Toll - Like Receptor 4 Gene (TLR4), tapi bukan TLR2, Modifikasi

Polimorfisme Risiko Penyakit Pada Tonsil Yang Disebabkan oleh

Bakteri Streptococcus and Haemophilus influenzae
Kyriaki Liadaki, Efthimia Petinaki, ]Charalampos Skoulakis, Paraskeui Tsirevelou,
Dimitra Klapsa, Anastasios E. Germenis, dan Matthaios Speletas
Departemen Imunologi dan Histocompatibility, Universitas Thessaly Medical School,
Biopolis, Larissa, Yunani
Departemen Mikrobiologi, University of Thessaly Medical School, Biopolis, Larissa,
Yunani; dan
Departemen THT, Rumah Sakit Umum Volos, Volos, Yunani
Penyakit tonsil (tonsilitis berulang dan / atau hipertrofi tonsil) adalah salah satu
gangguan paling umum yang terjadi pada manusia, bakteri penyebab yang paling
sering adalah Streptococcus (kelompok A Streptococcus beta-Haemolitic [GAS]) and
Haemophilus influenzae. Sampai saat ini, belum ada penelitian yang menyelidiki
mengapa beberapa individu lebih rentan terhadap infeksi tonsil yang disebabkan oleh
bakteri tertentu daripada yang lain. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk
mengungkap kemungkinan hubungan antara polimorfisme Toll-like reseptor gene
(TLR) dengan penyakit tonsil. Polimorfisme TLR2-R753Q, TLR4-D299G, dan
TLR4-T399I dibagi dalam 327 kelompok pasien yang mengalami tonsilektomi karena
tonsilitis berulang (n = 245) dan hipertrofi tonsil (n = 82) dan 245 donor sumsum
tulang yang sehat. Hubungan polimorfisme tersebut dengan terisolasinya
strain bakteri setelah tonsilektomi juga diselidiki. Menariknya, pembawa
polimorfisme TLR4 ditampilkan dengan sekitar 3 kali lipat meningkatkan risiko
infeksi GAS (untuk TLR4-D299G, [OR] = 2.81, 95% confidence interval [CI] 1,166,79, P = 0,038; untuk polimorfisme TLR4-T399I, OR = 3.01, 95% CI = 1,29-7,02, P
= 0,023), dan hubungan ini lebih mendalam pada pasien dengan tonsilitis berulang.
Sebaliknya, yang Kehadiran polimorfisme TLR4-T399I dikaitkan dengan 2 kali lipat
penurunan risiko Haemophilus influenzae carriage (OR = 0,38, 95% CI = 0,15-0,96, P
= 0,038). Pada akhirnya, tidak ada perbedaan yang signifikan yang
mengamati, mengingat genotipe dan alel frekuensi dari polimorfisme yang disebutkan
di atas, antara pasien dan kontrol. Temuan kami menunjukkan bahwa, mengenai
infeksi tonsil, polimorfisme TLR4 mempengaruhi individu untuk terjadinya infeksi
oleh karena GAS, sementara mereka melindungi serangan infeksi oleh karena
Haemophilus influenzae. Hasil penelitian ini selanjutnya memaparkan bahwa variasi
genetik kekebalan tubuh setiap orang mungkin berperan dalam kerentanan terhadap
infeksi dan penyakit tonsil.
Penyakit tonsil merupakan salah satu gangguan paling umum yang terjadi
pada manusia dan disertai dengan gejala seperti tonsilitis akut berulang abses
peritonsillar, dan hipertrofi tonsil (TH). Tonsilektomi diindikasikan dalam kasus
berulang atau gejala persisten infeksi tonsil atau hipertrofi dan memiliki konsekuensi
fungsional (dyspnea atau disfagia, pernapasan mulut, apnea tidur obstruktif, dll), dan
itu merupakan salah satu operasi yang paling sering dilakukan, terutama pada anakanak (10,34). Beberapa studi telah menunjukkan bakteri penyebabnya adalah
Streptococcus (kelompok A Streptococcus beta-Haemolitic [GAS]) dan Haemophilus
influenzae, telah terisolasi di 14-37% dan 16-32% dari pasien, masing-masing, adalah

bakteri yang paling umum menyebabkan penyakit tonsil (10, 15, 19, 30, 34). Bakteri
yang sama, bagaimanapun, juga telah diisolasi dari tonsil individu sehat (34). Secara
umum, tidak ada perbedaan yang signifikan pada variasi flora mikroba pasien dengan
penyakit tonsil dan pada kontrol sehat yang telah diamati (32, 34). Oleh karena itu,
muncul dan masih terdapat pertanyaan yang belum terjawab yaitu mengapa beberapa
individu lebih rentan terjadi infeksi tonsil, serta mengapa beberapa dari mereka
menderita infeksi oleh bakteri tertentu? Meskipun faktor lingkungan, seperti
kehadiran tempat penitipan atau jumlah saudara kandung, mempengaruhi morbiditas
dari bakteri (1), perlu dicatat bahwa kecenderungan genetik untuk tonsil
Penyakit juga telah diamati (14).
