Tol-Like Receptor 4 Gene (TLR4), tapi NotTLR2, Polimorfisme

Memodifikasi Risiko Penyakit Tonsillar Karena toStreptococcus

pyogenes and Haemophilus influenzae
Kyriaki Liadaki, 1 Efthimia Petinaki, 2 Charalampos Skoulakis, 3
Paraskeui Tsirevelou, 3 Dimitra Klapsa, 2 Anastasios E. Germenis, 1 dan Matthaios
Speletas1 *
Departemen Imunologi dan Histocompatibility, Universitas Thessaly Medical School,
41.110 Biopolis, Larissa, Yunani 1
Departemen Mikrobiologi, University of Thessaly Medical School, 41.110 Biopolis,
Larissa, Yunani 2
; dan Departemen THT, Rumah Sakit Umum Volos, 38222 Volos, Yunani
3 Menerima 15 Oktober 2010 / Returned selama 15 modifikasi November 2010 /
Diterima 8 Desember 2010
Penyakit tonsil (tonsilitis berulang dan / atau hipertrofi tonsil) adalah salah satu
manusia
yang
paling
umum
gangguan, pyogenes withStreptococcus (kelompok A streptokokus beta-hemolitik
[GAS]) andHaemophilus influenzaerepresenting patogen yang paling umum. Sampai
saat ini, tidak ada penelitian yang menyelidiki mengapa beberapa individu
lebih rentan terhadap infeksi tonsil yang disebabkan oleh bakteri tertentu daripada
yang
lain.
Tujuan
dari
penelitian
ini
adalah
untuk
mengungkap kemungkinan hubungan antara gen reseptor Toll-like umum (TLR)
polimorfisme
dan
tonsil
penyakit. TheTLR2-R753Q, TLR4-D299G, andTLR4-T399I polimorfisme ditentukan
dalam
kelompok
327
pasien mengalami tonsilektomi karena tonsilitis berulang (n? 245) dan hipertrofi
tonsil
(n?
82)
dan 245 donor sumsum tulang yang sehat. Asosiasi dari polimorfisme tersebut dengan
terisolasi
strain bakteri setelah tonsilektomi juga diselidiki. Menariknya, pembawa
theTLR4polymorphisms
ditampilkan dengan sekitar 3 kali lipat peningkatan risiko infeksi GAS (forTLR4D299G,
rasio
odds
[OR]?
2.81,
95% confidence interval [CI] 1,16-6,79, P 0,038??; forTLR4-T399I, OR? 3.01, 95%
CI?
1,29-7,02,
P?
0,023), dan hubungan ini lebih mendalam pada pasien dengan tonsilitis berulang.
Sebaliknya,
yang
Kehadiran theTLR4-T399I polimorfisme dikaitkan dengan 2 kali lipat penurunan
risiko Haemophilus influenzaecarriage (OR? 0,38, 95% CI? 0,15-0,96, P? 0,038).
Pada
akhirnya,
tidak
ada
perbedaan
yang
signifikan
yang
mengamati, mengingat genotipe dan alel frekuensi dari polimorfisme yang disebutkan
di
atas,
antara
pasien dan kontrol. Temuan kami menunjukkan bahwa, mengenai infeksi tonsil,
TLR4polymorphisms mempengaruhi individu untuk infeksi GAS, sementara mereka
pelindung
againstHaemophilus
influenzaeinfection.
Ini
Hasil lebih lanjut memaparkan peran bahwa variasi genetik tuan kekebalan mungkin
bermain
di
kerentanan
terhadap
infeksi
umum
dan
penyakit
tonsil.
Penyakit tonsil merupakan salah satu gangguan manusia yang paling umum dan

