MEDIA KULTUR

JARIANGAN

PENDAHULUAN
Media merupakan faktor penentu dalam

perbanyakan dengan kultur jaringan.

Komposisi media yang digunakan
tergantung dengan jenis tanaman yang akan
diperbanyak. Media tumbuh pada kultur
jaringan sangat besar pengaruhnya terhadap
pertumbuhan dan perkembiakan eksplan
serta bibit yang dihasilkan.

FUNGSI MEDIA
1.
2.
3.
4.
5.

Menyediakan air
Menyediakan mineral
Menyediakan ZPT
Menyediakan tempat tumbuh
Tempat pembuangan sampah metabolisme

Macam Media Kultur Jarigan

Medium Murashige & Skoog (MS)
Media MS hampir digunakan untuk semua macam tanaman,
terutama tanaman herbaceus. Media ini mempunyai konsentrasi
garam- garam mineral yang tinggi dan kandungan
Nitrat ynag
tinggi (NO3- )

Medium B5
konsentrasi nitrat dan amonium lebih rendah dibandingkan
media MS. Media B5 dikembangkan untuk kultur kalus dan
suspensi, serta sangat baik sebagai media dasar untuk meregenerasi
seluruh bagian tanaman

Medium Scheck dan Hildebrandt

Merupakan media yang juga cukup terkenal, untuk kultur kalus
tanaman monokotil dan dikotil. Media SH ini cukup luas
penggunaannya, terutama untuk tanaman legume

Macam Media Kultur Jarigan

Medium WPM

Merupakan media dengan konsentrasi ion yang lebih

rendah dari media MS. Media diperuntukkan khusus
tanaman berkayu. Saat ini WPM banyak digunakan untuk
perbanyakan tanaman hias berperawakan perdu dan
pohon-pohon.
Medium N6
Media N6 mempunyai ciri perbandingan NHdan
NOyang jauh perbandinganya. Amonium yang
diberikan dalam bentuk (NH)SOhanya sebanyak 363
mg/l, sedangkan KNO2830 mg/l
dll
(Suryowinoto, M. 1991)

Komponen utama penyusun media kultur.

Garam mineral Hara

Makro: N,P,K,Ca,S,Mg &

Mikro :Fe,Mn,B,Cu,Mo,Cl
dan Co.
Sumber karbon: sukrosa 15% dan glukosa, maltosa,
galaktosa, laktosa (terbaik)
Vitamin : Tiamin,
piridoksin, asam nikotin
dan mio-inositol.
Agar: sebagai pemadat
media

Zat Pengatur tumbuh:

untuk menginduksi
pembelahan sel
Auksin : IAA,NAA & 2,4Diklrofenoksi- asetat(2,4D). Sitokinin : kinetin,
benziladenin(BA), 6benzilaminopurin (BAP).
Pelengkap organik: dapat
merangsang laju
pertumbuhan sel (air
kelapa, jus jeruk, ekstrak
ragi, dll)

GARAM-GARAM MINERAL
Unsur hara makro & mikro diberikan dalam bentuk

Garam anorganik pada media.

Unsur makro biasanya diberikan dalam bentuk
NH4NO3, KNO3, CaCl2, 2H2O, MGSO4.7H2O, dan
KH2PO4.
Unsur mikro diberikan dalam bentuk MnSO4.4H2O,
ZnSO4.4H2O, H3BO3, KI, NaMoO4.2H2O,
CuSO4.5H2O, dan CoCl2.6H2O.
Perbaikan pada penambahan garam mineral NO3 & K
Menunjang pertumbuhan kalus, pertumbuhan pucuk
dan embriogenesis pada banyak tanaman.

SUMBER KARBON
Tanaman kultur tumbuh secara heterotrof dan laju

fotosintesisnya rendah sehingga sintesis karbonnya

tidak cukup
Perlu ditambah gula sebagai sumber karbon dan
energi untuk induksi kalus
Sukrosa dalam media dihidrolisa jadi monosakarida
selama masa kultur.
Dalam kultur kalus dan pucuk 2-4 % optimum,
sdgkan kultur embrio dapat mencapai 12%
Selain sumber energi, gula berfungsi sebagai
tekanan osmotik dalam media

VITAMIN
Vitamin memiliki fungsi katalitik pada sistem enzim dan

dibutuhkan dalam jumlah kecil

Thiamine(B1) yang paling sering dan penting digunakan,
berperan sebagai koenzim dalam reaksi yang
menghasilkan energi dari karbohidrat dan memindahkan
energi
Piridoksin (B6) dan Niasin (asam nikotianat) dapat
meningkatkan pertumbuhan kalus. Mio-inositol
(vit.tanaman) untuk membantu diferensiasi &
pertumbuhan jaringan kalus
Asam Karbonat bertujuan untuk mencegah terjadinya
pencoklatan pada permukaan irisan jaringan
Vit.E juga dapat merangsang pembentukan kalus dalam
kultur embrio jagung.

