ACADEMIA DE TIINE A MOLDOVEI

INSTITUTUL DE MICROBIOLOGIE I BIOTEHNOLOGIE

Cu titlu de manuscris
C.Z.U.: 547.915+577.18.05 + 661.122 (478)

LUPACU LUCIAN

ACTIVITATEA ANTIMICROBIAN I ANTIOXIDANT A

PREPARATULUI AUTOHTON ENOXIL

03.00.07 - Microbiologie
Tez de doctor n medicin

Conductor tiinific:

Rudic Valeriu,
dr.hab.n biologie,
profesor universitar,
academician

Autorul:

Lupacu Lucian

Chiinu, 2011

 Lupacu Lucian, 2011

CUPRINS
ADNOTRI...................................................................................................................................6
LISTA ABREVIERILOR.............................................................................................................9
INTRODUCERE.........................................................................................................................10
1. CERCETRI CONTEMPORANE CU

PRIVIRE LA INFECIILE

DE PLAG I TRATAMENTUL ACESTORA CU

PREPARATE DE

ORIGINE NATURAL.............................................................................................................18

1.1. Aspecte istorice, medico-ecologice i economice ale unor infecii nozocomiale, oportuniste
i de plag......................................................................................................................................18
1.2. Particularitile infeciilor de plag. Fenomenul de rezisten antimicrobian......................19
1.3. Particularitile biologice i patogenice ale unor bacterii (P.aeruginosa,
E.coli, S.aureus) implicate n diverse infecii de plag................................................................21
1.4. Particularitile unor micoze oportuniste hialohifomicoze................................................26
1.5. Aspecte de management al rezistenei patogenilor umani la antibiotice................................28
1.6.Particulariti

de

structur,

activitate

utilizare

ale

taninurilor.......................................................................................................................................31
1.6.1. Proprieti fizico-chimice ale taninurilor.............................................................................31
1.6.2. Aplicarea extraselor fenolice din plante la tratarea infeciilor i
plgilor...........................................................................................................................................32
1.6.3. Fenomenul stresului oxidant. Taninuri din semine de struguri, activitate
biologic i aplicaii.......................................................................................................................35
1.6.4. Mecanisme de aciune antimicrobian a taninurilor......................................................38
1.6.5. Mecanisme ale activitii antioxidante i regenerative ale taninurilor..............................39
1.7. Concluzii la capitolul 1..........................................................................................................45

2.

ELABORAREA

COMPUSULUI

ENOXIL

CU

PROPRIETI

POLIFUNCIONALE ANTIMICROBIENE I ANTIOXIDANTE................................47

2.1. Procedeu de obinere a compusului Enoxil............................................................................47

2.2.Proprietile antioxidante ale Enoxilului.................................................................................50
2.3. Studii comparative ale activitii antimicrobiene a Enoxilului i enotaninurilor
asupra unor ageni oportuniti ageni cauzali ai hialohifomicozelor......................................52
3

2.3.1. Aspecte metodice de testare a aciunii fungitoxice a Enoxilului i prelucrare statistic a

datelor............................................................................................................................................52
2.3.2. Aciunea Enoxilului i enotaninurilor asupra fungilor Fusarium oxysporum i
F.solani in vitro.............................................................................................................................53
2.3.3. Analiza corelaional i regresional a stabilitii fungitoxice
a compusului Enoxil......................................................................................................................61
2.4. Concluzii la capitolul 2...........................................................................................................64

3. ACTIVITATEA ANTIMICROBIAN A PREPARATULUI ENOXIL PENTRU

UNII AGENI INFECIOI AI DIFERITELOR TIPURI DE PLGI..............................65

3.1. Materiale i locul efecturii cercetrilor.................................................................................65

3.2. Pregtirea inoculului bacterian i fungic..............................................................................65
3.3. Titrarea preparatului prin metoda diluiilor duble n serie....................................................66
3.4. Analiza de microscopie electronic a bacteriilor E.coli i S.aureus.....................................67
3.5. Testarea aciunii preparatului Enoxil asupra bacteriei P.aeruginosa la nivel biochimic......67
3.6. Determinarea concentraiilor minime inhibitorii i bactericide/fungicide ale Enoxilului......68
3.7. Determinarea timpului eficient de aciune a Enoxilului, n concentraie bactericid.............69
3.8. Microscopia electronic a celulelor bacteriene de E.coli i S.aureus,
tratate cu Enoxil...........................................................................................................................72
3.9. Aciunea preparatului Enoxil asupra unor indici biochimici i funcionali ai tulpinilor de
bacterii P.aeruginosa.....................................................................................................................74
3.10. Influena concentraiei statice de Enoxil asupra rezistenei P.aeruginosa
la antibiotice...................................................................................................................................76
3.11. Concluzii la capitolul 3.........................................................................................................82

4. STUDII CLINICE ALE PREPARATULUI ENOXIL........................................................83

4.1. Testarea clinic a preparatului Enoxil n tratamentul local al ulcerelor trofice de

gamb.............................................................................................................................................83
4.2. Testarea clinic a preparatului Enoxil n tratamentul plgilor postoperatorii i leziunilor
postradiante la bolnavele oncologice.............................................................................................84
4.3. Aplicarea preparatului Enoxil n tratamentul leziunilor termice...........................................87
4

4.4. Testarea eficienei preparatului Enoxil n clinica de chirurgie oro-maxilo-facial

pediatric........................................................................................................................................92
4.5. Concluzii la capitolul 4...........................................................................................................94

5. SINTEZA REZULTATELOR OBINUTE.........................................................................95

CONCLUZII..........................................................................................................................101
RECOMANDARE.................................................................................................................102
BIBLIOGRAFIE...................................................................................................................103
ANEXE ..................................................................................................................................122
Anexa 1: Brevet de invenie. 3113 G2, MD, A 01 N 65/00. Compus ce posed
activitate fungitoxic pentru ciuperca Fusarium oxysporum Snyd.et Hans / Cererea depus
02.08.2006, BOPI nr 8/2006........................................................................................................123
Anexa 2: Brevet de invenie. 3125 G2, MD, A01N 65/00. Procedeu de obinere a
enotaninurilor

hidrosolubile/

Cererea

depus

08.02.2006,

BOPI

nr

9/2006..........................................................................................................................................125
Anexa 3: Brevet de invenie. 3139 G2, MD, A 01 N 65/00. Compus ce posed
activitate fungitoxic pentru ciuperca Fusarium solani (Mart.) App. Et. Wr. / Cererea
depus 08.02.2006, BOPI nr 9/2006...........................................................................................127
Anexa 4: Brevet de invenie. 3979 F1, MD, C 08 H 5/00, C 07 D 311/30. Compus
cu proprieti antioxidante / Cererea depus 30.09.2008, BOPI, nr 11/2009.............................129
Anexa 5: Act de implementare al Regulamentului Tehnologic de producere a preparatului
Farmaceutic Enoxil, soluie alcoolic 5 i 10% din 05.11.2009..................................................131
Anexa 6: Act de implementare al Regulamentului Tehnologic de producere a preparatului
Farmaceutic Enoxil, soluie apoas 5 i 10% din 05.11.2009.....................................................132
Anexa 7: Act de implementare al Regulamentului Tehnologic de producere a preparatului
Farmaceutic Enoxil, unguent de 1 i 5% din 05.11.2009............................................................133
Anexa 8: Aviz emis de Agenia Medicamentului pentru desfurarea Studiului Clinic............134
DECLARAIA PRIVIND ASUMAREA RSPUNDERII....................................................136
CV-ul AUTORULUI.................................................................................................................137

ADNOTARE

Lupacu Lucian Activitatea antimicrobian i antioxidant a preparatului autohton

Enoxil. Tez de doctor n medicin, Chiinu, 2011. Teza const din introducere, 5 capitole,
concluzii, recomandri, bibliografie din 238 titluri, 102 pagini coninut de baz, 19 tabele, 28
figuri. Rezultatele obinute sunt publicate n 19 lucrri tiinifice.

Cuvinte cheie: preparat Enoxil, activiti antibacteriene, antifungice, antioxidante, rezisten

antimicrobian, plag, regenerare.
Domeniul de studiu: 03.00.07 Microbiologie.
Scopul lucrrii: elucidarea activitii antimicrobiene i antioxidante a preparatului autohton
Enoxil i utilizarea acestuia n tratamentul local al ulcerelor trofice de gamb, plgilor
combustionale, mecanice i postoperatorii.
Obiectivele lucrrii: elaborarea procedeului de obinere a unui nou compus polifuncional din
enotaninuri, cu solubilitate nalt n ap i alcool; stabilirea activitii

antimicrobiene i

antioxidante a compusului elaborat Enoxilului; elucidarea particularitilor activitii

enzimatice i modificrilor morfo-structurale ale celulelor bacteriene sub aciunea Enoxilului;
elucidarea capacitii regenerative a Enoxilului n tratamentul local al ulcerelor trofice de gamb,
plgilor combustionale, mecanice i postoperatorii.
Noutatea i originalitatea tiinific. Elaborarea unui preparat taninic complex, polifuncional
(Enoxil), cu nalte capaciti antimicrobiene (mrirea permeabilitii peretelui celular, inhibiia
activitii enzimatice i a multiplicrii), antioxidante (captarea radicalilor liberi) i regenerative.
Problema tiinific soluionat. Stabilirea activitilor antimicrobiene, antioxidante i
regenerative ale unui nou compus autohton de origine taninic Enoxil.
Semnificaia teoretic. Elucidarea activitii antimicrobiene i antioxidante a unui nou compus
de origine taninic Enoxil.
Valoarea aplicativ a lucrrii: Elaborarea unui preparat autohton Enoxil eficient n tratarea
plgilor de divers etiologie, rentabil din punct de vedere economic.
Implementarea rezultatelor tiinifice. n baza Enoxilului au fost implementate tehnologiile de
obinere a loiunilor i unguentelor la .M. "FARMACO" S.A. Preparatul Enoxil a fost supus
testrilor clinice la Dispanserul Dermatovenerologic Republican, Secia Mamologie a Institutului
Oncologic, Secia Combustiologie a Spitalului Clinic Traumatologic Republican, Spitalul Clinic
Republican pentru Copii Em.Coaga.
6

, 2011.

, 5 , , ,

238 , 102 , 19 , 28

. 19 .

, , , .
: 03.00.07 .
:
,
, . :
-
; ,
; -
;
, ,
. .

() ( ,

),

( ) .
. ,
.
.
. :

.
"FARMACO" .
, ,
,
. .
7

SUMMARY
Lupascu Lucian The antimicrobial and antioxidant activities of the localy produced
compound Enoxil. The doctor of medicine thesis, Chisinau, 2011. The thesis consists of the
introduction, 5 chapters, conclusions, recommendations, bibliography of 238 sources, 102 pages
of basic text, 28 figures, 19 tables. The obtained results were publicated in 19 scientific works.
Key words: Enoxil compound, antibacterial, antifungal, antioxidant activities, antimicrobial
resistance, wound, regeneration.
The research domain: 03.00.07 Microbiology.
The aim of the work: the elucidation of the antimicrobial and antioxidant activities of the
locally produced compound Enoxil and its use in the local treatment of the leg ulcers,
combustional, mechanical and postoperational wounds.
The research objectives: the elaboration of the obtaining procedure of a new polyfunctional
compound from enotannins, with high water and alcochol solubility; the establishment of the
antimicrobial and antioxidant activities of the obtained compound Enoxil; the elucidation of
the enzymatic activity peculiarities and structural modifications of the bacterial cells under the
Enoxil action; the elucidation of the Enoxil regenerative capacity for the local treatment of the
leg ulcers, combustional, mechanical, and postoperational wounds.
The novelty and the scientific originality: The elaboration of a complex tannic compound,
polyfunctional (Enoxil), with high antimicrobial (the increase of the wall permeability, inhibition
of the enzymatic and multiplication activities), antioxidant(free-radical scavenging) and
regenerative properties.
The scientific solved problem: The establishement of the antimicrobial, antioxidant and
regenerative activities of a new locally produced compound of tannic origin Enoxil.
The theoretical significance: the elucidation of the antimicrobial and antioxidant properties of a
new tannic origin compound Enoxil.
The applicative value of the work: The elaboration of the locally produced compound Enoxil
efficient in the treatment of the plagues of diverse etiology and profitable from the economical
point of view.
The implementation of the scientific results: On the basis of Enoxil were implemented the
obtaining technologies of the

lotions and

ointments at the FARMACO company. The

compound Enoxil was tested at the: Republican Dermato-Venerology Dispencer, Mamology

Unit of the Oncology Institute, Combustiology Unit of the Clinical Republican Traumatological
Hospital, Clinical Republican Hospital for Children E.Cotsaga.
8

LISTA ABREVIERILOR
AA activitate antioxidant;
CMB concentrai minim bactericid;
CMF concentrai minim fungicid;
CMI concentrai minim de inhibiie;
CL chemiluminiscen;
DMSO dimetilsulfoxid;
ESS extract de semine de struguri;
HPI hidroperoxidaza;
ISPN infecii septico-purulente nozocomiale;
NINSS Nosocomial Infection National Surveillance Service;
MALDI Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization;
PCT polichimioterapie;
RT radioterapie;
TD Turner Design;
UV ultraviolet.

INTRODUCERE
Actualitatea temei i importana problemei. Infeciile de plag, din cele mai vechi
timpuri i pn n prezent, sunt o problem major medical, social i economic.
Dei infeciile de plag se ntlnesc cu preponderen n rile cu nivel economic precar
i standarde joase de igien, n ultimele decenii acestea au devenit o preocupare serioas i
pentru rile cu dezvoltare socio-economic nalt [231].
Plgile, de orice origine, sunt periculoase pentru viaa omului datorit hemoragiilor i
dezvoltrii infeciilor, consider unii autori [53, 117, 118, 149].
O mare ngrijorare prezint infeciile intraspitaliceti (nozocomiale) de plag. Conform
datelor recente, acestea

complic nsntoirea, produc anxietate, mresc discomfortul

pacientului i pot conduce la deces, prezentnd, totodat, un pericol serios i pentru lucrtorul
medical [198, 231].
Unii autori opineaz c acordarea unei atenii mari pacienilor cu infecii de plag aparent
ar prea lipsit de temei, ntruct exist numeroase preparate antibiotice care pot fi utilizate n
permanen n efortul de a controla agenii cauzali ai infeciilor de plag [65].
Infeciile postoperatorii de plag prezint complicaii importante n cadrul interveniilor
chirurgicale cauzate, n special, de speciile Staphylococcus coagulazo-negative, rezistente la
multe antibiotice, din care cauz un tratament eficient presupune debridarea rnii i terapia
antimicrobian prelungit [142].
n calitate de ageni patogeni ai infeciilor de plag pot fi bacteriile, fungii, protozoarele i
virusurile, efectul depinznd de structura i capacitile metabolice ale acestora [80, 66]. Este
important de tiut c diferite microorganisme pot exista n comuniti polimicrobiene, din care
cauz acestea adesea sunt prezente n cadrul plgilor [54].
Nu sunt neglijabile nici aspectele economice ale problemei. Conform unor date,
pagubele economice anuale n urma infeciilor septico-purulente doar n mun.Chiinu constituie
circa 19 mln 683 mii lei [14].
Printre cele mai frecvente microorganisme n plaga purulent se constat bacteriile grampozitive Staphylococcus aureus, gram-negative Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa,
Proteus vulgaris i fungul Candida albicans, considerai ca ageni cauzali ai acestor boli [183].
Una din metodele tradiionale de combatere a infeciilor este utilizarea antibioticelor. n
ultimul timp, ns, se constat un fenomen ngrijortor, tot mai evident rezistena
microorganismelor la aceste preparate [224]. Rezistena bacililor gram-negativi la medicamente
se datoreaz extinciei spectrului de betalactamaze [198]. Un impediment serios n tratamentul
10

acestor infecii este spectrul diferit al izolatelor bacteriene n dependen de timp i aria
geografic [40].
Prin aciunea de monitoring al rezistenei

microorganismelor la preparatele

antimicrobiene, demarat n Republica Moldova n 2002 s-a constatat, ca i n ntreaga lume,

fenomenul tot mai evident de cretere a rezistenei tulpinilor de microorganisme-ageni patogeni
ai multor infecii, la aciunea antibioticelor. Astfel, conform datelor medicilor de la Centrul de
Medicin Preventiv din or. Ungheni [16], rezistena multor ageni patogeni, inclusiv celor din
grupul pseudomonadelor, stafilococilor, candidelor .a. a constituit circa 70-90% pentru
peniciline, n timp ce n anul 2004 indicele constituia 35 i 52%, respectiv, pentru ampicilin i
oxacilin. Chiar i pentru cefalosporinele de ultim generaie, se observ o cretere rapid a
rezistenei. De exemplu, la cefazolin rezistena a crescut de la 38,2 pn la 73,2%, iar la
cefalexin de la 18,8 la 69,2%, respectiv pentru anii 2004 i 2007.
Speciile de Pseudomonas i cele din cadrul familiei de Enterobacteriaceae, printre
bacilii gram-negativi, prezint un procent nalt de rezisten pentru asemenea antibiotice larg
utilizate, ca gentamicina i amikacina, ciprofloxacina, carbenicilina, tobramicina, amoxicilina,
cefotaxim [34]. n mai mult de 90% cazuri, P.aeruginosa este rezistent la gentamicin,
ceftizoxim, carbenicilin, cefalotin, ceftazidim. Antibioticele,

pentru care bacteria

prezint

sensibilitate sunt amikacina i tetraciclina [113].

Acest microorganism, se poate dezvolta n urmtoarele situaii clinice: arsuri, traume,
proceduri de tatuaj, perioad postoperatorie, celulite la pacienii neutropenici, ulcere cronice
decubitale, foliculite, piodermii. Infeciile pielii cauzate de P.aeruginosa ca complicaii ale
combustiilor prezint o nalt rat de mortalitate, n pofida terapiei agresive cu antibiotice [90].
P.aeruginosa este unul dintre cele mai frecvente microorganisme izolate de la pacienii cu
combustii, atestndu-se n 57% cazuri de culturi tisulare [183].
Pentru testarea activitii antipseudomonadice a preparatelor este important de relevat
indicii biologici de baz care asigur viabilitate bacteriei. Astfel, o particularitate biologic
caracteristic speciei P.aeruginosa, utilizat cu succes la identificarea acesteia este posibilitatea
unical a microorganismului de a sintetiza pigmentul fenazinic hidrosolubil piocianina care
coloreaz mediul nutritiv sau pansamentele bolnavilor n culoare albastr-verzuie. Se consider,
c lipsa sau diminuarea capacitii de pigmentogenez a tulpinilor de P.aeruginosa este
determinat de aciunea inhibitorie a microflorei asociate, antibioticelor sau a insuficienei de
oxigen. S-a stabilit, ca piocianina are rol de protecie a celulelor de P.aeruginosa mpotriva
influenei negative, produse de schimbarea concentraiei de oxigen n atmosfer i de aciunea
11

letal a razelor ultraviolete (UV). Prezena pigmentului, ajut bacteriei s suporte hipoxia n
timpul dezvoltrii infeciei n esuturile profunde, iar rezistena mpotriva razelor UV determin
supravieuirea patogenului la sterilizarea cu raze UV a obiectelor mediului nconjurtor. Aceste
proprieti ale pigmentului relev c tulpinile cu capaciti de sintez a piocianinei fiind mai
rezistente, sunt i mai periculoase [26]. Totodat, piocianina particip la diverse mecanisme
patogenice, precum ar fi traumarea epiteliului respirator i declanarea proceselor proinflamatorii
ale fagocitelor. Un alt grup de enzime al bacteriei hemolizinele (fosfolipaza, lecitinaza) care se
identific n majoritatea cazurilor prin apariia zonelor de hemoliz a eritrocitelor n jurul
coloniilor crescute pe mediu agarizat cu snge de 5% [133, 197], contribuie la invazia bacterian
datorit efectelor citotoxice asupra celulelor implicate n reaciile imunitare neutrofilelor i
limfocitelor [114].
Tratamentul permanent i, adesea, abuziv cu antibiotice a condus la selectarea noilor
virulene, agresive i severe cu potenial genetic nalt de rezisten. Aceast situaie orienteaz
specialitii n domeniu spre elaborarea preparatelor antimicrobiene, n special, de origine
vegetal i bazate pe mecanisme de aciune principial noi [15]. Dei utilizarea extractelor
taninice din plante pentru tratarea diferitelor infecii ale dermului i plgilor este cunoscut de
mult vreme, totui, acestea nu prezint efectul scontat pentru multe microorganisme [188].
Totodat, la moment nu exist o gam vast de preparate medicinale eficiente, elaborate n baza
acestor compui.
Astfel, creterea rezistenei microorganismelor la medicamente i a adaptrilor
evoluioniste ale acestora a redus mult eficiena agenilor antimicrobieni [190].
Oportunitatea

obinerii preparatelor

medicinale antimicrobiene eficiente n baza

extractelor din diverse specii de plante ce conin taninuri, fenoli, flavonoizi a fost menionat n
mai multe lucrri [46, 141, 164, 219]. Totodat, aplicabilitatea compuilor taninici n scopul
vizat este restrns, n mare parte, datorit insolubilitii multora din ei n soluii apoase sau
alcoolice.
Dezvoltarea intensiv a industriei n plan global n ultimii 50 de ani ai secolului XX i
primii ani ai secolului XXI, a produs perturbri fr precedent n corelarea ecosisteme
biosisteme pe planeta Pmnt. Organismul uman zi de zi este inta unor factori nocivi cum ar fi:
ageni poluani, stres, conservani, fum de tutun, pesticide, raze X, radiaii ultraviolete,
ultrasunete, microunde, computere, etc. Recent, Organizaia mondial a Sntii a prezentat un
studiu statistic prin care se pune n eviden corelaia ngrijortoare ntre gradul de dezvoltare
industrial a societii i incidena maladiilor cardio-vasculare i canceroase, care sunt o
12

consecin direct a complexului de fenomene reunite sub termenul de stres oxidant i care
este definit ca o producie exagerat de radicali liberi oxigenai n organismul uman, nsoit de
diminuarea agenilor antioxidani. O soluie posibil de rezolvare a acestei

probleme este

folosirea antioxidanilor naturali, care neutralizeaz radicalii liberi i protejeaz celulele

organismului uman.
Este cunoscut faptul c seminele de struguri prezint o surs bogat de aa numitele
enotaninuri taninuri condensate care reprezint o gam vast de substane naturale cu structur
polifenolic, remarcate prin coninut nalt de proantocianidine [126]. Cea mai mare parte a
enotaninurilor sunt insolubile n ap, din care motiv utilizarea lor n calitate de antioxidani este
dificil.
Cercetrile tot mai intense cu privire la capacitatea extraselor fenolice (taninice) de a
dezinfecta i trata mai rapid rnile au demonstrat c aceasta se bazeaz pe dou fenomene de
baz activitatea antimicrobian i antioxidant. La rndul lor, aceste fenomene se bazeaz pe
un ir de mecanisme, dintre care cele cunsocute sunt captarea ionilor de fier din substrat i, deci,
deprivarea microorganismelor de compuii necesari pentru activitatea fiziologic; jonciunea
acestora cu proteinele microbiene i formarea complecilor; captarea radicalilor liberi; absorbia
radicalilor de oxigen; inhibiia oxidrii lipoproteinelor de densitate joas. Totodat, mecanismele
de rezisten a microorganismelor mpotriva taninurilor se realizeaz prin detoxifierea acestora
ca urmare a sintezei polimerilor de complexare a taninurilor, oxidarea compuilor, biodegradarea
acestora i sinteza sideroforilor [109].
Polifenolii plantelor sunt cunoscui ca taninuri i percepui, n general, ca compui toxici
[191], probabil din cauza abilitii lor s precipite proteinele. Aceast proprietate, numit
astringen n sens chimic, se menioneaz n cazul cnd unguentele de acid tanic se utilizeaz
pentru tratarea combustiilor superficiale [100].
Toxicitatea taninurilor este determinat de aciunea acestora asupra membranelor
microorganismelor i de formare a complecilor cu ionii de metal. Astfel, acidul tanic cu efect
inhibitoriu asupra creterii unor bacterii intestinale,

aa ca Bacillus fragilis, Clostridium

perfringens, Escherichia coli i Enterobacter cloacae, capteaz fierul din mediul nutritiv,
fcndu-l inaccesibil pentru microorganismele ce activeaz n condiii aerobe, n special, pentru
bacteriile intestinale, care au nevoie de fier pentru activitile vitale [61, 62].
Taninurile formeaz compleci ireversibili cu proteinele, ceea ce conduce la inhibarea
sintezei proteinelor celulare [99], formnd precipitate care ulterior se transform n cicatrice
protectoare i antiseptic [31] i acest lucru este important n tratarea esuturilor inflamate i
13

ulceroase [153]. Capacitatea antimicrobian i antioxidant a preparatelor taninice asigur

aplicarea acestora la tratarea rnilor [30, 124, 136].
Cercetarea aciunii antibacteriene, prin testul de plasmocoagulare, a ctorva tanine
acidului

tanic,

acidului

galic,

acidului

elagic,

epicatechinei,

epicatechingalatului,

epigalocatechingalatului asupra S.aureus a relevat c acidul tanic este prioritar n investigaii ca

posibil agent adjuvant mpotriva infeciilor de plag cauzate de S.aureus i tratate cu antibiotice
-lactamice. Se consider c mecanismele antimicrobiene de baz ale taninurilor constau n
complexarea acestora cu enzimele microbiene sau substraturile nutritive datorit proprietii
astringente ale taninurilor. Multe enzime microbiene, n filtratele de cultur sau n form
purificat i inhib activitatea la amestecarea cu taninuri [105].
n Republica Moldova exist taninuri din semine de struguri (enotaninuri) n cantiti
industriale. Lund n consideraie faptul c multe taninuri cu proprieti antimicrobiene sunt
insolubile n ap, i, totodata, apariia rezistenei microbiene la taninurile vegetale, de mare
perspectiv se prezint cercetrile cu privire la posibilitatea de modificare structural a
enotaninurilor, mririi gradului de oxidare n scopul sporirii eficienei i aplicrii acestora la
tratarea infeciilor de plag. Pentru realizarea acestui deziderat este necesar obinerea noilor
compui taninici cu activiti antimicrobiene i antioxidante nalte care ar asigura un tratament
eficient, rapid i economic avantajos al infeciilor de plag.
Scopul prezentei lucrri a constat n elucidarea activitii antimicrobiene i antioxidante a
preparatului autohton Enoxil i utilizarea acestuia n tratamentul local al ulcerelor trofice de
gamb, plgilor combustionale, mecanice i postoperatorii.
Obiectivele cercetrilor:
-

elaborarea procedeului de obinere a unui nou compus polifuncional din enotaninuri,

cu solubilitate nalt n ap i alcool;

stabilirea activitii antimicrobiene i antioxidante a compusului Enoxil elaborat;

elucidarea particularitilor activitii enzimatice a celulelor bacteriene sub influena

Enoxilului;

stabilirea modificrilor morfo-structurale ale celulelor bacteriene sub aciunea

Enoxilului;

elucidarea capacitii regenerative a Enoxilului n tratamentul local al ulcerelor trofice

de gamb, plgilor combustionale, mecanice i postoperatorii.

14

Noutatea

tiinific a rezultatelor. Pentru prima dat a fost elaborat un preparat

complex polifuncional Enoxil, cu nalte capaciti antimicrobiene, antioxidante i regenerative

n baza enotaninurilor autohtone.
S-a constatat c activitatea antioxidant a preparatului Enoxil, stabilit prin metoda de
chemiluminiscen, se bazeaz pe capacitatea nalt de captare a radicalilor liberi din sistem.
Prin microscopie electronic i teste biochimice s-a stabilit c activitatea antibacterian a
preparatului Enoxil are la baz marirea permeabilitii peretelui celular, precum i inhibiia unor
enzime importante pentru activitatea fiziologic a organismului bacterian, ceea ce contribuie, n
final, la blocarea procesului de diviziune celular a bacteriilor.
Problema tiinific important soluionat n lucrare const n stabilirea activitilor
antimicrobiene, antioxidante i regenerative ale unui nou compus autohton de origine taninic
Enoxil.
Importana teoretic i valoarea aplicativ a lucrrii. Au fost elucidate activitile
antimicrobiene i antioxidante ale unui nou compus de origine taninic. Activitatea
antibacterian a preparatului Enoxil se bazeaz pe capacitatea de inhibiie a activitii unor
enzime importante ceea ce conduce la reprimarea procesului de multiplicare, antifungic pe
reprimarea creterii lineare a coloniilor fungice (Fusarium spp.), iar activitatea antioxidant pe
capacitatea nalt de captare a radicalilor liberi din sistem.
n tratamentul local al ulcerelor trofice de gamb preparatul Enoxil, n soluie apoas de
0,6% a demonstrat eficien prin reducerea fenomenelor inflamatorii, micorarea eliminrilor din
plag, accelerarea cicatrizrii, durata tratamentului fiind cu 5-7 zile mai mic n comparaie cu
tratamentul obinuit.
S-a constatat c preparatul Enoxil, n soluie apoas de 1-5%, n tratamentul leziunilor
postradiante ale bolnavelor oncologice a manifestat eficien n ceea ce privete indicii clinici de
baz, micornd durata de tratament cu 3 zile.
n tratamentul leziunilor termice, preparatul Enoxil n soluie apoas de 1% a demonstrat
eficien prin diminuarea eliminrilor purulente din plag, accelerarea proceselor de epitelizare,
reducerea timpului de cicatrizare a zonelor donore i a transplantelor, ameliorarea riiei i
decolrii timpurii a crustei, reducerea fenomenelor toxice generale i gradului de infectare a
plgilor, epitelizarea rapid cu rezultat estetic bun, micornd durata de tratament (comparativ cu
preparatul Betadin), termenul depinznd de suprafaa plgii.
n clinica de chirurgie oro-maxilo-facial pediatric preparatul Enoxil, n soluie apoas de
5%, a prezentat eficien n tratamentul leziunilor traumatice ale esuturilor moi, afeciunilor
15

inflamatorii, manifestat prin micorarea termenelor de lichidare a eliminrilor purulente din

plag i micorarea duratei de vitalizare a plgii cu 2-3 zile comparativ cu tratamentul obinuit.
Aprobarea rezultatelor tiinifice. Rezultatele tiinifice expuse n lucrare au fost
comunicate i discutate n cadrul diferitelor foruri tiinifice naionale i internaionale:
Conferina IV-a Internaionala a Tinerilor Cercettori, Chiinu, 10 Noiembrie, 2006; Conferina
de Inginerie Biomedical INGIMED 2006, Editia VII, Bucureti, Romnia, 9-10 noiembrie
2006; Conferina Internaional a Tinerilor Cercettori, Ediia VI, Chiinu, 06-07.11.2008;
Congresul VI al Igienitilor, Epidemiologilor i Microbiologilor din R.Moldova, Chiinu, 2324 octombrie, 2008; a XII-a Conferin Naional de Microbiologie cu participare internaional,
Sibiu, Romnia, 30.10.2008-01.12.2008.
Tema tezei de doctor n tiine medicale Activitatea antimicrobian i antioxidant a
preparatului autohton Enoxil a fost aprobat la edina Catedrei de Microbiologie, Virusologie
i Imunologie a Universitii de Stat de Medicin i Farmacie Nicolae Testemianu, proces
verbal nr.12 din 10.06.2009. Rezultatele tezei au fost discutate i aprobate la edina Catedrei de
Microbiologie, Virusologie i Imunologie din 22.06.2010, proces verbal nr.8 din 22.06.2010 i n
cadrul Seminarului tiinific de Profil, specialitatea 03.00.07 Microbiologie , proces verbal nr.1
din 17.02.2011.
Sumarul compartimentelor tezei. Teza cuprinde adnotri n limbile romn, rus i
englez, lista abrevierilor, introducere, 5 capitole, concluzii generale, recomandare practic,
bibliografia, declaraia privind asumarea rspunderii, CV-ul autorului.
n partea introductiv a lucrrii, sunt prezentate actualitatea i importana tiinificopractic a problemei abordate, scopul, obiectivele, descris noutatea tiinific, importana
teoretic i valoarea aplicativ a lucrrii, aprobarea rezultatelor.
Capitolul 1 Cercetri contemporane cu
tratamentul acestora cu

privire la

infeciile de plag i

preparate de origine natural (reviul literaturii) prezint

analiza detaliat a datelor bibliografice referitor la aspectele istorice, medico-ecologice i

economice ale unor infecii nozocomiale, oportuniste i de plag; fenomenul de rezisten
antimicrobian; particularitile

biologice i patogenice ale unor bacterii (Pseudomonas

aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus) implicate n diverse infecii; micozele

oportuniste hialohifomicoze; particularitile de structur, activitate i utilizare n medicin ale
taninurilor, inclusiv, a celor din semine de struguri; mecanismele antimicrobiene i antioxidante
ale taninurilor; mecanismele bacteriene de aciune antitaninic.

16

Capitolul 2 Elaborarea compusului Enoxil cu proprieti polifuncionale

antimicrobiene i antioxidante prezint date despre procedeul de obinere i proprietile
antioxidante ale Enoxilului, analizele comparative ale activitii antimicrobiene a Enoxilului i
enotaninurilor asupra unor ageni oportuniti ageni cauzali ai hialohifomicozelor.
Capitolul 3 Activitatea antimicrobian a preparatului Enoxil pentru unii ageni
infecioi ai diferitelor tipuri de plgi

descrie materialul i aspectele metodice ale

cercetrilor: mediile de cultur geloz peptonat, bulion peptonat, agar Miuller-Hinton, bulion
Sabouraud; pregtirea inoculului bacterian i fungic; determinarea concentraiilor minime
inhibitorii i bactericide/fungicide ale Enoxilului; analiza de microscopie electronic a bacteriilor
E.coli i

S.aureus; aciunea Enoxilului asupra tulpinilor de bacterii P.aeruginosa la nivel

biochimic; determinarea timpului eficient de aciune a Enoxilului n concentraie bactericid;

influena concentraiei statice de Enoxil asupra rezistenei P.aeruginosa la antibiotice.
Capitolul 4 Studii clinice ale preparatului Enoxil conine date cu privire la eficiena
clinic a preparatului Enoxil n tratamentul ulcerelor trofice de gamb, plgilor postoperatorii i
leziunilor postradiante la bolnavele oncologice, leziunilor termice i n clinica de chirurgie oromaxilo-facial pediatric.
Capitolul 5 Sinteza rezultatelor obinute prezint analiza comparativ a datelor din
literatur despre activitatea antimicrobian, antioxidant i regenerativ a preparatelor taninice
cunoscute i a rezultatelor obinute cu privire la activitile menionate pentru preparatul
autohton de origine taninic Enoxil.