Studi awal telah menunjukkan bahwa perlindungan terhadap infeksi adalah
terkait dengan kemampuan host untuk menghasilkan kekebalan yang cukup
tanggapan terhadap unsur-unsur penting bakteri (11, 13). Pada akhir ini, sekumpulan
Toll Like Reseptors (TLRs) merupakan peran utama, evolusi bakteri yang telah
diakui Associated Molecular Patterns (PAMPs) hadir pada sebagian besar jenis
mikroorganisme (9). Di antara mereka, TLR2 dan TLR4 yang terletak di
permukaan sel dan mengenali produk bakteri unik untuk menyerang organisme,
termasuk GAS dan Haemophilus influenzae (20, 24, 31). Baru-baru ini, polimorfisme
Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) dari TLR2 dan TLR4 telah dikaitkan
dengan reseptor hyporesponsiveness dan immunopathology, termasuk kerentanan
terhadap bakteri, jamur, dan infeksi virus (23). Namun, kontribusi yang mungkin dari
SNP ini menuju immunopathology tonsil benar-benar tidak diketahui.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk meneliti apakah
SNP dari TLR2 and TLR4, khususnya, TLR2-R753Q (SNP database [dbSNP]
penambahan nomor rs5743708), TLR4-D299G (dbSNP penambahan nomor
rs4986790), dan TLR4-T399I (dbSNP penambahan nomor. rs4986791), terkait
dengan GAS and infeksi Haemophilus influenzae, mempengaruhi virulensi dan
kemampuan untuk menyebabkan penyakit tonsil.
METODE DAN BAHAN
Kelompok sampel. Tiga ratus dua puluh tujuh pasien (173 laki-laki,
154perempuan; usia rata-rata, 12,6 tahun; rentang usia, 3-59 tahun) yang menjalani
tonsilektomi total atau parsial antara Januari 2006 dan Januari 2010 yang terdaftar di
penelitian. Para pasien dikategorikan ke dalam dua kelompok: tonsilitis berulang
(RT) kelompok (n = 245 pasien; 131 laki-laki, 114 perempuan) dan kelompok TH (n =
82 pasien; 42 laki-laki, 40 perempuan). Pasien dengan tonsilitis berulang yang
memiliki setidaknya tiga episode di masing-masing 3 tahun sebelumnya, lima episode
di setiap 2 tahun, atau tujuh episode dalam 1 tahun dikategorikan ke dalam kelompok
1, sementara pasien dengan hipertrofi tonsil disertai dengan mendengkur, disfagia,
pernapasan mulut, dan sindrom apnea tidur tapi tanpa tonsilitis berulang
dikategorikan ke dalam kelompok 2. Pasien yang menerima antibiotik 2 minggu
sebelum operasi dikeluarkan. Operasi dilakukan selama periode ketika pasien bebas
dari gejala. Spesimen tenggorokan swab diambil dari setiap pasien sebelum
operasi. Jaringan tonsil diekstraksi selama operasi segera ditransfer
ke dalam wadah kering steril dan dikirim ke laboratorium. Jaringan tonsil yang
dipotong menjadi beberapa bagian (2-4 mm), dibagi menjadi tiga bagian, dan
disimpan pada suhu -80 C kultur konvensional, analisis molekuler, dan bahan-bahan
arsip.

Sebuah penelitian kohort dari 245 donor sumsum tulang yang sehat (BMDs)
(110 laki-laki, 135 perempuan; usia rata-rata, 35,5 tahun; rentang usia, 19-65 tahun)
direkrut digunakan sebagai kelompok kontrol yang sehat untuk mengestimasi
prevalensi dari SNP yang dianalisis dalam populasi Yunani secara umum.
