Anda di halaman 1dari 10

BAB XIII

KROMATOGRAFI GAS SPEKTROSKOPI MASSA


(GCMS)

A. Prinsip dasar GCMS


Kromatografi Gas Spektroskopi Massa atau sering disebut GCMS (Gas
Chromatography Mass Spectrometry) adalah teknik analisis yang menggabungkan dua metode
analisis, yaitu Kromatografi Gas dan Spektroskopi Massa.
Kromatografi Gas adalah metode analisis, dimana sample terpisahkan secara fisik
menjadi bentuk molekul-molekul yang lebih kecil (hasil pemisahan dapat dilihat berupa
Kromatogram). Sedangkan spektroskopi massa adalah metode analisis, dimana sample yang
dianalisis akan diubah menjadi ion-ion gas-nya, dan massa dari ion-ion tersebut dapat diukur
berdasarkan hasil deteksi berupa Spektrum Massa).
Pada GC hanya terjadi pemisahan untuk mendapatkan komponen yang diinginkan,
sedangkan bila dilengkapi dengan MS (berfungsi sebagai detector) akan dapat mengidentifikasi
komponen tersebut, karena bisa membaca Spectrum Bobot Molekul pada suatu komponen,
juga terdapat LIBRARY (reference) pada software.

B. Proses Pemisahan pada GCMS


Pemisahan komponen senyawa dalam GCMS terjadi didalam kolom (kapiler) GC dengan
melibatkan dua fase, yaitu fase diam dan fase gerak. Fase diam adalah zat yang ada didalam
kolom, sedangkan fase gerak adalah gas pembawa (Helium ataupun Hidrogen dengan
kemurnian tinggi, yaitu 95,%).
Proses pemisahan dapat terjadi karena terdapat perbedaan kecepatan alir dari tiap
molekul didalam kolom. Perbedaan tersebut dapat disebabkan oleh perbedaan afinitas antar
molekul dengan fase diam yang ada didalam kolom. Selanjutnya komponen-komponen yang
telah dipisahkan tersebut masuk ke dalam ruang MS yang berfungsi sebagai detektor Secara
intrumentasi, MS adalah detektor bagi GC.

Gambar 13.1. Model proses pemisahan pada GCMS

Keterangan:
Kurva dengan warna garis hitam adalah kromatogram. Dan garis-garis berwarna merah adalah
spectrum massa.

KROMATOGRAFI GAS
SPEKTROSKOPI MASSA

13
2

Sample-sample yang dapat dianalisis dengan menggunakan GCMS, harus memenuhi


beberapa syarat, diantaranya:
o

Dapat diuapkan hingga suhu ~400 C;


o
Secara termal stabil (tidak terdekomposisi pada suhu ~400 C);
Sample-sample lainnya dapat dianalisis setelah melalui tahapan preparasi yang khusus.
1. Instrumentasi GCMS
Bagian-bagian dari instrumen GC adalah sebagai berikut:
Pengatur aliran gas (Gas Flow Controller);
Tempat injeksi sample (Injector);
Kolom (tempat terjadinya pemisahan);
Lalu dihubungkan pada interface (fungsi interface adalah sebagai penghubung antara GC
dan MS).
Sedangkan bagian-bagian dari MS adalah sebagai berikut:
Tempat masuk sample (melalui interface);
Sumber ion (Ion Source);
Pompa vakum (Vacuum Pump);
Penganalisis Massa (Mass Analyzer);
Detektor (Electron Multiplier Detector).
Sistem Pengolah Data (Personal Computer)
Setelah data tedeteksi, lalu data dikirimkan ke Sistem Pengolah Data (pada Personal
Computer) untuk diolah sesuai dengan tujuan analisis.