ZAT PENGATUR TUMBUH

AUKSIN digunakan untuk

SITOKININ berperan dalam

merangsang pertumbuhan kalus,

pemanjangan sel tanaman dan
pembentukan akar adventif
Konsentrasi auksin yang rendah
dapat meningkatkan
pembentukan akar adventif,
sedangkan konsentrasi tinggi
akan merangsang pembentukan
kalus dan menekan morfogenesis
Alamiah: indole acetic acid (IAA)
Sintetik: Naphthaleneaceic acid
(NAA), dan 2,4dichlorophenoxyacetic acid
(2,4D)

pembelahan sel, pembentukan

tunas dan proliferasi tunas
aksiler, serta dpt menghambat
pembentukan akar
Alamiah: Zeatin dan 2iP
Sintesis: Kinetin, BAP & BA
(benzyladenine ).
Bila rasio antara auksin dan
sitokinin tinggi maka akan
memacu inisiasi akar dan induksi
pembentukan kalus
Bila rasio antara auksin dan
sitokinin rendah maka akan
memacu proliferasi pucuk adv.

ZAT PENGATUR TUMBUH

Giberelin atau GA3

digunakan untuk
meningkatkan
pemanjangan pucuk2 yang
sangat kecil dan
merangsang pembentukan
embrio dari kalus.
Namun GA3 tidak begitu
sering digunakan karena
senyawa tersebut tidak
tahan panas dan tidak
dapat diautoklaf.

Asam Absisat (ABA)

berfungsi sebagai zat

penghambat tumbuh
Etilen merupakan ZPT
yang berbentuk gas
Etilen dapat mengakibatkan
terhambatnya
perkembangan kultur,
namun pada kisaran
kons.rendah dapat
meningkatkan
pembentukan pucuk
adventif

BAHAN PEMADAT MEDIA

Paling banyak digunakan

adalah agar agar mengandung

Ca,Mg,K dan Na atau
pengganti agar seperti, Geltrite
atau Phytagel
Keuntungan pemakaian agaragar :
1. Membeku pd suhu 45 C dan
cair pd suhu 100 C.
2. gel agar bersifat stabil pada
suhu inkubasi
3. Tidak dicerna oleh enzim
tanaman.
4. Tdk bereaksi dgn penyusun
media yang lain.
Kons agar : 0,5-1,0%

Konsentrasi agar yang

terlalu tinggi dapat

mengurangi difusi
persenyawaan dari dan ke
arah eksplan shg
pengambilannya kurang
sedangkan zat
penghambat dari eksplan
tetap berkumpul disekitar
eksplan.

PELENGKAP ORGANIK
Air kelapa dapat digunakan

untuk mempertahankan
pertumbuhan.
Kandungannya: as.amino,
as.organik, as.nukleat, purin,
gula, gula alkohol dan zat
pengatur tumbuhan
Jus Jeruk merupakan sumber
gula, vitamin dan zat pengatur
tumbuh.
Ekstrak Ragi digunakan pd
awal sejarah KJT oleh White
dan Robbins
As.amino,peptida, vitamin
untuk pertumbuhan kultur akar

Penggunaan suplemen

organik sering dihindari

karena tidak spesifik dan
hasil yang diperoleh
kadang tidak dapat
diulangi kembali

ARANG AKTIF
Dapat ditambahkan kedalam media pada berbagai tahap

perkembangan kultur.
Pengaruh arang aktif :
1. Mengadsorpsi senyawa toksik yg terdapat dlm media
sprti Senyawa Fenol
2. Mengadsopsi zat pengatur tumbuh shg mencegah
pertumbuhan liar & membantu embriogenesis.
3. Menstimulasi pertumbuhan sel
4. Dapat mempengaruhi kepadatan agar yang terbentuk.
Konsentrasi; 0,5-3%

pH MEDIA
Harus diatur agar tdk

mengganggu fungsi
membran sel dan pH
sitoplasma
Sel tanaman
membutuhkan pH
media yang sedikit
asam 5,6 5,8.
Beberapa tanaman
membutuhkan pH yang
berbeda untuk
pertumbuhan optimum

pH yang tinggi >6.0

meambuat media agar

menjadi keras
pH <5.2 membuat media
agar tidak dapat memadat

Teknik Aseptik dalam Pembuatan Media

a. Sterilisasi Peralatan

Sterilisasi peralatan
(glassware dan logum) dan
aquades dilakukan dengan
sterilisasi kering (oven
1300c-1700c selama 2-4 jam).
Sterilisasi peralatan dengan
autoclave dilakukan pada
suhu 1210c takanan 15 PSI
selama 1 jam.
Sterilisasi peralatan logam
(pinset, gunting, jarum) yang
digunakan dengan
merendam perakitan tsb
dalam alcohol 95% diikuti
dengan pembakaran dan
pendinginan.

b. Sterilisasi medium
kultur

Metode autoclave

Medium dalam botol kultur

ditutup dengan alumunium
foil pada suhu 1210 C,
tekanan PSI selama 15-40
menit dari waktu medium
mencapai suhu yang
diperlukan.