Semua sampel berasal dari individu-individu yang tidak berhubungan yang
etnis Yunani, dinilai dengan kuesioner. Studi ini disetujui oleh Institusi Dewan
Review Universitas Rumah Sakit Larissa, dan persetujuan tertulis yang diperoleh dari
masing-masing individu atau dengan syarat relatif, dimana dalam kasus ini
persetujuan pasien secara hukum tidak berlaku (misalnya, dengan anak-anak).
Kultur Konvensional. Untuk setiap pasien, swab tenggorokan diperoleh
sebelum dilakukan operasi, serta potongan jaringan tonsil yang diperoleh pasca
operasi, diinokulasi ke dalam 5% darah domba Columbia dan agar coklat
(bioma'rieux, Marcy l'Etoile, Perancis) dan diinkubasi pada suhu 37 C dalam 5%
CO2 atmosphere dalam suasana anaerob selama 10 hari. Gram stain dilakukan pada
semua spesimen untuk mengevaluasi leukosit dan flora mikroba apa yang ditemukan.
Pada isolasi bakteri dalam kultur murni, diperoleh dengan memilih koloni yang
terisolasi, kemudian diidentifikasi dengan tes biokimia yang tersedia secara komersial
dan bila diperlukan menggunakan metode identifikasi molekuler (18, 22).
Deteksi molekuler DNA dan RNA bakteri. Empat individu diambil
potongan jaringan tonsil dari setiap pasien yang dipilih untuk ekstraksi simultan
DNA dan RNA, menggunakan kit komersial (Invitrogen, CA), berdasarkan
instruksi pembuatan. Selain itu, identitas ekstrak RNA dikonfirmasi dengan
elektroforesis, setelah 10-menit dicerna pada suhu 37 C dengan bebas DNase
RNase (Qiagen, Crawley, Inggris Raya). Efisiensi ekstraksi DNA dan kemungkinan
adanya inhibitor dalam sampel dikonfirmasi oleh deteksi gen 2-mikroglobulin (26).
PCR primer untuk gen 2mikroglobulin yang primer forward 5GAAGAGCCAAGGACAGGTAC-3
dan
primer
reverse5CAACTTCATCCACGTTCACC-3, dan Kondisi PCR yang 4 menit pada suhu 94C,
diikuti sebanyak 35 siklus dari suhu 94C selama 60 detik, suhu 58C dalam
60 detik, dan suhu 72C selama 60 detik dan 10 menit pada suhu 72 C setelah siklus
terakhir. Kedua DNA dan RNA disimpan pada -80 C.
Adanya DNA bakteri ditentukan oleh PCR dengan menargetkan 16S
gen rRNA sebagaimana telah dijelaskan sebelumnya (22), dengan kontrol positif dan
negatif termasuk dalam reaksi sesuai dengan prosedur standar. Di seluruh dunia PCR
primer yang digunakan adalah primer forward 5-AGAGTTTGATCATGGCTCA-3
dan primer reverse 5-ACGGCGACTGCTGCTGGCAC-3, sedangkan kondisi PCR
adalah 4 menit pada suhu 95C, diikuti dengan 35 siklus dari suhu 94 C selama 30
detik, 55C selama 30 detik, dan suhu 72 C selama 90 detik dan 10 menit pada suhu
72C setelah siklus terakhir. Selanjutnya, semua Produk PCR diurutkan pada kedua
arah menggunakan BigDye Terminator (versi 1.1) kotak siklus pengurutan (PerkinElmer, Coignieres, Prancis), seperti yang dijelaskan oleh pembuatnya. Perbandingan
urutan diperoleh dengan urutan yang ada dalam database GenBank, menggunakan
program BLAST yang tersedia di Situs Pusat Nasional Biotechnology Information
(NCBI), membantu kami menentukan hasil DNA bakteri. Jadi, ketika kesamaan 16S
rRNA urutan gen mendekati 99%, hasilnya dianggap sesuai untuk
identifikasi tingkat-spesies. Selain itu, hasil menunjukkan urutan campuran
pengamatan pada elektroforegram dan kloning dari produk PCR dalam pGEM-T
Vektor Easy (Promega, Charbonnieres, Prancis), yang telah dijelaskan oleh
pembuatnya. Dalam beberapa kasus, klon yang memperkuat semalaman

pada LB medium (USB, Cleveland, OH), mengingat PCR dan peruntunan yang
telah dilakukan dan dijelaskan seperti di atas (26).