Gambar 13.2. Bagian-bagian Instrumen GCMS QP2010

C. Kegunaan bagian-bagian instrument


1. Pengatur Aliran Gas (Gas Flow Controller);
Untuk mengatur aliran gas didalam GC. Pada GCMS QP 2010, menggunakan GFC
elektrik. Kelebihannya bila dibandingkan dengan yang manual adalah:
Lebih mudah penggunaannya;

Mengurangi kesalahan yang mungkin terjadi dalam pengaturan manual, misal Split
Ratio;
Meningkatkan keakuratan pengulangan analisis.
2. Injektor (Sample Injector);
Sebagai tempat injeksi sample. Adapun fungsi secara mendetail adalah:
Menguapkan sample (pelarut dan analat);
Mencampurkan sample dengan gas pembawa;
Menyalurkan campuran gas tersebut ke dalam kolom.
3. Kolom (Column);
Umumnya GC menggunakan kolom kapiler (capillary column). Fungsi kolom adalah
sebagai tempat terjadinya pemisahan molekul-molekul dalam sample.
Macam-macam kolom :
Wal Coated Open Tubular (WCOT), adalah kolom yang dilapisi oleh lapisan tipis polimer pada
dinding kolom bagian dalamnya;
Pours Layer Open Tubular (PLOT), adalah kolom yang dilapisi oleh partikel padat yang
berrongga/porous pada dinding kolom bagian dalam;
PackedCapillary, adalah kolom yang diisi penuh oleh partikel padat didalam kolom. Zat pengisi
kolom (WCOT) pada umumnya adalah: Polysiloxane, atau Polyethyleneglycol. Ukuran
kolom :
Panjang: Biasanya berkisar dari 30~60 m.
Diametr bagian dalam (i.d): Biasanya 0,25mm (narrow bore), 0,32mm (semi wide bore), atau
0,53mm (wide bore).
Ketebalan fase diam: Biasanya berkisar dari 0,1~3 mikron.
4. GCMS Interface
GCMS interface memiliki fungsi untuk mengirimkan sample dari GC ke MS dengan
meminimalkan kehilangan sample saat pengiriman. Untuk instrumen GCMS QP2010,
menggunakan interface sambungan langsung (direct interface). Artinya kolom langsung
masuk ke dalam alat MS. Model interface seperti ini memiliki kelebihan dalam
penyesuaian suhu yang lebih cepat, dari dingin ke panas atau sebaliknya.
5. Sumber Ion (Ion Source)
Memiliki fungsi untuk mengionkan sample yang berbentuk gas sebelum dianalisis di
Penganalisis Massa (Mass Analyzer). Ada tiga macam ionisasi yang dapat dilakukan oleh
GCMS QP2010, yaitu:
(EI) Electron Impact Ionization,
(P)CI ((Positive) Chemical Ionization), dan
NCI (Negative Chemical Ionization).
Sedangkan gambaran secara singkatnya adalah sebagai berikut:
EI adalah teknik ionisasi dengan menggunakan elektron energi tinggi, yaitu sebesar 70 eV.
Memiliki kelebihan bila digunakan untuk identifikasi senyawa, karena pemisahan
molekul yang terjadi cukup baik.
(P)CI adalah teknik ionisasi dengan menggunakan gas pembantu (reagent gas). Gas yang
dapat digunakan antara lain adalah metana (CH4), isobutana (C4H10), atau Amoniak
(NH3). Digunakan untuk proses ionisasi yang lebih ringan (dibandingkan dengan EI).
Menghasilkan ion gas positif yang akan bereaksi dengan analat/sample.

