FACTORES

QUE AFECTAN
LA ACTIVIDAD
ENZIMATICA
EDUARDO SAL GARCA DONAYRE
UNIVERSIDA PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

Practica N03-Laboratorio de
bioqumica

INTRODUCCIN
Las enzimas son compuestos de naturaleza proteica que tienen la propiedad de
acelerar las reacciones qumicas sin modificar la constante de equilibrio del sistema.
Su actividad es afectada por diversos factores:

Concentracin de sustrato
PH
Concentracin de enzima
Temperatura
Inhibidores
Fuerza inica, constante dielctrica, etc.

Concentracin del sustrato:

A mayor concentracin del sustrato, a una

concentracin fija de la enzima se obtiene la velocidad mxima.

Despus de que se alcanza esta velocidad, un aumento en la concentracin del
sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reaccin.

Concentracin de la enzima: Siempre y cuando haya sustrato disponible, un

aumento en la concentracin de la enzima aumenta la velocidad enzimtica hacia
cierto lmite.

Temperatura: Un incremento de 10C duplica la velocidad de reaccin, hasta ciertos

lmites. El calor es un factor que desnaturaliza las protenas por lo tanto si la
temperatura se eleva demasiada, la enzima pierde su actividad.

PH: El pH ptimo de la actividad enzimtica es 7, excepto las enzimas del estmago

cuyo pH ptimo es cido.

Presencia de cofactores: Muchas enzimas dependen de los cofactores, sean

activadores o coenzimas para funcionar adecuadamente. Para las enzimas que tienen
cofactores, la concentracin del cofactor debe ser igual o mayor que la concentracin
dela enzima para obtener una actividad cataltica mxima

OBJETIVO: Establecer los factores que modifican la actividad enzimtica

MARCO TEORICO
Factores que activan la actividad enzimtica
Los biocatalizadores especficos sintetizados por el organismo, llamados enzimas son
protenas que intervienen en las reacciones biolgicas, acelerando la velocidad de
reaccin hasta alcanzar su punto de equilibrio.
Las enzimas son sumamente especficas en las reacciones que catalizan y en los
compuestos (llamados sustratos) sobre los que actan.
La cintica enzimtica es el estudio del comportamiento de la velocidad en reacciones
catalizadas por enzimas.
Las mediciones de la cintica proporcionan una herramienta bioqumica muy til para
calcular la concentracin de una enzima en una muestra biolgica y comparar su
actividad cataltica con la de otras enzimas.
Adems, las mediciones cinticas permiten describir de manera cuantitativa el efecto
de un veneno o medicamento sobre la actividad de una enzima.
La velocidad a la que procede una reaccin enzimtica est controlada en parte por
las concentraciones de la enzima y el sustrato.
A medida que progresa la reaccin, aumenta la concentracin de los productos a
expensas de la desaparicin de los correspondientes sustratos, en tanto que la
concentracin de la enzima no se altere.
La actividad enzimtica puede expresarse:
a) Por la desaparicin del sustrato (S).
b) Por la aparicin de productos (P).
c) Por modificacin de cofactores (C).

El mecanismo de reaccin enzima-sustrato puede simbolizarse as:

Diversos factores modifican la actividad enzimtica, tales como:

1) Concentracin de sustrato [S]

El efecto de la concentracin de sustrato [S], en la velocidad de una reaccin

enzimtica muestra dos etapas:
a) La velocidad de reaccin aumenta gradualmente hasta hacerse a una velocidad
mxima.
b) La velocidad se mantiene constante pues todos los centros activos de las
molculas de enzimas han sido ocupados por el sustrato, se puede decir que es un
comportamiento de saturacin.

La relacin entre Vo y [S] para una reaccin enzimticas fue descrita por Leonor
Michaelis y Maude Menten en 1913 dando la ecuacin de Michael-Menten.

La principal desventaja de este modelo es que este modelo no cumple para todas
las enzimas.

2) Concentracin de la enzima [E]

Las enzimas son protenas que catalizan todas las reacciones bioqumicas. Adems
de su importancia como catalizadores biolgicos, tienen muchos usos mdicos y
comerciales.
Un catalizador es una sustancia que disminuye la energa de activacin de una
reaccin qumica. Al disminuir la energa de activacin, se incrementa la velocidad de
la reaccin.

La mayora de las reacciones de los sistemas vivos son reversibles, es decir, que en
ellas se establece el equilibrio qumico. Por lo tanto, las enzimas aceleran la formacin
de equilibrio qumico, pero no afectan las concentraciones finales del equilibrio.
De acuerdo a su complejidad las enzimas se clasifican como:

En las protenas conjugadas podemos distinguir dos partes:

Apoenzima: Es la parte polipeptdica de la enzima.
Cofactor: Es la parte no proteica de la enzima.
La combinacin de la apoenzima y el cofactor forman la holoenzima.
Clasificacin de las enzimas segn su actividad

3) pH del medio
Los cambios de PH alteraran considerablemente la naturaleza inica de los enzimas
se sabe poco de las variaciones del PH en las enzimas.

