Anda di halaman 1dari 11

Biarylaniline Phenethanolamines sebagai Potensi dan

Selektif A3 adrenergik Agonis Reseptor


Pendahuluan
Sebuah peningkatan besar dalam prevalensi obesitas dan
diabetes mellitus tipe 2 dan gangguan kardiovaskular terkait telah
menyebabkan pencarian pendekatan farmakologis baru dalam
pengobatan conditions.1 ini Pada awal 1980-an, yang atipikal atau
A3

adrenoseptor

(AR)

pertama

kali

diidentifikasi

sebagai

kesempatan terapi mungkin untuk pengobatan diabetes tipe 2 dan


obesitas. Minat target ini sebagai pengobatan untuk diabetes
didorong

oleh

temuan

bahwa

senyawa

seperti

kelas

phenethylamine yang dimiliki sifat termogenik dan antidiabetes di


rodents2,3 (Grafik 1). Sayangnya, 1 dan lainnya A3 agonis AR
ditemukan selama tahun 1980 tidak berhasil di klinik, baik karena
kurangnya kemanjuran atau kardiovaskular profil efek samping yang
tidak menguntungkan. Kegagalan klinis agen awal terkait dengan 1
telah dikaitkan dengan kurangnya potensi A3 AR cukup dan A1 AR
dan A2 AR selektifitas yang dihasilkan dari perbedaan antara
farmakologis tikus dan reseptor manusia. 4 Hipotesis bahwa
perbedaan hewan pengerat dan reseptor manusia bertanggung
jawab atas kurangnya kemanjuran klinis manusia 1 dan analog
terkait

didukung

oleh

penemuan,

kloning,

dan

karakterisasi

manusia, 5 tikus, 6 dan mouse7 A3 ARS pada tahun 1989. Evaluasi


dari aktivitas senyawa seperti 1 pada tikus kloning dan reseptor
manusia, pada kenyataannya, menemukan perbedaan antarspesies
yang signifikan dalam kegiatan mereka di tiga AR subtypes.8
Ketersediaan reseptor manusia yang sesuai telah melahirkan desain
dan sintesis dari generasi baru agonis A3 AR dengan potensi tinggi
dan selektivitas yang baik sehubungan dengan A1 manusia dan ARS
A2 dicontohkan oleh ampuh, selektif, dan secara lisan bioavailable
pyridylethanolamine 2,9 Meskipun diterbitkan data klinis dengan 2

telah gagal mengkonfirmasi bahwa stimulasi A3 AR kronis adalah


efektif Pendekatan untuk pengobatan diabetes, 10 penemuan terus
agen dengan properties11 praklinis menjanjikan serta penemuan
aplikasi terapi tambahan mungkin bagi agonis a3 AR untuk
bladder11c terlalu aktif, 12 dan disorders13 gastrointestinal telah
menyebabkan upaya terus menuju penemuan dan eksplorasi
pemanfaatan klinis agen ini. Sebelumnya kami dijelaskan upaya di
daerah ini yang termasuk pengungkapan phenethanolamines anilin
dicontohkan oleh fenil asetat 3a asam derivatif, dengan upaya
optimasi lebih lanjut mengakibatkan acylsulfonamides seperti 3b.14
The in vitro potensi dan selektivitas 3a dan analog terkait
menyarankan bahwa peluang ada dalam seri ini untuk optimasi
lebih lanjut dari farmakokinetik dan karakteristik lainnya. The
glukuronida dan taurin konjugat dari analog seperti 3a berada
metabolit utama dalam anjing, membatasi terminal paruhnya.
Hipotesa

bahwa

kendala

konformasi

mungkin

memperlambat

konjugasi oleh enzim fase II metabolisme yang mengarah ke


peningkatan terminal setengah-Lifes, strategi diterapkan untuk
membatasi

kebebasan

konformasi

dari

asam

para-bagian

anilinophenylacetic di 3a analog (Gambar 1). Selain itu, hibridisasi


sp2 atom karbon dari aril atau heteroaril menahan diri berdekatan
dengan fungsi asam mungkin mengubah elektronik serta lingkungan
sterik dari relatif asam pada atom karbon sp3 CH2 asam fenilasetat,
mengubah kerentanan terhadap asil fungsionalisasi oleh konjugasi
enzim. Selain itu, rigidification ini bisa memblokir metabolisme di
situs lain di agonis dengan mengubah pekerjaan mereka dari situs
pengikatan

fase

enzim

I-metabolisme.

