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LA LUZ COMO UN MECANISMO INDUCTIVO DE ACTIVIDAD

ELCTRICA ESPONTNEA EN LA CADENA GANGLIONAR DEL


ACOCIL.
Autores: Nogueira Islas Silvia Monserrat, Oble Tsubaki Sayuri Estephania, Snchez Pineda
Laura y Snchez Ponce Jose de Jesus
Prctica 4
Fecha de elaboracin 05 de Marzo del 2015
Fecha de entrega: 10 de Marzo del 2015

Introduccin
Los acociles son crustceos bentnicos omnvoros que viven en medios lticos en agua con
cierta turbidez a no ms de 5 m de profundidad. Son de hbitos nocturnos permaneciendo en sus
madrigueras durante el da. El trmino acocil en Mxico se le da a algunos miembros de la
familia Cambaridae en particular a los gneros Cambarellus, Orconectes y Procambarus, son
considerados organismos cosmopolitas y habitan en cuerpos de agua dulce desde climas
templados hasta subtropicales adems de ser parte esencial de las cadenas trficas en las que
participan (Rodrguez-Serna 2002 y lvarez 2007). Procambarus clarkii que es el acocil ms
ampliamente distribuido pues se encuentra en todos los continentes a excepcin de Oceana, por
sus caractersticas anatmicas, su facilidad de manejo y el amplio conocimiento que se ha
obtenido de esta especie la han convertido en un modelo ampliamente extendido en
neurofisiologa, el acocil en Mxico toma importancia gracias al Dr. Hugo Archiga (BarreraMera 2013).
Como en los platelmintos, moluscos, anlidos y artrpodos su sistema nervioso es relativamente
sencillo, conocido como cadena ganglionar y se localiza en la parte ventral del cuerpo. Este
sistema est formado por ganglios en donde se encuentran los cuerpos celulares, nervios
conectivos que conectan a un ganglio con otro y races nerviosas a travs de las que viajan
axones que comunican a los ganglios con la periferia (Fanjul e Hiriart, 1998). Es decir, se
compone por el cordn nervioso ventral longitudinal y un ganglio cerebroide ubicados debajo
del tracto digestivo. Estar compuesto neuronas motoras y sensoriales, el soma de estas
neuronas lo encontraremos en los rganos de los sentidos o en los ganglios, estos se componen
de un neuropilo central, que incluye axones y dendritas, as como de grupos de somas perifricos
(Correa 2014). Cada ganglio est compuesto por pocas neuronas, lo que facilita su estudio y el
trazo de los circuitos neuronales (Fanjul e Hiriart, 1998). Del ganglio cerebroide se originan
cinco nervios pareados y dos nervios no pareados, los primeros incluyen los nervios ptico,
oculomotor, antenular, antenar y tegumentario, los segundos unen al ganglio con la red nerviosa
del esofago, el ganglio cerebroide esta dividido en tres partes protocerebro, deuterocerebro y
tritocerebro, el protocerebro es el que procesa la informacin visual prcticamente en su

totalidad. este se divide en tres partes en el ganglio ptico que se encarga del procesamiento de la
informacin que es recibida por los fotorreceptores de la retina, el protocerebro lateral que se
localiza en los tallos pticos y el medial (Vizcarra, 2006 y Nelson, 2014).
En 1934 se describi para Cambarus sp. el fotoreceptor caudal, es decir la presencia de
receptores extra-retinianos, que se encuentran en el sexto ganglio abdominal, se sabe que la
regin del espectro donde se obtiene la mxima respuesta est cercana a los 500 nm, la respuesta
se da por neuronas fotosensibles que tienen al ser iluminadas un patrn de descarga tnico, que
tiene un prolongado periodo de latencia y un largo periodo de sumacin de periodos subumbrales
(Gmez, 1999).
A pesar de no contar con axones recubiertos de mielina, el sistema nervioso del acocil puede
manifestar un alto potencial de accin gracias a que los axones de sus neuronas son ms gruesos
en comparacin con aquellos mielnicos . Sin embargo, los mecanismos bsicos para su
funcionamiento son semejantes a los de los mamferos, lo que permite generar modelos
aplicables a sistemas nerviosos ms complejos (Barrera-Mera 2013).

Fig 1.0 Estructura ganglionar del sistema nervioso del acocil (Procambarus clarkii).(Fanjul e
Hiriart, 1998)

Hiptesis
1. Si la cadena ganglionar de los acociles presenta neuronas
fotosensibles, entonces sta va a generar un potencial de accin ante la aplicacin
de un estmulo luminoso.
1. Si el KCl es una solucin hipertnica, entonces al aplicarlo a la
cadena ganglionar se van a generar potenciales de accin ms fuertes.