disertai
dengan
gejala
seperti
akut
berulang
tonsilitis,
abses
peritonsillar,
dan
hipertrofi
tonsil
(TH). Tonsilektomi diindikasikan dalam kasus berulang atau gejala persisten infeksi
tonsil
atau
hipertrofi
dan
memiliki
konsekuensi fungsional (dyspnea atau disfagia, pernapasan mulut, apnea tidur
obstruktif,
dll),
dan
itu
merupakan
salah
satu
operasi yang paling sering dilakukan, terutama pada anak-anak (10,
34). Beberapa studi telah menunjukkan pyogenes thatStreptococcus (streptokokus
grup A beta-hemolitik [GAS]) andHaemophilus influenzae, terisolasi di 14-37% dan
16-32%
dari
pasien, masing-masing, adalah bakteri yang paling umum menyebabkan
Penyakit tonsil (10, 15, 19, 30, 34). Bakteri yang sama, bagaimanapun, juga telah
diisolasi dari tonsil individu sehat (34). Secara umum, variasi ada yang signifikan
dalam
mikroba
Flora antara pasien dengan penyakit tonsil dan kontrol yang sehat telah diamati (32,
34).
Oleh
karena
itu,
muncul
dan
masih pertanyaan yang belum terjawab adalah mengapa beberapa individu lebih
rentan
terhadap
infeksi
tonsil,
serta
mengapa
beberapa
mereka menderita infeksi oleh bakteri tertentu? Meskipun faktor lingkungan, seperti
kehadiran penitipan atau jumlah saudara kandung, mempengaruhi morbiditas dari
bakteri
umum
(1),
perlu
dicatat
bahwa
kecenderungan
genetik
untuk
tonsil
Penyakit
juga
telah
diamati
(14).
Studi awal telah menunjukkan bahwa perlindungan terhadap infeksi adalah
terkait dengan kemampuan host untuk menghasilkan kekebalan yang cukup
tanggapan terhadap unsur-unsur bakteri penting (11, 13). Untuk ini
akhir, keluarga
reseptor
Pulsa
seperti
(TLRs)
memainkan
sentral
peran,
mengakui
evolusioner
patogen
terkait
pola molekul (PAMPs) hadir pada sebagian besar jenis mikroorganisme (9). Di antara
mereka,
TLR2andTLR4are
terletak
di
permukaan
sel
dan
mengenali
produk
bakteri
unik
untuk
organisme menyerang, termasuk GAS dan Haemophilus influenzae (20, 24, 31).
Baru-baru
ini,
polimorfisme
nukleotida
tunggal
(SNP)
dari
TLR2
dan
TLR4
telah
dikaitkan
dengan
reseptor
hyporesponsiveness dan immunopathology, termasuk kerentanan terhadap bakteri,
jamur,
dan
infeksi
virus
(23).
Namun,
kontribusi yang mungkin dari SNP ini menuju immunopathology tonsil benar-benar
tidak
diketahui.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menyelidiki apakah umum
SNP
ofTLR2andTLR4,
khususnya,
TLR2-R753Q
(SNP
database
[dbSNP]
aksesi
tidak
ada.
rs5743708),
TLR4-D299G
(dbSNP
aksesi
tidak
ada.
rs4986790),
dan
TLR4-T399I
(dbSNP
* Penulis yang sesuai. Alamat surat: Departemen Imunologi dan Histocompatibility,
Universitas
Thessaly
Medical
School,
41.110 Larissa, Yunani. Telepon: 302410685687. Fax: 302413502580.
E-mail:
maspel@med.uth.gr.
?
Diterbitkan
menjelang
cetak
pada
15
Desember
2010.
Para penulis telah membayar biaya untuk memungkinkan akses gratis langsung ke
ini

artikel.
217
pada tanggal 7 September 2015 dengan tamu http://cvi.asm.org/ Download dari
aksesi tidak ada. rs4986791), terkait dengan influenzaeinfections GAS
andHaemophilus,
mempengaruhi
virulensi
dan
kemampuan
untuk
menyebabkan
penyakit
tonsil.
BAHAN
DAN
METODE
Koleksi specimens.Three-ratus dua puluh tujuh pasien (173 laki-laki, 154
betina; usia rata-rata, 12,6 tahun; rentang usia, 3-59 tahun) yang menjalani total
atau tonsilektomi parsial antara Januari 2006 dan Januari 2010 yang terdaftar di
pembelajaran. Para pasien dikategorikan ke dalam dua kelompok: tonsilitis berulang
(RT) kelompok (n 245 pasien;? 131 laki-laki, 114 perempuan) dan kelompok TH (n?
82 pasien; 42 laki-laki, 40 perempuan). Pasien dengan tonsilitis berulang yang
memiliki
setidaknya tiga episode di masing-masing 3 tahun sebelumnya, lima episode di setiap
2
tahun, atau tujuh episode dalam 1 tahun dikategorikan ke dalam kelompok 1,
sementara
pasien
dengan hipertrofi tonsil disertai dengan mendengkur, disfagia, pernapasan mulut,
dan sindrom apnea tidur tapi tanpa tonsilitis berulang dikategorikan ke dalam
Kelompok 2. Pasien yang menerima antibiotik 2 minggu sebelum operasi dikeluarkan.
Operasi dilakukan selama periode ketika pasien bebas dari gejala. Spesimen
tenggorokan
swab
lagi-lagi
diambil
dari
setiap
pasien
sebelum
operasi. Jaringan tonsil diekstraksi selama operasi segera ditransfer
ke dalam wadah kering steril dan dikirim ke laboratorium. Jaringan tonsil yang
dipotong menjadi beberapa bagian (2-4 mm), dibagi menjadi tiga bagian, dan
disimpan
di?
80

C
budaya
konvensional,
analisis
molekuler,
dan
bahan-bahan
arsip.
Sebuah kohort dari 245 donor sumsum tulang yang sehat (BMDs) (110 laki-laki, 135
perempuan;
usia rata-rata, 35,5 tahun; rentang usia, 19-65 tahun) direkrut untuk melayani sebagai
kelompok kontrol yang sehat untuk estimasi prevalensi dari SNP dianalisis dalam
populasi
Yunani
umum.
Semua sampel berasal dari individu-individu yang tidak berhubungan yang etnis
Yunani,
sebagai
dinilai dengan kuesioner. Studi ini disetujui oleh Institutional Review
Dewan University Hospital of Larissa, dan persetujuan tertulis adalah
yang diperoleh dari masing-masing individu atau relatif menyertainya, dalam kasus
pasien di mana persetujuan secara hukum tidak berlaku (misalnya, dengan anakanak).
Konvensional cultures.For setiap pasien, cairan tenggorokan diperoleh sebelum
operasi, serta potongan jaringan tonsil yang mendalam diperoleh pascaoperasi, yang
diinokulasi ke 5% darah domba Columbia dan agar coklat (bioma'rieux,
Marcy l'Etoile, Perancis) dan diinkubasi pada 37 C dalam 5% CO2atmosphere dan
suasana anaerob selama 10 hari. Gram stain dilakukan pada semua spesimen
untuk mengevaluasi apakah leukosit dan flora mikroba yang hadir. The
isolat bakteri dalam budaya murni, yang diperoleh dengan memilih koloni terisolasi,
yang
diidentifikasi dengan tes biokimia yang tersedia secara komersial dan, bila diperlukan,
dengan
metode
identifikasi
molekuler
(18,
22).

