Anda di halaman 1dari 5

Resume dan Review Jurnal :

Biochemical markers of pollutant responses in macrozoobenthos from the White Sea


: Intracellular proteolysis
1. Pendahuluan
Kelimpahan spesies makrozobentos dapat digunakan sebagai objek dalam
ekotoksikologi pada persebaran daerah perairan pantai. Pada konsidi
diversity buruk terutama di Laut Putih di Daratan Kandalaksha - Russia,
kerang Mytilus edulis sebagai filter feeder dan ampipod Gammarus duebeni
sebagai suspensi feeder bisa dijadikan monitoring lingkungan yang kurang
baik terutama terhadap pengaruh factor polusi. Sebagai komunitas akuatik
dalam parameter biodiversity dan densitas perairan, kedua spesies ini dapat
pula dijadikan sebagai biomonitoring pada aspek-aspek lingkungan. Selain
itu, dapat juga dijadikan biochemical dan biomarker pada pengaruh utama
sebelum pengaruh bahan toksik menjadi level yang lebih tinggi. Disamping
itu, determinasi biomarker seperti gangguan oksidasi, komposisi membran
lemak atau control pada kualitas protein sudah berhasil dilakukan dalam studi
lapang utama dalam karakterisasi pengaruh wilayah terhadap kontaminasi
(produk minyak, logam berat, bahan-bahan organic dll).
Mekanisme ensim proteolitik atau adaptasi biochemical terhadap degradasi
abnormal (seperti oksidasi, misfolded dll) menyebabkan konsisi protein dan
protease mengalami hidrolisis dan juga proses multi biological active dalam
perubahan metabolism selluler.
Permasalahan yang masih ada yaitu
komposisi protease intraselluler
dijadikan control kualitas protein dalam indikasi terhadap adaptasi dan
patologi, studi parameter seperti biochemical dan biomarker organism yang
terkontaminasi.
Hipotesis dalam penelitian tersebut yaitu a. bahan organic yang dihasilkan
dari lombah domestik dan dekomposisi industri kayu; b. beberapa logam
berat seperti Cu, NI, Zn, Cr dan Pb tersendiri tidak mampu secara maksimal
terakumulasi dalam rantai tropis; c. produk minyak secara langsung
berpengaruh pada organism perairan dan distribusi gas berbeda antara
perairan dan udara.
Tujuan studi adalah 1. Mengetahui karakteristik protease intraselluler yang
cocok dijadikan biomarker pada kondisi lapang sebagai spesies indicator dari
Lingkungan Karang - Laut Putih dengan target bahan pencemar dan 2.
Mengetahui sinyal biomarker pada bivalve dab crustacea
2. Materi dan Metode
a. Langkah pertama adalah pembuatan reagent (salts dan kimia) protease
penghambat, substrat protein, berat marker molekuler dari Sigma-Aldrich,
US. Semua regent sudah ada tingkatan analisisnya. Peralatan yang
digunakan Ultra-Turrax TR 10 ultrasoinik homogenizer, UF 240-86 E
frezzing chamber. Rotina 35R sentripugasi, Optima Beckman LE 80
ultracentripugasi dan Hitachi-557 spektopotometer
b. Studi area di Kawasan Reservasi Alam Kandalaksha Laut Putih, Russia.
Sampling organism yang potensial terkontaminasi logam, bahan organic,
nutrient dan organic dengan input dari zon industri dan pencemar.
Perairan pada area studi maksimal kecepatan 20 m (shallow) dan tenang.
Inlet estuary dari dua air tawar yaitu dari sungai Niva dan beberapa anak
sungai lainnya.
1 | Review dan Resum Jurnal ; Moh. Awaludin Adam