Selanjutnya,

kurungan

konformasi juga bisa menyebabkan peningkatan potensi melalui


pengurangan hukuman entropis untuk mencapai interaksi agonis /
reseptor yang optimal. Akhirnya, penyempitan kebebasan rotasi
dapat meningkatkan selektivitas dengan mencegah penduduk
rotamers yang mengikat secara optimal untuk reseptor adrenergik
lainnya. Dalam artikel sebelumnya, kami telah menunjukkan bahwa

phenethanolamines anilin mengandung asam karboksilat isostere


melekat pada cincin fenil anilin dalam meta posisi acara yang
sangat baik in vitro profiles.14 Pada artikel ini, kita menggambarkan
identifikasi

dan

karakterisasi

serangkaian

terkait

anilines

phenethanolamine yang berisi anilino meta biaryl turunan asam


karboksilat yang diwakili oleh struktur 4. Selain memiliki beredar di
profil vitro, pekerjaan ini telah menghasilkan penemuan serangkaian
senyawa dengan sangat baik in vivo dan farmakokinetik sifat yang
mengarah ke identifikasi calon pengembangan klinis 38.
Kimia. Rute sintetis umum untuk a3 AR agonis target 4
ditunjukkan dalam Skema 1. aminasi reduktif dari aldehida 5a atau
b, sintesis dari yang telah dijelaskan sebelumnya, 14,15 dengan
biaryl

anilines

15-23

diberikan

sesuai

Boc

amina

silil

eter

intermediet 24-33,17 Sepenuhnya diuraikan intermediet 24-33


menjadi sasaran urutan deproteksi terdiri dari pembelahan asam
dari karbamat Boc dengan penghapusan bersamaan dari silil eter,
diikuti

oleh

membuka

hidrolisis
kedok

metil

asam

ester

dengan

karboksilat.

lithium

Dengan

hidroksida

pengecualian

phenethanolamine metil ester 39, produk methyl ester yang secara


langsung dihasilkan dari langkah deproteksi asam dibawa langsung
melalui

langkah

ester

saponifikasi

tanpa

karakterisasi

untuk

memberikan biaryl karboksilat targets.17 asam akhir Untuk senyawa


target akhir yang mengandung gugus metil kiral berdekatan dengan
nitrogen phenethanolamine (misalnya, 34-37, 41), tingkat kecil
epimerization terjadi baik di final anilin-aldehida aminasi reduktif
atau

dalam

langkah-langkah

deproteksi

akhir.

Komposisi

diastereomerik dari target akhir dimurnikan ditentukan oleh 1H NMR


setidaknya 80% dari R, R isomer. Untuk alasan yang dijelaskan
sebelumnya, 14 kehadiran diastereomer kecil diperkirakan tidak
berdampak signifikan aktivitas -AR atau selektivitas SAR dari target
akhir.
Anilin intermediet 15-23 diperoleh dengan reduksi derivatif
nitro yang sesuai 6-14,16-18 yang, pada gilirannya, diperoleh

melalui Suzuki lintas-coupling dari 3-nitrophenylboronic asam dan


bromophenyl

tepat,

19

bromopyridyl,

20-23

atau

trifluoromethylsulfonylpyridyl16 ester asam karboksilat. The aril


halide- atau derivatif triflat mengandung disintesis dari turunan
asam karboksilat yang sesuai, yang baik tersedia secara komersial
atau disiapkan melalui prosedur sintetik dikenal.
Hasil dan Diskusi
Sasaran akhir dievaluasi sebagai agonis terhadap kloning
manusia A3, A2, atau ARS A1 dinyatakan dalam hamster ovarium
(CHO) baris sel Cina. Seperti dijelaskan sebelumnya, 14 stimulasi
ARS

relevan

dihitung

dengan

mengukur

akumulasi

cAMP

intraseluler, dengan hasil yang dilaporkan sebagai potensi (pEC50)