NCIadalah teknik ionisasi dengan menggunakan gas pembantu (reagent gas) sama dengan PCI.
Perbedaannya terletak pada ion gas yang dihasilkan, yaitu menghasilkan ion gas
negatif. Bersifat selektif, sehingga sangat sensitif (karena meminimalisir noise pada
Spektrum Massa). Dalam analisis biasa digunakan untuk senyawa dengan kandungan
unsur halogen.
Selain itu, dalam mode NCI juga terdapat mode pilihan lain yaitu SEI (Simulated EI), dan
SCI (Simulated CI). Kepekaan SEI dan SCI tidaklah sama seperti EI, dan (P)CI. Kedua
mode itu memiliki fungsi untuk melakukan analisis secara EI dan CI dalam mode NCI,
tanpa mengubah Sumber Ion secara fisik.
6. Sistem Vakum (Vacuum System)
a. Dua tipe vakum yang dimiliki oleh GCMS QP2010, yaitu:
Pompa vakum tinggi, memiliki fungsi untuk mengurangi dan mempertahankan tekanan
pada MS saat analisis. Tekanan tinggi yang dipertahankan itu juga dapat menambah
sensitivitas pada proses analisis Spektrum Massa pada MS.
Pompa vakum tinggi pada GCMS PQ2010 terdiri dari dua buah Turbo Molecular Pump
dengan spesifikasi berbeda (260 L/s dan 65 L/s).
Pompa vakum rendah, memiliki fungsi untuk mengurangi tekanan udara luar didalam MS.
b. System vakum diperlukan karena:
Ion-isample harus berjalan dari sumber ion menuju detektor tanpa, atau dengan sedikit
tumbukan dengan partikel-partikel lainnya.
Mengurangi reaksi-reaksi ion-molekular
Mengurangi gangguan (background interference) dan meningkatkan sensitivitas
Memperpanjang umur filamen
7. Penganalisis Massa (Mass Analyzer)
Mass analyzer terdiri dari empat batang logam yang dapat diberikan muatan
(Quadrupole), baik positif ataupun negatif. Berfungsi secara selektif dengan mengatur
sendiri voltase dari muatan batangan logam untuk berbagai massa ion. Sehingga ion-ion
yang dapat melewatinya hanya ion-ion yang sesuai dengan voltase dan massa ion yang
diinginkan.
Quadrupole memisahkan ion-ion berdasarkan stabilitas osilasi ion-ion didalam ruang
Quadrupole.

Gambar 13.3. Sistematika Kerja Quadrupole

8. Detektor
Ion-ion yang keluar dari penganalisis massa dideteksi dan jumlahnya diukur oleh
detektor. Dalam GCMS QP2010 menggunakan Electron Multiplier Detector. Kelebihan
dari detektor macam ini adalah sensivitasnya yang lebih baik dari detektor biasa. Dibantu

oleh lensa tambahan (overdrive lens), detektor akan mendapat hasil yang lebih akurat
karena partikel-partikel noise (seperti molekul-molekul netral) dihilangkan.

D. Faktor-faktor yang harus dipertimbangkan sebelum memulai analisis


a. Karakter sampel, kondisi dan tujuan analisis :
-

Sample: memenuhi persyaratan, yaitu mudah menguap dan stabil secara termal.
Kondisi sample: gas, cairan, padatan, sumber biologis, keperluan analisis lingkungan.
Tujuan analisis: kualitatif, dan kuantitatif.

b. Memilih Mode Ionisasi


-

EI: Spektrum massa yang standar dapat diperoleh; library dari spectrum massa dijual
secara komersial; dapat mengidentifikasi komponen-komponen.
CI: Digunakan untuk memperoleh data kualitatif tentang Bobot Molekul suatu
senyawa, yang tidak dapat dilakukan oleh mode EI.
NCI: Digunakan untuk analisis senyawa-senyawa yang memiliki afinitas besar
terhadap electron. Misal, senyawa-senyawa halogen, pestisida yang mengandung
organochlorine.

c. Memilih Kolom Untuk Analisis


-

Memiliki resolusi yang baik. (Kolom kapiler memiliki resolusi yang lebih baik
daripada kolom kemas (packed column).
- Fase diam, apakah polar atau non-polar. Senyawa yang polar akan lebih terpisahkan
dengan fase diam yang polar, begitupun sebaliknya. Polar atau tidaknya suatu kolom
tergantung dari fase diamnya.
- Ketebalan Fase Diam (Pengisi Kolom)
- Fase diam yang semakin tebal akan menahan sample lebih banyak, dan sebaliknya.
Contoh kasus penggunaan: sample yang sangat mudah menguap, membutuhkan fase diam
yang lebih tebal. Dan sample yang memiliki titik uap tinggi membutuhkan fase diam yang
lebih tipis.
d. Panjang Kolom
Pada umumnya panjang kolom kapiler berkisar dari 30~60 m. Semakin panjang maka
semakin mahal harganya.