17

1. CERCETRI CONTEMPORANE CU
I TRATAMENTUL ACESTORA CU

PRIVIRE LA INFECIILE DE PLAG

PREPARATE DE ORIGINE NATURAL

1.1. Aspecte istorice, medico-ecologice i economice ale unor infecii nozocomiale,

oportuniste i de plag
Conform unor autori, infeciile intraspitaliceti, numite nozocomiale prezint unele din
problemele de baz ale medicinii contemporane, n patologiile acestora predominnd infeciile
septico-purulente. Aceste infecii conduc la implicaii multiple: prelungirea duratei de spitalizare,
agravarea bolii de baz, apariia complicaiilor, sechelelor sau deceselor, creterea cheltuielilor
pentru tratamentul i ntreinerea bolnavilor [14].
n Republica Moldova, frecvena morbiditii i letalitii n cazul infeciilor nozocomiale
constituie, respectiv, 6,5 i 2,0 la 1000 persoane spitalizate, acestea revenind, n special, nounscuilor. Pagubele economice anuale n urma infeciilor septico-purulente nozocomiale (ISPN),
doar n mun. Chiinu constituie circa 19 mln 683 mii lei [14].
Investigaiile bacteriologice ale agenilor care provoac ISPN au demonstrat c 53,8%
cazuri au fost provocate de bacterii grampozitive, dintre care 83,9% au revenit bacteriilor
Staphylococcus spp. n seciile chirurgicale se constat infecii mixte de E.coli (27,6%) i
S.aureus (26,8%). De mare importan se prezint problema creterii rezistenei agenilor cauzali
la antibiotice. Printre factorii ce contribuie la apariia i intensificarea fenomenului este
considerat utilizarea neraional a preparatelor antibacteriene [14].
Unii autori consider c majoritatea infeciilor fungice nozocomiale sunt cauzate de
speciile Candida [175]. De menionat, c multe specii de fungi, anterior considerai nepatogeni,
de exemplu, cele din genurile Malasezzia, Fusarium, Trichosporon s-au dovedit a fi implicate n
aceste tipuri de infecii [193]. Conform unor opinii, acordarea unei atenii mari pacienilor cu
infecii de plag aparent ar prea lipsit de temei, ntruct exist numeroase preparate antibiotice
care pot fi utilizate n permanen n efortul de a controla agenii cauzali ai acestor infecii [65].
Infeciile postoperatorii de plag prezint complicaii importante n cadrul interveniilor
chirurgicale spinale cauzate, n special, de speciile Staphylococcus coagulazo-negative,
rezistente la multe antibiotice, din care cauz un tratament eficient presupune debridarea rnii i
terapia antimicrobian prelungit [142].
S.aureus i Streptococii grupului A, invadatori comuni ai pielii exematoase, traumatizate
i imunocompromise prezint infecii clinice primare: impetigo, foliculite, furuncule, carbuncule,
celulite i secundare: ulcere i exeme infectate [214].
18

1.2. Particularitile infeciilor de plag. Fenomenul de rezisten antimicrobian

Plgile, de orice origine, sunt periculoase pentru viaa omului datorit hemoragiilor i
dezvoltrii infeciilor [53, 117, 118, 149]. Cu referin la datele NINSS [161], unii autori
comunic c infeciile de plag complic nsntoirea, produc anxietate, mresc discomfortul
pacientului i pot conduce la deces [230].
Problemele socio-economice, importana profesionalismului n tratarea infeciilor de
plag sunt considerate probleme prioritare chiar i pentru rile cu economie dezvoltat [66, 91,
158, 210], iar msurile igienice de rutin sunt adesea determinante n evoluia infeciilor de plag
i, totodat, destul de costisitoare [92]. Evoluia infeciilor de plag depinde de un ir de factori:
statutul imunologic al pacientului, virulena i patogenitatea microorganismelor colonizatoare
[84, 68], statutul hidric, nutriia, condiiile medicale, asistena postoperatorie [103].
Odat cu stabilirea diagnosticului infeciei de plag i a sensibilitii antibioticelor,
managementul trebuie asigurat imediat pentru a impiedica infeciile intersectate [52, 54, 87,
119]. Alegerea corect a antibioticelor n infeciile de plag [166] i a antisepticelor [111] este
important pentru evoluia bolii.
Contaminarea, colonizarea [48], colonizarea critic [56, 81, 117] sunt noiuni bine
definite pentru infeciile de plag. Criteriile clasice de recunoatere a infeciilor de plag sunt
urmtoarele: eritem, durere, fierbineal localizat, celulite, edeme, iar criteriile recente
abscese, eliminri vscoase, decolorri i purulen, cicatrizare ntrziat, decolorare a esuturilor
la marginile plgii, durere brusc, miros specific. Dezvoltarea infeciei de plag depinde de un
complex de factori. Dac integritatea i funcia protectoare a pielii este compromis, cantiti
mari de diferite tipuri de celule pot ptrunde n plag i iniia un rspuns inflamator care va
prezenta

semne clasice [59]. Rspunsul inflamator este un mecanism de aprare pentru

neutralizarea, nimicirea agenilor toxici n locul traumat i restabilirea homeostaziei tisulare

[64]. Exist un ir de indicatori ai infeciilor care includ semne clasice ale procesului inflamator
i semne recente [69].
Conform unor date, infeciile plgilor chirurgicale sunt unele dintre cele mai comune
infecii achiziionale, intraspitaliceti, i prezint cauze importante de morbiditate i mortalitate.
Totodat, acestea conduc la mrirea perioadei de staionare n spital, ceea ce implic consecine
economice fiecare pacient cu infecii ale plgilor chirurgicale va necesita 6,5 zile suplimentare
de edere n spital, ceea ce conduce la dublarea cheltuielilor intraspitaliceti [49, 177].
Infeciile de plag n urma arsurilor i septicemia cateteric cele mai frecvente la copii,
sunt cauzate de asemenea ageni infecioi, ca S.aureus, C.albicans, P.aeruginosa, Enterococcus
19

spp., E.coli, K.oxytoca, S.pneumoniae [183]. Se consider c prima faz a procesului infecios n
cadrul plgilor este determinat de dezvoltarea E.coli, Enterococcus spp., Bacterioides fragilis
care produc o varietate larg de factori viruleni enzime i toxine [120].
n calitate de ageni patogeni ai infeciilor de plag pot fi bacteriile, fungii, protozoarele i
virusurile, efectul depinznd de structura i capacitile metabolice ale acestora [66, 80]. Este
important de tiut c diferite microorganisme pot exista n comuniti polimicrobiale, din care
cauz adesea sunt prezente n cadrul plgilor [54].
Bacilii gram-negativi (P.aeruginosa, E.coli, Klebsiella, Proteus, Acinetobacter,
Enterobacter spp.) apar n rana deschis la aproximativ 4 saptamni de la iniierea acesteea.
Bacteriile menionate, n general,

nu penetreaz, dar se asociaz la un numar mare de

microorganisme pe biofondul rnii. Bacilii gram-negativi posed mecanisme antifagocitare i de

aderen,

iar endotoxinele i unele exotoxine, premit

toxinelor s prelungeasc rspunsul

inflamator printr-un proces cronic. Exotoxina pseudomonadic piocianina, albastr-verzuie poate

cauza extensia de plag. Bacteriile gram-negative elibereaz endotoxine i fac ca procesul
inflamator cronic s dureze. ntr-o cantitate anumit, aceste microorganisme, datorit expresiei
factorilor de virulen pot produce un biofilm. Eficiena preparatelor antimicrobiene depinde n
mare msur de colonizarea critic a bacteriilor. Produsele care omoar bacteriile i nltur
endotoxinele acestora sunt considerate avantajoase [119].
De importan vital se prezint problema rezistenei microorganismelor la antibiotice.
Astfel, principalii factori ce influeneaz ecologia bacterian n plaga combustional sunt agenii
antibacterieni i antibioticele sistemice [234].
Prin cercetarea plgilor chirurgicale s-a constatat c microorganismele predominante au
fost coliforminele (63,5%), iar n ulcere au fost prevalente Proteus spp. care prezentau rezisten
semnificativ la antibioticele, de obicei, utilizate ampicilina, tetraciclina, co-trimaxazol, dar i
sensibilitate la asemenea antibiotice ca ciprofloxacina i ofloxacina [168]. Investigrile
bacteriologice ale infeciilor plgilor nechirurgicale au pus n eviden prevalena detaat a
izolatelor bacteriene asupra celor fungice, n majoritatea cazurilor atestndu-se culturile
monomicrobiene. Dintre speciile mai frecvent izolate s-au remarcat S.aureus, P.aeruginosa,
Klebsiella spp., E.coli, Proteus spp., S.epidermidis, Streptococcus spp., cu rezisten nalt la
antibiotice, multe dintre ele pstrnd, totui, sensibilitate la ceftriaxon, gentamicin i
ofloxacin [162].
Din plgile cauzate de leziuni mecanice n urma cutremurelor de pmnt s-au izolat mai
frecvent S.aureus, la mod general bacteriile gram-pozitive prezentnd o inciden mai nalt
20

(73,2%) [215]. Specia P.aeruginosa s-a atestat, n special, printre infeciile de plag, care
deseori conduc la amputaii [36]. Speciile Pseudomonas erau cele mai ntlnite i n seciile de
combustiologie, i prezentau rezisten moderat la piperacilin (41,42%), rezisten nalt la
asemenea remedii antimicrobiene ca amikacina, gentamicina, ciprofloxacina, carbenicilina,
tobramicina, ceftazidim. Totodat, acestea erau mai sensibile la imipenem, acid clavulanic,
cefoperazon, n timp ce speciile de Enterobacteriaceae i Acinetobacter nu a prezentat rezisten
la imipenem [147].
n majoritatea cazurilor, tulpinile de bacterii Staphylococcus spp. i E.coli implicate n
ISPN din or. Chiinu manifest rezisten nalt pentru preparatele grupului penicilinelor i
tetraciclinelor. Printre tulpinile de E.coli, 51,4% manifest rezisten la cefalosporine [14].
Rezistena tulpinilor de S.aureus, izolate din piodermitele primare i secundare a fost destul de
difereniat: rezistente la penicilin i ampicilin, relativ rezistente la eritromicin i sensibile la
cloxacilin, cefalexin i co-trimaxazol [214].
Speciile de bacterii Pseudomonas i Enterobacteriaceae, printre bacilii gram-negativi,
prezint un procent nalt de rezisten pentru asemenea antibiotice ca gentamicina, amikacina,
ciprofloxacina, carbenicilina, tobramicina, amoxicilina, cefotaxim [34]. n mai mult de 90%
cazuri P.aeruginosa este rezistent la gentamicin, ceftizoxim, carbenicilin, cefalotin,
ceftazidim. Antibioticul, pentru care bacteria prezint sensibilitate este amikacina [113]. S-a
constatat c majoritatea tulpinilor de P.aeruginosa aprute prin mutaii demonstreaz rezisten
la cefpirom, ceftazidim i cefotaxim, n timp ce pentru cefepim rezistena s-a manifestat la 25%
tulpini [94]. n calitate de patogeni ageni cauzali ai infeciilor de plag pot fi cocii grampozitivi

S.pyogenes*,

Enterococcus

faecalis,

S.aureus*,

bacilii

aerobi

gram-negativi

P.aeruginosa*, bacilii gram-negativi facultativi anaerobi Enterobacter spp., E.coli, Klebsiella

spp., Proteus spp., anaerobii Bacteroides, Clostridium, fungii Candida, Aspergillus (*ageni
cauzali comuni, asociai cu infeciile de plag) [64].

1.3. Particularitile

biologice i patogenice ale unor bacterii (P.aeruginosa, E.coli,

S.aureus) implicate n diverse infecii de plag

P.aeruginosa. Istoricul studierii bacteriei P. aeruginosa ncepe n anul 1862, cnd
A.Lucke pentru prima dat a descris supurarea plgii cauzat de bacilul piocianic, izolat n
cultur pur de ctre C. Gessard n 1882 i numit B.pyocyanea (bacilul puroiului albastru). Chiar
n 1897 a fost nregistrat primul focar de infecie intraspitaliceasc n care rolul etiologic
principal l juca P.aeruginosa [24]. Se menioneaz faptul c aciunea patologic a P.aeruginosa
21

mai frecvent se atest la bolnavii cu imunitate sczut i la copii. De la nceputul anilor 70 ai

sec.XIX, acest microorganism a ocupat un rol primordial att n etiologia proceselor purulentinflamatorii locale, ct si a celor generalizate, patogenitatea crora este
producerea

determinat de

unei fitotoxine, structura chimica a creia nefiind elucidat complet [27], dar

presupunndu-se a fi o proteinaz [211].

Timp ndelungat, majoritatea cercetrilor asupra P.aeruginosa, s-au efectuat n baza
materialului prelevat n seciile de combustiologie i staionarele chirurgicale [27, 178].
P.aeruginosa, n baza clasificrii Bergey B. (1980) face parte din genul Pseudomonas,
familia Pseudomonadaceae, pentru medicin fiind mai importante speciile

P.aeruginosa,

P.mallei i P.pseudomallei. P.aeruginosa prezint o bacterie gram-negativ cu dimensiunile 1-3

mcm n lungime i 0,5-1 mcm n lime. n frotiul preparat din cultur pur bastonaele se pot
dispune solitar, pereche sau formeaz lanuri scurte. Sunt mobile datorit prezenei unuia sau a 2
flageli dispui polar, nu formeaz spori. P.aeruginosa este un patogen oportunist, care rareori
cauzeaz maladii la persoanele sntoase. Speciile pseudomonadice sunt att invazive, ct i
toxigene [26].
Conform unor date, exist 3 faze ale rspndirii bacteriei: 1) ataarea la substrat i
colonizarea, 2) infecia local, 3) diseminarea n snge i dezvoltarea maladiilor sistemice.
Capacitatea microorganismului de a produce proteaze extracelulare mrete virulena acestuia,
ajutndu-l n aderen i invazie [179].
Infeciile pseudomonadice pot fi implicate n orice sistem de organe: tract respirator
(pneumonie), inim (endocardite), sistem nervos central (meningit i abcese ale creierului),
urechi (otit medie), ochi (cheratite bacteriene, abscese sclerale, endoftalmite), oase i articulaii
(coloana vertebral, pelvis, articulaie sternoclavicular, osteomielite vertebrale, pioartroze),
sistem gastro-intestinal (enterocolite necrozante, enterite), tract urinar (infecie dup cateterizare,
chirurgie), piele (foliculite, ectima gangrenosum) [179].
P.aeruginosa este unul din cei mai rspndii bacili aerobi gram-negativi, destul de
periculos

prin

dezvoltarea

infeciilor

nozocomiale

severe,

special

la

gazdele

imunocompromise. Adesea bacteria este rezistent la antibiotice, astfel, punnd n dificultate

alegerea corect a procedeelor de tratament. Acest microorganism se poate dezvolta n
urmtoarele situaii clinice: n urma arsurilor, traumelor, procedurilor de tatuaj, postoperatoriu,
celulite la pacienii neutropenici, ulcere cronice decubitale, foliculite, piodermii. Infeciile pielii
cauzate de P.aeruginosa ca complicaii ale combustiilor prezint o nalt rat de mortalitate, n
pofida terapiei agresive cu antibiotice [90]. P.aeruginosa este unul dintre cele mai frecvente
22

microorganisme izolate de la pacienii cu combustii, atestndu-se n 52-57% cazuri de culturi

tisulare [147, 183]. Datele pentru o perioad de 25 ani relev c 9% din arsuri au avut ca
complicaii bacteriemii pseudomonadice, mortalitatea fiind de 77%. Cele mai comune
microorganisme izolate de la pacienii seciilor de combustiologie erau cele de Pseudomonas,
urmate de S.aureus i Klebsiella [127, 167].
Actualitatea studierii infeciilor pseudomonadice este determinat i de faptul ca
agenii ei infecioi pot fi reprezentani ai ctorva specii de bacterii, patogene nu doar pentru om,
dar i pentru animale. Aceti ageni adesea afecteaz tractul urogenital al vitelor cornute. Avnd
mai multe organisme-gazd, P.aeruginosa este deosebit de periculoas, ntruct se mrete
posibilitatea de contaminare a organismelor sntoase.
O particularitate adaptiv, specific pentru P.aeruginosa este

utilizarea limitat a

substanelor nutritive de ctre aceasta, ceea ce determin pstrarea viabilitii chiar i n condiii
limit de existen a sursei nutritive. Totodat, s-a constatat posibilitatea meninerii viabilitii
culturii de P.aeruginosa chiar i n soluii de antiseptici (de exemplu, n furacilin) care servesc
pentru aseptizarea cateterelor i instrumentariului chirurgical, precum i pentru splarea rnilor
n seciile de combustiologie i chirurgie [114].
Conform unor date, contaminarea cateterelor i instrumentelor cu tulpini intraspitaliceti
ale bacteriei P.aeruginosa poate atinge nivelul de 90% [25], iar a echipamentului sanitar din
seciile de hematologie 4,5... 20,0% [79]. Nivel nalt de supravieuire al acestui microb se
constat n ape reziduale i soluii de iodofor [42]. Tulpinile de P.aeruginosa se pot adapta i la
aciunea bactericid a bromidei de didecildimetilamonium, un rol mare n declanarea
mecanismelor de rezisten

avndu-l acizii grai din membrana bacteriei [146]. Totodat,

P.aeruginosa este sensibil la uscare, aciunea preparatelor dezinfectante cu coninut de clor,

uor se inactiveaz la temperaturi nalte. n prezena unei cantiti suficiente de mas nutritiv
acest microorganism poate s rmn viabil pn la 2 sptmni n condiii anaerobe [202].
n calitate de patogen oportunistic, P.aeruginosa depete mecanismele de aprare a
gazdei i poate produce maladia. Nu s-a atestat vreodat ca bacteria s infecteze esuturile
necompromise. Implicarea patogenului n infeciile tractului urinar, sistemului respirator,
esuturilor moi, afectarea oaselor/articulaiilor, aparatului gastrointestinal, n diverse dermatite,
dezvoltarea endocarditelor, meningitei, absceselor creierului, otitelor, keratitelor, foliculitelor,
acneiei. Totodat, P.aeruginosa

prezint o problem serioas pentru pacienii spitalizai cu

cancer, fibroz chistic i arsuri [114]. Exist date despre implicarea bacteriei P. aeruginosa n

23

pneumoniile acute i inflamarea corneiei, constatndu-se, totodat, c reaciile de aprare ale

gazdei sunt ineficiente n cazul unui nivelul nalt al concentraiei bacteriene [96].
S-au atestat infecii de piele, n special pe picioare, declanate de ctre P.aeruginosa,
constatndu-se c patogenul manifest sensibilitate nalt la antibiotice, cu excepia minociclinei
[104, 196]. Exemplele prezentate relev dificultile majore existente n elaborarea msurilor
orientate

spre

profilaxia

sanitaro-igienica

infeciilor

intraspitaliceti

de

etiologie

pseudomonadic.
O particularitate biologic caracteristic speciei P.aeruginosa, utilizat cu succes la
identificarea acesteia este posibilitatea unical a microorganismului de a sintetiza pigmentul
fenazinic hidrosolubil piocianina care coloreaz mediul nutritiv sau pansamentele bolnavilor
n culoare albastr-verzuie. Se consider, c lipsa sau diminuarea capacitii de pigmentogenez
a tulpinilor de P.aeruginosa este determinat de aciunea inhibitorie a microflorei asociate,
antibioticelor sau insuficienei de oxigen. S-a stabilit, ca piocianina deine rol de protecie a
celulelor de P.aeruginosa mpotriva influenei negative, produse de schimbarea concentraiei de
oxigen n atmosfer i de aciunea letal a razelor ultraviolete (UV). Prezena pigmentului ajut
bacteriei s suporte hipoxia n timpul dezvoltrii infeciei n esuturile profunde, iar rezistena
mpotriva razelor UV determin supravieuirea patogenului la sterilizarea cu raze UV a
obiectelor mediului nconjurator. Aceste proprietai

ale pigmentului relev c tulpinile cu

capaciti de sintez a piocianinei fiind mai rezistente, sunt mai periculoase dect cele care nu
prezint aceast proprietate. Totodat, piocianina particip la diverse mecanisme patogenice,
precum ar fi traumarea epiteliului respirator i declanarea proceselor proinflamatorii ale
fagocitelor [26].
Un alt grup de enzime al bacteriei P.aeruginosa hemolizinele (fosfolipaza, lecitinaza)
care se identific n majoritatea cazurilor prin apariia zonelor de hemoliz a eritrocitelor n jurul
coloniilor crescute pe mediu agarizat cu snge de 5% [133, 197], contribuie la invazia bacterian
datorit efectelor citotoxice asupra celulelor implicate n reaciile imunitare neutrofilelor i
limfocitelor [114].
O alt particularitate specific a pseudomonadelor este cea de sintez a citocromoxidazei.
Citocromoxidaza bacterian este membr a superfamiliei oxidazice Fe-hem, important pentru
conservarea energiei la condiii limitate de oxigen. Fermentul catalizeaz reducerea oxigenului
molecular pn la ap. La cultivarea pe medii nutritive, celulele pseudomonadelor sintetizeaz
trimetilamina, care confer culturii un miros specific ce amintete mirosul de iasomie [26].

24

La moment, polimorfismul patogenic al bacteriilor Pseudomonas este determinat nu doar

de particularitile biologice de origine i evoluie fireasc, ci i de presiunea de selecie a
fondalurilor medicamentoase, n special a antibioticelor. n legtur cu aceasta devine atractiv
prin oportunitile i avantajele sale strategia de utilizare a preparatelor naturale, de origine
taninic n tratamentul infeciilor bacteriene.
E.coli. Bacteria E.coli abiteaz colonul i intestinul omului, multor mamifere, psri,
peti, reptile, amfibieni i insecte. Este un anaerob facultativ, temperatura optim de cretere
fiind 30-37C. Pe agar peptonat, dezvolt colonii uor bombate, semitranslucide, de nuan gri,
iar n bulion peptonat produce opalescen omogen cu formare de sediment. E.coli sunt bacterii
condiionat-patogene. Unele tulpini produc enterotoxine i posed activitate hemolitic. La
aciunea factorilor fizici nefavorabili, este mai rezistent dect alte bacterii, supravieuind
sptmni i luni de zile, dar uor se inactiveaz sub aciunea dezinfectanilor. Contaminarea se
produce de la persoanele bolnave pe cale oro-fecal sau pe cale aerian, prin picturi i praf
[228].
S.aureus. Se consider c stafilococii, fiind reprezentai de circa 30 de specii, sunt
membri ai florei normale a pielii, tractului respirator i gastrointestinal. Totui, 3 specii
principale ale genului Staphylococcus S.aureus, S.epidermidis, S.saprophyticus s-au dovedit a
fi de mare impact clinic, cauznd intoxicaii alimentare, infectarea plgilor, endocardite,
osteomielite hematogene, meningite i infecii pulmonare. Producnd o varietate mare de enzime
extracelulare i toxine, stafilococii patogeni adesea hemolizeaz sngele i coaguleaz plasma. n
condiii in vitro s-a constatat existena multor remedii cu activitate antibacterian pentru
Staphylococcus. Cu toate acestea, stafilococii dezvolt rezisten pentru multe remedii
antimicrobiene i prezint probleme terapeutice majore [106].
S.aureus este o bacterie gram-pozitiv, cauzeaz la om i animale procese inflamatorii,
nsoite de formarea puroiului, din care cauz aceasta este numit coc piogen. Bacteria are form
sferic cu diametrul de 0,8-1 m, dispus sub form de aglomerri neregulate. Pe frotiurile din
culturi i din puroi se ntlnesc lanuri scurte, uneori coci perechi sau izolai. Cocii lipsii de cili,
asporulai i unele tulpini formeaz capsul. S.aureus este anaerob facultativ. Se dezvolt bine pe
medii nutritive cu pH 7,2-7,4, la temperatura de 37C. Pe agar peptonat formeaz colonii
bombate cu margini regulate, avnd diametrul de 1-4 mm. Sintetizeaz peste 25 de proteine,
toxine i enzime. Hemolizinele acestora se caracterizeaz prin aciune hemolitic, letal i
dermatonecrotic. Ca i ceilali stafilococi, S.aureus se caracterizeaz printr-o rezisten relativ
pronunat la desicare, congelare, aciunea luminii solare i substane chimice. n afeciunile
25

stafilococice se aplic antibiotice i sulfanilamide [13]. S-a constatat o nou gen stafilicocic
mprF care determin rezistena bacteriei la peptidele umane de aprare defensinele i
protegrinele [174].
S-a constatat o cretere semnificativ a ratei de izolare a speciilor de Acinetobacter care,
conform unor autori prezint o cauz important a infeciilor nosocomiale n seciile de
combustiologie [195].

1.4. Particularitile unor micoze oportuniste hialohifomicoze

Micozele oportuniste ale omului, produse de fungii condiionat-patogeni prezint
afeciuni de proporii ale membranelor mucoase sau plmnilor, cauzate de ctre miceliul
fungului la pacienii cu stri imunodeficitare sau n perioada postoperatorie. Ca surs de infecie
a acestora pot servi resturile organice n putrefaie sau solul, straturile superficiale ale cruia se
transform n praf i se transport la distane mari, ptrunznd n ncperile pentru trai sau
instituiile curative. Analiza componenei speciilor microscopice a demonstrat prezena n
solurile din pdure a speciilor oportuniste, fitopatogene i fitotoxice [21].
Conform datelor unor autori, mediul urbanistic prezint unul din factorii importani care
influeneaz viaa i sntatea omului. Mediul urban se caracterizeaz prin poluri de transport i
industriale ale solului, apei, aerului, factori cu impact negativ deosebit asupra ecologiei tuturor
sistemelor urbanistice. Ciupercile microscopice prezint componeni structurali i funcionali ai
sistemelor terestre i reacioneaz promt la schimbrile antropogene ale mediului. Printre
micromicetele care abiteaz aerul, solul, elementele de infrastructur i ncperile locative, se
enumr i speciile care produc diverse boli micotice, numrul crora cu fiece an crete [17, 18,
22]. De exemplu, printre speciile din complexul ciupercilor mediului aerian al or. SanktPetersburg se enumr Fusarium culmorum, F.moniliforme, F.oxysporum, F.sambucinum,
F.sporotrichiella [20].
Speciile de fungi Fusarium Link.ex Fr. sunt cunoscute, n special, ca ageni patogeni ai
diferitelor boli la plante, adic n calitate de fitopatogeni. Totodat, se cunoate capacitatea
fungilor de a produce diverse afeciuni organismului uman n form de micotoxicoze sau micoze.
Micotoxicozele sunt atestate mai frecvent i, deci, mai bine investigate. Aceasta se refer, n
special, la speciile Fusarium care, datorit contaminrii boabelor/cariopselor de diverse culturi
agricole cu micotoxine (dezoxinivalenol, zearalenon, nivalenol, trihotecin, toxin T-2,
fumonizine, moniliformin, acid fuzaric .a.), prin produsele de panificaie i alte produse

26

alimentare produc grave tulburri, sub form de toxicoze, leucemii, cancer al esofagului,
anorexie, convulsii, cefalee, neoplasme, boli autoimune .a. [19, 50, 132, 144, 155, 229].
Este cunoscut faptul c solurile Republicii Moldova sunt puternic infectate cu fungi
Fusarium, n special cu F.oxysporum i F.solani, aceste specii atestndu-se cu frecven nalt
n rdcinile i tulpinile plantelor agricole [8].
Sunt mai puin cercetate aspectele cu privire la implicarea speciilor Fusarium n
dezvoltarea micozelor umane. Informaiile cu privire la aciunea ciupercilor menionate asupra
pielii se refer cu preponderen la specia F.sporotrichiella, metaboliii creia au fost atestai ca
factori cu aciune toxic asupra dermului, producnd hiperemie, descuamare, ngroare, necroze,
edeme [135, 160, 229]. Date recente relev c unele specii Fusarium care, de obicei, atac
rdcinile i partea bazal a tulpinilor de plante, sunt implicate n iniierea i dezvoltarea
hialohifomicozelor micozelor umane, manifestate prin edeme, ulceraii ale pielii .a. ntruct
n apariia i manifestarea bolii sunt implicai numeroi patogeni Fusarium, care elaboreaz n
calitate de metabolii toxine cu spectru larg de aciune, problema hialohifomicozelor este doar
parial investigat. Conform unor date, speciile F.solani, F.oxysporum, F.moniliforme pot cauza
infecii localizate ale ochilor (endoftalmite, keratite) i pielii. Manifestri severe se atest la
pacienii imunocompromii, infectarea producndu-se prin plmni sau cile respiratorii
inferioare, dar i prin deteriorarea pielii sau mucoaselor. Aceste din urm conduc la leziuni
subcutanate masive [39, 78, 185, 238].
Autorii Guarro, Gene [97] comunic c speciile Fusarium, saprofii hialinici ai solului i
patogeni ai plantelor sunt, totodat, i ageni etiologici ai infeciilor fuzariene severe la oameni.
Circa 15 specii de Fusarium au fost constatate ca ageni ai diverselor infecii la oameni i
animale. n cele mai frecvente cazuri, aceste infecii sunt implicate n micozele superficiale, dar
recent numrul infeciilor esuturilor profunde i infeciilor diseminate a crescut considerabil, n
special la pacienii cu stri imunosupresive. Semnele caracteristice ale acestor infecii sunt
nodulii diseminai ai pielii, fungemia, mialgia i implicrile multiorganice. Implicri ale pielii n
manifestarea infeciilor s-au atestat n mai mult de 80% de cazuri ale infeciilor diseminate.
Leziunile produse sunt pronunate, ceea ce determin necesitatea unui diagnostic timpuriu, n
baza biopsiei.
n cazul ulcerelor cutanate ale picioarelor provocate de F.oxysporum, constatate la
persoanele implicate n munci agricole, prin studii histopatologice s-a atestat o reacie
inflamatorie nespecific, format din neutrofile polimorfonucleare, limfocite i macrofage, dar i
prezena filamentelor hialinice, ramificate, de 4...10 m. Fungul, cultivat pe agar suplimentat cu
27

glucoz, la 7 zile de incubare la 28C prezenta un miceliu filamentos, hialin, cu ramificaii de 3

i 5 m n diametru, cu clamidospori intercalai n grup, a cte 2-3. Caracterele descriptive bine
definite au permis stabilirea apartenenei fungului la specia F. oxysporum. Aspectele clinice
prezente au permis identificarea acestei maladii n calitate de fuzarioz cutanat focalizat, pe
fondal

de depresie imun. Tratamentul

hialohifomicozei s-a efectuat prin administrarea

amfotericinei B (1 gr/zi) i, ulterior, a itraconazolului (400 mg/zi), asociat cu aplicaia local a

ciclopiroxolaminei [159].
Din aceste considerente, fungii Fusarium reprezint poteniali ageni etiologici ai
hialohifomicozelor pentru populaia rural din republic, implicat activ n munci agricole. Sub
aspectul dat, este important detectarea sau elaborarea preparatelor medicamentoase de origine
natural, eficiente i accesibile pturilor largi ale populaiei.

1.5. Aspecte de management al rezistenei patogenilor umani la antibiotice

Conform World Health Report of Infectious Deseases 2000, creterea rezistenei
patogenilor umani la antibiotice prezint o problem major a Organizaiei Mondiale a Sntii
pentru mileniul prezent [190]. Rezistena bacterian la antibiotice continu s creasc rapid i
constituie o problem de baz n dermatologie [224].
Prin aciunea de monitoring al rezistenei

microorganismelor la preparatele

antimicrobiene, demarat n Republica Moldova n 2002 s-a constatat, ca i n ntreaga lume,

fenomenul tot mai evident de cretere a rezistenei tulpinilor de microorganisme ageni
patogeni ai multor infecii, la aciunea antibioticelor. Astfel, conform datelor medicilor de la
Centrul de Medicin Preventiv din or.Ungheni [16], rezistena multor ageni patogeni, inclusiv
celor din grupul pseudomonadelor, stafilococilor, candidelor .a. a constituit circa 70-90% din
tulpini pentru peniciline,

n anul 2004 indicele constituind

35 i 52%, respectiv, pentru

ampicilin i oxacilin. Chiar i pentru cefalosporinele de ultim generaie, se observ o cretere

rapid a rezistenei. De exemplu, la cefazolin rezistena a crescut de la 38,2 pn la 73,2%, iar
la cefalexin de la 18,8 la 69,2%, respectiv pentru anii 2004 i 2007.
S-a constatat c tulpinile de P.aeruginosa prelevate de la bolnavii din raionul Cueni,
prezint polirezisten la multe antibiotice, de exemplu la piperacilin (57,1%), ticarcilin
(33,3%) i ciprofloxacin (25% cazuri) .a. [5].
Conform autorilor Matcovschi, Procopiin, Parii [11], caracteristica unor preparate
antimicrobiene de baz, omologate n Republica Moldova este urmtoarea:

28

Cefalotin cefalosporin de generaia I. Activ fa de bacteriile gram-pozitive:

stafilococi;

inclusiv

productori

de

penicilinaze,

streptococi,

inclusiv

S.pneumoniae,

Corynebacterium diphtheriae, Bacillus anthracis, bacterii gram-negative: Neisseria meningitidis,

Shigella spp., Salmonella spp., E.coli, Haemophilus influenzae, Klebsiella spp., Treponema
pallidum, Leptospira spp. Ineficient fa de Proteus spp., Mycobacterium tuberculosis,
bacteriile anaerobe. Mecanismul aciunii const n inhibiia peptidoglicansintetazelor bacteriene
i n liza bacteriilor aflate n faza creterii.
Cefoxitin Cefalosporin de generaia II, din grupa cefamicinelor, rezistente la betalactamazele bacteriilor gram-negative. Activ fa de bacteriile gram-pozitive: S.aureus,
S.epidermidis, streptococcii beta-hemolitici, S.pneumoniae, bacteriile gram-negative: E.coli,
Klebsiella spp., Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae, inclusiv tulpinile productoare
de penicilinaze, Proteus mirabilis, Morganella morganii, P.vulgaris, Providencia spp., inclusiv
Providencia rettgeri, bacteriile anaerobe: Peptococcus spp., Clostridium spp., Bacteroides spp.,
inclusiv Bacteroides fragilis. Este inactiv fa de P.aeruginosa i Enterobacter cloacae.
Mecanismul aciunii const n inhibiia peptidoglicansintetazelor bacteriene i liza bacteriilor
aflate n faza creterii.
Cefuroxim Cefalosporin de generaia II. Activ fa de S.aureus, inclusiv fa de
tulpinile penicilinorezistente, cu excepia celor metilinorezistente, S.epidermidis, Haemophilus
influenzae, Klebsiella spp., Enterobacter spp., S.pyogenes, E.coli, S.mitis (grupa viridans),
Clostridium spp., P.mirabilis, P.rettgeri, S.typhi i alte Salmonella spp., Neisseria spp., inclusiv
productoare de beta-lactamaze, Bordetella pertussis, Bacteroides fragilis sunt rezisteni. Este
ineficient fa de Pseudomonas, Campylobacter, Acinetobacter calcoaceticus, Serratia,
Clostridium difficile. Cefuroximul axetil este eficient i n administrarea oral. Mecanismul
aciunii const n inhibiia peptidoglicansintetazelor bacteriene i liza bacteriilor aflate n faza
creterii.
Ciprofloxacin fluorochinolon cu spectru antibacterian larg, activ fa de E.coli,
Salmonella spp., Shigella spp., Proteus spp., inclusiv indol-pozitiv i indolnegativ, M.morganii,
Citrobacter spp., Klebsiella spp., Enterobacter spp., Yersinia spp., Vibrio spp., Campylobacter
spp., Hafnia spp., P.stuartii, H.influenzae, Pasteurella multocida, Pseudomonas spp.,
Gardnerella spp., Legionella pneumophila, Neisseria meningitidis, N.gonorrhoeae, Moraxella
catarrhalis, Acinetobacter spp., Brucella spp., Chlamydia spp., Staphylococcus spp.,
Streptococcus pyogenes, S.agalactiae, Corynebacterium diphtheriae, Listeria monocytogenes.
Mecanismul aciunii const n blocarea ADN-girazei microorganismelor sensibile i a replicrii
29

ADN-ului. Fluorul este responsabil de lrgirea spectrului antibacterian pentru gram-negativi i

extinderea spectrului la gram-pozitivi. Ciclul piperazinic face preparatul activ contra
Pseudomonadelor.
Cloramfenicol activ fa de S.aureus, Streptococcus spp. (inclusiv S.pneumoniae),
E.coli, H.influenzae, Klebsiella spp., Enterobacter spp., Moraxella lacunata, Neisseria,
Salmonella, Shigella, Rickettsia, Chlamydia .a. Inhib subunitile 50S ribozomale bacteriene i
sinteza proteinelor. Are aciune bacteriostatic, iar n concentraii mari, sau pentru bacteriile
foarte sensibile la cloramfenicol bactericid.
Eritromicin antibiotic izolat din Streptomyces. Se fixeaz pe subunitile 50S ale
ribozomilor organismelor susceptibile i inhib sinteza proteinelor. Este activ fa de
Streptococcus,

Staphylococcus

Corynebacterim,

Listeria,

(poate

Bordetella,

deveni
Legionella,

rezistent),

Mycoplasma,

Ureaplasma,

Treponema,

Neisseria,

Chlamydia,

Entamoeba.
Gentamicin unul dintre cele mai utilizate aminoglicozide. Este activ fa de
Escherichia,

Proteus,

Pseudomonas,

Klebsiella,

Enterobacter,

Serratia,

Citrobacter,

Staphylococcus, inclusiv productorii de beta-lactamaze, Salmonella, Shigella. Sunt rezisteni la

gentamicin speciile de bacterii: Streptococcus pneumoniae, streptococii grupei D i toate
bacteriile anaerobe.
Imipenem inhib sinteza peretului bacterian al unui ir de bacterii gram-pozitive i
gram-negative, aerobe i anaerobe. Este rezistent la beta-lactamaze ceea ce-l face eficient pentru
Pseudomonas, Serratia, Enterobacter, Staphylococcus, Streptococcus, Bacteroides.
Pefloxacin este o fluorochin activ fa de Escherichia, Enterobacter, Serratia,
Proteus, Citrobacter, Salmonellla, Shigella, Haemophilus, Staphylococcus, inclusiv productor
de beta-lactamaze, Neisseria, Legionella. Sunt rezisteni la pefloxacin anaerobii gram-negativi,
spirochetele, Mycobacterium. Mecanismul aciunii const n inhibiia ADN-girazei, fragmentarea
ADN, ceea ce conduce la distrugerea bacteriilor.
Piperacilin activ fa de bacterii gram-pozitive: Staphylococcus, Streptococcus spp.,
inclusiv, bacterii gram-negative: Escherichia, Proteus, Morganella, Providencia, Serratia,
Klebsiella,

Enterobacter,

Acinetobacter,

Salmonella,

Haemophilus

(tulpinile

Shigella,

Pseudomonas,

neproductoare

de

inclusiv

Pseudomonas,

beta-lactamase),

Neisseria

gonorrhoeae, bacterii anaerobe: Actinomyces, Bacteroides, inclusiv Bacteroides fragilis,

Clostridium spp., Eubacterium, Fusobacterium, Peptococcus, Peptostreptococcus, Veillonella.

