Menentukan ED50 ( Effect Dose) Diazepam pada Tikus
KELOMPOK A1 Jati Nurwigati
(201310330311005)
Atika Rahmania Lilo
(201310330311006)
Tiara Juli Audiawiyanti Putri
(201310330311007)
Hiolda Lubvianda Oktavin
(201310330311015)
Hendrian Novantiano
(201310330311026)
Yulanda Fitriana
(201310330311046)
Karina Puspaseruni
(201310330311048)
Alfien Rusdiana
(201310330311053)
Prajnamita Manindhya
(201310330311084)
Cindy Alverina
(201310330311103)
Cha Cha Astrid Ghesa
(201310330311111)
Windy Kirtanti
(201310330311126)
Dwi Wilyani
(201310330311146)
Elok Yulia Manthofani
(201310330311172)
Tesa Yovi Pratama
(201310330311173)
FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG 2013
TUJUAN 1.
Mengamati perubahan aktivitas perilaku setelah pemberian diazepam secara
2.
intraperitonial Menentukan ED50 (dosis yang memberi efek tidur) diazepam
DASAR TEORI ED50 (effective Dose 50) adalah dosis yang menimbukkan efek terapi pada 50% individu. Pemberian Diazepam secara interperitoneal digunakan untuk menentukan ED50 yaitu dosis yang memberikan efek tidur pada 50% individu atau separuh dari jumlah individu yang diamati. Benzodiazepine meningkatkan kerja GABA di system syaraf pusat. Diazepam bekerja disemua sinaps GABA a, tetapi kerjanya dalam mengurangi spastisitas sebagai mediasi di medulla spinalis. Karena itu Diazepam dapat juga digunakan pada spasme otot yang asalnya dari mana saja, termasuk trauma otot lokal. Tetapi, obat ini menyebabkan sedasi pada dosis yang diperlukan untuk mengurangi tonus otot. ED50 merupakan dosis yang menghasilkan setengah efek maksimal, dan respon maksimum terjadi pada dosis di mana kita menganggap reseptor terisi. Diazepam merupakan obat dari golongan benzodiazepine. Golongan obat ini bekerja pada sistem syaraf pusat dengan efek utama : sedasi, hypnosis, pengurangan
terhadap
rangsangan
emosi/ansietas,
relaksasi
otot
dan
antikonvulasi. Diazepam menyebabkan tidur dan penurunan kesadaran yang
disertai nistagmus dan bicara lambat, tetapi tidak berefek analgesic. Juga tidak menimbulkan potensial terhadap efek penghambat neuromuskuler dan efek analgesic obat narkotik. Diazepam digunakan untuk menimbulkan sedasi basal pada anestesi regional, endoskopi dan prosedur dental, juga untuk induksi anastesia terutama pada penderita dengan penyakit kardiovaskuler. Diazepam adalah turunan dari benzodiazepine dengan rumus molekul 7kloro- 1,3-dihidro- 1-metil- 5-fenil- 2H- 1,4-benzodiazepin- 2-on. Mekanisme kerjanya yaitu bekerja pada sistem GABA, yaitu dengan memperkuat fungsi hambatan neuron GABA. Reseptor Benzodiazepin dalam seluruh sistem saraf
pusat, terdapat dengan kerapatan yang tinggi terutama dalam korteks otak frontal dan oksipital, di hipokampus dan dalam otak kecil. Pada reseptor ini, benzodiazepin akan bekerja sebagai agonis. Terdapat korelasi tinggi antara aktivitas farmakologi berbagai benzodiazepin dengan afinitasnya pada tempat ikatan. Dengan adanya interaksi benzodiazepin, afinitas GABA terhadap reseptornya akan meningkat, dan dengan ini kerja GABA akan meningkat. Dengan aktifnya reseptor GABA, saluran ion klorida akan terbuka sehingga ion klorida akan lebih banyak yang mengalir masuk ke dalam sel. Meningkatnya jumlah ion klorida menyebabkan hiperpolarisasi sel bersangkutan dan sebagai akibatnya, kemampuan sel untuk dirangsang berkurang (Laurent, 2005; Sean, 2007; Barbara, 2006). Teori occupancy sederhana menyatakan bahwa intensitas respon obat adalah sebanding dengan jumlah reseptor diduduki oleh obat itu. Sederhananya, semakin banyak obat berikatan dengan reseptor yang lebih intens responnya. Teori occupancy menjelaskan bahwa intensitas efek farmakologi berbanding lurus dengan total jumlah reseptor diduduki oleh obat. Efek obat menjadi lebih intens karena jumlah reseptor diduduki meningkat. karenanya, respon farmakologis maksimal sesuai dengan pendudukan semua reseptor (Cannon, 2007). Dosis dimulai dengan 4mg/hari yang dapat ditingkatkan bertahap hingga maksimum 60mg/hari. Benzodiazepine lain yang sering juga dipakai sebagai pelemas otot adalah midazolam (Dikutip dari Farmakologi dan Terapi Universitas Indonesia, Tahun 2007, hall 112) Benzodiazepine yang tidak larut dalam air adalah Diazepam dan Lorazepam, oleh karenanya obat-obat ini tidak diberikan secara intra vena pada pasien, karena dapat menyebabkan tidur, mengurangi cemas, dan menimbulkan amnesia anterograd, tetapi tidak berefek analgesic. Diazepam yang diberikan secara intra vena segera didistribusikan ke otak, tetapi efeknya baru Nampak setelah beberapa menit. Kadarnya segera turun karena adanya redistribusi tetapi sedasi sering muncul lagi setelah 6-8 jam akibatnya adanya penyerapan ulang Diazepam yang dibuang melalui empedu.