Deteksi molekuler DNA bakteri dan potongan individu dari RNA.Four

jaringan tonsil mendalam dari setiap pasien yang dipilih untuk ekstraksi simultan
DNA dan RNA, menggunakan kit komersial (Invitrogen, CA), menurut
instruksi
pabrik.
Selain
itu,
identitas
ekstrak
RNA
adalah
dikonfirmasi dengan elektroforesis, setelah 10-menit pencernaan pada 37 C dengan
DNase
bebas
RNase (Qiagen, Crawley, Inggris Raya). Efisiensi ekstraksi DNA
dan kemungkinan adanya inhibitor dalam sampel dikonfirmasi oleh
deteksi?
gen
2-mikroglobulin
(26).
PCR
primer
untuk?
2
gen mikroglobulin yang maju primer 5? -GAAGAGCCAAGGACAGGTA
C-3? dan reverse primer 5? -CAACTTCATCCACGTTCACC-3 ?, dan PCR
Kondisi yang 4 menit pada 94 C, diikuti dengan 35 siklus dari 94 C selama 60 s,
58

C
untuk
60 s, dan 72 C selama 60 s dan 10 menit pada 72 C setelah siklus terakhir. Kedua
DNA
dan
RNA
disimpan
pada?
80

C.
Kehadiran DNA bakteri ditentukan dengan PCR menargetkan 16S
gen rRNA sebagaimana telah dijelaskan sebelumnya (22), dengan kontrol positif dan
negatif
termasuk dalam reaksi sesuai dengan prosedur standar. Universal PCR
primer yang digunakan adalah primer forward 5? -AGAGTTTGATCATGGCTCA-3?
dan
sebaliknya primer 5? -ACGGCGACTGCTGCTGGCAC-3 ?, sedangkan kondisi PCR
adalah 4 menit pada 95 C, diikuti dengan 35 siklus dari 94 C selama 30 s, 55 C
selama
30
s,
dan
72 C selama 90 s dan 10 menit pada 72 C setelah siklus terakhir. Selanjutnya,
semua
PCR
Produk disekuensing di kedua arah menggunakan BigDye Terminator (versi
1.1) siklus sequencing kit (Perkin-Elmer, Coignieres, Prancis), seperti yang dijelaskan
oleh
produsen. Perbandingan urutan diperoleh dengan urutan yang ada dalam database
GenBank,
menggunakan
program
BLAST
tersedia
di
Pusat Nasional untuk Biotechnology Information situs (NCBI), membantu kami
menentukan hasil DNA bakteri. Jadi, ketika kesamaan 16S rRNA
urutan
gen
mendekati
99%,
hasilnya
dianggap
sesuai
untuk
identifikasi spesies-tingkat. Selain itu, hasil menunjukkan urutan campuran dipimpin
pengamatan pada elektroforegram dan kloning berikutnya dari PCR
produk dalam vektor pGEM-T Easy (Promega, Charbonnieres, Prancis), sebagai
dijelaskan oleh produsen. Dalam beberapa kasus, klon yang dibudidayakan semalam
LB menengah (USB, Cleveland, OH), sedangkan PCR dan sekuensing yang
dilakukan
seperti
yang
dijelaskan
di
atas
(26).
Untuk memverifikasi hasil yang diperoleh dengan menggunakan 16S rRNA, semua
spesimen
yang
diperiksa, menggunakan primer spesifik untuk GAS andHaemophilus influenzae (18,
22,
26). Secara khusus, primer PCR untuk gen GAS yang maju primer
5? -GAGAGACTAACGCATGTTAGTA-3? Dan reverse primer 5? -TAGTTACC
Kondisi GTCACTTGGTGG-3 ?, dan PCR yang 30 s pada 95 C, diikuti oleh
40 siklus 95 C selama 15 s, 50 C selama 30 s, dan 72 C selama 30 s dan 10 menit
pada
72

C
setelah

siklus terakhir. PCR primer untuk influenzaegene Haemophilus yang

maju primer 5? -TATCACACAAATAGCGGTTGG-3? dan primer terbalik
Kondisi 5? -GGCCAAGAGATACTCATAGAACGTT-3 ?, dan PCR yang
5 menit pada 95 C, diikuti oleh 35 siklus 95 C selama 25 s, 57 C selama 40 s, dan
72