30

Tetraciclin preparat de elecie n infeciile cu Rickettsia, Mycoplasma, agenii

limfogranulomului veneric i inghinal. Activ fa de Haemophilus, Yersinia, Francisella,
Bartonella, Bacteroides, Vibrio, Campilobacter, Brucella, Escherichia, Enterobacter, Shigella,
Mima, Herella, Klebsiella, Streptococcus, S.aureus (numai bolile respiratorii, ale pielii i
esuturilor moi). Mecanismul aciunii tetraciclinei const n complexarea cu proteinele
subunitilor 30S ribozomale i inhibiia sintezei proteinelor.
Tobramicin aminoglicozid ce se deosebete printr-o activitate sporit fa de
Pseudomonas. n afar de aceasta este activ fa de Proteus spp., inclusiv P.mirabilis,
P.vulgaris, Morganella, Escherichia, ns relativ slab mpotriva Streptococcus spp.
Deci, printre mecanismele importante ale aciunii antibioticelor menionate se enumr
inhibiia acivitii enzimelor implicate n sinteza peptidoglicanului bacterian, ADN-girazei sau
fragmentarea ADN-ului.

1.6.

Particulariti

de

structur,

activitate

utilizare

ale

taninurilor

1.6.1. Proprieti fizico-chimice ale taninurilor

Taninurile reprezentani importani ai fenolilor

sunt compui vegetali cu o structur

chimic complex (care cuprinde multe grupri hidroxil-fenolice, dar i grupri carboxilice),
capabile s precipite proteinele din pielea crud, proteine cu care formeaz precipitate insolubile,
imputrescibile, impermeabile (pielea tbcit). Taninurile fac parte alturi de alcaloizi din
categoria metaboliilor secundari care se acumuleaz n plante i n organele acestora. Dup
capacitatea de hidroliz, taninurile se mpart n taninuri catehice (condensate sau nehidrolizabile)
i taninuri galice (condensate sau nehidrolizabile) [82].
Taninurile, att cele catehice, ct i cele galice sunt substane solide, de regul amorfe,
inodore de culoare alb-brun (culoarea se intensific cu ct greutatea moleculara este mai mare),
au un gust astringent (care dispare cu creterea gradului de polimerizare). Sunt solubile n ap
(formeaz soluii coloidale din care n prezena electroliilor salefiaz), alcool, aceton, glicerol,
i insolubile n eter, benzen, cloroform [33].
Datorit gruprilor hidroxil fenolice i uneori a gruprilor carboxilice din molecul,
taninurile prezint un caracter acid. Au capacitatea de precipitare a alcaloizilor i substanelor cu
caracter bazic. Structura polifenolic este responsabil n mediul alcalin de caracterul puternic
reductor al soluiilor de taninuri, nsuire pus n eviden de reducerea soluiilor: Fehling,
permanganatului de potasiu, reactivului Tollens, iodului, apei oxigenate [12].

31

1.6.2. Aplicarea extraselor fenolice din plante la tratarea infeciilor i plgilor

Creterea rezistenei microorganismelor la medicamente i a adaptrilor evoluioniste ale
acestora a redus cu mult eficiena agenilor antimicrobieni [190]. Majoritatea medicamentelor
sintetice sunt de origine vegetal [205], de aceea, elaborarea noilor medicamente n baza materiei
prime vegetale, prezint interes comercial major n domeniul famaceuticii.
Remedii de tratare ale diferitor infecii cu ajutorul extraselor din plante sunt cunoscute pe
larg n medicina popular [102, 182]. Astfel, extrasele din scoara plantelor de Stryphnodendron
ce conin 20% de taninuri, datorit proprietilor antibacteriene, au fost utilizate cu succes de
ctre btinai la tratarea rnilor [188]. Conform autorilor [194], majoritatea

plantelor

medicinale antimicrobiene sunt mai eficiente fa de bacteriile gram-pozitive n comparaie cu

cele gram-negative.
Oportunitatea obinerii preparatelor medicale antimicrobiene eficiente n baza extractelor
din diverse specii de plante ce conin taninuri, fenoli, flavonoizi a fost menionat n mai multe
lucrri [46, 141, 150, 164, 219]. De exemplu, n calitate de materie prim, speciile de plante
L.inermis, Eucalyptus sp., H.antidysenterica, H.indicus i cele din familia Aizoaceae prezint
interes

biotehnologic

antieerihice,

pentru

anticandidice,

obinerea

preparatelor

antipseudomonadice

[35,

antistafilococice,
208],

iar

antisalmonelice,

polifenolii,

inclusiv

proantocianidinele din extrasele apoase ale plantelor de Vigna angularis a preparatelor

antibacteriene pentru S.aureus, Acromonas hydrophila, Vibrio parahaemolyticus [107].
Pentru tratarea plgilor de piele sunt eficiente extrasele de plante ce conin compui
fenolici, inclusiv taninici [77]. Beneficiile principale ale extraselor fenolice constau n absena
efectelor sistemice adverse i incidena diminuat a rezistenei microorganismelor [207].
Prin extragerea din plante medicinale a unui ir de polifenoli i terpenoizi i testarea
acestora cu privire la activitatea antibacterian pentru Helicobacter pylori a fost pus n eviden
eficiena unei tanine hidrolizabile, dependent de doz i timp, mpotriva bacteriei. De
menionat, totodat, c tanina nu a afectat viabilitatea celulelor epiteliului gastric, ceea ce este
destul de important [88]. Testarea in vitro a aciunii extraselor eteropetrolice, cloroformice,
metanolice din Aspila africana ce conin muli compui bioorganici activi, printre care taninurile
sunt prezente n cantiti

considerabile, asupra bacteriilor

S.aureus, B.subtilis,

P.aeruginosa i fungilor C.albicans, Aspergillus flavus a demonstrat

E.coli,

proprietile

antimicrobiene ale extractelor, ceea ce le fac de mare perspectiv n tratamentul dizenteriei, la

cicatrizarea rnilor [31]. Extractele metanolice ale unor specii de Hypericum care prin analiz

32

fitochimic au demonstrat prezena taninurilor, flavonoizilor i acizilor fenolici, au activitate

antistafilococic [70].
Se consider c plantele ce conin taninuri n cantiti mari, au proprieti astringente i se
utilizeaz cu succes la tratarea unor dereglri intestinale, aa ca diareea i dizenteria, tocmai
datorit activitii antimicrobiene [73].
Prin separarea taninurilor extrase din scoara plantelor de Rhizophora apiculata s-a
constatat c taninurile hidrolizabile, spre deosebire de cele condensate, prezint activiti
antifungice semnificative pentru C.albicans [130].
n medicina modern, majoritatea tratamentelor mpotriva infeciilor stafilococice se
bazeaz pe utilizarea: eritromicinei, gentamicinei, rifampicinei, vancomicinei. Extractele din
scoara de Parkia biglobosa au fost utilizate cu succes n tratamentul numeroaselor maladii
infecioase: diaree, pneumonie, bronit, traheit, sepsis al plgilor, carii dentare, conjuctivite,
otit, dermatoz, agentul etiologic al crora a fost S.aureus. Totodat, taninurile izolate din
Vaccinium vitis-idaea L., datorit proprietilor antimicrobiene,

sunt eficiente la tratarea

maladiilor periodontice [106].

Testrile in vitro i in vivo au demonstrat c extractele metanolice din Hemidesmus
indicus, cu coninut bogat de taninuri, steroizi, triterpenoizi i carbohidrai prezentau efect
antienterobacterian asupra Salmonella typhimurium, E.coli i Shigella flexneri, mai pronunat
dect remediul antidiareic Lomotil, efectul antidiareic

datorndu-se

inhibiiei motilitii

intestinale i activitii bactericide a extractelor [71].

Prin cercetarea efectelor procianidinelor patachinei de mare asupra cicatrizrii leziunilor
stomacale ale obolanilor induse de acidul acetic, evoluia crora a fost evaluat cu ajutorul
indicelui ulceros i metodelor imunohistochimice, s-a constatat mrirea factorului de cretere
epidermal din plasm, expresiei receptorului factorului de cretere epidermal (RFCE) i
proliferrii antigenului nuclear celular (PANC) n jurul ulcerului. Ca rezultat, s-au micorat
considerabil dimensiunile ulcerelor la ziua 7 i 14, funcie de doza aplicat, tratarea leziunilor
gastrice induse de acidul acetic datorndu-se, probabil, accelerrii reparaiei mucoasei [235].
Conform unor autori, fraciile mbogite cu taninuri din Myracrodruon urundeuva
plant utilizat n Brazilia de Nord n calitate de antiinflamator, cicatrizant de ran n ulcerele
stomacale i n procese ginecologice, datoreaz aceste caliti aciunii antioxidante a compuilor
polifenolici [206].
Au fost constatate unele mecanisme ale aciunii antiulceroase a extractelor apoase din
coaja de copac Rhizophora mangle, bogate n taninuri. Astfel, la obolani extractele de
33

R.mangle au micorat suprafaa ulcerului, s-a recuperat nivelul de prostoglandine E2 care a fost
iniial micorat de ctre diclofenac. Dozele nalte de extract au provocat o cretere a activitii
peroxidazei glutatienice i superoxidismutazei, i o inhibare a nivelurilor de oxidare lipidic.
Rezultatele relev c efectul gastroprotectiv al R.mangle se datoreaz proprietilor antioxidante
prostoglandin-dependente [51].
Angiogeneza joac un rol important n cicatrizarea plgilor, iar factorul de cretere
endotelial vascular este important n stimularea angiogenezei n plag, de obicei, bogat n
asemenea oxidani, ca H2O2, produs de neutrofile i macrogagi. Extractul proantocianidinic din
seminele de struguri regleaz necroza oxidant i temporal n keratinocitele umane [115].
Extractele etanolice ale taninurilor scoarei de Terminalia arjuna studiate cu privire la
activitatea cicatrizant n plagi, prin administrare oral sau prin aplicri topice, au contribuit la
o cretere semnificativ a forei tensiunii superficiale a plgilor prin incizie i o cretere
procentual a reducerii dimensiunilor plgilor prin excizie, comparativ cu grupul de control.
Aplicrile topice cu taninuri s-au dovedit a fi superioare celorlalte n cadrul studiilor plgilor prin
incizie i excizie. Coninutul nalt al hidroxiprolinei n esutul de granulaie din plgile prin
excizie relev o proliferare colagenic activ care conduce la o cicatrizare rapid a acestora
[180].
Colagenul, o protein unical a esutului conjunctiv, i-a gsit o aplicare larg n calitate
de material biocompatibil pentru cicatrizarea de plag. S-a constatat c catechinele polifenolice
stabilizeaz colagenul de tip 1 datorit implicrii legturilor de hidrogen i interaciunilor
hidrofobe n calitate de fore majore [140].
Specia Aspira

africana, utilizat pe larg n Africa n medicina tradiional pentru

stoparea sngerrii din plag i tratarea durerilor reumatice, reduce sngerarea i durata acesteia
la obolani. Extractele de A.africana produc diverse grade de inhibiie a creterii izolatelor
clinice de P.fluorescens, P.aeruginosa i S.aureus, i reduc perioada de epitelizare a plgilor
experimentale. Prezena de alcaloizi, saponine, taninuri, flavonoizi, steroli, terpenoizi,
carbohidrai n extractele frunzelor de A.africana face posibil stoparea sngerrii de plag,
sanarea suprafeelor de inflamaii, inhibiia creterii microorganismelor ce contamineaz plaga,
ceea ce, n definitiv, accelereaz cicatrizarea plgii [163].
Constituienii polifenolici din Mimoza pudica, n extractele metanolice de 2%, prezint la
obolani un efect cicatrizant puternic prin contracia de plag i perioada de epitelizare n cazul
plgilor prin excizie, i prin mrirea forei superficiale de tensiune i coninutului de
hidroxiprolin n plag [123].
34

n timpul cicatrizrii plgii, suprafaa acesteia este bogat n oxidani, aa ca H2O2.

Acidul ascorbic i taninurile cu greutate molecular joas emblicaninele A i B, prezente n
Emblica officinalis posed o aciune antioxidant, ceea ce contribuie la procesele reparatorii din
plag. Totodat, extractul de E.officinalis activeaz proliferarea celular i colagenic pe
suprafaa plgii, ceea ce conduce la cicatrizarea acesteia [212].
Extractele apoase ale scoarei de Rhizophora mangle L. posed proprieti
antimicrobiene, cicatrizante de plag i antiulcerogene. Taninurile polimerice prezint
componenta major 80%, iar taninurile hidrolizabile 20%. De asemenea, s-au constatat n
calitate de componeni epicatechinele, catechinele, acidul clorogenic, acidul galic, acidul elagic
[187]. Este cunoscut, de asemenea, efectul taninurilor condensate mpotriva nematodelor
gastrointestinale [47, 57, 58, 151, 152].

1.6.3. Fenomenul stresului oxidant. Taninuri din semine de struguri, activitate biologic i
aplicaii
Dezvoltarea intensiv a industriei n plan global n ultimii 50 de ani ai secolului XX i
primii ani ai secolului XXI a produs perturbri fr precedent n corelarea ecosisteme
biosisteme pe planeta Pmnt. Organismul uman zi de zi este inta unor factori nocivi cum ar fi:
ageni poluani, stres, conservani, fum de tutun, pesticide, raze X, radiaii ultraviolete,
ultrasunete, computere, boli micotice, bacteriene, virale, etc. Aceti factori sunt o consecin
direct a complexului de fenomene reunite sub numele de stres oxidant i care este definit ca o
producie exagerat de radicali liberi oxigenai n organismul uman, nsoit de diminuarea
agenilor antioxidani. O soluie posibil de rezolvare a acestei

probleme este folosirea

antioxidanilor naturali, care neutralizeaz radicalii liberi i protejeaz celulele organismului

uman. Antioxidanii reprezint un grup de compui sintetizai de organism care se ntlnesc i n
diverse produse alimentare de provenien natural. Antioxidanii acioneaz sincronizat cu
organismul uman, consumnd radicali liberi i meninnd sntatea omului. Rolul antioxidanilor
const n anihilarea aciunii radicalilor liberi din organismul uman, care se produc continuu i
servesc drept catalizatori pentru procesele metabolice [169].
Dac organismul uman nu este supus factorilor nocivi externi, acesta regleaz de sine
stttor cantitatea radicalilor liberi, fr implicaii din afar, i dimpotriv cnd factorii nocivi
externi acioneaz asupra organismului uman, cantitatea radicalilor liberi se mrete esenial,
situaie n care este necesar suplimentarea alimentelor cu substane naturale antioxidante. Sunt
cunoscute sute de antioxidani, dar numai cinci din ei sunt cheie pentru organismul uman,
35

fiind numii antioxidani de reea. Acestea sunt vitaminele C i E, acidul lipoic, glutationul i
coenzima Q 10. De menionat, c vitaminele C i E nu se produc n organismul uman, din care
cauz acestea se obin prin hran. Acidul lipoic, glutationul i coenzima Q 10 se produc de
organismul uman, ns coninutul antioxidanilor scade paralel cu mbtrnirea organismului, din
care motiv este necesar obinerea acestora din exterior [169].
Taninurile condensate izolate din semine de struguri, numite i proantocianidine,
reprezint o grup de substane naturale cu structur polifenolic [192, 201]. Interesul fa de
aceti compui este determinat de mai muli factori. n primul rnd ei posed un spectru larg de
activiti biologice, n special, antioxidante, iar prezena lor n dieta uman este considerat ca o
msur preventiv n combaterea maladiilor severe, cum ar fi cancerul, ictusul cerebral,
activitatea antidiabetic [41].
n mod cronologic, prima surs explorat de taninuri condensate a fost scoara de pin.
Ulterior, una dintre sursele preferabile ale acestor compui au devenit seminele de struguri,
datorit disponibilitii acestora n cantiti industriale. Ca rezultat, pe piaa produselor secundare
vinicole a aprut un ir de extracte din semine de struguri, prezentnd surse sigure de taninuri.
Taninurile, compui polihidroxilai cu structur aromatic, n primul rnd, sunt caracterizate de
proprietatea de a forma complexe insolubile cu proteinele salivare. De aceea, prezena acestor
compui n vin determin proprietile organoleptice ale acestuia, n primul rnd culoarea i
astringena [85, 93, 112, 176, 227].
n afar de aceasta, derivaii flavan-3-olului reprezint antioxidani importani n celulele
vii, din care motiv taninurile din semine de struguri sunt examinate, n primul rnd, datorit
activitii lor antioxidante. Se cunoate c potenialul de oxido-reducere al compuilor fenolici
este suficient de mic pentru a interaciona cu speciile oxidante prin intermediul diferitelor
mecanisme, de regul, prin mecanismul de captare a radicalilor liberi [72, 223]. Aceti compui
mai au un rol semnificativ n calitate de repeleni pentru protecia plantelor contra agenilor
patogeni i diferiilor duntori [93]. Taninurile au o aciune protectoare n cazul degradrii
oxidante a ADN-ului, precum i o aciune benefic n inhibarea preventiv a carcinogenezei
[176]. De rnd cu proprietile lor antioxidante, proantocianidinele pot influena eliberarea
oxidului de azot de ctre celulele endoteliale [83]. Bazndu-se pe aceste mecanisme de aciune,
compuii polifenolici din produsele vinicole au fost prezentai n diferite publicaii ca substane
cu aciune antibacterian, antiviral, antiinflamatoare, antialergic i vasodilatatoare. De
asemenea, taninurile din semine de struguri au demonstrat capacitatea de a inhiba agregarea
trombocitelor, de a mbunti permeabilitatea vaselor sangvine i de a diminua fragilitatea lor.
36

Au mai fost relatate date despre efectul enotaninurilor asupra sistemelor enzimatice precum ar fi
fosfolipazele A2, ciclooxigenazele i lipooxigenazele. Ca rezultat, beneficiul potenial al
enotaninurilor pentru sntatea uman a fost recunoscut pe larg [189]. Aceasta a condus la
aplicaii fitofarmaceutice diverse ale enotaninurilor condensate: prevenirea maladiilor
cardiovasculare, reducerea edemelor, ameliorarea circulaiei periferice i vederii, tratarea
retinopatiei diabetice, hipercolesterolemiei, stabilizarea tonusului esuturilor conjunctive,
reducerea reaciilor alergice i inflamatorii, accelerarea

tratamentului plgilor, precum i

mbuntirea funciei imunitare [156]. Binecunoscutul fenomen Paradoxul francez const n

incidena mai sczut a maladiilor cardiovasculare n Frana, comparativ cu situaia analoag din
Marea Britanie i SUA [172]. Cu toate c dieta populaiei din toate aceste ri este la fel de
bogat n lipide, n special, n grsimi animale, s-a presupus c sntatea mai bun a francezilor,
inclusiv numarul mai mic de cazurile fatale, se datoreaz consumului sistematic i moderat al
vinului, ceea ce contribuie la inhibarea inflamrilor cronice i stimularea activitii
anticoagulante exercitate de compuii polifenolici din vin [216].
Extractele din semine de struguri (ESS) (spre exemplu preparatul Leucoselect) sunt
utilizate att ca ingredieni activi n produse farmaceutice, ct i ca aditivi alimentari. Aceste
extracte contribuie, n primul rnd, la tratarea fragilitii i creterea stabilitii pereilor vaselor
sanguine, precum i la captarea radicalilor liberi activi i inhibarea ionilor superoxidici [89]. n
baza acestor circumstane, proantocianidinele din seminele de struguri prezint un interes sporit
n calitate de compui biologic activi cu spectru larg de activiti [126].
Catechinele din ESS au proprieti fitotoxice determinate de enantiomerii catechinici.
Totodat, catechinele, dar nu enantiomerii posed activiti antibacteriene i antifungice. Datorit
combinaiei activitilor fitotoxice i antimicrobiene, catechinele pot fi utilizate ca erbicide
naturale i n cadrul remediilor antimicrobiene [226].
Testarea activitii antimicrobiene a compuilor fenolici sumari din ESS, prin metoda
difuziei n agar, cu privire la bacteriile

Aeromonas hydrophila, B.cereus, E.aerogenes,

E.faecalis, E.coli, Mycobacterium smegmatis, P.vulgaris, P.aeruginosa, P.fluorescens,

S.enteritidis, S.typhimurium, S.aureus i Yersinia enterocolitica a demonstrat c toate bacteriile
au fost inhibate de fenoli n concentraiile 2,5; 5; 10 i 20%, cu excepia Y. enterocolitica pentru
care nu s-a constatat eficien n cea mai mic concentraie. Extractele, n concentraia 1% nu
au prezentat activitate antibacterian. Conform metodei utilizate, E.coli era cea mai sensibil
bacterie. S-a constatat, c unii polifenoli (catechinele) din semine de struguri stopeaz creterea
bacteriei S.mutans care cauzeaz cariile dentare [232].
37

Prin examinarea aciunii antimicrobiene a compuilor fenolici n extractele cu aceton,

acid acetic, etil-acetat i ap, s-a constatat eficiena acestora pentru un ir de tulpini de E.coli,
S.aureus, P.aeruginosa, E.faecalis

i L.monocytogenes. n comparaie cu cloramfenicolul,

utilizat ca martor, extractele manifest activitate mai diminuat, dar totui destul de pronunat.
De menionat, c reacia tulpinilor speciilor menionate la compuii fenolici a fost difereniat,
ceea ce denot polimorfismul genetic semnificativ al speciilor cu privire la rezistena pentru
compuii fenolici. Rezultatele obinute au pus n eviden, totui,

o corelaie direct ntre

coninutul de fenoli n extrase i efectul antimicrobian [37].

Seminele de struguri reprezint deeuri ale produciei vinicole i conin cantiti
semnificative de compui polifenolici. innd cont de faptul c valorificarea produselor
secundare ale industriei vinicole reprezint o direcie de cercetare prioritar recunoscut de
Guvernul Republicii Moldova, un ir de companii au iniiat programe de cercetare orientate spre
elaborarea procedurilor eficiente de extracie a proantocinidinelor din seminele de struguri.

1.6.4. Mecanisme de aciune antimicrobian a taninurilor

Cercetarea aciunii antibacteriene, prin testul de plasmocoagulare, a ctorva taninuri
acidului

tanic,

acidului

galic,

acidului

elagic,

epicatechinei,

epicatechingalatului,

epigalocatechingalatului asupra S.aureus a relevat c acidul tanic merit investigri ca un

posibil agent adjuvant mpotriva infeciilor de piele cauzate de S.aureus i tratate cu antibiotice
-lactamice. Diverse enzime microbiene, n filtratele de cultur sau n form purificat i inhib
activitatea la amestecarea cu taninuri. Se consider c mecanismele antimicrobiene de baz ale
taninurilor constau n complexarea acestora cu enzimele microbiene sau substraturile nutritive
datorit proprietii astringente a taninurilor [105].
Toxicitatea taninurilor este determinat de aciunea acestora asupra membranelor
microorganismelor i de formarea complecilor cu ionii de metal. Astfel, acidul tanic cu efect
inhibitoriu asupra creterii unor bacterii intestinale, aa ca B.fragilis, Clostridium perfringens,
E.coli i E.cloacae, capteaz fierul din mediul nutritiv, fcndu-l inaccesibil pentru
microorganismele care activeaz n condiii aerobe, n special, pentru bacteriile intestinale, care
au nevoie de fier pentru activitile vitale [61, 62].
Conform unor date, proprietile antimicrobiene

ale taninurilor se realizeaz prin

urmtoarele mecanisme: inhibiia enzimelor extracelulare microbiene, deprivarea substratelor

necesare pentru creterea microbian, n special, a fierului i aciunea asupra metabolismului
microbian prin inhibiia fosforilrii oxidative [191] .
38

Muli flavonoizi lipofilici uor pot deregla membrana microbian. Totodat, activitatea
antibacterian a taninurilor poate fi atribuit abilitii acestora s inactiveze adezinele
microbiene, enzimele, proteinele de transport i nveli, i s formeze compleci cu
polizaharidele patogenilor [143].
Prin metoda diluiei n agar s-a constatat c acizii

tanic, galic i propilgalatic, n

concentraiile 150, 275, 300 g/ml, respectiv, prezint activiti inhibitorii pentru patogenul
petilor Cytophaga columnaris. ntruct acidul tanic reprezint un compus polimeric cu multiple
grupri hidroxilice i are capacitate de joncionare a proteinelor cu glicogenul de cel puin 9 ori
mai mare dect ali compui-test, tocmai aceste nsuiri sugereaz c gruprile hidroxilice ale
taninurilor sunt importante pentru realizarea activitii antibacteriene [98] i conduc la
distrugerea membranei celulare [88].
Activitatea antibacterian a extractelor din Pterocarpus santalinus, bogate n taninuri,
pentru speciile E.aerogenes, Alcaligenes faecalis, E.coli, P.aeruginosa, P.vulgaris, B.cereus,
B.subtilis, testat prin metoda difuziei n agar, a pus n eviden eficiena acestora i, totodat,
specificitatea de reacie a patogenilor. Se presupune, c nsuirile antimicrobiene pronunate ale
flavonoizilor se datoreaz abilitii acestora de a forma compleci cu proteinele extracelulare
(solubile) i, totodat, cu peretele celulei bacteriene [143].
Mecanismele de rezisten ale microorganismelor mpotriva taninurilor se realizeaz prin
detoxifierea acestora ca urmare a sintezei polimerilor de complexare a taninurilor, oxidarea
compuilor, biodegradarea acestora i sinteza sideroforilor [191].
Conform unor autori [45], catechinele componeni majori ai taninurilor condensate,
dei sunt considerate rezistente, sunt descompuse de unele microorganisme. Oxigenaza
catechinic reprezint o enzim-cheie a fungilor i bacteriilor care particip la degradarea acestor
compui, iniial catechinele fiind degradate n acid fluoroglucinol carboxilic i acid
protocatechinic.

1.6.5. Mecanisme ale activitii antioxidante i regenerative ale taninurilor

Studii recente relev c ESS exercit efecte protectoare n diverse forme de dereglri
cardiace datorit proprietilor antioxidante ale acestora. Polifenolii seminelor de struguri pot
proteja cardiomicetele de apoptoz prin inducerea enzimelor antioxidante endogene, protejnd
celula cardiac de traumatismul oxidant, iar tratarea prealabil cu catechine i proantocianidine
B4 conduce la reducerea considerabil a xantinoxidazei i acumularea de specii de oxigen
reactive xantininduse [74].
39

Investigaiile asupra obolanilor au pus n eviden faptul c administrarea oral timp de 1

sptmn a proantocianidinelor intensific activitatea de captare radicalic n plasm i esutul
muscular, indicele fiind cu 34-44% mai nalt dect n grupul de control [145].
S-a constatat, c fracia metanolic din florile de Dimocarpus iongan Lour, ce posed
activitate antioxidant const din 2 componeni majori: epicatechin i proantocianidin A2
[109]. Capacitatea de captare a radicalilor liberi, absorbie a radicalilor de oxigen, inhibiie a
oxidrii lipoproteinelor de densitate joas prezint criterii exacte de determinare a proprietilor
antioxidante ale taninurilor. De menionat, c extrasele n baza diferiilor solveni adesea prezint
activitate diferit. Astfel, la cercetarea activitii antioxidante a extractelor metanolice, etilacetate i n-hexanice din florile de D.iongan s-a stabilit c extractul metanolic prezint cea mai
nalt activitate antioxidant [109]. Aceste date au o mare importan la elaborarea tehnologiei
de obinere a preparatelor eficiente n baza compuilor taninici.
Culturile gliale ale obolanilor, tratate prealabil cu proantocianidinele din ESS prezint o
ameliorare a viabilitii n urma stresului oxidant, indus cu H2O2, confirmat de reducerea
eliberrii lactatdehidrogenazei [186]. De asemenea, i fraciile oligomerice proantocianidinice
din prun, ce constau din uniti epicatechinice i catechinice prezint activiti pronunate
antioxidante [116].
Conform autorului Sroka [209], flavonoizii, taninurile i acizii fenolici prezint
proprieti antiradicalice i antioxidante pronunate datorit prezenei gruprilor hidroxilice,
legturilor duble 2,3, precum i structurilor ortodifenolice care intensific aceste nsuiri.
Glicozilarea, blocarea gruprii 3-OH n inelul C, lipsa gruprii hidroxilice sau prezena doar a
gruprii metoxice n inelul B au ca efect diminuarea activitii antiradicalice sau antioxidante a
acestor compui. Unele taninuri, dar i esterii galatici din vinurile roii

manifest efecte

antioxidante in vivo. Numrul gruprilor hidroxice, joncionate la inelul aromatic n poziiile

orto- sau para- mresc activitatea antioxidant i antiradicalic a acizilor fenolici. Substituia
gruprii metoxice din poziia orto- n poziia OH din cadrul monofenolilor, de asemenea,
mrete activitatea antioxidant.
Cercetrile asupra mutanilor bacteriei patogenice Erwinia chrizsantemi, neutri n
sistemul de transport al fierului mediat de siderofori au demonstrat c

polifenolii inhib

creterea microorganismelor datorit deprivrii acestora de fier. n baza mecanismului ipotetic,

conform cruia polifenolii (taninurile) sunt buni chelatori ai fierului cu care formeaz precipitat,
se presupune c deprivarea fierului n plantele bogate n polifenoli contribuie la protejarea
acestora de invazia microorganismelor patogene [148].
40

Pe modelul celulelor vegetale s-a constatat c taninurile oxidate pot forma legturi
covalente cu enzimele fungice (pectinaza, celulaza, lactaza) i s interfereze cu acestea,
mecanism necesar pentru stoparea invaziei fungice n plante [129, 218].
Punicalagina i punicalina substane fenolice, izolate din frunzele de Terminalia
catappa L.
antioxidant

o plant folosit la tratarea dermatitelor i a hepatitelor, prezint activitate

i

contribuie

la

reducerea

coninutului

de

aspartataminotransferaze

alaninaminotransferaze din ser. Schimbrile histologice n jurul venei centrale hepatice i

traumarea oxidant, indus de acetaminofen sunt recuperate de ambii compui, ceea ce relev
activitatea antihepatotoxic a acestora. S-a constatat, c substanele n doze mari produc o
traumare hepatic, iar n doze mici manifest activitate antioxidant [131].
Testele in vitro au demonstrat, c de rnd cu asemenea antioxidani, ca vitamina C,
vitamina E, carotinoizii care previn progresarea cataractei, induse experimental la obolanii cu
cataract ereditar, i procianidinele din struguri prezint capaciti antioxidante puternice
reinnd formarea cataractei [236].
Prin cercetarea aciunilor preventive asupra maladiilor s-a constatat c activitile
antioxidante ale proantocianidinelor sunt mai puternice dect ale vitaminei C sau E.
Mecanismele aciunii antioxidante se datoreaz capacitii de captare radicalic i aciunii
inhibitorii enzimatice. ESS, bogate n proantocianidine, manifest aciuni preventive n astfel de
maladii, ca ateroscleroz, ulcere gastrice, cancer, cataract i diabet. Datorit acestor efecte,
produsele sunt

lansate ca antioxidani n aditivi alimentari, ingrediente n suplimentele

alimentare i cosmetic [44]. De asemenea, proantocianidinele din semine de struguri au un

efect benefic n protejarea rinichilor obolanilor

diabetici, mecanismul efectului constnd n

creterea abilitii renale antioxidante [134].

Este interesant de menionat, c catechinele i proantocianidinele B4 prezint capaciti
protectoare n ceea ce privete toxicitatea unor preparate. Astfel, utilizarea clinic a
doxorubicinei unui agent anticanceros activ, este restrns datorit efectelor sale cardiotoxice
adverse i severe. ESS manifest

efecte protectoare pentru cardiotoxicitatea indus de

doxorubicin datorit proprietilor antioxidante. Rezultatele studiului arat c catechinele

polifenolice din seminele de struguri i proantocianidinele B4 pot proteja cardiomiocitele de
toxicitatea indus de doxorubicin prin micorarea generrii de specii reactive de oxigen i
numrului de celule apoptotice, prevenirea fragmentrii de ADN, reglarea nivelurilor de expresie
a proteinei pro-apoptotice Bax- i proteinei antiapoptotice Bci-2, precum i inhibarea
semnalelor apoptotice [75].
41

La testarea activitii antioxidante a extractelor din ceaiul verde n condiii de generare

radicalic, prin utilizarea compusul azohidrofilic, 2,2- azobis (2-aminopropan) dihidroclorid, la o
rat constant i msurabil, n cadrul liniei celulare epiteliale din cultur renal, s-a constatat c
extractele din ceaiul verde i amestecul taninic cu componentele sale [(-)-epigalocatechina 3-Ogalat (EGCg), (-)-galocatechina 3-O-galat (GCg), (-)-epicatechina 3-O-galat (ECg), (-)epigalocatechina (EGC), (+)-galocatechina (GC), (-)-epicatechina (EC) i (+)-catechina (C)],
prezint activitate protectoare mpotriva traumatismului celular

indus de 2,2- azobis (2-

aminopropan) dihidroclorid. Amestecul taninic i componentele sale exercit activitate

antioxidant mai nalt dect extractele din ceaiul verde. Structurile O-dihidroxi din inelul B i
gruprile galatice sunt determinante i importante n captarea radicalic i formarea potenialului
antioxidant [237]. Frunzele de Houttuynia cordata, cu coninutul polifenolic general de 1,14%,
tradiional sunt utilizate ca aliment medicinal n Asia de Est datorit efectelor antioxidante ale
polifenolilor, demonstrate n testele n care s-a constatat inhibarea fragmentrii albuminei serice
bovine de ctre hidrogen-peroxidul de cupru [221].
Conform unor opinii, efectele protectoare cardiovasculare ale ESS n diminuarea
dereglrilor cardiace se datoreaz proprietilor antioxidante. Incubarea celulelor cardiace H9C2
cu concentraii micromoleculare de catechine sau proantocianidine B4

conduce la inducia

semnificativ a enzimelor antioxidante celulare. De asemenea, tratamentul

preventiv cu

catechine sau proantocianidine B4 reduce semnificativ xantinoxidaza (XO), speciile reactive de

oxigen, intracelulare i xantin-induse i apoptoza cardiac celular, astfel relevndu-se c
polifenolii din struguri pot proteja de apoptoza celular cardiac prin inducerea enzimelor
antioxidante endogene, ceea ce prezint un mecanism important al efectelor protectoare ale ESS,
n diverse forme de dereglri cardiovasculare [74].
Prin cercetarea efectelor extractelor proantocianidinice din semine de struguri asupra
generrii de oxid de azot n culturile celulare astrogliale primare la obolani, s-a constatat c de
rnd cu activitatea antioxidant, acestea conduc la producerea diminuat a cantitilor de oxid de
azot [186]. S-a constatat c administrarea proantocianidinelor
polifenolilor din

care reprezint majoritatea

vinul rou, conduce la creterea rezistenei plasmei sngelui de oareci

mpotriva stresului oxidant [122].