Untuk menferifikasi hasil yang diperoleh dengan menggunakan 16S rRNA,
semua spesimen yang diperiksa, menggunakan primer spesifik untuk GAS and
Haemophilus influenzae (18, 22,26). Secara khusus, primer PCR untuk gen GAS yang
primer forward 5-GAGAGACTAACGCATGTTAGTA-3 Dan primer reverse 5TAGTTACCGTCACTTGGTGG-3, dan Kondisi PCR yang 30 detik pada suhu 95C,
diikuti oleh 40 siklus 95C selama 15 detik, 50C selama 30 detik, dan 72C selama
30 detik dan 10 menit pada 72C setelah siklus terakhir. PCR primer untuk gen
Haemophilus influenza yang primer forward 5-TATCACACAAATAGCGGTTGG-3
dan primer reverse 5-GGCCAAGAGATACTCATAGAACGTT-3, dan Kondisi PCR
yang 5 menit pada suhu 95 C, diikuti oleh 35 siklus 95 C selama 25 s, 57 C
selama 40 detik, dan 72C untuk 60 detik dan 7 menit pada 72 C setelah siklus
terakhir.
Deteksi molekuler dari SNPs TLR2 dan TLR4. Deteksi TLR4-D299G
dan SNP TLR4-T399I dilakukan oleh alel spesifik PCR, diikuti oleh analisis
restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP), seperti yang dijelaskan
sebelumnya (16, 29). Secara singkat, di kedua reaksi primer forward yang
dimodifikasi di 5 terakhir, menciptakan batasan pengenalan enzim (NcoI untuk
polimorfisme TLR4-D299G dan HinfI untuk polimorfisme TLR4-T399I), sehingga
jika ada polimorfisme, analisis PCR-RFLP akan menciptakan fragmen pencernaan
yang terlihat pada gel agarosa (16, 29). Deteksi primer untuk
SNP TLR4-D299G yang primer forward 5-GATTAGCATACTTAGACTACT
ACCTC(G)CATG-3 dan primer reverse 5-GATCAACTTCTGAAAAAGCA
TTCCCAC-3. Deteksi primer untuk SNP TLR4-T399I yang forward
primer 5-GGTTGCTGTTCTCAAAGTGATTTTGGGA(C)GAA-3 dan primer
reverse 5-GATCAACTTCTGAAAAAGCATTCCCAC-3 . Nukleotida dalam tanda
kurung yang dimodifikasi dan diubah dengan yang digarisbawahi. Kondisi kedua
PCR adalah 2 menit pada suhu 94C, diikuti oleh 32 siklus pada suhu 94C untuk
30 detik, pada suhu 57 C selama 30 detik, dan suhu 72 C selama 60 detik dan 5
menit pada suhu 72C setelah siklus terakhir. Untuk SNP TLR4-D299G, sebuah
fragmen 249-bp diamplifikasi dengan PCR dan digunakan untuk pencernaan NcoI
(Invitrogen, Inggris Raya) dalam 4 jam pada suhu 37C. Kehadiran produk PCR tak
tercerna ini adalah indikasi dari wild-type sample, sedangkan polimorfisme yang
mengakibatkan pencernaan produk PCR adalah fragmen 218-bp dan 31-bp. Untuk
SNP TLR4-T399I, sebuah fragmen 407-bp diperkuat dengan PCR dan mengalami
pencernaan HinfI (New England BioLabs, United Kingdom) untuk 4 jam pada suhu
37 C. Kehadiran produk PCR tak tercerna ini adalah indikasi dari wild-type sample,
sedangkan polimorfisme yang mengakibatkan pencernaan produk PCR adalah
fragmen 375-bp dan 32 bp-.
Deteksi polimorfisme TLR2-R753Q juga dilakukan Analisis oleh PCR-RFLP
(27). Protokol ini dirancang atas dasar fakta bahwa hasil polimorfisme dalam
pengenalan urutan DNA oleh enzim restriksi SfcI (New England BioLabs). PCR
primer yang primer forward 5-TATGGTCCAGGAGCTGGAGA-3 Dan primer
reverse 5TGACATAAAGATCCCAACTAGACAA-3, dengan kondisi PCR adalah
2 menit pada suhu 94C, diikuti oleh 38 siklus pada suhu 94 C selama 30 detik, pada
suhu 64C selama 30 detik, dan suhu 72C selama 45 detik dan
5 menit pada suhu 72 C setelah siklus terakhir. Kehadiran produk PCR tak tercerna
(430bp) adalah indikasi dari wild-type sample, sedangkan polimorfisme yang
mengakibatkan pencernaan pada produk PCR adalah fragmen 307-bp dan 123 bp-.