C
untuk
60
dan
7
menit
pada
72

C
setelah
siklus
terakhir.
OfTLR2andTLR4SNPs.Detection deteksi molekuler dari theTLR4-D299G
andTLR4-T399I SNP dilakukan oleh spesifik alel PCR, diikuti oleh restriction
fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analisis, seperti yang dijelaskan
sebelumnya (16, 29). Secara singkat, di kedua reaksi primer ke depan yang
dimodifikasi
di
5? end, menciptakan pembatasan situs pengakuan enzim (NcoI untuk theTLR4D299G polimorfisme dan HinfI untuk theTLR4-T399I polimorfisme), sehingga jika
polimorfisme yang hadir, analisis PCR-RFLP akan menciptakan fragmen pencernaan
terlihat
pada
gel
agarosa
(16,
29).
Primer
untuk
deteksi
TLR4-D299G SNP yang maju primer 5? -GATTAGCATACTTAGACTACT
ACCTC (G) CATG-3? dan sebaliknya primer 5? -GATCAACTTCTGAAAAAGCA
TTCCCAC-3 ?. Primer untuk deteksi TLR4-T399I SNP yang maju
primer 5? -GGTTGCTGTTCTCAAAGTGATTTTGGGA (C) GAA-3? dan reverse
primer 5? -GATCAACTTCTGAAAAAGCATTCCCAC-3 ?. Nukleotida dalam tanda
kurung yang dimodifikasi dan diubah dengan yang digarisbawahi. The
kondisi kedua PCR adalah 2 menit pada 94 C, diikuti oleh 32 siklus 94 C untuk
30 s, 57 C selama 30 s, dan 72 C selama 60 s dan 5 menit pada 72 C setelah
siklus
terakhir.
Untuk
theTLR4-D299G SNP, sebuah fragmen 249-bp diamplifikasi dengan PCR dan
dikenakan
untuk NcoI pencernaan (Invitrogen, Inggris Raya) for4hat37 C. Kehadiran dari
produk PCR tercerna adalah indikasi dari tipe liar sampel, sedangkan kehadiran
polimorfisme
yang
mengakibatkan
pencernaan
produk
PCR
untuk
218-bp dan fragmen 31-bp. Untuk theTLR4-T399I SNP, sebuah fragmen 407-bp
adalah
diperkuat dengan PCR dan mengalami HinfI pencernaan (New England BioLabs,
United Kingdom) for4hat37 C. Kehadiran produk PCR tercerna adalah
indikasi dari tipe liar sampel, sedangkan kehadiran polimorfisme yang
mengakibatkan pencernaan produk PCR untuk fragmen 375-bp dan 32 bp-.
Deteksi
theTLR2-R753Q
polymorphism
juga
dilakukan
oleh
Analisis PCR-RFLP (27). Protokol ini dirancang atas dasar fakta bahwa
hasil
polimorfisme
dalam
penciptaan
urutan
DNA
diakui
oleh
enzim restriksi SfcI (New England BioLabs). PCR primer yang maju
primer 5? -TATGGTCCAGGAGCTGGAGA-3? dan sebaliknya primer 5? -TGACA
Kondisi TAAAGATCCCAACTAGACAA-3 ?, dan PCR yang 2 menit pada
94 C, diikuti oleh 38 siklus 94 C selama 30 s, 64 C selama 30 s, dan 72 C
selama
45
s
dan
5 menit pada 72 C setelah siklus terakhir. Kehadiran produk PCR tercerna (430
bp) adalah indikasi dari tipe liar sampel, sedangkan kehadiran polimorfisme yang
mengakibatkan pencernaan produk PCR untuk 307-bp dan 123 bpfragmen.
Untuk semua PCR dijelaskan di sini, total 100 sampai 200 ng DNA diamplifikasi
dalam campuran 30-? l reaksi menggunakan 62,5? M setiap trifosfat deoxynucleoside,
20

pmol primer masing-masing, 1,5 mM MgCl2, dan 1,0 U Taqpolymerase (Invitrogen,

United Kingdom) dalam buffer yang disediakan oleh produsen. Semua PCR dan
pencernaan prosedur dilakukan di aparat mesin PCR PTC-200 (MJ
Penelitian, Watertown, MA), dan PCR dan pencernaan produk dianalisis
di
2%
TBE
(Tris-borat-EDTA)
gel
agarosa.
Untuk konfirmasi hasil analisis PCR-RFLP, yang dipilih secara acak PCR
produk positif dan negatif untuk polimorfisme TLR dimurnikan dengan menggunakan
dari sistem pemurnian PCR (Qiagen) dan langsung sequencing menggunakan ABI
Prism 310 analyzer genetik (Applied Biosystems, Foster City, CA) dan BigDye
Terminator
sequencing
DNA
kit
(Applied
Biosystems).
Uji chi-square statistik analysis.Pearson dengan Yates 'koreksi kontinuitas
digunakan untuk membandingkan alel dan genotipe frekuensi antara BMDs, pasien,
dan
subkelompok
pasien,
sedangkan
uji
Fisher
dilakukan
ketika
diperlukan. Variabel kontinyu dibandingkan dengan menggunakan uji nonparametrik
MannWhitney U. Sebuah asosiasi dinyatakan sebagai rasio odds (OR) dengan
sesuai
interval
kepercayaan
95%
(CI),
dan
variabel
dianggap
whenPwas signifikan? 0,05. Akhirnya, koefisien korelasi Spearman (r) adalah
digunakan untuk mengkorelasikan kehadiran SNP dengan usia dan penyakit. Analisis
atas
dilakukan dengan menggunakan Paket Statistik untuk Ilmu Sosial (SPSS;
Versi 13; Chicago, IL). Selain itu, penyimpangan dari Hardy-Weinberg equilibrium
dievaluasi menggunakan Arlequin software tersedia secara bebas (versi 3.11;
http://cmpg.unibe.ch/software/arlequin3).
218
LIADAKI
ET
AL.
CLIN.VACCINEIMMUNOL.
pada tanggal 7 September 2015 dengan tamu http://cvi.asm.org/ Download dari
HASIL
Analisis polimorfisme TLR pada pasien dengan penyakit tonsil dan BMDs.None dari
pasien
dengan
penyakit
tonsil
menunjukkan homozigositas untuk setiap SNP atau heterosigositas ganda
theTLR2-R753Q andTLR4-D299G orTLR4-T399I polimorfisme. Selain itu, G alel
dari
theTLR4-D299G
SNP
memiliki
tingkat tinggi linkage disequilibrium dengan alel C dari theTLR4-T399I SNP untuk
kedua
pasien
dan
BMDs,
seperti
dilaporkan
sebelumnya
(28). Ketika frekuensi alel dari theTLR4-D299G, TLR4-T399I, andTLR2-R753Q
polimorfisme
dianggap,
tidak
ada
perbedaan
signifikan
yang
diamati
antara
pasien
dan
kontrol
(5.05%
dan
6.94%,
masing-masing,
untuk
TLR4-D299G
[P
0,203?];
5,51%
dan
6,74%,
masing-masing,
forTLR4-T399I
[P 0,452?]; dan 1,07% dan 0,61%, masing-masing, forTLR2-R753Q [P? 0,530]).
Selain
itu,
tidak
ada
perbedaan
yang
signifikan
dalam
genotipe
dan
alel
frekuensi
tersebut
di
atas
SNP
ditemukan ketika dua kelompok tonsil wereseparately dibandingkan dengan BMDs
(untuk
kelompok
RT,
P?
0.680
andP?
0,512,
masing-masing, forTLR4-D299G; P 0.890 andP 0,603, masing-masing, forTLR4T399I??;
andP?
0,339
andP?
0,224,
masing-masing,
untuk TLR2-R753Q; untuk kelompok TH, P? 0,107 andP? 0,085,
masing-masing, forTLR4-D299G; P 0.420 andP 0,267, masing-masing, forTLR4T399I??;
andP?
0,576
andP?
0,577,
masing-masing,
forTLR2-R753Q).
Pada akhirnya, tidak ada korelasi yang signifikan dari setiap SNP dengan kelompok

