3.

Hasil
3.1 . Ukuran partikel liposom
Ukuran partikel dan polidispersitas ukuran distribusi formulasi liposom diukur oleh foton
spektroskopi korelasi ditunjukkan pada Tabel 2. Pengenceran sampel dengan media yang
berbeda sebelum pengukuran sangat dipengaruhi hasilnya. Dengan demikian , pengenceran
dengan suling. Air yang dihasilkan hingga dua kali lipat lebih kecil dari partikel pengenceran
dengan pelarut yang digunakan dalam formulasi dan etanol yang terkandung atau etanol dengan
2.000 IU / ml UH . Liposom formulasi mengandung Heparin yang nyata lebih besar dalam
Ukuran dibandingkan formulasi tanpa Heparin. Formulasi liposom dengan SM murni ( LF3 )
menunjukkan ukuran partikel yang lebih besar dan lebih tinggi polydisprespersity daripada
formulasi lain . neon label tergabung dalam fosfolipid untuk studi CLSM pada konsentrasi 0,5
mol % tidak mempengaruhi ukuran partikel formulasi liposom yang berbeda ( hasil tidak
ditunjukkan ) .

3.2. potensi
Potensi liposom formulasi disiapkan tanpa penambahan Heparin adalah negatif (Tabel 3).
Kehadiran PL80 ditambah muatan negatif dari liposom karena asam fosfatidat yang terkandung
dalam PL80 pada konsentrasi 8% mol. Fosfatidilkolin, konstituen utama PL80, dan lipid lain
yang terkandung dalam jumlah kecil di PL80 netral dalam hal biaya. Pure SM liposom memiliki
potensi kecil karena electroneutrality SM. Di hadapan 50 IU Heparin / ml, potensi dari ketiga
liposom formulasi negatif tetapi nilainya meningkat jauh dibandingkan dengan formulasi tanpa
Heparin. Setelah kenaikan Konsentrasi Heparin 200 IU / ml nilai-nilai Potensi mendatar dan
pada 2000 IU / ml mereka menurun. Penambahan NaCl ke formulasi dengan 200 IU Heparin /
ml juga tertekan potensi liposom. Sedikit positif Nilai yang diperoleh untuk LF3 dengan 200 IU /
ml tampaknya menjadi outlier yang tidak cocok dengan umum pola. Penambahan Heparin dalam
medium yang digunakan untuk mengencerkan sampel sebelum pengukuran pada konsentrasi
yang sesuai dengan formulasi yang asli sangat penting untuk mendapatkan nilai-nilai potensial
yang stabil.
3.3. Confocal laser scanning gambar mikroskop
3.3.1. Autofluorescence kulit dan stabilitas fluoresensi
Percobaan kontrol menunjukkan hanya rendah tingkat autofluorescence spesimen kulit
digunakan dalam penelitian ini bertentangan dengan temuan kelompok lain (Zellmer et al.,
1995). Ini adalah dikoreksi oleh pengaturan photomultiplier. Setelah koreksi, kulit tidak
menunjukkan fluoresensi nya sendiri ketika gembira baik dengan garis 488 nm atau dengan garis

525 nm laser. Fluoresensi sifat PE-NBD tidak dipengaruhi oleh. Kehadiran Heparin, fosfolipid
yang digunakan, atau baik sebagai formulasi Heparin liposomal.