4) Influencia de la temperatura
Las enzimas son inactivadas por el calor a temperaturas de 50C-60C inactivan
rpidamente la mayor parte de las enzimas. Esta inactivaron es irreversible, pues al
enfriar no se obtiene actividad otra vez. Esto explica que casi todos los organismos
resulten muertos a una exposicin a temperatura elevada: Sus enzimas se inactivan y
resultan incapaces de reanudar su metabolismo.

Las Enzimas no son inactivadas por la congelacin; las reacciones que producen
tienen a lugar muy lentamente a temperaturas bajas, o se detienen, pero la actividad
cataltica reaparece si la temperatura vuelve a su estado normal

5) Efecto de inhibidores y activadores

TIPOS DE INHIBIDORES
Inhibidor Reversible
Inhibicin Competitiva: El sustrato y el inhibidor no se pueden unir a la misma enzima
al mismo tiempo, esto ocurre cuando el inhibidor tiene afinidad por el sitio activo de

una enzima en el que se una el sustrato. El sustrato y el inhibidor compiten por el

acceso al sitio activo de la enzima.
Este tipo de inhibidor se puede superar con concentraciones suficientes altas del
sustrato, es decir dejando afuera el inhibidor.

Inhibicin Mixta
El sustrato en el inhibidor afecta la unin del sustito y viceversa; este tipo de inhibidor
se puede reducir pero no se puede superar al aumentar la concentracin del sustrato
aunque si se dan las cosas que se unan el sitio activo.
Aunque es posible que los inhibidores de tipo mixta se unen al sitio activo (efecto
alosterico)
Donde el inhibidor se une a otro sitio activo que no es el sitio activo de la enzima todo
esto es un sitio alosterico cambia con la formacin da la afinidad del sustrato por el
sitito activo reducido.

Inhibicin No Competitiva
Es una forma de una inhibicin mixta donde la unin del inhibidor con la enzima
reduce su actividad pero no acepta la unin del sustrato. El grado de inhibicin
depende de su concentracin.

Inhibidor Irreversible:
La inhibicin irreversible es diferente de la in activacin enzimtico reversible. Los
inhibidores irreversibles son generalmente especficos para un tipo de enzima y no
inactivan todas las protenas.

No funcionan destruyendo la estructura protenica, sino alterando especficamente la

estructura tridimensional del sitio activo inhabilitndola.
Los inhibidores irreversibles dan lugar a una inhibicin dependiente del tiempo y por
ello su potencia no puede ser caracterizada mediante la determinacin del valor. Esto
se debe a la cantidad de enzima activa a la concentracin dada de inhibidor
irreversible ser diferente dependiendo del tiempo de pre incubacin del inhibidor con
la enzima.

En la presente prctica estudiaremos el efecto de estos factores sobre la actividad

enzimtica de la amilasa salival sobre el almidn.
La amilasa es una enzima que degrada molculas hidrocarbonadas complejas en
componentes ms pequeos, tiene un PM de 40,000 a 50,000 daltons. Es producida
por el pncreas exocrino y las glndulas salivales para ayudar a digerir el almidn.
La amilasa humana se denomina alfa-amilasa por su capacidad para romper los
enlaces polisacridos alfa-1,4 al azar. Los enlaces alfa-1,6 de los puntos de
ramificacin no se alteran.
El producto final de la accin de la alfa-amilasa sobre el almidn es la formacin de
dextrinas, maltosas y algunas molculas de glucosa. El pH ptimo al cual acta es 6.9
a 7 y se requiere cloro para su activacin.
En la prctica la actividad enzimtica se medir por la desaparicin del sustrato
(disminucin de la turbidez en los tubos que contienen almidn), la cual se determinar
en el espectrofotmetro a 650 nm.

PROCESO EXPERIMENTAL
EXPERIMENTO A
EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE LA ENZIMA, DE LA TEMPERATURA Y DEL
ION CLORO SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA AMILASA SALIVAL
1) Preparar los siguientes tubos:

2) Colocar los tubos I al V en un bao de agua a 37C, durante 5 minutos. El tubo VI

servir de comparacin para ver el efecto de la temperatura sobre la accin
enzimtica por lo que se deja a temperatura ambiente.

3) Agregar la solucin de enzima:

4) Colocar nuevamente los tubos I al V en bao de agua a 37C durante 20 minutos,

el tubo VI se mantiene a temperatura ambiente.