dan khasiat (Emax, respon maksimal pas untuk senyawa dinyatakan
sebagai persen dari respon maksimal ) relatif terhadap orang-orang
dari non selektif penuh AR agonis isoprenalin (ISO). Hasil dengan
mengacu senyawa 1 ditunjukkan untuk perbandingan. Senyawa 1
tidak hanya menunjukkan penuh, aktivitas agonis poten di a3 AR
(pEC50) 7.6, Emax) 91%), tetapi juga menunjukkan aktivitas agonis
signifikan pada A2 AR (pEC50) 7.3, Emax) 80%).
Dalam artikel sebelumnya, desain seri target ampuh dan
selektif dijelaskan dimulai dengan phenylacetic 3a asam derivatif,
14,15 yang ditemukan untuk menjadi sangat aktif tetapi hanya
lead.14 cukup selektif dalam usaha itu, upaya kita difokuskan pada
peningkatan sifat timbal 3a dengan mengganti asam karboksilat
dari

3a

dengan

fungsi

isosteric

yang

menyebabkan

analog

acylsulfonamide seperti 3b. Dalam strategi kimia obat yang


diuraikan di sini, asam karboksilat dipertahankan tetapi dibatasi
dalam sistem biaryl diwakili oleh struktur 4 (Gambar 1). Dengan
mempertahankan

asam

karboksilat

sementara

membatasi

fleksibilitas dengan cara ini, kita hipotesis bahwa posisi karboksilat


yang bisa disimpan dalam orientasi yang tidak hanya akan

memberikan selektivitas unggul dan potensi relatif terhadap analog


3a tersebut tetapi juga akan meningkatkan farmakokinetik seri ini .
Untuk

melaksanakan

strategi

ini,

pertama

kita

mempersiapkan serangkaian asam karboksilat bifenil (34-40) di


mana posisi asam karboksilat bervariasi dengan menempatkannya
di orto, meta, atau posisi para dari cincin fenil terminal (Tabel 1) .
Karena hasil lainnya di laboratorium kami menunjukkan potensi
unggul dan selektivitas yang dicapai ketika titik lampiran substituen
terminal dari kanan cincin sisi fenil adalah meta ke anilin nitrogen
(misalnya, analog 3b), 14 hanya analog di mana batin cincin fenil
memiliki meta pola substitusi relatif terhadap anilin dan cincin fenil
terminal disintesis. Gratifyingly, berbeda dengan 3a fenil asetat
turunan asam dan klinis pembanding senyawa 1, sebagian senyawa
bifenil bantalan orto atau asam karboksilat meta pada cincin fenil
terminal tidak hanya ampuh (pEC50> 7,5) dan sepenuhnya
berkhasiat (Emax> 80% ) di AR A3, tetapi juga menunjukkan
aktivitas yang rendah dan kemanjuran miskin di kedua A1 dan A2
ARS. Posisi asam karboksilat pada substituen aril tampaknya sangat
mempengaruhi profil AR keseluruhan. Analoginya mengandung
asam karboksilat orto (34 dan 36) yang sangat kuat (pEC50> 9) dan
selektif (> 1000 kali lipat vs A1 dan A2 ARS, Tabel 1). Namun, para
analog 35 menunjukkan potensi yang lebih rendah (pEC50) 7,5) dan
selektivitas miskin (A1 wrt 63 dan 16 kali lipat dan ARS A2)
dibandingkan dengan meta dan ortho derivatif diganti. Sehubungan
dengan

asam

karboksilat

orto

mengandung

analog

36,

memindahkan asam karboksilat ke posisi meta pada cincin fenil


terminal (senyawa 37) memiliki sedikit efek pada potensi A3 AR
(pEC50) 10,0 vs 9,6) dan menyebabkan agak menurun selektivitas,
terutama , di AR A1 (100 kali lipat vs 2512 kali lipat di A1).
Penghapusan dari kelompok metil kiral, bagaimanapun, dipulihkan
tinggi (> 300 kali lipat vs A1 dan A2 AR) selektivitas untuk meta
asam karboksilat analog 38, yang menunjukkan stimulasi minimal
baik AR a1 atau AR A2 (1 dan 3% dari isoprenalin, masing-masing).