E. Sistem Opersional GCMS


Salah satu contoh GCMS yang ada di Laboratorium Pangan PLT adalah GCMS Merk
Shimadzu, QP 2010 dengan sistem operasional sebagai berikut :
a. Menyalakan dan mengkondisikan alat:
0

Dibuka gas regulator 1x putaran 90 berlawanan arah jarum jam.


dParegulator, penunjuk di sebelah kanan menunjukkan isi gas pada tabung
sebenarnya (antisipasi gas habis minimal tekanan 5000 Psi).
dParegulator, penunjuk di sebelah kiri menunjukkan volume gas yang keluar dari tabung.
Dihubungkan ke stop kontak seluruh kabel yang berhubungan dengan alat GC, MS, PC
dan printer.
Nyalknalat GC, dengan menekan tombol kanan bawah pada bagian depan GC, tekan tombol flow,
kemudian tekan tombol PF3 (On).
Tekan tombol MS pada bagian belakang kiri bawah.
Nyalakan computer

Gambar 13.4. Instrumen GCMS yang langsung terhubung dengan PC.

Klik GCMS Real Time Analysis. Ketikkan Password. Tunggu hingga terhubung.
Klik Top, Klik Vacuum control, Auto Start Up, tunggu hingga ada tulisan Completed.
Prosesnya bisa dilihat di bagian Advanced. Bila selesai klik Close.
-3
Klik Tuning, lihat daftar Low Vacuum harus < 15 Pa dan High Vacuum < 1,5 .10 Pa,
Isikan kondisi alat yang diinginkan, detector 0.7 KV.
Bilatelah memenuhi persyaratan, klik filament, lihat keadaan peak M/Z 18 harus lebih besar
dari M/Z 28. (Rasio perbandingannya adalah maksimal 18/28 = 2/1)
Save parameter
b. Leak Test (tes kebocoran)
# Monitor group: water air, detector: 0,5 kV, Filamen ON
Pada Start Auto Tuning , keadaannya harus:
Peak 69 > 502 >219
Peak pengotor < 50 %
Selisih FWHM 10,dari yang terkecil hingga terbesar.
Ratio M/Z 502 > 2%
ColumnFlow = 1.1 ml/min c. Cara
meng-inject sample
Vacuum-kan GC MS.
Tekan Data Acquisition.
Masuk ke parameter (tab) GC, MS, dan Sampler (diatur sesuai keperluan analisis).
Tekan File, Save Method File.
Tekan Sample Log In.
Isi parameter yang ada (opsi Tuning File, bila dikosongkan akan memanggil file
autotuning terakhir).
Tekan Standby.
Tekan Start.
d. Cara meng-inject sample lebih dari satu
Vacuumkan GC MS.
Tekan Batch Processing.
Tekan Wizard (atur parameter sesuai keperluan analisis) =>
-auto increment = akan otomatis setelah inject 001 jadi 002
-auto average = dirata-ratakan setiap 2 x injeksi.
Tekan OK.

Tekan Standby.
Tekan Start.
e. Mengolah Data
Klik GC MS Post Run Analysis
Tampilkan data yang ingin diolah
Bila ingin tahu waktu Retensi , klik TICS, Peak Integration
Slope , contoh = 1000, maka slope berbanding terbalik dgn sensitivitas.
Width = lebar tinggi
Width (saat tinggi peak)

KlikQualitative, Qualitative Parameter, diatur similarity search, double klik,


posisikan kursor pada peak yang dicari, klik similarity search.
1. Split Ratio, contoh = 100, maka yang masuk ke kolom = 1/100 nya
2. Split = sample mengalami proses splitting pada injector, dengan rasio split diatur
pada Split Ratio.
3. Splitless = sample mengalami proses splitting pada injector setelah melewati waktu
yang ditentukan sampling time. Sebelumnya, seluruh sample masuk ke dalam
injector.
4. Solvent Cut Time = setelah di-inject, sample ditahan selama xx detik sebelum
masuk ke dalam kolom.
5. ACQ mode = mengubah Scan menjadi SIM dan sebaliknya.
6. SCAN = akan mendeteksi dari m/z start sampai M/Z end
7. SIM = mendeteksi hanya pada m/z tertentu saja , sehingga lebih akurat.

f.