ESS inhib carcinoma uman a toracelui, sporete creterea i viabilitatea mucoasei
gastrice umane, induc moartea apoptotic a celulelor carcinomei umane, inhib tumorigeneza
pielii indus de radiaia UV. S-a concluzionat c ESS posed proprieti anticanceroase i
chemopreventive mpotriva diferitelor cancere epiteliale [32, 82, 199, 213, 200, 225].
42

Eficacitatea anticanceroas i chemopreventiv a ESS n numeroase procese maligne

inclusiv cancerul de prostat, este determinat de cea mai activ procianidin esterul 3,3-di-Ogalat al procianidinei dimerice B2. Studiile profilului chimic al ESS au demonstrat c toate
gruprile hidroxilice ale acidului galic sunt necesare pentru activitate. Aceste date sugereaz c
gruprile galoil ale B2-digalat sunt responsabile, n mod special, pentru efectul anticancerigen.
Procianidina B2-3,3-di-O-galat este privit n calitate de nou agent biologic activ al ESS ce
necesit un studiu mai detaliat pentru aprecierea efectelor anticancerigene, inclusiv pentru
tumorogeneza pielii indus de radiaia UV [33].
Prezint interes descompunerea acidului tanic n soluii apoase n cadrul proceselor de
oxidare, n care au fost implicai ozonul, peroxidul de hidrogen i radiaia ultraviolet, att
individual, ct si n combinaii. Testul bacteriologic ToxAlert cu bacteria luminescent Vibrio
fisheri a demonstrat c toxicitatea tulpinilor a diminuat considerabil n timpul oxidrii avansate a
soluiei de acid tanic [173].
S-a constatat c creterea bacteriei E.coli a fost inhibat de taninurile condensate doar
atunci cnd acestea au fost expuse mediului aerob, ceea ce a condus la autooxidarea taninurilor
i generarea considerabil a peroxidului de hidrogen. Totodat, adiionarea catalazei exogene a
permis creterea bacteriei n mediu cu taninuri. Deci, taninurile condensate sunt toxice pentru
E.coli n mediu aerob, ntruct acestea genereaz H2O2, iar rspunsul la stresul oxidant ajut
tulpinile de E.coli s depeasc efectul inhibitor al acestora [203].
Studiile asupra catechinelor din ceaiul verde, care sunt polifenoli monomerici, arat c
bacteriile gram-pozitive sunt mai sensibile la aciunea bactericid ca cele gram-negative. Se
cunoate c catechinele deterioreaz integritatea membranar, cauznd dezmembrarea
lipozomilor. Activitatea compuilor este mai joas n prezena lipidelor ncrcate negativ,
relevndu-se, astfel, c rezistena nalt a bacteriilor gram-negative

se datoreaz prezenei

lipopolizaharidelor ncrcate negativ [110]. Investigaiile asupra catechinelor din ceaiul verde au
confirmat c n cadrul distrugerii membranare are loc inserarea sau interaciunea flavonoizilor
(catechinelor i epigalocatechinelor galat) cu zona polar extern a bistratului lipidic din
lipozomi [101, 121, 181, 217, 222].
Oricum, gruprile dihidroxifenolice pot forma compleci stabili cu muli ioni de metal.
n prezena cocentraiei neletale de cupru (II), catechinele prezint efecte bactericide pentru
E.coli, ceea ce determin distrugerea membranei citoplasmatice. n acest caz, mecanismul
ipotetic de aciune const n reaciile redox reciclante dintre catechinele-complexate cu Cu (II) i
Cu (I), cauzate de oxigenul molecular, genernd peroxidul de hidrogen pe suprafaa celular
43

[108]. Autorii Smith, Imlay, Mackie [203] confirm aceast ipotez prin constatarea faptului c
creterea E. coli n mediu cu acid tanic este restabilit dup adiionarea fierului.
E.coli posed enzime antioxidante, induse ca rspuns la stresul oxidant. Gena Oxy-R
controleaz expresia a cel puin 9 proteine peroxid-inducibile, inclusiv a hidroperoxidazei I
(HPI). Rspunsul la stresul oxidant este necesar E.coli pentru depirea efectului inhibitor al
taninelor condensate din mediu. Mutanii, privai de gena HPI o gen catalazic inducibil,
sunt mai sensibili, iar mutanii ce prezentau superexpresia enzimelor antioxidante mai puin
sensibili la efectul taninelor [95].
Inducerea stresului peroxidic mrete rata de supravieuire a E.coli incubate cu catechine
n prezena Cu (II). Posibil, c rezistena E.coli la toxicitatea taninelor este determinat de
implicarea sistemelor de achiziionare a ferului i/sau activarea rspunsului la stresul oxidant.
Autooxidarea taninurilor nsoit de producerea peroxidului de hidrogen inhib creterea E.coli,
iar creterea rspunsului la stresul oxidant poate diminua efectul inhibitoriu al taninurilor.
Reaciile redox dintre Cu (II) i Cu (I) complexat cu catechine rezult n producerea peroxidului
de hidrogen bactericid. Efectul extractului taninic asupra tulpinii E.coli BW13711 este mai mult
bacteriostatic decat bactericid la concentraia 0,1%, iar la concentraia mai nalt 0,2% efectul
este pronunat bactericid [108].
Peroxidul de hidrogen este o important molecul care contribuie la distrugerea oxidant
n celule. n mediile, n care taninurile produc peroxid de hidrogen ca rezultat al autooxidrii,
microorganismele vor fi inhibate. Aceasta are importan considerabil i n sistemele biologice
ale solului n care taninurile sunt prezente la descompunerea biomasei plantelor. La multe
specii de microorganisme, proteinele OxyR induc genele antioxidante de protecie ca rspuns la
peroxidul de hidrogen produs de taninuri [67].
Activitatea antimicrobian a taninurilor din ceai este cercetat pe larg n lume [220]. De
exemplu, s-a constatat c catechinele i teaflavinele prezint activitate antibacterian nalt
pentru Bacillus cereus, comparabil cu asemenea antibiotice medicinale ca tetraciclina sau
vancomicina [86]. Totodat, s-a elucidat

faptul c exist specificitate de sensibilitate a

microorganismelor Salmonella typhimurium, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus i

Lactobacillus plantarum la aciunea extractelor catechinice [38, 67, 165].
S-a constatat oportunitatea utilizrii extractelor de ceai n manipulrile de cultura tisular
a maimuelor, ntruct acestea preveneau infectarea celulelor cu virusuri. Se consider, totui, c
este vorba mai mult de influena asupra adsorbiei virale dect de efectul antiviral direct [154].

44

Proprietile antimicrobiene i antioxidante ale preparatelor taninice la tratarea rnilor

[30, 100, 124, 136] se datoreaz faptului c taninurile formeaz compleci ireversibili cu
proteinele, ceea ce conduce la inhibarea sintezei proteinelor celulare [99], acest lucru fiind
important n cazul esuturilor inflamate i ulceroase [153].
Capacitatea

taninurilor de a cicatriza rnile se bazeaz pe abilitatea acestora de a

jonciona cu proteinele esuturilor lezate, formnd precipitate care ulterior se transform n

cicatrice protectoare i antiseptic [31].
Deci, compuii taninici, prin aciunea antimicrobian (cuplarea cu enzimele microbiene i
substratul nutritiv, jonciunea cu fierul) i antioxidant (capacitatea de captare a radicalilor liberi,
absorbie a radicalilor de oxigen, inhibiie a oxidrii lipoproteinelor .a.) au proprieti
regenerative puternice ale esuturilor, unul din mecanismele de baz fiind jonciunea cu
proteinele i precipitarea acestora.

1.7. Concluzii la capitolul 1

1. Prin analiza situaiei n domeniul tezei s-a constatat c infeciile de plag,
nozocomiale, oportuniste au o mare importan medical, ecologic i socio-economic. n multe
ri ale lumii, inclusiv n Republica Moldova acestea conduc la frecvente cazuri de morbiditate,
invalidizare i mortalitate; administrarea intens a antibioticelor care favorizeaz selectarea i
rspndirea continu a celor mai virulente tulpini de bacterii i fungi; cheltuieli financiare imense
pentru tratament i spitalizare suplimentar. ntruct rezistena agenilor patogeni la antibiotice a
devenit o realitate alarmant, problema elaborrii preparatelor taninice polifuncionale n
tratamentul infeciilor menionate este de actualitate stringent, acestea oferind largi oportuniti
n medicina contemporan.
2. Afeciunile de origine bacterian i fungic

reprezint patologii, rezultate din

interaciuni specifice celul-gazd x microorganism care conduc la formarea unui sistem de

interrelaii. Mecanismele de aciune antimicrobian a taninurilor se bazeaz pe un ir de efecte
dintre care cele mai importante sunt: complexarea taninurilor cu enzimele microbiene,
substanele nutritive, inhibiia enzimelor extracelulare microbiene, deprivarea substratelor
necesare pentru creterea microbian, aciunea asupra metabolismului microbian prin inhibiia
fosforilrii oxidative i deprivarea de fier. Mecanismele de rezisten a microorganismelor
mpotriva taninurilor se realizeaz prin detoxifierea acestora ca urmare a sintezei polimerilor de
complexare a taninurilor, oxidarea compuilor, biodegradarea acestora i sinteza sideroforilor.
Pentru depirea acestui fenomen i fortificarea potenialului imunitar al organismului uman este
45

necesar elaborarea tehnologiei de obinere a noilor preparate complexe polifuncionale n baza

materiei vegetale, economic rentabile.
3. Preul nalt al multor remedii medicamentoase, reaciile lor adverse i, n mare masur,
ineficiena lor, a determinat n ultimii ani intensificarea cercetrilor tiinifice cu privire la
valorificarea unor noi surse de substane biologic active i elaborarea preparatelor eficiente.
4. n Republica Moldova exist taninuri din semine de struguri (enotaninuri) n cantiti
industriale. Lund n consideraie insolubilitatea n ap a multor taninuri i, totodata, existena
fenomenului de rezisten microbian la taninurile vegetale, de mare perspectiv se prezint
cercetrile cu privire la posibilitatea de modificare structural a enotaninurilor, mririi gradului
de oxidare n scopul sporirii eficienei i aplicrii acestora la tratarea infeciilor de plag.

46

2. ELABORAREA COMPUSULUI ENOXIL CU PROPRIETI

POLIFUNCIONALE ANTIMICROBIENE I ANTIOXIDANTE
Unii din cei mai importani antioxidani care nu se constat n reelele metabolice ale
organismului uman, sunt compuii proantocianidinici ce se gsesc n fructe, legume, struguri de
vi de vie, ceai verde, etc. Este cunoscut faptul c seminele de struguri prezint o surs bogat
de aa numitele enotaninuri taninuri condensate care reprezint o gam vast de substane
naturale cu structur polifenolic, remarcate prin coninut nalt de proantocianidine [126].
ntruct stresul oxidant este implicat n patogeneza numeroaselor maladii, sunt actuale
investigaiile cu privire la manifestarea proprietilor antioxidante ale compuilor polifenolici
[184]. Cea mai mare parte a enotaninurilor sunt insolubile n ap, din care motiv utilizarea lor n
calitate de antioxidani este dificil. Pentru lrgirea spectrului acestor valoroase substane
polifenolice s-a propus drept scop elaborarea unui procedeu de hidrosolubilizare a
enotaninurilor, determinarea proprietilor antioxidante

i antimicrobiene ale compusului

elaborat.
2.1. Procedeu de obinere a compusului Enoxil
Sunt cunoscute enotaninuri obinute din semine de struguri care au proprieti
antioxidante i capteaz radicalii liberi. Dezavantajul acestor compui polifenolici const n
faptul c majoritatea enotaninurilor nu sunt solubile n ap, ceea ce restrnge mult sfera de
utilizare a acestora n calitate de antioxidani pentru captarea radicalilor liberi. Din aceast cauz,
s-a considerat oportun obinerea unui preparat cu proprieti taninice i, totodat, solubil n ap,
nsuiri care ar lrgi cu mult domeniul de aplicare a taninurilor naturale.
Pentru aceasta, enotaninurile solubile n alcool etilic au fost supuse procesului de
hidrosolubilizare prin tratarea acestora cu peroxid de hidrogen n raportul masic de, respectiv, 1
(36), timp de 7 15 min, la temperatura de 70 100oC, dup care soluia s-a evaporat la
temperatura de 40 65 oC, iar produsul obinut s-a uscat la aceeai temperatur pn la mas
constant [2].
n cadrul procesului de oxidare a enotaninurilor, peroxidul de hidrogen rupe lanul
polimeric al enotaninurilor formnd compui noi care conin grupe funcionale carboxilice,
peroxidice, alcoolice, fenolice, aldehidice, cetonice, esterice etc. Realizarea acestui procedeu
face posibil obinerea compuilor organici solubili n ap cu gust astringent.

47

Prezena grupelor carboxilice, peroxidice, alcoolice, fenolice, aldehidice, cetonice,

esterice n compusul nou format a fost demonstrat prin spectroscopie IR, titrri acido-bazice i
indicele peroxidic [2].
Procesul de depolimerizare a fost stabilit i n baza spectrelor de mas ale compusului
nou obinut Enoxilului, nregistrate la masspectrometrul MALDI (Matrix Assisted Laser
Desorption/Ionization), seria Bruker Daltonix Flex Analysis. Masele moleculare i formulele de
structur ale compuilor obinui sunt prezentate n Figura 2.1.
Astfel, datele masspectrometrice confirm originea catechinic a compuilor n amestecul
studiat n care, judecnd dup intensitatea maximurilor predomin structurile monomerice.
Totodat, s-a constatat existena compuilor dimerici confirmat de maximurile intervalului de
mas ionic (m/z) 620-670; trimerici (m/z 918) i tetramerici (m/z 1118-1158). Maximuri
ale masei ionice, mai mari dect cele prezentate nu s-au constatat n spectre. De menionat, c
compuii trimerici i tetramerici se conin n cantiti mici. Radicalii cationici aparin structurilor
derivate din catechine i prezint urmtoarele valori m/z: 322 (2), 289 (3), 272 (4), 198 (5), 182
(6), 184 (7), 181 (8), 172 (9), 165 (10), 163 (11), 76 (12) i 44 (13).
Unele maximuri relev c n amestec sunt prezeni compusi ce conin resturi
hidroperoxidice n poziiile C-3 (radicalii ionici cu m/z 198 5, 182 6 i/sau 7) i C-4
(maximuri cu m/z 304 2, 171 9 a catechinei i m/z 74 12, format din radicalul ionic 2.
Maximurile radicalilor cu m/z 443 (14) i 333 (15) confirm prezena n amestec a
esterilor acidului galic, care supun molecula de catechin procesului de esterificare n poziia
C-3. Datele prezentate demonstreaz c la tratarea enotaninurilor cu peroxid de hidrogen are loc
depolimerizarea oligomerilor catechinici i/sau epicatechinici, nsoit de scindarea legturilor C4-C-8 n urma atacului nucleofilic al anionilor HO2- i formarea ulterioar de derivai
monomerici liberi esterificai cu acid galic n poziia C-3. La ruperea legaturii C4-C8 ntre
resturile catechinice, n pozitia C-4 joncioneaz fragmentul hidroperoxidic care se poate fixa i
n pozitia C-3, ca rezultat al reactiei de substituie nucleofilic. Se admite i posibilitatea de
scindare oxidant a ciclurilor catechinice B i C, cu formare de acizi carboxilici de tip 16 i 17:

OHC

COOH
COOH

(16), m/z 170

COOH
COOH
(17), m/z 197

48

5'

OH

6'
8

HO

8a

OH

OH
Depolimerization

2'
6

4a

OH

(n+1)

OH

OH

OH

OH HO

OH
OH

OOH

OH

(2),m/z 322

OH

OH

OH
OH

HO

HO

(3), m/z 289

OH

OH
O

HO

OH
OH

OH
(1), m/z 271

n=0-8

OH
MS

OH

OH

OH

HO

OH

OH
(6), m/z 182

OH

HO

OH
H2COOH

OH

-H2O

OH

OH

OH OOH

OH

OH
(10),m/z 165

(9), m/z 172

(8), m/z 181

(7), m/z 184

CHO

HO

OH

OOH
(5), m/z 198

(4),m/z 272

OH

OH

OH

OH
OH
(11), m/z 163

CH3CHO

OOH
(13), m/z 44
(12), m/z 76
OH
O

OH

OH

HO

O
OH

OH

HO

OH

OH

O
OH

(15), m/z 333

(14), m/z 442

OH
OH

Fig. 2.1. Schema proceselor de depolimerizare i oxidare a enotaninurilor.

De menionat, ca unuia i aceluiai maxim care prezint o anumit mas ionic (m/z)
poate s corespund mai muli izomeri cu structur diferit, fenomen ntlnit n cercetrile
masspectrometrice. Toate tipurile de flavoane au o structur comun format dintr-un fragment
cromatic (inelele A i C) de care se leag nucleul aromatic (B) [7]:
49

2.2. Proprietile antioxidante ale Enoxilului

Dintre metodele larg utilizate pentru stabilirea capacitii antioxidante a preparatelor se
enumer capacitatea de captare a radicalilor liberi, absorbie a radicalilor de oxigen, inhibiie a
oxidrii lipoproteinelor de densitate joas, indus de Cu2+ [109].
Mecanismul de captare a radicalilor liberi de ctre catechine este determinat de modul n
care fragmentele A, B, C particip la oxidare. Se cunoate, c fragmentul B nu particip direct
la reacia redox, n timp ce nucleul C cu grupri OH capteaz radicali liberi, formnd radicali
fenoxilici stabili. Astfel, stabilitatea produsului este asigurat de structura inelelor A i B,
mecanismul fiind similar cu cel al oxidanilor capabili s capteze radicali liberi din sistem, n
special, de tip peroxidic [7]. Pe lng aceasta, flavonoidele pot capta unele metale cu aciune
toxic (Cu2+, Fe2+) formnd chelai [55].
Proprietile antioxidante ale enotaninurilor i Enoxilului au fost stabilite prin metod de
chemiluminiscen, la aparatul Turner Design TD 20/20, US. Metoda este oportun, n special,
pentru structurile complexe (pulbere de compui organici, soluii de compui organici i
anorganici) i poate fi aplicat n studiul tuturor produselor care pot fi solubilizate n ap sau
dimetilsulfoxid (DMSO).
n cuva aparatului numit chemiluminometru (Turner Design TD 20/20, US) se introduc
200 l soluie de Luminol 10-5 M, 50 l soluie de analizat, 700 ml soluie tampon (Tris HCl), 50
ml soluie de H2O2 10-5 M. Cuva se nchide, se agit i se introduce n aparat ntr-un
compartiment special, dup care se ncepe msurarea, datele nregistrndu-se

la fiecare 5

secunde, totalul acestora constituind 30-60 de valori ale intensitii chemiluminiscenei (CL).
Activitatea antioxidant (AA, %) se calculeaz din relaia:

Io - Ip
100%

AA% =
Io

n care Io reprezint intensitatea CL martorului la t = 5s, iar Ip intensitatea CL probei la t =

5s. Pentru fiecare prob s-au efectuat minimum 3 testri succesive. Rezultatele obinute sunt
prezentate n Figura 2.2.
50

Fig. 2.2. Variaia n timp a semnalului chemiluminiscent al Enoxilului (1),

enotaninurilor (2) i martorului (3).

Analiza datelor prezentate n Figura 2.2 ne demonstreaz c AA a Enoxilului a fost

diminuat comparativ cu martorul, dar mrit comparativ cu compusul de origine din care s-a
obinut enotanina. Datele chemiluminometrului au demonstrat c AA a enotaninurilor
alctuiete 33,14%, iar a Enoxilului 54,02%. Deci, Enoxilul manifest AA cu 20,88% mai
pronunat n comparaie cu enotaninurile iniiale.
Creterea AA a Enoxilului n comparaie cu enotaninurile se explic prin faptul c n
procesul de hidrosolubilizare a enotaninurilor paralel cu multiplele procese de oxidare are loc i
procesul de depolimerizare a lanului polimeric al proantocianidinelor. Ca

urmare, dintr-o

macromolecul de enotaninuri se formeaz un numr mai mare de monomeri de catechine,

epicatechine, etc. [4, 76].
Prezint interes i studiul evoluiei AA a Enoxilului n funcie de concentraie. Datele
prezentate n Tabelul 2.1 relev c n intervalul de concentraii 1,0 10

-8

... 2,5 10

-2

(%) de

Enoxil AA a diminuat paralel cu descreterea concentraiei, indicele cercetat fiind aproape

constant (31,28...32,16) n intervalul 10-4 ... 10-8 %. Deci, AA a preparatului elaborat este destul
de mare chiar i la diluii avansate.

51

Tabelul 2.1. Activitatea antioxidant a diferitelor concentraii de Enoxil

Concentraie, %

Activitate antioxidant, %

2,5 10 -2

59,75

1,0 10 -3

36,20

1,0 10 -4

32,16

1,0 10 -6

31,28

1,0 10 -8

31,63

Prin cercetarea variaiei n timp a semnalului chemiluminiscent, funcie de logaritmul

concentraiei Enoxilului (Figura 2.3), s-a constatat c la concentraii mai mari de 0,6% a
Enoxilului AA este practic egal cu 100%, adic pornind de la aceast concentraie, practic, toi
radicalii liberi prezeni n sistem sunt captai [137].

100
90
80

AA%

70
60
50
40
30
-8

-6

-4

-2

LgC

Fig. 2.3. Dependena variaiei n timp a semnalului chemiluminiscent (AA, %) de

logaritmul concentraiei soluiei de Enoxil.
2.3. Studii comparative ale activitii antimicrobiene a Enoxilului i enotaninurilor
asupra unor ageni oportuniti ageni cauzali ai hialohifomicozelor
2.3.1. Aspecte metodice de testare a aciunii fungitoxice a Enoxilului i prelucrare
statistic a datelor
Pentru testarea activitii antimicrobiene a Enoxilului, iniial s-a procedat la cercetarea
aciunii acestuia asupra creterii in vitro pe mediu must de bere-agar a fungilor fitopatogeni
Fusarium spp., care conform mai multor date recente se constat implicai i n multe boli
52

oportunistice severe la om [18, 21], printre care se evideniaz leziunile cutanate i subcutanate
masive ale pielii hialohifomicoze [78, 97] i, totodat, reprezint obiecte cu nalte oportuniti
pentru determinarea capacitii fungitoxice a preparatelor [23].
n calitate de obiecte-test au servit 2 tulpini virulente de Fusarium F.oxysporum
var.orthoceras i F.solani, izolate din plante bolnave de gru.
Creterea liniar a ciupercilor se consider un indice valabil pentru determinarea
influenei diferiilor factori (temperatur, inhibitori .a.) asupra creterii acestora pe mediu
nutritiv [23].
Aciunea

fungitoxic a preparatelor a fost cercetat prin cultivarea ciupercilor

F.oxysporum var.orthoceras i F.solani, pe mediu must de bere-agar, suplimentat cu Enoxil sau

enotanin (analog proxim), ce coninea compuii n concentraiile 10-610-1%.
Mediile au fost sterilizate prin autoclavare la temperatura 120C, timp de 30 min.
Pentru determinarea creterii liniare s-a msurat diametrul coloniilor (de la locul
inoculrii pn la sfritul zonei de cretere a miceliului), crescute pe mediu must de bere-agar
solidificat, n cutii Petri, cu grosime uniform a mediului.
Ca martor a servit mediul must de bere-agar, nesuplimentat cu Enoxil sau enotanin.
Efectul preparatelor asupra creterii ciupercilor a fost stabilit n baza diametrului coloniilor
(mm) de ciuperc la a 3, 5, 7, 10-a zi de cultivare pe mediu, n cutii Petri, la temperatura de 2022oC. Experiena a fost efectuat n 10 repetiii.
Datele obinute au fost prelucrate statistic n pachetul de SOFT STATISTICA 7.
Parametrii de baz au fost media cu eroarea (xmx), deviaia standard (), coeficientul de variaie
(V, %), coeficientul de corelaie (r), ecuaia regresional (y funcie de x), gradul de similitudine
n baza analizei clusteriene (metoda construirii dendrogramei, metoda k-medii) i scanrii
multidimensionale [28].

2.3.2. Aciunea Enoxilului i enotaninurilor asupra fungilor F.oxysporum i F.solani in

vitro
Dup cum se vede din datele prezentate (Figura 2.4), concentraia de Enoxil a prezentat
un rol important pentru creterea liniar a coloniilor de F.oxysporum. n intervalul de
concentraii 10-610-1% de enotanin diametrul coloniilor de F.oxysporum a fost mai mic cu
3,9...12,8; 3,1...14,8; 3,3...15,5 i 2,4...14,4% dect martorul, respectiv, pentru zilele 3, 5, 7 i 10
de cretere. Pentru Enoxil s-a constatat c n diapazonul de concentraii 10-610-1% diametrul

53

coloniilor a prezentat valori mai mici cu 8,1...29,1; 5,2...26,5; 2,7...36,6 i 4,5...46,9% dect
martorul, respectiv, pentru zilele 3, 5, 7 i 10 de la plasarea miceliului pe mediu.

Fig. 2.4. Aspectul i dimensiunea coloniilor de F.solani pe mediu must de bere-agar

suplimentat cu Enoxil.
1 martor; 2 Enoxil, 10-1%; 3 Enoxil, 10-2%; 4 Enoxil, 10-3%; 5 Enoxil, 10-4%;
6 Enoxil, 10-5%.

54

De menionat, c cea mai

puternic

reprimare

enotanina

prezentat-o

concentraiile 10-4%: -12,8% i 10-6%: -14,8; -15,5; -14,4%, respectiv, zilelor 3, 5, 7 i 10.
Spre deosebire de enotanin, Enoxilul a manifestat efect fungistatic asupra ciupercii
F.oxysporum n concentraie mai nalt: 10-1%, ns puterea de reprimare a fost mult mai
pronunat, valorile diametrului coloniilor fiind cu 29,1; 26,5; 36,6 i 46,9% mai mici dect
martorul, pentru zilele 3, 5, 7 i 10 de testare (tab.2.2, 2.3) [1].
Metodele statistice de clasificare se utilizeaz cu succes n medicin i alte domenii ale
tiinelor reale pentru stabilirea gradului de similitudine/deosebire a obiectelor/variantelor aflate
n studiu [28].
n cercetrile noastre prezint interes particularitile de distribuire a enotaninei i
Enoxilului n diverse concentraii, funcie de activitatea antifungic.

Tabelul 2.2. Date comparative ale influenei enotaninei nemodificate i Enoxilului asupra
creterii ciupercii F.oxysporum in vitro (a 3 i 5-a zi de cretere)
Nr.

Varianta,

Diametrul coloniilor

Diametrul coloniilor

concentraia

n a 3-a zi de cretere

n a 5-a zi de cretere

(%)

xmx, mm

% fa de

xmx, mm

% fa de martor

martor
1

Enotanin, 10-6

23,20,9*

89,9

32,81,3*

85,2

Enotanin, 10-5

22,81,5*

88,4

33,31,9*

86,5

Enotanin, 10-4

22,50,6*

87,2

36,21,4

94,0

Enotanin, 10-3

23,80,8*

92,2

41,01,3*

106,5

Enotanin, 10-2

24,80,8

96,1

37,31,2

96,9

Enotanin, 10-1

23,81,0*

92,2

36,81,1

95,6

Enoxil, 10-6

23,01,0*

89,1

38,52,4

100,0

Enoxil, 10-5

21,81,1*

84,5

34,80,7*

90,4

Enoxil, 10

-4

23,70,8*

91,9

40,31,8

104,7

10

Enoxil, 10-3

22,71,0*

88,0

40,32,3

104,7

11

Enoxil, 10-2

20,50,9*

79,4

36,51,7

94,8

12

Enoxil, 10-1

18,30,3*

70,9

28,31,5*

73,5

13

Martor

25,81,1

100,0

38,50,8

100,0

* suport statistic la nivelul p<0,05.

55

Tabelul 2.3. Date comparative ale influenei enotaninei nemodificate i Enoxilului asupra
creterii ciupercii F.oxysporum in vitro (a 7 i 10-a zi de cretere)
Nr.

Varianta,

Diametrul coloniilor n a 7-a zi

Diametrul coloniilor n a 10-

concentraia

de cretere

a zi de cretere

(%)

xmx, mm

% fa de

xmx, mm

martor

% fa de
martor

Enotanin, 10

-6

43,70,8*

84,5

60,81,1*

85,6

Enotanin, 10-5

48,01,8*

92,8

69,32,2

97,6

Enotanin, 10-4

49,71,9

96,1

66,01,0*

93,0

Enotanin, 10-3

50,00,7

96,7

71,71,3

102,4

Enotanin, 10-2

47,01,1*

90,9

62,23,0*

87,6

Enotanin, 10-1

49,51,6

95,7

66,72,2*

93,9

Enoxil, 10-6

50,31,6

97,3

72,72,4

102,4

Enoxil, 10-5

44,30,9*

85,7

62,70,8*

88,3

Enoxil, 10-4

51,81,1

100,2

73,81,9*

103,9

10

Enoxil, 10-3

49,71,8

96,1

72,32,8

101,8

11

Enoxil, 10-2

47,01,2*

90,9

67,81,4*

95,5

12

Enoxil, 10-1

32,81,7*

63,4

37,72,9*

53,1

13

Martor

51,71,1

100,0

71,00,9

100,0

* suport statistic la nivelul p<0,05.

Prin analiz clusterian (Figura 2.5) i scanare multipl (Figura 2.6) a fost relevat faptul
c Enoxilul n concentraia 10-1%, sub numrul 12, care a prezentat cele mai nalte valori ale
gradului de reprimare a creterii coloniilor de F.oxysporum pe durata testrii (10 zile) a format
un cluster separat, determinat de valori nalte ale distanelor euclidiene al acestuia de toate
variantele aflate n studiu (tab.2.4), ceea ce relev c nivelul de eficien a Enoxilului n
concentraia 10-1% are superioritate avansat n comparaie cu alte concentraii de Enoxil sau
enotanin. Analiza clusterian prin metoda construirii dendrogramelor, fiind o metod
aglomerativ-iteraional prezint clustere i subclustere tot mai mici, relevndu-se, astfel, c un
grad de similitudine mai nalt ntre variante exist la nivel de agregare mai mic, la care, deci, i
distanele euclidiene sunt mai mici [10].
56

1
8
5
2
3
6
11
4
10
7
9
13
12
0

10

15

20

25

30

35

40

Distante euclidiene

Fig. 2.5. Analiza clusterian a similitudinii de aciune a enotaninei i Enoxilului

asupra fungului F.oxysporum.
1, 2, 3, 4, 5, 6 enotanin n concentraiile 10-6, 10-5, 10-4, 10-3, 10-2, 10-1%;
7, 8, 9, 10, 11, 12 Enoxil n concentraiile 10-6, 10-5, 10-4, 10-3, 10-2, 10-1%; 13 martor,
respectiv.

63
211
8
1
13
94
7
10

12

Fig. 2.6. Scanarea multidimensional a concentraiilor de enotanin i Enoxil

n baza capacitii de reprimare a creterii fungului F.oxysporum.
1, 2, 3, 4, 5, 6 enotanin n concentraiile 10-6, 10-5, 10-4, 10-3, 10-2, 10-1%;
7, 8, 9, 10, 11, 12 Enoxil n concentraiile 10-6, 10-5, 10-4, 10-3, 10-2, 10-1%; 13 martor,
respectiv.
57

Tabelul 2.4. Matria distanelor euclidiente ntre variantele de enotanin i Enoxil (F.oxysporum)
Varianta 1
1

10

11

12

13

0,0

9,5 0,0

8,7

15,0

8,4

7,6 0,0

6,0

8,5

5,3 10,7 0,0

9,2

4,7

1,6

6,5

14,8

6,6

7,1

2,8 11,2

3,2

7,8

6,5 12,5

17,1

9,2

9,1

2,9 13,0

8,2

2,7 14,6 0,0

10

15,0

7,8

7,5

1,5 11,1

6,7

2,0 12,3

2,8 0,0

11

9,0

4,3

3,8

7,4

4,3

6,7

9,1

4,7 0,0

5,3 0,0
4,8

7,1

6,3 0,0
7,1 12,3 0,0

6,2

6,8 0,0

12

26,4 35,7 34,2 40,5 30,4 35,0 40,7 28,5 42,9 40,6 34,3 0,0

13

14,4

7,3

6,7

3,7 10,1

5,5

3,6 12,4

3,9

4,3

8,0 40,3 0,0

1, 2, 3, 4, 5, 6 enotanin n concentraiile 10-6, 10-5, 10-4, 10-3, 10-2, 10-1%;

7, 8, 9, 10, 11, 12 Enoxil n concentraiile 10-6, 10-5, 10-4, 10-3, 10-2, 10-1%; 13 martor,
respectiv.
Datele prezentate n tab.2.5, 2.6 relev c n intervalul de concentraii 10-610-1% de
enotanin diametrul coloniilor de F.solani a fost mai mic cu 2,0...20,4; 10,2...20,4; 4,2...13,1 i
10,9...16,4% dect martorul, respectiv, pentru zilele 3, 5, 7 i 10 de cretere.
Pentru Enoxil s-a constatat c n diapazonul de concentraii 10-610-1% diametrul
coliniilor a prezentat valori cu 3,3...44,9; 5,9...36,4; 4,2...39,8 i 4,8...50,2% mai mici dect
martorul, respectiv, pentru zilele 3, 5, 7 i 10 de la plasarea miceliului pe mediu [3].
De menionat, c enotanina a manifestat aciune mai pronunat de reprimare a creterii
tulpinii de F.solani n concentraia 10-3% (-20,4% fa de martor) n a 3-a zi de cretere, ns la
a 10-a zi diferen ntre concentraii, practic, nu s-a manifestat.
Spre deosebire de enotanin, Enoxilul a manifestat efect fungistatic asupra ciupercii
F.solani n concentraie mai nalt: 10-1%, ns puterea de reprimare a fost mult mai pronunat,
valorile diametrului coloniilor fiind mai mici cu 44,9; 36,4; 39,8 i 50,2% dect martorul, pentru
zilele 3, 5, 7 i 10 de testare [9].
58

Tabelul 2.5. Date comparative ale influenei enotaninei nemodificate i Enoxilului asupra
creterii ciupercii F.solani in vitro (a 3 i 5-a zi de cretere)
Varianta,
concentraia (%)
Enotanin, 10-6
Enotanin, 10-5
Enotanin, 10-4
Enotanin, 10-3
Enotanin, 10-2
Enotanin, 10-1
Enoxil, 10-6
Enoxil, 10-5
Enoxil, 10-4
Enoxil, 10-3
Enoxil, 10-2
Enoxil, 10-1
Martor (must-agar)

Diametrul coloniilor n a 3-a zi

de cretere
% fa de
xmx, mm
martor
22,70,6*
92,7
24,00,4
98,0
20,20,9*
82,4
19,50,6*
79,6
22,51,4
91,8
22,50,4
91,8
23,31,0
95,1
21,20,7*
86,5
22,30,8*
91,0
23,70,5
96,7
23,00,7
93,9
13,50,8*
55,1
24,50,9
100,0

Diametrul coloniilor n a 5-a zi

de cretere
xmx, mm
% fa de
martor
34,50,6*
87,8
35,30,5*
89,8
33,20,7*
84,5
31,30,8*
79,6
33,71,7*
85,8
35,21,4*
89,6
36,01,0*
91,6
33,51,4*
85,2
37,00,9*
94,1
36,71,0*
93,4
35,80,5*
91,1
25,01,5*
63,6
39,31,0
100,0

* suport statistic la nivelul p<0,05.