Compound 38, meskipun agak kurang poten (pEC50) 8.4 vs 10) dari
analog sesuai dengan kelompok R metil kiral dalam rantai (37),
masih menunjukkan aktivitas yang lebih besar terhadap reseptor
manusia daripada molekul pembanding 1 dan 3. Atas dasar SAR
sebelumnya hasil untuk senyawa struktur terkait yang menunjukkan
pentingnya

bagian

asam

pada

selektivitas,

14,25

itu

tidak

mengherankan bahwa sesuai metil ester analog senyawa 38 (analog


39)

memiliki

potensi

keseluruhan

miskin

(pEC50)

6,8)

dan

selektivitas (22 kali lipat vs A2 dan 10 kali lipat AR) profil A1 relatif
terhadap analog 38.
Serangkaian analog biaryl dimana kanan cincin sisi fenil
terminal digantikan oleh piridil juga disintesis. Mengingat preferensi
dari orto atau meta asam karboksilat untuk potensi dan selektivitas,
fokus desain ditempatkan pada orto dan meta karboksilat di posisi
ini relatif terhadap titik lampiran fenil cincin bagian dalam (Tabel 2).
Secara umum, ditemukan bahwa piridil analog 41-43, sementara
juga menunjukkan aktivitas minimal terhadap A1 atau A2 ARS
(pEC50 <? 6), hanya sederhana (pEC50 <? 6) potensi di A3 AR
relatif terhadap mereka sesuai analog fenil ditunjukkan pada Tabel 1
(Bandingkan 36 vs 41 atau 38 vs 42). Kegiatan berkurang ini
mungkin

akibat

dari

hukuman

desolvation

meningkat

untuk

menghapus molekul air yang terkait dengan nitrogen piridin pada


reseptor mengikat. Sebaliknya, derivatif 44 yang berisi asam
karboksilat dalam orto hubungan relatif terhadap hubungan biaryl
dan nitrogen dalam 3 posisi cincin terminal ditemukan memiliki
potensi yang sangat tinggi (pEC50) 10) dan selektivitas (> 1000kali lipat vs A2 dan 10 kali lipat A1 AR). Kemungkinan, piridin
nitrogen ini membentuk ikatan hidrogen yang menguntungkan dan /
atau interaksi elektrostatik chargecharge yang mengkompensasi
denda desolvation. Karena 42 juga memiliki piridin meta nitrogen
untuk cincin aril, orto 44 dan meta 42 karboksilat mungkin mengikat
sedikit

berbeda,

posisi

nitrogen

piridin

masing-masing

di

menguntungkan (44) atau netral / merugikan (42) posisi relatif

terhadap

aktivitas

agonis.

Orto

analog

44

bersama

dengan

beberapa turunan bifenil itu berkembang menjadi studi lebih lanjut.


Beberapa analog dengan yang paling menarik di profil vitro
yang berkembang menjadi farmakokinetik anjing (PK) tes. Untuk
menilai senyawa untuk perkembangan lebih lanjut dengan cepat,
sebagian senyawa dievaluasi untuk tes PK anjing dalam pendekatan
yang efisien dengan menguji hanya satu binatang. Dalam kasus di
mana beberapa hewan yang digunakan (senyawa 38), variabilitas
ditemukan kurang dari 30% untuk parameter dilaporkan. Dalam
eksperimen ini, ampuh dan selektif dicarboxylate analog 34
ditemukan untuk memiliki terminal paruh pendek (t1 / 2 <2 jam)
dan paparan rendah (AUC0f ) dengan pemberian iv dan akibatnya
tidak diteliti lebih lanjut. Bifenil analog 36-38 dan 40 dan
phenylpyridyl analog 44 dievaluasi pada anjing (PK) tes berikut baik
iv dan po administrasi. Seperti dapat dilihat pada Tabel 3, dengan
pengecualian piridil senyawa 44, semua senyawa ini menunjukkan
ketersediaan hayati baik di lebih dari 30% dengan paruh oral 2 jam
atau

lebih.