Objetivo general
1. Observar la respuesta de la cadena ganglionar ante un estmulo
luminoso.

Objetivos particulares
1. Visualizar la diferencia en el potencial de accin de la cadena
ganglionar ante la aplicacin de un estmulo luminoso de baja intensidad y uno de
alta intensidad.
2. Observar el efecto que tiene el KCl en el potencial de accin de la
cadena ganglionar.

Mtodo
Preparacin del equipo y obtencin del ejemplar
El acocil (Procabarus clarkii) se obtuvo del acuario de la Facultad de Ciencias, UNAM, era un
ejemplar vivo y tena un tamao de aproximadamente 10 cm. Antes de sacrificarlo se coloc en
una charola con hielo y posteriormente se meti al refrigerador por aproximadamente 5 minutos
para disminuir su actividad.
El dispositivo para la obtencin de la actividad elctrica se arm dentro de la jaula de Faraday, en
un soporte se coloc una cmara de acrlico con electrodos de plata clorurada y solucin Van
Harreveld, los electrodos se conectaron a la sonda de alta impedancia mediante dos caimanes, la
sonda de alta impedancia se conect al amplificador IsoDAM8A. Por otro lado, se conect un
transductor de luz a un amplificador Bridge8, para calibrarlo se us una fibra ptica y un tubo de
cartulina negra, como se hizo en la prctica de uso de Acqknowledge. El software de
computadora que se utiliz fue Acqknowledge 3.8.1
Montaje del arreglo experimental
Para la obtencin de la preparacin, primero se decapit el ejemplar, es decir, con unas tijeras se
separ el cefalotrax del resto del cuerpo. Para extraer la cadena ganglionar, se cort el borde de
la cutcula en la regin ventral del abdomen y se removieron los msculos, para dejar expuesta la
cadena ganglionar y poderla retirar. Una vez que se obtuvo la cadena ganglionar y en especial el
sexto ganglio que se ubica en el extremo posterior del abdomen, se coloc en la cmara de
acrlico, humectando la preparacin constantemente con la solucin Van Harreveld para
mantener hidratado el tejido.
Registro de la actividad nerviosa espontnea y su respuesta a la luz
Con el programa Acqknowledge se registr la actividad elctrica de la cadena ganglionar
primero en un estado basal sin estmulo lumnico, posteriormente se aadi un estmulo lumnico
de baja intensidad y observ la respuesta de la cadena al inicio y al final del mismo. Se dej

reposar la cadena durante 3 minutos en oscuridad y se repiti el procedimiento pero ahora con la
mxima intensidad de luz.
Respuesta de la cadena ganglionar ante una solucin saturada de KCl
Por ltimo, se agreg a la preparacion 3 gotas de una solucin de KCL 3M y se registr su
actividad.

Resultados
El anlisis de los datos se hizo mediante la obtencin de histogramas de segmentos de 5
segundos, para poder observar si existen cambios significativos en la amplitud y en la frecuencia
de los potenciales de accin.
En los histogramas siguientes, se observa en el eje de las abscisas: la amplitud del intervalo, y
por altura (eje Y), la frecuencia absoluta de cada intervalo.

Fig A. Potencial de reposo,sin ningn estmulo.


Ejercicio 1. Actividad espontnea y respuesta a la luz(intensidad baja).

Fig. 2.0 Registro de actividad elctrica de la cadena ganglionar aplicando un estmulo luminoso
de baja intensidad.

Fig 2.1 Histograma de amplitud a una respuesta de baja intensidad de luz.(20 bins).La amplitud
de la onda est muy marcada cuando hay un primer estmulo, pero despus no hay una respuesta.

Ejercicio 2. Actividad espontnea y respuesta a la luz(intensidad alta).

Fig. 2.2 Registro de la actividad elctrica de la cadena ganglionar ante el aumento de la


intensidad luminosa.

Fig 2.3 Histograma de amplitud a una respuesta de intensidad de luz alta (20 bins). La respuesta
a una luz intensa fue inmediata y conforme se aument la intensidad de alta a muy alta se
observa una cresta muy marcada.

Ejercicio 3. Respuesta de la cadena ganglionar ante una solucin saturada de KCl 3M.

Fig 2.4 Registro de la actividad elctrica de la cadena ganglionar al aplicar KCl 3M.