c. Ekstraksi : Pelarut fraksi protein dan membran diekstraksi dari Seluruh


tubuh amphipods ( individu 4-5 per kolam , 8 ulangan per situs ) atau
kelenjar hepatopancreas kerang ( 8-10 spesimen per situs sampling) .
Sampel ( 0,5 g ) yang dihomogenisasi di 01:10 w / v 0,2 M TriseHCl
penyangga ( pH 7,4 ) dengan 0,25 M sukrosa dan protease cocktail
inhibitor ; homogenat disentrifugasi pada 15.000 rpm selama 30 menit
( Rotina 35R ; Hettich Zentrifugen , Jerman ) untuk mendapatkan fraksi
sitosol. Pelet terdiri dari komponen membrane disuspensikan dalam buffer
yang sama dengan 0,1 % deterjen non ionic Triton X - 100 untuk
memperoleh fraksi lisosom dan dimurnikan dengan sentrifugasi dalam
kondisi yang sama. Fraksi supernatan digunakan sebagai sumber sitosol
atau lisosom fraksi enzim proteolitik.
d. Gel filtrasi chromatography : Untuk fraksinasi bentuk molekul individu
Ca2+-pengaktif protease , sampel amphipod ( 4 ulangan dari 8-10
spesimen masing-masing) hepatopancreas atau sampel kerang ( 4 kolam
masing-masing 2-3 spesimen) 5.0 g total dihomogenisasi dalam buffer A
( 10 mM TriseHCl , pH 7,5 , yang mengandung 50 mM NaCl , 4 mM EDTA ,
dan 5 mM mercap - toethanol ) dengan 0,25 M sukrosa (1 : 3 b / v) dan
disentrifugasi ( 60 min di 105.000 g ). Volume fraksi 3,5 ml dikumpulkan
setelah ukuran - eksklusi kolom ( B5.0 cm , panjang 95,0 cm ) dengan
Sephacryl S300 diseimbangkan dengan penyangga A tanpa sukrosa di
Tingkat elusi 24 ml / jam dengan penyangga A seperti yang dijelaskan
sebelumnya ( Lysenko et al. , 2012b )
e. Aktifitas enzim protease : Aktivitas peptidase CatB di sitosol atau fraksi
lisosom diukur dengan hidrolisis 65 mM etil eter D-benzoil L-arginin
hidroklorida (BAEE) 200 mM dapar asetat (pH 5.0) di 37 OC (Bondareva et
al., 2003). Aktivitas enzimatik sebagian dipurifikasi CatB menggunakan
unit konvensional (AU) dengan reaksi absorbansi produk di 525 nm per g
jaringan per 30 menit (Hitachi-557; Hitachi Ltd, Jepang). Aktivitas
proteolitik CatD di sitosol atau fraksi lisosom diukur dengan degradasi 1%
hemoglobin bovine serum di 0,1 M buffer asetat (pH 3,6) pada 37 C
dengan teknik Anson dimodifikasi
(Bondareva et al., 2003). Nilai
absorbansi produk asam-larut trikloroasetat pada 280 nm per gram
jaringan per jam diperkirakan sebagai unit kegiatan CatD (AU). Kegiatan
calpain Caseinolytic diukur untuk setiap fraksi protein dielusi dari kolom
kromatografi (dijelaskan dalam Bagian 2,5) dalam campuran reaksi dari
komposisi sebagai berikut : 0,4% kasein, 5 mM dithiotreitol 50 mM
2 | Review dan Resum Jurnal ; Moh. Awaludin Adam