Tabelul 2.6. Date comparative ale influenei enotaninei nemodificate i Enoxilului asupra
creterii ciupercii F.solani in vitro (a 7 i 10-a zi de cretere)
Varianta,
concentraia (%)
Enotanin, 10-6
Enotanin, 10-5
Enotanin, 10-4
Enotanin, 10-3
Enotanin, 10-2
Enotanin, 10-1
Enoxil, 10-6
Enoxil, 10-5
Enoxil, 10-4
Enoxil, 10-3
Enoxil, 10-2
Enoxil, 10-1
Martor (must-agar)

Diametrul coloniilor n a 7-a zi

de cretere
xmx, mm
% fa de
martor
44,70,6*
88,9
48,20,9
95,8
45,81,4*
91,1
43,71,5*
86,9
45,81,6*
91,0
46,71,4*
92,8
45,51,4*
90,5
42,71,0*
84,9
48,20,9
95,8
48,20,2
95,8
45,70,3*
90,8
30,31,3*
60,2
50,31,3
100,0

* suport statistic la nivelul p<0,05.

59

Diametrul coloniilor n a 10-a zi

de cretere
xmx, mm
% fa de
martor
61,31,4*
83,6
64,70,6*
88,3
65,31,4*
89,1
61,52,2*
83,9
61,81,7*
84,3
62,32,8*
85,0
63,51,2*
86,6
58,51,0*
79,8
69,82,1*
95,2
68,20,6*
93,0
67,01,1*
91,4
36,52,2*
49,8
73,31,1
100,0

Astfel, concentraiile de enotanin au format cluster comun, ceea ce relev similitudinea

de aciune a substanei n diferite doze asupra creterii fungului. Totodat, concentraiile de
Enoxil s-au repartizat n diferite clustere, fapt determinat de reacia specific a patogenului la
concentraii diferite de Enoxil n mediu (Figura 2.7, 2.8) .
De menionat, c preparatul n concentraia 10-1% (varianta 12), care a prezentat cele mai
nalte valori ale gradului de reprimare a creterii coloniilor de F.solani pe durata testrii (10 zile)
a format un cluster separat, determinat de valori nalte ale distanelor euclidiene ntre toate
variantele aflate n studiu (tab.2.7), ceea ce demonstreaz c nivelul de eficien a Enoxilului n
concentraia 10-1% are superioritate avansat n comparaie cu alte concentraii de Enoxil sau
enotanin.
1
5
6
2
3
4
8
9
10
11
13
7
12
0

10

15

20

25

30

35

40

Distante euclidiene

Fig. 2.7. Analiza clusterian a similitudinii de aciune a enotaninei i Enoxilului asupra fungului
F.solani.
1, 2, 3, 4, 5, 6 enotanin n concentraiile 10-6, 10-5, 10-4, 10-3, 10-2, 10-1%;
7, 8, 9, 10, 11, 12 Enoxil n concentraiile 10-6, 10-5, 10-4, 10-3, 10-2, 10-1%, 13 martor,
respectiv.
7

12
13

2 651 8
10
9 11
3 4

Fig. 2.8. Scanarea multidimensional a concentraiilor de enotanin i Enoxil

n baza capacitii de reprimare a creterii fungului F.solani.
1, 2, 3, 4, 5, 6 enotanin n concentraiile 10-6, 10-5, 10-4, 10-3, 10-2, 10-1%;
7, 8, 9, 10, 11, 12 Enoxil n concentraiile 10-6, 10-5, 10-4, 10-3, 10-2, 10-1%, 13 martor,
respectiv.
60

Tabelul 2.7. Matria distanelor euclidiente ntre variantele de enotanin i Enoxil (F.solani)
Varianta 1
1
0,0

10

5,1 0,0

5,0

5,0 0,0

4,6

8,2

4,8 0,0

1,5

4,4

4,2

4,4 0,0

2,4

3,2

4,4

5,8

11,0

3,9

8,9

7,5

4,2

4,7

5,9 13,6 0,0

9,5

5,6

6,7 11,4

9,0

7,9 13,0 13,1 0,0

10

8,1

3,8

6,2 10,6

7,6

6,4 11,0 11,9

2,1 0,0

11

5,9

3,6

4,2

5,6

4,9 10,9

4,0

11

12

13

1,8 0,0

9,8 13,5 14,8 11,2 11,0 0,0

8,2

9,5

3,0 0,0

12

31,6 36,5 34,4 29,7 32,2 33,5 38,4 27,7 40,6 39,6 37,1 0,0

13

14,2

9,7 11,8 16,5 13,7 12,4 14,4 17,9

5,2

6,1

8,7 45,6 0,0

1, 2, 3, 4, 5, 6 enotanin n concentraiile 10-6, 10-5, 10-4, 10-3, 10-2, 10-1%, respectiv;

7, 8, 9, 10, 11, 12 Enoxil n concentraiile 10-6, 10-5, 10-4, 10-3, 10-2, 10-1%, 13 martor,
respectiv.

2.3.3. Analiza corelaional i regresional a stabilitii fungitoxice a compusului Enoxil

Sub aspect practic are importan determinarea gradului de stabilitate a eficienei
preparatului. Prin analiz corelaional s-a constatat c n ceea ce privete enotanina, n-au existat
corelaii semnificative, cu suport statistic, pentru datele diametrului coloniilor de F.oxysporum
pe durata testrii. n cazul F.solani, a existat corelaie nalt (r=0,90*) ntre valorile diametrului
coloniilor n a 3-a i a 5-a zi de cretere, dup care a diminuat la ziua a 7-a i disprut, practic,
complet la ziua a 10-a (tab.2.10, 2.11). n ceea ce privete Enoxilul, s-au manifestat dependene
nalte, cu suport statistic (r=0,910,93*) ntre cele 4 zile de testare n cazul F.oxysporum
(tab.2.8, 2.9), i ntre zilele 5, 7 i 10 (r=0,991,00*) n cazul ciupercii F.solani (tab.2.10, 2.11).
Datele obinute relev c, comparativ, cu enotanina, concentraiile de Enoxil au
manifestat, practic, aceeai putere de aciune pe durata testrii. Aceasta, pe de o parte, denot
capacitatea stabil a Enoxilului de reprimare a creterii fungilor Fusarium pe durata menionat,

61

pe de alt parte, exclude necesitatea obligatorie de testare a preparatelor n zilele 7 i 10, ceea ce
conduce la reducerea considerabil a volumului de lucru.

Tabelul 2.8. Analiza corelaional a eficienei enotaninei asupra fungului F.oxysporum

la diferite zile de testare
Ziua

3-a

3-a
5-a
7-a
10-a

5-a
1,00
0,49
-0,07
-0,22

7-a
1,00
0,67
0,51

10-a

1,00
0,78

1,00

Tabelul 2.9. Analiza corelaional a eficienei Enoxilului asupra fungului F.oxysporum

la diferite zile de testare
Ziua

3-a

3-a
5-a
7-a
10-a

5-a
1,00
0,93*
0,93*
0,91*

7-a
1,00
0,98*
0,97*

10-a

1,00
0,99*

1,00

* deosebire cu suport statistic la nivelul p0,05.

Tabelul 2.10. Analiza corelaional a eficienei enotaninei asupra fungului F.solani
la diferite zile de testare
Ziua

3-a

5-a

7-a

3-a
1,00
5-a
0,90*
1,00
7-a
0,73
0,80
10-a
0,05
0,23
* deosebire cu suport statistic la nivelul p0,05.

10-a

1,00
0,63

1,00

Tabelul 2.11. Analiza corelaional a eficienei Enoxilului asupra fungului F.solani

la diferite zile de testare
Ziua
3-a
5-a
7-a
10-a

3-a

5-a
1,00
0,74
0,69
0,66

7-a
1,00
1,00*
0,99*

* deosebire cu suport statistic la nivelul p0,05.

62

10-a

1,00
0,99*

1,00

Prin analiz regresional, s-a constatat c ecuaia dependenei diametrului coloniilor ntre
ziua a 10-a (y) i a 3-a (x) de testare pentru F.oxysporum este y = -9,4285+2,1175 x (p<0,05)
(Figura 2.9), iar ntre ziua a 10-a (y) i a 5-a (x) pentru F.solani y = -31,3737+2,7046 x
(p<0,05) (Figura 2.10). Astfel, utiliznd aceste ecuaii se poate uor calcula diametrul coloniilor
de Fusarium pentru ziua a 10-a sub aciunea Enoxilului, n baza datelor obinute n ziua a 3-a
pentru F.oxysporum i a 5-a pentru F.solani.
y = -9,4285+2,1175*x; 0,95 Conf.Int.
Diametrul coloniei la a 10-a zi

42
40
38
36
34
32
30
28
26
18

19

20

21

22

23

24

Diam etrul coloniei la a 3-a zi

Fig. 2.9. Analiza regresional a dependenei diametrului coloniilor

de F.oxysporum sub aciunea Enoxilului la diferite zile de testare.
y = -31,3737+2,7046*x; 0,95 Conf.Int.
Diametrul coloniilor la a 5-a zi

75
70
65
60
55
50
45
40
35
24

26

28

30

32

34

36

38

Diam etrul coloniilor la a 10-a zi

Fig. 2.10. Analiza regresional a dependenei diametrului coloniilor

de F.solani sub aciunea Enoxilului la diferite zile de testare.

63

2.4. Concluzii la capitolul 2

1. Problem tiinific soluionat n acest capitol a constat n elaborarea unui preparat
autohton de origine taninic Enoxil, cu nalte activiti antioxidante i antifungice.
2. Tehnologia de obinere a preparatului Enoxil cu pronunate proprieti antioxidante i
antimicrobiene se bazeaz pe elaborarea unui sistem-cadru de interaciuni ale factorilor de
diferit origine: biologic materie prim (enotaninuri), fizic temperatur (70...100C),
chimic peroxid de hidrogen. Procesele chimice i fizico-chimice declanate, au determinat
depolimerizarea compusului polimeric iniial ntr-un complex catechinic format, n special, din
structuri monomerice esterificate, cu capacitate nalt de captare a radicalilor liberi, conferind,
astfel, compusului obinut activitate antioxidant.
3. n condiii in vitro s-a constatat c enotanina modificat chimic (Enoxil) pentru fungii
oportuniti i, totodat, ageni patogeni ai hialohifomicozelor

F.oxysporum

i F.solani

manifest aciune antifungic, mai pronunat fiind n concentraia 10-1%, ceea ce ofer anse de
utilizare a acesteia la tratarea posibilelor hialohifomicoze provocate de patogen.
4. Prin analiz corelaional a fost relevat o dependen pronunat a reaciei fungilor la
Enoxil, ntre primele i ultimele zile de testare, ceea ce relev capacitatea stabil de inhibiie a
creterii fungilor pe durata menionat de ctre preparat. Aceasta determin lipsa de necesitate a
aprecierii efectelor preparatelor n zilele 7 i 10 i, deci, reducerea considerabil a volumului de
lucru. Analiza regresional a pus n eviden ecuaiile matematice ale dependenelor diametrului
coloniilor de ciuperci F.oxysporum i F.solani ntre primele i ultimele zile de testare.
5. Analiza clusterian i scanarea multidimensioanl au demonstrat particularitile de
distribuire a diverselor concentraii de Enoxil i enotanin, funcie de capacitatea de reprimare a
creterii tulpinii de F.oxysporum n condiii in vitro. S-a constatat, c Enoxilul, n concentraia
10-1% formeaz cluster separat de alte concentraii ale preparatelor testate, ceea ce denot c
nivelul de eficien a variantei respective nu este manifestat de o alt concentraie de Enoxil sau
enotanin, adic are superioritate avansat n comparaie cu alte concentraii ale preparatelor
cercetate.

64

3. ACTIVITATEA ANTIMICROBIAN A PREPARATULUI ENOXIL PENTRU

UNII AGENI INFECIOI AI DIFERITELOR TIPURI DE PLGI
3.1. Materiale i locul efecturii cercetrilor
Cercetrile au fost efectuate la Catedra de Microbiologie, Imunologie i Virusologie a
Universiti de Stat de Medicin i Farmacie Nicolae Testemianu, n anii 2006-2009.
n calitate de material pentru cercetare au servit tulpini de microorganisme cu implicare
sever n multe boli infecioase bacteriile gram-pozitive Staphylococcus aureus, gramnegative Escherichia coli,Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris,

fungul Candida

albicans. Culturile de microorganisme utilizate au prezentat att tulpini izolate de la pacieni ai

Seciei de Combustiologie a Spitalului Traumatologic Republican (P.aeruginosa), ct i tulpini
de referin ale Catedrei de Microbiologie, Imunologie i Virusologie a USMF Nicolae
Testemianu: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922,
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Proteus vulgaris ATCC 6896 , Candida albicans
885.
n experiene s-au utilizat mediile de cultur geloz peptonat, bulion peptonat, geloz
Sabouraud, geloz Miuller-Hinton, bulion Sabouraud i soluia fosfat-tampon.
Vesela de lucru spalat i cltit cu ap distilat, s-a sterilizat n dulapul de uscare la
temperatura 180oC.

3.2. Pregtirea inoculului bacterian i fungic

Un volum de 1 ml de soluie fosfat tampon se transfer cu pipeta n eprubeta cu geloz
nclinat ce conine

cultur bacterian, dup care

aceasta se agit, astfel obinndu-se o

suspensie bacterian de turbiditate nalt.

Suspensia

obinut se transfer

n eprubeta ce conine

8 ml de soluie tampon.

Coninutul nou obinut se agit bine cu pipeta, apoi se compar cu standardul de turbiditate
pentru bacterii 109 microorganisme, acceptat pentru efectuarea experienei. n caz dac soluia
obinut este mai concentrat

dect standardul, aceasta se dilueaz suplimentar cu soluie

tampon pn ce densitatea culturii bacteriene din eprubet

devine similar cu densitatea

standardului i, dimpotriv, dac suspensia bacterian obinut are concentraie mai mic dect
standardul, atunci la aceasta se suplimenteaz cultur de bacterie pn la nivelul standardului.

65

Dac cultura obinut corespunde standardului de turbiditate acceptat pentru testare,

atunci se face diluia acesteia: se ia cte 1 ml de suspensie cu pipeta steril i se transfer n
eprubeta nr.1 a rndului de 5 eprubete care conin cte 9 ml de soluie tampon necesare pentru
titrarea culturii. Cu alt pipet steril se amestec bine soluia nou obinut prin metoda de
pipetare i se transfer cte 1 ml n urmtoarea eprubet. Aceeai procedur se repet pn la
eprubeta nr.5. Aplicnd aceast metod, concentraia bacterian scade de la 109 pn la 105.
Eprubeta cu diluia bacterian 105 a servit pentru nsmnare n eprubetele cu diluii ale
preparatului antimicrobian studiat. Astfel se asigur un inocul de 105 UFC/ml.
Pregtirea standardului de turbiditate pentru fungi se realizeaz ca i n cazul bacteriilor.
Diluia culturii se face pn la nivelul 104, dup care doza de nsmnare se aplic n eprubetele
cu diverse diluii ale preparatului testat Enoxilului.
3.3. Titrarea preparatului prin metoda diluiilor duble n serie
Testrile preliminare ale activiti antimicrobiene a preparatelor taninice se efectuiaz n
baza extractelor n diveri solveni: etanol [35], ap [164], aceton [46], metanol [125], petrol
[46, 125].
Dup cum se tie, concentraia minim de inhibiie (CMI) a microorganismelor pentru
preparatele/substanele testate reprezint un indiciu relevant al activitii biologie a acestora [46,
208]. Totodat, sub aspect practic este important stabilirea concentraiei minime bactericide
(CMB). Determinarea CMI i CMB se efectueaz n condiii optime de cretere i dezvoltare
pentru microorganism.
Iniial s-a efectuat titrarea preparatului prin metoda diluiilor duble n serie. Pentru
aceasta, n condiii aseptice, la flacra spirtierei, la 1 ml de bulion peptonat s-a adugat 1 ml de
Enoxil de 5%. Prin agitarea amestecului cu ajutorul pipetei s-a format o soluie omogen, dup
care 1 ml de amestec a fost suplimentat la 1 ml de bulion. Procedura iniial a fost repetat de 9
ori pn cnd ultima diluie a prezentat concentraia Enoxilului de 0,008%.
n fiecare eprubet cu diluii diferite ale preparatului i n eprubeta de control (bulion
peptonat fr preparat) s-au picurat cte 0,1 ml (2 picturi) de suspensie de bacterii (doza de
nsmnare) din eprubeta cu diluia 105.
Incubarea s-a efectuat la 37oC n termostat pn la constatarea creterii bacteriene n
varianta martor.
Concentraia preparatului la care nu se observ o cretere vizibil a bacteriilor
(coninutul eprubetei rmne transparent) se consider a fi CMI a Enoxilului.
66

Pentru determinarea CMB, pe geloz peptonat, n cutii Petri s-a nsmnat coninutul
eprubetei cu CMI, ct i al eprubetei care precedeaz cea cu CMI, n care concentraia
preparatului este mai nalt. CMI poate fi CMB. Ca martor al creterii culturii a servit
coninutul eprubetei cu o concentraie mai mic de preparat dect coninutul eprubetei ce
reprezint CMI. Ultima diluie a preparatului care nu prezint creterea nici a unei singure
colonii de bacterie, poate fi considerat ca CMB a preparatului.
Pentru aprecierea activitii antifungice diluia preparatului s-a efectuat n bulionul
Sabouraud, iar stabilirea CMI

ca i n cazul bacteriilor. Pentru determinarea concentraiei

minime fungicide CMF, n cutii Petri cu geloz Sabouraud se nsmneaz coninutul

eprubetei cu CMI, precum i al eprubetei care precedeaz cea cu CMI, la care concentraia
preparatului a fost mai nalt. CMI poate fi CMF.

3.4. Analiza de microscopie electronic a bacteriilor E.coli i S.aureus

Aspectul morfologic integral i al peretelui celular, n particular, al bacteriilor E.coli i
S.aureus tratate cu concentraie bactericid de Enoxil (0,3%) au fost examinate n cultur de
suspensie la microscopul electronic Vega Tescan TS 513OMM.
Fixarea probelor pentru microscopia electronic cu baleaj a inclus urmtoarele etape:
1.Fixarea n glutaraldehid de 2% n soluie tampon de cacodilat de sodiu, la rece.
2.Splarea materialului n soluie tampon de cacodilat de sodiu de 0,1 M de 2 ori a cte
10 min.
3.Fixarea n OsO4 de 2%, timp de 1 or.
4.Splarea materialului n soluie tampon de 3 ori, a cte 10 min.
5.Dehidratarea n alcool de 50, 60, 70 cu suplimentare de uranilacetat de 80, 90 a cte
10 min, apoi de 2 ori n propilenoxid a cte 5 min.
6.Uscarea materialului n Silicagel.
7.Metalizarea cu Cu.
8.Examinarea vizual.

3.5. Testarea aciunii preparatului Enoxil asupra bacteriilor

biochimic

P.aeruginosa la nivel

n calitate de indici ai aciunii Enoxilului asupra bacteriilor P.aeruginosa au fost utilizai

un ir de parametri biochimici indicatori ai viabilitii i patogenitii bacteriene: sinteza
67

citocromoxidazei, citratreductazei, hemolizinelor, piocianinei, prezena mirosului, iar n calitate

de indice al sensibilitii la antibiotice zona de inhibiie (mm) a culturii, specific fiecrui
antibiotic, conform standardului.
Sensibilitatea

bacteriilor P.aeruginosa a fost determinat prin metoda difuziei

antibioticelor n geloz din rondele care au coninut urmtoarele antibiotice omologate n

Republica Moldova: cloramfenicol (30mkg), pefloxacilin (5 mkg), eritromicin (15 mkg),
cefuroxim (30 mkg), cefoxitin (30 mkg), cefalotin (30 mkg), piperacilin (30 mkg), imipenem
(10 mkg), ciprofloxacin (5 mkg), tobramicin (10 mkg), gentamicin (10 mkg), tetraciclin (30
mkg). Pentru testare, s-a utilizat mediul de cultur standardizat Miuller-Hinton. Cutiile cu
bacterii i antibiotice au fost meninute la temperatura 37C, timp de 24 ore, dup care s-a citit
rezultatul antibioticogramei.

3.6. Determinarea concentraiilor minime inhibitorii i bactericide/fungicide ale Enoxilului

Conform datelor din literatur, valorile concentraiei minime inhibitorii (CMI) sunt relevante
pentru stabilirea gradului de activitate a preparatelor testate [43, 170]. Prin cercetarea aciunii
preparatului Enoxil asupra bacteriilor E.coli, S.aureus, P.vulgaris, P.aeruginosa i fungului
C.albicans au fost puse n eviden CMI (Figura 3.1 A) i concentraia minim
bactericid/fungicid (CMB/CMF) (Figura 3.1 B). Aceti parametri au importan n perspectiva
elaborrii preparatelor medicamentoase cu spectru antimicrobian larg [138].
%

0,35

0,7

0,30

0,6

0,25

0,5

0,20

0,4
0,3

0,15
1
2
3
4
5

0,10
0,05

1
2
3
4
5

0,2
0,1
0,0

0,00

Fig. 3.1. Concentraia minim de inhibiie (A) i minim bactericid/fungicid (B) a

Enoxilului pentru unele microorganisme.
Pe vertical: 1 E.coli, 2 S.aureus, 3 P.vulgaris, 4 P.aeruginosa, 5 C.albicans.
68

Din datele prezentate se vede c Enoxilul prezint proprieti att antibacteriene, ct i

antifungice la concentraii relativ joase. Concentraia minim de inhibiie a Enoxilului pentru
bacteriile testate se manifest n limitele 0,15-0,3%, iar cea bactericid n limitele 0,3-0,6%.
Pentru fungul C.albicans concentraia minim de inhibiie este de 0,3%, iar cea fungicid de
0,6%. Valorile CMI i CMB/CMF pentru microorganismele aflate n studiu au prezentat
diferene de un ordin, cu excepia bacteriei E.coli, pentru care aceti indici au coincis.
Prin analiz corelaional s-a constatat c gradul de dependen (r) ntre CMI i
CMB/CMF este semnificativ i pozitiv, egal fiind cu 0,66. Analiza regresional (Figura 3.2) care
are valoare predictiv i prezint relaia matematic a dependenei a demonstrat c ecuaia
acesteia este urmtoarea: y=0,0923+0,3385 x (p0,05).

y = 0,0923+0,3385*x; 0,95 Conf.Int.

0,32
0,30
0,28
0,26
0,24
0,22

CMB/CMF

0,20
0,18
0,16
0,14
0,12

0,25 0,30 0,35 0,40 0,45 0,50 0,55 0,60 0,65

C MI

Fig. 3.2. Analiza regresional a dependenei ntre CMI i CMB/CMF n cadrul aciunii
compusului Enoxil asupra bacteriilor i fungilor (S.abony, S.aureus, P.vulgaris, P.aeruginosa,
C.albicans).
Astfel, uor se poate calcula CMB/CMF n baza CMI.
3.7. Determinarea timpului eficient de aciune a Enoxilului, n concentraie bactericid
Stabilirea timpului de aciune a Enoxilului n concentraie bactericid

are mare

importan practic. n scopul dat, asupra culturilor de E.coli i S.aureus, aflate n faza de
multiplicare exponenial (peste 8 ore de la nsmnare) s-a adugat Enoxil n raportul 9,7 ml de
bulion peptonat: 0,3 ml de Enoxil 10%, dup care la intervale de 1, 2, 3, 4 i 5 ore s-au efectuat
nsmnri ale culturilor pe mediul-geloz peptonat. Aprecierea efectelor aciunii preparatului
Enoxil a demonstrat diferene mari ntre variante (Figura 3.3). Astfel, s-a constatat c pentru
E.coli, pe durata de aciune a Enoxilului 1, 2, 3 ore, creterea bacteriei era tot mai slab, dup 4
69

i 5 ore semnele de cretere nefiind constatate, ceea ce denot c cultura era neviabil, adic timp
de 4 ore Enoxilul exercit un efect bactericid puternic.
Pentru S.aureus s-a constatat aceeai tendin, ns efectul Enoxilului era, totui, mai
diminuat dect n cazul E.coli, ntruct gradul de cretere a bacteriei era mai avansat dup 2 i 3
ore de aciune a preparatului. Totui, dup 5 ore S.aureus n-a prezentat viabilitate (tab.3.1).
Pentru calculul statistic, s-a procedat la elaborarea gradaiei de cretere n limitele 0...4,
adic 0 lipsa creterii, 1 (+), 2 (++), 3 (+ + +), 4 (+ + + +), gradaia 4 fiind nivelul maxim de
cretere. n modelul matematic n-a fost inclus indicele de cretere a bacteriei testate n variantamartor.

2
D

Fig. 3.3. Aspectul culturi E.coli n varianta martor (1) i la aciunea Enoxilului (2).
A peste 1 or; B 2 ore;
C 3 ore; D 4 ore de aciune a Enoxilului (0,3%).
70

Tabelul 3.1. Inhibiia creterii tulpinilor de bacterii E.coli i S.aureus n dependen de durata
de aciune a preparatului Enoxil
E.coli

S.aureus

Gradul de cretere

Martor

Gradul de cretere

++++

Martor

++++

1 or

+++

1 or

+++

2 ore

++

2 ore

+++

3 ore

3 ore

++

4 ore

4 ore

5 ore

5 ore

Prin analiz corelaional, s-a constatat c dependena ntre sensibilitatea la durata de

aciune pentru E.coli i S.aureus este semnificativ i pozitiv: r=0,91.
Ecuaia regresional a dependenei este: y=0,7059+0,9118* x, la nivelul de confiden
p0,05, n care y prezint capacitatea de cretere a bacteriei S.aureus, corelat cu x capacitatea
de cretere a bacteriei E.coli peste n ore de aciune a Enoxilului (Figura 3.4).

y = 0,7059+0,9118*x; 0,95 Conf.Int.

3,5
3,0
2,5
2,0
1,5
1,0

S.aureus

0,5
0,0
-0,5
-0,5

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

3,0

3,5

E.coli

Fig. 3.4. Analiza regresional a relaiilor ntre reacia E.coli i S.aureus la durata de aciune a
Enoxilului.

Astfel, cercetrile efectuate, prin stabilirea dependenelor corelaionale i regresionale

ntre reacia bacteriilor S.aureus i E.coli la aciunea Enoxilului pe durata de timp 1...5 ore,
prezint o importan predictiv, ntruct pot fi exluse testrile suplimentare pentru una dintre
aceste specii.
71

3.8. Microscopia electronic a celulelor bacteriene de E.coli i S.aureus, tratate cu

Enoxil
n biologia contemporan, microscopia electronic este implicat n cercetarea analizei
ultrastructurale i morfologice n virusologie i microbiologie, n studii ale medicinei moleculare
i patogenezei microbiene [233]. Metoda de microscopie electronic prezint un potenial
considerabil pentru mai multe obiective tiinifico-practice izolarea selectiv i analiza spaial
a microorganismelor in situ [139], investigarea reteniei bacteriilor pe membranele poroase
[128], numrarea electronic a sporilor de Bacillus subtilis n timpul procesului de germinare,
precum i determinarea dimensiunilor celulelor n cretere [171].
n cercetrile noastre, preparatele au fost examinate la microscopul electronic SEM MAG
la tensiune accelerat de 20 kv i mrirea de 32000x. Prin analiz de microscopie electronic s-a
urmrit stabilirea efectului concentraiei bactericide (0,3%) de Enoxil asupra morfologiei
celulelor bacteriene, modificrilor citoplasmatice i, n particular, asupra peretelui celular care
are rol de barier pentru diferii factori nocivi, inclusiv, pentru antibiotice (Figura 3.5).

Fig. 3.5. Aspectul bacililor de E.coli n varianta martor (A, B) i cu Enoxil 0,3% (C, D).

Dup cum se vede din Figura 3.5 (A, C), sub aciunea preparatului Enoxil s-au produs
blocarea procesului de multiplicare a celulelor bacteriene de E.coli i destabilizri ale peretelui
celular. Totodat, au aprut sectoare de citoplasm cu densitate electronic joas, vizualizate n
form de fulgi (Figura 3.5 B, D).
Asemenea procese distructive constatate n cazul sistemului Lactobacillus fermentum
E.coli au condus la pieirea celulelor bacteriene-int [29]. Conform acelorai autori, incluziunile
mari amorfe cu densitate electronic moderat, fr granie bine definite, pot fi constatate n caz
de hiperproducie proteic sub aciunea agenilor stres-inducibili care poate conduce la
dereglarea balanei proteice normale i formarea de novo a peptizilor. n cazul nostru, sectoarele
72

de citoplasm lipsite de organele celulare, cu coninut n form de fulgi ar putea fi considerate ca

un efect citopatic al Enoxilului asupra celulelor bacteriene.
Calculul statistic a demonstrat c n varianta martor (1) toate celulele au avut aspect de
bacili tipici (100,00,0%), pe cnd n varianta cu Enoxil frecvena acestor bacili

a constituit

doar 19,12,8%, iar cu multiplicare inhibat 81,12,7%, respectiv (Figura 3.6).

n ceea ce privete cultura de S.aureus, s-a constatat c sub aciunea Enoxilului n
concentraia bactericid de 0,3% s-a mrit numrul de celule cu modificri morfo-structurale
(forme neregulate ale celulelor, contururi neclare, suprafee mate) (Figura 3.7).
%
110
100
90
80
70
60
50
40
30

20

xmx
x

10
1

Fig. 3.6. Influena preparatului Enoxil asupra multiplicrii bacililor de E.coli.

1 rata bacililor tipici n varianta martor, 2 rata bacililor tipici n varianta cu Enoxil
(0,3%), 3 rata bacililor cu multiplicare inhibat n varianta cu Enoxil (0,3%).

Fig. 3.7. Cultur de S.aureus n varianta martor (A) i la tratarea cu Enoxil 0,3% (B).
73

Astfel, dac n varianta martor toate celulele au prezentat suprafa neted a peretelui
celular, iar frecvena cocilor cu modificri morfo-structurale a fost la nivel de 7,51,1%, n
varianta cu Enoxil, frecvena acestora a constituit 87,42,3% (Figura 3.8).
Modificrile atestate la speciile E.coli i S.aureus ar putea fi explicate prin mrirea
permeabilitii peretelui celular bacterian cu ulterioara inhibiie a aparatului enzimatic, ceea ce n
final conduce la blocarea procesului de diviziune celular.
%
100
90
80
70
60
50
40
30
20
x
xmx

10
0

Fig. 3.8. Influena preparatului Enoxil asupra caracterelor morfologice ale cocilor de
S.aureus.
1 martor, 2 Enoxil (0,3%).

Date obinute cu privire la aciunea Enoxilului asupra peretelui celular bacterian sunt n
concordan cu unele date din literatur. Astfel, conform autorilor Smith,

Mackie [204],

activitatea antimicrobian a taninurilor se datoreaz inhibiiei selective a sintezei peretelui

celular. Pe exemplul taninurilor condensate din Onobrychis viciifolia, s-a constatat c acestea
produc blocarea dezvoltrii celulelor

bacteriilor intestinale. Totodat, de rnd cu inhibiia

creterii i activitii proteazice, au loc i schimbri morfologice ale peretelui celular.

3.9. Aciunea preparatului Enoxil asupra unor indici biochimici i funcionali ai tulpinilor
de bacterii P.aeruginosa
Conform datelor din literatur, citratreductaza reduce citratul din mediul Simmons. n
caz dac enzima este activ, se produce alcalinizarea i ca urmare are loc schimbarea culorii
mediului n albastru (n prezena indicatorului bromtimol albastru). Sub aciunea hemolizinelor
pe mediul agar-snge n jurul coloniilor de Pseudomonas se formeaz zone de hemoliz.
Piocianina confer mediului de cultivare o culoare verde-albstruie, iar mirosul culturii este de
iasomie. Activitatea oxidazelor se determin prin testul la citocromoxidaz [26, 133, 197].
74

n urma testrilor experimentale, s-a constatat c concentraia static a Enoxilului pentru

P.aeruginosa

este 0,2%. Cercetarea influenei preparatului n aceast concentraie asupra

bacteriilor a pus n eviden schimbri semnificative ale unor indici biochimici i funcionali.
Sub aciunea Enoxilului s-a produs reprimarea activitii unor asemenea enzime importante
pentru vitalitatea i manifestarea nsuirilor patogenice ale bacteriilor, precum ar fi oxidazele,
citratreductazele i hemolizinele. Totodat, tulpinile de bacterii tratate cu Enoxil nu au produs
piocianin i nu au prezentat miros specific (tab.3.2, Figura 3.9).

Tabelul 3.2. Influena concentraiei statice de Enoxil asupra unor indici biochimici i
funcionali ai tulpinilor de bacterii P.aeruginosa
Indicatorul

Martor (+/)

Enoxil (+/)

Oxidaze

Citratreductaze

Hemolizine

Piocianin

Miros

Mobilitate

2
B

Fig. 3.9. Modificarea pigmentogenezei (A) i activitii enzimei citratreductaza (B) la tulpinile
de P.aeruginosa, tratate cu Enoxil n concentraie static.
1 martor, 2 tratare cu Enoxil.
n aceste condiii, prezena mobilitii la bacteriile testate relev viabilitatea acestora.
Deci, concentraia static de Enoxil produce mari perturbri la nivel biochimic n celulele
75

bacteriene ceea ce, probabil, diminueaz considerabil capacitatea acestora de descompunere a

substraturilor i de manifestare patogenic.
3.10. Influena concentraiei statice de Enoxil asupra rezistenei tulpinilor de P.aeruginosa
la antibiotice
Antibioticele prezint msurile terapeutice de baz n infeciile bacteriene. Totui,
variabilitatea genetic nalt a bacteriilor face ca antibioticele adesea s fie incapabile de a
prezenta eficien pentru multe tulpini din cauz apariiei fenomenului de rezisten. Aceast
stare de lucruri impune necesitatea gsirii noilor antibiotice sau a preparatelor care menin
sensibilitatea bacterian la medicamente [190]. n legtur cu aceasta, ne-am propus drept scop
stabilirea influenei concentraiei statice de Enoxil (0,2%) asupra sensibilitii unor tulpini clinice
de P.aeruginosa la antibiotice omologate n Republica Moldova. Experiena s-a efectuat asupra
4 tulpini bacteriene de P.aeruginosa.
Literatura de specialitate relev, c testarea activitii antibiotice prin metoda difuziei n
agar, bazat pe plasarea rondelelor cu antibiotice n mediu Muller-Hinton cu cultur bacterian
prezint un procedeu sigur, rapid i eficient [157, 190].
n scopul elaborrii strategiei de tratament al afeciunilor bacteriene prin aplicarea
Enoxilului sunt importante studiile comparative ale sensibilitii

culturilor-martor de

P.aeruginosa i a celor tratate cu Enoxil la aciunea antibioticelor omologate, n concentraii

eficiente.
Datele prezentate n tab.3.3, Figura 3.10 (1-4) relev c tratarea culturilor bacteriene cu
Enoxil a sporit sensibilitatea (S) la majoritatea antibioticelor aflate n studiu, rezistena (R) fiind
manifestat doar pentru eritromicin i cefalotin. Pentru tetraciclin s-a constatat o reacie de
sensibilitate medie (RS). Dac n varianta martor, doar pentru pefloxacilin i imipenem culturile
au manifestat sensibilitate, atunci n varianta cu Enoxil sensibilitatea s-a manifestat pentru
majoritatea antibioticelor, excepie prezentnd doar eritromicina i cefalotina, pentru care
tulpinile au pstrat rezisten. De menionat, c preparatul a indus sensibilitate bacteriei pentru
unele antibiotice, considerate inactive pentru P.aeruginosa, de exemplu, cefoxitin.
Analiza clusterian prin metoda construirii dendrogramelor n baza algoritmului UPGMA a
demonstrat c antibioticele testate n baza aciunii asupra tulpinilor de P.aeruginosa, tratate cu
Enoxil, s-au repartizat n 3 clustere mari, ceea ce relev existena deosebirilor pronunate a
acestora (Figura 3.11).

76

Preparatul cefalotina (6), pentru care tulpinile au manifestat cea mai mare rezisten (zona de
inhibiie: 0,0 mm) a prezentat un cluster separat. Celelalte antibiotice au format clustere i
subclustere care relev diferit grad de similitudine.

