Isolasi DNA
Isolasi DNA
1. Metode 1
2. Metode 2
3. Metode 3
2. Metode 2
Sebelum ekstraksi dilakukan, buffer CTAB dipanaskan pada suhu 65oC selama
1 menit.
0,5 g sampel daun dihilangkan tulang daunnya, lalu dipotong kecil-kecil,
digerus sampai halus dengan menggunakan mortal dan pastel dan dimasukan
dalam tabung mikrosentrifuge. Bubuk sampel ditambahkan 15000 l beta
mercaptoetanol.
Campuran dipanaskan pada suhu 65oC selama 30 menit menggunakan
waterbath.
Setelah 30 menit, campuran disentrifuge pada kecepatan 12.000 rpm selama
20 menit.
Supernatan dipindahkan ke tabung mikrosentrifuge yang baru dan ditambakan
800 l kloroform:isoamylalkohol (24:1). Campuran dibiarkan selama 15 menit
sambil sesekali dihomogenkan secara perlahan.
Campuran disentrifuge selama 20 menit pada kecepatan 12.000 rpm. Lalu
supernatant diambil dan dipindahkan ke tabung mikrosentrifuge yang baru.
Ditambahkan 1/10 volume ammonium asetat dan 2/3 volume etanol absolute.
Dibolak-balik secara perlahan lalu diinkubasi di lemari pendingin selama
semalam.
Campuran disentrifuge selama 30 menit pada kecepatan 13.000 rpm pada suhu
4oC. supernatant dibuang.
Pellet DNA dicuci dengan 70% etanol 750 l. sentrifuge selama 5 menit.
Buang supernatant.