imidazol-HCl buffer pH 7,5, 30 mM Ca 2+ (sebagai CaCl2), dan solusi


enzimatik; total volume 2,5 ml. Setelah inkubasi pada 28 OC reaksi diakhiri
oleh volume yang sama dari 10% asam trikloroasetat. Komposisi kimia
yang sama dan Ca2+ ditambahkan pada penghentian reaksi. Aktivitas
enzimatik diperkirakan unit kegiatan (AU) didefinisikan sebagai jumlah
enzim yang menyebabkan peningkatan dalam absorbansi pada 280 nm
dengan 1,0 lebih dari 30 menit.
3. Hasil dan Pembahasan
a. Aktivitas Protease Lisosom
Suspense cathepsin lisosom tergantung degradasi protein yang menjadi
respon non - spesifik untuk multiple stres ditunjukkan dalam sebagian
besar invertebrata dari cukup terkontaminasi daerah . Selain itu, aktivitas
asam pro -teases, seperti CatB dan CatD , di amphipods ditunjukkan
korelasi negatif dengan tingkat pencemaran air pantai . di G. duebeni ,
penurunan yang signifikan dalam lisosom intra CatD bisa mencatat antara
wilayah kontrol S1 dan stasiun S5 , 6 , 7 , 10 , 11 dan aktivitas catb antara
S1 dan S5-9. Kemungkinan hasil adalah pencernaan yang tidak sempurna
atau " autophagy gagal " dengan akumulasi auto - phagic bahan dasarnya
terdegradasi ( Cajaraville et al, 1995 ; . . Krishnakumar et al, 1994 ; .
Moore et al ,
2006) .
Dalam sampel hepatopancreas dari kerang pada area tercemar,
mendeteksi baik penghambatan CatB (sistein-jenis protease) dan aktivasi
CatD (aspartat-jenis protease); itu menunjukkan selektif Peraturan
komponen proteolitik lisosom diprovokasi dampak polutan. Perubahan
yang paling signifikan dalam aktivitas cathepsin di kerang yang
disebabkan oleh penyerapan minyak (S11). Perbedaan yang ditemukan
antarspesies, dengan tren meningkatnya CatB (sistein-jenis protease)
aktivitas penurunan satu INM. edulis, kemungkinan besar menunjukkan
bahwa tidak ada langsung interaksi antara komponen polusi dan katalitik
SH- enzim yang khas untuk ion logam bervalensi dua; bukannya itu
tanggapan biomarker yang dipilih di invertebrata bisa mencerminkan
beban jaringan yang berbeda dari yang dipilih polutan yang dihasilkan
dari berbeda-beda dalam kebiasaan makan dan habitat hidup.
Pada tingkat sel , paparan polutan moderat menginduksi serangkaian
tanggapan umum yang termasuk perbaikan protein yang rusak atau
penghapusan puing-puing seluler dan molekuler yang disebabkan oleh
stres atau interaksi antarmolekul menyimpang dengan xenobiotik sel
penetrasi ( Kassahn et al , 2009; . Sokolova et al , 2012 . ) ; respon
terakhir membutuhkan aktivasi jalur degradasi protein utama seperti
sebagai ubiquitin - proteasome dan / atau sistem autophagy . Bersama
dengan degradasi protein yang rusak melimpah di toksikan accumula tion lisosom sistem hidrolitik yang bertanggung jawab untuk autophagy
tampaknya menyediakan mekanisme perlindungan melalui kedua dan
renovasi adaptif metabolisme protein dalam sel ( Ciechanover , 2005;
Moore et al ., 2006; Nemova et al. , 2010) . Pada gilirannya sistem lisosom
- autophagy dapat terganggu oleh lisosom stres akibat Permeabilisasi dan
ancaman sel dengan menumpahkan isi lisosom ke dalam sitoplasma.
b. Aktivitas protease -tergantung Ca2+
3 | Review dan Resum Jurnal ; Moh. Awaludin Adam

