatura actan

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simultneamente. En algunos casos, la temperatura puede provocar que las


semillas germinen en la oscuridad, aun cuando generalmente requieren luz.
La luz y la fluctuacin de temperatura interactan de muchas maneras para
determinar la germinacin de las semillas presentes en el suelo en el momento en
que las condiciones para el establecimiento de las plantas son las ptimas.
La regulacin de la germinacin producida por las fluctuaciones de temperatura, la
calidad de la luz incidente o alguna combinacin de ambos factores es comn en
hierbas y plantas colonizadoras. Los sensores ambientales de estas semillas
detectan cambios en su ambiente que les indican la aparicin de condiciones
favorables para la germinacin y establecimiento de las plantas. Estos cambios se
dan cuando la cubierta de plantas se destruye, cuando desaparece la capa de
hojarasca o cuando las semillas son desenterradas por algn disturbio, producto
de un fenmeno natural o de la perturbacin por el hombre.

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Leccin 5. Latencia de la semilla.


Una vez que la semilla ha completado su desarrollo se inician los cambios que
darn lugar al establecimiento del reposo en las semillas Este reposo o reduccin
del metabolismo se denomina quiescencia cuando la causa de que no ocurra la
germinacin es por no disponer de condiciones exgenas adecuadas.
En cambio, el reposo de las semillas se denomina latencia ,dormicin, letargo,
reposo o vida latente y se refiere a la ausencia o inhibicin del crecimiento vegetal
y en particular, de la germinacin por causas internas, aun cuando las condiciones
externas sean adecuadas (temperatura, humedad, luz, etc.)
Algunos autores emplean el trmino dormicin, para referirse a la falta de
germinacin debida a un medio desfavorable o a mecanismos inhibidores
residentes en las semillas.
El fenmeno de la dormancia es comn, principalmente en semillas de
determinadas hortalizas y forrajeras, algunas frutales , arbreas y ornamentales,
que no germinan despus de la cosecha debido a los mecanismos internos, de
naturaleza fsica o fisiolgica, que bloquean la germinacin.
Estos mecanismos son genticos y acontecen durante el ciclo de vida de la
especie, durante la maduracin de la semilla, de modo que, despus de la
dispersin, la semilla todava no estar apta para germinar. sta dormancia, que
se instala en la fase de maduracin de la semilla, es denominada primaria.
No obstante, en algunas especies, el bloqueo a la germinacin se establece luego
de la dispersin de la semilla, inducido por ciertas condiciones de estrs o por un
ambiente desfavorable a la germinacin, caracterizando otro tipo de dormancia,
denominada secundaria.
De esta forma, la dormancia de la semilla es un importante estadio del ciclo de
vida de las plantas, caracterizada por la ausencia temporal de la capacidad de
germinacin, permitiendo que las especies vegetales sobrevivan a las
adversidades, principalmente a aquellas que dificulten o impidan el crecimiento
vegetativo de la planta. Se trata, por lo tanto, de un fenmeno fundamental para la
perpetuacin y la supervivencia de muchas especies vegetales en los ms
variados ecosistemas.
Tambin es gracias a la dormancia que semillas de muchas especies no germinan
en el fruto cuando este est todava prendido a la planta, pues, luego de la
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maduracin fisiolgica, y en condiciones ambientales favorables a la germinacin como, por ejemplo, aumento de la humedad por el exceso de lluvias -, semillas sin
bloqueos al crecimiento del embrin podrn germinar en la planta madre.
Cabe resaltar que la mayora de las plantas cultivadas actualmente es
representada por variedades, cultivares e hbridos genticamente mejorados por
procesos de seleccin que eliminaron la dormancia, pues los objetivos de la
agricultura moderna son la rapidez y la uniformidad de la germinacin de la semilla
y de la emergencia de la plntula en campo.
No obstante, existen muchas especies que tienen la supervivencia garantizada por
la dormancia. Lo que varia bastante entre las especies vegetales es el perodo de
duracin de la dormancia, que puede ser de apenas algunos das, de algunos
meses o de varios aos. Inclusive para una misma especie, este perodo puede
variar en funcin del genotipo, del ambiente donde la semilla fue producida y de
otros factores.
Adems, semillas originadas de una misma planta tienen intensidades distintas
de dormancia, para que la germinacin ocurra a lo largo del tiempo, en intervalos
regulares, a medida que la dormancia es superada, aumentando la probabilidad
de supervivencia de los individuos.
De esta forma, el impedimento a la germinacin de la semilla, establecido por la
dormancia, se constituye en una estrategia benfica, por distribuir la germinacin a
lo largo del tiempo y permitir a la especie "escapar" de condiciones adversas al
crecimiento de la plntula.
Se trata, por lo tanto, de un fenmeno que contribuye para que la germinacin de
la semilla ocurra solamente en una poca o estacin favorable al desarrollo de la
plntula, garantizando la supervivencia de la especie.
Principales causas de la dormancia de semillas
Pueden considerarse las siguientes:

a.

Impermeabilidad al agua.

b.

Baja permeabilidad a los gases.

c.

Resistencia mecnica al crecimiento del embrin.


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d.

Permeabilidad selectiva a los reguladores del crecimiento.

e.

Bloqueos metablicos

f.

Presencia de inhibidores.

g.

Embriones rudimentarios

h.

Adquisicin de mecanismos inhibidores.

Las causas por las que no germinan pueden deberse a la existencia de un periodo
cronolgicamente regulado de interrupcin del crecimiento y de disminucin del
metabolismo durante el ciclo vital. sta es una estrategia adaptativa de
supervivencia frente a condiciones ambientales desfavorables que se presenta en
algunos seres vivientes.
En las plantas superiores puede existir latencia o interrupcin del crecimiento en el
tejido meristemtico, por ejemplo en las yemas de crecimiento de las ramas, as
como en las semillas.
El establecimiento de la latencia puede estar regulado por factores hereditarios
que determinan los mecanismos fisiolgicos endgenos de las plantas, los cuales
interactan con factores del ambiente en el que las plantas crecen; esto da lugar,
a la larga, a cambios evolutivos en las plantas.
Entre las condiciones ms importantes del ambiente se encuentran las
variaciones climticas de temperatura y humedad, las variaciones microclimticas
derivadas de aspectos fisiogrficos y biticos, como la calidad espectral de la luz y
el termoperiodo, as como las caractersticas especficas del lugar a las que las
plantas se han adaptado para establecerse y crecer.
Las variaciones micro y macroclimticas, as como las condiciones hormonales y
nutricionales de la planta progenitora tienen gran influencia en el establecimiento
de la latencia de sus semillas durante su desarrollo, por lo cual pueden existir
variaciones entre cosechas de semillas de una especie, segn la poca y el lugar
de produccin.
Tipos de latencia
Latencia innata o endgena
Las semillas viables, especialmente de muchas especies de arboles, pueden no
germinar despus de un tiempo considerable incluso en condiciones en que el
ambiente para la germinacin parece ser ideal.
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Se presenta en el momento en el que el embrin cesa de crecer (cuando la semilla


an est en la planta madre) y contina hasta que el impedimento endgeno cesa,
en ese momento las semillas estn en condiciones de germinar en cuanto se
presentan las condiciones ambientales adecuadas.
Latencia inducida o secundaria
Este tipo de latencia se produce cuando las semillas estn en condiciones
fisiolgicas para germinar y se encuentran en un medio que presenta alguna
caracterstica muy desfavorable, como poco oxgeno, concentraciones de CO2
mayores a las de la atmsfera, temperatura alta, etc., lo que puede producir
alteraciones fisiolgicas reversibles en las semillas. En estos casos, las semillas
pueden caer en un estado de latencia secundaria en el que ya no pueden
germinar a pesar de continuar vivas. En algunos casos este tipo de latencia se
rompe por medio de un estmulo hormonal. Algunas veces la latencia inducida
tambin puede sumarse a otros tipos de latencia o sustituirlos.
En muchas especies, la germinacin retrasada resulta de condiciones internas de
los tejidos finos del almacenaje del embrin y del alimento, o de una porcin de
estos tejidos finos, que deben experimentar ciertos cambios de desarrollo (los
embriones rudimentarios o no maduros) o fisiolgicos antes de que las semillas
germinen.
Si los cambios fisiolgicos y mecnicos ocurren: se sintetizan las hormonas y
actan las enzimas del crecimiento o se desactivan las hormonas activadas, que
inhiben la germinacin y se absorbe el agua , se rompe este tipo de latencia.
Latencia impuesta o exgena
En la naturaleza esta latencia se presenta en semillas aptas para germinar en
condiciones adecuadas de humedad y temperatura media, es decir, adecuadas al
hbitat que ocupan, pero que continan latentes por falta de luz, requerimientos
especiales de temperatura, oxgeno o de otro factor. Esta latencia est controlada
por las condiciones fsicas del ambiente que rodea a la semilla, y se presentan en
aquellas que se encuentran en el suelo y que germinan slo despus de una
perturbacin que modifique el rgimen lumnico o el contenido de oxgeno.
La presencia de inhibidores qumicos de la germinacin en el embrin o la
inmadurez de ste son probablemente las causas principales de esta latencia. La
duracin de la latencia innata es muy variable segn la especie, en algunos casos,
incluso puede variar entre las semillas de un mismo individuo.
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Las semillas de las plantas de las familias de Cornaceae, de Geraniaceae, de


Fabaceae, de Malvaceae, y de Convolvulaceae se caracterizan por esta
condicin .
Mtodos para superar la latencia

Como mtodos para superar la latencia de las semillas se encuentran la


escarificacin y la estratificacin de las semillas.
La escarificacin
Consiste en romper, gastar o remover parte o toda la cubierta de la semilla a
travs de mtodos fsicos y /o qumicos.
Entre los tratamientos fsicos se encuentran:

Agua caliente. Este tratamiento esteriliza la superficie de las semillas. La


temperatura y duracin del tratamiento son los factores que determinan su
efecto sobre la impermeabilidad y viabilidad de las semillas.

Figura 6. escarificacin con agua caliente

. Tomado de viveros .2002

Calentamiento en seco. Consiste en incrementar la temperatura de las


semillas durante cierto tiempo, colocndolas sobre una plancha trmica o
dentro de un horno.

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Productos custicos. Generalmente se utiliza cido sulfrico o cido


clorhdrico , que debe cubrir dos veces el volumen ocupado por las semillas,
utilizando un envase de cristal, y revolviendo suavemente con una barra de cristal
durante el tratamiento.
La duracin de la exposicin cida depender de grueso de la capa de semilla y
dependiendo de la especie en tiempos que van desde quince minutos a 3 horas o
ms de exposicin .
Es importante tener en cuenta que para reducir la concentracin del cido con
agua, esta no se debe adicionar al cido, sino que el cido se debe agregar
lentamente en el agua para evitar reacciones violentas.
La inmersin de las semillas en estas sustancias, y, en general, su uso, implica
grandes riesgos para los operarios, quienes deben ser cuidadosamente
entrenados y en el momento del contacto protegerse con anteojos, guantes y
delantales resistentes a los cidos y lcalis. Se debe contar tambin con una
abundante provisin de agua corriente.
Una vez realizado el tratamiento de acuerdo al tipo de semilla , es indispensable,
un lavado de las mismas con abundante agua para eliminar trazas del cido.

Escarificacin mecnica. Su efectividad depende de que se retire la mayor


parte de la cubierta externa, mediante productos abrasivos tales como lijas , o
una rueda abrasiva o por el rompimiento total de la cubierta de la semilla.

Un vaso mecnico pequeo alineado con papel de lija o llenado con arena o
grava puede ser ms prctico para cantidades ms grandes de la semilla . La
cantidad de semillas en el vaso debe ser suficiente permitir que todas las semillas
sean desgastadas.
Figura 7. Escarificacin mecnica

Tomado de viveros . 2.002


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Las mquinas comercialmente diseadas estn tambin disponibles para


escarificar cantidades grandes de semilla. Estos escarificadores desgastan o
marcan con una cicatriz las semillas entre dos superficies de caucho que
impulsan generalmente las semillas contra superficies speras tales como papel
de lija. La severidad de la abrasin o del impacto se debe controlar para prevenir
dao a la semilla .

Dentro de los tratamientos qumicos se encuentran:

Fermentacin e intemperizacin. La descomposicin de las cubiertas, sobre


todo si son carnosas, se puede lograr poniendo las semillas en agua o en la
pulpa del fruto y dejndolas fermentar durante varios das.

Aceptores de electrones. Compuestos como el azul de metileno, cloruro de


trifeniltetrazolio, nitratos, nitritos y perxido de hidrgeno eliminan la dormicin
leve, ya que actan como reoxidantes alternos del NADPH, o bien inhiben la
catalasa. Las sustancias ms usadas son los nitratos y el agua oxigenada, su
efecto estimulante se limita, principalmente a la dormicin leve.

Entre los nitratos se usa principalmente el de potasio y, con menor frecuencia, el


de amonio.

Hormonas. Las sustancias ms empleadas son las giberelinas, las


citoquininas-Kinetina, benziladenina y 6-aminopurina, el etileno y la fucocinina.

Inhibidores de la respiracin. Unicamente tienen efecto sobre la dormicin


leve. Son tiles los inhibidores de la gluclisis, el ciclo de Krebs y la
fosforilacin oxidativa; los productos terminales de la fermentacin tambin
actan como inhibidores de la respiracin al activar la va de las pentosas
fosfatadas

La estratificacin
Corresponde a otro mtodo para superar la latencia y consiste en estimular al
embrin para que pueda desarrollarse utilizando principalmente el manejo del
suelo y de la temperatura.

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Estratificacin por bajas temperaturas. Consiste en ubicar semillas en un


sustrato , principalmente arena , manteniendo una temperatura alrededor de 4
C, durante un tiempo alrededor de uno a cuatro meses .

Estratificacin clida. Este tratamiento consiste en ubicar semillas en un


sustrato sin destruir las cubiertas, el sustrato empleado debe estar esterilizado
para evitar infecciones, manteniendo el sustrato a una temperatura ptima
para el crecimiento de los embriones que depende de la especie manejada.

Combinacin de estratificacin clida con enfriamiento en hmedo. En


general, es una metodologa similar a la anterior, pero posteriormente es
seguido de un perodo de enfriamiento en hmedo en un tiempo igual al de la
etapa de estratificacin clida.

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CAPITULO 2: ANLISIS DE SEMILLAS


Leccin 6. Vigor
El vigor hace relacin a la capacidad de una semilla par producir una germinacin
rpida y uniforme, as como un rpido crecimiento de la planta bajo condiciones
generales de campo.
La semilla como elemento vivo nunca est completamente inactiva, aunque la
actividad dentro de ella puede ser tan baja que la mayora de las veces es
imposible medirla. As, puede mantenerse por aos en el suelo si sta no
encuentra condiciones favorables para germinar.
Las semillas poseen un mecanismo de proteccin marcadamente complejo y
efectivo que las ayuda a asegurar su supervivencia. Tienen un mecanismo de
accin retardada "un reloj natural" el cual asegura que permanezcan inactivas o
dormantes en tiempos difciles, hasta que se presenta otro momento ms
adecuado lo suficientemente largo y favorable que asegure el establecimiento de
las plantas.
El simple hecho de que una semilla absorbe agua, se hinche y desarrolle una
pequea raz, no garantiza que sta contine creciendo y llegue a formar una
planta adulta.
Estas pueden solamente tener vigor suficiente para formar una raz, o puede
empezar a formar un rebrote y despus morir. Puede incluso crecer y formar una
planta, pero que sea tan dbil que no pueda establecerse por s sola en el suelo y
continuar desarrollndose normalmente en contra de factores ambientales
adversos.
Vigor de semillas y deterioro estn fisiolgicamente ligados, son aspectos
inversamente proporcionales de la calidad de semillas. El deterioro tiene una
connotacin negativa, mientras que el vigor tiene una connotacin positiva; el vigor
disminuye a medida que el deterioro aumenta. Deterioro es el proceso de
envejecimiento y muerte de las semillas, en cuanto vigor es el principal
componente de la calidad afectado por el proceso de deterioro.
Como un primer acercamiento a la determinacin del vigor de las semillas se
utilizan las pruebas de germinacin en las cuales se puede evaluar:

Vigor de germinacin, entendido como la obtencin de la germinacin de una


planta vigorosa y sana en el menor tiempo posible.
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Poder de germinacin, entendida como el vigor de germinacin cuando por lo


menos el 50% de las semillas hallan germinado.

Capacidad de germinacin, entendida como la sumatoria del vigor y el poder


de germinacin.

A pesar de que la prueba de germinacin es la medida aceptada del efecto final


del deterioro de las semillas, o sea, prdida de la capacidad de germinar.
Es importante entender que la prueba de germinacin no es una medida adecuada
del potencial de una semilla para la produccin de plantas, ni para que se tenga
una total apreciacin de su potencial , ni de su vigor.
Las pruebas de germinacin buscan la optimizacin y patronizacin de las
condiciones de la prueba de manera que se puedan optimizar los resultados.
Pero, estas son realizadas en un medio esencialmente artificial y esterilizado, con
un grado adecuado de humedad , en germinadores, ajustados a una temperatura
optima para la especie de semilla probada, por un tiempo largo lo suficiente para
permitir que tanto semillas "dbiles" como semillas vigorosas germinen y
desarrollen plntulas normales.
Adems, los principios de optimizacin y maximizacin de las pruebas de
germinacin son relativamente poco sensibles para la determinacin de plntulas
normales y anormales, apenas las plntulas muy enfermas y deformadas son
normalmente excluidas del porcentaje de germinacin.
Plntulas dbiles, semidefectuosas y robustas tienen el mismo peso en el
porcentaje de germinacin, que es un parmetro de la calidad de semilla
cuantitativo y no cualitativo , pues , una semilla o germina o no germina; ella es o
100% germinable o 0% (muerta o anormal).
Este porcentaje de germinacin es relativamente vlido para el momento que se
realiza la prueba de germinacin, pero, el proceso de deterioro de la semilla y su
relacin con la germinacin, contina y por y tanto sigue ocurriendo la prdida de
la germinacin, as, la naturaleza progresiva del deterioro y sus efectos menores
no son considerados sino hasta el momento de la realizacin de la prueba.

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Leccin 7. Pruebas de vigor

Las pruebas de vigor proporcionan una informacin adicional a la brindada por la


Prueba de Germinacin Estndar.
Desde que el vigor es un atributo solamente de semillas capaces de germinar, las
pruebas de vigor son designados para evaluar uno, varios o la mayora de los
efectos menores del deterioro sobre el potencial de desempeo de las semillas.
Las pruebas de vigor desde un punto de vista relativo al desarrollo, pueden ser
agrupadas dentro de tres categoras :

1) Pruebas que evalan daos de los sistemas bsicos biolgicos/bioqumicos: por


ejemplo, la degradacin de las membranas como reflejada en la conductividad,
resistencia, turbidez y acidez del agua de imbibicin de las semillas, tasa de
respiracin y coeficiente respiratorio, la reaccin de tetrazolio y la actividad de
otros sistemas de enzimas. Evidencia valiosa de daos en las membranas y
cambios en la permeabilidad puede ser obtenida a partir de la observacin directa
de la profundidad de coloracin en las pruebas con tetrazolio de algunos tipos de
semillas.
2) Pruebas que miden la velocidad e intensidad de las actividades y respuestas
fisiolgicas: por ejemplo, velocidad de germinacin y de crecimiento y desarrollo
de plntulas, peso verde y/o seco de plntulas.
3) Pruebas que miden cambios en la resistencia o tolerancia a condiciones de
estrs: por ejemplo, la prueba de fro para semillas de maz (fro, suelos
hmedos), pruebas de germinacin bajo fro para algodn (temperaturas fras subptimas), pruebas de envejecimiento acelerado y deterioro controlada (alta
temperatura, contenido de agua de la semilla y/o humedad), pruebas de arena o
ladrillo molido (alto impedimento mecnico).
Estas a su vez pueden separarse por pruebas directas y pruebas indirectas
Pruebas directas

Son aquellos que simulan las adversidades que la semilla puede encontrar en el
campo , procurando establecer bajo condiciones controladas de laboratorio los
factores desfavorables responsables por la reduccin de la emergencia en el
campo
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Como ejemplo se puede citar la prueba del fro, las pruebas directas,
son difciles de estandarizar entre laboratorios y tienden a dar
resultados ms variables que las pruebas de g erminacin.
Prueba del Fro
El fundamento terico de esta prueba es que la condicin fra y
hmeda del suelo retarda la act ividad tanto de la semilla como de los
microorganismos del suelo. Sin embargo, como las semillas est n en
desventajas relativament e mayor, sern ms susceptibles al ataque
de microorganismos causantes de pudricin. Las semillas vigorosas
producirn plntulas capaces de resistir el ataque de estos
microorganismos en mayor grado que las semillas dbiles.
Pruebas Indirectas

Los tests indirectos son aquellos que miden determinados atributos fisiologicos de
la semillas que posteriormente se correlaciona con su desempeo en el
campo.
Dentro de estas pruebas indirectas de vigor sobresalen:
1.

Pruebas bioqumicas: prueba de respiracin, test de GADA, prueba del


tetrazolio, prueba de la conductividad elctrica.

2.

Pruebas
fisiolgicas: primero conteo de germinacin, velocidad de
germinacin.

3.

Pruebas de resistencia: germinacin a baja temperatura, inmersin en agua


caliente.
Pruebas de Vigor recomendadas

Prueba de Envejecimiento Acelerado


Se basa en someter a las semillas a un estrs antes de conducir el ensayo
germinacin tradicional. Se utilizan condiciones totalmente opuestas a un buen
almacenamiento, esto es alta humedad relativa cercana al 100% y alta
temperatura, durante un perodo de tiempo de varias horas.

