Anda di halaman 1dari 14

ALT (Angka Lempeng Total)

TPC (Total Plate Count)

Tujuan
Menghitung jumlah koloni bakteri pada
suatu bahan pangan
Mengetahui mutu mikrobiologis suatu
bahan pangan

Prinsip
Jika mikroorganisme ditumbuhkan pada
suatu media agar, maka mikroorganisme
tersebut akan tumbuh dan berkembang
biak dengan membentuk koloni yang
dapat dilihat langsung dengan mata serta
dapat dihitung jumlahnya.

Metode agar cawan merupakan cara yang


paling sensitif untuk menentukan jumlah
mikroorganisme karena beberapa hal:
1. Hanya sel yang masih hidup yang dihitung
2. Beberapa jenis mikroorganisme dapat
dihitung sekaligus
3. Dapat digunakan untuk mengisolasi dan
mengidentifikasi mikroorganisme karena

Beberapa kelemahan metode agar cawan

Hasil perhitungan mungkin tidak menunjukkan


hasil
1 yang sebenarnya
Media dan kondisi inkubasi yang berbeda
mungkin menghasilkan nilai yang berbeda
Mikroorganisme yang ditumbuhkan harus dapat
tumbuh pada media padat dan membentuk
koloni yang kompak, jelas dan tidak menyebar
Membutuhkan persiapan dan waktu inkubasi
yang relatif lama

Penentuan ALT dapat dilakukan dengan 2


cara :

Metode agar cawan tuang (pour plate)

yaitu memasukkan contoh terlebih dulu,


kemudian menambahkan media agar
Metode agar cawan sebar (spread plate)
yaitu memasukkan terlebih dulu media
agar ke dalam cawan petri, setelah agar
membeku contoh diratakan pada
permukaan agar dengan menggunakan
batang gelas bengkok

Peralatan

Timbangan dengan ketelitian 0.0001 gram


Autoclave
Inkubator
Cawan petri
Botol pengencer / tabung reaksi
Blender yang dapat disterilkan / stomacher
Pipet
Batang gelas bengkok
Alat penghitung koloni

Media dan pengencer


Media : Plate Count Agar
Pengencer :
- Larutan Butterfields Phosphate atau
- Larutan NaCl 0,85% atau
- Larutan Pepton 0,1%

Preparasi contoh
Berat contoh yang akan diuji diambil dengan

ketentuan sebagai berikut : Contoh dengan


berat 1 kg : contoh diambil secara acak dan
dipotong kecil-kecil hingga beratnya mencapai
100 gram
Contoh dengan berat 1 4,5 kg : contoh diambil
secara acak dan dipotong kecil-kecil hingga
beratnya mencapai 300 gram.
Contoh dengan berat 4,5 kg : contoh diambil
dan dipotong kecil-kecil hingga beratnya
mencapai 500 gram

Prosedur
Timbang 25 g contoh, tambahkan 225 ml
pengencer, hancurkan dengan blender atau
stomacher ----- pengenceran 10 -1
Ambil 1 ml larutan dengan pengenceran 10 -1,
masukkan ke dalam 9 ml pengencer ------
pengenceran 10 -2
Pipet 1 ml dari setiap pengenceran yang
dikehendaki, masukkan ke dalam cawan petri
steril, tuangi dengan 12 15 ml PCA, putar-putar
supaya rata
Setelah beku, balik, inkubasikan pada suhu 351oC
selama 48 2 jam

Pembacaan dan perhitungan koloni pada cawan


petri.
Cawan dengan jumlah koloni 25 250 dan bebas

spreader : catat pengenceran yang digunakan dan


hitung jumlah koloni. Untuk perhitungan koloni yang
menggunakan metode agar cawan sebar, jumlah koloni
yang dihitung dikalikan 10, kemudian dikalikan
pengenceran yang digunakan.
Cawan dengan jumlah koloni 250 : bila jumlah koloni
pada setiap cawan 250 pada seluruh pengenceran
maka laporkan hasilnya sebagai jumlah tak terhingga
atau TBUD (tak bisa untuk dihitung).
Cawan tanpa koloni atau 25 : bila cawan dari semua
pengenceran tidak menghasilkan koloni atau 25, lapor
kan jumlah nya 25 dikalikan pengenceran terendah
yang digunakan.

Pelaporan
Untuk menghasilkan perhitungan yang akurat dan teliti, maka

laporkan hasilnya dengan dua angka (digit) pertama sebagai hasil


pembulatan.
Bulatkan keatas dengan cara menaikkan angka kedua menjadi
angka yang lebih tinggi bila angka ketiga adalah 6, 7, 8 dan 9 dan
gunakan angka 0 untuk masing-masing angka berikutnya.
Bulatkan ke bawah bila angka ketiga adalah 1, 2, 3 dan 4. Bila
angka ketiga 5, bulatkan keatas. Bila angka kedua ganjil bulatkan
keatas dan bulatkan kebawah bila angka kedua genap.
Contoh :
Hasil perhitungan
ALT
10. 600
11.000
10. 400
10.000
13. 500
14.000
12. 500
12.000

Pengenceran
Jumlah koloni

1 : 100
246 dan 238

Rumus :
c
N = ----------------------------------[(1 x n ) + (0,1 x n )] x (d)

1 : 1000
34 dan 29

Contoh Perhitungan
Pengenceran
Jumlah koloni
N=

=
=
=

1 : 100
246 dan 238

(246+238+34+29)
[(1x2) + (0,1x2)] x 10 -2
547 : 0,022
24.863
25.000

1 : 1000
34 dan 29