Volume

mapan

distribusi

cenderung

rendah,

mencerminkan sifat polar dari analog ini. Secara khusus, desmethyl


meta karboksilat bifenil analog 38 menunjukkan profil terutama
mendorong dengan clearance yang rendah (2,4 mL / menit / kg) dan
lisan paruh dari 5 jam.
Meskipun

kriteria

utama

untuk

pemilihan

calon

klinis

kombinasi in vitro A3 potensi tinggi AR, A1 baik dan A2 AR


selektivitas, dan wajar profil farmakokinetik anjing, validasi lebih
lanjut dari potensi farmakodinamik anggota dalam seri ini sebagai
agen antidiabetes yang dieksplorasi dengan menguji aktivitas
fungsional mereka dalam tikus dalam model vivo diabetes. Oleh
karena itu, kemampuan tiga senyawa kunci untuk menurunkan
glukosa plasma dalam model tikus diabetes db / db diselidiki. Atas
dasar kombinasi mereka yang luar biasa dalam profil vitro dan profil
anjing diterima PK, senyawa 36, 38, dan 44 dipilih untuk profil
dalam model diabetes ini. Senyawa ini diberikan pada tikus db / db

laki-laki pada dosis yang ditunjukkan dalam kurung oleh gavage


lisan dua kali sehari selama 14 hari (Tabel 4). Ketiga analog yang
efektif

untuk

menurunkan

glukosa

dalam

dosis

cara

yang

tergantung. Selain kadar glukosa plasma menurunkan, tiga senyawa


yang efektif untuk menurunkan parameter terkait hemoglobin
glikosilasi (Hb1Ac) (Tabel 5). Hewan diperlakukan juga menyebabkan
dosis penurunan tergantung kadar insulin, menunjukkan sensitivitas
insulin ditingkatkan pada hewan diperlakukan (Tabel 6). Menariknya,
ditemukan bahwa meskipun khasiat maksimal analog ini untuk
menurunkan glukosa plasma adalah serupa, senyawa 38 adalah
jauh lebih kuat dari 36 atau 44, memberikan khasiat submaksimal
pada dosis di bawah 100 mg / kg. Alasan untuk potensi relatif tinggi
senyawa 36 atau 44 dibandingkan dengan 38 tidak jelas tetapi
mungkin, setidaknya sebagian, akibat dari potensi yang lebih besar
dari kedua senyawa tersebut dibandingkan yang dari 38 di a3 tikus
AR relatif bahwa pada reseptor manusia.
Sebagai konfirmasi lebih lanjut dari A3 yang AR fungsional
dalam kegiatan vivo pada hewan pengerat, analog 38 diuji
kemampuannya untuk memperoleh sebuah in vivo A3 respon
termogenik AR-dimediasi dalam lemak coklat yang kaya wilayah
interskapula dari db tikus / db oleh pencitraan inframerah. Seperti
dijelaskan sebelumnya, agonis AR A3 telah terbukti mendapatkan
respon termogenik dalam model ini, menyebabkan peningkatan
suhu di wilayah interskapula dari hewan yang dapat dipantau
menggunakan kamera inframerah mampu menghasilkan dihitung
readouts.13,28 berbasis gambar Menariknya, dibandingkan dengan
model

glukosa

db

db,

assay

thermogenesis

pada

tikus

menunjukkan sensitivitas yang lebih tinggi terhadap perlakuan agak


oleh turunan 38 karena dosis 3, 10, dan 30 mg / kg menghasilkan
peningkatan dosis terkait signifikan dalam aktivitas thermogenik
(Gambar 2). Meskipun senyawa 36, 38, dan 44 semua kepentingan
potensial sebagai kandidat pengembangan, farmakokinetik unggul
38 dalam hal paruh relatif terhadap orang-orang dari dua senyawa