tonsil penyakit (r ?? 0,064 andP? 0,127 forTLR4-D299G, r ?? 0,037 andP? 0,380

forTLR4-T399I,
r?
0,007
andP?
0,866
forTLR2-R753Q)
atau
usia
(r
??
0.014
andP?
0,745 forTLR4-D299G, r ?? 0,015 andP? 0,713 forTLR4-T399I, r? 0,035 andP? 0.410
forTLR2-R753Q)
diamati
(Gbr.
1).
Asosiasi TLR
polimorfisme
withStreptococcus
pyogenesandHaemophilus
influenzaeinfections.
Di
antara
pasien
dengan
penyakit
tonsil,
Haemophilus
influenzaewas
terisolasi
dari
105
pasien
(32,1%)
dan
GAS
diisolasi
dari
38
(11,6%),
sedangkan
kedua
bakteri
diidentifikasi
di
10
ini
pasien.
Akibatnya,
kami
membandingkan
prevalensi
ofTLR
polimorfisme dalam subkelompok pasien sesuai dengan penyebabnya
penyakit tonsil. Seperti terlihat pada Tabel 1, theTLR4-D299G dan
TLR4-T399I
polimorfisme
yang
sangat
terkait
dengan
GAS, karena operator ditampilkan risiko sekitar 3 kali lipat meningkat untuk infeksi
GAS
(Tabel
1).
Temuan
ini
juga
mendalam bahkan untuk pembawa bothTLR4polymorphisms (frekuensi genotipe,
21,6%
dibandingkan
8,4%,
rasio
odds?
3,00,
95%
CI
1,23-7,28,
P
0,019??;
frekuensi
alel,
10,8%
dibandingkan
4,2%, rasio odds? 2,94, 95% CI? 1,21-7,13, P? 0.021). Pada
Sebaliknya, tidak ada hubungan dari polimorfisme TLR2-R753Q dengan GAS
ditemukan
(P?
0,418
andP?
0,419
untuk
genotipe
dan
frekuensi
alel,
masing-masing).
Selain
itu,
kami
juga
mengamati
bahwa
infeksi
GAS
lebih
menonjol
dalam
pasien di bawah usia 14 tahun dibandingkan pasien dewasa (Tabel 1).
Analisis
lebih
lanjut
mengenai
kelompok
tonsil
yang
berbeda
menunjukkan
hubungan
yang
kuat
antara
bothTLR4SNPs
dan infeksi GAS hanya untuk kelompok RT. Secara khusus, pasien dengan TLR4T399I
dan
tonsilitis
berulang
dipamerkan
2,6 kali lipat peningkatan risiko infeksi GAS (P? 0,043, 95%
CI?
1,12-6,25),
sedangkan
kehadiran
theTLR4-D299G
polimorfisme
juga
dikaitkan
dengan
2,2
kali
lipat
meningkat
risiko,
tetapi
perbedaannya
tidak
bermakna
secara
statistik
(P? 0,075, 95% CI? 0,94-6,32). Pada akhirnya, operator dari kedua
TLR4SNPs ditampilkan 2,5 kali lipat peningkatan risiko infeksi GAS; Namun,
perbedaannya
tidak
signifikan
(rasio
odds?
2,55,
95%
CI?
0,98-6,63,
P?
0.068).
Di
sisi
lain,
kehadiran
theTLR4-D299G
dan
TLR4-T399I polimorfisme tidak dikaitkan dengan infeksi GAS pada kelompok TH
(P? 0,273 andP? 0,362, masing-masing). Pada akhirnya, tidak ada hubungan yang
TLR2-R753Q
SNP
dengan infeksi GAS diamati untuk salah satu dari dua kelompok.
Menariknya,
seperti
yang
disajikan
pada
Tabel
2,
kehadiran
TLR4-T399I
polimorfisme
dikaitkan
dengan
hampir
2 kali lipat penurunan risiko ofHaemophilus influenzaeinfection, sebagai
ditunjukkan oleh genotipe dan frekuensi alel analisis. Menariknya, sebuah asosiasi
hampir
mirip
diamati
dengan
TLR4-D299G
polimorfisme,
tetapi
gagal
mencapai
statistik
signifikansi
(Tabel
2).
Selain
itu,
operator
dari
kedua
TLR4
SNP ditampilkan 2 kali lipat penurunan risiko ofHaemophilus influFIG. 1. plot