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Los resultados del ensayo de envejecimiento acelerado se comparan con los del
ensayo de germinacin estndar y en la medida que estos valores sean elevados
y estn prximos podemos decir que el lote posee una buena condicin de vigor.
Por otro lado cuando los valores de ambas pruebas se separen
considerablemente el lote es considerado como de bajo vigor.
Conductividad Elctrica

El fundamento de esta prueba es la mayor o menor liberacin de electrolitos


(iones, azucares, aminocidos, etc.) al medio de imbibicin por parte de las
semillas de acuerdo a la condicin fisiolgica de las mismas.
Despus de la madurez fisiolgica, la semilla presenta una condicin de bajo
contenido de agua, la cual es variable en funcin de las condiciones ambientales,
principalmente la humedad del aire.

Luego con la prdida de humedad de la semilla, las membranas celulares sufren


un proceso de desorganizacin estructural, estando ms desorganizadas cuando
menor sea el contenido de agua de la semilla perdiendo as temporalmente su
integridad estructural
La integridad de las membranas celulares, est en funcin del grado de
alteraciones bioqumicas, de deterioro y/o daos fsicos, influyendo de manera
significativa en las caractersticas de los lixiviados que sern liberados desde la
semilla , debido a la prdida de la integridad de las membranas celulares y una
mayor permeabilidad de las mismas.
Prueba Topogrfica por Tetrazolio
Esta prueba se fundamenta en una reaccin bioqumica de coloracin mediante la
cual los tejidos vivos se tien de color rojo y los tejidos muertos permanecen sin
tincin. Se puede realizar un diagnstico acerca de la naturaleza de los daos que
existen en la semilla y a la vez se puede establecer su nivel de viabilidad y vigor.
La principal ventaja de esta prueba es la rapidez de la ejecucin y obtencin de
resultados, lo que confiere agilidad a las decisiones tomadas en el proceso
productivo.
Esta prueba es muy utilizada en la comercializacin de semillas de gramneas
forrajeras tropicales y los resultados obtenidos han comprobado su eficiencia en
estimar el potencial fisiolgico de esas semillas. A pesar de esas ventajas
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verificadas en su uso, no debe ser considerado un substituto de la prueba de


germinacin, pues sus resultados no caracterizan anormalidades y otros disturbios
de las plntulas, la presencia de microorganismos y la dormancia de semillas.

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Leccin 8. Anlisis de semillas


Para realizar ajustes en la cantidad de semilla requerida se pueden realizar
anlisis de peso de la semilla y germinacin en condiciones de campo, mientras
algunos anlisis requieren de ciertas condiciones especiales tales como balanzas
de precisin.
Anlisis de pureza
La pureza hace referencia a la mezcla normal de semillas puras con impurezas,
corno pueden ser polvo, ramitas, hojas, semillas de otras especies o en general
todo aquello que no sea la semilla pura, denominado material inerte; la pureza
normalmente se expresa en porcentaje.
La metodologa utilizada en la determinacin del porcentaje de pureza, es como
sigue:
Se toman dos muestras (en total unas 2.500 semillas, si el tamao lo permite) para
evaluarlas independientemente y establecer su promedio; cada muestra es
sometida a un proceso de pesado y seleccin manual de la semilla y las
impurezas; una vez se tienen los dos grupos. se pesan por aparte los
componentes (semilla pura e impurezas) y se procede a calcular el porcentaje de
pureza mediante la siguiente frmula:
% de pureza = peso de la semilla pura x 100
peso total
A manera de ejemplo:
repeticin

peso semilla
pura

peso total

13,678 g

16,789 g

14,632 g

16,532 g

total

28,31 g

33.321 g

% de pureza = 28,31 x 100


33,321
% de pureza = 84,96 %

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Anlisis de peso
Este anlisis muestra el peso de la semilla, usualmente expresado en relacin con
un millar de unidades puras; para facilitar el trabajo, se toman semillas puras , y se
agrupan en 8 muestras o repeticiones, de cien (100) semillas cada una.
Se procede a pesar por separado cada muestra, tomando los valores de cada
grupo para obtener la sumatoria y dividiendo luego por el nmero de muestras
para hallar el promedio, cifra representativa de todo el lote. Una vez hallado el
peso promedio de 100 unidades, se calcula para 1.000, as:
Repeticin

peso en gramos de 100


semillas

2,684

2,605

2,599

2,789

2,568

2,876

2,556

2,345

total

21,022

Peso Promedio de 100 semillas 21,022/8 = 2,62775 g


Peso promedio de 1.000 semillas = 26,2775 g
Anlisis de Germinacin
La muestra requerida para el anlisis de germinacin, es de un mnimo de 400
semillas, evaluadas en 4 repeticiones de 100 unidades cada una.
Las rplicas se siembran en un sustrato adecuado. que puede ser tierra, arena,
papeles absorbentes o algodn; se distribuyen los 100 gramos de cada ensayo en
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forma uniforme, controlando hasta donde sea posible, la temperatura (cuyo nivel,
va de acuerdo al hbitat de cada especie, la luz (que haya suficiente luz,
preferiblemente luz del da) y la humedad (proporcionando un riego diario, bien
dosificado, es decir que las semillas permanezcan hmedas por lo menos hasta el
inicio de la germinacin).
A cada repeticin se le evala el porcentaje de germinacin mediante la siguiente
frmula:
% germinacin =

semillas germinadas

x 100

semillas sembradas
repeticin semilla
sembrada

semilla
germinada

% de
germinacin

100

82

82

100

78

78

100

80

80

100

71

71

total

400

311

% germinacin =

311

x 100

400
% germinacin = 77,75%
Germinacin por peso
Cuando el tamao de la semillas muy pequeo, es ms complejo separar las
semillas de las impurezas, en este caso la evaluacin se hace de la siguiente
manera: se toman 4 rplicas de un gramo cada una con semillas e impurezas y se
siembran.
Cuando ocurre la germinacin, se hace un conteo de las semillas germinadas en
cada rplica y se calcula el promedio para el ensayo. El resultado se expresa en
trminos de plntulas germinadas por unidad de peso, as:
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repeticin

semilla
sembrada

nmero de
semillas
germinadas

1g

25

1g

32

1g

28

1g

22

total

4g

107

Promedio de germinacin = 107/ 4 g


Promedio de germinacin = 26,75 semillas por gramo
Por tanto para 1.000 g de semilla germinarn 26.750 semillas
Valor real
El valor real relaciona la pureza de la semilla con el porcentaje de germinacin;
tiene un uso muy extendido en el sector agrcola y se expresa con la siguiente
frmula:
Valor real = % pureza x % germinacin
100
Ejemplo:
% de germinacin

96%

% de pureza

85%
Valor real =

85% x 96%
100

Valor real = 81,6 % esto es, el 81,6% de las semillas pueden germinar.

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Leccin 9. Ejercicio de aplicacin.


La densidad de plantas de un cultivo es de 25.000 plantas /Ha y se sabe que
1000 semillas tienen un peso promedio de 48 g, con una pureza del 96% y un
porcentaje de germinacin del 89%.
Determinar los requerimientos de semilla, conociendo adems que se har
semillero para luego transplantar al sitio definitivo, por lo que se estima tener un
10% ms de plantas

Como primer lugar calcularemos el valor real as:

Valor real =

89% x 96%
100

Valor real = 85,44%


Esto nos indica que por cada 100 semillas sembradas 85,44 germinarn
adecuadamente, entonces para asegurar que 100 semillas germinen , tendremos:
Semillas
100
X

germinacin
85,44
100

X= 100 x 100/ 85,44 = 117,04 semillas

Para obtener 100 semillas germinadas requiero de sembrar 117,04 semillas, ahora
cono se requieren 25.000 plantas/ Ha incrementando un 10% ms requeriremos
la germinacin de :
25.000 + 25.000 x 10 = 27.500 semillas
100

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Para el clculo de semillas totales requeridas para asegurar un 100% de


germinacin, tendremos:
Semillas germinadas

semillas sembradas

100
117,04
27.500
x
X = 27.500 x 117,04/ 100= 32.186 semillas
Ahora teniendo en cuenta que el peso promedio de 1000 semillas es de 48 g,
para 32.186 semillas requerimos de :

Semillas

gramos

1000
32.186

48
x

x= 32.186 x 48/ 1000 = 1.544,9 g 1.550 g de semilla

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Leccin 10. Envigoramiento


Existen algunos mtodos que pueden recuperar o aumentar el vigor de una
semilla, como mtodos de envigoramiento sobresalen:

El pre-remojo con secamiento lento, consiste en remojar la semilla en agua ,


para posteriormente permitir el secado de la semilla a condiciones ambientales
bajo sombra

El tratamiento con sustancias qumicas en solucin tales como cido brico,


cido giberelico, nitrato de potasio y cloruro de sodio.

Fermentacin de semillas en su propio jugo, fermentndose por varios das


muy til para semillas de hortalizas.

Acin de un campo magntico, ubicando el micrpilo en contacto directo con


un campo magntico.

Peletizacin de la semilla, realizando el recubrimiento de la semilla con


micronutrientes.

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CAPITULO 3: LOS VIVEROS

INTRODUCCIN
Independientemente del sistema de propagacin los primeros das de vida de la
nueva planta son los ms crticos para su supervivencia. Con el propsito de
lograr que un mayor nmero de plantas sobreviva a esta etapa a fin de que las
plantas puedan ser producidas rpida, eficiente y econmicamente se utilizan
instalaciones especiales denominados viveros en las que se modifican las
condiciones ambientales y se proporcionan las condiciones de crecimiento ms
favorables para que las nuevas plantas continen su desarrollo.
Dependiendo de su finalidad, los viveros se pueden clasificar como temporales o
permanentes.

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Leccin 11. Tipos de viveros y criterios para su establecimiento.


Vivero temporal.
Se establece en reas muy cercanos a las zonas donde se realizar la plantacin,
Generalmente se ubican en reas relativamente pequeas y se utilizan por
periodos cortos de tiempo o en forma intermitente, buscando que la produccin
coincida con la temporada de lluvias. Para su funcionamiento se requiere poca
infraestructura, generalmente se realiza a cielo abierto y la inversin es baja. Su
desventaja radica en que, pueden estar situados en reas de difcil acceso, no son
fciles de vigilar y por lo tanto la produccin queda ms expuesta a daos por
animales u otros factores.
Vivero permanente.
Es la extensin de terreno dedicado a la obtencin de plantas con diferentes fines
(reforestacin, frutales, flores, etc.), ya sea en reas rurales o centros urbanos. Su
instalacin requiere una inversin mayor en equipo, mano de obra y extensin del
terreno, y debe contar con vas de acceso que permitan satisfacer oportunamente
la demanda de plantas.
Criterios para el establecimiento de un vivero
La mala eleccin del sitio donde se establece el vivero repercute directamente en
una baja calidad de la produccin de plntulas, lo cual a la larga se reflejar en
una alta mortalidad en la plantacin. Por ello es fundamental la seleccin del sitio
donde se establecer el vivero. Las condiciones del sitio son ms determinantes
cuando la produccin se obtiene a raz desnuda (por camas de crecimiento).
Se pueden considerar y tener en cuenta los siguientes aspectos:

Los viveros deben estar localizados en reas con una buena iluminacin
natural, tanto en el transcurso del da como durante toda la estacin de
crecimiento, as que los viveros debern estar ubicados donde reciban total
radiacin solar durante casi todo el da. Cualquier cantidad de sombra puede
reducir la productividad y aumentar los costos, principalmente si se requiere
proporcionar energa lumnica artificial .Esta situacin se vuelve ms crtica en
los lugares donde existen condiciones permanentes de nubosidad.

De la orientacin del terreno y su topografa, al igual que la textura del suelo,


depende en gran parte el buen drenaje del vivero. Para el caso de suelos de
textura fina la pendiente deber ser suave (de 2 a 3%) y en el caso de suelos
arenosos y profundos se recomienda nivelar el terreno.
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La textura del suelo es muy importante en el cultivo de plantas a raz desnuda,


ya que adems de regular el drenaje y la erosin deber facilitar la extraccin
de las plntulas y promover el crecimiento vegetativo. Un suelo bien drenado
asegura su aireacin, por lo que es conveniente verificar que no existan capas
endurecidas en los primeros centmetros del suelo.

Otro aspecto importante se relaciona con las caractersticas del suelo tales
como la acidez del suelo, el contenido de materia orgnica y su disponibilidad
de nutrientes.

Despus de la luz solar, un suministro confiable de agua de buena calidad


resulta ser el factor ms importante para la seleccin del sitio El abastecimiento
de agua y su calidad para el riego son fundamentales teniendo en cuenta su
suministro abundante y constante y su calidad determinada por dos factores:
las partculas suspendidas(sedimentos o plagas) y por las sales disueltas. Los
sedimentos tales como arcillas, cieno y partculas finas de arena, debern ser
filtradas en forma mecnica o removidas mediante tratamientos qumicos ya
que son abrasivos y pueden desgastar rpidamente el equipo como bombas,
inyectores de fertilizante y aspersores.
Las plagas pueden tambin estar suspendidas en el agua. El agua de fuentes
superficiales, especialmente de estanques en reas agrcolas puede contener
semillas de malezas y esporas de hongos, algas, musgos y hepticas. Filtros
especialmente diseados pueden remover estos elementos pero el costo de los
filtros se incrementa a medida que el tamao de las partculas es ms pequeo.
Las sales disueltas de iones de diferentes minerales pueden estar disueltos en
al agua a utilizar para el riego, tales como el sodio (Na+) y el cloro (Cl-) o
algunos cationes, tales como los iones de calcio (Ca2+) y de magnesio (Mg2+)
que se encuentran presentes en las aguas duras, pueden ser problemticos o
benficos, dependiendo de sus concentraciones.

La superficie seleccionada para el establecimiento del vivero, deber ser lo


suficientemente grande para contener las reas de crecimiento y las diferentes
instalaciones que se requieran, as mismo la forma del terreno puede ser ms
importante que la misma superficie, dado que los invernaderos tienden a ser
instalaciones elongadas. En forma adicional a las necesidades inmediatas, se
deber evaluar los sitios potenciales para el establecimiento del vivero en
cuanto a superficie, pensando que existan necesidades futuras de ampliacin.

Las restricciones ecolgicas y polticas que no eran considerados hasta hace


algunos aos, han llegado a ser uno de los criterios de evaluacin ms crticos,
donde se debe articular la legislacin y normatividad sobre el uso del suelo ,
el uso de plaguicidas, as como la potencial contaminacin del suelo y aguas

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subterrneas como un elemento fundamental para el establecimiento de un


vivero.
Como criterios secundarios podemos considerar:

El sitio para el futuro vivero debe ser abierto y protegido, con un clima lo ms
homogneo posible, donde no se tengan problemas de temperaturas extremas
o fuertes vientos, pero si donde exista un grado de viento moderado para la
ventilacin durante las pocas calurosas.

Cuando el viento es fuerte, puede ser necesario, que ste posea suficientes
abrigos, que restrinjan la accin del viento; en caso de que no existan, se deben
planificar cortinas rompevientos, preferiblemente con rboles de la regin.,
ubicadas a una distancia mnima de 15 metros al vivero evitar el sombreado
excesivo, que pueda afectar el desarrollo de las plantas .

Es muy importante conocer qu tipo de plantas se encuentran adaptadas a las


condiciones climatolgicas que prevalecen en la zona donde el vivero se va a
establecer. Asimismo, es necesario contar con los registros climticos que
indiquen las pocas de riesgo, como las heladas, las sequas y la cantidad y
distribucin del periodo de lluvias.

La topografa general de un sitio potencial es importante por razones


econmicas y biolgicas. Un sitio relativamente plano reduce el costo de
nivelacin del terreno durante la construccin e incrementa la facilidad para el
movimiento de equipo, materias primas, materiales y vehculos despus de que
el vivero ha sido establecido .

La distancia entre la ubicacin potencial del vivero y los centros de entrega


tambin es un factor que debe ser considerado.

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Leccin 12. Construccin de un vivero


Una vez que el sitio ha sido seleccionado, el siguiente paso para desarrollar el
vivero es considerar en que grado es necesario realizar modificaciones
ambientales que permitan la produccin de un cultivo con un alto grado de
calidad, dentro de un tiempo determinado.
El ambiente de propagacin
Las condiciones de un vivero que produce bajo cubierta han sido modificadas
radicalmente del ambiente natural, por lo cual el ambiente de propagacin, no se
limita a un tipo de estructura en particular o a un sistema de produccin, sino a la
combinacin de estas dos partes que estn relacionadas entre s y donde
participan factores atmosfricos, edficos y biticos.
Factores atmosfricos.
Los principales factores del ambiente atmosfrico son: luz, temperatura, humedad
y dixido de carbono Los factores ambientales son fuertemente afectados por la
ubicacin geogrfica y por el tipo de instalaciones del vivero, por lo cual, debern
tomarse muy en cuenta al momento de la seleccin del sitio y de la construccin
de las estructuras para la propagacin.
El clima del sitio determinar qu tipo de ambiente de propagacin se requerir. Si
tanto el ambiente como el tiempo de produccin no son limitantes importantes,
entonces el vivero puede establecerse con instalaciones a cielo abierto o con una
estructura de propagacin de bajo costo.
Por otra parte, si el clima es adverso y la planta requiere ser producida en un
tiempo muy corto, entonces ser necesario establecer un invernadero
completamente automatizado.
El vivero que logra acoplar los requerimientos biolgicos del cultivo a las
condiciones ambientales del sitio, podr ser la opcin ms econmica, por lo cual
al anlisis del sitio donde se ubicar el vivero, es vital antes de que sea
seleccionado el ambiente de propagacin.
Factores edficos.
Los dos factores principales del ambiente edfico son el agua y los nutrientes
minerales En los viveros, los factores edficos son independientes de la ubicacin
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del vivero y pueden ser completamente controlados por el tipo de contenedor, el


sustrato y las prcticas culturales.
Factores biticos.
Tanto los componentes atmosfricos como edficos contienen otros organismos
que pueden afectar el crecimiento de la planta. Una de las primeras ventajas del
cultivo de produccin en invernadero, es que se cuenta con un mayor control
sobre los factores biolgicos y puede realizarse un manejo sobre las plagas y
enfermedades.
Un buen diseo de vivero en contenedor, reflejar las condiciones ambientales en
el sitio y los requerimientos biolgicos de un cultivo especfico. Un ambiente de
propagacin que es ideal para un grupo de plantas, puede no serlo para otro
desde el punto de vista econmico o biolgico.
Sin embargo, muchos viveros producen una gran cantidad de diferentes especies,
por lo cual es muy comn que tengan que disearse ambientes de propagacin
para satisfacer los requerimientos de varios grupos de cultivos.
Tabla 3 . Criterios a considerar para el establecimiento de un vivero.

Tomado de Manual de viveros. Depto. de Agricultura de Estados Unidos. 1.995

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Leccin 13. Tipos de Estructuras para la Propagacin


Los viveros en contenedor pueden ser clasificados por la cantidad relativa de
modificacin ambiental en: ambientes totalmente controlados, ambientes
semicontrolados y ambientes mnimamente controlados.
Ambientes completamente controlados
Requieren de una estructura de propagacin que contiene todo el equipo
necesario para el control ambiental, a efecto de mantener en niveles ptimos los
factores limitantes potenciales
Operativamente, un ambiente de propagacin completamente controlado tiene
muchos atributos biolgicos positivos stos son adecuados para casi cualquier
tipo de clima, y debido al alto grado de control ambiental, el riesgo por perder un
cultivo debido a climas severos es muy bajo.
Sin embargo, este tipo de estructuras son las ms caras de construir y operar,
debido a los altos requerimientos de energa.
Los invernaderos se incluyen en esta categora siendo el mtodo tradicional para
la produccin de plantas pudiendo estar equipados completamente para controlar
el ambiente de propagacin. Los invernaderos utilizan radiacin solar, la cual es
atrapada dentro de una estructura transparente para convertirla en calor (el
efecto invernadero).
El inconveniente de la cubierta transparente es que los invernaderos tienen
inherentemente un bajo nivel de aislamiento y requieren de equipos tanto para un
buen calentamiento, como enfriamiento, a efecto de mantener un buen control de
la temperatura.
Donde generadores de dixido de carbono pueden ser utilizados para promover
tasas de rpido crecimiento y sistemas de irrigacin con inyectores para la
fertilizacin, pueden proporcionar cantidades ptimas de agua y todos los
principales nutrientes esenciales.
Ambientes semicontrolados
Esta categora incluye una gran variedad de estructuras de crecimiento que, son
diseadas para controlar slo ciertos aspectos del ambiente Algunos de estos
tipos de estructuras, incluyen las de malla media sombra y los tneles, que son
comnmente utilizados para el endurecimiento y el almacenamiento de plantas en
forma intermitente.
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Desde un punto de vista econmico, los ambientes semicontrolados son baratos


en cuanto a su construccin y operacin, aunque existe una variacin significativa
entre los diferentes tipos de estructuras.
Se incluyen:
Los invernaderos de paredes mviles. Son una modificacin de los invernaderos
tradicionales. Su caracterstica principal es que cuentan con un techo
permanente y transparente, con paredes mviles que pueden ser enrolladas o
abiertas hacia el lado opuesto .
Este diseo permite una flexibilidad considerable en el control del ambiente, en el
momento que se requiera, las paredes laterales son bajadas para mantener una
temperatura ideal.
Cuando las condiciones ambientales son favorables, las paredes pueden ser
levantadas para permitir la ventilacin natural eliminando la necesidad de contar
con un sistema de enfriamiento.
Adems de esta clase de modificaciones, a estos invernaderos se le puede
integrar algunos o todos los equipos de control ambiental disponibles para los
invernaderos tradicionales, y as lograr modificar la mayora de los factores
limitantes.
Adems de la casa sombra que comnmente se encuentran equipadas con
sistemas de irrigacin y fertilizacin. Aunque tradicionalmente han sido
utilizadas para el endurecimiento de la planta o como reas de mantenimiento,
Las casas sombra son utilizadas en los viveros para la propagacin de ciertas
especies, as como para finalizar la produccin de cultivos con diferentes
regmenes.
Generalmente, las plantas o estacas son desarrolladas en la casa sombra en sus
primeras fases para completar su perodo de crecimiento en el invernadero,
.En climas fros, este tipo de estructura es utilizada para el mantenimiento de la
produccin .este tipo de estructuras con techos permanentes y paredes laterales
mviles y con cubierta polisombra puede lograr los objetivos culturales y adems,
excluir insectos y otro tipo de plagas del rea de crecimiento.
La seleccin del material para la sombra es importante en cuanto a su color y
porcentaje de sombreamiento.