lain mendorong kami untuk fokus pada senyawa ini sebagai calon
pengembangan

mungkin

Untuk

menyelidiki

lebih

lanjut

perkembangan senyawa 38, itu diuji dalam uji miniscreen bakteri,


yang merupakan versi uji Ames. Dalam tes ini, beberapa strain
bakteri yang digunakan dengan dan tanpa metabolisme melalui
fraksi hati tikus S9. Gratifyingly, senyawa ini tidak menunjukkan
indikasi memiliki kewajiban mutagenik dari tes ini dan, karena itu,
dianggap sebagai calon yang layak untuk perkembangan lebih
lanjut. Hasil profiling farmakokinetik tambahan di tiga spesies yang
berbeda ditunjukkan pada Tabel 7.
Senyawa 38 menunjukkan bioavailabilitas 30, 43, dan 46%
pada tikus, anjing, dan monyet dan nilai-nilai iv paruh 2.1, 3.3, dan
4.5 jam dalam spesies ini, masing-masing. Manusia versus tikus dan
monyet mikrosomal percobaan S9 disarankan tidak ada indikasi
peningkatan metabolisme dalam mikrosom manusia relatif dengan
spesies lainnya diperiksa (data tidak ditampilkan). Temuan ini dalam
kombinasi dengan fakta bahwa hasil uji hERG dengan analog 38
menunjukkan tidak ada perhatian klinis untuk arrhythmogenesis QTdependent

lanjut

didukung

senyawa

ini

sebagai

calon

pengembangan klinis.
Kesimpulan
Potensi dan data selektivitas dari serangkaian biaryl anilin A3
phenethanolamine AR agonis dimana kedua posisi substituen
karboksilat dari cincin aril terminal serta cincin aril bervariasi telah
dijelaskan. Hasil dikomunikasikan di atas menunjukkan bahwa
strategi menghambat kanan sisi asam karboksilat substituen dalam
perancah biaryl anilin di sisi kanan dari molekul itu efektif dalam
memberikan analog dengan potensi A3 AR luar biasa dan A1 dan A2
AR selektivitas. Meskipun beberapa analog yang paling ampuh dan
selektif (Analog 34, 36, 38, dan 40) adalah anggota dari seri anilin 3bifenil yang mengandung asam karboksilat baik pada orto atau
posisi meta dari cincin fenil terminal, phenylpyridyl analog 44 juga

menunjukkan luar biasa dalam profil vitro. Profil farmakokinetik


anjing senyawa menunjukkan menjanjikan di profil vitro (34, 36-38,
40, dan 44) menunjukkan bahwa semua senyawa yang diuji
memiliki diterima (> 25%) lisan bioavailabilitas dan waktu paruh
oral setidaknya 1,5 jam.
Di antara analog dijelaskan di sini, 3,3 turunan karboksilat
-biarylaniline

36,

38

dan

44

phenylpyridyl

derivatif

adalah

kepentingan tertentu karena kombinasi dari luar biasa dalam sifat


vitro dan profil PK anjing diterima. Meskipun 38 kurang kuat dari dua
analog

lainnya

dalam

model

tikus

diabetes,

ketiga

analog

menunjukkan dosis A3 tergantung AR tanggapan dimediasi pada


tikus. Hasil ini, dalam kombinasi dengan sangat baik mereka di profil
vitro terhadap reseptor manusia hasil kloning, memberikan bukti
untuk mendukung hipotesis bahwa salah satu dari tiga agen ini
harus mampu merangsang ARS A3 dengan cara selektif sehubungan
dengan A2 dan A1 ARS pada dosis farmakologi yang relevan .
Secara keseluruhan, analog 38 menawarkan profil komposit lebih
disukai dibandingkan dengan baik analog 44 atau analog 36 karena
kombinasi dari kedua kesederhanaan relatif dalam sintesis biaryl
anilin sisi kanan mulai material dan profil PK anjing unggulannya.
Meskipun perbandingan menyeluruh dari kedua senyawa itu tidak
dibuat, semakin lama paruh dan clearance lebih rendah dari
senyawa 38 dibandingkan dengan mereka yang diungkapkan
sebelumnya selektif A3 AR agonis kami, seperti 3b pada anjing, dan
stimulasi yang lebih rendah maksimal A2 dan A1 ARS mendorong
kami untuk fokus pada 38 relatif terhadap senyawa teladan dalam
seri

acylsulfonamide

sebagai

calon

potensi

pengembangan.

Akhirnya, data yang mengikat untuk senyawa 38 di A2 dan A1 ARS


menunjukkan risiko minimal antagonisme fungsional terhadap
reseptor ini pada dosis yang relevan secara klinis (Tabel 8).
Senyawa ini, oleh karena itu, dipilih untuk kemajuan ke klinik
untuk evaluasi sebagai calon obat untuk pengobatan diabetes tipe 2

dan kandung kemih yang terlalu aktif. Hasil studi klinis akan
dilaporkan pada waktunya.