Menyebarkan korelasi betweenTLR2and TLR4SNPs dan usia di subkelompok yang

berbeda
dianalisis
dalam
penelitian
ini.
Heter,
heterozigot;
Homoz,
homozigot.
VOL. 18, 2011 TLR polimorfisme DAN tonsil PENYAKIT 219
pada tanggal 7 September 2015 dengan tamu http://cvi.asm.org/ Download dari
enzaeinfection, namun perbedaan ini juga gagal menjadi signifikan
(rasio
odds?
0,45,
95%
CI?
0,16-1,25,
P?
0,131).
Di
sisi
lain,
kehadiran
theTLR2-R753Q
SNP
tidak
mempengaruhi influenzaeinfection kemungkinan ofHaemophilus (Tabel 2). Sebuah
analisis
lebih
lanjut
mengenai
kelompok
RT
dan
TH
tidak mengungkapkan hubungan yang signifikan betweenTLRpolymorphisms
andHaemophilus
influenzaeinfections
(data
tidak
ditunjukkan).
Seperti
disebutkan
di
atas,
kedua
strain
bakteri
yang
diisolasi
dari 10 pasien (5 laki-laki, 5 betina; berarti standar deviasi [SD] usia, 9,1 6,3 tahun;??
8
pasien
dengan
RT
dan
2
dengan
TH). Menariknya, dalam kelompok ini genotipe dan alel frekuensi
bothTLR4polymorphisms
yang
sangat
tinggi
(30%
dan
15%,
masing-masing);
Namun,
karena
jumlah
rendah
dari pasien-pasien ini, analisis statistik lebih lanjut tidak dilakukan.
PEMBAHASAN
Untuk yang terbaik dari pengetahuan kita, ini adalah studi pertama menghadirkan
asosiasi
yang
kuat
antara
TLRpolymorphisms
umum
dan penyakit tonsil. Menganalisis kohort besar pasien mengalami tonsilektomi karena
tonsilitis berulang dan / atau hipertrofi tonsil, bukti yang jelas menunjukkan bahwa
TLR4
polimorfisme berhubungan dengan peningkatan risiko tonsilitis berulang akibat
infeksi GAS disediakan. Secara bersamaan, kehadiran mereka, terutama kehadiran
theTLR4-T399I SNP, tampaknya memberikan perlindungan againstHaemophilus
Infeksi influenzae dan / atau kereta. Sebaliknya, tidak ada hubungan antara theTLR2R753Q polimorfisme dan kecenderungan penyakit tonsil ditemukan.
GAS adalah Gram-positif manusia patogen penting yang bertanggung jawab untuk
spektrum
yang
luas
dari
infeksi,
mulai
dari
yang
ringan
penyakit (misalnya, tonsilitis akut) untuk penyakit serius (misalnya, tonsilitis
berulang, necrotizing fasciitis, sepsis, dan gejala sisa poststreptococcal berat) (3, 4).
Faktor-faktor yang memprovokasi virulensi patogen, memungkinkan GAS untuk
melarikan
diri
surveilans
kekebalan
atau,
sebaliknya, merangsang reaksi yang berlebihan dari sistem kekebalan tubuh, yang
tidak
jelas
(3,
4).
Penelitian
terbaru
telah
menunjukkan
bahwa
pengakuan
multimodal
dari
GAS
oleh
TLRs,
termasuk
TLR2 dan TLR4, berlangsung, di mana kombinasi sinyal TLR-dimediasi berbeda
adalah penting untuk respon yang cepat dan efektif untuk patogen (5, 31, 35). The
twoTLR4SNPs
dianalisis
dalam
penelitian
ini
(D229G
dan
T399I)
terletak
di
ekson
ketiga
gen
dan
mengubah
domain
ekstraseluler
dari
reseptor (2). Mereka telah dikaitkan dengan hyporesponsiveness reseptor di makrofag,
sel
epitel,
dan
perifer
sel
mononuklear
darah,
mengakibatkan
gangguan
TLR4
signaling
(2). Dengan demikian, kita bisa berharap bahwa kehadiran TLR4SNPs
TABEL 1. Asosiasi TLR polimorfisme withStreptococcus pyogenes (GAS) infeksi