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Ambientes mnimamente controlados


Que normalmente son estructuras a cielo abierto fueron desarrolladas para
producir plantas donde las condiciones ambientales no son limitantes., se debe
contar con un buen sistema de drenaje y un adecuado control de arvenses (que
puede incluir el uso de una cubierta en el sustrato utilizado) por lo general se
encuentran equipadas con lneas de riego semifijas por las cuales es posible
aplicar el riego y la fertilizacin.
El material vegetal puede estar ubicado en camas, plataformas o directamente en
el suelo.
Aunque las estructuras a cielo abierto son las ms econmicas para la produccin
de plantas, las tasas de crecimiento son bajas. Los daos climticos tales como
heladas o lluvias torrenciales son una constante preocupacin, pues el riesgo de
perder el cultivo es el ms alto de entre todos los diferentes ambientes de
propagacin .
Figura 8. Tipos de estructuras para la propagacin de plantas

Tomado de Manual de viveros. Depto. de Agricultura de Estados Unidos. 1.995

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Leccin 14. Sistemas de siembra en los viveros


Antes de iniciar la siembra de semillas en el vivero es necesario tener claro cul es
el mtodo de cultivo que se usar, pues su eleccin est directamente relacionada
con su desarrollo y manejo, tanto en el vivero como en los sitios de plantacin.
(ver tabla 4).
Para la siembra de material vegetal se requiere un sustrato que debe cumplir con
las siguientes condiciones:
- El sustrato debe ser lo suficientemente firme y denso para mantener el material
vegetal en su sitio durante el enrace.
- Debe retener la suficiente humedad para que no sea necesario regarlo con
mucha frecuencia.
- Debe ser lo suficientemente poroso, de modo que se escurra el exceso de agua
y permita una aireacin adecuada.
- Debe estar libre de malezas, nemtodos y otros patgenos.
- No debe tener un nivel excesivo de salinidad.
- Debe poderse esterilizar con vapor o qumicos sin que sufra efectos nocivos.
- Debe existir una adecuada provisin de nutrientes para todo el perodo de
crecimiento, pudiendo suplirse con fertilizantes de lenta liberacin.
Normalmente ningn sustrato rene estas condiciones en su totalidad por lo tanto
se utilizan sustratos en mezcla compuestos que incluyen arena gruesa ,perlita,
escoria o grava fina, para mejorar la capacidad de infiltracin ; turba, vermiculita ,
humus u otros materiales como fuente de nutrientes y de retencin de humedad .
Los mtodos de cultivo en viveros se dividen en: cultivo a raz desnuda, en camas
de crecimiento
o germinadores y en envases de crecimiento (utilizando
recipientes de gran variedad de materiales y dimensiones).
Se pueden iniciar por medio de la siembra directa de las semillas u obteniendo las
plntulas por medio de almcigos (semilleros), para posteriormente trasplantarlas.

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Tabla4. Comparacin entre el sistema de germinador y raz desnuda


Aspecto

Ventaja o desventaja

Caracterstica

Seleccin del sitio de Menos exigente que raz


produccin de plntulas
desnuda

Desarrollo de plantas
independiente
de
la
calidad del subsuelo

Tiempo de cultivo

Menor tiempo

Permite un mayor uso


continuo del germinador

Crisis de trasplante

Menos severa

Menor dao del sistema


radicular

Control de las condiciones Mejor control


de crecimiento

Se pueden normalizar y
optimizar las condiciones
de crecimiento

Tiempo de permanencia Menor


en el vivero

Por
presentar
crecimiento inicial

Capacidad para soportar Mayor


estrs por agua

Se
favorece
supervivencia
y
establecimiento

Costos de produccin

Por requerir el uso de


envases , una etapa de
adaptacin y su posterior
movilizacin
al
sitio
definitivo

Mayores

Cuidado y preparacin Mayor


del sitio de plantacin

mayor

la
el

Las
plantas
a
raz
desnuda presentan una
mayor adecuacin a las
condiciones ambientales.

Germinadores
La semilla en las eras de germinacin puede sembrarse de dos maneras en lneas
o surcos o al voleo.

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Para el primer caso, con la superficie nivelada se hacen surcos de una


profundidad no superior a dos veces el tamao de la semilla, la distancia entre
lneas puede variar entre 4 a 10 cm dependiendo de la especie a sembrar .
En los surcos trazados , se distribuye la semilla de tal forma que se evite la
superposicin de las semillas.
Mientras la siembra al voleo, implica la nivelacin del suelo esparciendo la semilla
sin manejar distancias de siembra.
Figura 9. Sistema de siembra.

Tomado de viveros. 2002

Trasplante
Las semillas que han sido sembradas en los germinadores, permanecen all ,
hasta que se haga necesario su traslado al sitio definitivo o para que pueda
completar su crecimiento y desarrollo en otro sitio definido para el material vegetal.
El objeto del trasplante es disminuir la competencia que existe en la siembra;
aumentar el espacio vital entre las plantas jvenes; desarrollar el sistema
radicular, favorecer el acceso a los elementos nutritivos; formar muchas
ramificaciones radiculares, pues el crecimiento en altura est disminuido, y
posibilitar el transporte y acomodamiento en su lugar.
El trasplante se efecta rpidamente despus de la germinacin, en cuanto se
desarrollan algunas hojas o agujas. Desde cualquier punto de vista es preferible
realizarlo prematuramente, pues as se garantiza una buena recuperacin y se
elimina la posibilidad de la detencin pasajera del crecimiento (crisis del
trasplante); tambin ayuda a colocar verticalmente a la joven raz en la tierra sin
encorvarla y sin que se daen las raicillas.
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Para el proceso del trasplante , se someten las plntulas a un proceso de


endurecimiento en el cual se reduce la aplicacin de agua al germinador por tres
das y al momento del tras plante se humedece el suelo para facilitar la extraccin
de las plntulas sin daar el rea de raz , colocndolas en un balde con agua
fresca, protegindolas del calor del sol.
En climas medios y clidos se aconseja dejar las plntulas a la sombra luego del
proceso de trasplante por un tiempo cercano a las dos semanas; eliminando poco
a poco el sombro hasta que queden finalmente expuestas a las condiciones
naturales, esta labor se realiza con el propsito de que adquieren la consistencia
necesaria que permita su supervivencia en el sitio definitivo de plantacin.
Figura 10. Actividad de trasplante

Tomado de viveros .2002

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Produccin a raz desnuda


En el caso de produccin a raz desnuda , las plntulas se dejan crecer en la era
hasta cuando completen las caractersticas para ser llevadas al sitio definitivo de
plantacin.
Es conveniente aplicar una poda de raz , en el momento del trasplante al sitio
definitivo, para asegurar que no quede la raz principal doblada , lo que podr
afectar el posterior desarrollo de la planta.
Figura 11. Produccin a raz desnuda.

Tomado de Viveros . 2002

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Leccin 15. Otros aspectos para la construccin de viveros


Con base en la identificacin de la demanda de plantas y de un anlisis de
mercado, el diseador del vivero podr tener una buena idea sobre cules son las
especies y la cantidad de planta a producir en cada cultivo.
El nivel de produccin definir las dimensiones del rea de crecimiento; mientras
que los requerimientos biolgicos de las especies a producir, determinarn los
tipos de ambientes de produccin que sern necesitados.
Sin embargo, los constructores debern tener siempre en cuenta la posibilidad de
que en el futuro, los niveles de produccin o el nmero de especies consideradas
inicialmente, pueden incrementarse.
En este sentido, es importante considerar una adecuada flexibilidad durante el
establecimiento del vivero a fin de que se tenga la capacidad de responder a
oportunidades futuras de produccin.
Es posible disear un vivero de contenedores sin contar con informacin
especfica de produccin, pero en tal caso las personas con conocimientos sobre
el comportamiento del mercado, debern decidir sobre los niveles de produccin
estimados y las especies posibles de producir.
Necesidad de diferentes ambientes de produccin.
Si la produccin programada puede hacerse de manera simultnea y bajo
ambientes muy similares, puede ser conveniente la utilizacin de estructuras
grandes
Este tipo de estructuras son inherentemente menos costosas en su construccin, y
generan un costo por unidad de superficie ms eficiente.
Sus sistemas de riego y fertilizacin son simples de disear, y su costo por
calentamiento es menor, ya que su menor permetro reduce el rea de prdida de
calor., adems la cantidad de plantas afectadas por el efecto de borde ser
menor que con otros diseos.
Las estructuras de grandes dimensiones pueden ser divididas en ambientes
separados mediante una cortina mvil o puertas corredizas, aunque los sistemas
para el control ambiental deben estar diseados de acuerdo con ello.
Mientras un conjunto de pequeos ambientes de produccin pueden ser usados
para generar una gran variedad de ambientes, de acuerdo a los requerimientos
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de las especies a cultivar, adems de permitir diferentes programas de produccin


durante el ao. Si el cultivo consiste de especies con requerimientos totalmente
diferentes, entonces
es conveniente la divisin por grupos que sean
biolgicamente compatibles.
El nmero de grupos determinar a su vez la cantidad mnima de ambientes de
produccin necesarios, a menos que se tenga que producir en diferentes
momentos del ao en un sistema de produccin mltiple.
El contar con varios ambientes de produccin pequeos, tambin permite una
mayor flexibilidad en la propagacin, manejo y produccin. Desde un punto de
vista de planeacin de viveros, los ambientes pequeos son ms ventajosos
porque pueden irse agregando ms estructuras en forma paulatina, sin tener que
interrumpir la produccin y el riesgo de que el total de la produccin se dae es
bajo.
Para viveros permanentes se deben incluir en su diseo, como mnimo las
siguientes subreas:

Cercas

Se construyen con el fin de independizar el rea del vivero y restringir la entrada


de animales y/o personas que pueden afectar la produccin, a zonas especficas
del vivero ,adems facilitan las labores de vigilancia.

Eras de germinacin

Es el sitio donde se produce la germinacin de las semillas , se conoce tambin


como eras de germinacin o germinadores.
Los germinadores tienen una altura variable segn sea el material con el cual se
construyan, pudiendo ubicarse a nivel del suelo o a una mayor altura. Su longitud
es variable aunque por lo general no supera los 20 metros y un ancho que no
supera los 1,40 metros ; la separacin entre germinadores promedia es de 40 cm
y se requiere para facilitar el paso de los operarios.
En terrenos pendientes , las eras de germinacin son diseadas ajustndose a la
inclinacin del terreno, mediante variaciones en los taludes para impedir la cada
de la era y garantizar su completa nivelacin; se pueden adelantar trabajos de
adecuacin del terreno, especialmente el uso e terraplenes, aunque es un proceso
costoso.
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Figura 12. Eras de germinacin

Tomado de viveros .2002

Caminos

En el vivero deben existir caminos principales y secundarios, para la movilizacin


propia de las actividades de la produccin.
Los caminos principales, son aquellos por los cuales circulan los vehculos que
llevan materiales al vivero, principalmente tierra y los que llevan el material
producido; deben ser lo suficientemente anchos para permitir el paso de vehculos
pesados corno volquetas y estar ubicados equidistante de las eras para facilitar las
labores de carga.
Los caminos secundarios son los que se encuentran entre las eras y sirven para el
paso de tractores, carretillas y operarios. El adecuado diseo de las vas
interiores, influye en la eficiencia de los tiempos y movimientos de las labores
propias del vivero.

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Figura 13. Caminos en el vivero

Tomado de viveros. 2002

Sistema de riego

El sistema de riego en el vivero es de dos clases: El utilizado para las eras de


propagacin, que normalmente es un sistema de microaspersin y el sistema de
riego para las eras de crecimiento y produccin de gota ms gruesa, donde se
emplea usualmente el sistema de aspersin.

Bodegas

Para el almacenamiento de abonos, fungicidas, insecticidas, herbicidas, semillas y


dems insumos y para el almacenamiento de equipos y herramientas

Oficina de administracin

Para las labores administrativas del vivero como planificacin de la produccin,


control de personal, registro de costos, ventas, etc.

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ACTIVIDADES DE AUTOEVALUACIN DE LA UNIDAD

Sembrar diez (10) semillas de maz por matera, sembradas a una profundidad de
3cm en cinco (cinco) materas plsticas, utilizando como sustrato arena que debe
permanecer hmeda durante el ensayo.
En el cuadro 1 debe registrarse el porcentaje de germinacin por matera y por da,
donde debe realizar un grfico das porcentaje de germinacin por matera,
mientras en el cuadro 2 debe registrar la informacin solicitada.
Con la informacin obtenida del cuadro 2 de las cinco materas, calcule el
promedio y la desviacin estndar para cada caso.
Cuadro1.
MATERA

% de
No de das donde No de das donde ocurre la
germinacin ha germinado el germinacin de la primera
a los 10 das
50% de las
semilla
semillas

1
2
3
4
5

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Cuadro 2. (Incluir en las casillas nmero de semillas que germinan cada da).

DIAS A GERMINACION
MATERA

8 9 10

1
2
3
4
5

Con la informacin desarrollada, consolidar un informe que incluya introduccin,


objetivos, marco terico con una revisin bibliogrfica sobre la importancia de las
pruebas de germinacin en campo, vigor y poder germinativo.

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UNIDAD 2. LA PROPAGACIN ASEXUAL


CAPITULO 4. MTODOS DE PROPAGACIN ASEXUAL (INJERTOS)
Leccin 16. Generalidades de la propagacin asexual.
La reproduccin asexual o vegetativa comprende la reproduccin de partes
vegetativas de la planta original.
Para ello se utilizan tejidos vegetales que conserven la potencialidad de
multiplicacin y diferenciacin celular para generar nuevos tallos y races a partir
de estructuras meristemticas presentes en diversos rganos.
La propagacin vegetativa comprende desde procedimientos sencillos, conocidos
de tiempos inmemoriales por los campesinos de todo el mundo, hasta
procedimientos tecnolgicamente muy avanzados, basados en la tecnologa del
cultivo de tejidos vegetales.
Para asegurar el xito en los procedimientos empleados en la propagacin
vegetativa se requiere:

Conocer los procedimientos tcnicos y de manipulacin del material vegetal a


reproducir.

Conocer la estructura y forma de desarrollo de la planta.

Conocer los diferentes mtodos que pueden ser empleados en la propagacin


de una determinada especie.

Como razones para emplear la propagacin vegetativa sobresalen las siguientes:

Mantenimiento de clones

Propagacin de plantas sin semilla o que aunque presenten formacin de


semilla, estas sean poco viables o de bajo poder germinativo.

Evitar que la fase juvenil de la planta sea prolongada.

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Razones econmicas.

Un clon pude definirse como un conjunto genticamente uniforme de individuos


derivados de un individuo comn a travs del uso de la propagacin vegetativa.
En virtud de la totipotencia del tejido vegetal, es decir, de su capacidad para
formar yemas y races adventicias, casi cualquiera de los rganos de una planta
vascular tiene relacin con su propagacin vegetativa al sufrir modificaciones
anatmicas y funcionales que le permiten desarrollarse en un organismo vegetal
completo e independiente, con las mismas caractersticas genticas de la planta
progenitora.
Mutaciones
Aunque es importante precisar que dicha uniformidad gentica puede verse
afectada por la interaccin genotipo- ambiente, presentndose mutaciones
espontneas , estas mutaciones pueden darse en cambios en la estructura del
cromosoma o cambios en el nmero de cromosomas a nivel del ncleo celular o
tambin en plastos y mitocondrias que normalmente afecta el contenido de
clorofila.
Otra manifestacin mutacional permite la conformacin de quimeras, que se
componen de la mezcla de dos o ms tejidos diferentes genticamente que
crecen en forma separada pero adyacentes en la misma planta.
Las quimeras pueden ocurrir a nivel de hojas, ramas, frutos y plantas enteras,
siendo ms evidente a nivel de fruto y de yema.
Tabla 5. Tipos de mutaciones.
MUTACIONES

TIPOS

MUTACION SOMATICA

MUTACION GERMINAL
MUTACIONES CROMOSOMICAS

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Morfolgicas
Letales
Condicionales
Bioqumicas
De resistencia
Ocurre en tejido somtico
Se mantiene por propagacin
vegetativa
No transmisible sexualmente
Ocurre en clulas sexuales
Se mantiene y estabiliza por
propagacin sexual
Inversin.

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QUIMERAS

MUTACIONES GENICAS

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Duplicacin
Translocacin
Reduccin
Cambio en el nivel de ploida
Tejidos de constitucin gentica
diferente
En ciertos casos afectan nivel de
ploida
Mutacin directa. Cambios de un
nico par de nucletidos.
Mutacin de transicin: Purina
sustituida por otra purina o
pirimidina por otra pirimidina.
Mutacin de transversin :Purina
sustituida por pirimidina o al
contrario.
Mutacin por adicin o delecin de
un par o varios pares de
nucletidos: cambios de fase en
tramos del ADN.

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Leccin 17. El injerto Generalidades.


El injerto es un sistema de multiplicacin vegetativa en el cual se presenta la
unin en forma intima de una planta con parte de otra de la misma especie o de
una especie muy cercana, que despus crecern juntas y darn origen a un
individuo nuevo manifestndose como una unidad biolgica.
Las dos partes se denominan patrn o porta-injerto , que es la parte que recibe el
injerto que conserva el sistema radicular y la otra parte se denomina vstago,
pa , yema o injerto que permitir la conformacin de brotes , ramas , hojas, flores
y frutos.
Figura 14.relacin patrn-injerto .

Tomado del Manual del fruticultor moderno.1992

Esta tcnica presenta como ventajas, sobre todo para el cultivo de rboles
frutales y de ornato, que permite utilizar como base del injerto plantas ya
establecidas que sean resistentes a condiciones desfavorables , enfermedades o
plagas , utilizndolas como receptoras de injertos de plantas ms productivas y
con frutos de mejor calidad y mayor produccin.
Adems de acelerar la produccin de frutos, con posibilidades de lograr plantas
homogneas por sus caractersticas de resistencia y produccin.

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Siendo posible adems el cambio de variedades de poco valor en el mercado por


variedades de mayor aceptacin.
Las tcnicas de injerto son muy variadas ( alrededor de 150 tipos de injertos) y
existe un mtodo ptimo para cada propsito y tipo de planta.
Pero podemos hablar en forma general de dos grandes clases:
-

injerto de pa: o injerto es un pequeo trozo de rama separado de la planta


madre que contiene varias yemas en reposo y que cuando se une con el
patrn, forma la porcin superior del injerto y de la cual crecen el tallo y las
ramas, o ambos, de la planta injertada.

injerto de yema: la pa o injerto se reduce en tamao de manera que contenga


una sola yema.
Condiciones para realizar un injerto

Para tener xito en la realizacin de un injerto se requieren unas condiciones


tanto fsicas como fisiolgicas , como condiciones fsicas que influyen en la unin
del injerto se encuentran las condiciones de temperatura, humedad, y oxgeno
presentes mientras ocurre la formacin del callo .
Adems de la actividad de crecimiento del patrn y su estado fisiolgico, la forma
de realizacin del injerto, la contaminacin por patgenos y las condiciones
ambientales en la fase posterior al injerto
Mientras las condiciones fisiolgicas hacen relacin con
la afinidad y
compatibilidad patrn-injerto, que se basan en la posibilidad de que los tejidos de
ambos se unan y cumplan conjuntamente funciones fisiolgicas.
Afinidad
Siendo esencial que el cmbium o zona generatrz de la pa se coloque en
contacto estrecho con el cmbium del patrn. El cmbium es un tejido delgado de
la planta situado entre la corteza (floema) y la madera (xilema). Sus clulas son
meristemticas, esto es, capaces de dividirse y formar nuevas clulas.
El injerto no puede funcionar si las zonas generatrices del patrn y del injerto no
estn en contacto intimo, ya que posteriormente se presentar la formacin de un
callo que favorecer la unin y posterior proliferacin de tejidos nuevos, que darn
origen a nuevas clulas cambiales y permitirn el desarrollo de los haces
vasculares.

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La afinidad se presenta en mayor grado en la medida que se injerten variedades


de una misma especie, que entre especies del mismo gnero o entre gneros
distintos de la misma familia botnica.
La compatibilidad
Se puede llegar a confundir la afinidad con la compatibilidad, la afinidad
comprende el hecho de que pueda realizarse la unin patrn-injerto. Mientras la
compatibilidad se relaciona con la facultad de que la unin permanezca en forma
satisfactoria a lo largo del tiempo.
La diferencia entre injerto compatible e incompatible no est bien definida. Desde
especies que tienen una relacin estrecha y unen con facilidad, hasta otras no
relacionadas entre s incapaces de unirse, hay una graduacin intermedia de
plantas que forman una soldadura, pero con el tiempo muestran sntomas de
desarreglo en la unin o en su hbito de crecimiento.
Figura 15. Incompatibilidad patrn injerto.

Tomado del Manual del fruticultor moderno.1992

La incompatibilidad suele manifestarse con alguno de estos sntomas:

Alto porcentaje de fallos en el injerto.

Amarillamiento del follaje, a veces defoliacin y falta de crecimiento.

Muerte prematura de la planta.


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Diferencias marcadas en la tasa de crecimiento entre patrn y


variedad.

Desarrollo excesivo de la unin, arriba o debajo de ella

Ruptura por la unin del injerto.

