sekresi, ketika sebagian besar protein enamel gigi adalah disekresikan; transisi, ketika
ameloblasts kehilangan sebagian besar mereka organel sekretori, mempersingkat dan
kehilangan proses Tomes mereka, dan invasi kapiler terjadi ke dalam organ enamel; 1 dan
pematangan, ketika enamel kehilangan air dan organik material, yang digantikan oleh
pertumbuhan kristal, 1 menjadi jaringan paling sangat termineralisasi di body.2 yang
ameloblasts tahap pematangan menutupi matriks enamel di tahap pematangan; Namun, peran
yang dimainkan oleh sel-sel ini dalam proses pematangan tidak sepenuhnya understood.3
antara peran diusulkan untuk sel-sel ini, kita akan menyoroti dua yang mungkin. Yang
pertama adalah bahwa tahap pematangan ameloblast adalah penting untuk penghapusan
matriks organik. Yang kedua adalah bahwa sel menciptakan kondisi untuk enamel untuk
mencapai yang sangat kandungan mineral yang tinggi, dan peran ini akan menjadi
independen penghapusan matriks organik.
ameloblasts tahap pematangan menjalani morfologi siklik transisi antara sel dengan
mengacak-acak dan halus apikal borders4-8 dan beberapa studi telah berkorelasi ameloblast
ini transisi dengan hilangnya content.9,10 organik Karena munculnya kloning molekuler,
karakterisasi beberapa protein enamel telah menunjukkan kehadiran proteinase di enamel,
yang mampu menurunkan sebagian besar protein struktural enamel menjadi chains11
polipeptida kecil yang akan meninggalkan enamel oleh paracellular route.12 normal aktivitas
proteolitik tampaknya diperlukan untuk normal amelogenesis, karena didukung oleh studi
Model sistem gugur. enamel diubah terbentuk di MMP-20 mice.13,14 nol Selanjutnya, ada
keluarga amelogenesis imperfecta di mana fenotipe enamel rusak terkait dengan gen
amelogenin defect15 yang mungkin menyebabkan penurunan hidrolisis amelogenin oleh
MMP-20.16,17 Sebuah mutasi dalam hasil gen MMP-20 di autosomal resesif hypomaturation
amelogenesis imperfecta.18 Sebuah mutasi pada gen yang mengkodekan KLK-4 juga
mengarah
untuk fenotipe enamel manusia yang berhubungan dengan amelogenesis
imperfecta.19 Semua bukti-bukti ini mendukung pandangan bahwa
protein enamel terdegradasi oleh proteinase penduduk di
matriks. Dengan demikian, proteolisis dan penghapusan matriks organik mungkin
acara independen ekstraselular kehadiran
ameloblasts tahap pematangan. Enamelysin, juga dikenal sebagai
MMP-20, merupakan enzim tertentu yang disekresi ke dalam matriks enamel
selama tahap sekretori, dan itu menunjukkan bahwa secara khusus
memotong amelogenin, 20 dan amelogenins terdiri 90% dari
kandungan protein total tahap sekretori enamel.3 gigi
diikuti.
2.1. Histologi
Lima tikus tewas di masing-masing interval waktu berikut: 1, 7,
14 dan 21 hari setelah operasi dan ketika insisal kedudukan dari
gigi seri tersisa muncul di rongga mulut. The hemimandibles
yang dibedah dan, setelah penghapusan semua jaringan lunak eksternal,
mereka tenggelam ke dalam 10% buffer formalin pH 7,4 untuk
48 h. Setelah diradiografi, yang hemimandibles yang
demineral dengan 5% asam nitrat dalam 10% formol. radiografi
membantu untuk melokalisasi daerah gigi insisivus antara
takik, dan dipandu persiapan tiga 4 mm panjang,
blok transversal bernama: tes, antara tanda; insisal,
anterior ke tanda insisal dan terkait dengan diastema; dan basal,
posterior basalmark dan terkait dengan ameloblasts sekretorik.
Tiga blok dari gigi insisivus kontrol yang dipotong sejajar dengan
takik divisualisasikan dalam gigi eksperimental. segmen
yang tertanam dalam Paraplast dan semiserial lintas 5 mm-tebal
bagian yang bernoda dengan hematoksilin dan eosin.
2.2. Pemindaian mikroskop elektron (SEM)
Lima tikus tewas ketika kedudukan insisal terlihat di
rongga mulut hewan. Gigi seri diekstraksi dan
tetap seperti yang dijelaskan untuk histologi. Sebuah garis tipis dicat di
Pesawat midsagittal dari gigi seri, di muka labial gigi,
sehingga gigi bisa dipotong dan dipoles tanpa hilang
pesawat ini. Gigi seri dipotong menggunakan gergaji jaringan keras dan
bagian yang dipoles dengan amplas dengan menurunnya
granulasi, 600-4000, menggunakan air. Setelah membersihkan
waktu 5 s.
2.5. Fourier transform infrared (FTIR) spektroskopi
Untuk analisis FTIR, sampel enamel dari daerah antara
takik lima tikus tewas ketika insisal kedudukan muncul
di mulut adalah bubuk. Bubuk enamel itu
dipisahkan dari dentin menggunakan bromophorm / aseton
mixture34 dicampur dengan kalium bromida (KBr) dan dipadatkan
menjadi pellet kering 13 mm-lebar. Pelet yang
dianalisis dalam FTIR Spektrometer (Nicolet 380, ThermoNicolet,
USA) menggunakan mode transmisi. Setelah pengukuran,
daerah di bawah pita penyerapan obligasi C-H adalah
dihitung dengan menggunakan software Origin1. Untuk prosedur ini, kami
dikurangi latar belakang dan terintegrasi band C-H dengan
bilangan gelombang berkisar antara 3000 dan 2820 CM1
.
2.6. analisis protein
enamel belum matang itu dikorek dari tes dan basal
daerah eksperimental dan kontrol gigi seri dari lima hewan
menewaskan satu minggu setelah operasi. Protein diekstraksi
dari enamel menggunakan asam trikloroasetat (TCA)
method.35 Singkatnya, sampel disimpan semalam di 0 8C
di TCA mengandung koktail protease inhibitor, dan mereka
kemudian disentrifugasi pada 2500 g dan 4 8C selama 45 menit. Itu
pelet yang dilarutkan kembali dalam 6 M urea. Jumlah protein /
mg enamel ditentukan dengan metode Bradford
(BioRad, Hercules, USA). Untuk evaluasi kualitatif, 25 mg
protein dari empat kontrol dan empat sampel uji yang digunakan untuk