Fig 2.5 Histograma de intensidad ante una solucin saturada de KCl 3M. Con la presencia de una
sustancia despolarizante se marc una amplitud de onda muy alta y despus de 15 segundos, una
amplitud menor a comparacin del primer estmulo.

Fig 2.6 Cmara acrilico con electrodos de plata clorurada y la cadena ganglionar sobre los
electrodos.

Anlisis de resultados
Se midi el potencial de accin a travs de la membrana plasmtica de las clulas presentes en la
cadena ganglionar del acocil, esto fue posible por medio de una cmara de acrilico con
electrodos de plata clorurada (Fig 2.6). La cmara se encontraba conectada a un voltmetro capaz
de medir pequeas diferencias de potencial. El potencial a travs de la membrana de la superficie
de la mayora de las clulas animales en general no vara con el tiempo (Lodish et al. 2000). En
casi todos los casos el interior de la membrana de la clula es negativo con relacin al exterior;
los potenciales de membrana tpicos son entre -30 y -70 mV. Los mecanismos que son capaces de
provocar un potencial de accin varan en las diferentes clulas excitables (neuronas, clulas
musculares etc), pero el mecanismo general es el mismo, todo estmulo produce un cambio en
el potencial de membrana en la clula estimulada, comnmente este cambio consiste en una
despolarizacin.
En la cadena ganglionar existe una respuesta diferencial de las clulas fotosensibles,
dependiendo de la intensidad luminosa, y que adems puede actuar o no de manera conjunta con
los ojos compuestos del animal. Debido a que el fotorreceptor caudal ubicado en el sexto ganglio
tiene un gran umbral y responde lentamente, al aplicarle un estmulo luminoso de baja intensidad
(Fig 2.0 y 2.1) se genera un potencial de accin pero este ser leve y despus ya no se generarn
ms potenciales de accin. Esto se relaciona con la conducta y los hbitos del acocil, ya que las
intensidades luminosas bajas atraen al acocil y es cuando salen de sus madrigueras y realizan sus
actividades (Fanjul e Hiriart, 1998).
Cuando se le aplica un estmulo de alta intensidad (Fig. 2.2 y 2.3), el fotoreceptor caudal se
estimula demasiado y se genera un potencial de accin mayor, seguido de ms potenciales de
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accin, lo que hace que la respuesta se mantenga por ms tiempo. Esto se relaciona con la
conducta de huida que adquieren los acociles ante una alta intensidad de luz (Fernndez, 1991).
Con la presencia de una solucin electroltica KCl (cloruro de potasio) 3M se observ que se
genera una hiperpolarizacin de la clula, esto de debe a la entrada masiva de Cl - a travs de la
membrana, ya que los iones tienden a fluir hacia el interior desde medio extracelular por debajo
de su gradiente de concentracin, dejando un exceso de iones positivos en la superficie
citoslica. Esto es crucial en la respuesta en los msculos del acocil ya que los canales Cl - y los
de K+ son los principales determinantes del potencial en reposo negativo en el interior de la
clula, por lo tanto, al cerrar los canales de Cl- si existe una disminucin en su concentracin,
se favorece la despolarizacin, lo mismo pasa con los iones de K+. Los iones de K+ tienden a salir
de la clula, a favor de su gradiente qumico, causando una hiperpolarizacin en la membrana.
(Fig 2.4 y 2.5) (Lodish et al. 2001). Estos gradientes de potasio y cloro tanto como el interior y
exterior de la clula son necesarios para la conduccin de los impulsos nerviosos en la cadena
ganglionar del acocil.

Conclusiones
El sistema nervioso de los acociles se localiza ventralmente y est formado por
ganglios que se unen a travs de fibras nerviosas conocidas como conectivos, estos
ganglios controlan el movimiento de las patas.
Intensidades altas de luz provocan potenciales de accin de mayor intensidad, ms
rpidos y de menor amplitud, mientras que la baja intensidad de luz provocan un
potencial de accin de menor intensidad, ms lento y con mayor amplitud.
Las respuestas dadas por el fotorreceptor caudal ante estmulos luminosos, estn
sumamente relacionadas con las conductas de atraccin o huida en el acocil.
Sustancias qumicas como el KCl causan una hiperpolarizacin en la clula,
favoreciendo la generacin de potenciales de accin de gran intensidad.
Las caractersticas del sistema nervioso de los acociles lo hacen un buen modelo
para el estudio de los circuitos neuronales y otras cuestiones dentro del campo de la
neurociencia.

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