La aparicin, de forma aislada, de uno o varios de los sntomas antes descritos no


significa necesariamente que la unin sea incompatible. Estos sntomas pueden
ser consecuencia de condiciones ambientales desfavorables, presencia de
enfermedades o malas tcnicas de injerto .
La incompatibilidades se pueden agrupar , sin importar su grado o el momento de
su aparicin en dos :

Incompatibilidad localizada: Comprende aquellos casos en los que el punto de


unin, o tejidos muy cercanos a l, presentan irregularidades en su desarrollo ,
manifestados en ndices diferentes de crecimiento en grosor entre ambas
partes ( engrosamientos o abultamientos anormales),separacin de los tejidos
y ruptura de la unin Si se utiliza un patrn intermedio se elimina esta reaccin.

En este tipo de unin con frecuencia la estructura de la unin es mecnicamente


dbil, presentando una interrupcin en la continuidad de los tejidos vasculares.

Incompatibilidad traslocada: Este tipo


de incompatibilidad produce
degeneracin del floema formndose una lnea de color pardo o una zona
necrtica en el injerto. La unin presenta dificultades al movimiento de
carbohidratos, ocurriendo una acumulacin en la parte superior y una
reduccin abajo.

Este tipo de incompatibilidad est relacionada de forma clara con diferencias


genticas entre el patrn y la variedad. Teniendo en cuenta la combinacin de
sistemas fisiolgicos, bioqumicos o anatmicos diferentes. En algunos casos se
ha demostrado que algunos compuestos que produce el patrn reaccionan con
otros de la variedad, originando otros nuevos compuestos que inhiben la actividad
del cambium. La reduccin de la concentracin de azcares que llegan a la raz
por dificultades de traslocacin a travs del injerto puede liberar en ella
compuestos txicos que producen su degeneracin y muerte.
En otros casos, en las superficies en contacto de dos especies incompatibles, se
deposita una capa de suberina a lo largo de la pared celular, formndose una capa
necrtica de espesor creciente que conduce a la desecacin de la pa o yema .

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Influencia entre las partes injertadas.


Al igual que una planta sin injertar , en la planta injertada existirn relaciones
determinantes entre la parte area y el sistema radical, es evidente que aunque
formen una unidad biolgica , sus diferencias a nivel gentico, la interrelacin
entre patrn e injerto pueden superar las influencias presentes a nivel ambiental, y
se evidencian principalmente en el vigor y la precocidad. Y siendo ms evidentes
las influencias del patrn sobre la variedad injertada .(Ver tabla 6)
Tanto el patrn como la copa mantienen individualmente, a travs de toda su vida,
su carga gentica original; de manera que el fruto producido por una planta
injertada tendr, fundamentalmente, las caractersticas propias de la especie y
cultivar correspondiente a la planta madre de la cual se extrajeron las yemas, al
margen del patrn sobre el cual se haya realizado la injertacin. Es decir, no existe
mezcla de caractersticas de los frutos del patrn y del injerto. Sin embargo,
existen influencias recprocas que pueden alterar la manifestacin de algunos
caracteres originales de una u otra pare de la planta.
Tabla 6. Influencia del patrn sobre la variedad
Tipo de influencia
Sobre el vigor

caractersticas
Plantas de diferente capacidad de
comparativamente con una sin injertar.

desarrollo

Patrones obtenidos por semilla, gran heterogeneidad


con respecto al tamao de planta. La disminucin del
vigor permite mayores densidades de siembra y
facilidad de labores culturales.
Sobre la precocidad

Se afecta el perodo vegetativo.


La injertacin por s misma acelera la fase productiva.

Sobre la poca de
floracin

Se afecta el perodo reproductivo , por cambios en la


relacin carbono-nitrgeno, importante para la
ocurrencia de la floracin.

Sobre la productividad

La relacin entre el transporte de raz y la produccin


de fotoasimilados se manifiesta en la productividad,
por afectar el desarrollo de las yemas florales y el
llenado de frutos.

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Sobre el fruto

No es muy clara ni grande , con patrones


enanificantes los frutos maduran en forma ms
temprana, presentan un mejor color y un mayor
tamao.

Sobre la longevidad

A mayor precocidad menor longevidad , sin embargo


una mayor productividad puede compensar
la
reduccin en longevidad.

Produccin de patrones
La seleccin adecuada del patrn deriva en una mayor produccin, por ello es
necesario conocer el comportamiento y caractersticas de los mismos.
En trminos generales se distinguen dos tipos de patrones:

Los provenientes del multiplicacin por semilla o francos.

Los propagados vegetativamente o clonales.

Los patrones francos son los ms empleados universalmente , una de sus


principales ventajas es la facilidad de obtencin y en consecuencia su bajo costo
relativo, presentando adems un buen desarrollo radica, adems de la reducida
posibilidad de transmisin de virus , ya que son pocos los virus que pueden
transmitirse por semillas sexuales .
Sin embargo estos patrones presentan como desventajas la imposibilidad de
lograr
ciertas condiciones de resistencia a factores desfavorables, o de
enanificacin o de precocidad, al no existir patrones francos que renan todas las
caractersticas deseables en todos los casos, como otro inconveniente se
presenta gran heterogeneidad de los materiales injertados principalmente en vigor
, debido a la variabilidad gentica presente en el patrn.
Los patrones clonales o de multiplicacin vegetativa , aseguran una mayor
homogeneidad en vigor, lo que puede influir favorablemente en la rentabilidad, sin
embargo su costo es ms elevado que el de un patrn franco, debido al mayor
trabajo y a la mayor inversin que se requiere para su obtencin, por otra parte , la
fcil transmisin de enfermedades virosas se convierte en su mayor desventaja,
lo que implica mayores medidas de control de la sanidad del material.
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Seleccin de plantas madre


Las plantas madre sern aquellas plantas de las cuales se obtendrn los injertos,
estas plantas madre sern plantas de una variedad identificada y conocida, por lo
cual deben manifestar en todos sus aspectos las caractersticas propias de la
variedad. Adems de ser un material sano, sin presencia de plagas ni
enfermedades, en edad productiva, con alta produccin de frutos de buena
calidad , peso y tamao.
Para asegurar los cuidados necesarios para mantener la sanidad ,se hace
necesario que se encuentren localizados en un rea pequea aquellos materiales
que sern destinados como donantes de material de propagacin.
Estas plantas madre requieren un trabajo permanente de identificacin de las
mejores ramas y yemas, adems de observar su productividad por lo cual es
normal llevar un libro de registros.
Recomendaciones para tener xito en la realizacin de un injerto
1. Seleccin de la metodologa de injertacin a utilizar de acuerdo con las
especias a injertar.
2. Seleccin del mtodo de acuerdo con el estado fenolgico y tamao del
material vegetal.
3. Uso de material vegetativo fresco o almacenado en condiciones adecuadas.
4. Realizacin del injerto en un ambiente favorable, fresco y hmedo, ya sea en
campo o en vivero.
5. Ejecucin del trabajo con rapidez y limpiamente.
6. Uso de herramientas adecuadas y bien afiladas.
7. Empleo de materiales selladores y de amarre.
8. Proteccin del injerto con sombra.
9. Realizacin de los tratamientos adecuados a cada tipo de injerto.

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Leccin 18. Principales tcnicas de injertacin (Parte 1)


Injerto doble
Es la combinacin posible que se puede realizar entre dos clones de plantas en un
arreglo o disposicin vertical. Esto supone la insercin de un clon entre patrn y el
injerto. Esta insercin permitir el desarrollo de una planta con tres tipos de
especies vegetales, a esta porcin entre injerto y patrn se le conoce como patrn
intermedio.
El uso de este patrn intermedio es importante para la solucin de ciertos
problemas de incompatibilidad, es decir, el patrn intermedio sirve de conector
entre especies vegetales que normalmente son incompatibles.
Adems el uso de este patrn intermedio tambin es asociado con ciertas
caractersticas deseadas con las que pueda aportar y que se encuentren ausentes
tanto en la pa como en el patrn. Tambin se ha comprobado que el patrn
intermedio influye sobre el crecimiento de los rboles aportando tambin sus
caractersticas.
Injerto de escudete o yema
Es el tipo de injerto ms utilizado en fruticultura ,ya que requiere de la utilizacin
de poco material vegetativo, una sola yema por cada injerto; su ejecucin es muy
rpida con un alto porcentaje de prendimiento, utilizando patrones juveniles de
escaso dimetro; con posibilidad de reinjertar , en caso de fallas, sin que se dae
el patrn.
Una condicin importante para tener xito se basa en contar con un patrn en
estado vegetativo, es ir en crecimiento activo, con un dimetro variable entre 0.5 a
2.5 cm.
Procedimiento

Sobre la corteza del patrn se realiza un corte


profundidad de entre 2 a 3 cm de longitud.

Inmediatamente se efecta un corte transversal en la parte superior del


primer corte, con una longitud variable de 0.5 a 1.5 cm, de tal forma que se
conformen dos ngulos rectos en forma de T.
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longitudinal , de poca

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Previamente se ha seleccionada la vara portayemas, siendo de vigor medio,


de rboles en etapa productiva, esta se corta en horas de la maana o se
tiene almacenada en fro en condiciones de humedad, a las cuales se les
retiran las hojas.

A la vareta se le retira la yema , para ello, se realiza un corte transversal


debajo de la yema a 1.5 a 2 cm de la misma, que penetre un poco ms de la
corteza y luego un poco ms profundo , terminando el corte nuevamente
superficialmente y retirando posteriormente el exceso de madera .

Para ubicar la yema se introduce de arriba hacia abajo por el espacio libre
que el corte en T en la corteza del patrn determina, resbalando suavemente
hasta que la yema ajuste por debajo de la corteza del patrn, a la madera de
l.

Se sella con cinta de polietileno, dejando libre a la yema.

Se desata a los 15 20 das aproximadamente si ha agarrado. Si se deja


mucho tiempo atado se pueden perder por quedar ahogados una vez
brotados.

Figura 16. Injerto en T.

Injerto en T invertida
El procedimiento de injertacin es similar al proceso anterior , presentndose dos
variaciones , la primer es que el corte transversal de la corteza se realiza en la
parte inferior del corte longitudinal correspondiente y la segunda es que la yema
es empujada de abajo hacia arriba.

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Es recomendado para regiones donde la precipitacin es muy elevada o donde el


riego se realiza con manguera , ya que disminuye la posibilidad de que entre agua
a travs e los cortes e interfiera con el proceso de prendimiento.

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Leccin 19. Principales tcnicas de injertacin (Parte 2).


Injerto en forma de parche o chapa.
En este mtodo , se utiliza un pedazo de corteza, de forma rectangular con una
yema, y que forma un parche, incrustndose en el patrn en un hueco del mismo
tamao y forma realizado en l al quitar el correspondiente pedazo de corteza.
Para que el injerto tenga xito es fundamental que la chapa tenga las mismas
medidas y forma del hueco realizado en el patrn, ajustando perfectamente y con
una buena coincidencia de los cortes transversales de arriba y de abajo ms que
los cortes longitudinales.
Es empleado con xito en materiales de corteza dura o en patrones no juveniles
de hasta dos aos de edad o en patrones de hasta 10 cm de dimetro.
Figura 17. Injerto de parche.

Procedimiento

En el patrn se selecciona un sitio liso que no tenga yemas, a una altura de 15


a 20 cm del suelo.

Se realizan dos cortes longitudinales y dos cortes transversales de unos 2,5


cm. de ancho y 2,5 cm de largo.

La chapa as marcada no se remueve del patrn hasta no se obtenga y


desprenda de la vareta el material que contiene la yema.

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En la vareta se procede de manera similar , desprendiendo la chapa, con la


mayor rapidez posible se desprende la chapa del patrn y se ubica la nueva
chapa.

Se amarra el parche con cinta de polietileno o polivinilo, dejando al descubierto


la yema.

Se realiza un despunte al patrn, dejando suficiente follaje para que siga


ocurriendo la fotosntesis

Se desata a los 15 das aproximadamente. si no se desata se pueden perder


por quedar ahogada una vez brotada la yema.

Se deja una porcin de tallo por arriba del chapa , para amarrar el brote y que
pueda tener un crecimiento vertical.
Injerto de hendidura simple

Este tipo de injerto es el ms recomendable cuando el patrn y la pa tienen el


mismo dimetro, por ejemplo, entre 0,5 a 3 cm.
Se puede emplear tanto en condiciones en campo como sobre patrones
previamente arrancados y arreglados.
Figura 18. Injerto de hendidura simple.

Tomado del Manual del fruticultor moderno.1992

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Procedimiento
Se corta con unas tijeras de podar el patrn a la altura deseada y se le hace un
corte a lo largo por el centro de unos 6 cm de longitud.
La pa debe tener al menos un ao, el mismo tamao que el patrn, y 2 3
yemas. Si el patrn es de mayor dimetro que la pa, slo pueden estar en
contacto por un lado.
A la pa se le corta un bisel por ambos lados.
Se introduce de tal manera que la corteza del patrn y la de la estaca se toquen
para que el cambium de ambos elementos quede en contacto.
Se ata la unin con cinta de injertar y se encera con pasta o mstic para injertar.
Se pone tambin cera en la punta de la pa.
No se desata hasta que las yemas hayan brotado y midan unos 5-10 cm. Ms
tiempo tampoco es bueno porque puede quedar estrangulado al dificultar el paso
de savia.
Injerto de doble hendidura
Se utiliza sobre relativamente gruesos, prefiriendo la implantacin de dos varetas
siempre que el dimetro del patrn tenga capacidad para ello.
En el caso de que las dos varetas injertadas prendan se realiza posteriormente la
seleccin de la que presente mejores caractersticas, principalmente de vigor.
Figura 19. Injerto de doble hendidura

Tomado del Manual del fruticultor moderno.1992


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Procedimiento
Todo el proceso de injertacin, amarre y sellado es similar al de la hendidura
simple, variando solo en el hecho de colocar dos cuas en cada extremo de la
hendidura.

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Leccin 20. Principales tcnicas de injertacin (Parte 3).


Injerto Ingles
Es uno de Los mtodos de injerto ms empleado, teniendo en cuenta la unin que
se presenta entre el patrn y la vareta, utilizando tanto patrones como varetas del
mismo dimetro.
Figura 20. Injerto Ingls.

Tomado del Manual del fruticultor moderno.1992

Procedimiento

Tanto en el patrn como en la vareta se efectan exactamente los mismos


cortes de las mismas medidas.
Se realiza un corte inclinado, a manera de bisel, en la vareta, este corte se
comienza a 1 cm aproximadamente debajo de la yema.

Luego de realizar un corte en sentido longitudinal que penetra en general,


1 cm y que se efecta en el lugar que marque un tercio de la longitud del
corte oblicuo. Este segundo corte se realiza en la vareta a un tercio de la
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parte inferior del corte inclinado, y en el patrn a un tercio de la parte


superior de l.
Una vez hechos los cortes se puede observar tanto en la vareta y en el
patrn una lengeta o muesca,. Resbalando los dos planos inclinados uno
sobre otro, se logra el ensamblaje y acoplamiento de las dos muescas.
Una vez ensambladas las dos partes del injerto se debe efectuar el amarre,
no tanto para mantenerlas unidas sino para protegerlos de la prdida de
agua por contacto con el aire.
Como variantes del injerto ingles se utilizan en el injerto Ingles de silla cuando el
patrn es mucho ms grueso que la vareta donde el injerto se realiza no en el
centro del patrn sino lateralmente.

Figura 21 .Injerto Ingles de silla .

Tomado del Manual del fruticultor moderno.1992

Injerto de corona
Se utiliza , cuando los patrones son de considerable dimetro, principalmente en la
reconstruccin de rboles o para cambiar variedad.
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En este tipo de injerto las varetas deben ser colocadas entre la corteza y la
madera del patrn.
Figura 22 .Injerto de corona

Tomado del Manual del fruticultor moderno.1992

Procedimiento
En cada corte transversal efectuado sobre una rama gruesa se colocan
varias pas, pero por lo general no deben estar ubicadas a distancias
menores de 5 cm entre s.
En el patrn debe introducirse entre corteza y madera las varetas, afiladas y
adelgazadas por un lado, de tal modo que constituyan un tejido uniforme,
pero de escaso grosor que pueda penetrar sin dificultad entre corteza y
madera, sin romper la corteza.

A la corteza se le efecta en cada lugar donde se har un injerto, un corte


longitudinal que llegue hasta la madera y de longitud variable ( alrededor de 5
cm de largo).
Las varetas se preparan realizando debajo de la yema y en el lado opuesto
un corte que penetre hasta aproximadamente un tercio del grosor, para
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posteriormente realizar un corte en bisel, mientras en el lado opuesto se


puede realizar un pequeo corte semejante, no paralelo al primer corte sino
ladeado para facilitar el contacto entre vareta y patrn.
Lista la vareta se introduce bajo la corteza separada, justamente en
contacto con la parte de la corteza que limita con el corte longitudinal y que
no fue levantada o separada de la madera.

Para lograr una buena unin se pueden utilizar puntillas de cabeza ancha y
plana de tal manera que penetren en la corteza y la vareta, y ajusten todo a
la madera del patrn y se recubre con cera.

Injerto de enchapado lateral


Con este tipo de injerto se pueden utilizar patrones de diferente edad y dimetro,
sin que la vareta sea del mismo dimetro.
Figura 23 .Injerto de enchapado lateral.

Tomado del Manual del fruticultor moderno.1992

Procedimiento

Realizar un corte longitudinal sobre el patrn entre 3 a 10 cm, en un lugar


liso sin nudos, este corte es superficial aunque implica llegar a la madera.

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Cerca de la base del corte, a 0.5cm aproximadamente, se realiza otro corte


transversal inclinado de tal modo que una vez efectuado se desprende la
mayor pite de la seccin delimitada por el primer corte, quedando una
pequea muesca.

A la vareta que contiene varias yemas, se quitan las hojas cortndolas por
el pecolo, a la vareta se le efecta un corte longitudinal semejante en
forma y longitud al que se hizo en el patrn.

Por el lado contrario a este primer corte se realiza otro pequeo corte
inclinado que se une al primero formando en la base una pequea cua.

Se procede a hacer la unin ya que se permite el acoplamiento perfecto


entre las partes amarrando con una cinta de polietileno de tal manera que la
cinta pase por arriba entre ambas partes para evitar la posible entrada del
agua de lluvia o riego por la unin de los dos elementos.

A las dos o tres semanas puede observarse el procedimiento del injerto, en


caso afirmativo se procede a despuntar el patrn para promover la
brotacin de yemas de la vareta.

Injerto de aproximacin lateral


Se emplea en espacios en donde normalmente los procedimientos habituales
fallan debido a una lenta soldadura de los tejidos.
Esta lentitud carece de importancia ya que el material que se injerta no se separa
de la planta original, sino hasta el momento en que haya ocurrido el prendimiento
del injerto.

Figura 24 .Injerto de aproximacin lateral

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Procedimiento
Tanto en el patrn como en la vareta, que deben ser dimetros similares,
se realizan cortes longitudinales en la corteza que llegue hasta la madera,
de modo que forman superficies ovaladas iguales.
Estas superficies se ponen en contacto una con la otra, se amarran
fuertemente y se cubren con cera.
Injerto de aproximacin en puente
Se utiliza para revigorizar rboles viejos o con ataques de plagas o enfermedades
que afecten el sistema radical.
Figura 25. Injerto en puente.

Procedimiento

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Se plantan alrededor del rbol afectado, varios pequeos patrones,


preferiblemente obtenidos por semilla.
Se practican en el rbol, cortes longitudinales dobles, paralelos, de una
longitud variable de 10 a 20 cm, que permitan la extraccin de una tira de
corteza de anchura semejante a la de los patrones delgados.
En la parte superior de estos cortes longitudinales se prctica un corte
transversal que permita la formacin de una lengeta en la corteza
ranurada de 1 cm de longitud.
En los patrones, en la cara que se dirige hacia la ranura practicada en el
rbol, se efecta un corte longitudinal de las mismas dimensiones tanto de
largo como de ancho, penetrando hasta una tercera parte del grueso del
patrn.
Posteriormente se efecta otro corte en la cara posterior, inclinando en bisel
a 1 cm de la parte terminal, formando una pequea cua afilada que se
introducir en la muesca que se hizo en el rbol.
En el patrn se arquea y se pone en contacto con el patrn, asegurando la
unin con puntillas cada 2 cm aproximadamente, penetrando la madera de
un rbol y se recubre con cera.

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CAPITULO 5. MTODOS DE PROPAGACIN ASEXUAL


(ACODOS Y ESTACAS)
Leccin 21. Principales tcnicas de acodo (Parte 1).
El acodo consiste en obtener races en ramas o brotes antes del corte o
separacin del material vegetativo de la planta madre, por lo cual es un
procedimiento seguro ya que no se corre el riesgo de falta de prendimiento,
mientras no haya una formacin adecuada de races y que son de difcil resultado
si se utiliza la propagacin por estacas.
Es un procedimiento de propagacin muy conveniente para aquellos materiales
que ofrecen dificultad para la emisin de races y que son de difcil resultado si se
utiliza la propagacin por estacas.
Para lograr la emisin de races se requiere de que el acodo se encuentre en
continuo contacto con cierto grado de humedad y una buena relacin de
reguladores de crecimiento a nivel endgeno ( que pueden ser suplidos a nivel
exgeno).
A nivel comercial es un sistema poco empleado debido a la lentitud para obtener
un nmero elevado de plantas, siendo empleado para obtener rboles con raz y
patrones vegetativos.
El acodamiento puede ocurrir en forma natural (como en la mora) o en forma
artificial donde tratamientos a los tallos tales como el arqueamiento de ramas que
permite una acumulacin de reguladores de crecimiento localizado facilita la
formacin de races. Como la exclusin de la luz en el sitio donde se van a formar
races adventicias que permite el ahilamiento (elongacin y adelgazamiento del
tallo) y el blanqueamiento (perdida de pigmentos) facilita el desarrollo y formacin
de races.
Acodo areo
Esta forma de acodo puede ser practicada en frutales de hoja perenne en
cualquier poca del ao y en caducifolios en poca previa al reposo.
Consiste en realizar en una rama de alrededor de un ao de edad un corte
transversal en forma de anillo, de 1-2 cm de ancho, que implique el levantamiento
y remocin de una capa de corteza, de tal manera que esta herida y sus zonas
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vecinas deben ser cubiertas por un material que retenga gran cantidad de
humedad como el musgo o en algunos casos espuma que se coloca envolviendo
completamente dicha seccin y formando una masa compacta y completamente
humedecida.
Esta cubierta humedecida a su vez se recubre por polietileno para evitar la prdida
de la humedad, este polietileno se amarra tanto arriba como debajo de la seccin
anular.
Previamente a la realizacin del acodo deben eliminarse las hojas cercanas donde
se realizara el corte. Igualmente es conveniente antes de recubrir con el musgo
aplicar un producto enraizador sobre el corte para facilitar el enraizamiento.
Figura 26. Acodo areo.