Dengan metode kromatografi eksklusi ukuran tiga fraksi calpain yang


mengandung amphipods dan kerang. Berat molekul 110, 85, dan 65 kDa
sebagai bentuk kerang calpain molekul dan 110, 80, dan 65 kDa untuk
amphipods. Karakteristik persiapan protease (pH optimal, sensitivitas
inhibitor, kadar kalsium diperlukan untuk aktivasi, dll). Meningkatkan total
aktivitas protease -tergantung Ca2+ terdeteksi di amphipods dan kerang
dari daerah tercemar (Gambar 2A dan B.);
perubahan yang lebih
signifikan yang diamati pada amphipods. Spesifik perubahan proteolisis
-tergantung Ca2+diamati di amphipod dari kawasan industri yang sangat
tercemar (S13;. Gambar 2A) dan juga di kedua spesies dari daerah
dominan dengan dampak minyak (S11;. Gambar 2A dan B). Peningkatan
yang signifikan dalam aktivitas total calpain Ing. Duebeni dari titik
pengambilan sampel yang terkontaminasi minyak (S11) disebabkan
kelebihan aktivasi di 80 fraksi calpain kDa, protein melalui kedua
degradasi protein selular normal dan reaksi regulasi pengolahan
Proteolitik yang penting untuk pengembangan adaptasi biokimia.
Peningkatan jelas dalam calpain molekul rendah fraksi (monomer diduga
dari 110 kDa dimer) konten menunjukkan pengolahan calpain berlebihan
dan kemudian aktivasi in vivo dan / atau ketidakstabilan molekul enzim.
Redistribusi toksik diinduksi total kolam calpain menjadi pecahan
enzimatik dengan prevalensi 110 kDa sifat khas untuk jaringan patologi
(Goll et al, 2003;. Lysenko et al, 2013;. Ono dan Sorimachi, 2012). Ada
bukti eksperimental yang m-calpain pada vertebrata (dan juga orthologue
diduga di dalam vertebratese110 kDa calpain) adalah hyperactivasi
akhirnya sebagai Hasil gangguan dalam homeostasis kalsium (Bakhmet et
al, 2012.; Goll dkk., 2003; Lysenko et al., 2013). Jadi terungkap bahwa
perbedaan Calpain berkontribusi dalam reaksi metabolisme adaptif dan
patologi jaringan.
Efek ini mungkin timbul dari kedua ketidakstabilan genom yang mengarah
ke penurut protein yang tersintesis abnormal dan / atau protein langsung
modifikasi ( kerusakan, oksidasi , kompleksasi , dll ) oleh xenobiotik dan
metabolitnya . jalur pertama jangka panjang dan hasil total populasi
setelah terpapar factor tersebut selama beberapa tahun, sedangkan jalur
kedua lebih efisien dan merespon dengan cepat dalam organisme
terhadap pencemaran lingkungan.
4. Kesimpulan
Meskipun variabilitas intra dan antarspesies dari jaringan aktivitas protease
dan bentuk molekul dalam invertebrata laut, Hasil mengkonfirmasi kontribusi
umum dari protease dalam adaptasi fisiologis spesies yang mendiami daerah
tercemar sebagai persyaratan sel protein dan control kualitas organel
meningkatkan dampak antropogenik. Gradien ditandai diamati di cathepsin
dan aktivitas calpain di invertebrata makro dipelajari dari daerah tercemar
dapat memberikan beberapa keuntungan dalam isu program biomonitoring
Gradien jelas ditunjukkan dalam suspense-feeder Mytilus edulis, sedangkan
sedimen yang tinggal Gammarus duebeni menunjukkan hasil lebih sebgai
biomarker. Amphipods menjadi lebih rentan terhadap respon kontaminasi
minyak M. edulis yang pasti akumulasi logam berat. Menggunakan dua spesies
invertebrata dengan berbeda nyata pada kebiasaan makan dan habitat. Oleh

4 | Review dan Resum Jurnal ; Moh. Awaludin Adam

karena itu, rute dari paparan polusi lingkungan dianggap strategi rasional
sebagai biomonitoring pencemaran wilayah laut pesisir.
Singkatnya, temuan menunjukkan bahwa perubahan seluler, seperti berkurang
stabilitas membran lisosom dan aktivitas protease yang terpapar pencemar
lingkungan cenderung dipertahankan, mereka dapat digunakan untuk
memprediksi bahwa patologis lanjut perubahan akan terjadi. Regulasi protease
yang bertanggung jawab untuk jalur yang berbeda dari kematian sel dan
kelangsungan hidup mungkin mencerminkan perilaku adaptif untuk kerusakan
protein terhadap kontaminan lingkungan, yang mewakili respon bioindikator.
Dengan demikian, parameter menunjukkan sifat umum biomarker non-spesifik
stres yang disebabkan oleh berbagai kontaminan lingkungan dan campuran
mereka mampu untuk meningkatkan protein dan kerusakan organel seperti
logam berat, xenobiotik organik, dan produk minyak.

5 | Review dan Resum Jurnal ; Moh. Awaludin Adam