Masa paruh Diazepam memanjang dengan meningkatnya usia, kira-kira 20 jam
pada usia 20 tahun, dan kira-kira 90 jam pada usia 80 tahun. Klirens plasma hampir konstan (20-30 mL/menit), karena itu pemberian Diazepam dalam waktu lama tidak memerlukan koreksi dosis. (Farmakologi dan Terapi Universitas Indonesia, 2007, hal 134-135)
Suntikkan pada masing-masing tikus a. Tikus I : Diazepam dengan dosis 5 mg/kgBB b. Tikus II : Diazepam dengan dosis 2,5 mg/kgBB c. Tikus III : Diazepam dengan dosis 5 mg/kgBB Amati perubahan perilaku tikus (seperti yang tertera pada lembar pengamatan, lakukan dengan seksama)
Menit 5 10 15 30
No. Ekperimen 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3
Postur Tubuh + ++ + ++ + ++ ++ ++ ++ ++
Aktivitas Motor + + ++ + + ++ + + +++ ++ + ++++
Ataksia ++ ++ + ++ ++ +++
Righting Reflex + + + + ++
Test Kasa + + + + + + + + + + + ++
Analgesia
Ptosis
+ + + +
+ + + ++ + + + ++
60
1 2 3
++ ++ +++
++ ++ ++++
++ +++
+ +++
+ +++
++
Keterangan : 1. Postur Tubuh : + = jaga = kepala dan punggung tegak ++ = ngantuk = Kepala tegak punggung mulai datar +++ = tidur = Kepala dan punggung datar 2. Aktifitas Motor + = gerak spontan ++ = gerak spontan bila dipeggang +++ = gerak menurun saat dipegang ++++ = tidak ada gerak spontan 3. Ataksia = Gerakan berjalan inkoordinasi + = inkoordinasi terlihat kadang-kadang ++ = inkoordinasi terlihat jelas +++ = tidak dapat berjalan lurus 4. Righting Reflex + = diam pada satu posisi miring ++ = diam pada dua posisi miring +++ = diam saat terlentang 5. Tes Kasa + = tidak jatuh apabila kasa dibalik dan digoyang ++ = jatuh apabila kasa dibalik +++ = jatuh apabila posisi kasa 90 ++++ = jatuh apabila posisi kasa 45 6. Analgesia + = respon berkurang ketika telapak kaki dijepit ++ = tidak ada respon saat telapak kaki dijepit 7. Ptosis + = ptosis < ++ = +++ = seluruh palpebra tertutup
Hasil Pengamatan 1. Tentukan onset of action (mula kerja) dari perubahan perilaku seperti biasa 2. Penentuan ED50 (dosis efektif) tidur dari seluruh kelas (6 kelompok) Respon tidur (+/-) pada tikus no. Dosis
1 mg
% indikasi
yg
berespon 33,3%
+ ++ +++
2,5 mg 7,5 mg
+ +
+ +
+ -
+ +
66,6% 83,3%
3. Tentukan ED50 dengan menggunakan persamaan y = ax+b (menggunakan
kalkulator) Y =ax+b
Jadi, dosis yang dibutuhkan untuk mencapai ED50 adalah pada 1,75mg
PEMBAHASAN Berdasarkan data yang diperoleh dari hasil praktikum, dapat diketahui bahwa % indikasi yang merespon pada tikus yang diberi dosis 1 mg/kgBB (I) adalah 33,3 %; pada dosis 2,5 mg/kgBB (II) adalah 66,6 %; pada dosis 5 mg/kgBB (III) adalah 83,3 %. Pada dosis (I) belum mencapai ED50; pada dosis (II) dan (III) sudah melewati ED50. ED50 (effective Dose 50) adalah dosis yang menimbukkan efek terapi pada 50% jumlah populasi. Dari ketiga data diatas, dapat dihitung ED50 Diazepam menggunakan persamaan y = ax + b, dan didapat dosis yang dibutuhkan untuk mencapai ED50 adalah 1,75 mg. Dengan