Untuk semua PCR yang dijelaskan di sini, total 100 sampai 200 ng DNA
diamplifikasi dalam campuran 30l reaksi campuran menggunakan 62,5M setiap
trifosfat deoxynucleoside, 20 pmol primer masing-masing, 1,5 mM MgCl2, dan 1,0 U
Taq polymerase (Invitrogen,United Kingdom) dalam buffer yang disediakan oleh
pembuatnya. Semua PCR dan prosedur pencernaan dibawa ke perlengkapan mesin
PCR PTC-200 (MJ Penelitian, Watertown, MA), serta PCR dan produk pencernaan
dianalisis di 2% TBE (Tris-borat-EDTA) gel agarosa.
Untuk konfirmasi hasil analisis PCR-RFLP, yang dipilih secara acak PCR
produk positif dan negatif untuk polimorfisme TLR dimurnikan dengan menggunakan
sistem pemurnian PCR (Qiagen) dan diruntutkan langsung menggunakan ABI
Prism 310 analyzer genetik (Applied Biosystems, Foster City, CA) dan BigDye
Terminator sequencing DNA kit (Applied Biosystems).
Analisis Statistik. Uji chi-square pearson dengan Yates' koreksi kontinuitas
digunakan untuk membandingkan alel dan genotipe frekuensi antara BMDs, pasien,
dan subkelompok pasien, sedangkan uji Fisher dilakukan ketika diperlukan. Variabel
kontinyu dibandingkan dengan menggunakan uji nonparaetrik MannWhitney U.
Suatu hubungan dinyatakan sebagai rasio odds (OR) dengan sesuai interval
kepercayaan 95% (CI), dan variabel dianggap signifikan bila P < 0,05. Akhirnya,
koefisien korelasi Spearman (r) digunakan untuk mengkorelasikan kehadiran SNP
dengan usia dan penyakit. Analisis atas dilakukan dengan menggunakan Paket
Statistik untuk Ilmu Sosial (SPSS; Versi 13; Chicago, IL). Selain itu, penyimpangan
dari Hardy-Weinberg equilibrium dievaluasi menggunakan Arlequin software tersedia
secara bebas (versi 3.11; http://cmpg.unibe.ch/software/arlequin3).
HASIL
Analisis polimorfisme TLR pada pasien dengan penyakit tonsil dan
BMDs. Tidak ada pasien dengan penyakit tonsil menunjukkan homozigositas untuk
setiap SNP atau heterosigositas ganda oleh TLR2-R753Q and TLR4-D299G atau
polimorfisme TLR4-T399I. Selain itu, G alel dari SNP TLR4-D299G memiliki
hubungan ketidakseimbangan tingkat tinggi dengan alel C dari SNP TLR4-T399I
untuk kedua pasien dan BMDs, seperti dilaporkan sebelumnya (28). Ketika frekuensi
alel dari TLR4-D299G, TLR4-T399I, dan polimorfisme TLR2-R753Q
dipertimbangkan, tidak ada perbedaan signifikan yang diamati antara pasien dan
kontrol (5.05% dan 6.94%, masing-masing, untuk TLR4-D299G [P = 0,203]; 5,51%
dan 6,74%, masing-masing, untuk TLR4-T399I [P = 0,452]; dan 1,07% dan 0,61%,
masing-masing, untuk TLR2-R753Q [P = 0,530]). Selain itu, tidak ada perbedaan
yang signifikan dalam genotipe dan alel yang frekuensinya telah tersebut di atas SNP
ditemukan ketika dua kelompok tonsil yang dipisah kemudian dibandingkan dengan
BMDs (untuk kelompok RT, P = 0.680 dan P = 0,512, masing-masing, untuk TLR4D299G; P = 0.890 dan P = 0,603, masing-masing, untuk TLR4-T399I; dan P = 0,339
dan P = 0,224, masing-masing, untuk TLR2-R753Q; untuk kelompok TH, P = 0,107
dan P = 0,085, masing-masing, untuk TLR4-D299G; P = 0.420 dan P = 0,267,
masing-masing, untuk TLR4-T399I; dan P = 0,576 dan P = 0,577, masing-masing,
untuk TLR2-R753Q).