Tomado de Viveros . 2002

Acodo de punta
Es un tipo de acodo poco visual, pero con gran xito en mora y frambuesa,. Estas
plantas emiten ramas muy alargadas, que al ser delgadas son muy flexibles y que
tienden a doblarse hasta el suelo, cuando la punta de las ramas toma una forma
un tanto arqueada se realiza el acodamiento.
El acodamiento se realiza con la apertura de zanjas o agujeros en el suelo, no
muy profundos, en los cuales se entierran las puntas de las ramas.

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Posteriormente se obtiene una pequea planta desarrollada a partir del pice


vegetativo enterrando su propio sistema radical que puede ser separada de la
planta madre.
Figura 27. Acodo de punta.

Tomado del Manual del fruticultor moderno.1992

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Leccin 22. Principales tcnicas de acodo (Parte 2)


Acodo subterrneo simple
Este acodo puede realizarse en aquellas plantas que producen ramas lo
suficientemente largas y flexibles que pueden ser inclinadas y mantenidas
enterradas en una parte mientras su parte terminal permanece libre, siendo
utilizada para mora, frambuesa y vid principalmente.
En algunos casos se puede requerir la ayuda de un gancho que colocado en la
parte inferior de la rama la sostenga firmemente fijada entre su levantamiento
natural.
Figura 28. Acodo subterrneo simple.

Pueden realizarse incisiones transversales, anillos totales o parciales que


favorezcan la emisin de races, al igual que la aplicacin de reguladores de
crecimiento tipo auxinas que favorezcan el enraizamiento.
Como una variante se puede realizar el acodo subterrneo compuesto en donde la
rama flexible es enterrada en una parte dejando una posicin libre y a su vez
volver a enterrar otra porcin libre, esto es un acodo simple repetido para la misma
rama ms de una vez.

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Figura 29. Acodo subterrneo compuesto

Acodo en montculo
Este tipo de acodo se emplea en la floricultura, no necesariamente para obtener
plantas de forma directa, sino para propagar patrones vegetativos que
posteriormente sern injertados.
Los pies madre deben tener una certificacin varietal completa sanidad, en una
primera etapa los pies madre estarn sembrados en surcos y cuando estn
establecidos se podarn dejando de cada planta un pedazo de brote arriba de la
superficie del suelo de aproximadamente 30- 40 cm, lo que permitir la emisin de
abundantes brotes.
A estos nuevos brotes se les debe podar y cuando tengan una longitud de 10 cm
se realiza un aparque de tal manera que queden cubiertos hasta la mitad de su
longitud, lo que facilitar la emisin de races si se realiza cuando los brotes son
juveniles. Nuevamente cuando los brotes tengan de 10- 15 cm se realiza un
ltimo aporque, en el cual se cubren las ramas 10cm con el suelo.
Finalmente se separan los brotes enraizados.

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Figura 30. Acodo en montculo.

Tomado del Manual del fruticultor moderno.1992

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Leccin 23. Propagacin por estacas (Parte 1)


Es un mtodo muy usado conveniente para la propagacin de algunas especies y
para la obtencin de patrones en algunos frutales.
Consiste en el corte de material vegetativo, ya sea en pedazos de brotes, ramas o
races, que se colocan en un medio de suelo que favorezca la emisin de races y
la brotacin de la parte area, obteniendo una nueva planta igual genticamente a
la planta original
Segn la parte de la planta de donde se obtienen los segmentos (cortes o
fragmentos) se ha dividido en cortes de: hojas, de brotes o renuevos, de raz y de
ramas.
La propagacin vegetativa mediante segmentos de ramas o brotes es uno de los
mtodos ms usados para propagar plantas leosas en vivero. Segn las
caractersticas de madurez de la madera de donde se obtienen las ramas o brotes,
se habla de estacas de madera dura, y de madera suave.
Ventajas e inconvenientes del estacado
Ventajas:
- Notable simplicidad del procedimiento.
- Obtencin de gran nmero de plantas a partir de una sola planta madre
- Gran rapidez.
- Homogeneidad de las plantas obtenidas.
- Necesidad de poco espacio
- Bajo costo de operacin.
Desventajas:
-

Reducidos Porcentajes
variedades.

de

procedimiento

en

algunas

especies

Criterios para la seleccin de estacas


Como pasos y criterios para obtener estacas se pueden considerar los siguientes
1) Seleccionar plantas donantes vigorosas y sanas preferentemente de un banco
de plantas donantes o de un grupo de plantas previamente seleccionadas .

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2)La obtencin de ramas de la planta donante debe realizarse por la maana o por
la tarde (antes de las 10 am o despus de las 4 pm), con la finalidad de evitar la
prdida de agua durante las horas de mayor insolacin.
3) Elegir preferiblemente los segmentos basales o centrales de la rama, ya que
normalmente all se encuentran yemas de un estado y edad fisiolgica adecuado
, adems que en la rama es donde se tienen ms reservas alimenticias necesarias
para el desarrollo de las nuevas races.
4) El tamao de los segmentos puede variar entre 10 a 75 cm de longitud, el
criterio adecuado para elegirlo depende de la especie y del tipo de estaca ,
incluyendo por lo menos dos nudos, aunque lo recomendable es de cuatro a seis,
sobre todo cuando los entrenudos son muy cortos. El dimetro de las ramas en
que se realizan los cortes puede ser de 0.5 a 5 centmetros.
5) El corte basal se hace justo abajo de un nudo (sitio donde preferentemente se
forman races adventicias) y el corte superior se realiza de 1.5 a 2.5 cm arriba del
otro nudo.
6) Ya cortados los brotes se marcan con el nmero de la planta donante (nmero
de clon), se introducen lo ms rpidamente posible en bolsas de plstico con
algn material que retenga bastante agua y se cierran para evitar la prdida de
humedad. Deben mantenerse en un sitio fresco y sombreado y en cuanto sea
posible se trasladan al rea de enraizamiento del vivero.
Figura 31. Obtencin de estacas.

Tomado de vivero .2002

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Leccin 24. Propagacin por estacas (Parte 2)

Estacas de madera dura


Este tipo de estacas son fciles de preparar, no son fcilmente perecederas,
pudiendo ser transportadas a grandes distancias ,y por lo general presentan alto
prendimiento aunque pueden requerir de un tiempo mayor que otros tipos de
estacas, las estacas de madera dura se preparan de una longitud de 20-30 cm ,
donde se incluyen por lo menos dos nudos, el corte en la base de la estaca se
hace recto, por debajo de un nudo y el corte superior de realiza en forma diagonal,
dos centmetros arriba de un nudo. El dimetro de la estaca puede variar entre
0.5-3 cm, dependiendo de la especie, pero nunca inferior a 0.5 cm.

Se puede hablar de tres tipos de estacas de madera depende como se haga el


corte , pudiendo ser de mazo (incluye una seccin del tallo de madera ms vieja),
de taln o tacn (la porcin de madera vieja es ms pequea) y el recto (no
incluye madera vieja)
Figura 32. .Tipos de estacas de madera dura

A .Recta B.Taln C. De mazo

Estacas de madera suave


Este tipo de estacas presenta cierto grado de flexibilidad, pero estn
suficientemente duras para quebrarse si se dobla mucho. El material ms usado
procede de las ramas laterales de la planta madre o donante que se encuentran
en crecimiento activo, se cortan con una longitud entre los siete a 15 cm,
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dejando de dos a tres entrenudos, realizando el corte en la base de las estacas


por debajo de un nudo, eliminando las hojas inferiores pudiendo dejar las hojas
superiores o parte de ellas si son de gran tamao para reducir la transpiracin.
Es importante por ello mantener las estacas en un sitio hmedo y sombreado
desde el momento del corte hasta el proceso de enraizamiento, debido a la
presencia de hojas que continan transpirando activamente y a las condiciones
diferenciales de madurez en las ramas jvenes
Estacas de hojas
Este tipo de propagacin no es tan frecuente en la naturaleza como los dos
anteriores. Sin embargo, es posible encontrarlo en las hojas de algunos helechos,
que forman una especie de acodadura al entrar en contacto con el suelo; en otras
especies, entre las que se encuentran las violetas africanas, Gloxinias y otras
Gesnariaceas , Begonia rex y otras Begoniaceas y las Peperomias, se producen
races a partir de sus hojas y posteriormente tallos que conduce a la formacin de
nuevos individuos.
En la mayora de estos casos las races adventicias y los brotes que se originan,
se forman en la base de la hoja y raramente esta se vuelve parte de la nueva
planta.
En el caso de la violeta africana y otras Gesnariaceas, se puede utilizar toda la
hoja o porciones ms pequeas que incluya una porcin de peciolo.
Para las begonias se puede plantar toda la hoja con gajo, manteniendo el pecolo
entero, o se puede colocar la hoja en porciones sobre arena hmeda y sobre las
venas principales aparecern los nuevos brotes.

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Leccin 25. Enraizamiento de estacas


Teniendo en cuenta que no todas las plantas tienen la capacidad de enraizar
naturalmente, se hace necesario en muchas ocasiones aplicar sustancias
hormonales que provoquen la formacin de races., es el caso de las auxinas
como el cido indolactico (AIA), y el cido naftalenactico (ANA) que estimulan
la formacin y el desarrollo de las races cuando se aplican la base de las estacas.
Estas sustancias solas o en combinacin pueden ser aplicadas por medio del
remojo de la base de las estacas (de 2 a 3 cm) en soluciones acuosas y con bajas
concentraciones de auxina (de 4 a 12 horas), segn las instrucciones de los
preparados comerciales. Sin embargo, este mtodo es lento y poco exacto, difcil
de realizar cuando los cortes son numerosos .

Otra forma de realizar la aplicacin del producto enraizador es la dilucin del


producto en alcohol etlico como solvente, realizando una aspersin sobre la base
de la estaca antes de colocarlas en el sitio de propagacin.
Aspectos que influyen en el enraizamiento de estacas
-

Edad del rbol madre.


Tamao de la estaca
Contenido de las reservas de la estaca.
Epoca de corte de la estaca.
Uso de hormonas de enraizamiento.
Epoca de estacado.
Forma de ejecucin del estacado.
Tipo de suelo.
Condiciones ambientales.

Teniendo en cuenta lo anterior , se deriva que el ambiente en el cual las estacas


son puestas a enraizar es de vital importancia. y por tanto las estacas deben estar
en un sitio que rena unas condiciones optimas para a asegurar la obtencin de
nuevo material vegetal.
Este sitio se denomina propagador , que consiste en una construccin que evita la
prdida de agua del medio que rodea a las estacas, para ello se puede contar con
sistemas de aspersin que regulen automticamente la frecuencia y la intensidad
de la aspersin, en el caso de utilizar invernaderos con control de luz y humedad.
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Sin embargo, la humedad tambin se puede controlar de manera sencilla en un


compartimiento que tenga una tapa transparente para permitir el paso de la luz y
evitar la prdida de humedad.
Las estacas ya preparadas se siembran rpidamente tomando en cuenta las
siguientes indicaciones: los cortes deben colocarse a una profundidad de 2 a 3
cm; para asegurar que queden firmes es necesario compactar un poco el sustrato
de enraizamiento; cuando se utilizan estacas multinodales con varias hojas se
debe evitar que las hojas inferiores queden en contacto con el medio de
enraizamiento para evitar su dao.

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CAPITULO 6. MTODOS DE PROPAGACIN ASEXUAL


(TALLOS MODIFICADOS)
Leccin 26. Propagacin vegetativa por tallos modificados (Parte 1)
Bulbos
Constan de un "disco basal" de cuyo pice surge el tallo floral, se desarrollan
sobre tallos cortos y engrosados, a partir de yemas axilares de hojas carnosas. De
stas obtienen elementos de reserva .El engrosamiento se forma en la base de las
hojas. Se desarrollan subterrneamente en forma de tallos carnosos, cubiertos
con hojas engrosadas a manera de escamas que funcionan como rganos de
reserva.
Es posible que se produzca ms de un bulbo a partir de cada yema. En algunos
casos se desarrollan masas de bulbos en el extremo del tallo, cada uno de ellos
llamados bulbilos, los cuales pueden ser dispersados lejos del bulbo parental. En
el centro de los bulbos existe un meristemo vegetativo o un vstago floral.
Los bulbos se clasifican a su vez en tunicados y escamosos; los tunicados, que
estn cubiertos por escamas secas y membranosas superpuestas que protegen al
bulbo y le dan una estructura ms o menos slida. A esta clase pertenecen la
cebolla y el tulipn; los escamosos o no tunicados, que no presentan la cubierta
seca y sus escamas de consistencia carnosa estn separadas y unidas a la placa
basal.

Los hijuelos que emiten los bulbos pueden ser separados para la multiplicacin.
Algunas plantas que se reproducen por bulbos son: Narcissus, amaryllis, lilium, ,
tulipa, veltheimia, zephyrantes, etc.

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Figura 33. A. Bulbo tunicado. B. Bulbo dentado.

Tomado de Botany. Hill et al ,1.990

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Leccin 27. Propagacin vegetativa por tallos modificados (Parte 2)


Cormos
Los cormos son muy parecidos a los bulbos en lo que se refiere a su aspecto
externo. A diferencia de los bulbos estn recubiertos de hojas secas, no de
escamas. Presentan una base hinchada con nudos y abultamientos en el interior,
en ocasiones mostrando yemas.
Los pequeos cormos que se producen en la parte inferior son aptos para la
reproduccin despus del engrose; la parte superior emite un cormo muy
desarrollado. Algunas plantas que se reproducen por cormos son: Crocus,
acidanthera, colchicum, freesia, gladiolus, ixia, sternbergia, trotonia, watsonia.
Se forman en las yemas de las axilas de las hojas de un tallo robusto y suculento
que proporciona los nutrientes necesarios para la nueva estructura, la cual se
desprender del progenitor y se desarrollar subterrneamente como un tallo
corto, erecto y slido con nudos y entrenudos. Los cormos tienen forma de esferas
aplanadas dorsoventralmente, como los del gladiolo y el azafrn. Estn envueltos
en delgadas hojas escamosas que los protegen del dao fsico y de la prdida de
agua, pero que no funcionan como estructuras de almacenamiento, a diferencia de
las escamas de los bulbos.
ste desarrolla races adventicias ventrales o basales. El pice del cormo es un
vstago terminal que se desarrollar en las hojas y en un vstago floral terminado
por una inflorescencia, y en cada uno de los nudos se producen las yemas
axilares

El cormo se multiplica ramificndose simpdicamente, y si se corta un cormo,


manteniendo una yema en cada seccin, cada uno de estos segmentos
desarrollar un cormo nuevo.

Sobre el extremo inferior del cormo se producen pequeas estructuras semejantes


a los estolones conocidos como cormelos o cormillos. La muerte del cormo
parental permitir la separacin de los cormos hijos.

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Figura 34. A. Cormo de Gladiolo.

Tomado de Botany. Hill et al ,1.990

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Leccin 28. Propagacin vegetativa por tallos modificados (Parte 3)


Tubrculos
Son estructuras gruesas, suculentas, que actan tambin como estructuras de
reserva. Se forman en el extremo de tallos subterrneos delgados. Un ejemplo
muy conocido lo constituye la papa.
Los tubrculos presentan en su superficie nudos con hojas escamosas, arreglados
de manera espiral, y cada uno de ellos consta de una o ms yemas pequeas.

Cuando se inicia el crecimiento del vstago principal las races adventicias se


desarrollan en la base del tubrculo y las yemas horizontales se alargan y
producen tallos etiolados en forma de estolones. A partir de los tubrculos que han
formado ramas horizontales se forman tubrculos nuevos

Figura 35. Tubrculo de papa.

Tomado de http://3.bp.blogspot.com

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Leccin 29. Propagacin vegetativa por tallos modificados (Parte 4)

Rizomas
Son tallos que se desarrollan bajo tierra, normalmente en sentido horizontal.
Presentan varias yemas que pueden ser divididas para la reproduccin. Algunas
plantas que se reproducen por rizoma son: Achimenes, canna y zantedeschia.
Se generan a partir del crecimiento horizontal de un tallo subterrneo, por lo
general ms robusto que el que da origen a un estoln. Las viejas porciones se
degradan y se separan en fragmentos que debern enraizar de manera
independiente.
Este tallo subterrneo presenta hojas escamosas en las axilas, donde se pueden
generar yemas axilares, adems de presentar races adventicias
Una vez formado el vstago principal se da un crecimiento continuo. Cada
estacin de crecimiento presenta un crecimiento simpodial por medio de la yema
axilar o monopodial por medio de la yema terminal.
El rizoma funciona como rgano de almacenamiento de reservas. De esta manera
se propagan especies de importancia econmica, tales como el bamb, la caa de
azcar, el pltano, as como algunos pastos.
Figura 36..Rizoma de pasto y rizoma de Canna indica .

Tomado de Botany. Hill et al ,1.990

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Leccin 30. Propagacin vegetativa por tallos modificados (Parte 5).

Seudobulbos
Consisten en partes engrosadas y areas del tallo que presentan determinadas
especies muy caractersticas, como las orqudeas cattleya.
Son crecimientos tuberosos del tallo completo o de parte de ste o de las ramas.
En las axilas de las escamas de la base de los pseudobulbos se forman vstagos
nuevos o pseudobulbos en serie que conectan segmentos del tallo .
Estolones
Constan de secciones relativamente largas y delgadas de tallos areos
horizontales con entrenudos largos y cortos alternados que generan races
adventicias.
La separacin de estos segmentos enraizados permite el desarrollo de plantas
hijas. La fresa es un ejemplo de las especies que comnmente presentan este tipo
de propagacin .
Figura 37.Estoln de fresa

Tomado de: commons.wikimedia.org

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ACTIVIDADES DE AUTOEVALUACIN DE LA UNIDAD 2

Investigue tres (3) tipos de injertos que realicen en su regin sobre especie
de inters econmico, realizando un diagrama grfico y explicativo del
procedimiento (pasos) de cada una de las tcnicas investigadas.
Investigar cuales son las especies vegetales ms importantes sembradas
en Colombia que son reproducidas por los mtodos de acodo y estaca.

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UNIDAD 3. MICROPROPAGACIN DE PLANTAS


CAPITULO 7. ASPECTOS BSICOS DEL CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES
(PARTE 1)
Leccin 31. Generalidades del cultivo de tejidos.

Historia del cultivo in vitro


En 1.665, Hooke realiza la primera descripcin de una clula.
En 1.674, Leeuhenhoek, realiza la descripcin de la vida celular.
En 1.838 Schleiden, Establece el concepto celular en plantas sobre la totipotencia
celular.
En 1.846, Nageli establece que las clulas vegetales se forman por divisin de
clulas vegetales existentes.
En 1.892 Sachs indica que las plantas sintetizan sustncias para poder formar
rganos.
En 1902, Hnning realiza un cultivo de embriones, aunque esto no se puede
considerar como el inicio del cultivo in vitro ya que los embriones no necesitan
hormonas para crecer.
En esa misma ao, Haberlandt realiz un cultivo de clulas aisladas del mesfilo
de hoja, sin consiguir clulas en divisin.
En 1.909, Kuster realiza el primer intento de fusin de protoplastos vegetales , sin
lograr su supervivencia.
En 1922 Robbins comienza a usar extractos de levadura y de tiamina para realizar
los medios de cultivo , logrando cultivar in vitro pices de raz por corto tiempo.
En 1933 Thimann demuestra la influencia de las hormonas en el crecimiento
vegetal.
En 1934, Gautheret realiza un cultivo en condiciones aspticas del tejido cambial
de rboles.
En 1.936, La Rue realiza el cultivo de embriones en Gimnospermas.

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En 1937, Went y Thimann descubren la primera auxina: el cido indolactico o


IAA.
En 1939, Gautheret cultiva segmentos de raz de zanahoria en un medio con sales
minerales, sacarosa, vitaminas y auxinas y teoriza sobre la posibilidad de
crecimiento sin lmite.
En 1.941,Van Oberbekk utiliza la leche de coco en el cultivo de embriones de
Datura.
En 1944, Skoog descubri que los callos se podan diferenciar aplicando
hormonas.
En 1950, Hoagland y Aaron establecieron los 11 tipos de sales que necesitaban
las plantas para su crecimiento.
En 1952, Morel y Martin realizan la primera aplicacin del microinjerto y obtienen
plantas libres de virus por meristemos.
En 1957, Skoog y Miller establecieron las cantidades de auxinas y citoquininas
que se necesitaban para diferenciar un callo.
En 1958, Steward obtuvo callos de zanahoria que posteriormente diferenci a una
planta completa.
En 1960, Cocking obtuvo protoplastos empleando enzimas de digestin
En 1.962 , Murashige y Skoog, formulan el medio MS, uno de los medios ms
empleados.
En, 1.964, Nitsch lograr la induccin floral en condiciones in vitro.
Para el mismo ao, Guha y Maheswary, obtienen plantas haploides a partir de
anteras de Datura.
En 1.965, Ledoux, realiza pruebas para introducir DNA extrao en clulas.
En 1.971 Kao et al y Takebe, realizan pruebas para la regeneracin de plantas
provenientes de protoplastos.
En 1.972, Carlson et al, fusionan protoplastos y regeneran hibridos.
En 1.977,mediante la utilizacin de anteras China ( arroz) y Japn (tabaco) logran
variedades mejoradas .