3.3.2. Stack gambar confocal sejajar dengan permukaan kulit
Dua percobaan CLSM dengan setiap liposom perumusan masing-masing dengan dan tanpa
Heparin adalah terbawa. Perwakilan gambar akan ditampilkan dalam Gambar. 2. Setiap gambar
menggambarkan irisan paralel optic ke permukaan kulit dengan luas 250 250 m. Pola penetrasi
yang berbeda dari label neon dari empat formulasi ke epidermis diamati. Untuk liposom
disiapkan dengan PL80 tanpa Heparin, fluoresensi itu cukup merata di kulit sekitar tempat nonneon di kedalaman sekitar 5 m. Dari sini jelas bahwa neon fosfolipid didistribusikan dalam
domain lipid stratum korneum menguraikan corneocytes yang tidak menunjukkan afinitas untuk
label. Individu corneocytes dengan bentuk heksagonal sekitar dan diameter 25-35 m dapat
dilihat. Terang garis pada permukaan terluar menunjukkan akumulasi label fluorescent pada
keriput dari kulit. Lebih dalam kulit intensitas label fluoresensi menurun dan semua tapi
menghilang di kedalaman 10 m. Ketika SM termasuk dalam perumusan, tidak ada distribusi
homogen fluoresensi dalam matriks lipid dan, oleh karena itu, tidak ada corneocytes bias dilihat.
Label muncul agak merata di bidang kulit.
Dalam ence prespersity dari Heparin, lokus intensitas fluoresensi tinggi ke kedalaman 10 m
dalam strata korneum diamati untuk semua komposisi fosfolipid menunjukkan lokalisasi yang
kuat dan mungkin agregasi dari label kontak dengan kulit.
3.3.3. Penampang optik tegak lurus ke permukaan kulit
Dua percobaan CLSM dengan setiap liposom perumusan masing-masing dengan dan tanpa
Heparin adalah dilakukan dengan waktu pemaparan dari kulit liposom dari 30 menit dan 144
jam. 3D Perwakilan gambar stereo dari 30 menit paparan ditunjukkan pada Gambar. 3 Gambargambar ini tercatat 12 jam setelah eksperimen. Ketika gambar yang direkam segera setelah
percobaan hasilnya identik (Tidak ditampilkan). Hal ini menunjukkan bahwa dalam waktu 30
min fosfolipid neon merambah ke lapisan dalam dermis mana fluoresensi adalah homogen
terdistribusi dan khususnya kuat. Dalam dermis atas lapisan dan di epidermis, fosfolipid neon
jelas hanya bersama seperti benang channel jalur yang berbeda. Rambut shaft yang sangat
fluoresensi label bersama seluruh panjang mereka mencapai ke dalam lapisan dermis yang
menunjukkan homogen dan intens fluoresensi. Pengamatan ini adalah sama untuk semua
formulasi dan independen dari kehadiran Heparin . Label neon muncul seragam di lapisan
dangkal terluar kulit hanya untuk perumusan PL80 . Untuk 144 h paparan kulit terhadap
liposom , gambar yang direkam maksimal 48 jam setelah percobaan . Ini selang waktu sampai
pencitraan tidak diharapkan mempengaruhi distribusi label karena tidak ada pengaruh tersebut
diamati untuk waktu pemaparan lebih pendek dari 30 menit saat pencitraan dilakukan segera dan
12 jam setelah paparan.

Kedalaman penetrasi fosfolipid neon menjadi gambar kulit setelah 144 jam ( perwakilan pada
Gambar . 4 ) tidak menunjukkan perbedaan yang setelah 30 menit . Lapisan yang lebih dalam
dari dermis yang homogen dan sangat neon . Di atas lapisan ini , sangat samar atau tidak ada
fluoresensi sama sekali diamati . Berbeda dengan 30 menit eksposur , jalur neon seperti benang
tidak jelas di sini . Untuk formulasi PL 80 hanya , fluoresensi terdeteksi untuk menembus
homogen di kedalaman yang cukup ke dalam epidermis yang sesuai dengan temuan dari gambar
yang diambil sejajar dengan kulit permukaan.
4. Diskusi
4.1. Karakterisasi liposom
Semakin besar ukuran liposom ditemukan untuk semua formulasi setelah pengenceran dengan
25% (v / v) etanol di air dibandingkan dengan pengenceran dengan ganda suling. Air konsisten
dengan temuan Kirjavainen et al. (1999), yang menyarankan bahwa peningkatan ukuran liposom
dengan adanya etanol mungkin karena penurunan tegangan antar muka atau induksi interdigitasi.