Tabelul 3.3. Influena concentraiei statice de Enoxil asupra sensibilitii culturilor clinice de
P.aeruginosa la unele antibiotice
Nr.

Antibiotic

Culturi netratate (martor), n=4

Zon de inhibiie,

Culturi tratate, n=4

Reacie

Zon de inhibiie,

mm
1

Cloramfenicol

Reacie

mm
0,0

26,00,6*

Pefloxacilin

14,00,6

26,30,3*

Eritromicin

0,0

13,00,6*

Cefuroxim

0,0

20,01,2*

Cefoxitin

0,0

22,00,6*

Cefalotin

0,0

0,0

Piperacilin

0,0

20,01,2*

Imipenem

30,01,2

29,31,5

Ciprofloxacin

0,0

24,00,6*

10

Tobramicin

0,0

17,01,2*

11

Gentamicin

0,0

16,00,6*

12

Tetraciclin

0,0

19,00,7*

R-S

* deosebire de martor (culturi netratate) cu suport statistic la nivelul p0,05.

De exemplu, cloramfenicolul (1) i pefloxacilina (2) care au prezentat zone de inhibiie,

practic, egale au format un subcluster mic (nivel de agregare mic), iar

imipenem (8) i

tetraciclin (12), marcate de zone de inhibiie diferite s-au repartizat ntr-un cluster cu nivel de
agregare mare.
Spre deosebire de metoda construirii dendrogramelor, care este o metod aglomerativiteraional i efectueaz clasificarea obiectelor (antibioticelor) n baza diferitelor nivele de
agregare, metoda k-medii de analiz clusterian, neiteraional clasific obiectele n clustere n
baza posibilelor efecte: mici, medii, mari .a. [28]. Astfel, metoda k-mediilor efectund
77

clasificarea n baza numrului de clustere determinate de experimentator prezint oportuniti de

nalt precizie (Figura 3.12).

Fig. 3.10. Aspectul zonelor de inhibiie pentru P.aeruginosa n jurul rondelelor

cu diverse antibiotice (mediu Muller-Hinton).
Pe orizontal: 1, 3 martor; 2, 4 tratate cu Enoxil (0,2%).

n cutii: 1 cloramfenicol, 2 pefloxacilin, 3 eritromicin, 4 cefuroxim, 5 cefoxitin, 6

cefalotin, 7 piperacilin, 8 imipenem, 9 ciprofloxacin, 10 tobramicin, 11 gentamicin,
12 tetraciclin.

78

1
2
9
8
3
10
11
4
7
12
5
6
0

10

15

20

25

30

35

40

Distante euclidiene

Fig. 3.11. Analiza clusterian a antibioticelor n baza capacitii de reprimare a tulpinilor de

P.aeruginosa tratate cu Enoxil (0,2%).
1 cloramfenicol, 2 pefloxacilin, 3 eritromicin, 4 cefuroxim, 5 cefoxitin, 6
cefalotin, 7 piperacilin, 8 imipenem, 9 ciprofloxacin, 10 tobramicin, 11 gentamicin,
12 tetraciclin.

mm
35
30
25
20
15
10
5
0

1
2
3

-5
-10

Repetitii

Fig. 3.12. Analiza clusterian (metoda k-medii) a repartiiei antibioticelor n baza capacitii de
reprimare a P.aeruginosa tratate cu Enoxil (0,2%).
Pe vertical n dreapta: 1, 2, 3 clustere.
79

Prin examinarea membrilor celor 3 clustere s-a constatat c clusterul 1 a fost format doar
de cefalotin, pentru care tulpinile de P.aeruginosa au manifestat cea mai nalt rezisten, fapt
confirmat i de analiza dendrogramei de repartiie. Clusterul 2 n care s-au repartizat antibioticele
eritromicina, cefuroxim, piperaciclina, tobramicina, gentamicina, tetraciclina se caracterizeaz
prin capacitea acestora de producere a reaciei de sensibilitate medie, iar clusterul 3
antibioticele cloramfenicol, pefloxacilin, cefoxitin, imipenem, ciprofloxacin a reaciei de
sensibilitate puternic (tab.3.4).
Tabelul 3.4. Analiza k-medii a antibioticelor pentru care tulpinile de P.aeruginosa tratate cu
Enoxil (0,2%) manifest reacie diferit
Cluster

Rezisten

Nr.

Antibiotic

Distana euclidian de
centrul clusterului

Rezisten puternic

efalotin

0,0000

Sensibilitate medie

Eritromicin

4,7003

Cefuroxim

2,4647

Piperacilin

2,8766

10

Tobramicin

0,6389

11

Gentamicin

1,6355

12

Tetraciclin

1,4785

Cloramfenicol

0,5185

Pefloxacilin

0,8657

Cefoxitin

3,6627

Imipenem

3,7986

Ciprofloxacin

1,5873

Sensibilitate puternic

Deci, dac facem abstracie de antibioticul imipenem, pentru care tulpina a prezentat
sensibilitate i n varianta martor, se poate observa uor c Enoxilul a indus o reacie de
sensibilitate puternic pentru 4 antibiotice, dintre care conform autorilor Matcovschi, Procopiin,
Parii [11]

2 antibiotice cloramfenicolul

i cefoxitin nu se aplic la tratarea infeciilor

pseudomonadice. Distana euclidian a antibioticului de centrul clusterului relev existena unei

variabiliti intraclusteriene pronunate. Dac lum n consideraie faptul c cele mai pronunate
deosebiri ntre clustere sunt prezentate de antibioticele cu cele mai mici distane de centrul
clusterului respectiv, sau coincide cu acesta (0,0), putem observa c asemenea preparate sunt
80

cefalotina (clusterul 1), tobramicina (2) i cloramfenicolul (3). Astfel, antibioticele date pot servi
ca standard de rezisten puternic, sensibilitate medie i sensibilitate puternic, respectiv, pentru
tulpinile de P.aeruginosa tratate cu Enoxil.
Analiza de scanare tridimensional a confirmat gradul de similitudine/deosebire a
antibioticelor n baza capacitii de reprimare a P.aeruginosa tratate cu Enoxil (0,2%), relevat
prin analizele clusteriene prezentate (Figura 3.13).

3
8
6
11
2
1

10
9
5

4
7

12

Fig. 3.13. Scanarea tridimensional a antibioticelor n baza capacitii de reprimare a

P.aeruginosa tratate cu Enoxil (0,2%).
1 cloramfenicol, 2 pefloxacilin, 3 eritromicin, 4 cefuroxim, 5 cefoxitin, 6
cefalotin, 7 piperacilin, 8 imipenem, 9 ciprofloxacin, 10 tobramicin, 11 gentamicin,
12 tetraciclin.
Rezultatele obinute au pus n eviden faptul c concentraia static de Enoxil 0,2%
pentru tulpinile de bacterii P.aeruginosa produce reprimarea nu doar a creterii
microorganismelor, ci i ai unor indici biochimici cu importan major pentru vitalitatea i
manifestarea capacitilor patogenice ale microorganismelor, precum ar fi oxidazele,
citratreductazele, hemolizinele, piocianinele. Reprimarea activitii

piocianinei sub aciunea

preparatului poate determina, n mare parte, pierderea rezistenei bacteriilor la aciunea multor
factori nefavorabili.
Cercetarea influenei Enoxilului n concentraie static pentru tulpinile de bacterii
P.aeruginosa cu privire la sensibilitatea acestora la unele antibiotice, aplicate pe larg n practica
medical, a demonstrat pierderea rezistenei microorganismului la majoritatea din ele. Acest
fenomen ar putea fi determinat, n mare parte, de mecanismele biochimice declanate n celulele
81

bacteriene sub aciunea Enoxilului, i anume a reprimrii activitilor enzimatice importante

pentru viabilitatea microorganismelor. Deci, Enoxilul enotanin hidrosolubilizat prin
modificare chimic, n concentraie static (0,2%) posed activitate antipseudomonadic,
manifestat prin

reprimarea activitii unor enzime importante pentru viabilitatea i

patogenitatea tulpinilor de P.aeruginosa: oxidazelor, citratreductazelor, hemolizinelor, precum i

a piocianinelor.
Studiul comparativ al aciunii unui ir de preparate antibiotice asupra culturilor de
P.aeruginosa, tratate i netratate n prealabil cu Enoxil a pus n eviden faptul c preparatul
mrete sensibilitatea microorganismelor la majoritatea antibioticelor testate, punnd astfel n
eviden unele aciuni inhibitorii ale acestuia asupra bacteriilor.

3.11. Concluzii la capitolul 3

1. Rezumnd datele obinute, putem concluziona c problema tiinific important
soluionat n respectivul compartiment a inut de elucidarea CMI i CMB/CMF a Enoxilului
pentru unele microorganisme, modificrilor morfo-structurale ale celulelori i activitii
enzimatice bacteriene sub aciunea preparatului autohton Enoxil.
2. Valorile CMI i CMB/CMF a Enoxilului pentru microorganismele aflate n studiu au
prezentat diferene de un ordin, cu excepia bacteriilor E.coli, pentru care aceti indici au coincis.
S-a stabilit existena unei corelaii nalte, pozitive pentru CMI/CMB a tulpinilor de E.coli i
S.aureus la tratarea cu Enoxil, ceea ce face predictiv comportarea acestor bacterii.
3. Analiza de microscopie electronic a pus n eviden faptul c concentraia bactericid
de Enoxil produce modificri ireversibile tulpinilor de bacterii E.coli, S.aureus, fenomen care
ar putea fi explicat prin mrirea permeabilitii peretelui celular bacterian, cu ulterioara inhibiie
a aparatului enzimatic ceea ce, n final, conduce la blocarea procesului de diviziune celular.
4. Pe modelul bacteriilor de P.aeruginosa s-a constatat c unele din mecanismele
biochimice de reprimare a creterii i dezvoltrii acestora de ctre Enoxil, constau n inhibiia
sintezei unor enzime importante pentru viabilitatea organismului bacterian oxidazele,
citratreductazele, hemolizinele, precum i a piocianinei. Acest fenomen s-a reflectat n cel mai
direct mod asupra sensibilitii bacteriilor la un ir de antibiotice utilizate n medicina
contemporan.

82

4. STUDII CLINICE ALE PREPARATULUI ENOXIL

Cercetrile cu privire la identificarea plantelor cu compoziie fenolic (flavonoizi,
taninuri) care prezint efecte antiinflamatorii i cicatrizante sunt, la moment, deosebit de actuale
pentru practica medical [206]. De exemplu, prin investigarea efectului aplicrii topice a
extractelor hidroalcoolice de taninuri ale scoarei de plant Terminalia arjuna asupra cicatrizrii
plgilor dermice la obolani a fost relevat, o cretere semnificativ a forei de tensiune a
plgilor prin incizie i incidenei de epitelizare a plgilor prin excizie, comparativ cu martorul.
Totodat, s-a constatat o cretere a coninutului de hexozamin n esutul de granulaie i a
efectelor antimicrobiene pentru P.aeruginosa, E.coli, S.aureus, S.pyogenes, fenomen ce
favorizeaz accelerarea cicatrizrii plgilor [60].

4.1. Testarea clinic a preparatului Enoxil n tratamentul local al ulcerelor trofice de

gamb
Investigaiile au fost efectuate n Secia nr.2 a Dispanserului Dermatovenerologic
Republican. Au fost examinate 28 paciente cu vrsta de 49-76 ani, durata bolii fiind cuprins
ntre 1 an i 4-5 ani.
Aprecierea eficienei terapeutice s-a efectuat n baza unor manifestri clinice semne
inflamatorii (edem, hiperemie, dureri, etc.), eliminri din plag i, totodat, prin observaii cu
privire la particularitile ameliorrii, vindecrii proceselor patologice n esuturile moi i
timpului de apariie a esutului de granulaie, prezena efectelor adverse sau a complicaiilor n
urma administrrii preparatului.
La primele edine de tratament, preparatul s-a utilizat n concentraia 0,6%, aceasta fiind
treptat mrit pn la concentraia de 5%. Bolnavelor s-au aplicat mee de tifon cu Enoxil pentru
24 ore. Alte preparate pe durata tratamentului n-au fost aplicate.
Scopul de baz a constat n stabilirea eficienei terapeutice a preparatului Enoxil,
toleranei la preparat i a efectelor adverse.
S-a constatat c preparatul Enoxil (5%) se administreaz uor, se suport fr iritaii i
dureri. n tratamentul

ulcerelor trofice, preparatul Enoxil a demonstrat urmtoarele efecte

pozitive: reducerea fenomenelor inflamatorii, micorarea eliminrilor din plag, accelerarea

cicatrizrii, ameliorarea strii generale a pacienilor. De menionat, c durata tratamentului a fost
de 12-14 zile cu 5-7 zile mai mic n comparaie cu tratamentul obinuit: 18 zile (Figura 4.1).
83

Fig. 4.1. Aspectul poriunii de gamb cu ulcer trofic n faza de debut (1) i la sfritul
(2) tratrii cu Enoxil.

n ceea ce privete tolerana preparatului, s-a constatat lipsa complicaiilor n testrile

clinice menionate. S-a concluzionat c efectul curativ al preparatului Enoxil este evident i
acesta poate fi utilizat pe larg n tratamentul local al pacienilor cu ulcere trofice de gamb.
4.2. Testarea clinic a preparatului Enoxil n tratamentul plgilor postoperatorii i
leziunilor postradiante la bolnavele oncologice
Cercetrile au fost efectuate n secia Mamologie a Institutului Oncologic Republican. n
studiu au fost incluse 26 bolnave cu maladii benigne i maligne (cancer) ale glandei mamare.
Tratamentul leziunii postradiante epiteliitei postradiante a pielii n regiunea fosei
axilare cu Enoxil a fost aplicat la 5 bolnave prin prelucrarea pielii regiunii afectate i aplicarea pe
regiune a meelor cu soluie apoas de 5% Enoxil. De menionat, c n cadrul tratamentului
leziunilor postradiante cu Enoxil, bolnavelor nu s-au administrat alte preparate sau remedii
curative. Pentru ameliorarea vitalizrii plgii dup interveniile chirurgicale, la bolnavele de
cancer al glandei mamare s-a aplicat intraoperator (dup nlturarea preparatului) soluie
alcoolic de Enoxil 5% n volum de 100 ml, cu care timp de 2-3 min se prelucrau toate sectoarele
plgii. De asemenea, la aceste bolnave n perioada postoperatorie n cadrul pansamentului se
prelucra pielea n regiunea suturilor cu Enoxil n soluie alcoolic de 5%, apoi se aplica mea cu
preparat n soluie apoas de 5% pe linia suturilor.
84

De asemenea, prin aceast metod s-a aplicat Enoxilul la 12 bolnave de cancer al glandei
mamare. n cadrul tratamentului, bolnavelor de cancer al glandei mamare (10) sau operaiilor
organomenajante (2) n primele 5-6 zile postoperatorii s-a administrat tratament cu antibiotice.
La bolnavele cu maladii benigne ale glandelor mamare, pentru prevenirea infectrii
plgii, preparatul Enoxil s-a aplicat n plag timp de 2-5 min prin utilizarea meelor mbibate cu
soluie alcoolic de 5%, dup care plaga se usca i se efectuau suturi pe esuturile glandulare,
adipoase i piele. Aceast metod a fost aplicat la 14 bolnave, dintre care la 6, preoperator s-a
constatat un proces inflamator pe fond de maladie fibrochistic a glandei mamare. Dei acestor
bolnave n perioada preoperatorie li s-a administrat tratament cu antibiotice, n timpul nlturrii
piesei sectorului afectat al glandei mamare, din ductele dilatate ale esutului glandular se
elimina un coninut vscos tulbure.
Tratamentul cu alte preparate: pentru 6 bolnave s-a prescris tratament preoperator cu
antibiotice conform sensibilitii florei S.epidermidis, depistat n eliminrile din mamelon.
Acestora, i nc altor 6 bolnave li s-au prescris antibiotice timp de 5 zile dup intervenia
chirurgical rezecia sectoral a glandei mamare 8 bolnave i rezecia bilateral a glandelor
mamare 4. Scopul aplicrii Enoxilului a fost:
- tratamentul leziunilor postradiante epiteliitelor postradiante ale pielii n regiunea fosei
axilare n urma tratamentului radioterapic al cancerului glandei mamare;
- ameliorarea vitalizrii plgii, micorarea limforeei dup interveniile chirurgicale la
bolnavele de cancer al glandei mamare;
- prevenirea infectrii plgii postoperatorii i ameliorarea vitalizrii plgii dup
intervenia chirurgical rezecia sectoral a glandei mamare sau rezecia sectoral a ambelor
glande mamare la bolnavele cu maladii benigne ale glandei mamare (tumori benigne i forme
nodozice ale maladiei fibrochistice).
S-a constatat c tratamentul leziunilor postradiante epiteliitei postradiante n regiunea
fosei axilare a fost eficient n toate 5 cazuri, manifestat prin micorarea duratei de tratament cu 3
zile (pn la dispariia simptomelor de epiteliit hiperemiei, eroziunii pielii, infiltraiei
inflamatorii a esuturilor subcutane) (Figura 4.2), comparativ cu tratamentul acestor leziuni n
cazul altor remedii larg aplicate (unguentul Methyluracil, levomicol, sol.Castelani, etc.) care
dureaz 8-14 zile.

85

Fig. 4.2. Aspect al epiteliitei postradiante a pielii n regiunea fosei axilare pn la operaie (A) i
dup tratamentul pre- i postoperator cu Enoxil (B).

La bolnavele de cancer al glandei mamare, la care s-a aplicat preparatul Enoxil,

intraoperator i postoperator, s-a micorat durata de vitalizare a plgii, suturile fiind nlturate
peste 8-9 zile (Figura 4.3).

Fig. 4.3. Cancer al glandei mamare pn (A) i dup (B) operaie, cu prelucarea intra- i
postoperatorie a plgii cu Enoxil.

Din 12 bolnave, 9 au fost supuse preoperator curelor de polichimioterapie (PCT) i

radioterapie (RT). De regul, dup PCT i RT suturile se nltur peste 12-14 zile dup operaie.
Totodat, la 10 bolnave s-a atestat o limforee mai puin pronunat dect media obinuit pentru
aceste bolnave: la 14 zile dup operaie, limforeea constituia 50% din cantitatea iniial (2-3 zile
86

dup operaie). Aceast fapt a permis ca 8 bolnave s nceap tratamentul postoperator PCT sau
RT la a 15-17 zi dup intervenia chirurgical. Este important de menionat c, de regul, din
cauza limforeei bolnavele ncep urmtoarea metod de tratament adjuvant peste 21-28 zile de la
operaie.
La bolnavele cu maladii benigne ale glandei mamare, vitalizarea plgii s-a produs peste
7-8 zile dup operaie, iar simptome de inflamaie n plag nu s-au atestat. Chiar i la 2 bolnave
crora nu s-au aplicat antibiotice din cauza sarcinii de 26-27 i 22-23 sptmni, vitalizarea
plgilor, de asemenea, s-a produs n 7-8 zile.
n concluzie se poate meniona c preparatul Enoxil n soluie apoas i/sau alcoolic de
5% prezint eficien nalt n tratamentul epiteliitei postradiante, micorarea termenelor de
vitalizare a plgilor la bolnavele de cancer al glandei mamare i cu maladii benigne ale glandelor
mamare, micorarea limforeei n perioada postoperatorie la bolnavele de cancer al glandei
mamare [6].

4.3. Aplicarea preparatului Enoxil n tratamentul leziunilor termice

Studiul eficacitaii clinice a preparatului farmaceutic Enoxil (produs de SA Farmaco"), n
tratamentul arsurilor acute a fost efectuat n cadrul seciei Leziuni termice, IMSP Spitalul Clinic
de Traumatologie i Ortopedie al MS RM. Toate investigaiile s-au efectuat avnd acordul
pacienilor dupa familiarizarea acestora cu preparatul n studiu.
Metodele de cercetare au cuprins urmtoarele investigaii:
clinice studiul asupra simptomelor de baz:
- subiective durere, frigere, rash cutanat, impoten funcional;
- obiective sindrom inflamator, eliminri din plag, apariia crustei, decolarea
crustei, debutul epitelizrii i sfritul epitelizrii;
-

determinarea reparaiei cicatriciale i ameliorrii vindecrii proceselor patologice n

esuturile lezate;

- stabilirea prezenei efectelor adverse sau a complicaiilor n tratamentul cu Enoxil;

-

determinarea termenelor de reparaie a arsurilor acute, zonelor donore i transplantelor

de piele.
microbiologice:
- studiul de laborator al florei din plgile cu arsuri:

87

- determinarea calitativ i cantitativ a florei plagale nainte, n timpul i dup

tratamentul cu Enoxil;
Schema investigaiiilor: bolnavii au fost selectai conform grupelor de varst i sex
comparabile, cu grad i profunzime de leziuni relativ similare. Rezultatele obinute n urma
tratamentului cu Enoxil i cu Betadin au fost supuse studiului comparativ.
Schema de administrare a medicamentului. Tratamentul cu Enoxil s-a efectuat avnd
acordul pacientului, n condiii de staionar, n urma aprecierii gradului, suprafeei i debutului
leziunii. Pansamentul cu Enoxil i Betadin s-a efectuat dup toaleta chirurgical de rutin a
plgilor, nlturarea detritului plagal, folosind material atraumatic de pansament inert. Aplicarea
local a remediilor sus-menionate a fost complementar tratamenului infuzional, transfuzional,
antibioticoterapiei, vitaminoterapiei, imunocorectorilor, etc, care prescrise, de obicei, bolnavilor
cu arsuri. Procedeul a fost utilizat n tratamentul arsurilor acute necontaminate (ncepnd cu
primele ore de la traumatism) i contaminate (dupa primele zile de la traumatism cu prezena
semnelor inflamatorii locale). Pansamentele cu Enoxil i Betadin au fost aplicate pe suprafeele
transplantelor i zonelor de prelevare a acestora, peste plasa atraumatic.
Tratamentul: pansamentele mbibate cu sol. Enoxil 1% sau Betadin 1%, cate 20-25 ml
pentru 1% de suprafa de leziune, au fost aplicate zilnic peste pansamentele atraumatice, care
acopereau primar suprafaa de arsur.
Scopul investigaiilor a constat n aprecierea eficacitaii clinice a soluiei de Enoxil n
tratamentul leziunilor termice superficiale i profunde.
Obiectivele au fost urmtoarele:
-

stabilirea eficacitaii clinice a tratamentului cu sol. Enoxil 1% la pacienii cu plgi acute

postarsur, cauzate de ageni termici, chimici, electrici, precum i n cazul regenerrii
zonelor donore i a transplantelor de piele;

analiza efectului tratamentului plgilor cu diferit grad de infectare;

determinarea toleranei pacienilor la preparat i a efectelor adverse;

studiul comparativ al soluiilor de Enoxil 1% i Betadin 1%.

S-a constatat c preparatul Enoxil este comod n administrare: nu se lipete de plag i

formeaz pelicul protectiv pe suprafaa lezat, uor nlaturat, fr dureri. Perioada dintre
schimbul pansamentelor (1-2 zile) este bine tolerat de pacieni, care menioneaz un comfort
local i o diminuare a edemului segmentelor afectate. La aplicarea zilnic a pansamentelor cu
Betadin bolnavii nu acuzau iniial senzaie de frigere sau durere, n schimb, menionau un
discomfort local dupa uscarea pansamentului, manifestat peste cteva ore, cu precdere, prin
88

impoten funcional mai pronunat, lipirea materialului de pansament de suprafaa plgii.

Totodat, era anevoioas i dureroas nlturarea ulterioar a pansamentului. Datele rezultatelor
sunt prezentate n tab.4.1-4.4, Figura 4.4.
Tabelul 4.1. Indicii de baz implicai n cercetare
Indici
Bolnavi sex, vrst
Vrsta medie
Tipul de tratament
Chirurgical
Conservator
Durata medie de tratament (zile)
Arsur superficial
Arsur profund
Profunzimea arsurilor (%)
Suprafa superficial
Suprafa profund

Betadin, 1%
Femei 7, brbai 13
51,0 ani

Enoxil, 1%
Femei 8, brbai 11
50,7 ani

6 (30%)
14 (70%)

9 (47,4%)
10 (52,6%)

15,3
39

13,8
22,3

11,4
4,3

17,4
12,3

Flacr

12 (60%)

8 (42,1%)

Lichid i abur
Chimic
Electric

8 (40%)
-

6 (31,6%)
2 (10,5%)
1 (5,4%)

Contact

2 (10,5%)

Localizarea arsurilor
Arsur solitar pe un segment anatomic
Arsur solitar pe mai multe segmente
anatomice

11 (55%)
9 (45%)

7 (36,8%)
12 (63,2)

Originea arsurilor

Rezultatele obinute demonstreaz efectul curativ evident al preparatului medicamentos n

baza Enoxilului:
-

atenuarea edemului posttraumatic i sindromului inflamator local;

diminuarea eliminrilor purulente din plag;

accelerarea proceselor de epitelizare spontan n cazul arsurilor superficiale;

reducera timpului de cicatrizare a zonelor donore i a transplantelor;

micorarea perioadei de pregtire preoperatorie pentru necrectomie precoce i transplant;

ameliorarea riiei i decolrii timpurii a crustei;

reducerea fenomenelor toxice generale;

epitelizarea rapid i, respectiv, rezultatul estetic mai bun.

89

Tabelul 4.2. nceputul i durata tratamentului

Enoxil, 1%

Betadin, 1%
Debut de tratament arsur necontaminat:
10 (50%)
Tratamentul
la
arsuri
profunde
necontaminate cu suprafaa medie de
1% 35 zile;
Tratamentul
la
arsuri
superficiale
necontaminate cu suprafaa medie 15%
15,2 zile
Debut de tratament la arsura contaminat: 5
(25%)
Tratamentul
la
arsuri
superficiale
contaminate cu suprafaa medie de 4,3%
17,7 zile;
Tratamentul la arsuri profunde contaminate cu
suprafaa medie 1,5% 25,5 zile
Tratamentul
la
arsuri
superficiale
contaminate cu suprafaa medie de 10% 13
zile;
Tratamentul la arsuri profunde contaminate
cu suprafaa medie 6% 46 zile

Debut de tratament arsur necontaminat: 3

(15,8%)
Tratamentul
la
arsuri
profunde
necontaminate cu suprafaa medie de 5%
36 zile;
Tratamentul la arsuri superficiale
necontaminate cu suprafaa medie 21%
16 zile
Debut de tratament la arsura contaminat: 5
(26,3%)
Tratamentul
la
arsuri
superficiale
contaminate cu suprafaa medie de 9%
12 zile;
Tratamentul la arsuri profunde contaminate
cu suprafaa medie 1% 19 zile
Tratamentul
la
arsuri
superficiale
contaminate cu suprafaa medie de 20%
15 zile;
Tratamentul la arsuri profunde contaminate
cu suprafaa medie 13% 43 zile

Tabelul 4.3. Analiza microbiologic a diferitelor tipuri de arsuri

Betadin, 1%
I frotiu (la internare):
S.aureus
P.aeruginosa

Enoxil, 1%
Arsur infectat, cazuri
I frotiu (la internare):
3
S.epidermidis
1
S.aureus

S.aureus + Citrobacter diversus

-

1
2

S.aureus + P.aeruginosa
Enterococcus faecalis
S.aureus + Citrobacter freundii

2
2
1

E.aerogenes
S.aureus + P.vulgaris
Fr cretere

1
1
1

II frotiu (n timpul tratamentului):

II frotiu (n timpul tratamentului):

Citrobacter diversus
S.aureus

1
3

S.aureus + E.aerogenes
S.aureus

3
2

P.aeruginosa

Fr cretere

III frotiu (la sfritul tratamentului):

S.aureus + Citrobacter diversus
S.aureus
Fr cretere

III frotiu (la sfritul tratamentului):

1
2
2

S.epidermidis
S.aureus
Fr cretere
90

1
1
9

Betadin, 1%
Zile preoperatorii: (20 bolnavi) 22,7 zile
Epitelizarea donatorilor i transplantelor:
(8 cazuri) 14 zile
Durere: 20 bolnavi 23,5 zile
Senzaie de arsur: 20 bolnavi 13,4 zile
Debutul pruritei: 20 bolnavi 14,3 zile
Sindrom inflamator: 17 bolnavi 11,1 zile
Eliminri purulente: 14 bolnavi 12,5 zile
Impoten funcional:
20 bolnavi 13,1 zile
Pansament strns: 17 bolnavi 13,9 zile
Febr: 17 bolnavi 10,3 zile
Sete: 15 bolnavi 8,5 zile
Intoxicaie: 14 bolnavi 10,2 zile
Apariia crustei: 15 bolnavi 4,7 zile
Decolarea crustei: 15 bolnavi 12,1 zile
Temperatura local: 16 bolnavi 8,6 zile
Debutul epitelizrii: 20 bolnavi 13,1 zile
fritul epitelizrii:
20 bolnavi 21,6 zile

Tabelul 4.4. Reacia bolnavilor la tratament

Enoxil, 1%
Zile preoperatorii: (20 bolnavi) 11 zile
Epitelizarea
donatorilor
i
transplantelor: (19 cazuri) 8,8 zile
Durere: 19 bolnavi 7,11 zile
Senzaie de arsur: 19 bolnavi 8,05 zile
Debutul pruritei: 19 bolnavi 10,02 zile
Sindrom inflamator: 19 bolnavi 6,11 zile
Eliminri purulente: 4 bolnavi 4,7 zile
Impoten funcional:
19 bolnavi 11,2 zile
Pansament strns: 10 bolnavi 10,5 zile
Febr: 15 bolnavi 9,3 zile
Sete: 17 bolnavi 9,8 zile
Intoxicaie: 15 bolnavi 8,1 zile
Apariia crustei: 18 bolnavi 3,6 zile
Decolarea crustei: 18 bolnavi 7 zile
Temperatura local: 10 bolnavi 6,03 zile
Debutul epitelizrii: 19 bolnavi 9,7 zile
fritul epitelizrii:
19 bolnavi 18,6 zile

Tolerana preparatului. Preparatul a fost bine suportat. n studiul realizat nu s-au observat
reacii adverse, alergice sau alte tipuri.
Asocierea. Interaciuni medicamentoase concomitent cu antibioticoterapia, imunoterapia,
terapia infuzional i transfuzional, analgezicele, etc. nu s-au atestat.
S-au constatat urmtoarele:
- efectul curativ evident n cadrul tratamentului local al arsurilor superficiale i profunde cu
Enoxil;
- adjuvarea preparatului Enoxil sporete att cantitativ, ct i calitativ procesul reparatoriu,
ceea ce face posibil utilizarea acestuia pe viitor n combustiologie;
- aplicarea cu succes n cazul ingrijirilor postoperatorii a transplantelor i zonelor donore
indic utilizare mai vast;
- preparatul este bine tolerat, fr manifestri toxice;
- preparatul Enoxil se poate utiliza n tratamentul arsurilor acute superficiale i profunde, n
evoluia postoperatorie dup dermatoplastie.

91

Fig. 4.4. Aspect de leziune termic n faza de debut (A) i de vindecare (B).

4.4. Testarea eficienei preparatului Enoxil n clinica de chirurgie oro-maxilo-facial

pediatric
Studiul s-a efectuat n secia Chirurgie oro-maxilo-facial a Spitalului Clinic Republican
pentru Copii Em.Coaga". Preparatul Enoxil s-a aplicat la 14 pacieni cu leziuni i procese
inflamatorii ale esuturilor moi n regiunea maxilo-facial. Tratamentul leziunilor traumatice ale
esuturilor moi ale regiunii maxilo-faciale cu preparatul Enoxil a fost aplicat la 5 pacieni cu
vrsta ntre 1,9-9 ani. Preparatul, n sol. alcoolic de 5% a fost utilizat prin prelucrarea pielii i
aplicarea meelor pe regiunea afectat.
Aplicarea altor preparate n cadrul tratamentului postoperatoriu. Pacienilor li s-au
administrat remedii parenterale: analgetice, iar la necesitate antibiotice (5 zile).
Scopul aplicrii preparatului Enoxil a fost:
-

elucidarea eficienei tratamentului local al leziunilor traumatice ale esuturilor moi dup
prelucrarea primar chirurgical i sporirea epitelizrii plgii;

tratamentul local al plgilor infectate dup evacuarea coleciilor purulente;

micorarea termenului de lichidare a eliminrilor purulente din plag, ameliorarea

vitalitii plgii postoperatorii (micorarea edemaiei, sporirea epitelizrii plgii).
S-a constatat c tratamentul leziunilor posttraumatice a fost eficient n toate 5 cazuri,

fenomenul manifestndu-se prin lichidarea edemaiei, hiperemiei esuturilor la a 2-3-a zi; lipsa de
inflamaie n plag, accelerarea epitelizrii cu 1-2 zile comparativ cu durata tratamentului acestor
leziuni cu alte remedii tradiionale (comprese cu dimexid, ulei de salvie, ctin, .a.) (Figura
4.5).
92

La pacienii cu afeciuni inflamatorii ale regiunii maxilo-faciale, cu vrsta ntre 3-14 ani
care prezentau adenite acute purulente 4, furuncule 3, parotidit cronic parenchimatoas
exacerbat 1, flegmon 2,

preparatul s-a aplicat pentru sporirea lichidrii eliminrilor

purulente din plag, lichidarea mai rapid a edemaiei, ameliorarea vitalizrii plgii dup
intervenia chirurgical n perioada postoperatoie. n cadrul pansamentului, plaga se iriga cu
sol. apoas de 3% de Enoxil, apoi se aplic mea cu sol. alcoolic de 5% de preparat.

Fig. 4.5. Evoluia tratamentului cu Enoxil n cazul traumatismului maxilo-facial la o feti de 5

ani.
Administrarea altor preparate n cadrul tratamentului. Tuturor pacienilor n primele 5-7
zile postoperatorii s-a prescris tratament cu antibiotice, hiposensibilizante, analgezice

la

necesitate fizioterapie.
S-a concluzionat c tratamentul afeciunilor inflamatorii menionate cu preparatul Enoxil a
demonstrat eficacitate, manifestat prin micorarea termenului de eliminare a puroiului din plag,
acesta disprnd la a 2-3 zi; micorarea edemaiei esuturilor moi cu circa 75% din volum la a 2-3
zi; micorarea termenului de vitalizare a plgii dup

intervenia chirurgical cu 2-3 zile,

comparativ cu durata tratamentului acestor plgi la aplicarea altor remedii (ung. Heparin, ung.
catin, salvie, etc.).
Deci, preparatul Enoxil n sol. apoas sau/i alcoolic de 3-5% a demonstrat eficien n
tratamentul leziunilor traumatice ale esuturilor moi, afeciunilor inflamatorii ale regiunii maxilofaciale la copii, care s-a manifestat prin micorarea termenelor de lichidare a eliminrilor
purulente din plag i micorarea duratei de vitalizare a plgii.

93

4.5. Concluzii la capitolul 4

Rezumnd datele prezentate, se poate meniona c problema tiinifico-practic
important soluionat n respectivul compartiment const n elucidarea faptului c preparatul
Enoxil manifest evidente proprieti curative n tratamentul local al ulcerelor trofice de gamb,
epiteliitei postradiante i a plgilor postoperatorii la bolnavele de cancer al glandei mamare,
arsurilor superficiale i profunde, leziunilor traumatice ale esuturilor moi, afeciunilor
inflamatorii ale regiunii maxilo-faciale la copii. n toate aceste situaii clinice, preparatul Enoxil
nu provoac reacii adverse, este uor tolerat de bolnavi, reduce considerabil durata de tratament.
Aceste efecte se datoreaz pronunatelor nsuiri antimicrobiene, regenerative i antioxidante ale
Enoxilului.