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En este mismo ao, Chilton et al, lograr la integracin del plsmido Ti de


Agrobacterium en plantas.
En 1.978, Melchers et al, lograr la hibridacin somtica entre tomate y papa.
En 1.984, primera patente de un gen de una planta.
Definicin de cultivo de tejidos
Como puede observarse en el desarrollo histrico del cultivo de tejidos vegetales
distintas partes de la planta fueron utilizadas ( tejidos de hoja , de tallo de raz,
meristemos, protoplastos , anteras, etc).
Teniendo en cuenta que estas tcnicas presentan caractersticas comunes como:

Ocurren a microescala , se requiere una parte de un tejido vegetal.

Se optimizan las condiciones ambientales , esto es, se homogenizan


condiciones fsicas, nitricionales y hormonales.

Se excluyen todos los microorgansmos.

Generalmente no se reproduce el patrn normal de desarrollo de un planta.

Existe la capacidad de manipular clulas individuales lo que permite nuevas


alternativas no posibles en la reproduccin y mejoramiento vegetal
convencional.

Estas tcnicas de cultivo no convencionales- solamente hasta despus de 1.945


se agruparon bajo el nombre de cultivo de tejidos vegetales, aunque tambin se
conoce como cultivo in vitro, que es un trmino muy genrico que se refiere ms
bien a la metodologa usada que al propio objetivo de ese mtodo. En sentido
estricto, in vitro quiere decir "dentro de vidrio", es decir, el cultivo de plantas o de
alguna de sus partes (pero tambin de clulas y tejidos animales) dentro de
recipientes de vidrio en condiciones de ambiente controlado.
Roca (1993) establece que el cultivo de tejidos in vitro de plantas comprende la
combinacin de un grupo heterogneo de tcnicas mediante las cuales una parte
separada de la planta o explante (embriones, rganos, tejidos, clulas ,
protoplastos, meristemos , etc.) se cultiva aspticamente en un medio de
composicin qumica definida , incubado en condiciones ambientales controladas.
Y donde mltiples potencialidades como las mostradas en la figura 38 son tiles
para el uso, rescate y preservacin de recursos vegetales.

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Figura 38. Potencialidades del cultivo de tejidos

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Leccin 32. Constitucin de un laboratorio de cultivo de tejidos.


Un laboratorio de cultivo de tejidos consta de las siguientes reas o secciones,
principalmente:
Area de preparacin
Se utiliza principalmente para preparar los medios de cultivo, pero debe proveer
tambin un espacio para almacenamiento de materiales de vidrio y de plstico y
de los reactivos qumicos. Debe contar con mesas de trabajo para la preparacin
de los medios y para colocar las balanzas, medidor de pH, agitador magntico, y
un espacio para el refrigerador.
Area de lavado y de esterilizacin
El rea de lavado debe incluir un lavadero grande y una fuente de agua de alto
grado de pureza, para tal efecto debe tenerse un destilador de agua. Esta rea
debe contar con un espacio para almacenar el agua destilada en botellas
plsticas.
El rea de esterilizacin debe contar con un espacio para el autoclave, y debe
incluir un espacio para una estufa, y una estufa de secado, adems de una
estantera para almacenar material de vidrio no estril.
Area de Transferencia
En esta rea del laboratorio se realiza el trabajo de excisin, inoculacin y
transferencia de los explantes a los medios de cultivo. Aqu se encuentra ubicado
la cmara de flujo laminar y se puede ubicar un estante con puerta que permita
almacenar material estril.
Area de incubacin
El rea de incubacin o crecimiento in vitro debe proporcionar un buen control de
la temperatura ( promedio 25 C) y de la iluminacin ( 1000 a 5000 lux). En el
cuarto se instala estantes metlicos con dimensiones variables, el ancho entre
0.30 m a 1 m, el largo de acuerdo al tamao del cuarto, la altura total entre 1.8 a
2.2 m y la distancia entre entrepaos de 0.20 a 0.50 m. Estos estantes se
encuentran provistos de lmparas fluorescentes, donde puede ser conveniente

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que los balastos queden instalados afuera del cuarto y la regulacin del tiempo de
funcionamiento de las lmparas est controlado por un reloj temporizador.
Area de Adaptacin
Est rea es vital para lograr la adaptacin del material producido in vitro y puede
estar constituida por un invernadero.
Es importante anotar que las reas que conforman el Laboratorio con excepcin
del rea de adaptacin , deben tener pisos lavables en materiales cermicos o de
caucho de alta duracin, as mismo las paredes del laboratorio deben ser blancas,
con pintura lavable de alta resistencia, evitando en las esquinas que formen
ngulos de 90 (esquinas curvas).
Equipos y elementos necesarios para el montaje de un laboratorio
Cuarto de incubacin
Iluminacin fluorescente
Estantera metlica
Termmetro de mximas y mnimas
Reloj temporizador* para la regulacin del fotoperiodo.
Cuarto de siembra
Cmara de flujo laminar
Estante para material de vidrio estril
Area de preparacin de medios
Refrigerador pequeo
Balanza analtica (precisin hasta 0.01 g)
Balanza de precisin ( precisin hasta 0.1 mg)
Phmetro
Destilador de agua
Desionizador
Autoclave
Microondas*
Placa caliente con agitacin magntica
Area de lavado
Lavadero metlico
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Horno de secado y esterilizacin


Otros equipos , materiales y reactivos
Material para cerrado de tubos y frascos (papel aluminio,tapones, algodn, etc)
Suministro de agua , gas y electricidad
Probetas de 100ml, 500ml y 100ml
Pipetas graduadas de 1ml, 2ml, 5 ml, 10 ml.
Frascos de vidrio de diferentes volmenes
cajas de petri
Beaker de 100ml,250 ml, 600 ml, 1000 ml.
Erlenmeyer de 25 ml,125 ml,250 ml, 500 ml,1000 ml
Amplia gama de productos qumicos
Sacarosa*
Agar-agar
Hipoclorito de Sodio, Hipoclorito de Calcio.
Etanol (96%)
Mangos para bisturi
Cuchillas para bisturi
Tijeras pequeas
pinzas metlicas cortas
pinzas metlicas largas
Mechero de alcohol
Papel para envolver
Papel filtro
Toallas de papel
Esptulas
Detergente anionico
Cepillos de lavado para frascos
Elementos de aseo
Rollo de Parafilm
Frascos lavadores plsticos
Gradillas metlicas
Cestillos metlicos
Depsito de agua destilada
Escurridores

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Leccin 33. Los medios de cultivo


Aunque se han formulado una gran cantidad de medios de cultivo, antes de iniciar
una investigacin, es necesario definir los objetivos para determinar cual medio se
va a emplear, ajustndolo y modificndolo si es necesario.
El xito en un trabajo con cultivo de tejidos se debe principalmente a la eleccin
del medio de cultivo por cuanto existe una interaccin entre el explante utilizado y
los requerimientos nutricionales., teniendo en cuenta que los requerimientos
nutricionales para un crecimiento in vitro ptimo varan con la especie, e incluso
son especficos de acuerdo a la parte de la planta que se est cultivando y a la
respuesta que se desea obtener.
Desde 1.940 se han realizado una gran cantidad de trabajos referentes a las
necesidades nutricionales
de explantes
utilizando medios estrictamente
definidos. En trminos generales , la mayor parte de los explantes se pueden
cultivar en un medio que contenga una mezcla de sales minerales asegurando al
menos el mantenimiento del mismo sin presentar cambios en crecimiento y
diferenciacin.
Mientras algunos tejidos solamente en medios completamente definidos y
complementados con ciertos microelementos, vitaminas y sustancias promotoras
de crecimiento pueden ser cultivados obteniendo respuestas favorables al cultivo
in vitro.
Teniendo en cuenta la gran cantidad de informacin que puede obtenerse de la
literatura sobre el cultivo de tejidos vegetales , esta puede convertirse en una
herramienta valiosa para la seleccin de un medio de cultivo , la dificultad se
deriva de la confiabilidad de la informacin obtenida , pues , normalmente se
omiten o no son completos y claros algunos de los procesos desarrollados .
Por ello es importante comprender la parte bsica del sistema biolgico con el cual
se espera trabajar, tal como la definicin del material desde el punto de vista
taxonmico, gentico y de desarrollo, ya que se presenta variabilidad en la
respuesta obtenida de acuerdo al genotipo utilizado y de la forma como se realice
el cultivo.
A menudo el problema se basa en la interpretacin de los materiales biolgicos
empleados en los trabajos experimentales, encontrndose diferencias en las
descripciones morfolgicas de los orgenes de los explantes.

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As mismo las supresiones o modificaciones de varios o muchos de los


compuestos utilizados en los medios bsicos frecuentemente complejizan la
interpretacin de los resultados obtenidos.
Para obviar esta dificultad es
conveniente que la informacin indique la designacin de las sales minerales y de
los suplementos de crecimiento y el valor del pH del medio.
El desarrollo de los materiales in vitro es altamente dependiente de la interaccin
entre la ocurrencia natural de procesos de organognesis , la presencia natural de
reguladores de crecimiento y de reguladores en el medio, por ello las respuestas
pueden mostrar marcadas diferencias de acuerdo a la combinacin de estos
factores.
Composicin de los medios de cultivo
Podemos en forma general decir que un medio de cultivo contiene:

Una fuente de carbono.


Nutrientes minerales
Vitaminas.
Un agente gelificante ( en el caso de medios slidos o semislidos)
Hormonas vegetales.
Otros compuestos.

Generalmente cuando se hace referencia a un medio basal se hace referencia a


aquel medio que contiene una fuente de carbono, nutrientes minerales y
vitaminas.
Fuentes de carbono
Son la fuente de carbono y energa, y ms teniendo en cuenta que los explantes
cultivados in vitro son ampliamente heterotrficos, en sus primeras fases.
La sacarosa es la fuente ms utilizada ( 1 al 5%), pudiendo reemplazarse por
glucosa y en menor medida por maltosa y galactosa.
Nutrientes minerales
En los medios de cultivo cualitativamente se encuentran los mismos elementos (
macro y Micronutrientes) que son requeridos esencialmente para el crecimiento de
plantas. (ver tabla 8 funcin de los macro y micronutrientes ).

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Vitaminas
Si bien todos los medios contienen comnmente vitaminas que in vitro favorecen
el crecimiento de tejidos, hasta el momento la nica vitamina que se considera
necesaria en medios de cultivo es la Tiamina(0.1- 1 mg/L).
Aunque se han sealado efectos benficos del cido pantotenico, la piridoxina, la
riboflavina, y el cido nicotnico.
Agente gelificante
En los medios semislidos o slidos comnmente se utiliza el agar (0.3-1%),
considerndose importante la pureza del mismo, pues sus minerales trazas
pueden alterar la respuesta in vitro.
Hormonas vegetales o reguladores de crecimiento
Los fitoreguladores, fitohormonas, reguladores de crecimiento vegetal, hormonas
de crecimiento vegetal, son compuestos orgnicos sintetizados por las plantas
superiores, que influyen sobre el crecimiento y desarrollo, actan generalmente en
un lugar diferente a donde son producidas y se encuentran presentes y activas en
muy pequeas cantidades.
En el cultivo in vitro , estos compuestos naturales o sintticos juegan un papel
muy importante ya que la clase y concentracin interacta con el genoma de la
planta, siendo responsables de la distribucin de los compuestos que la planta
biosintetiza y determinan el crecimiento relativo de todos los rganos de la planta.
En general los explantes in vitro podran presentar las siguientes necesidades
hormonales:
1.
2.
3.
4.

Explantes que no requieran ni auxinas ni citoquininas


Explantes que requieran solo auxinas.
Explantes que requieran solo citoquininas.
Explantes que requieran tanto auxinas como citoquininas.

En el caso de especies en las que no se haya trabajado previamente se deben


plantear las necesidades hormonales, su concentracin absoluta y relativa y si son
necesarias otros tipos de hormonas.
Si se requiere la utilizacin de reguladores especialmente auxinas
y/o
citoquininas, se debe establecer el tiempo en el cual permanecern los explantes
en cada etapa, ya que se puede producir el efecto de habituacin, es decir,
cultivos in vitro que inicialmente necesitan reguladores, para su crecimiento y/o
formacin de rganos, despus de algunos repicados , necesitan menores aportes
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de ellos, ya que han acumulado parte de los reguladores aportados en el medio de


cultivo y si se mantiene el nivel inicial puede generar alteraciones en los nuevos
explantes. ( ver tabla 7 , Hormonas y concentraciones de trabajo).

Auxinas

Producen elongacin celular y expansin de los tejidos, divisin celular (formacin


de callos), formacin de races adventicias, inhibicin de la formacin de brotes
axilares y adventicios.
La formacin de races se observa en bajas concentraciones , mientras la
produccin de callos se obtiene con concentraciones altas.
Dentro de las principales auxinas se encuentran:

El cido--indolactico (AIA) que se produce de manera natural en las plantas,


siendo sensible a la accin de enzimas, se oxidan en la luz y es termolabil.
El cido-- indolbutrico (AIB)
El cido naftalen-actico (ANA), su principal uso es la produccin de
rizognesis.
El cido indol-propionico (AIP).
El 2,4 D o cido 2,4 dicloro fenoxiactico.
El 2,4,5 T o cido 2,4,5 tricloro fenoxiactico. Estos dos ltimos son utilizados
principalmente para la formacin de callos, afecta procesos de fotosntesis y
puede producir vitrificacin de los explantes.
Citoquininas

Poseen una alta actividad sobre la divisin celular , retardan la senescencia de


los rganos vegetales, promueven la formacin de vstagos axilares
disminuyendo la dominancia apical , inducen la iniciacin del crecimiento en tallos
y yemas, y el rompimiento del letargo en yemas y semillas de muchas especies.
Para el cultivo de tejidos se utilizan las siguientes citoquininas:

Kinetina: 6-Furfuril-amino-purina
2ip: 6-Dimetil-amino-purina
BA: 6-Bencil adenina.
BAP: 6-Bencil-adenin- purina.
Zeatina: 6- (4-hidroxi-3 metilbut-2-enilamino) purina.
Adenina.
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En general la concentracin de trabajo est en funcin de su Molaridad as:


Para la proliferacin de tejidos 10-7 10-6 M.
Formacin de yemas sobre callos 10-6 10-5 M.
Proliferacin de meristemos axilares 10-5 10-4 M
Giberelinas
Las giberelinas son un grupo de compuestos que inducen la elongacin de los
entrenudos y el crecimiento de los meristemos o yemas en condiciones in vitro,
tambin pueden romper la dormicin de embriones aislados o yemas, inhiben
tambin la formacin de races y de brotes adventicios .
La Principal giberelina utilizada en condiciones in vitro es la GA 3
Tabla 7. Hormonas y concentraciones de trabajo
Auxina

Peso mol

Diluyente

esterilizacin

Concentracin
de
trabajo
(ppm)

2,4D

221

Etanol

AC

0.1-10
5

AC/F

0.001-10
ptimo 0.1-1

AC/F

0.1-10

NaOH 1N
AIA

175.2

Etanol
NaOH 1N

AIB

203.2

Etanol

optimo

NaOH 1N
AIP

189.2

NaOH 1 N

AC/F

0.1-10

ANA

186.2

NaOH 1 N

AC

1-10 optimo 2

2,4,5 T

255.5

Etanol

AC

0.01-5

Citoquinina

Peso mol

Diluyente

esterilizacin

Concentracin
de
trabajo
(ppm)

120

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BAP

309.4

Etanol

AC/F

0.1-5

BA

225.3

NaOH 1N

0.01-5

ZEATINA

219.2

NaOH 1N

AC/F

0.01-5

KINETINA

215.2

NaOH 1N

AC/F

0.1-5

Giberelina

Peso mol

Diluyente

esterilizacin

Concentracin
de
trabajo
(ppm)

KGA3

384.5

Agua

AC/F

0.01-5

GA3

346.4

Etanol

AC/F

0.01-5

AC =autoclave; F= filtracin.

Otros compuestos
Existen un tipo variado de compuestos que son incorporados a los medios de
cultivo, sobresaliendo principalmente :

Leche de coco(5-15% v/v)


Antioxidantes ( cido ctrico, cido ascorbico)
Aminocidos ( Sulfato de Adenina (2-120 ppm), glicina, asparagina, cistena,
tirosina, glutamina,etc.)
Carbn activado ( 0.1-5%)
Casena hidrolizada(0.1-1%)
Jugos de frutas
Extractos de papa o levadura.
Purinas y Pirimidinas.

121

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Tabla 8 Funcin de los Macro y Micronutrientes


Macronutrientes

Funcin

Nitrgeno

Sntesis de cidos nucleicos, protenas,


clorofila

Magnesio
Fsforo
Potasio

Sntesis de clorofila y ribosomas


Forma parte de la energtica celular
Regulacin
osmtica,
actividad
enzimtica, translocacin de azucares

Calcio

Componente de la membrana celular,

Azufre

Sntesis de aminocidos

Sodio

Importante el halofitas, y rutas C4 y


CAM

Micronutrientes
Molibdeno
Hierro
Manganeso

Funcin
Sntesis de protenas
Oxido-reduccin
Sntesis de Clorofila

Boro

Actividad meristemtica

Cobre

Proceso de lignificacin

Zinc

Cobalto
Cloro

Oxidacin
e
hidrolizacin
compuestos fenlicos
Componente de la vitamina B12
Evolucin del O2 en la fotosntesis

122

de

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Leccin 34. Preparacin de un medio de cultivo (Parte 1)


La preparacin de medios puede realizarse de dos formas, una de ellas es a
travs de medios comerciales con premezclas de los elementos constituyentes
del msmo, entre estos se consiguen los medios MS, B5, Nitsch and Nitsch, With,
Hiller, Vacin and Went, Anderson y otros . (ver tabla 9)
La otra forma , es a partir de soluciones stock concentradas o soluciones madre ,
siendo una prctica habitual en todos los laboratorios preparar soluciones stock
concentradas de los distintos componentes, agrupados teniendo en cuenta que
algunas sustancias son incompatibles con otras y producen fenmenos de
precipitacin como es el caso por ejemplo del Calcio y el Magnesio que forman
precipitados con fosfatos.
Es habitual trabajar con una solucin stock de macronutrientes, una de
micronutrientes, una de hierro con un agente quelante, otra de vitaminas y mioinositol, as como con soluciones especficas para los dems componentes del
medio
Las soluciones stock se deben mantener en frascos mbar, con una etiqueta que
los identifique con fecha de preparacin. Estas pueden mantenerse durante un
cierto tiempo en la nevera o en el congelador, para el caso de macro y
micronutrientes pueden almacenarse hasta por un ao, para vitaminas por tres
meses.
Mientras para las hormonas como el AIA debe emplearse antes de dos semanas
de preparacin, el cido ascorbico y las giberelinas se preparan en el momento de
la utilizacin, por lo cual es conveniente mantener soluciones stock de hormonas
por muy corto tiempo. (ver Tabla 7)
Tabla 9.Composicin de algunos medios de cultivo
COMPOSICION DE ALGUNOS MEDIOS DE CULTIVO
Medios (mg l-1)

Constituyentes
White's
NH4NO3

Heller's
-

MS

B5

Nitsch's

1.650,0000

1.900,0000 2.500,0000

KNO3

80,0000

CaCl2.2H2O

75,0000

123

440,0000

150,0000

720,0000
950,0000
-

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CaCl2

166,0000

MgSO4.7H2O

737,0000

250,0000

370,0000

250,0000

185,0000

KH2PO4

170,0000

68,0000

K2SO4

(NH4)2SO4

134,0000

Ca(NO3)2.4H2O

288,0000

NaNO3

600,0000

Na2SO4

200,0000

NaH2PO2.H2O

19,0000

125,0000

150,0000

KCl

65,0000

750,0000

KI

0,7500

0,0100

0,8300

0,7500

H3BO3

1,5000

1,0000

6,2000

3,0000

10,0000

MnSO4.4H2O

6,6500

0,1000

22,3000

25,0000

MnSO4.H2O

3,0000

ZnSO4.7H2O

2,9700

1,0000

8,6000

2,0000

10,0000

Zn.Na2.EDTA

Na2MoO4.2H2O

0,2500

0,2500

0,2500

MoO3

0,0001

CuSO4.5H2O

0,0010

0,0300

0,0250

0,0250

0,0250

CoCl2.6H2O

0,0250

0,0250

AlCl3

0,0300

NiCl2.6H2O

0,0300

FeCl3.6H2O

1,0000

FeSO4.7H2O

27,8000

27,8000

27,8000

Na2.EDTA.2H2O

37,3000

37,3000

37,3000

124

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Fe2(SO4)3

2,5000

Inositol

100,0000

100,0000

100,0000

Acido
Nicotnico

0,5000

0,5000

1,0000

5,0000

Piridoxina HCl

0,1000

0,5000

1,0000

0,5000

Tiamina HCl

0,1000

0,1000

10,0000

0,5000

Glicina

3,0000

2,0000

2,0000

Acido Flico

0,5000

Biotina

0,0500

Sacarosa

20,0000

30,0000

20,0000

20,0000

pH

5,5

5,7

5,5

Preparacin de un medio partiendo de soluciones stock


Para la preparacin de un medio de cultivo a partir de soluciones stock, se
desarrollan los siguientes pasos:
1. En un erlenmeyer agregue un volumen conocido de agua destilada esteril.
2. Aadir el volumen de soluciones de macronutrientes, micronutrientes y
vitaminas , agitando.
3. A continuacin, aadir la solucin stock que contenga la fuente de hierro y
agitar.
Se debe tener en cuenta que se debe utilizar una pipeta por solucin stock
agregada , adems de tomar el volmen requerido de acuerdo al a cantidad de
medio a preparar.
4. Agregar la fuente de carbono y agitar hasta que se disuelva completamente.
5. Completar con agua destilada esteril al volumen requerido de Medio, agitar y
ajustar el pH para que se encuentre entre 5,7-5,9., aadiendo NaOH 0.1 N o
HCl 0.1N al medio.