Ukuran liposom dalam formulasi, oleh karena itu, sesuai dengan yang diukur setelah
pengenceran dengan 25% (V / v) etanol dalam air. Peningkatan ukuran liposom dengan adanya
Heparin menunjukkan sebuah adsorpsi Heparin molekul ke permukaan liposom. Pengukuran
potensial mengkonfirmasi hipotesis ini. Peningkatan besarnya potensi secara absolut ditimbulkan
oleh penambahan 50 IU / ml Heparin ke dispersi liposom adalah konsisten dengan tudung dari
permukaan liposom dengan Heparin molekul yang menanggung negative biaya karena kelompok
sulfat bebas mereka. Atas peningkatan lebih lanjut dari konsentrasi Heparin di dispersi liposom,
potensi negative liposom tetap konstan, pada awalnya, dan kemudian berkurang. Hal ini
mungkin disebabkan kombinasi dari dua fenomena. Pertama, adsorpsi permukaan umumnya
proses saturable menyiratkan bahwa jumlah Heparin mengikuti liposom. Permukaan tidak akan
meningkat terus dengan konsentrasi, mencapai bukan dataran tinggi. Kedua, potensi tergantung
pada kekuatan ionik dari solusi. Dengan demikian, peningkatan konsentrasi Heparin hasil dalam
peningkatan kekuatan ion yang menekan potensi. Ini mungkin menyebabkan potensi untuk
mengurangi, secara absolut, pada Konsentrasi Heparin 2000 IU / ml. The 0,09% Larutan NaCl,
yang berisi kira-kira sama konsentrasi muatan listrik sebagai 2000 IU / ml larutan Heparin,
menyebabkan penurunan yang sama potensial bila termasuk dalam 200 IU Heparin / formulasi
liposom ml, mendukung penafsiran ini. Oleh karena itu, hasil ini memberikan langsung namun
bukti yang jelas bahwa permukaan liposom ditutupi oleh molekul Heparin. Ini juga menjelaskan
fakta bahwa sampel diencerkan sebelum pengukuran potensial dengan medium yang
mengandung ada Heparin memberi terus berubah bacaan . Sebuah muatan permukaan yang
tinggi liposom ditingkatkan stabilitas fisik mereka . Liposom dari LF3 formulasi memiliki indeks
polidispersitas jauh lebih tinggi, terutama dengan tidak adanya Heparin , dari formulasi lain . The
polidispersitas tinggi menunjukkan agregasi dan mungkin fusi dari Liposom SM yang dikaitkan
dengan virtual. kurangnya muatan permukaan bersih liposom tersebut . Keadaan fisik lapisan
ganda fosfolipid di suhu percobaan , bagaimanapun, juga berperan untuk stabilitas liposom
dispersi ( lihat di bawah ).

4.2. Gel-negara ersus cair kristal-negara

liposom
The PL80 bilayer fosfolipid di suhu percobaan dalam kristal cair Negara yang berkaitan dengan
fakta bahwa kepala nya konstituen, fosfatidilkolin, mengandung terutama asam linoleat, asam
lemak tak jenuh ganda (lihat Betz et al., 2001). SM bilayer, di sisi lain tangan, adalah pada suhu
percobaan di negara gel karena kandungan palmitat asam, asam lemak jenuh, di SM.