Analisa Kuantitatif
GC MS Post Run Analysis, panggil data Standar
Top, Create Compound Table, Peak Integration (atur parameter), OK
Qualitative, Qualitative parameter, Similarity Search, pilih Wiley7 sebagai library, OK
QualitveTable, delete data yang ada di spectrum process, TIC, blok fase yang akan diintegrasikan,
edit, select all, register process table, edit, select, similarity search,
search column, similarity search, search table.
Klik wizard, next 6 x
Beri check list, external standar, of calib. Level ( deret standar), unit : ppm, masukkan
[ ] standar, type : target, target ion di blok , Save compound table.
Calibrtoncurve, klik data yes, file save as, top, panggil method yang akan dijadikan standar, ke
directory data, ditarik ke level, Peak Integration for All data, file save method file.
Top, Quantitative, panggil data sample, load method.
Qualitveparameter, panggil sample yang akan dihitung, load method, standar open yang sudah
bikin kurva kalibrasi, Quantitative, Peak Integrate for IDs, lihat Result,
Print, OK.

g. Report Data
Klik Peak yang akan di integrasikan , Peak Integration for TIC
Mematikan GCMS QP2010 :

Close, TOP, Vacuum control, Pilih Auto Shutdown, Matikan PC, matikan MS, Matikan
Tombol Power pada GC.

F. Teknik Preparasi Sampel


Ada beberapa teknik sampling & memasukkan sample yang dikenal dalam analisis
dengan menggunakan instrumen GCMS.
Diantaranya adalah:
Injeksi untuk sample berupa zat cair;
Melalui alat khusus Direct Inlet Probe;
Teknik Headspace;
Pirolisis;
Purge & Trap.
Injeksi sample berupa cairan adalah teknik memasukkan sample yang paling umum.
Sample langsun dimasukkan/di-injeksi setelah mendapat preparasi.
Direct Inlet Probe, digunakan untuk sample memiliki titik uap yang lebih tinggi dari
kemampuan injector GC; atau untuk analisis sample yang tidak stabil secara termal. Sample
langsung dimasukkan ke dalam MS tanpa melalui GC.
Teknik Headspace, digunakan untuk sample hasil ekstraksi dari senyawa-senyawa
organic yang mudah menguap. Senyawa-senyawa tersebut terdapat di dalam produk berbentuk
cair atau padat. Misal, senyawa yang mudah menguap di dalam air, aroma di dalam produk
makanan, dan sebagainya.
Sample dimasukkan ke dalam wadah khusus, lalu diinkubasi. Setelah terjadi
ekuilibrium, gas yang berada diatas diambil oleh syringe. Lalu sample dimasukkan ke dalam
GC. Teknik sampling ini menggunakan alat khusus yang terpisah dari instrumen GCMS
QP2010.
Pirolisis, digunakan untuk sample yang tidak dapat diuapkan oleh injector GC,
misalnya polimer-polimer. Sample pertama kali diuraikan terlebih dahulu oleh pemanasan
dalam alat khusus. Hasil dekomposisi dapat dianalisis oleh GC.
Purge & Trap, digunakan untuk sample hasil ekstraksi dari senyawa-senyawa
organic yang mudah menguap. Zat yang mudah menguap (zat volatil) pertama kali dikeluarkan
dari sample dengan menggunakan gas inert. Kemudian zat volatile tersebut diabsorb oleh zat
khusus untuk meng-absorb, seperti Karbon aktif. Lalu absorben dipanaskan untuk melepaskan
senyawa yang diinginkan ke dalam GC untuk dianalisis.

2. Perawatan dan Pemecahan Masalah


1. Langkah-Langkah Pencegahan :
Selalu menggunakan peralatan dengan cara yang benar;
Melakukan perawatan pada seluruh bagian alat secara teratur;
Bersihkan debu yang ada, karena debu dapat menyebabkan hantaran listrik;
Jangan menggunakan peralatan yang kotor/sudah tidak layak dipakai;
o

Pastikntabung gas yang dipakai disimpan di tempat yang aman (suhu jangan lebih dari 40 C);
Menggunakan gas yang memiliki kemurnian yang tinggi ( 99,995%)
Instrumen jangan dinyalakan secara tiba-tiba, setelah sebelumnya baru dimatikan
(ditunggu 60menit);
Menguak kain yang bebas dari serat untuk penggantian sumber ion (jangan menggunakan
bahan dari karet/plastik);
nPegati komponen alat selain sumber ion dan kolom, harus dilakukan oleh teknisi dari Shimadzu
untuk mencegah kerusakan;