Metode Filtrasi

Yaitu sterilisasi
menggunakan membrane
filter berukuran 0,45-0,22
mm di dalam kontiener
steril.

(Sriyanti, 1994)

Jenis Kontaminan Media

Internal
Kontaminasi internal

umumnya disebabkan
oleh ketidaksterilan bahan
eksplan itu sendiri.
Pencegahan kontaminasi
Internal dapat dilakukan
dengan sterilisasi kontak.

Eksternal
Kontaminasi eksternal dapat

disebabkan oleh jamur dan

bakteri.
Untuk mengatasi
kontaminasi eksternal dapat
digunakan penggunaan
fungisida, HgCl2 dan klorin
karena dengan sterilisasi
berlapis dapat mereduksi
resiko kontaminan baik yang
berasal dari cendawan,
bakteri maupun kotorankotoran lain yangmenempel
pada permukaan eksplan
(Gunawan, 2007)

Pembuatan Larutan Stok

Rumus perhitungan larutan stok

Untuk menentukan larutan stok yang ingin digunakan
kita dapat menghitungnya dengan menggunakan
rumus:
V1.M1 = V2.M2
Dimana :
V1 = volume yang akan dibuat
V2 = volume larutan stok yang akan diambil
M1 = banyaknya kebutuhan senyawa dalam media
MS
M2 = banyaknya senyawa larutan stok
(Marlin dan Romaida, 2008)

Pembuatan Media Kultur Jaringan

Alat;

Bahan;

Beker glass

Makro

: Tempat pembuatan media

: Mengaduk Bahan
Plastik wrap
: Menutup tempat media
Botol kultur
: Tempat membiakkan
eksplan
Autoclave : Menyimpan media
Microwave: Pemanas/ mengentalkan
larutan
Mikropipet
: Mengambil media MS
Gelas ukur : Mengukur media MS yang

diperlukan
Neraca analitik
: Menimbang bahanbahan
Pipet ukur : Mengambil bahan cair
pH meter : Mengukur pH larutan
Karet
: Mengikat plastik penutup
botol
Kertas label
: Memberi nama pada botol
kultur
Labu ukur : Menampung dan
mencampur larutan kimia
Erlenmeyer
: tabung tempat larutan
sebelum di masukan pada
botol kultur
Stirer

: 15 mL
Mikro
: 1,5 mL
Fe-Na-EDTA
: 1,5 mL
Vitamin
: 1,5 mL
Mio inositol
: 1 mL
Fungsi
: Sebagai bahan
pembuatan larutan stok
Sukrosa : Membuat larutan
menjadi tercampur
rata (4,5 gram)
Agar-agar: Mengentalkan Larutan
(1,02 gram)
Aquades : Bahan dasar media
HCL
: untuk ditambahkan ke
larutan jika larutan
bersifat basa
KOH
: untuk ditambahkan ke
larutan jika larutan
bersifat asam

Pembuatan Media Kultur Jaringan

Strelisasi semua peralatan
Pipet larutan stok (Makro 15 mL, mikro 1,5 mL ,
Vitamin 1,5 mL, Fe-Na-EDTA 1,5 mL, mio inositol 1
mL)
Masukan dalam Beaker gelas dan tambahkan Aquades sampai
Volume 150 mL

Masukan Magnet Stirer kedalam Beaker gelas

dan letakan pada Plate Magnetic Stirer

Nyalakan magnetic stirrer supaya larutan homogen

dan tambahkan Sukrosa (4,5 g/L) sampai larut

Pembuatan Media Kultur Jaringan

Ukur pH Larutan sesuai ketentuan (5,6 (asam+NaOH)
-5,8 (Basa+NaCl/HCl)), dengan pH Meter / pH
Universal
Jika pH sudah sesuai, tambahkan agar-agar (1,o2 g/L) lalu
dihomogenkan dan disimpan dalam microwave selama 2,5 menit
kemudian stirrer lagi
Tiriskan sampai tidak terlalu panas dan tuangkan dalam botol
kultur (Masing-masing 15 mL)

Tutup botol dengan plastic yang sudah di siapkan dan media siap di
sterilisasi dengan Autoclave pada tekanan 1.5 psi selama 20 menit
Setelah disterilkan di autoclave botol media di pindahkan ke
ruang kultur jaringan dan selanjutnya siap untuk digunakan
sebagai media tanam

TERIMA KASIH