Pertimbangan ini mungkin bertanggung jawab untuk fashion berbeda di mana formulasi liposom
berinteraksi dengan stratum korneum. van den Bergh et al. (1998), menunjukkan dengan freezesubstitusi mikroskop electron bahwa liposom negara gel agregat, sekering dan mematuhi pada
permukaan stratum korneum, dengan demikian menyetorkan tumpukan lembaran pipih dan
membentuk jaringan lipid bilayer. Di sisi lain tangan, liposom kristal cair tidak agregat atau
sekering pada permukaan strata korneum tapi dilaporkan untuk menginduksi interaksi dengan
lipid interseluler di strata yang lebih dalam lapisan corneum. Fleksibilitas yang lebih besar dari
bilayer dan kebebasan bergerak individu molekul fosfolipid dalam kristal cair negara
dibandingkan dengan negara gel mungkin terkait perbedaan interaksi liposom dengan stratum
korneum Demikian pula , Zellmer et al . (1995 ) , melaporkan bahwa liposom fosfatidilkolin
tetap homogen tersebar dalam epidermis manusia direkonstruksi sementara phosphatidylserine
dan stratum korneum manusia lipid liposom dikumpulkan di permukaan dan di dalam lapisan sel
epidermis . Akhirnya , dalam karya Kuijk - Meuwissen van et al . ( 1998) , label diterapkan non occlusively dalam vesikel negara kristal cair pada tikus kulit secara in vivo menembus lebih
dalam ke dalam kulit dibandingkan bila diterapkan dalam vesikel negara gel . kehadiran 20-50 %
ethanol dalam formulasi liposomal dilaporkan untuk menurunkan transisi fase suhu dan
meningkatkan fluiditas liposomal yang membran sehingga meningkatkan interaksi dengan
stratum korneum . Dengan demikian , etanol mengandung persiapan vesikel fosfolipid disebut
ethosomes ditunjukkan untuk meningkatkan permeasi sifat obat melalui kulit hewan ( TOUITOU
et al . , 2000a TOUITOU et al . , 2000b ) .
Temuan gambar CLSM direkam sejajar dengan permukaan kulit dalam karya ini adalah
konsisten dengan hasil sastra tersebut. Hal ini dianggap bahwa distribusi fluoresensi berlabel
fosfolipid dalam jaringan mencerminkan distribusi liposom pembentuk lemak. Distribusi
homogeny dalam domain lipid stratum korneum diamati hanya untuk kristal cair negara PL80
liposom yang perilakunya dapat ditingkatkan dengan kehadiran etanol. SM liposom
menunjukkan distribusi yang tidak merata pada kulit yang mungkin bisa berhubungan dengan
diagregasi mereka pada permukaan kulit. Lokalisasi yang kuat lipid yang diamati di hadapan
Heparin mungkin karena fakta bahwa liposom ditutupi dengan Heparin, tidak memungkinkan
fosfolipid molekul untuk berinteraksi dengan strata corneum.
4.3. Seberapa dalam liposom menembus ke dalam kulit

Karena hanya fluoresensi berlabel fosfolipid divisualisasikan oleh CLSM, teknik ini memberikan
informasi yang dapat dipercaya tentang penetrasi fosfolipid di kulit tetapi bukan tentang
Pertanyaan apakah liposom dapat menembus sebagai utuh vesikel. Sebuah penetrasi dan
akumulasi lipid jauh ke dalam dermis terjadi dalam waktu 30 min dan penetrasi profil itu
dasarnya sama setelah 144 jam. Ini adalah independen dari komposisi formulasi liposom dan
kehadiran Heparin. The kecepatan penetrasi ditemukan di sini adalah tingkat yang sama tetapi
agak lebih besar daripada yang dilaporkan oleh lainnya pekerja, yaitu 1-3 h (Meuwissen et al.,
1998), atau 3-6 jam (Kuijk-Meuwissen van et al., 1998).
Penetrasi lipid melalui epidermis dan dermis atas muncul untuk mengikuti berbeda jalur seperti
benang. Gambar yang sama dilaporkan sebelum (van den Bergh et al., 1999) dan satu mungkin
berhipotesis bahwa dalam lapisan kulit bagian atas jalur ini sesuai dengan matriks lipid domain
dekat tepi corneocytes di stratum korneum (Cevc, 1996) dan antar yang domain dari epidermis
yang layak. Lebih Lanjut, pewarnaan fluoresensi intens batang rambut di seluruh panjang
menunjukkan bahwa lipid dapat mengikuti rute dari folikel rambut untuk menembus ke dalam
dermis lapisan. Selubung akar batin sekitarnya batang rambut memberikan peluang untuk
molekul untuk menyebar sepanjang folikel rambut. Kompartemen ini diisi dengan sebum yang
tidak tidak membentuk penghalang untuk difusi sebanding dengan domain antar hadir di SC.