menggunakan dosis 1,75 mg/kgBB, sudah dapat digunakan untuk memberi efek pada 50 % atau setengah dari jumlah populasi yang ada. Berdasar literatur, Diazepam menyebabkan tidur dan penurunan kesadaran yang disertai nistagmus dan bicara lambat, tetapi tidak berefek analgesic. Jadi, untuk dapat membuat 50% dari jumlah total populasi tikus tidur dibutuhkan dosis sebesar 1,75 mg/kgBB. Berdasarkan literatur, teori occupancy menyatakan bahwa intensitas efek farmakologi berbanding lurus dengan total jumlah reseptor diduduki oleh obat. Efek obat menjadi lebih intens karena jumlah reseptor diduduki meningkat. karenanya, respon farmakologis maksimal sesuai dengan pendudukan semua reseptor. Sedangkan berdasarkan hasil praktikum dan dihubungkan dengan teori diatas, dapat diketahui bahwa jumlah reseptor yang diduduki obat (occupancy) dengan pemberian dosis (III) merupakan yang paling banyak diantara pemberian dosis yang lain [(I) dan (II)]. Obat Diazepam dapat bekerja di dalam tubuh karena adanya mekanisme kerja seperti ini : 1.
Reseptor Benzodiazepin dalam seluruh sistem saraf pusat, terdapat dengan
kerapatan yang tinggi terutama dalam korteks otak frontal dan oksipital, di hipokampus dan dalam otak kecil
2.
Pada reseptor ini, benzodiazepin akan bekerja sebagai agonis.
3.
Terdapat korelasi tinggi antara aktivitas farmakologi berbagai benzodiazepin
dengan afinitasnya pada tempat ikatan.
4.
Dengan adanya interaksi benzodiazepin, afinitas GABA terhadap reseptornya
akan meningkat, dan dengan ini kerja GABA akan meningkat.
5.
Dengan aktifnya reseptor GABA, saluran ion klorida akan terbuka sehingga ion klorida akan lebih banyak yang mengalir masuk ke dalam sel.
6.
Meningkatnya
jumlah
ion
klorida
menyebabkan
hiperpolarisasi
sel
bersangkutan dan sebagai akibatnya, kemampuan sel untuk dirangsang akan
berkurang. Sehingga efek yang ditimbulkan oleh Diazepam terhadap tubuh yaitu tidur.
KESIMPULAN Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa ada beberapa perubahan aktivitas yang dilakukan oleh tikus setelah pemberian Diazepam, antara lain tidur, tidak ada gerakan spontan, tidak dapat berjalan lurus, diam saat terlentang, jatuh bila posisi kasa 45 o, tidak ada respon saat kaki dijepit, dan seluruh palpebra tertutup. Pada praktikum kali ini didapatkan ED50 Diazepam yang dicapai pada dosis 1,75mg.
DAFTAR PUSTAKA Barbara G. Wells, et.all. 2006. Pharmacotherapy Handbook 6th Edition (Electronic Version). New York : Mc Graw-Hill Book Company. Cannon, Joseph G. 2007. Pharmacology for Chemists 2nd Ed. New York : Oxford University Press. Laurent C. Galichet. 2005. Clarkes Analysis of Drugs and Poisons 3rd Edition (Electronic Version). London : Pharmaceutical Press. Sean C. Sweetman, et.all. 2007. Martindale : The Complete Drugs Reference 35th Edition (Electronic Version). London : Pharmaceutical Press. Syarif, Amir. 2007. Farmakologi dan Terapi. Jakarta: Balai Penerbit FKUI