Pada akhirnya, tidak ada korelasi yang signifikan dari setiap SNP dengan
kelompok penyakit tonsil (r = - 0,064 dan P = 0,127 untuk TLR4-D299G, r = - 0,037
dan P = 0,380 untuk TLR4-T399I, r = 0,007 dan P = 0,866 untuk TLR2-R753Q) atau
usia (r = - 0.014 dan P = 0,745 untuk TLR4-D299G, r = - 0,015 dan P = 0,713 untuk
TLR4-T399I, r = 0,035 and P = 0.410 untuk TLR2-R753Q) diamati (Gbr. 1).

Hubungan antara polimorfisme TLR dengan Streptococcus pyogenes dan

infeksi Haemophilus influenzae. Di antara pasien dengan penyakit tonsil,
Haemophilus influenzae telah diisolasi dari 105 pasien (32,1%) dan GAS diisolasi
dari 38 (11,6%), sedangkan kedua bakteri diidentifikasi di 10 pasien ini. Akibatnya,
kami membandingkan prevalensi TLR polimorfisme dalam subkelompok pasien
sesuai dengan penyebab penyakit tonsil. Seperti terlihat pada Tabel 1, TLR4-D299G
dan polimorfisme TLR4-T399I yang sangat terkait dengan GAS, karena pembawa
menampilkan risiko sekitar 3 kali lebih meningkat untuk infeksi GAS (Tabel 1).
Temuan ini juga mendalam bahkan untuk pembawa kedua polimorfisme TLR4
(frekuensi genotipe, 21,6% dibandingkan 8,4%, rasio odds = 3,00, 95%
CI 1,23-7,28, P = 0,019; frekuensi alel, 10,8% dibandingkan 4,2%, rasio odds = 2,94,
95% CI = 1,21-7,13, P = 0.021). Pada Sebaliknya, tidak ditemukan hubungan antara
polimorfisme TLR2-R753Q dengan GAS (P = 0,418 dan P = 0,419 untuk genotipe
dan frekuensi alel, masing-masing). Selain itu, kami juga mengamati bahwa infeksi
GAS lebih menonjol dalam pasien di bawah usia 14 tahun dibandingkan pasien
dewasa (Tabel 1).
Analisis lebih lanjut mengenai kelompok tonsil yang berbeda menunjukkan
hubungan yang kuat antara kedua SNPs TLR4 dan infeksi GAS hanya pada kelompok
RT. Secara khusus, pasien dengan TLR4-T399I dan tonsilitis berulang
memperlihatkan 2,6 kali meningkatan risiko infeksi GAS (P = 0,043, 95%
CI = 1,12-6,25), sedangkan kehadiran polimorfisme TLR4-D299G juga dikaitkan
dengan 2,2 kali meningkatkan risiko, tetapi perbedaannya tidak bermakna secara
statistik (P = 0,075, 95% CI = 0,94-6,32). Pada akhirnya, pembawa dari kedua
SNPs TLR4 diperlihatkan 2,5 kali lipat peningkatan risiko infeksi GAS; Namun,
perbedaannya tidak signifikan (rasio odds = 2,55, 95% CI = 0,98-6,63, P = 0.068).
Di sisi lain, adanya TLR4-D299G dan polimorfisme TLR4-T399I tidak
dikaitkan dengan infeksi GAS pada kelompok TH (P = 0,273 dan P = 0,362, masing
masing). Pada akhirnya, tidak ada hubungan antara SNP TLR2-R753Q dengan infeksi
GAS yang diamati untuk salah satu dari dua kelompok. Menariknya, seperti yang
disajikan pada Tabel 2, adanya polimorfisme TLR4-T399I dikaitkan dengan hampir 2
kali lipat penurunan risiko infeksi Haemophilus influenzae, ditunjukkan oleh analisis
genotipe dan frekuensi alel. Menariknya, sebuah hubungan hampir mirip dengan
polimorfisme TLR4-D299G diamati, tetapi gagal mencapai statistik signifikansi
(Tabel 2). Selain itu, pengamat dari kedua SNP TLR4 ditampilkan 2 kali lipat
menurunkan risiko infeksi Haemophilus influenzae , namun perbedaan ini juga gagal
menjadi signifikan (rasio odds = 0,45, 95% CI = 0,16-1,25, P = 0,131). Di
sisi lain, kehadiran SNP TLR2-R753Q tidak mempengaruhi infeks Haemophilus
influenzae (Tabel 2). Sebuah analisis lebih lanjut mengenai kelompok RT dan TH
tidak mengungkapkan hubungan yang signifikan antara polimorfisme TLR dan
infeksi Haemophilus influenzae (data tidak ditunjukkan).