Rambut folikel memiliki diameter sekitar 40 m (Dawber, 1985). Pintu masuk dari folikel rambut
dapat berfungsi sebagai perangkap bagi partikel (Schaefer dan Redelmeier, 1996). Penetrasi lebih
cepat fosfolipid ke dermis konsisten dengan jalur folikel. The intens neon lapisan bawah dermis
kasar dapat sesuai ke dermis retikular, yang terbuat dari padat dikemas bundel berserat tebal
kolagen.
Hal ini berlaku umum bahwa liposom standar tidak menembus utuh ke dalam kulit. Jarak antara
bilayers lipid antar sangat kecil dibandingkan dengan ukuran liposom standar, ukuran rata-rata
satu unit Landmann menjadi 12,8 nm (Madison et al., 1987). Memiliki diperdebatkan,
bagaimanapun, bahwa transfersomes mungkin dapat menembus ke dalam dan menyerap
seluruh kulit. Atas semua, sejauh mana interaksi antara vesikel lipid dan kulit tampaknya sangat
tergantung pada komposisi lipid liposom. Dengan demikian, label neon dari DMPC vesikel
diterapkan non-occlusively pada kulit mayat manusia tetap di atas kulit (Zellmer et al., 1995),
sementara dengan DLPC dan C12EO7 vesikel label neon terdeteksi terutama dalam stratum
korneum setelah 1 dan 3 jam dari aplikasi dan dalam dermis setelah 6 h (Meuwissen et al., 1998)
dan penambahan DOPE dan octaoxyethylene laurat ester untuk liposom Komposisi
meningkatkan penetrasi label fluoresensi ke stratum korneum (Kirjavainen et al, 1996, 1999;.
Van den Bergh et al., 1999).
5. Kesimpulan
Penetrasi fosfolipid dalam dermis lapisan dicapai dalam waktu yang relatif singkat waktu
terlepas dari komposisi liposom digunakan dalam penelitian ini. Folikel rambut cenderung
berperan sebagai jalur untuk penetrasi ini. Itu distribusi fosfolipid dalam matriks lipid stratum

korneum tergantung pada liposom Komposisi. Keadaan kristal cair dari membran bilayer
fosfatidilkolin jenuh dari Phospholipon 80 di hadapan etanol tampaknya mendukung distribusi
ini. Heparin membentuk lapisan di sekitar liposom dan pengaruh interaksi fosfolipid dengan lipid
matriks stratum korneum tetapi tidak mereka penetrasi ke dalam dermis yang lebih dalam.
Namun, penetrasi fosfolipid ke dalam dermis adalah tidak disertai dengan penetrasi Heparin
yang tetap di atas epidermis lapisan (Betz et al., 2001), menunjukkan bahwa disosiasi dari
Heparin dari liposom terjadi.
Ucapan Terima Kasih
Confocal Laser Scanning Microscopy dilakukan di Electron Microscopy Antar (IEM) Unit
Biocenter, Universitas Basel oleh Dr M. Duerrenberger. Kami sangat berterima kasih Dr
Duerrenberger untuk kontribusinya yang berharga untuk pekerjaan ini. Kami berterima kasih
kepada Institut Patologi dari University of Basel untuk menyediakan kulit biopsi. Untuk
pengukuran -Potensi instrument di laboratorium Profesor H. Wunderli- Allenspach, Lembaga
Ilmu Pengetahuan Farmasi, ETH Zurich digunakan.