pada
pasien
dengan
penyakit
tonsil
Sebuah
Pasien
pasien
variabel
GAS-GAS
positif-negatif
pvalue
b
OR
(95%
CI)
Jumlah
pasien
38
289
Berarti?
Usia
SD
(yr)
9.2?
7.13
13.1?
11.1
0.430
No (%) di bawah usia 14 tahun 32 (84,2) 182 (64,6) 0,011 0,32 (0,13-0,81)
No
(%)
di
atas
usia
14
tahun
6
(15,8)
104
(36,4)
Seks (no. Laki-laki / tidak. Female) 19/19 154/135 0,732 0,87 (0,44-1,72)
TLR4-D299G
No
(%)
dari
pasien
dengan
genotipe:
A
/
A (wt)
30
(78,9)
264
(91,3)
0,038
2,81
(1,16-6,79)
A
/
G
(het)
8
(21,1)
25
(8,7)
G
/
G
(hom)
0
(0)
0
(0)
No
(%)
dari
pasien
dengan
alel
dengan:
A
68
(89,4)
553
(95,6)
0,044
2,6
(1,12-5,99)
G
8
(10,5)
25
(4.3)
TLR4-T399I
No
(%)
dari
pasien
dengan
genotipe:
C
/
C
(wt)
29
(76,3)
262
(90,7)
0,023
3,01
(1,29-7,02)
C
/
T
(het)
9
(23,7)
27
(9.3)
T
/
T
(hom)
0
(0)
0
(0)
No
(%)
dari
pasien
dengan
alel
dengan:
C
67
(88,1)
551
(95,3)
0,027
2,74
(1,23-6,07)
T
9
(11,8)
27
(4.6)
TLR2-R753Q
No
(%)
dari
pasien
dengan
genotipe:
G
/
G
(wt)
38
(100)
282
(97,6)
0,418
0,88
(0,84-0,91)
G
/
A
(het)
0
(0)
7
(2,4)
A
/
A
(hom)
0
(0)
0
(0)
No
(%)
dari
pasien
dengan
alel
dengan:
G
76
(100)
571
(98,7)
0,419
0,97
(0,95-0,99)
0
(0)
7
(1,21)
Sebuah
Perbandingan genotipe dilakukan antara tipe liar dan jumlah alel bermutasi (itu?
2
uji
dua
sisi
dilakukan
untuk
TLR4SNPs
dan?
2
uji satu sisi dilakukan forTLR2-R753Q). Singkatan: wt, jenis liar; het, heterozigot;
hom,
homozigot.
b
Nilai tebal menunjukkan perbedaan yang signifikan secara statistik.
220
LIADAKI
ET
AL.
CLIN.VACCINEIMMUNOL.
pada tanggal 7 September 2015 dengan tamu http://cvi.asm.org/ Download dari
mungkin mengakibatkan gangguan sinyal, yang disebabkan oleh hyaluzonan
dan / atau cytolysins GAS lainnya, yang mengarah ke clearance berkurang dari
patogen, penyakit invasif, dan infeksi berulang. Menariknya, hasil yang sama juga
dilaporkan
oleh
Yuan
et
al.,
yang menunjukkan bahwa ofTLR4is variabilitas genetik yang terkait

dengan peningkatan risiko terkena penyakit invasif byStreptococcus pneumoniae,

bakteri
lain
Gram-positif
(36).
Selain itu, kami menunjukkan bahwa pembawa theTLR4-T399I SNP ditampilkan
risiko forHaemophilus influenzaecarriage menurun dan / atau infeksi, yaitu, efek
kebalikan
dari
hyporesponsiveness
reseptor
diduga.
Hasil
yang
sama
juga telah dilaporkan baru-baru ini oleh Hawn et al., yang menunjukkan
bahwa
kehadiran
theTLR4-D299G
SNP
dikaitkan
dengan
perlindungan dari sistitis berulang, kondisi terutama disebabkan oleh
Bakteri gram negatif (7). Ini dapat dianggap paradoks, karena TLR4 adalah reseptor
utama dari lipopolisakarida (LPS) dari bakteri Gram-negatif (21). Namun, ia memiliki
telah
diusulkan
bahwa
operator
di
atas-mentionedTLR4
SNP mungkin lebih tahan terhadap bentuk-bentuk lokal peradangan endotoxininduced
(seperti
dalam
kasus
kami)
dan
lebih
rentan
terhadap
respon
inflamasi
sistemik
dimulai
atau
diperburuk
oleh
endotoksin
(2).
Di
sisi
lain,
dalam
studi
utama
Arbour et al., Tidak semua mata pelajaran yang hyporesponsive ke
LPS hadTLR4mutations, dan tidak semua orang dengan theTLR4
mutasi adalah hyporesponsive ke LPS (2). Hal ini menunjukkan bahwa
Mutasi TLR4 mungkin bertindak dalam konser dengan genetik lainnya
perubahan atau faktor yang diperoleh untuk mempengaruhi respon kekebalan
kompleks untuk patogen. Sebagai contoh, cocolonization dari antarspesies (GAS vs
Haemophilus
influenzae)
mungkin umum, dan spesies ini mungkin telah berevolusi untuk memiliki
mekanisme khusus untuk menargetkan satu sama lain (14). Dengan demikian,
diubah
respon
imun
karena
adanya
fungsional
polimorfisme
dapat
memfasilitasi
kolonisasi
satu
spesies
(misalnya, bahwa dari GAS di amandel), mencegah kolonisasi yang lain (misalnya
Haemophilus
influenzae).
Hasil
dari
dalam studi vitro yang lebih lanjut bisa menjelaskan mekanisme yang tepat dari
respon
aktual
dari
TLR4
bermutasi
terhadap
komponen seluler spesifik GAS andHaemophilus influenzaespecies masih belum
tersedia.
Seperti
disebutkan
di
atas,
kehadiran
theTLR4-D299G
SNP, sendiri atau dalam kombinasi withTLR4-T399I, dikaitkan dengan peningkatan
risiko yang signifikan untuk infeksi GAS tonsil dan menurun, namun tidak signifikan,
influenzaeones probabilitas forHaemophilus. Meskipun sel-sel mengekspresikan baik
mutasi
menampilkan
kurang
ekspresi
reseptor
TLR4
dan
kurang
responsif terhadap stimulasi dengan LPS (32), initialin vitro studi
TABEL 2. Asosiasi TLR polimorfisme influenzaeinfections withHaemophilus dan /
atau
kereta
pada
pasien
dengan
penyakit
tonsil
Sebuah
Variabel
H.
influenzae-positif
pasien
H.
influenzae-negatif
pasien
Pvalue
b
OR
(95%
CI)