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6.Si el medio a preparar se requiere que sea semislido o slido, se agrega el


agente gelificante, agitando y calentando la solucin hasta que se formen un
rosario de burbujas , sin dejar ebullir.
7.Verter el contenido en los recipientes de cultivo, procediendo a taparlos
esterilizandolos en autoclave..

8. Cuando finalice el proceso de esterilizacin, dejar enfriar el material para que el


medio adquiera una textura gelatinosa.
El medio de cultivo puede permanecer en buenas condiciones durante una
semana si se almacena a temperatura ambiente, y hasta un mes si se conserva a
4 C.
Conviene tener en cuenta que algunos de los componentes del medio de cultivo
pueden ser termolbiles (algunas vitaminas, algunos reguladores,...). En este
caso, la esterilizacin de la solucin que contienen la substancia termolbil debe
hacerse por filtracin y aadirse una vez esterilizada al medio de cultivo .
Clculo de soluciones stock
Para el clculo de las soluciones stock, como un primer criterio se debe determinar
los requerimientos de medio de cultivo, teniendo en cuenta el tiempo de
almacenamiento mximo.
Como ejemplo se realizarn los clculos para soluciones stock del medio MS, en
los cuales se requieren 5 litros de medio para un tiempo de experimentacin de
seis meses y se prepararn 2 litros de una solucin stock de vitaminas .(columna
4)
Ya definidas las necesidades del medio de cultivo y el agrupamiento de las
soluciones stock se define cual es el volumen en mililitros de cada solucin
necesarios para la preparacin de un litro de medio, normalmente se utilizan
valores fcilmente divisibles por si se requiere preparar no un litro de medio sino
menores volmenes.(columna 5)

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Tabla 10. Clculo de solucines stock, Medio MS


COMPUESTO

SOLUCION

mg/L

(2)

(3)

(4)

(5)

(6)

(7)

NH4NO3

1650

20

100

8,25

KNO3

1900

20

100

9,5

(1)

L de medio mL de
mL de la
requeridos solucin
solucin
stock para 1 stock
L de medio

Peso final
en gramos

MgSO4.7H20

370

1,85

MnSO4.H2O

22.3

0.1115

KH2PO4

170

25

0,85

ZnSO4.7H2O

8.6

0, 043

CuSO4.5H2O

0.025

0,000125

CaCl2.2H2O

440

2,2

CoCl2.H2O

0.025

0,000125

Na2MoO4.2H2O

0.25

25

0,00125

H3BO3

6.2

0.031

KI

0.83

0,00415

Na2.EDTA

37.3
E

0,0746
2

10

FeSO4.7H2O

27.8

0,0556

Tiamina-HCl

0.02

0,00004

Glicina

0.4
F

0, 0008
2

10

Acido nicotnico

0.1

0,0002

Piridoxina

0.1

0,0002

Mioinositol

100

127

10

20

0,2

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Como siguiente paso se calcula el volumen a preparar de la solucin stock as:


mL/L de solucin stock x Nmero de litros a preparar
Solucin A: 20 mL/ L x 5 L 100 mL
Solucin D: 5 mL/ L x 5 L 25 mL
Solucin E : 5 mL/ L x 2 L 10mL
Solucin G : 10 mL/ L x 2 L 20mL (ver columna 6)
Despus se calcula la cantidad total en gramos a pesar de cada uno de los
compuestos del medio as:
mg/L del compuesto x Nmero de litros a preparar
Solucin A con NH4NO3 : 1.650 mg/L x 5 L 8.250 mg ; 8,25 g
Solucin C con ZnSO4.7H2O: 8,6 mg/L x 5 L 43 mg ; 0,043 g
Solucin D con CoCl2.H2O : 0.025 mg/L x 5 L 0,125 mg ; 0,000125 g
Solucin E con FeSO4.7H2O : 27,8 mg/L x 2 L 55,6 mg ; 0.0556 g
(Para los dems clculos ver columna 7).

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Leccin 35. Preparacin de un medio de cultivo (Parte 2)


Clculo de concentraciones hormonales
En el cultivo de tejidos vegetales se acostumbra hablar de concentraciones de
uso y trabajo de sustancias tales como las hormonas vegetales en partes por
milln (ppm) , mg/L, mM y M tomando como referente su uso en un litro de
medio.
Por tanto es necesario clarificar la forma
de realizar los clculos de
requerimientos utilizando cualquiera de estas unidades.
Clculo de ppm y mg/L
Cuando se habla de partes por milln se habla de tener como base un milln de
partes, para el caso de una ppm tendremos que:
En una concentracin donde se tenga 1 ppm
quedara enunciado as:

expresado como notacin decimal

1x 10-6 mg
Ahora tomando como base un litro de medio quedara expresada as:
1x 10-6 mg/L
Teniendo en cuenta que hablamos de una parte por un milln de partes se puede
concluir que:
1 ppm es equivalente a 1 mg/L
Ejercicio de aplicacin
En medio litro de medio se requiere la adicin del producto A en una
concentracin de 50 ppm, Un producto B en una concentracin de 50 mM/L (
peso molar 745) y un producto C en una concentracin de 5M/L ( peso de una
mol 245). Calcular para cada producto la cantidad a pesar .

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Para el producto A tendremos:


1 ppm = 1 mg/L
Por tanto :
50 ppm = 50 mg/L
Como se preparar medio litro de medio y no un litro , la cantidad a pesar del
producto A ser de :
25 mg
Clculo en mM y M
Para poder realizar clculos de mM y M , se requerir conocer el peso de una
mol del compuesto a trabajar , para aclarar el clculo utilizando estas unidades
continuaremos realizando el ejercicio de aplicacin.
Para la sustancia B el peso de una mol es de 745 g , y 1 Mol tendr 1000 mM,
por tanto el peso de una mM ser de :
745 g / 1000 = 0,745 g
Como se requiere aadir al medio 50 mM/L , entonces se requiere :
0,745 g x 50 = 37,25 g/L
de los cuales se requerirn 18,625 g del compuesto B para el medio litro
requerido.
Para el compuesto C tendremos que una mol tiene 1 x106M, por tanto si un mol
del compuesto pesa 245 g , el peso de una M ser de :
245 g /1 x106 = 0,000245 g
Como se requiere aadir al medio 5 M/L , entonces se requiere :
0,000245 g x 5 = 0,001225 g/L
de los cuales se requerirn 0,0006125 g o 0,6125 mg del compuesto C para el
medio litro requerido.

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CAPITULO 8. ASPECTOS BSICOS DEL CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES


(PARTE 2)
Leccin 36. Control preventivo de la contaminacin (Parte 1).
El cuidado primordial que se debe tener al hacer cultivo in vitro es la conservacin
del material y los medios de cultivo libres de microorganismos.
Donde la contaminacin por hongos y bacterias( incluyendo Agrobacterium,
Bacillus,
Corynebacterium,
Enterobacter,
Lactobacillus,
Pseudomanas,
Staphylococcus, y Xanthomonas.), son uno de los mayores problemas que
afronta quien trabaja en este campo.
Aunque tambien se pueden presentar levaduras y virus , estos ltimos son de
difcil deteccin y pueden influir en etapas posteriores del cultivo.
Las siguientes son las fuentes donde se encuentran contaminantes y sobre los
cuales se requieren medidas de prevencin:
Los tejidos
La puesta en cultivo es un proceso que consiste en obtener material vegetal in
vitro libre de microorganismos, a partir de material vegetal ex vitro.
Estos tejidos pueden llevar contaminantes tanto en su superficie como en su
interior, para la desinfeccin superficial de estos tejidos, aunque existen una gran
variedad de productos qumicos que se pueden utilizar como desinfectantes
superficiales, en la actualidad es casi generalizado el empleo de etanol (70%) y
del hipoclorito de Sodio (NaOCl) en concentraciones del 1 al 3% , un producto
alternativo al hipoclorito de sodio es el hipoclorito de calcio (Ca(COCl) 2) que se
utiliza en concentraciones del 2 al 12%.
Otro agente esterilizante es el cloruro de mercurio (HgCl2), el cual se disuelve en
agua a una concentracin de 0,01-0,5 (p/v). El material vegetal est en contacto
con el producto durante 2-12 minutos, para ser enjuagado concienzudamente con
agua estril al final del proceso. Este producto debe utilizarse bajo medidas de
seguridad, ya que es nocivo para la salud.
En algunos casos resulta til la adicin de algn agente tensoactivo (TWEEN 20
80 en concentracin del 0.01 al 0.1%).
En el proceso de desinfeccin es conveniente agitar el tejido conjuntamente con la
solucin desinfectante, y despus de tratar los tejidos con las soluciones
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desinfectantes, es necesario remover de l, los restos del tejido mediante varias


lavadas de agua destilada estril con 2 a 3 enjuagues sucesivos ( 2, 5 y 15
minutos , respectivamente).
Este proceso de esterilizacin superficial presenta, dos problemas: la capacidad
de los agentes esterilizantes para daar los tejidos vegetales y la presencia de
microorganismos en el interior de dichos tejidos.
En el primer caso, se aconseja disminuir la concentracin y/o tiempo de exposicin
a los agentes esterilizantes. Con esta medida disminuyen los daos al material
vegetal pero aumenta el porcentaje de contaminacin.
En el segundo caso, el proceso de esterilizacin no tiene el efecto deseado puesto
que los microorganismos internos no se eliminan y pueden proliferar en el medio
de cultivo, por lo cual se puede llegar a requerir productos fungistticos o
bacteriostticos, dentro de estos ltimos los ms recomendados por su amplio
espectro son el Sulfato de Gentamicina, ,el sulfato de estreptomicina, Penicilina,
Kanamicina, y Rifampicina en concentraciones de 10-50 mg/L.
El rea de trabajo
Deben tenerse en cuenta como medidas preventivas la limpieza y orden riguroso
en los mesones de trabajo , limpindo no solo los mesones sino paredes con
alcohol , hipoclorito o algn detergente., para evitar la acumulacin de esporas de
hongos y bacterias.
En el rea donde se encuentra la cmara de flujo donde se realiza gran parte de
las manipulaciones propias del cultivo in vitro donde se requieren condiciones de
esterilidad total para evitar la contaminacin de los cultivos se deben tener en
cuenta aspectos tales como la limpieza diaria, no introducir ningn material
infectado, no permitir la entrada a objetos o personas innecesarias, no utilizar la
cmara como almacn y antes de comenzar a trabajar en ella encenderla de 15 a
30 minutos antes de su uso.
As mismo es necesario el mantenimiento de la cmara limpiando los filtros de
forma regular y remplazndolos anualmente.

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Leccin 37. Control preventivo de la contaminacin (Parte 2).


Los instrumentos
Los instrumentos metlicos tales como pinzas requieren de mantener las
condiciones de esterilidad, por lo cual es importante mientras se utilizan colocarlos
en alcohol etlico y flamearlos cuidadosamente, manteniendo varios juegos
mientras se trabaja.
El material de vidrio y los elementos necesarios para la labor de siembra (Pinzas,
esptulas, bistures, agua) deben esterilizarse ya sea en autoclave o en estufa, si
es en estufa u horno de acuerdo a la temperatura empleada se requieren unos
tiempos especficos como se muestra a continuacin:
Tabla 10.Relacin de tiempo y temperatura para esterilizacin en estufa
Temperatura 0C

Tiempo en minutos

121

15-30

140

10-20

160

7-15

160-180

5-10

El material debe envolverse en papel para evitar la adherencia de contaminantes


mientras se guardan y utilizan.
El investigador
Es la fuente primaria de contaminacin por tanto debe utilizar batas de laboratorio
limpias, mascarillas para nariz y boca, gorro para el cabello y polainas, siendo
necesario antes de iniciar su trabajo lavar brazos y manos con agua y jabn y
enjuagarse con alcohol al 70%.

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Leccin 38. La esterilizacin y sus mtodos.


Se entiende por esterilizacin a la destruccin total de los microorganismos por
medios fsicos y se utiliza principalmente sobre los medios de cultivo y el agua a
utilizar en procesos de enjuague de tejidos o de preparacin de medios.
Para este proceso se utiliza principalmente el autoclave y la filtracin.
El autoclave
Esteriliza por medio del vapor bajo presin siendo muy eficiente para la
destruccin de bacterias y hongos y sus esporas, Su efectividad depende del
tiempo, de la presin, de la temperatura y del volumen del objeto a esterilizar,
normalmente se acostumbra utilizar una presin de 15 libras; a esta presin la
temperatura del vapor es aproximadamente 121 0C (250 0F), como puede verse a
continuacin:
Tabla 11.Relacin volumen- tiempo de autoclaveado
Volmen del medio/recipiente (ml) Tiempo mnimo (minutos)
20-50

15

75

20

250-500

25

1000

30

1500

35

2000

40

Nota: el tiempo se empieza a contar cuando se alcanza la presin de 15 libras.


Las ventajas de este sistema son:

Velocidad.
Destruccin adicional de virus.
Simplicidad

Mientras sus desventajas son:


Puede haber cambios en el pH del medio de 0.3 a 0.5 unidades.
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Algunos compuestos se pueden separar: zeatina, cido giberlico, sacarosa,


Extractos vegetales, enzimas.
Pueden producirse reacciones qumicas que resulten en una prdida de
actividad, si la temperatura es demasiado alta.
A altas temperaturas los azcares pueden caramelizar, resultando txicos al
explante.
.por un proceso muy largo de autoclaveado se puede despolimerizar el agar o
puede ocurrir precipitacin de sales.
Filtracin

La filtracin se usa cuando se deben aadir al medio sustancias termolbiles,


donde las soluciones o medios lquidos pasan a travs de un filtro de membrana,
donde son retenidas partculas de microorgansmos de mayor tamao que el
correspondiente tamao de poro del filtro.
Los filtros que se utilizan son de Nitrato o acetato de celulosa , con tamao de
poro de 0,22 .
Como mayor ventaja presenta que las sustancias termolbiles, pueden pasar a
travs del filtro sin sufrir ninguna modificacin, como desventajas se encuentran la
adsorcin de componentes del medio en la membrana, y si el poro no es lo
suficientemente pequeo, pueden pasar virus, adems de ser un proceso ms
complejo que el uso del autoclave, pues, se pueden presentar contaminantes
cuando existe una presin excesiva en el filtro, o se encuentran fugas en la lnea
de vaco.
El compuesto filtrado se aade despus de que el resto del medio se ha
autoclaveado y est a una temperatura razonable.

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Leccin 39. Posibles respuestas en el cultivo de tejidos vegetales (Parte 1).


El establecimiento de los cultivos de tejidos vegetales , esto es ,la separacin de
un determinado tipo de explante y los procesos relacionados con su incubacin,
dependern en gran medida del explante y del sistema de cultivo que se emplee,
los que a su vez dependern del objetivo perseguido.
Para su aplicacin en la agricultura , independientemente del sistema de cultivo in
vitro el producto final del proceso debe ser la regeneracin de plantas completas.
Sin embargo ,en algunos casos es posible encontrar repuestas no deseadas
dentro del proceso investigativo y aplicativo , en general podemos hablar de
respuestas tales como:
Sin respuestas
En esta situacin no se observa ningn cambio apreciable en el explante, aunque
en la mayora de los casos lo que se puede observar es un explante vivo que se
conserva as debido a los elementos nutricionales presentes hasta que el medio
se agote ocurriendo la muerte del explante .
Cultivo infectado
Pudiendo presentarse en parte del material sembrado o en su totalidad, como
consecuencia de contaminacin de tipo exgena, endgena o combinada.
Para identificar donde se presenta la contaminacin es importante revisar los
pasos seguidos y los procesos desarrollados durante el proceso de desinfeccin,
aislamiento y siembra del explante.
Oxidacin del explante
Ocurre un oscurecimiento del explante revelado por el oscurecimiento de la
superficie del medio, debido a la presencia de polifenoles.
Muchas plantas son ricas metablicamente en compuestos fenlicos los cuales se
manifiestan despus que un tejido se lesiona durante la diseccin in vitro.
La oxidacin de explantes se relaciona con la inhibicin de la actividad de la
enzima Polifenoloxidasa (PPO) , bloqueando el metabolsmo celular e induciendo
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el oscurecimiento de los explantes hasta la muerte del tejido celular en algunos


casos .
El control de la oxidacin puede realizarse en el proceso de desinfeccin del
material vegetal, en el momento del aislamiento de explantes o en el medio de
cultivo utilizando para ello cido ctrico, cido ascorbico, polivinilpirrolidona o
carbn activado, este ltimo en el medio de cultivo.

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Leccin 40. Posibles respuestas en el cultivo de tejidos vegetales (Parte 2).


Formacin de callo
La formacin de callo, como un proceso en el cual tanto la elongacin celular
como la divisin celular ocurren de manera desordenada y catica , debe tomarse
como una respuesta indeseable a menos que se busque variabilidad para la
obtencin de materiales para mejoramiento vegetal, debido a procesos de
mutacin inducida.
Callo ms regeneracin indirecta
En este caso ocurre primero la formacin de un callo, pero posteriormente ocurre
la regeneracin de estructuras que pueden conducir a la conformacin de una
nueva planta.
Una primera posibilidad es el proceso de organognesis indirecta que permite la
conformacin de vstagos y brotes de los cuales se derivarn nuevas plantas, en
el caso de que se logre la conformacin de brotes areos y races en forma
independiente dentro del explante, este material se debe eliminar por presentar
una variabilidad gentica muy alta con alta inestabilidad en su respuesta.
La otra posibilidad es el proceso conocido como embriognesis somtica por el
cual se conforman estructuras bipolares similares a los embriones cigticos y del
cual se puede derivar una planta completa.
Vitrificacin
El proceso de vitrificacin, hiperhidratacin, suculencia, o cristalizacin se refiere
a un conjunto de caractersticas fsicas, que describen cambios en las hojas, tallo
y raices que le dan a la plntula una apariencia cristalina, acuosa, hmeda y
translcida.
Estos desrdenes, van a impedir el normal establecimiento de plantas
micropropagadas a condiciones ex vitro.
Las causas de estas malformaciones estn
ligadas a las especiales
caractersticas del cultivo in vitro: factores nutricionales sobredimensionados y/o
superfluos (elementos minerales, carbohidratos) y elevadas dosis de reguladores
de crecimiento,, que producen un efecto subtxico global; una baja intensidad
luminosa durante la incubacin; y la humedad relativa y un potencial hdrico, que
son el factor clave para explicar estas complejas anormalidades morfogenticas
producidas en condiciones de cultivo de tejidos in vitro.

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CAPITULO 9. LA MICROPROPAGACIN DE PLANTAS


Leccin 41. Generalidades de la Micropropagacin
Cuando se evidencia que la mayora de plantas que se propagan mediante
metodologas in vitro utilizan pequeos trozos de tejido o de rganos en
condiciones aspticas, con el fin de conseguir nuevas plantas, se podra pensar
que no se presenta una gran diferencia entre la propagacin convencional y la
micropropagacin.
El termino de Micropropagacin , desarrollado por Hartmann y Kester en 1.968 es
utilizado como trmino general para designar cualquier tcnica in vitro aplicada a
la propagacin de plantas.
Por tanto en la micropropagacin se busca reproducir de la forma ms aproximada
posible todos los factores que puedan incidir en la propagacin cuando esta
sucede en forma convencional , aunque lo veremos ms adelante , otros factores
propios de la tcnica de cultivo pueden afectar la respuesta esperada.
La micropropagacin "in vitro" de plantas como lo presenta Roca (1993) se puede
definir como *cualquier procedimiento asptico que comprenda la manipulacin ,
en las plantas, de rganos, tejidos o clulas que produzcan poblaciones de
plntulas y que permitan el desvo tanto del proceso sexual normal como de la
propagacin no asptica que se practica convencionalmente*
Esto es posible gracias a la propiedad de totipotencia que tienen las clulas
vegetales; esto es la capacidad de regenerar una planta completa cuando estn
sujetas a los estmulos adecuados
Ventajas y desventajas de la micropropagacin
Las ventajas son las siguientes:
Elevada velocidad de propagacin. Esto se debe a que las condiciones de
cultivo estn controladas (luz, temperatura, composicin del medio, niveles y
relaciones hormonales, principalmente.)

Poco material de partida. Para hacer un cultivo in vitro no se requieren grandes


cantidades de material vegetal pudiendo lograrse resultados ptimos utilizando
material seleccionado de forma adecuada antes de iniciar el cultivo, que
permite adems manejar menores espacios que en la propagacin
convencional y la reduccin en tiempo y en costos.

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Multiplicacin de especies. Permite la propagacin de especies de difcil


propagacin convencional, o protegidas o en peligro de extincin.

Mayor control sobre la sanidad del material que se micropropaga. Es el caso


de la obtencin de plantas libres de virus, partiendo de meristemos .

Produccin continua. Ya que la produccin de nuevos materiales se puede


mantener durante todo el ao, sin ser afectadas por condiciones ambientales
externas.

Como desventajas presenta:

Problemas de contaminacin. Las fases tempranas del cultivo se contaminan


con mucha facilidad, lo que produce grandes prdidas econmicas.

Especificidad. Las tcnicas de cultivo aplicadas a una especie vegetal pueden


no servir para otra especie vegetal, o incluso para otra variedad Ello implica
desarrollar mtodos especficos para cada caso.

Inversin inicial elevada. El coste inicial del cultivo es alto, sobre todo por el
mantenimiento de la planta en condiciones controladas y por las instalaciones
que se necesitan. Esto debe compensarse con una alta produccin de plantas
y con un valor aadido sobre el producto final.

Instalacin y personal especializado. Los cultivos in vitro, por el hecho de que


requieren estar muy controlados, deben de realizarse en instalaciones
altamente especializadas y con un personal con alta formacin en el campo.

Las tcnicas de propagacin no deben producir alteracin gentica. Esto es ,


durante ninguna parte del proceso se deben permitir la formacin de callos,
que favorecen cambios mutacionales .