94

5. SINTEZA REZULTATELOR OBINUTE

Infeciile de plag prezint unele din problemele de baz ale medicinei contemporane.
Pentru multe ri cu nivel economic precar i standarde joase de igien, apariia, dezvoltarea i
rspndirea acestor boli au devenit o preocupare social. Maladiile menionate aduc prejudicii
medicale i economice importante i rilor cu nivel economic dezvoltat, n special, n ceea ce
privete infeciile intraspitaliceti (nozocomiale). Conform datelor NINSS [161], aceste infecii
complic nsntoirea, produc anxietate, mresc discomfortul pacientului i pot conduce la
deces. Morbiditatea i letalitatea prin infecii nozocomiale constituie o problem major pentru
Republica Moldova, pagubele economice anuale n urma infeciilor septico-purulente doar n
mun. Chiinu constituind circa 19 mln 683 mii lei [14].
Izolarea i identificarea microorganismelor din dermul afectat sau plaga purulent au
demonstrat c bacteriile gram-pozitive Staphylococcus aureus, gram-negative Escherichia coli,
Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris i fungul Candida albicans prezint ageni cauzali
frecveni ai acestor boli [183].
Prin

aciunea

de

monitoring

al

rezistenei

microorganismelor

la preparatele

antimicrobiene, demarat n Republica Moldova n 2002 s-a constatat, ca i n ntreaga lume,

fenomenul tot mai evident de cretere a rezistenei tulpinilor de microorganisme agenilor
patogeni ai multor infecii, la aciunea antibioticelor, chiar i a celor de ultim generaie [16].
Fenomenul tot mai alarmant de rezisten a microorganismelor patogene la antibiotice
orienteaz specialitii n domeniu spre elaborarea

preparatelor antimicrobiene bazate pe

mecanisme de aciune principial noi. Dei utilizarea extraselor taninice din plante pentru tratarea
diferitelor infecii ale plgilor este cunoscut de mult vreme [188], la moment nu exist o gam
vast de preparate medicinale n baza acestor compui.
Este cunoscut faptul, c seminele de struguri prezint o surs bogat de aa numitele
enotaninuri taninuri condensate care reprezint o gam vast de substane naturale cu structur
polifenolic, remarcate prin coninut nalt de proantocianidine [126]. Cea mai mare parte a
enotaninurilor sunt insolubile n ap, din care motiv utilizarea lor n calitate de antioxidani este
dificil. Pentru lrgirea spectrului acestor valoroase substane polifenolice s-a propus drept scop
elaborarea un procedeu de hidrosolubilizare a enotaninurilor, determinarea proprietilor
antioxidante i antimicrobiene ale compusului elaborat.
Enotaninurile solubile n alcool etilic au fost supuse procesului de hidrosolubilizare prin
tratarea acestora cu peroxid de hidrogen n raportul masic, respectiv, 1: (36), timp de 7 15
95

min, la temperatura de 70 100oC, dup care soluia s-a evaporat la temperatura de 40 65

o

C, iar produsul obinut s-a uscat la aceeai temperatur pn la mas constant.

S-a constatat c n cadrul procesului de oxidare a enotaninurilor, peroxidul de hidrogen

rupe lanul polimeric al enotaninurilor, formnd compui noi care conin grupe funcionale
carboxilice, peroxidice, alcoolice, fenolice, aldehidice, cetonice, esterice etc. Ca rezultat, se
obin compui organici solubili n ap cu gust astringent. Prezena grupelor carboxilice,
peroxidice, alcoolice, fenolice, aldehidice, cetonice, esterice n compusul nou format a fost
demonstrat prin spectroscopie IR, titrri acido-bazice i indicele peroxidic [2], obinute la
masspectrometrul MALDI (Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization), seria Bruker Daltonix
Flex Analysis.
Datele masspectrometrice au confirmat originea catechinic a compuilor n amestecul
studiat n care, judecnd dup intensitatea maximurilor masei ionice predomin structurile
monomerice.
Analiza cu privire la activitatea antioxidant a Enoxilului, determinat la aparatul numit
chemiluminometru (Turner Design TD 20/20, US) a demonstrat nivelul diminuat al acesteea
comparativ cu martorul, dar mrit comparativ cu compusul de origine enotanina. Datele
chemiluminometrului au demonstrat c capacitatea antioxidant a enotaninurilor alctuiete
33,14%, iar a Enoxilului 54,02%. Deci, Enoxilul are activitate antioxidant cu 20,88% mai
pronunat n comparaie cu enotaninurile iniiale din care s-a obinut.
Activitatea antioxidant mai nalt a Enoxilului n comparaie cu enotaninurile se explic
prin faptul c n procesul de hidrosolubilizare a enotaninurilor, paralel cu multiplele procese de
oxidare are loc i procesul de depolimerizare a lanului polimeric al proantocianidinelor. Ca
urmare, dintr-o macromolecul de enotaninuri se formeaz un numr mare de monomeri de
catechine, epicatechine, etc. [76].
Prin analiza relaiei concentraie activitate antioxidant, s-a constatat c n intervalul de
concentraii 1,0 10 -8 ... 2,5 10 -2 (%) de Enoxil activitatea antioxidant a diminuat paralel cu
descreterea concentraiei, indicele cercetat fiind aproape constant (31,28...32,16) n intervalul
10-4 ... 10-8 %. Deci, activitatea antioxidant a preparatului elaborat a fost destul de mare chiar i
la diluii avansate. Cercetarea variaiei n timp a semnalului chemiluminiscent, funcie de
logaritmul concentraiei Enoxilului, a pus n eviden faptul c la concentraii mai mari de 0,6%
a acestuia, activitatea antioxidant a fost, practic, egal cu 100%, adic pornind de la aceast
concentraie, aproape toi radicalii liberi prezeni n sistem sunt captai.

96

Activitatea antioxidant a Enoxilului este deosebit de valoroas, innd cont de faptul c

stresul oxidant este implicat n patogeneza numeroaselor maladii [184].
Pentru testarea activitii antimicrobiene a Enoxilului, iniial s-a procedat la cercetarea
aciunii acestuia asupra creterii in vitro pe mediu must de bere-agar a fungilor fitopatogeni
Fusarium spp., care conform mai multor date recente se constat implicai i n multe boli
oportunistice severe la om [18, 21], printre care se evideniaz leziunile cutanate i subcutanate
masive ale pielii hialohifomicoze [78, 97].
S-a constatat c suplimentarea mediului de cultivare cu Enoxil a condus la diminuarea
creterii liniare a coloniilor de F.oxysporum, n intervalul de concentraii 10-610-1% cu
8,1...46,9%. n cazul enotaninei (materie prim iniial) reprimarea a fost mai slab cu
3,9...14,4%. Astfel, spre deosebire de enotanin, Enoxilul a manifestat efect fungistatic mai
pronunat asupra ciupercii F.oxysporum.
Prin analiz corelaional a fost relevat o dependen pronunat a reaciei fungilor
Fusarium la Enoxil, ntre primele i ultimele zile de testare (3-10 zile), ceea ce relev capacitatea
stabil a preparatului de a inhiba creterea fungilor pe aceast durata de timp. Analiza
regresional a pus n eviden ecuaiile matematice ale dependenelor: ntre ziua a 10-a (y) i a
3-a (x) de testare pentru F.oxysporum y = -9,4285+2,1175 x (p<0,05), iar ntre ziua a 10-a (y) i
a 5-a (x) pentru F.solani y = -31,3737+2,7046 x (p<0,05). Fenomenul exclude necesitatea
obligatorie de testare a preparatului n zilele 7 i 10, ceea ce conduce la reducerea volumului de
lucru.
Analiz clusterian i scanarea tridimensional au

relevat faptul c Enoxilul n

concentraia 10-1%, care a prezentat cele mai nalte valori ale gradului de reprimare a creterii
coloniilor de F.oxysporum i F.solani pe durata testrii (10 zile) a format un cluster separat,
determinat de valori nalte ale distanelor euclidiene al acestuia de celelate variantele aflate n
studiu (10-6...10-2%), ceea ce relev c nivelul de eficien a Enoxilului n concentraia 10-1% are
superioritate avansat n comparaie cu alte concentraii de Enoxil sau enotanin.
Conform datelor din literatur, valorile concentraiei minime inhibitorii (CMI) sunt
relevante pentru stabilirea gradului de activitate a preparatelor testate [43, 170]. Cercetrile
noastre au relevat c concentraia minim de inhibiie a Enoxilului pentru bacteriile testate
gram-pozitiv S.aureus, i gram-negative E.coli, P.aeruginosa, P.vulgaris s-a manifestat n
intervalul de concentraii 0,15-0,3%, iar cea bactericid (CMB) n limitele 0,3-0,6%. Pentru
fungul C.albicans concentraia minim de inhibiie este de 0,3%, iar cea fungicid (CMF)
0,6%.
97

Prin analiz corelaional s-a constatat c gradul de dependen (r) ntre CMI i
CMB/CMF este semnificativ i pozitiv, egal fiind cu 0,66. Deci, valorile CMI i CMB/CMF
pentru microorganismele aflate n studiu sunt destul de apropiate. Analiza regresional care are
valoare predictiv i prezint relaia matematic ntre 2 factori dependeni a demonstrat c
ecuaia acesteia pentru CMI i CMB

este urmtoarea: y=0,0923+0,3385 x (p0,05), n care y

este CMB/CMF, iar x CMI.

Prin cercetarea timpului de aciune a Enoxilului n concentraia bactericid de 0,3 %
asupra culturilor aflate n faza de multiplicare exponenial (peste 8 ore de la nsmnare pe
mediul de cultivare) de S.aureus i E.coli, s-a constatat c efectul bactericid s-a manifestat n
timp de 4 i 5 ore, respectiv. Analiz corelaional a demonstrat c dependena ntre
sensibilitatea la durata de aciune pentru E.coli i S.aureus este semnificativ i pozitiv: r=0,91,
ceea ce denot activitatea antibacterian complex a preparatului.
Ecuaia regresional a dependenei este: y=0,7059+0,9118* x, la nivelul de confiden
p0,05, n care y prezint capacitatea de cretere a bacteriei S.aureus, corelat cu x capacitatea
de cretere a bacteriei E.coli peste n ore de aciune a Enoxilului. Astfel, cercetrile efectuate, prin
stabilirea dependenelor corelaionale i regresionale ntre reacia bacteriilor S.aureus i E.coli
la aciunea Enoxilului pe durata de timp 1...5 ore, prezint o importan predictiv, ntruct pot fi
exluse testrile suplimentare pentru una dintre aceste specii.
Surse tiinifice relev, c microscopia electronic este implicat n cercetarea analizei
ultrastructurale i morfologice n biologia celular, virusologie i microbiologie, n studii ale
medicinei moleculare i patogenezei microbiene [233].
n legtur cu oportunitile microscopiei electronice s-a cercetat influena concentraiei
bactericide de Enoxil (0,3%) asupra bacteriilor E.coli, S.aureus. Sub aciunea preparatului
Enoxil s-a produs blocarea procesului de multiplicare a celulelor bacteriene.
Calculul statistic a demonstrat c n varianta martor toate celulele au avut aspect de
bacili tipici (100,00,0%), pe cnd n varianta cu Enoxil frecvena acestor bacili a constituit
doar 18,03,3%, iar cu multiplicare inhibat 82,66,2%, respectiv.
n ceea ce privete cultura de S.aureus, s-a constatat c sub aciunea Enoxilului n
concentraia bactericid de 0,3% s-a mrit numrul de celule cu modificri morfo-structurale
(contururi neregulate, suprafee mate).Astfel, dac n varianta martor toate celulele au prezentat
suprafa neted a peretelui celular, iar frecvena cocilor cu modificri morfo-structurale a fost
la nivel de 7,01,2%, n varianta cu Enoxil, frecvena acestora a constituit 87,02,3%. Reprimare
a procesului de diviziune bacterian atestate la speciile E.coli, S.aureus ar putea fi explicate prin
98

mrirea permeabilitii peretelui celular bacterian cu ulterioara inhibiie a aparatului enzimatic,

ceea ce, n final, conduce la blocarea procesului de diviziune celular.
n urma cercetrilor efectuate s-a constatat c concentraia static a Enoxilului pentru
P.aeruginosa

este 0,2%. Cercetarea influenei preparatului n aceast concentraie asupra

bacteriei a pus n eviden schimbri semnificative ale unor indici biochimici i funcionali.
Astfel, sub aciunea Enoxilului n concentraie static (0,2%) s-a produs reprimarea activitii
unor asemenea enzime importante pentru vitalitatea i manifestarea nsuirilor patogenice ale
bacteriei, precum ar fi oxidazele, citratreductazele i hemolizinele. Totodat, culturile de bacterii
tratate cu Enoxil nu au produs piocianin i nu au prezentat miros specific.
Conform datelor din literatur, reprimarea sintezei hemolizinelor conduce la diminuarea
efectelor citotoxice ale P.aeruginosa

asupra celulelor implicate n reaciile imunitare

neutrofilelor i limfocitelor [114], iar a piocianinei la mrirea vulnerabilitii bacteriilor la

aciunea unor factori nefavorabili, de exemplu, hipoxie, raze UV, dar i la deprivarea de unele
mecanisme patogenetice, precum ar fi traumarea epiteliului respirator i declanarea proceselor
proinflamatorii ale fagocitelor [26].
Dup cum se tie, testrile in vitro

sunt importante pentru stabilirea activitii

biologice/fiziologice a oricrui preparat. Totui, la extrapolarea testrilor in vivo, adesea

potenialul preparat poate s nu manifeste rezultatul scontat. n legtur cu aceasta, preparatul
Enoxil a fost supus unor ample testri clinice.
Astfel, la Dispanserul Dermatovenerologic Republican s-a constatat eficiena Enoxilului
n tratarea ulcerelor trofice de gamb, durata tratamentului fiind cu 5-7 zile mai mic n
comparaie cu tratamentul obinuit 18 zile.
n Secia Mamologie a Institutului Oncologic, s-a stabilit eficiena nalt a Enoxilului n
tratarea epiteliitei postradiante a pielii n regiunea fosei axilare i a plgilor postoperatorii n
cancerul glandei mamare, termenele de vitalizare a plgilor fiind reduse cu 3 i 7-8 zile,
respectiv. Totodat, a fost apreciabil capacitatea nalt a preparatului de a reduce limforeea.
n cadrul Seciei de Leziuni Termice al Spitalului Clinic de Traumatologie i Ortopedie
al Ministerului Sntii a Republicii Moldova s-a constatat n cazul diferitelor tipuri de arsuri
termice, chimice, electrice .a. c este evident efectul curativ n cadrul tratamentului local al
arsurilor superficiale i profunde cu Enoxil. Suplimentar la tratamentul general al arsurii
tegumentului, adjuvarea preparatului Enoxil sporete att cantitativ, ct i calitativ procesul
reparatoriu i poate fi utilizat pe viitor n acest domeniu.

99

n Secia de Chirurgie Oro-Maxilo-Facial a Spitalului Clinic Republican pentru Copii

Em.Coaga" s-a stabilit c tratamentul afeciunilor inflamatorii cu preparatul Enoxil n sol.
apoas sau/i alcoolic de 3-5% demonstreaz eficacitate, manifestat prin micorarea
eliminrilor purulente din plag, acestea disprnd la a 2-3 zi; micorarea edemaiei esuturilor
moi cu circa 75% din volum la a 2-3 zi; micorarea termenului de vitalizare a plgii dup
intervenia chirurgical cu 2-3 zile, comparativ cu durata tratamentului acestor plgi la aplicarea
unor remedii tradiionale.
De menionat c n toate situaiile clinice descrise, Enoxilul nu a manifestat reacii adverse,
a fost bine tolerat de bolnavi, nu a prezentat toxicitate, iar cicatrizarea plgilor a avut un aspect
estetic mai superior comparativ cu remediile tradiionale.
Aceste rezultate sunt n concordan cu datele autorilor despre rolul pozitiv al
preparatelor taninice la tratarea plgilor datorit proprietilor antimicrobiene i antioxidante
[30, 124, 136].
Deci, prin elaborarea procedeului de obinere n baza materiei prime locale din semine
de struguri enotaninei a preparatului Enoxil, cu proprieti antioxidante, antimicrobiene nalte
i efect regenerativ pronunat la tratarea plgilor se pot atinge realizri importante medicale i
obine beneficii economice prin reducerea cheltuielilor directe pentru medicamente i a duratei
de spitalizare.

100

CONCLUZII
1.

Problema

tiinific

important

soluionat

ine

de

stabilirea

activitilor

antimicrobiene, antioxidante i regenerative ale unui nou compus autohton polifuncional de

origine taninic Enoxil care poate fi utilizat la tratarea afeciunilor ce au la baz un sistem de
interaciuni a factorilor nocivi

microbieni x oxidani x antiregenerativi. Tehnologia de

obinere a preparatului Enoxil se bazeaz pe elaborarea unui sistem-cadru de interaciuni ale

factorilor de diferit origine: biologic materie prim (enotaninuri), fizic temperatur
(70...100C), chimic peroxid de hidrogen. Procesele chimice i fizico-chimice declanate, au
determinat depolimerizarea compusului polimeric iniial ntr-un complex catechinic format, n
special, din structuri monomerice esterificate conferind, astfel, compusului obinut activitate
antioxidant, mecanismul de baz al creia este captarea radicalilor liberi din sistem.
2. Activitatea antioxidant a preparatului elaborat prin hidrosolubilizare chimic este
destul de mare chiar i la diluii avansate 10-4 ... 10-8 %. Prin cercetarea variaiei n timp a
semnalului chemiluminiscent, n funcie de logaritmul concentraiei Enoxilului, s-a constatat c
la concentraii mai mari de 0,6% a Enoxilului activitatea antioxidant este practic egal cu 100%,
adic pornind de la aceast concentraie, practic, toi radicalii liberi prezeni n sistem sunt
captai.
3. Prin analiz corelaional s-a constatat c gradul de dependen (r) ntre CMI i CMB
al bacteriilor E.coli i S.aureus este semnificativ i pozitiv, egal fiind cu 0,66. Analiza
regresional care are valoare predictiv i prezint relaia matematic a dependenei a demonstrat
c ecuaia acesteia

este urmtoarea: y=0,0923+0,3385 x (nivelul de confiden p0,05);

dependena ntre sensibilitatea la durata de aciune a Enoxilului pentru E.coli i S.aureus este
semnificativ i pozitiv: r=0,91, ecuaia regresional a dependenei fiind: y=0,7059+0,9118* x
(p0,05), n care y prezint capacitatea de cretere a bacteriei S.aureus, corelat cu x
capacitatea de cretere a bacteriei E.coli peste n ore de aciune a Enoxilului.
4. S-a constatat activitatea fungitoxic nalt a Enoxilului (10-1%) pentru unii din agenii
cauzali ai hialohifomicozelor umane Fusarium oxysporum i F.solani. Prin analiz
corelaional a fost relevat o dependen pronunat a reaciei fungilor la Enoxil, ntre primele
i ultimele zile de testare, ceea ce relev capacitatea stabil de inhibiie a creterii fungilor pe
durata menionat de ctre preparat. Aceasta determin lipsa de necesitate a aprecierii efectelor
preparatelor n zilele 7 i 10 i, deci, reducerea considerabil a volumului de lucru. Analiza
regresional a pus n eviden ecuaiile matematice ale dependenelor: ntre ziua a 10-a (y) i a
101

3-a (x) de testare pentru F.oxysporum y = -9,4285+2,1175 x (p<0,05), iar ntre ziua a 10-a (y) i
a 5-a (x) pentru F.solani y = -31,3737+2,7046 x (p<0,05).
5. Analiza de microscopie electronic a pus n eviden faptul c la concentraie
bactericid, preparatul Enoxil a produs mrirea permeabilitii peretelui celular bacterian (E.coli,
S.aureus). Concentraia static de Enoxil a inhibat activitatea unor asemenea enzime importante
pentru vitalitatea i manifestarea nsuirilor patogenice ale tulpinilor de bacterii P.aeruginosa,
precum ar fi oxidazele, citratreductazele i hemolizinele. Mrirea permeabilitii peretelui celular
i diminuarea activitii enzimatice au determinat blocarea procesului de multiplicare al
celulelor bacteriene.
6. Studiul comparativ al aciunii unui ir de preparate antibiotice asupra culturilor de
P.aeruginosa, tratate i netratate n prealabil cu Enoxil a pus n eviden faptul c preparatul
mrete sensibilitatea microorganismului la majoritatea antibioticelor testate, fenomen care se
datoreaz mririi permeabilitii peretelui celular i diminurii activitii enzimatice.
7. Prin testri clinice s-au constatat nalte proprieti antimicrobiene i regenerative ale
Enoxilului pentru ulcerele trofice de gamb, plgile mecanice, combustionale i postoperatorii,
ceea ce confirm capacitile antimicrobiene i antioxidante, atestate in vitro, astfel preparatul
prezentnd nalte capaciti curative.

RECOMANDARE

Pentru regenerarea rapid, eficient i estetic a ulcerelor trofice de gamb, plgilor

mecanice, combustionale i postoperatorii se propune aplicarea soluiilor apoase i/sau alcoolice
de 0,6-5% Enoxil, ceea ce asigur avantaje n medicina contemporan datorit eficienei clinice
nalte i a reducerii termenului de spitalizare.

102

Bibliografie
1. Brevet de invenie. 3113 G2, MD, A 01 N 65/00. Compus ce posed activitate
fungitoxic pentru ciuperca Fusarium oxysporum Snyd.et Hans / Lucian Lupacu, Elena Saco,
Tudor Lupacu, Valeriu Rudic (MD). Cererea depus 02.08.2006, BOPI nr 8/2006.
2. Brevet de invenie. 3125 G2, MD, A01N 65/00. Procedeu de obinere a enotaninurilor
hidrosolubile / Tudor Lupacu, Lucian Lupacu (MD). Cererea depus 08.02.2006, BOPI nr
9/2006.
3. Brevet de invenie. 3139 G2, MD, A 01 N 65/00. Compus ce posed activitate
fungitoxic pentru ciuperca Fusarium solani (Mart.) App. Et. Wr. / Valeriu Rudic, Lucian
Lupacu, Tudor Lupacu, Elena Saco (MD). Cererea depus 08.02.2006, BOPI nr 9/2006.
4. Brevet de invenie. 3979 F1, MD, C 08 H 5/00, C 07 D 311/30. Compus cu proprieti
antioxidante / Tudor Lupacu, Gheorghe Duca, Lucian Lupacu, Maria Jiurginc, Aurelia
Meghea A (MD). Cererea depus 30.09.2008, BOPI, nr 11/2009.
5. Calmc I. . a. Dinamica rezistenei la antibiotice a microflorei eliminate din
biosubstratele bolnavilor n raionul Cueni. n: Epidemiologia i microbiologia. Materialele
congr.VI al Igienitilor, epidemiologilor i microbiologilor din Republica Moldova. Chiinu,
2008, p. 266-268.
6. Godoroja N., Lupacu T., Tcaciuc D., Corincioi E., Lupacu L. Eficacitatea
preparatului Enoxil n tratamentul leziunilor postradiante i plgilor dup mastectomie. n:
Congresul al III-lea al Oncologilor din Republica Moldova, 2010, p. 276-278.
7. Iftimie M.N. Testarea capacitii de protecie la radiaiile UV a unor compozite i
produse pe baz de extracte de plante naturale. n: Revista de Politica tiinei i Scientometrie, nr
special, 2005, p. 1-30.
8. Lupacu G. Protecia plantelor de fuzarioze. Protecia plantelor. Realizri i
perspective. Conferina tiinifico-practic 10 ani ai Centrului de Stat pentru Atestarea i
Omologarea Produselor de Uz Fitosanitar i a Fertilizanilor. Chiinu, 2004, p. 31-32.
9. Lupascu L. Particulariti de aciune a enotaninurilor modificate asupra creterii
fungului Fusarium solani (Mart.) App. et Wr. n: Curierul Medical, 2008, nr 4, p. 14-18.
10. Lupacu L. Influena taninurilor modificate asupra fungului Fusarium oxysporum
Link.ex FR. n condiii in vitro. n: Revista Farmaceutic a Moldovei, 2008 a, nr 1-2, p. 40-46.
Matcovschi C., Procopiin V., Parii B. Ghid farmacoterapeutic. Chiinu: .S.F.E.-P. Tipografia
central, 2006. 1424 p.

103

11. Matcovschi C., Procopiin V., Parii B. Ghid farmacoterapeutic. Chiinu: .S.F.E.-P.
Tipografia central, 2006. 1424 p.
12. Neniescu C.D. Tratat elementar de chimie organic, Vol. II. Bucuresti: Editura
Tehnic, 1958. 1027 p.
13. Piatkin Gh., Krivoein Iu. Microbiologie. Chiinu: Lumina, 1993. 386 p.
14. Prisacari V., Paraschiv A., Jucovschi C. Evaluarea epidemiologica a factorilor de risc n
infeciile septico-purulente nozocomiale. n: Buletinul ASM. Stiinte medicale, 2005, nr 2, p. 7386.
15. Rudic V. BioR. Studii biomedicale i clinice. Chiinu, 2007. 376 p.
16. Vinevschi L., Bradu V. Modificarea rezistenei microorganismelor la antibiotice,
testate n laboratorul microbiologic al CMPR Ungheni. n: Epidemiologia i Microbiologia.
Mat.Congr.VI al Igienitilor, epidemiologilor i microbiologilor din Republica Moldova.
Chiinu, 2008, p. 264-265.
17. .. -
. : , 2005, 5, c. 54-56.
18. ..
.. . . . , 2005. 24 .
19. .. . : , 1977. 422 .
20. .., ..
-. : , 2007, 41, 1, . 40-47.
21. .., .., ..
. :
, 2007, 41, 2, . 164-171.
22. ..
. . . ., 2000. 25 .
23. . ( . . ..). : .
, 1982, 552 .
24. .. . : , 1988. 256 .
25. .., M .., ..
. :
, 1982, 5, . 308-309.
26. .. P.aeruginosa. :
, 1983, 1, . 45-47.
104

27. .., .., ..

. III.
,

. : , 1978, 3, . 65-67.
28. .. .
- : , 1982. 320 c.
29. .. . Lactobacillus fermentum
. : ,
, 2009, nr 2, c. 3-6.
30. Adekunie A.A. Antifungal property of the crude extracts of Brachystegia eurycoma
and Richardia brasiliensis. In: Nigerian Journal of Natural Products and Medicine, 2000, nr 4, p.
70-72.
31. Adeniyi B.A., Odufowora R.O. In vitro antimicrobial properties of Aspilla africana.
In: African Journal of Biomedical Research, 2000, vol. 3, p. 167-170.
32. Agarwal C., Singh R.P., Agarwal R. A polyphenolic fraction from grape seeds causes
irreversible growth inhibition of breast carcinoma MDA-MB468 cells by inhibiting mitogenactivated protein kinases activation and inducing G1 arrest and differentiation. In: Clinical
Cancer Research, 2000, nr 6, p. 2921-2930.
33. Agarwal C.H. et al. Fractionation of high molecular weight tannins in grape seed
extract and identification of procyanidin B2-3,3-di-O-gallate as a major active constituent
causing growth inhibition and apoptotic death of DU 145 human prostate carcinoma cells. In:
Carcinogenesis, 2007, vol. 28(7), p. 1478-1484.
34. Agnihotri N., Gupta V., Joshi R.M. Aerobic bacterial isolates from burn wound
infections and their antibiograms: A five year study. In: Burns, 2004, vol. 30, p. 241-243.
35. Ahmad I., Beg A.Z. Antimicrobial and phytochemical studies on 45 Indian medicinal
plants against multi-drug resistant human pathogens. In: Journal of Ethnopharmacology, 2001,
vol. 74(2), p. 113-123.
36. Akinyoola A.L., Ojo O.D., Oginni L.M. Microbiology of amputation wound
infection in a Nigerian setting. In: Journal of Wound Care, 2008, vol. 17(5), p. 202-206.
37. Alberto M.R., Canavasio M.A.R., Nadra M.C.M. Antimicrobial effect of
polyphenols from apple skins on human bacterial pathogens. In: Electronic Journal of
Biotechnology, 2006, vol. 9(3), p. 205-209.

105

38. Amarowicz R. et al. Antioxidant and antibacterial properties of extracts of green tea
polyphenols. In: A.C.S. symposium series, 2005, vol. 909, p. 94-106.
39. Anaissie E.J., Bodey G.P., Rinaldi M.G. Emerging fungal pathogens. In: European
Journal of Clinical Microbiological & Infectious Diseases, 1989, vol. 8(4), p. 323330.
40. Ananthakrishanan A.N. et al. Detection of extended spectrum beta Lactamase
producers among surgical wound infections and burn patients in JIPMER. In: Indian Journal of
Medical Microbiology, 2002, vol. 18, p. 160-165.
41. Anderson R.A et al. Isolation and characterization of polyphenol type-A polymers
from cinnamon with insulin-like biological activity. In: Journal of Agricultural and Food
Chemistry, 2004, vol. 52(1), p. 65-70.
42. Anderson R.L. et al. Investigations into the survival of Pseudomonas aeruginosa in
polaxamer-iodine. In: Applied Environmental Microbiology, 1984, vol. 4(7), p. 757-762.
43. Andrews J.M. Determination of minimum inhibitory concentrations. In: Journal of
Antimicrobial Chemotherapy, 2001, vol. 48, p. 516.
44. Ariga T. The antioxidative function, preventive action od disease and utilization of
proanthocyanidins. In: Biofactors, 2004, vol. 21(1-4), p. 197-201.
45. Arunachalam M. et al. Biodegradation of catechin. In: Proceedings of the Indian
National Science Academy, 2003, vol. 69(4), p. 353-370.
46. Asres K., Mazumder A., Bucar F. Antibacterial and antifungal activities of extracts of
combretum molle. In: Ethiopian Medical Journal, 2006, vol. 44(3), p. 269-277.
47. Athanasiadou S. et al. Direct antihelmintic effects of condensed tannins towards
different gastrointestinal nematodes of sheep: in vitro and in vivo studies. In: Veterinary
Parasitology, 2000, vol. 99, p. 205-219.
48. Ayton M. Wound care: wounds that won't heal. In: Nursing Times, 1985, vol. 81(46),
p. 16-19.
49. Bamberg R., Sullivan P., Conner-Kerr T. Diagnosis of wound infections: current
culturing practices of US wound care professionals. In: Wounds, 2002, vol. 14(9), p. 314-327.
50. Berek L. et al. Effects of mycotoxins on human immune functions in vitro. In:
Toxicology in Vitro, 2001, nr 15, p. 25-30.

106

51. Berenguer B. et al. Protective and antioxidant effects of Rhizophora mangle L.

against NSAID-induced gastric ulcers. In: Journal of Ethnopharmacology, 2006, vol. 103
(2), p. 194-200.
52. Bill T. et al. Quantitative swab culture versus tissue biopsy: a comparison in chronic
wounds. In: Ostomy/Wound Management, 2001, vol. 47(1), p. 34-37.
53. Bowler P., Davies B. The microbiology of acute and chronic wounds. In: Wounds,
1999, vol. 11(4), p. 72-78.
54. Bowler P., Duerden B., Armstrong D. Wound microbiology and associated
approaches to wound management. In: Clinical Microbiology Reviews, 2001, vol. 14(2), p. 244269.
55. Brown J.E. et al. Structural dependence of flavonoid interactions with Cu 2+ -ions:
implications for their antioxidant properties. In: Biochemical Journal, 1998, vol. 330, p. 1173
1178.
56. Browne A., Dow G., Sibbald R. Infected wounds: definitions and controversies. In:
Falanga V. (ed). Cutaneous Wound Healing. London, UK: Martin Dunitz, 2001.
57. Butter N.L., Dawson J.M., Wakelin D. Effect of dietary tannin and protein
concentration on nematode infection (Trichostrongylus colubriformis) in lambs. In: Journal of
Agricultural Science Cambridge, 2000, vol. 134, p. 89-99.
58. Butter N.L., Dawson J.M., Wakelin D. Effect of dietary tannins on gastrointestinal
nematodes. In: Journal of Agricultural Science Cambridge, 2001, vol. 137, p. 461-469.
59. Calvin M. Cutaneous wound repair. In: Wounds, 1998, vol. 10(1), p. 12-32.
60. Chaudhari M., Mengi S. Evaluation of phytoconstituents of Terminalia arjuna for
wound healing activity in rats. In: Phytotherapy Research, 2006, vol. 20(9), p. 799-805.
61. Chung K.-T., Lu Z., Chou M.W. Mechanism of inhibition of tannic acid and related
compounds on the growth of intestinal bacteria. In: Food and Chemical Toxicology, 1998, nr
36, p. 10531060.
62. Chung K.-T. et al. Growth inhibition of selected food-borne bacteria by tannic acid,
propyl gallate and related compounds. In: Letters in Applied Microbiology, 1993, nr 17, p. 29
32.
63. Collier M. A ten-point assessment plan for wound management. In: Journal of
Community Nursing, 2001, vol. 16(6), p. 22-26.
64. Collier M. Understanding wound inflammation. In: Nursing Times, 2003, vol. 99(25),
p. 63-64.
107

65. Collier M. Wound-bed management: key principles for practice. In: Journal of
Professional Nursing, 2002, vol. 18(4), p. 221-225.
66. Cooper R, Kingsley A, White R. Wound Infection and Microbiology. Medical
Communications

(UK)

Ltd

for

Johnson

&

Johnson

Medical,

2003.

www.worldwidewounds.com/.../Management-of-Wound-infections.htm
67. Costa S.L., Imlay J.A. Alkyl hydroperoxide reductase is the primary scavenger of
endogenous hydrogen peroxide in Escherichia coli. In: Journal of Bacteriology, 2001, vol. 183,
p. 7173-7181.
68. Costerton J.W., Stewart P.S., Greenberg E.P. Bacterial biofilms: a common cause of
persistent infections. In: Science, 1999, vol. 284 , p. 1318-1322.
69. Cutting K., Harding K. Criteria for identifying wound infection. In: Journal of
Wound Care, 1994, vol. 3(4), p. 198-201.
70. DallAgnol R. et al. Antimicrobial activity of some Hypericum species. In:
Phytomedicine, 2003, vol. 10(6-7), p. 511-516.
71. Das S., Prakash R., Devaraj S.N. Antidiarrhoeal effects of methanolic root extract of
Hemidesmus indicus (Indian sarsaparilla) - an in vitro and in vivo study. In: Indian Journal of
Experimental Biology, 2003, vol. 41(4), p. 363-366.
72. De Freitas V., Glories Y., Laquerre M. Incidence of Mollecular Structure in
Oxidation of Grape Seeds Procyanidins. In: Journal of Agricultural Food Chemistry, 1998, nr
46, p. 376-382.
73. Dharmananda S. Allnuts and the uses of Tannins in Chinese medicine. Proceedings of
Institutes for Traditional Medicine. In: African Journal of Biotechnology, 2003, p. 24-27.
74. Du Y., Guo H., Lou H. Grape seed polyphenols protect cardiac cells from apoptosis
via induction of endogenous antioxidant enzymes. In: Journal of Agricultural Food Chemistry,
2007, vol. 55(5), p. 1695-1701.
75. Du Y., Lou H. Catechin and proanthocyanidin B4 from grape seeds prevent
doxorubicin- induced toxicity in cardiomyocytes. In: European Journal of Pharmacology,
2008, vol. 591(1-3), p. 96-101.
76. Duca Gh., Lupacu T., Vlad P. Studies on the water solubilization processes of
oenotannins and their physico-chemical properties. In: Chemistry Journal of Moldova, 2006,
vol. 1, p. 74-79.
77. Dweck A.C. Herbal medicine for the skin. Their chemistry and effects on skin and
mucouse membranes. In: Personal Care Magazine, 2002, vol. 3, p. 1921.
108

78. Dynowska M. Hialohyphomycosis of the shank caused by Fusarium solani. In:

Mikology Lek, 1988, vol. 5, p. 241-245.
79. Engelhart S. et al. Pseudomonas aeruginosa outbreak in a haematology-oncology unit
associated with contaminated surface cleaning equipment. In: Journal of Hospital Infection,
2002, vol. 52(2), p. 93-98.
80. English M.P., Smith R.J., Harman R.R. The fungal flora of ulcerated legs. In: British
Journal of Dermatology, 1971, vol. 84(6), p. 567-581.
81. Falanga V., Grinnell F., Gilchrest B. Workshop on the pathogenesis of chronic
wounds. In: Journal of Investigative Dermatology, 1994, vol. 102(1), p. 125-127.
82. Ferreira D. Oligomeric proanthocyanidins: naturally occuring O-heterocycles. In:
Natural Products Report, 2002, vol. 19, p. 517-541.
83. Fitzpatrick D.F. et al. Isolation and Characterization of Endothelium-Dependent
Vasorelaxing Compounds from Grape Seeds. In: Journal of Agricultural Food Chemistry, 2000,
nr 48, p. 6384-6390.
84. Flanagan M. Variables influencing nurses selection of wound dressing. Journal of
Wound Care, 1992, vol. 1(1), p. 33-43.
85. Frazier R.A. et al.

