PEMERIKSAAN BAKTERI Oleh : dr. Chinda Liaska Indah
INDIKATOR Mahasiswa dapat menjelaskan pemeriksaan jenis bakteri Mahasiswa dapat menjelaskan alat yang diperlukan dan cara pewarnaan.
Pengertian Bakteri Bakteri merupakan organisme yang sangat kecil. Itu berarti bahwa jasad renik ini tipis sekali sehingga tembus cahaya. Akibatnya, bakteri ini akan sangat sulit untuk dilihat dengan teliti dibawah mikroskop. Oleh karena itu, agar dapat dilihat dengn jelas maka bakteri tersebut haruslah diwarnai/dilakukan pewarnaan terlebih dahulu.
Dasar Mengapa Bakteri Harus
diwarnai? Mikroorganisme sulit dilihat dengan Mikroskop Cahaya, karena tidak mengadsorbsi ataupun membiaskan cahaya.
PEWARNAAN GRAM
Sejarah Pewarnaan Gram
Metode Pewarnaan Bakteri secara Gram pertama kali ditemukan oleh salah satu ilmuwan dari Denmark bernama Hans Christian Gram (1853-1938) yang mengembangkan teknik ini pada tahun 1884 untuk membedakan antara pneumokokus dan bakteri Klebsiella pneumoniae.
Pengertian Pewarnaan Gram
Pewarnaan Gram atau metode Gram adalah suatu metode empiris untuk membedakan spesies bakteri menjadi dua kelompok besar, gram-positif dan gram-negatif, berdasarkan sifat kimia dan fisik dinding sel mereka.
Tujuan Pewarnaan Gram 1. Untuk memahami cara identifikasi bakteri secara Gram. 2. Membagi Bakteri menjadi bakteri Gram Negatif (-) dan Bakteri Gram Positif (+)
Bagan Kerja
Alat dan Bahan
Alat Kaca alas datar/ kaca obyek Lampu bunsen Ose Pipet Kaca penutup Mikroskop
Bahan Spesimen bakteri dalam suspensi Larutan kristal violet Larutan lugol Larutan alkohol Larutan karbol fuchsin Air
Kaca alas datar dibersihkan
dengan kapas + alkohol 70%
Disiapkan untuk di letakkan
spesimen pemeriksaan
Dikeringkan
Suspensi Bakteri
Ose
Membuat ulasan
Diteteskan kristal violet 2-3
tetes selama 30 detik
Proses fiksasi di lampu
bunsen
Diberi lugol 3 tetes selama
30 detik
Dibilas dengan air suling
Dibilas dengan air suling
Dicuci dengan aseton alkohol
selama 10 detik
Diteteskan zat warna karbol
fuchsin 2 tetes selama 30 detik
Dibilas dengan air suling
sampai tetes terakhir jernih
Ditetesi 1 tetes minyak
imersi kemudian ditutup dgn kaca penutup
Dikeringkan dengan kertas
saring
Diamati pada mikroskop
perbesaran 1000x
INTERPRETASI Hasil pewarnaan : Bakteri Gram positif : ungu Bakteri Gram negatif : merah
Kelebihan dan kekurangan
pewarnaan Gram Kelebihan : Pewarnaan Gram penting sebagai pedoman awal untuk memutuskan terapi antibiotik, sebelum tersedia bukti definitif bakteri penyebab infeksi (kultur dan tes kepekaan bakteri terhadap antibiotik). Hal ini karena bakteri Gram positif dan negatif mempunyai kepekaan yang berbeda terhadap berbagai jenis antibiotika. Kadang-kadang morfologi bakteri yang telah diwarnai Gram mempunyai makna diagnostik. Misalnya pada pemeriksaan Gram ditemukan Gram negatif diplococci intraseluler dari spesimen pus (nana) uretral, maka memberikan presumptive diagnosis untuk penyakit infeksi gonore.
Kekurangan : Pewarnaan Gram memerlukan mikroorganisme dalam jumlah banyak yakni lebih dari 104 per ml. Sampel yang cair dengan jumlah kecil mikroorganisme misalnya cairan serebrospinal, memerlukan prosedur sentrifuge dulu untuk mengkonsentrasikan mikroorganisme tersebut. Pellet (endapan hasil sentrifuge) kemudian dilakukan pengecatan untuk diperiksa secara mikroskopis.
Macam- macam bakteri pewarnaan
gram
Bakteri gram positif
Bakteri gram negatif
Pengertia n Morfolo gi Dinding sel
Pengertian Bakteri Gram Positif
Bakteri gram positif adalah sekelompok bakteri yang mempertahankan senyawa iodin kompleks saat proses pencucian dengan dekolorizer karena mempunyai dinding peptidoglikan yang tebal.
Pengertian Bakteri Gram Negatif
Bakteri gram-negatif adalah sekelompok bakteri yang melepaskan senyawa iodin kompleks saat proses pencucian dengan decolorizer karena mempunyai dinding peptidoglikan yang tipis, tetapi mengikat zat warna lain yaitu karbolfuchsin.
Morfologi Sel Bakteri memiliki bentuk yang sangat bervariasi. Bentuk sel bakteri meliputi: kokus (bulat) basil (batang) spirilum (spiral) filamen Bentuk sel menunjukkan karakteristik spesies bakteri tersebut, tetapi dapat bervariasi tergantung kondisi pertumbuhannya. Beberapa bakteri
Dinding sel Fungsi dinding sel pada prokaryot, adalah melindungi sel dari tekanan dari lingkungan di luarnya. Dinding sel bakteri mengandung peptidoglikan yang terletak di luar membran sitoplasmik. Peptidoglikan berperan dalam kekerasan dan memberikan bentuk sel. Ada dua tipe utama bakteri berdasarkan kandungan peptidoglikan dinding selnya yaitu Gram positif dan Gram negatif.
Dinding sel Gram Positif
Karakteristik utamanya adalah tebalnya lapisan peptidoglikan pada dinding sel. Akibatnya, pada saat prosedur pewarnaan Gram, meninggalkan warna ungu. Dinding sel Gram positif biasa ditemukan pada Actinobacteria dan Firmicutes.
Dinding sel Gram Negatif
Tidak seperti dinding sel Gram positif, dinding sel Gram negatif memiliki lapisan peptidoglikan yang tipis. Hal ini menyebabkan lunturnya warna ungu saat disiram etanol.
PEWARNAAN BAKTERI TAHAN ASAM (ZIEHL-NEELSEN)
Pengertian Pewarnaan Bakteri
Tahan Asam Pewarnaan ZN atau pewarnaan bakteri tahan asam adalah suatu metode empiris untuk membedakan spesies bakteri menjadi dua kelompok besar, bakteri tahan asam dan tidak tahan asam, berdasarkan sifat kimia dan fisik dinding sel mereka.
Tujuan Pewarnaan Bakteri
Tahan Asam (BTA) 1. Untuk memahami cara identifikasi bakteri secara pewarnaan tahan asam. 2. Membagi Bakteri menjadi bakteri tahan asam dan Bakteri tidak tahan asam
Alat dan Bahan
Alat
Bahan
Kaca alas datar/ kaca
obyek Lampu bunsen Ose Pipet Kaca penutup Mikroskop
Spesimen bakteri dalam suspensi Larutan karbol fuchsin Larutan alkohol Larutan methylen blue Air