5) Luego hacer el control final de la reaccin con el reactivo de yodo, de la siguiente

manera:

6) Mezclar y dejar en reposo por 10 minutos.

7) Leer las absorbancia al espectrofotmetro a 650 nm.

8) La diferencia de las absorbancia entre los tubos nos indicar la actividad

enzimtica para cada tubo.
9) Graficar en papel milimetrado: Actividad enzimtica en el eje Y vs concentracin de
la enzima [E] en el eje X.

EXPERIMENTO B
EFECTO DE LA CONCENTRACIN DEL SUSTRATO SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA
AMILASA SALIVAL
1) Preparar los siguientes tubos: Tubos

2) Mezclar bien los tubos. Hacer un control con la solucin yodada con todos los
cinco tubos de la misma manera que se hizo en el experimento anterior y leer las
absorbancia de dichos controles a 650 nm. Dichas absorbancia se tomarn como
lecturas iniciales.

3) Luego aadir 1 ml de solucin de enzima a cada tubo y colocarlos en el bao de

agua a 37C por 20 minutos.

4) Sacar los tubos y hacer un control con solucin yodada de cada uno. Las lecturas
5)

de absorbancia se tomarn ahora como lecturas finales.

Hacer la diferencia:
Actividad enzimtica = Lectura inicial Lectura final
El resultado de esta diferencia se considerar como actividad enzimtica.

6) Determinar el Km experimental de la amilasa para el almidn a partir de una

grfica de actividad enzimtica contra [S] (Ecuacin de MichaelisMenten) y una
grfica de dobles inversas: 1/actividad enzimtica contra 1/[S] (Ecuacin de
Lineweaver-Burk). Graficar en papel milimetrado.

EXPERIMENTO C
EFECTO DEL PH SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA AMILASA SALIVAL
1) Preparar los siguientes tubos:

2)
3)
4)
5)

Mezclar y colocar los tubos en bao de agua a 37C por 5 minutos.

Aadir a cada tubo 2 ml de solucin de enzima (amilasa).
Colocar nuevamente los tubos a 37C por 20 minutos.
Extraer los tubos del bao y realizar el control mediante la solucin yodada, como
en el experimento anterior.

6) Realizar el estudio crtico comparativo de ellos. Sacar conclusiones.

7) Graficar en papel milimetrado una curva de actividad enzimtica vs pH.

CUESTIONARIO
1.- Cul es la importancia del Km.
La Km nos da una idea la afinidad que tiene el enzima por su sustrato, cuanto mayor
es Km menor es la afinidad (predominan las formas E y S libres), cuanto menor es Km
mayor es la afinidad (predomina la forma ES).

2.- Qu efectos produce las altas temperaturas sobre las enzimas.

Las enzimas son siempre protenas y stas soportan temperaturas relativamente altas.
Pero superada esa temperatura, las protenas se desnaturalizan y por tanto tambin
las enzimas.
Se estima que la temperatura aproximada de desnaturalizacin in vitro en de 45 C. In
vivo pueden soportar temperaturas ambientales ms altas pero es porque el cuerpo
utiliza todos sus sistemas de refrigeracin. Se puede vivir a temperaturas de hasta
unos 50 C
Este fenmeno tiene la aplicacin industrial de sobrecalentar sustancias, sobre todo
alimenticias, que contengan enzimas que puedan estropearlas. Por ejemplo, cortar
una fermentacin vnica para que no se convierta en actica.

3.- Cmo se clasifican las enzimas?

Oxidorreductasas: Catalizan una amplia variedad de reacciones de xido-reduccin,
empleando coenzimas, tales como NAD+ y NADP+, como aceptor de hidrgeno. Este
grupo incluye las enzimas denominadas comnmente como deshidrogenasas,
reductasas, oxidasas, oxigenasas, hidroxilasas y catalasas.

Transferasas: Catalizan varios tipos de transferencia de grupos de una molcula a.

otra (transferencia de grupos amino, carboxilo, carbonilo, metilo, glicosilo, acilo, o
fosforilo). Ej.: aminotransferasas (transaminasas).

Hidrolasas: Catalizan reacciones que implican la ruptura hidroltica de enlaces

qumicos, tales como C=O, C-N, C-C. Sus nombres comunes se forman aadiendo el
sufijo -asa al nombre de substrato. Ejs.: lipasas, peptidasas, amilasa, maltasa,

pectinoesterasa, fosfatasa, ureasa. Tambin pertenecen a este grupo la pepsina,

tripsina y quimotripsina.

Liasas: Tambin catalizan la ruptura de enlaces (C-C, C-S y algunos C-N, excluyendo
enlaces peptdicos), pero no por hidrlisis. Ejs.: decarboxilasas, citrato-liasa,
deshidratasas y aldolasas.

Isomerasas: Transforman sus substratos de una forma isomrica en otra. Ejs.:

Epimerasas, racemasas y mutaras.