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Contenido didctico del curso Propagacin y Micropropagacin de Plantas

Leccin 42. Etapas de la micropropagacin


Etapa 0: Preparacin del material vegetal
El empleo de explantes que se encuentren expuestos a bajos niveles de
contaminantes exgenos y endgenos puede resolverse con el manejo que se le
d a la planta donante durante esta etapa.
La planta donante debe elegirse sobre la base de un proceso de seleccin ,
teniendo en cuenta las caractersticas agronmicas y/o potenciales deseables.
Una vez seleccionados los individuos, es preciso definir el tipo de explante a
establecer en condiciones in vitro. En general, los rganos jvenes o bien
rejuvenecidos son los que tienen mejor respuesta en el establecimiento que los
obtenidos a partir de materiales adultos.
La eleccin del explante apropiado constituye el primer paso para el
establecimiento de los cultivos in vitro, dicha eleccin est determinada por el
objetivo perseguido y la especie vegetal utilizada.
Si por ejemplo se busca la proliferacin de callos , es factible la utilizacin de una
amplia gama de explantes desde que contenga clulas nucleadas vivas, si la
obtencin de callos no est limitada por el tipo de explante , la seleccin del
mismo se har teniendo en cuenta la disponibilidad , facilidad de manipulacin,
homogeneidad, baja contaminacin por microorganismos y rpida respuesta in
vitro.
Con respecto a la especie vegetal es importante tener en cuenta la variabilidad
gentica asociada con el genotipo, ya que es frecuente que en condiciones
homogneas del medio de cultivo y ambiente las respuestas in vitro de un
determinado explante de una especie difiera en respuesta con otro explante
distinto de la misma especie.
La respuesta de los explantes puede variar de acuerdo con el estado de
desarrollo y la edad, considerndose la misma como la edad el material es decir
el perodo de tiempo desde cuando se origin.; la edad fisiolgica , donde el
explante se considera joven o viejo de acuerdo a si es derivada de un aparte de la
planta que se encuentre en una fase juvenil o adulta; la edad secuencial
considerando que las clulas no diferenciadas se encuentran en rganos juveniles
y clulas diferenciadas se encuentran en rganos ms viejos.

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Aspectos tales como pretratamientos a explantes , las condiciones de crecimiento


de las plantas donantes, y la poca del ao en que se toma el material tambin
pueden afectar la respuesta del explante.
Etapa 1: Establecimiento del cultivo
En esta etapa los principales procesos a controlar son la seleccin, el aislamiento
y la esterilizacin de los explantes.
El objetivo de esta etapa es establecer explantes axnicos, donde la seleccin y la
concentracin de los productos para la eliminacin de los contaminantes, as como
el tiempo de desinfeccin se determinan, en gran medida experimentalmente por
pruebas y evaluaciones de prueba y error.
Etapa 2: Multiplicacin
El objetivo de esta etapa es mantener y aumentar la cantidad de brotes para los
nuevos ciclos de multiplicacin sucesivos y poder destinar parte de ellos a la
siguiente etapa
Es importante sealar que en esta etapa, cualquiera que sea la va de
regeneracin empleada, para procesos de micropropagacin es conveniente evitar
la formacin de callo para disminuir el riesgo de variabilidad . En esta etapa, los
medios de cultivo, los reguladores de crecimiento y las condiciones de crecimiento
juegan un papel crtico sobre la multiplicacin clonal de los explantes.
Los medios de cultivo influyen por una parte por la presencia de los nutrientes
requeridos por el explante para su mantenimiento y por otra parte las condiciones
de pH del medio , pudiendo afectar la solidificacin de los agentes gelificantes en
medios de cultivo slidos , la solubilidad y la absorcin de algunos componentes
del medio de cultivo, as como la actividad enzimtica.
Los tipos de reguladores, sus combinaciones y rangos de concentraciones deben
ser optimizados para cada especie, genotipo y etapa de multiplicacin .
As mismo, las condiciones del cuarto de incubacin tales como fotoperodo e
intensidad lumnica y las condiciones de temperatura tienen una alta incidencia
en la respuesta del explante.
La temperatura a la que est expuesto el explante cultivado in vitro afecta a la
mayora de procesos fisiolgicos y por consiguiente es un factor fundamental a
controlar.
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Normalmente, se pueden obtener resultados satisfactorios con temperaturas de


incubacin que oscilan entre los 20 y 28 0C, con valores promedio de 25 C.
La luz es uno de los factores principales que determinan el desarrollo de los
organismos auttrofos, en ello radica la importancia de controlar el factor luz en los
cultivos in vitro.
Los aspectos relacionados con la luz que son importantes en los cultivos in vitro
son:
La cantidad de luz: LA IRRADIACIN (alrededor de 25 W/m2 o 100 mol/m2s )
La calidad de la luz: EL ESPECTRO (la fuente de luz ms usada es la lampara
fluorescente luz da.

La alternancia de los ciclos de luz con los de oscuridad: EL


FOTOPERODO(En forma general se utilizan 16 horas de luz y 8 horas de
oscuridad)

En esta etapa si hay presencia de compuestos fenlicos que producen oxidacin


y liberacin de exudados al medio , se puede inhibir el crecimiento de los
explantes.
Para controlar y limitar al mnimo la produccin y oxidacin de los compuestos
fenlicos, se pueden emplear agentes absorbentes de fenoles en el medio de
cultivo, tales como el carbn activado y la polivinilpirrolidona o antioxidantes como
el cido ascrbico o el cido ctrico .
Es recomendable adems lograr que la tasa de intercambio gaseoso entre los
ambientes del recipiente y externo sea ptima, evitndose la acumulacin de CO2
y de etileno por una parte y por otra parte el manejo de la humedad relativa.
En este sentido, el sellado del recipiente es importante, teniendo en cuenta que el
intercambio gaseoso es ms limitado con el empleo de una tapa de aluminio, que
con un film de polietileno extensible. En algunos casos la utilizacin de una tapa
perforada con tapn de gasa es altamente recomendable

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Etapa 3: Enraizamiento
En esta etapa se produce la formacin de races adventicias. En las especies
herbceas es relativamente fcil mientras que en las especies leosas es
complicado por su limitada capacidad rizognica.
El enraizamiento puede realizarse tanto en condiciones in vitro como ex vitro. En
el primer caso pueden emplearse varios tipos de sustratos y reguladores de
crecimiento (auxinas) para promover la rizognesis..
En un medio solidificado con agar, los nutrientes se reducen de 1/2 a 1/4 de la
composicin original, y la sacarosa se reduce a una concentracin final de 1-2%.
El empleo de agar aunque por un lado favorece la rizognesis en forma ms
sincrnica como resultado del contacto ntimo del material con el medio de cultivo ,
por otro lado produce races usualmente delgadas y poco funcionales.
Etapa 4:Endurecimiento
Una planta que se ha originado in vitro difiere en muchos aspectos de las
originadas in vivo. Las plantas cultivadas in vitro tienen generalmente la cutcula
escasamente desarrollada, Las clulas en empalizada tampoco estn muy
desarrolladas, son pequeas y se encuentran en pequeas cantidades.
Debido a la alta humedad (90-100%), Los estomas no son suficientemente
operativos, siempre estn abiertos.
Como consecuencia , cuando se transfiere la planta al suelo, se produce una
transpiracin cuticular extra, ya que la humedad del aire en las condiciones in vivo
es muy baja. As mismo las hojas de una planta producida in vitro son
frecuentemente finas, blandas, y fotosintticamente poco activas, y en
consecuencia mal adaptada a las condiciones que pueden encontrar in vivo,
adems de existir una pobre conexin vascular entre vstagos y races.
Por lo anterior, las plantas producidas in vitro requieren un cierto tiempo para
aconstumbrarse a las condiciones in vivo, de tal manera que quedan
endurecidas para afrontar el medio ambiente.
En esta etapa las plantas enraizadas in vitro o para enraizar in vivo, pero
obtenidas in vitro, se sacan del medio gelatinoso retirando los residuos del medio
adheridas a la planta, siendo sembradas en un sustrato estril contenido en
cmaras de vidrio o plsticas, utilizando como sustratos escoria fina, vermiculita
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ms tierra ( relacin 1:2), cascarilla de arroz ms tierra ( relacin 1:3) y suelo


cernido.
La plantas as sembradas deben cubrirse con bolsas plsticas o con vasos
desechables, manteniendo una alta humedad relativa,
e incorporando
fertilizantes foliares , la cobertura se ir retirando de manera secuencial hasta que
no exista dicha cobertura.
Figura 39. Etapas de Micropropagacin y sus potencialidades

Factores que influyen sobre la micropropagacin

Genotipo: la capacidad de regeneracin es muy variada, generalmente


regeneran mejor las Dicotiledneas que las Monocotiledneas , y se presenta
mayor regeneracin entre plantas herbceas que en las leosas. Adems
existen grandes diferencias en la capacidad de divisin celular y regeneracin
en plantas de la misma variedad pero de distinta variedad o cultivar.

Edad fisiolgica del explante: Mientras ms joven y menos diferenciado est el


tejido mejor ser la respuesta in vitro.

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Posicin del explante dentro de la planta: o topfisis que indica como la


influencia de la posicin del explante, afecta el crecimiento y desarrollo in vitro
, pudiendo explicarse este fenmeno por la acumulacin endgena de
fitoreguladores y por la edad en tiempo del material donante de explantes.

El explante: Siendo una parte de un tejido o de un rgano al aislarlo, el tamao


del explante puede tener influencia en el proceso de micropropagacin,
teniendo en cuenta que es ms difcil inducir una respuesta en estructuras muy
pequeas que en estructuras de mayor tamao, debido a la acumulacin de
sustancias de reserva y contenidos hormonales , por otra parte el proceso de
desinfeccin es ms complejo en estructuras grandes que en estructuras de
menor tamao.

Superficie de exposicin: Si la superficie de exposicin es demasiado grande


se producir etileno, que es perjudicial para el proceso de micropropagacin,
pero por otra parte cuanto mayor sea la superficie, mayor ser la capacidad de
absorcin de nutrientes y reguladores.

Posicin de siembra: los explantes pueden situarse en el medio en diferentes


formas ( ver figura 40 )Polar, con su base fisiolgica apoyada sobre el medio.
Apolar, al revs, invertido.

Figura 40. Posicin de siembra de los explantes. Tomado de Roca

Teniendo en cuenta los anteriores aspectos, como criterios deseables para


obtener xito en el proceso de micropropagacin in vitro se pueden considerar:

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Que se mantenga la estabilidad gentica de las plntulas obtenidas, para ello


es deseable la utilizacin de meristemos , yemas y segmentos nodales donde
se mantiene la estabilidad gentica.

Realizacin de una seleccin cuidadosa del material de partida.

Es deseable que la transferencia de etapa a etapa no sea compleja.

As mismo la propagacin in vitro no debe ser compleja.

No debe perderse la capacidad de regeneracin, para ello es conveniente no


utilizar muchos repicados.

Debe ser econmicamente viable.

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Leccin 43.Fases de laboratorio

En el laboratorio se presentan tres fases que siempre ocurrirn sin tener en cuenta
el tipo de explante o la metodologa de micropropagacin utilizada , estas son:
Fase de aislamiento
Los explantes deben separarse de la planta donante, esta labor de corte y
separacin del explante se puede realizar sobre una placa de cristal estril,
presentando como desventaja que los instrumentos cortantes pierden rpidamente
su filo, o tambin sobre papel de filtro estril, siempre debe tenerse en cuenta el
tamao de la seccin cortada.
Fase de inoculacin.
Durante la inoculacin o siembra, el tubo o frasco conteniendo el medio de cultivo
slido debe estar en principio en posicin horizontal, pues, esto reduce
fuertemente la posibilidad de contaminacin, sobre todo cuando no se trabaja con
cmara de flujo laminar.
El flameado del cuelo de tubo o frasco es desaconsejable por la entrada de etileno
en el recipiente.
El mtodo de inoculacin sobre medios slidos depende en gran medida del tipo
de explante con que se trabaje, las semillas y embriones se ubican sobre el
medio, al igual que los meristemos; mientras explantes de hojas, yemas,
segmentos nodales, se introducen ligeramente en el medio.
Fase de repicado.
Esta fase involucra principalmente el paso del explante y de la plantula obtenida a
las diferentes etapas de la micropropagacin , o por otra parte al nmero de veces
que separo brotes obtenidos in vitro para aumentar el material propagado.
Pero, puede realizarse adems porque el medio nutritivo esta agotado (se
presentan sntomas de deficiencia) o el medio se seca, o por que el tejido u
rgano ha crecido de tal forma esta ocupando todo el frasco; o por cambios de
coloracin en el medio, o por que se han presentado alteraciones en la estructura
del medio.

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Leccin 44. Propagacin por segmentos de hoja y por meristemos

Propagacin por segmentos de hoja


A pesar de que todos los cultivos de tejidos se generan de rganos o de sus
secciones, la organognesis del progenitor no siempre se mantiene durante el
desarrollo in vitro. Sin embargo, un cultivo de rganos tiene como objetivo el
alcanzar a partir de una estructura organizada, la morfologa y la fisiologa que lo
identifican con los rganos de su especie.
Hoy en da, el cultivo de segmentos de hoja se sigue utilizando, a pesar de que el
inters por el cultivo de rganos ha disminuido. Es importante anotar que se
incluye en esta forma de micropropagacin a las hojas modificadas tales como
ptalos e inflorescencias.
Se ha practicado el cultivo de hojas partiendo de material juvenil, en un medio
simple , que contenga sacarosa en concentraciones del 2-3%, en un medio slido
para explantes grandes y lquido para explantes pequeos, cultivndose
usualmente en luz, con un ciclo de oscuridad.
El cultivo de hojas se ha usado en la propagacin masiva por ejemplo de Cafeto,
Cattleya, , Miembros de la Familia Gesnariaceae como Saintpaulia; Sinningia;
Sttreptocarpus ; Episcia; Nautilocalyx ; Achimenes; Kohleria.
Adems de las Begonias , Algunas Solanceas cono tabaco, Petunia , etc. y en
Helechos.
El cultivo de hojas posibilita adems la evaluacin de los efectos de los nutrientes
y hormonas, a travs de la evaluacin de los sntomas de deficiencia en cultivo in
vitro.
Propagacin por meristemos
En los primeros estadios de desarrollo embrionario vegetal la divisin celular tiene
lugar en todo el organismo, pero a medida que el embrin se desarrolla y se
transforma en una planta adulta la adicin de nuevas clulas se restringe a ciertas
partes de la misma, mientras que el resto de la planta se especializa para otras
actividades especificas.
Estos grupos de clulas que retienen su actividad embrionaria durante toda la vida
de la planta se denominan meristemos.
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Estos meristemos se pueden clasificar como primarios o apicales proceden


directamente de clulas embrionarias , se sitan en los extremos de la raz y el
tallo, y determinan el crecimiento en longitud de la planta y los meristemos
secundarios o laterales se originan a partir de clulas adultas que recuperan su
capacidad de divisin. Se localizan en posicin lateral en los rganos que los
presentan, y hacen que stos crezcan en grosor (crecimiento secundario). ( Ver
figura 41)
Figura 41. Clasificacin de los meristemos. Tomado de Margara 1.988

Aplicaciones
Multiplicacin masiva
Aprovechando el potencial morfogentico que tienen los meristemos, esto es, que
los meristemos estn diferenciados para formar rganos , por lo cual en
condiciones in vitro solo se requiere la elongacin y la formacin de raiz sin que
se presenten alteraciones genticas, y as es posible lograr la produccin y
multiplicacin de diversas especies vegetales.

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Produccin de plantas libres de enfermedades


Teniendo en cuenta que los virus pueden ser transmitidos en la multiplicacin
sexual( alrededor de 80) y que muchos cultivos comerciales propagados
vegetativamente contienen virus sistmicos, la alternativa de utilizacin de los
meristemos apicales , frecuentemente combinada con prcticas de quimio y
termoterpia para la produccin de materiales libres de enfermedades con
resultados xitosos, desde los trabajos de Morel y Martin en 1.952 quienes fueron
los primeros en obtener plantas libres de virus en Dalia.
Aunque en una planta un virus puede encontrarse en toda ella distribuido en forma
desigual, no se encuentra ubicado en el meristemo apical posiblemente por tres
mecansmos como son :1.la competencia en el meristemo, entre las partculas
viricas y la produccin celular; 2. La falta de elementos vasculares en el meristemo
dificultando el transporte de las partculas viricas; 3.presencia de inhibidores
naturales en la zona meristemtica.
La termoterpia se utiliza para aumentar las posibilidades de obtener plantas libres
de virus en casos difciles (varios virus presentes), puede ser ineficaz, si la planta
es muy sensible al calor, ya que la termoterpia combina la utilizacin de una
temperatura y un tiempo de tratamiento tal que la planta o parte de ella sea capaz
de sobrevivir, pero que permita la inactivacin del virus., pero tambin de hongos y
micoplasmas
Algunos virus son ms estables que otros, y esto causa diversos problemas en su
erradicacin, por lo que necesitan periodos ms largos para unos y ms cortos
para otros, con diferentes tratamientos. Algunas especies son daadas por las
altas temperaturas continuas, por lo que se recomienda una alternancia de
temperaturas altas y bajas, disminuyndose as los daos causados en los tejidos
de las plantas.
La Quimioterapia, consiste en la aplicacin de productos qumicos al medio de
cultivo, lo que ocasiona una mayor probabilidad de obtener plantas de patgenos,
por lo que al aplicarse diferentes productos quimioteraputicos de manera
exgena al medio de cultivo, se est asegurando la obtencin de material sano.
La forma como se realiza la siembra de meristemos puede observarse en el
siguiente esquema:

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Figura 42. Cultivo de meristemos

Los explantes
Los explantes para el cultivo de meristemos pueden clasificarse como:
Apical dome : cpula meritemtica sin primordios foliares.

Meristem tip: incluye la regin meristemtica subapical con dos primordios


foliares. (Ver figura 43)

Shoot tip: Incluye la regin meristemtica con varios primordios foliares hasta
una longitud de dos centmetros.

El cultivo de shoot tip es ventajoso cuando la eliminacin de virus no es parte del


objetivo del trabajo, mientras apical dome y meristem tip son utilizados para la
limpieza de enfermedades.

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Figura 43. El meristemo y sus partes

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Leccin 45. Segmentos nodales


Con este nombre se conoce el aislamiento de una yema, junto con una porcin de
tallo para obtener un vastago a partir de la yema.
Este es el mtodo ms natural de propagacin vegetativa de las plantas in vitro, ya
que tambin se aplica en condiciones in vivo.
El aislamiento por este mtodo es imposible para plantas en roseta, y cuando las
posibilidades de infeccin son altas.
La velocidad de propagacin depende del nmero de yemas disponibles.
El mtodo de segmentos nodales ha producido un xito apreciable en papa, yuca,
uva, peral, rosa, etc.
Una variacin en el uso de las yemas axilares, siendo la diferencia ms
importante, que se utiliza casi exclusivamente para plantas sin tallos, donde
generalmente se necesita la citoquinina para el desarrollo de las yemas.
En la prctica se usa una combinacin de los dos mtodos, se permite a una yema
que se desarrolle y posteriormente se aade citoquinina para inducir la formacin
de vstagos axilares.
Yemas axilares y terminales pueden ser inducidas a desarrollarse in vitro. Una
nica yema puede producir un nico tallo, o dependiendo de la especie y del
medio, puede producir mltiples tallos. El proceso puede continuar
indefinidamente, si los tallos formados de las yemas iniciales desarrollan nuevas
yemas sobre su parte basal.
Los brotes basales o axilares se pueden producir a partir del explante
directamente o bien a partir de callos derivados del explante primario, actualmente
se prefiere la produccin directa del explante, ya que a partir de callos su
formacin ha sido difcil y frecuentemente presentan anormalidades genticas.
La regeneracin de rganos ( por formacin adventicia o por nueva formacin) que
no estn presentes en el momento del aislamiento, es un proceso
extremadamente complejo pudindose distinguir las siguientes etapas:

Desdiferenciacin de clulas diferenciadas ( que induce probablemente a una


redefinicin y rejuvenecimiento de las clulas).

Divisin celular, generalmente seguida por formacin de callo.

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Iniciacin de rganos (formacin) y desarrollo de rganos.

Debido a que las especies perennes y leosas, a diferencia de las anuales y


bianuales, han mostrado mayor dificultad para su micropropagacin, los avances
para estas especies no ha progresado rpidamente, teniendo en cuenta a que los
tejidos y los rganos diferenciados son poco sensibles en condiciones in vitro.
Es posible iniciar procesos de micropropagacin en algunas especies, con
explantes tomados de rboles maduros, a travs de la utilizacin de yemas
terminales de tallos que presentan crecimiento juvenil.
Arboles adultos que hayan demostrado unas caractersticas deseables son muy
atractivos para la propagacin masiva. Sin embargo, es usualmente ms difcil
establecer cultivos in vitro de rboles adultos, que de plantas juveniles, por ello
para facilitar el proceso in vitro o se pueden seleccionar tejidos juveniles dentro del
rbol o se pueden realizar pre-tratamientos de partes del rbol donante.
Algunos de estos pre-tratamientos incluyen aspersiones de citoquininas sobre las
yemas antes de la incubacin in vitro ; el uso de injertos de yemas maduras sobre
ramas juveniles antes de la excisin para el cultivo in vitro; la utilizacin de ramas
colocndolas en agua destilada adicionada con auxinas, citoquininas y cido
giberlico, para posteriormente tomar las yemas desarrolladas..
Figura 44 .Explantes nodales.

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Figura 45. Mtodo de segmentos nodales 1. Meristemo o pice caulinar. 2.


Aislamiento de un nudo. 3. Desarrollo el vstago. 4. Ramificacin axilar. 5.
Enraizamiento

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ACTIVIDADES DE AUTOEVALUACIN DE LA UNIDAD 3

Investigar tres (3) mtodos de mejoramiento gentico de plantas a partir de


la metodologa de la micropropagacin, indicando especies vegetales de
inters comercial sobre las cuales se han utilizado dichas tcnicas.

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