Ketika tidak dipakai untuk waktu yang lama, maka kolom yang ada didalam GC
sebaiknya dicopot
2. Perawatan
a. Injector
Item yang diperiksa:
pSetum; setiap analisis menggunakan septum yang sudah dikondisikan (direndam didalam
pelarut organik, seperti heksana)
Glasinsert dan O-ring; menggunakan glass insert yang inaktif / sudah di- deaktifasi. O-ring
diganti bila glass insert diganti. Glass insert dapat aktif apabila sample memiliki
komponen asam/basa; dilarutkan oleh asam/basa; ataupun tergores. Glass insert
yang aktif dapat menyebabkan berkurangnya jumlah sample dari jumlah yang
sebenarnya, sehingga hasil yang diperoleh tidak akurat.
Langkah Preventif
Pembilasn setelah analisis dengan pelarut dilakukan untuk membersihkan komponen-komponen
non-volatil.
Mengurangi backflash dengan meng-inject volume sample sesedikit mungkin.
o

CATATAN: perawatan dilakukan bila injeksi sample < 50 C.


b. Kolom
Sample GC yang dapat dengan cepat mengurangi kepekaan / mengotori kolom:
Cairan-cairan biologis; Jaringan-jaringan biologis; Tanah; Lumpur; Air limbah.
Umumnya, bagian kolom yang paling mudah kotor adalah bagian ujungnya.
Bila kolom kotor, maka akan menimbulkan banyak masalah dalam data yang
dihasilkan (misal, noise yang lebih banyak). Untuk membersihkan bagian yang kotor
dapat dilakukan dengan memotong sedikit bagian ujung kolom, dengan menggunakan
cutter khusus untuk kolom. Setelah dipotong, dilihat hasil potongannya dengan kaca
pembesar 20 kali. Jika hasilnya bagus, maka dapat langsung dipakai. Bila tidak, kolom
dipotong lagi.

c. Sumber ion (Ion


source)

Gambar 13.5 Cara perawatan kolom, pemotongan bagian ujung


dan pengaturan panjang kolom.

Dengan mengikuti instruksi yang ada pada manual / help file dalam software
GCMS (Real Time An., Postrun An.), proses perawatan (penggantian atau
pembersihan) sumber ion dapat dilakukan. Bila melakukan analisis dengan sample
yang tidak bersih atau berkonsentrasi tinggi, proses perawatan perlu dilakukan.

Gambar 13.6. Cara membuka filamen dan pengganttian ion source

Indikasi-indikasi dari kotornya sumber ion antara lain adalah sebagai berikut:
o Hasil Auto Tuning menunjukkan sensitivitas yang rendah, tingginya noise pada
spectrum massa, sinyal yang lemah dari ion-ion bermassa atom tinggi (m/z 502,
m/z 614);
o Yang terburuk adalah tidak bisa dilakukan Auto Tuning.
System vakum
Hal-hal yang harus diperhatikan adalah sebagai berikut:
o Persediaan oli dalam pompa rotari (diservis setiap 12 bulan sekali);
o Memanggil teknisi ketika waktu penggunaan turbo molecular pump ~25000 jam;
o Cek pompa ketika muncul suara-suara yang tidak biasa.
Dengan menggunakan tools berikut ini, kesalahan-kesalahan dalam analisis dapat
dideteksi sebelum analisis dimulai.
Tools: Test kebocoran (Leak test); dan Standard Tuning (men-tes kondisi vakum alat)
Bila terjadi kebocoran saat Leak Test, ada dua sebab yang dapat dicurigai, yaitu:
Gaspembawa GC mengalami kebocoran (gas pembawa keluar dari system
instrumen)
Vakum MS mengalami kebocoran (udara masuk ke dalam system instrumen)
Pada umumnya kebocoran dapat diatasi dengan memperhatikan faktor-faktor
penyebabnya, seperti mengencangkan skrup. Troubleshooting lebih mendetail dapat
dilihat di file Help yang ada pada software.