Probing protein-tannin interactions by isothermal titration

microcalorimetry. In: Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2003, vol. 51, p. 5189-5195.
86. Friedman M. et al. Antimicrobial activities of tea catechins and theaflavins and tea
extracts against Bacillus cereus. In: Journal of Food Protection, 2006, vol. 69(2), p. 354-361.
87. Fumal I. et al.. The beneficial toxicity paradox of antimicrobials in leg ulcer healing
impaired by a polymicrobial flora: a proof of concept study. In: Dermatology, 2002, vol.
204(Suppl 1), p. 70-74.
88. Funatogawa K. et al. Antibacterial activity of hydrolyzable tannins derived from
medicinal plants against Helicobacter pylori. In: Journal of Microbiology, Immunology and
Infection, 2004, vol. 48, nr 4, p. 251-261.
89. Gabetta B. et al. Characterization of proanthocyanidins from grape seeds. In:
Fitoterapia, 2000, nr 71, p. 162-175.
90. Gang R.K. et al. Pseudomonas aeruginosa septicaemia in burns. In: Burns, 1999, vol.
25, p. 611-616.
91. Gardner S., Frantz R.A., Doebbeling B. The validity of the clinical signs and
symptoms used to identify localized chronic wound infection. In:
Regeneration, 2001, vol. 9(3), p. 178-186.
109

Wound Repair and

92. Gilchrist B. Taking a wound swab. In: Nursing Times, 2000, vol. 96(4 Suppl), p. 2-6.
93. Gonzalez-Manzano S. et al. Characterization of the Mean Degree of Polymerization
of Proanthocyanidins in Red Wines Using Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LCMS). In: Journal of Agricultural Food Chemistry, 2006, nr 54, p. 4326-4332.
94. Gradelski E. et al. Development of resistance in Pseudomonas aeruginosa to broadspectrum cephalosporins via step-wise mutations. In: Journal of Antimicrobial Chemotherapy.
European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, 1993, vol. 32, nr 6,
p. 75-80.
95. Greenberg J.T., Demple B. Overproduction of peroxide-scavenging enzymes in
Escherichia coli supresses spontaneous mutagenesis and sensitivity to redox-cycling agents in
oxyR-mutants. In: EMBO Journal, 1988, vol. 7, p. 2611-2617.
96. Gregory P.P. et al. The galU Gene of Pseudomonas aeruginosa Is Required for
Corneal Infection and Efficient Systemic Spread following Pneumonia but Not for Infection
Confined to the Lung. In: Infection and Immunity, 2004, vol. 72(7), p. 4224-4232.
97. Guarro J., Gene J. Opportunistic fusarial infections in humans. In: European Journal
of Clinical Microbiology & Infectious Diseases, 1995, vol. 14, nr 9, p. 741-754.
98. Guojing Z. et al. Antibacterial Properties of Tannic acid and Related Compounds
against the Fish Pathogen Cytophaga columnaris. In: Journal of Aquatic Animal Health, 1997,
vol. 9, p. 309-313.
99. Hagerman A.E., Butler I.G. Specificity of proanthocyanidin-protein interactions. In:
Journal of Biological Chemistry, 1981, vol. 256, p. 4494-4497.
100. Hamilton-Miller J.M.T. Antimicrobial properties of tea. In: Antimicrobial Agents
and Chemotherapy, 1995, vol. 39, nr 11, p. 2375-2377.
101. Hashimoto T., Kumazawa S., Nanjo F. Interaction of tea catechins with lipid
bilayers investigated with liposome systems. In: Bioscience, Biotechnology and Biochemistry,
1999, vol. 63, p. 2252-2255.
102. Heinrich M. et al. Fundamental of pharmacognosy and phytotherapy. In: Journal of
Ethnopharmacology, 2004, vol. 91(1), p. 177-183.
103. Heinzelmann M., Scott M., Lam T. Factors predisposing to bacterial invasion and
infection. In: American Journal of Surgery, 2002, vol. 183(2), p. 179-190.
104. Higaki S. et al. Characteristics of Pseudomonas aeruginosa isolated from skin
infections. In: Drugs under experimental and clinical research, 2001, vol. 27(4), p. 121-126.

110

105. Hisanori A. et al. Antibacterial action of several tannins against Staphylococcus

aureus. In: Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 2001, vol. 48, p. 487-491.
106. Ho K.Y. et al. Antimicrobial activity of tannin components from Vaccinium vitisidaea L. In: Journal of Pharmacy and Pharmacology, 2001, vol. 53, nr 2, p. 187-191.
107. Hori Y, Sato S., Hatai A. Antibacterial activity of plant extracts from azuki beans
(Vigna angularis) in vitro. In: Phytotherapy Research, 2006, vol. 20(2), p. 162-164.
108. Hoshino N. et al. Bactericidal activity of catechin-copper(II) complexes against
Staphylococcus aureus compared with Escherichia coli. In: Letters in Applied Microbiology,
2000, vol. 31, p. 213-217.
109. Hsieh M.C. et al. Antioxidative activity and active components of longan
(Dimocarpus longan Lour.) flower extracts. In: Journal of Agricultural Food Chemistry, 2008,
vol. 56(16), p. 7010-7016.
110. Ikigai H. et al. Bactericidal catechins damage the lipid bilayer. In: Biochimica et
Biophysica Acta, 1993, vol. 1147, p. 132-136.
111. Jones V., Milton T. When and how to use iodine dressings. In: Nursing Times, 2000,
vol. 96(45 Suppl), p. 2-3.
112. Jorgensen E.M., Marin A.B., Kennedy J.A. Analysis of the Oxidative Degradation
of Proanthocyanidins under Basic Conditions. In: Journal of Agricultural Food Chemistry, 2004,
nr 52, p. 2292-2296.
113. Karimi E.H., Pour K.P., Fahimeh G.H. Frequency of Pseudomonas aeruginosa
serotypes in burn wound infections and their resistance to antibiotics. In: Burns, 2002, vol. 28, nr
4, p. 340-348.
114.

Kehheth

T.

Pseudomonas

aeruginosa.

http://www.textbookofbacteriology.

net/pseudomonas.html (2008).
115. Khanna S. et al. Dermal wound healing properties of redox-active grape seed
proanthocyanidins. In: Free Radical Biology and Medicine, 2002, vol. 33(8), p. 1089-1096.
116. Kimura Y. et al. Characterization and antioxidative properties of oligomeric
proanthocyanidin from prunes, dried fruit of Prunus domestica L. In: Bioscience, Biotechnology
and Biochemistry, 2008, vol. 72(6), p. 1615-1618.
117. Kingsley A. A proactive approach to wound infection. In: Nursing Standard, 2001,
vol. 15(30), p. 50-58.
118. Kingsley A., Trudgian J., Shorney R. Wound healing and potential therapeutic
options. In: Professional Nurse, 2002, vol. 17(9), p. 539-544.
111

119. Kingsley A. The wound infection continuum and its application to clinical practice.
In: Ostomy/wound management, 2003, vol. 49, nr 7A, p. 1-7.
120. Kirov G, Kolean E. Microbiology and antibiotic treatment of the abdominal
gunshot injury. In: Khirurgiia(Sofiia), 2006, vol. 3, p. 47-54.
121. Kitano K. et al. Scaling effects of (-)- epigallocatechin gallate on protein kinase C
and protein phosphatase 2A. In: Biophysical Chemistry, 1997, vol. 65, p. 157-164.
122. Koga T. et al. Increase of antioxidative potential of rat plasma by oral administration
of proanthocyanidin-rich extract from grape seeds. In: Journal of Agricultural Food Chemistry.
1999, vol. 47(5), p. 1892-1897.
123. Kokane D.D. et al. Evaluation of wound healing activity of root of Mimosa pudica.
In: Journal of Ethnopharmacology, 2009, vol. 124(2), p. 311-315.
124. Krauze-Baranowska M. et al. Antifungal Activity of the Essential Oils from Some
Species of the Genus Pinus. In: Z Naturforsch, 2002, nr 57, p. 478-482.
125. Kuete V. et al. Antimicrobial activity of the methanolic extract from the stem bark
of tridesmostemon omphalocarpoides (Sapotaceae). In: Journal of Ethnopharmacology, 2006,
vol. 104(1-2), p. 5-11.
126. Kulciki V., Vlad P., Duca Gh. Investigation of grape seed proantocyanidins. In:
Chemistry Journal of Moldova, 2007, vol. 2, nr 1, p. 36-50.
127. Lari A.R., Alaghehbandan R. Nosocomial infections in a Iranian burn care centre.
In: Burns, 2000, vol. 26, p. 737-740.
128. Lebleu N. et al. Role of the cell-wall structure in the retention of bacteria by
microfiltration membranes. In: Journal of Membrane Science, 2009, vol. 326(1), p. 178-185.
129. Li L., Steffens J.C. Overexpression of polyphenol oxidase in transgenic tomato
plants results in enhanced bacterial disease resistance. In: Planta, 2002, vol. 215, p. 239-247.
130. Lim S.H., Darah I., Jain K. Antimicrobial activities of tannins extracted from
Rhizophora apiculata barks. In: Journal of Tropical Forest Science, 2006, vol. 18, nr 1, p. 59-65.
131. Lin C.C. et al. Antioxidant and hepatoprotective effects of punicalagin and
punicalin on acetaminophen-induced liver damage in rats. In: Phytotherapy Research, 2001, vol.
15(3), p. 206-212.
132. Lindsay J.A. Chronic sequelae of foodborne disease. In: Emerging Infectious
Diseases, 1997, nr 3, p. 443-452.

112

133. Liu P.V. The roles of various fractions of Pseudomonas aeruginosa in its
pathogenesis. II.

Effects of lecithinase and protease. In: Journal of Infectious Diseases, 1966,

vol. 116(1), p. 112116.

134. Liu Y.N., Shen X.N., Yao G.Y. Effects of grape seed proanthocyanidins extracts on
experimental diabetic nephropathy in rats. In: Wei Sheng Yan Jiu, 2006, vol. 35(6), p. 703-705.
135. Logrieco A. et al. Further data on specific trichothecene production by Fusarium
sect. Sporotrichiella strains. In: Mycological Research, 1990, vol. 94(5), p. 587-589.
136. Lopes G.C. et.al. Influence of extracts of Stryphnodendron polyphyllum Mart. and
Stryphnodendron obovatum Benth. on the cicatrization of cutaneous wounds in rats. In: Journal
of Ethnopharmacology, 2005, vol. 99, nr 2, p. 265-272.
137. Lupacu T., Duca Gh., Giurginca M., Vlad P., Lupacu L., Gromovoi T., Meghea
A. Natural Compounds with Antioxidant Properties. In: Key Engineering Materials
(Switzerland): Electrochemistry and physical chemical methods in serving materials for
sustainable development, 2009, vol. 415, p. 25-28.
138. Lupacu L., Rudic V., Cotos V., Lupascu T. Antimicrobial activity of the
autochthonous compound Enoxil. In : Journal of Biomedical Science and Engineering (USA),
2010 a, nr 8, vol. 3, p. 758-762.
139. Macnaughton S.J. et al. Physical stabilization and confocal microscopy of bacteria
on roots using 16S rRNA targeted, fluorescent-labeled oligonucleotide probes. In: Journal of
Microbiological Methods, 1996, vol. 26(3), p. 279-285.
140. Madhan B. et al. Stabilization of collagen using plant polyphenol: role of catechin.
In: International Journal of Biological Macromolecules, 2005, vol. 37(1-2), p. 47-53.
141. Mahmoud I.I. et al. Acylated flavonol glycosides from Eugenia jambolana leaves.
In: Phytochemistry, 2001, vol. 58, p. 12391244.
142. Malamou-Lada H. et al. Wound infections following posterior spinal
instrumentation for paralytic scoliosis. In: Clinical Microbiology and Infection, 1999, vol. 5, nr
3, p. 135-139.
143. Manjunatha B.K. Antibacterial activity of Pterocarpus santalinus//Department of
Botany, S.R.N.M.N. In: College of Applied Sciences, 2006, vol. 68, p. 115-116.
144. Marasos W.F.O. et al. Occurrence of Fusarium

moniliforme and fumonisins in

maize from high oesophageal cancer rate areas in Southern Africa and the USA. In:
Phytophylastica, 1992, vol. 24, nr 1, p. 111-116.

113

145. Masuda K. et al. Proanthocyanidin promotes free radical-scavenging activity in

muscle tissues and plasma. In: Applied Physiology, Nutrition and Metabolism, 2007, vol. 32(6),
p. 1097-1104.
146. Mechin L. et al. Adaptation of Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442 to
didecyldimethylammonium bromide induces changes in membrane fatty acid composition and in
resistance of cells. In: Journal of Applied Microbiology, 1999, vol. 86, p. 859-866.
147. Mehta M., Dutta P., Gupta V. Bacterial isolates from burn wound infections and
their antibiograms: A eight-year study. In: Indian Journal of Plastic Surgery, 2007, vol. 40, nr 1,
p. 25-28.
148. Mila I., Scalbert A. Tannin antimicrobial properties through iron deprivation: a new
hypothesis. Acta Horticulturae 381: International Symp. on Natural Phenols in Plant
Resistance/http.//www.acatahort.org/books/381/381_108.htm
149. Miller M. Wound infection unravelled. In: Journal of Community Nursing, 2001,
vol. 15(3), p. 31-36.
150. Mlambo V. et al. In vitro characteristics of separated tree components with added
polyethylene glycol (PEG) as a diagnostic tool for effect of tannins. In:

EAAP Satellite

Symposium. Wageningen, 2000, p. 80-81.

151. Molan A.L. et al. Effect of condensed tannins extracted from four forages on the
viability of the larvae of deer lungworms and gastrointestinal nematodes. In: Veterinary Record,
2003, vol. 147, p. 44-48.
152. Molan A.L. et al. The effect of condensed

tannins from seven herbages on

Trichostrongylus colubriformis larval migration in vitro. In: Folia Parasitologica, 2003, vol. 47,
p. 34-44.
153. Mota M.L.R., Thomas G., Barbosa F.J.M. Anti-Inflammatory Actions of Tannins
Isolated from the Bark of Anacardium occidentale L. In: Journal of Ethnopharmacology, 1985,
vol. 13, nr 3, p. 289-300.
154. Mukoyama A., Ushijima H., Nishimura S. Inhibition of rotavirus and enterovirus
infections by tea extracts. In: Japanese Journal of Medical Science, 1991, vol. 44, p. 181-186.
155. Murphy M., Armstrong D. Fusariosis in patients with neoplasic disease. In:
Infections in Medicine, 1995, nr 12, p. 63-67.
156. Murray M., Pizzorno J. Procyanidolic oligomers. In: Murray M., Pizzorno J., eds. In:
The Textbook of Natural Medicine. 2nd ed. London: Churchill Livingston, 1999, p. 899-902.

114

157. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Performance

standards for antimicrobial susceptibility testing. Twelfth Informational Supplement M100S12
NCCLS. Wayne, 2002.
158. National Prescribing Centre. Supplementary Prescribing: a resource to help
healthcare professionals to understand the framework and opportunities. National Health
Service, 2003.
159. Negroni R., Martino O., Robles A.M. Ulcera cutanea provocada por hongos del
genero Fusarium. In: Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical, 1997, vol. 30, nr 4,
p. 323-328.
160. Nicholson P. et al. Molecular Tools to Study Epidemiology and Toxicology of
Fusarium Head Blight of Cereals. In: European Journal of Plant Pathology. 2003, vol. 109, nr 7,
p. 691-703.
161. NINSS. Surveillance of Surgical Site Infection in English Hospitals: a national
surveillance and quality improvement programme. Public Health Laboratory Service, 2002.
162. Okesola A.O., Kehinde A.O. Bacteriology of non-surgical wound infections in
Ibadan, Nigeria. In: African Journal of Medical Science, 2008, vol. 37(3), p. 261-264.
163. Okoli C.O., Akah P.A., Okoli A.S.

Potentials of leaves of Aspilia africana

(Compositae) in wound care: an experimental evaluation. In: BMC Complementary and

Alternative Medicine, 2007, vol. 7, p. 24-28.
164. Okoli A.S. et al. Antibacterial activity of Harungana madagascariensis leaf extracts.
In: Phytotherapy Research, 2002, vol. 16(2), p. 174-179.
165. Okubo S., Toda M., Hara Y. Antifungal and fungicidal activities of tea extract and
catechin. In: Japanese Journal of Bacteriology, 1991, vol. 46, p. 509-514.
166. O'meara S.M. et al. Systematic review of antimicrobial agents used for chronic
wounds. In: British Journal of Surgery, 2001, vol. 88(1), p. 4-21.
167. Ozumba U.C., Jiburum B.C. Bacteriology of Burn Wounds in Enugu, Nigeria. In:
Burns, 2000, vol. 26, p. 178-180.
168. Ozumba U.C. Bacteriology of wound infections in the surgical wards of a teaching
hospital in Enugu, Nigeria. In: African Journal of Medicine and Medical Science, 2007, vol.
36(4), p. 341-344.
169. Packer L. The Antioxidant Miracle. New York, 1999. 276 p.

115

170. Palomino J.C. et al. Resazurin microtiter assay plate: simple and inexpensive
method for detection of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis. In: Antimicrobial Agents
and Chemotherapy, 2002, vol. 46, p. 27202722.
171. Parker M.S.., Barnes M. Use of the Coulter Counter to Measure the Swelling of
Bacterial Spores during Germination and Outgrowth. In: Journal of Applied Microbiology, 2009,
vol.30 (2), p. 299-303.
172. Pekic B. et al. Study of the Extraction of proanthocyanidins from grape seeds. In:
Food Chemistry, 1998, vol. 61, nr 1-2, p. 201-206.
173. Perkowski J., Dawidow U., Wojciech K.J. Advanced oxidation of tannic acid in
aqueous solution. In: Ozone: science &engineering, 2003, vol. 25, nr 3, p. 199-209.
174. Peschel A. et al. Staphylococcus aureus resistance to human defensins and evasion
of neutrophil killing via the novel virulence factor MprF is based on modification of membrane
lipids with l-lysine. In: Journal of Experimental Medicine, 2001, vol. 193(9), p. 1067-1076.
175. Pfaller M., Wenzel R. Impact of changing epidemiology of fungal infections in the
1990s. In: European Journal of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, 1992, vol. 11, p.
287-291.
176. Pinelo M., Laurie V.F., Waterhouse A.L. A Simple Method To Separate Red Wine
Nonpolymeric and Polymeric Phenols by Solid-Phase Extraction. In: Journal of Agricultural
Food Chemistry, 2006, nr 54, p. 2839-2844.
177. Plowman R. The socioeconomic burden of hospital acquired infection. In: Euro
Surveill, 2000, vol. 5(4), p. 49-50.
178. Pruitt B.A., Mcmanus A.T. Opportunistic infection in severely burned patients. In:
American Journal of Medicine, 1984, vol. 76(3A), p. 146-154.
179. Qarah S. Pseudomonas aeruginosa Infections. eMedicine Specialities>Infectious
Diseases>Medical, Dec 9, 2009.
180. Rane M.M., Mengi S.A. Comparative effect of oral administration and topical
application of alcoholic extract of Terminalia arjuna bark on incision and excision wounds in
rats. In: Fitoterapia, 2003, vol. 74(6), p. 553-558.
181. Ratty A.K., Sunamoto J., Das N.P. Interaction of flavonoids with 1,1-diphenyl-2picrylhydrazyl free radical, liposomal membranes and soybean lipoxygenase-1. In: Biochemical
Pharmacology, 1988, vol. 37, p. 989-995.
182. Rios J.L., Recio M.C. Medicinal plants and antimicrobial activity. In:
Journal of Ethnopharmacology, 2005, vol. 100, p. 80-84.
116

183. Rodgers G.L. et al. Predictors of infectious complications after burn injuries in
children. In: Infectious Diseases Journal, 2000, vol. 19(10), p. 990-995.
184. Romani A. et al. Evaluation of Antioxidant Effect of Different Extracts of Myrtus
communis L. In: Free Radical Research, 2004, vol. 38, nr 1, p. 97-103.
185. Rowsey J.J. et al. Fusarium oxysporum endophthalmitis. In: Archives of
Ophthalmology, 1979, vol. 97(1), p. 103105.
186. Roychowdhury S. et al. Protection of primary glial cells by grape seed
proanthocyanidin extract against nitrosative/oxidative stress. In: Nitric Oxide, 2001, vol. 5(2), p.
137-149.
187. Snchez Perera L.M. et al. Polyphenol and phytosterol composition in an
antibacterial extract from Rhizophora mangle L. bark. In: Journal of Herbal Pharmacotherapy,
2007, vol. 7(3-4), p. 107-128.
188. Santos S.C., Mello J.C.P. Taninos. In: Simoes C.M.O., Schenkel E.P., Gosmann G.,
Mello J.C.P., Mentz L.A., Petrovick P.R. Farmacognosia da planta ao medicamento. 5. ed. Porto
Alegre/ Florianopolis: Editora da URFGS/UFSC, 2004, p. 615-656.
189. Santos-Buelga C., Scalbert A. Proanthocyanidins and Tannin-like Compounds
Nature, Occurrence, Dietary Intake and Effect on Nutrition and Health. In: Journal of the Science
of Food and Agriculture, 2000, nr 80, p. 1094-1117.
190. Sathiya M., Muthuchelian K. Studies on Phytochemical Profile and Antibacterial
Activity of Ethanolic Leaf Extract of Tabebuia rosea (Bertol.) DC. In: Ethnobotanical Leaflets,
2008, vol. 12, p. 1153-1157.
191. Scalbert A. Antimicrobial properties of tannins. In: Phytochemistry.Oxford:
Pergamon Press, 1991, vol. 30, nr 12, p. 3875-3883.
192. Schofield P., Mbugua D.M., Pell A.H. Analysis of condensed tannins: a review. In:
Animal Feed Science and Technology, 2001, vol. 91, p. 21-40.
193. Scott K.F., Jarvis W.R.. Epidemiology of Nosocomial Fungal Infections. In:
Clinical Microbiology Reviews, 1996, vol. 9, nr 4, p. 499-511.
194. Scrinivasan D. et al. Antimicrobial activity of certain Indian medicinal plants used
in folkloric medicine. In: Journal of Ethnopharmacology, 2001, vol. 74, p. 217220.
195. Sengupta S. et al. Acinetobacter baumannii-an emerging nosocomial pathogen in
the burns unit. Manipal, India. In: Burns, 2001, vol. 27, p. 140-144.
196. Siebenhaar F. et al. Control of Pseudomonas aeruginosa Skin Infections in Mice Is
Mast Cell-Dependent. In: American Journal of Pathology, 2007, vol. 170, p. 1910-1916.
117

197. Sierra G. Hemolytic effect of a glycolipid produced by Pseudomonas aeruginosa.

In: Antonie Van Leewenhoek, 1960, vol. 26, p. 189-192.
198. Singh N.P. et al. Changing Trends in bacteriology of burns in the burns units, Delhi,
India. In: Burns, 2003, vol. 29, p. 129-132.
199. Singh R.P. et al. Mechanisms of action of novel agents for prostate cancer
chemoprevention. In: Endocrine-Related Cancer, 2006, vol. 13, p. 751-778.
200. Singletary K.W. et al. Effect of grape seed proanthocyanidins on colon aberrant
crypts and breast tumors in a rat dual-organ tumor model. In: Nutrition and Cancer, 2001, vol.
39, p. 252-258.
201. Sivakumaran S. et al. Variation of Proanthocyanidins in Lotus Species. In: Journal of
Chemical Ecology, 2006, vol. 32, nr 8, p. 1797-1816.
202. Slotnick I. J., H. J. Sacks. The growth of Pseudomonas in blood cultures. In:
American Journal of Clinical Pathology, 1972, vol. 58, p. 723725.
203. Smith A.H., Imlay J.A., Mackie R.I. Increasing the oxidative stress response allows
Escherichia coli to overcome inhibitory effects of condensed tannins. In: Applied and
Environmental Microbiology, 2003, vol. 69(6), p. 3406-3411.
204. Smith A.H., Mackie R.I. Effect of Condensed Tannins on Bacterial Diversity and
Metabolic Activity in the Rat Gastrointestinal Tract. In: Applied and Environmental
Microbiology, 2004, vol. 70, nr 2, p. 1104-1115.
205. Sofowara E.A. Medicinal plants and traditional Medicines in Africa. John Wiley
and Sons Ltd, 1982, p. 64-79.
206. Souza S.M. et al. Antiinflammatory and antiulcer properties of tannins from
Myracrodruon urundeuva Allemo (Anacardiaceae) in rodents. In : Phytotherapy Research,
2007, vol. 21(3), p. 220-225.
207. Spann C.T., Tutrone W.D., Weinberg J.M. Topical antibacterial agents for wound
care: a primer. In: Dermatologic Surgery, 2003, vol. 29, p. 620626.
208. Springfield E.P. et al.

An assessment of two Carpobrotus species extracts as

potential antimicrobial agents. In: Phytomedicine, 2003, vol. 10(5), p. 434-439.

209. Sroka Z. Antioxidative and Antiradical Properties of plant Phenolics. In: Z.
Naturforsch, 2005, p. 833-843.
210. Stephens P. et al. Anaerobic cocci populating the deep tissues of chronic wounds
impair cellular wound healing responses in vitro. In: British Journal of Dermatology, 2003, vol.
148, p. 456-466.
118

211. Strobel G.A. Bacterial phytotoxins. In: Annual Review of Microbiology, 1977, vol.
31, p. 205-224.
212. Sumitra M. et al. Emblica officinalis exerts wound healing action through upregulation of collagen and extracellular signal-regulated kinases (ERK1/2). In: Wound Repair
and Regeneration, 2009, vol. 17(1), p. 99-107.
213. Surch Y.J. Cancer chemoprevention with dietary phytochemicals. In: Nature
Reviews Cancer, 2003, vol. 3, p. 768-780.
214. Tan H.H., Tay Y.K., Goh C.L. Bacterial Skin Infections at a Tertiary
Dermatological Centre. In: Singapore Medical Journal, 1998, vol. 39, nr 8, p. 353-356.
215. Tao C. et al. Microbiologic study of the pathogens isolated from wound culture
among Wenchuan earthquake survivors. Diagn. Microbiol. Infect. Diseases, 2009, vol. 63, p.
268-270.
216. Teissedre P.L., Waterhouse A.L., Frankel E.N. Principal Phenolic Phytochemical in
French Syrah and Grenache Rhone Wines and Their Antioxidant Activity in Inhibiting
Oxydation of Human Low Density Lypoproteins. In: Journal International des Sciences de la
Vigne et du Vin, 1995, vol. 29, nr 4, p. 205-212.
217. Terao J., Piskula M., Yao Q. Protective effect of epicatechin,epicatechin gallate,
andquercetin on lipid peroxidation in phospholipid bilayers. In: Archives of Biochemistry and
Biophysics, 1994, vol. 308, p. 278-284.
218. Thipyapong P. et al. Antisense downregulation of polyphenol oxidase results in
enhanced disese susceptibility. In: Planta, 2004, vol. 220, p. 105-117.
219. Timbola A.K. et al. A new flavonol

from leaves of Eugenia jambolana. In:

Fitoterapia, 2002, vol. 73, p. 174176.

220. Toda

M. et al. The bactericidal activity of tea and coffee. In: Applied

Microbiology, 1989, vol. 8, p. 123-125.

221. Toda S. Antioxidative effects of polyphenols in leaves of Houttuynia cordata on
protein fragmentation by copper-hydrogen peroxide in vitro. In: Journal of Medicinal Food,
2005, vol. 8(2), p. 266-268.
222. Tsuchiya H. Effects of green tea catechins on membrane fluidity. In: Pharmacology,
1999, vol. 59, p. 34-44 .
223. Uchida S. et al. Condensed tannins scavenge active oxygen free radicals. In: Journal
of Medical Sciences Research, 1987, nr 15, p. 831-832.

119

224. Valencia I.C., Kirsner R.S., Kerdel F.A. Microbiologic evaluation of skin wounds:
alarming trend toward antibiotic resistance in an inpatient dermatology service during a 10year
period. In: Journal of American Academy of Dermatology, 2004, vol. 50, p. 845849.
225. Veluri R. et al. Fractionation of grape seed extract and identification of gallic acid as
one of the major active constituents causing growth inhibition and apoptotic death of DU145
human prostate carcinoma cells. In: Carcinogenesis, 2006, vol. 27, p. 1445-1453.
226. Veluri R. et al. Phytotoxic and antimicrobial activities of catechin derivates. In:
Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2004, vol. 52, nr 5, p. 1077-1082.
227. Vidal S. et al. Changes in Proanthocyanidin Chain Length in Winelike Model
Solutions. In: Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2002, nr 50, p. 2261-2266.
228. Vigil K.J. et al. Coliform and Escherichia coli Contamination of Desserts Served in
Public Restaurants from Guadalajara, Mexico, and Houston, Texas. In: American Journal of
Tropical Medicine and Hygiene, 2009, vol. 80(4), p. 606-608.
229. Visconti A. et al. Toxicity of some Fusarium section Sporotrichiella strains
mycotoxin production. In: Applied Environmental Microbiology, 1992, vol. 58(2), p. 769-772.
230. White R.J., Cooper R., Kingsley A. Wound colonization and infection: the role of
topical antimicrobials. In: British Journal of Nursing, 2001, vol. 10(9), p. 563-578.
231. Wilson J.A. et al. A user evaluation of the Nosocomial Infection National
Surveillance System: surgical site infection module. In: Journal of Hospital Infection, 2002, vol.
52(2), p. 114-121.
232. www.healthcentral.com
233. www. pasteur.fr/ recherche/rar
234. Xu Ws. Bacterial ecology on burn wound and antibacterial agent therapy. In:
Zhonghua Shao Shang Za Zhi, 2008, vol. 24(5), p. 334-336.
235. Xu X. et al. Effects of sea buckthorn procyanidins on healing of acetic acid-induced
lesions in the rat stomach. In: Asia Pacific Journal of Clinical Nutrition, 2007, vol. 16(1), p. 234238.
236. Yamakoshi J. et al. Procyanidin-rich extract from grape seeds prevents cataract
formation in hereditary cataractous (ICR/f) rats. In: Journal of
Chemistry, 2002, vol. 50(17), p. 4983-4988.

120

Agricultural and

Food

237. Yokozawa T. et al. Antioxidative activity of green tea treated with radical initiator 2,
2'-azobis(2-amidinopropane) dihydrochloride. In: Journal of Agricultural and Food Chemistry,
2000, vol. 48(10), p. 5068-5073.
238. Young J.B. et al. Opportunistic peritonitis in continuous ambulatory peritoneal
dialysis. In: Clinical Nephrology, 1984 , vol. 22(5), p. 268269.

121

ANEXE

122

ANEXA 1
Brevet de invenie. 3113 G2, MD, A 01 N 65/00. Compus ce posed activitate fungitoxic pentru
ciuperca Fusarium oxysporum Snyd.et Hans / Cererea depus 02.08.2006, BOPI nr 8/2006

123

124

ANEXA 2
Brevet de invenie. 3125 G2, MD, A01N 65/00. Procedeu de obinere a enotaninurilor
hidrosolubile/ Cererea depus 08.02.2006, BOPI nr 9/2006

125

126

ANEXA 3
Brevet de invenie. 3139 G2, MD, A 01 N 65/00. Compus ce posed activitate fungitoxic
pentru ciuperca Fusarium solani (Mart.) App. Et. Wr. / Cererea depus 08.02.2006, BOPI nr
9/2006

127

128

ANEXA 4
Brevet de invenie. 3979 F1, MD, C 08 H 5/00, C 07 D 311/30. Compus
cu proprieti antioxidante / Cererea depus 30.09.2008, BOPI, nr 11/2009

129

130

ANEXA 5
Act de implementare al Regulamentului Tehnologic de producere a preparatului
Farmaceutic Enoxil, soluie alcoolic 5 i 10% din 05.11.2009

131

ANEXA 6

Act de implementare al Regulamentului Tehnologic de producere a preparatului

Farmaceutic Enoxil, soluie apoas 5 i 10% din 05.11.2009

132

ANEXA 7
Act de implementare al Regulamentului Tehnologic de producere a preparatului
Farmaceutic Enoxil, unguent de 1 i 5% din 05.11.2009

133

ANEXA 8

Aviz emis de Agenia Medicamentului pentru desfurarea Studiului Clinic

134

135

Declaraia privind asumarea rspunderii

Subsemnatul, declar pe rspundere personal c materialele prezentate n teza de

doctorat sunt rezultatul propriilor cercetri i realizri tiinifice. Contientizez c, n caz contrar,
urmeaz s suport consecinele n conformitate cu legislaia n vigoare.

Semntura:

Lupacu Lucian

29.05.2011

136

CV AL AUTORULUI

Nume, prenume:
LUPACU Lucian.
Data i locul naterii:
26 noiembrie 1978, or. Chiinu, R. Moldova
Cetenia:
Republica Moldova
Studii:
1995-2001 Universitatea de Stat de Medicin i Farmacie N.Testemianu din Moldova,
Facultatea de Medicin General.
2001-2003 Studii postuniversitare prin rezideniat la specialitatea Microbiologie.
2006-2009 Doctorand al Institutului de Microbiologie i Biotehnologie al AM

la

specialitatea Microbiologie.
Domenii de interes tiinific:
- Microbiologie.
- Specializare n domeniul testrii activitii antimicrobiene a unor preparate taninice de origine
natural.
- Studii de evaluare a eficacitii clinice a preparatelor de origine taninic.

137

Activitatea profesional:
2009 prezent cercettor tiinific al Institutului de Microbiologie i Biotehnologie al AM, n
cadrul Coleciei Naionale de Microorganisme Nepatogene.
Participarea la proiecte tiinifice naionale i internaionale:
1.Proiect instituional (2006-2010) Valorificarea i conservarea resurselor microbiene prin
biotehnologii competitive clasice i moderne 06.411.017A
2. Program de Stat Nr.7 din cadrul CSDT(2007-2008) Evaluarea activitii preparatelor
medicamentoase i agricole obinute n baza substanei biologic active ENOXIL n condiii
clinice i de cmp 07.411.01.05 PA
3. Proiect Internaional INTAS (2006-2008) Optimizarea acidului tartric i a extraciei
enotaninice din deeurile industriei vinicole i utilizarea lor pentru sinteza noilor compui cu
activiti biologice i proprieti antioxidante 05 -104-7505
4. Proiect Internaional Bilateral cu Romnia (2010-2012) Obinerea i valorificarea unor
noi produse de uz dermatologic pe baz de extracte naturale cu proprieti terapeutice
amplificate 347. RoA

Participri la foruri tiinifice naionale i internaionale:

Conferina IV-a Internaionala a Tinerilor Cercettori, Chiinu, 10 Noiembrie, 2006;
Conferina de Inginerie Biomedical INGIMED 2006, Editia VII, Bucureti, Romnia, 9-10
noiembrie 2006; Conferina Internaional a Tinerilor Cercettori, Ediia VI, Chiinu, 0607.11.2008; Congresul VI al igienitilor, epidemiologilor i microbiologilor din R.Moldova,
Chiinu, 23-24 octombrie, 2008; a XII-a Conferin Naional de Microbiologie cu participare
internaional, Sibiu, Romnia, 30.10.2008-01.12.2008.
Lucrri tiinifice publicate 19, dintre care:
articole n reviste recenzate 5, dintre care 2 de autor;
articole n culegeri tematice 3;
teze ale comunicrilor tiinifice 7;
brevete de invenie 4.
Cunoaterea limbilor: romn, rus, englez.
138

Date de contact:
LUPACU Lucian
MD 2001 Chiinu, str. Academiei 1, of. 254, tel. +373 (22) 73 96 09; 069662968
e-mail: lucian1978@mail.ru

139