Jumlah
pasien
105
222
Berarti?
Usia
SD
(yr)
13,1?
11,1
12,4?
10,7
0,887
No (%) di bawah usia 14 tahun 65 (61,9) 118 (53,2) 0,153 0,69 (0,43-1,12)
No
(%)
di
atas
usia
14
tahun
40
(38,1)
104
(46,8)
Seks (no. Laki-laki / tidak. Female) 55/50 118/104 0,906 0,97 (0,61-1,54)
TLR4-D299G
No
(%)
dari
pasien
dengan
genotipe:
A
/
A (wt)
99
(94,2)
195
(87,8)
0,079
0,43
(0,17-1,09)
A
/
G
(het)
6
(5,7)
27
(12,1)
G
/
G
(hom)
0
(0)
0
(0)
No
(%)
dari
pasien
dengan
alel
dengan:
A
204
(97,1)
417
(93,9)
0,087
0,45
(0,18-1,11)
G
6
(2,8)
27
(6.08)
TLR4-T399I
No
(%)
dari
pasien
dengan
genotipe:
C
/
C
(wt)
99
(94,2)
192
(86.4)
0,038
0,38
(0,15-0,96)
C
/
T
(het)
6
(5,7)
30
(13,5)
T
/
T
(hom)
0
(0)
0
(0)
No
(%)
dari
pasien
dengan
alel
dengan:
C
204
(97,1)
414
(93,2)
0,044
0,40
(0,16-0,99)
T
6
(2,8)
30
(6.7)
TLR2-R753Q
No
(%)
dari
pasien
dengan
genotipe:
G / G (wt) 102 (97,1) 218
(98,2) 0,685 1,62 (0,35-7,29)
G
/
A
(het)
3
(2,9)
4
(1,8)
A
/
A
(hom)
0
(0)
0
(0)
No
(%)
dari
pasien
dengan
alel
dengan:
G
207
(98,5)
440
(99,1)
0,686
1,59
(0,35-7,18)
A
3
(1,5)
4
(0,9)
Sebuah
Perbandingan genotipe dilakukan antara tipe liar dan jumlah alel bermutasi (uji? 2 dua
sisi).
Singkatan:
wt,
jenis
liar;
het,
heterozigot;
hom,
homozigot.
b
Nilai tebal menunjukkan perbedaan yang signifikan secara statistik.
VOL. 18, 2011 TLR polimorfisme DAN tonsil PENYAKIT 221
pada tanggal 7 September 2015 dengan tamu http://cvi.asm.org/ Download dari
menunjukkan bahwa TLR4-D299G SNP mungkin memiliki lebih besar
Dampak
fungsional
dari
TLR4-T399I
SNP
(2).
Selain
itu,
yang
transfeksi
dari
THP-1
sel
dengan
baik-jenis
liar
atau
alel
mutan
ofTLR4demonstrated
bahwa
sel
transfected
dengan theTLR4-D299G alel tidak merespon secara normal untuk LPS
stimulasi, sementara mereka transfected dengan theTLR4-T399I alel memiliki respon
menengah, menyebabkan fenotipe lebih ringan (25). Dalam konteks ini, penggantian
dilestarikan
asam aspartat dengan glisin pada posisi 299 secara teoritis menyebabkan
gangguan
struktur
protein
-helical,
mengakibatkan
diperpanjang? strand, sedangkan substitusi isoleusin untuk treonin pada posisi 399
tidak harus mengubah struktur domain ekstraseluler dari reseptor (6, 25). Namun, ini
mungkin

tidak menjadi kasein vivo, karena penelitian asosiasi gen baru-baru ini
telah menunjukkan bahwa SNP yang disebutkan di atas dapat mempengaruhi
perkembangan penyakit dengan cara yang berbeda. Misalnya, Kiechl dkk.
mengamati
bahwa
theTLR4-D299G
SNP memiliki
lebih
mendalam
efek
perlindungan
terhadap
risiko
aterosklerosis
thanTLR4-T399I
(12), sementara hanya theTLR4-T399I SNP tampaknya mempengaruhi kerentanan
terhadap
kolitis
ulserativa
(33)
atau
pengembangan
Penyakit
kronis
paru
obstruktif
pada
perokok
(28)
dan
melindungi pasien Kaukasia dengan hepatitis kronis yang disebabkan oleh
virus hepatitis C dari pengembangan fibrosis (8). Demikian pula, dalam hal ini
Studi
kami
menunjukkan
bahwa
kehadiran
theTLR4-T399I
SNP menganugerahkan efek yang lebih mendalam thanTLR4-D299G, predisposisi
individu
untuk
gas
infeksi
tonsil
dan
melindungi
individu
dari
infeksi
influenzaetonsillar
Haemophilus.
Kesimpulannya, temuan kami menunjukkan bahwa TLR4polymorphisms
mempengaruhi
individu
untuk
gas
infeksi
dan
melindungi
mereka
terhadap
Haemophilus
influenzaeinfections
di
amandel.
Hasil ini lebih lanjut memaparkan peran yang host kekebalan genetik
variasi
mungkin
bermain
di
kerentanan
terhadap
infeksi
umum
dan penyakit tonsil