Ligaras: Catalizan la formacin de enlace entre C y O, S, N y otros tomos.

Generalmente, la energa requerida para la formacin de enlace deriva de la hidrlisis
del ATP. Las sintetasas y carboxilasas estn en este grupo.

4.- A que se llaman zimgenos e isoenzimas.

Un zimgeno o proenzima es un precursor enzimtico inactivo, es decir, no cataliza
ninguna reaccin como hacen las enzimas. Para activarse, necesita de un cambio
bioqumico en su estructura que le lleve a conformar un centro activo donde pueda
realizar la catlisis.
En ese momento, el zimgeno pasa a ser una enzima activa. El cambio bioqumico
suele ocurrir en un lisosoma, donde una parte especfica de la enzima precursora se
escinde del resto para activarla. La cadena de aminocidos que se libera por la
activacin se llama pptido de activacin.
Las isoenzimas o isozimas son enzimas que difieren en la secuencia de aminocidos,
pero que catalizan la misma reaccin qumica.
La existencia de las isoenzimas permite el ajuste del metabolismo para satisfacer las
necesidades particulares de un determinado tejido o etapa del desarrollo.
En bioqumica, las isoenzimas son isoformas (variantes estrechamente relacionadas)
de las enzimas. En muchos casos, son codificadas por genes homlogos que han
divergido con el tiempo. Aunque de forma estricta, las aloenzimas representan
enzimas de diferentes alelos de un mismo gen y las isoenzimas representan enzimas

de diferentes genes cuyos productos catalizan la misma reaccin, los dos trminos se
suelen usar indistintamente.

5.- Que son cofactores y mencione ejemplos.

Un cofactor es un componente no proteico, termoestable y de baja masa molecular,
necesaria para la accin de una enzima. El cofactor se une a una estructura proteica,
denominada apoenzima, y el complejo apoenzima-cofactor recibe el nombre de
holoenzima.
Aquellos cofactores que estn covalentemente unidos a la apoenzima son
denominados grupos prostticos, ya sean orgnicos (coenzimas) o inorgnicos.
Los cofactores son bsicamente de dos tipos, iones metlicos y molculas orgnicas,
denominadas coenzimas.

Cofactores metlicos
Entre los cofactores metlicos son cationes, como Fe2+, Cu2+, K+, Mn2+, Mg2+, entre
otros
Los iones metlicos puede actuar como:

Centro cataltico primario.

Grupo puente para reunir el sustrato y la enzima, formando un complejo de

coordinacin.
Agente estabilizante de la conformacin de la protena enzimtica en su forma
catalticamente activa.

Las enzimas que precisan de iones metlicos se llaman a veces metaloenzimas.

CONCLUSION
Diferentes factores ambientales como la variacin de pH, temperatura o presencia
de inhibidores pueden afectar a la actividad enzimtica.

Las enzimas son los catalizadores biolgicos muy importantes ya que casi todos
los procesos en las clulas los necesitan para que ocurran a unas tasas
significativas.
Las enzimas suelen ser tan especficas que son incapaces de actuar sobre las
sustancias estrechamente relacionadas.

 Las enzimas vienen a ser las protenas catalticas que aceleran la velocidad de las
reacciones celulares al bajar la energa de activacin y estabilizar las
intermediaciones del estado de transicin.
El sitio activo de la enzima comprende dos partes adicionales una regin de unin
de sustrato y la otra cataltica.
En el centro activo encontramos restos de aminocidos constituyentes funcionales
para la catlisis del sustrato, estos utilizan las llamadas coenzimas que son
molculas orgnicas que sufren modificaciones durante la reaccin enzimtico
para ayudar a la modificacin final del sustrato.

BIBLIOGRAFIA
http://lls.ulat.ac.pa/archivos/allanes_E-8102149/Archivos_de_Cursos/Materia_-_EMC-013BIOQUIMICA_HUMANA_I_Grupo_-_6_Anio_-_20121/Tema_3._Funciones_de_las_proteinas_2012-1_(II)_LLS.pdf
Lexmarck P. Enzimas Catalizadoras. 2da ed. Barcelona: Atlanta; 1989.
http://es.scribd.com/doc/78418338/Practica-de-Bioquimica-Factores-quealteran-la-reacccion-enzimatica - scribd
http://genesis.uag.mx/edmedia/material/quimicaII/enzimas.cfm - factores
file:///C:/Users/saul/Desktop/G.P.BIOQUIMICA%20Y%20NUTRICION
%20%202015-I.pdf
http://www.blogdebiologia.com/factores-que-afectan-la-actividadenzimatica.html
http://es.slideshare.net/lizbethdamazogalvez/factores-que-influyen-en-laactividad-enzimtica