Seperti disebutkan di atas, kedua strain bakteri yang diisolasi
dari 10 pasien (5 laki-laki, 5 perempuan; berarti standar deviasi [SD] usia, 9,1 6,3
tahun; 8 pasien dengan RT dan 2 dengan TH). Menariknya, dalam kelompok ini
genotipe dan alel frekuensi kedua polimorfisme TLR4 yang sangat tinggi
(30% dan 15%, masing-masing); Namun, karena memiliki angka yang rendah dari
pasien-pasien ini, analisis statistik lebih lanjut tidak dilakukan.
PEMBAHASAN
Untuk yang terbaik dari pengetahuan kita, ini adalah studi pertama yang
menghadirkan hubungan yang kuat antara polimorfisme TLR dan penyakit tonsil.

Analisa besar kohort pasien dilakukan tonsilektomi karena tonsilitis berulang dan /
atau hipertrofi tonsil, adanya kejelasan bukti yang menunjukkan bahwa polimorfisme
TLR4 berhubungan dengan peningkatan risiko tonsilitis berulang akibat infeksi GAS.
Secara bersamaan, kehadiran mereka, terutama kehadiran SNP TLR4-T399I,
tampaknya memberikan perlindungan serangan infeksi Haemophilus influenzae dan /
atau pembawanya. Sebaliknya, tidak ditemukan adanya hubungan antara
polimorfisme TLR2-R753Q dan kecenderungan penyakit tonsil. GAS adalah Grampositif bakteri penyebab terpenting yang bertanggung jawab untuk spektrum yang luas
terjadinya infeksi, mulai dari yang ringan penyakit (misalnya, tonsilitis akut) sampai
penyakit serius (misalnya, tonsilitis berulang, necrotizing fasciitis, sepsis, dan gejala
sisa poststreptococcal berat) (3, 4). Faktor-faktor yang memprovokasi virulensi
patogen, memungkinkan GAS untuk melarikan diri surveilans kekebalan atau,
sebaliknya, merangsang reaksi yang berlebihan dari sistem kekebalan tubuh, yang
tidak jelas (3, 4). Penelitian terbaru telah menunjukkan bahwa pengakuan multimodal
dari GAS oleh TLRs, termasuk TLR2 dan TLR4, berlangsung, di mana kombinasi
TLR-dimediasi untuk respon yang cepat dan efektif terhadap patogen (5, 31, 35).
Kedua SNPs TLR4 dianalisis dalam penelitian ini (D229G dan T399I) terletak di
ekson ketiga gen dan mengubah domain ekstraseluler dari reseptor (2). Mereka telah
dikaitkan dengan hyporesponsiveness reseptor di makrofag, sel epitel, dan
sel mononuklear darah perifer, mengakibatkan gangguan sinyal TLR4 (2). Dengan
demikian, kita bisa berharap bahwa kehadiran SNPs TLR4 mungkin mengakibatkan
gangguan sinyal, yang disebabkan oleh hyaluzonan dan / atau cytolysins GAS
lainnya, mengarah ke berkurangnya pertahanan bakteri, penyakit invasif, dan infeksi
berulang. Menariknya, hasil yang sama juga dilaporkan oleh Yuan et al., yang
menunjukkan bahwa TLR4 adalah variabel genetik yang terkait dengan peningkatan
risiko terkena penyakit invasif yang disebabkan oleh Streptococcus pneumoniae,
bakteri Gram-positif lain (36).
Selain itu, kami menunjukkan bahwa SNP TLR4-T399I menurunkan risiko
pembawa dan/atau infeksi Haemophilus influenzae, yaitu, diduga efek kebalikan dari
reseptor hyporesponsiveness. Hasil yang sama juga telah dilaporkan baru-baru ini
oleh Hawn et al., yang menunjukkan bahwa kehadiran SNP TLR4-D299G dikaitkan
dengan perlindungan dari cystitis berulang, terutama kondisi yang disebabkan oleh
Bakteri gram negatif (7). Ini dapat dianggap paradoks, sejak TLR4 merupakan
reseptor utama lipopolisakarida (LPS) dari bakteri Gram-negatif (21). Namun, ia telah
diusulkan operator bahwa yang telah di sebutkan di atas SNP TLR4 mungkin lebih
tahan terhadap bentuk-bentuk lokal peradangan endotoxin yang terkena (seperti dalam
kasus kami) dan lebih rentan terhadap respon inflamasi sistemik dimulai atau
diperburuk oleh endotoksin (2). Di sisi lain, dalam studi utama Arbour et al., Tidak
semua mata pelajaran yang hyporesponsive mempunyai mutasi LPS TLR4, dan tidak
semua orang dengan TLR4 hyporesponsive terhadap LPS (2). Hal ini menunjukkan
bahwa Mutasi TLR4 mungkin bertindak dalam peran dengan perubahan genetik
lainnya atau faktor yang diperoleh untuk mempengaruhi respon kekebalan kompleks
terhadap patogen. Sebagai contoh, cocolonization antarspesies (GAS vs Haemophilus
influenzae) pada umumnya, dan pada spesies ini mungkin telah berevolusi
meningkatkan mekanisme khusus untuk menargetkan satu sama lain (14). Dengan
demikian, respon imun diubah karena fungsi polimorfisme yang dapat memfasilitasi
kolonisasi satu spesies (misalnya, bakteri GAS di tonsil), mencegah kolonisasi lain
(misalnya Haemophilus influenzae). Hasil studi in vitro lebih lanjut menjelaskan
mekanisme yang tepat dari kemampuan reaksi aktual dari TLR4 yang bermutasi

terhadap komponen seluler yang spesifik dari species GAS and Haemophilus
influenzae masih belum tersedia.
Seperti disebutkan di atas, kehadiran SNP TLR4-D299G, sendiri atau dalam
kombinasi dengan TLR4-T399I, dikaitkan dengan peningkatan risiko yang signifikan
untuk terjadinya infeksi GAS di tonsil dan penurunannya, namun tidak signifikan,
kemungkinan species Haemophilus influenzae. Meskipun sel-sel mengekspresikan
kedua mutasi menunjukkan ekspresi reseptor TLR4 kurang dan mereka kurang
responsif terhadap stimulasi dengan LPS (32), awal sudi in vitro menunjukkan bahwa
SNP TLR4-D299G mungkin memiliki Dampak fungsional yang lebih besar dari SNP
TLR4-T399I (2). Selain itu, transfeksi sel THP-1 dengan baik jenis-bebas atau alel
mutan dari TLR4 ditunjukkan bahwa sel transfected dengan alel TLR4-D299G tidak
merespon stimulasi LPS secara normal, sementara transfected dengan alel TLR4T399I memiliki respon menengah, menyebabkan fenotipe lebih ringan (25). Dalam
konteks ini, penggantian pengawetan asam aspartat dengan glisin pada posisi 299
secara teoritis menyebabkan gangguan struktur protein -helical, mengakibatkan strand diperpanjang, sedangkan substitusi isoleusin dari treonin pada posisi 399 tidak
harus mengubah struktur daerah ekstraseluler dari reseptor (6,25). Namun, ini
mungkin tidak menjadi kasus secara in vivo, karena penelitian asosiasi gen baru-baru
ini telah menunjukkan bahwa SNP yang disebutkan di atas dapat mempengaruhi
perkembangan penyakit dengan cara yang berbeda. Misalnya, Kiechl dkk. mengamati
bahwa SNP TLR4-D299G memiliki efek perlindungan lebih mendalam terhadap
risiko aterosklerosis daripada TLR4-T399I (12), sementara hanya SNP TLR4-T399I
yang tampaknya mempengaruhi kerentanan terhadap kolitis ulserativa (33) atau
pengembangan Penyakit kronis paru obstruktif pada perokok (28) dan
melindungi pasien Kaukasia dengan hepatitis kronis yang disebabkan oleh virus
hepatitis C dari pengembangan fibrosis (8). Demikian pula, dalam hal ini Studi kami
menunjukkan bahwa kehadiran SNP TLR4-T399I memberikan efek yang lebih besar
daripada TLR4-D299G, predisposisi setiap individu untuk infeksi tonsil karena GAS
dan melindungi individu dari infeksi tonsil karena Haemophilus influenzae.
Kesimpulannya, temuan kami menunjukkan bahwa polimorfisme TLR4
mempengaruhi individu untuk terjadi infeksi oleh karena GAS dan melindungi
mereka dari infeksi bakteri Haemophilus influenzae di tonsil. Hasil ini lebih lanjut
menjelaskan teori variasi kekebalan genetik setiap host mungkin berperan terhadap
kerentanan infeksi dan penyakit tonsil.