Anda di halaman 1dari 3

I

Prosedur
Gelatinisasi pati larut

Penambahan 40 mL pati larut 1% pada 50 mL aquades mendidih dalam


beaker glass, sambil diaduk.

2
3

Genapkan hingga 100 mL dengan air.


larutan pati tergelatinisasi dibiarkan dingin pada suhu kamar (konsentrasi pati 4

mg/mL).
Ambil 10 mL larutan pati tergelatinisasi, encerkan hingga 100 mL dengan aquades.
Larutan ini digunakan sebagai larutan stok (substrat) untuk pengujian(konsentrasi

0,04 mg/mL = 40 g/mL).


b Pembuatan Indikator (Lugol)
Iodin 5 % dan KI 10% dicampur dalam aquades dan memiliki kandungan iodin total
c

126,5 mg/mL.
Pembuatan dapar fosfar
Dapar fosfat 0,1 M pH 3,5: Larutkan 13,6 g kalium dihidrogen fosfat dalam 900 mL
aquades. Cek pH dan atur pH hingga dicapai pH 3,5 dengan asam fosfat, encerkan
hingga 1000 mL dengan aquades.
Dapar fosfat 0,1 M pH 5,6: larutkan 0,908 kalium dihidrogen fosfat dengan aduades
dalam labu ukur 100 mL dan genapkan hingga tanda batas (larutan I). Larutkan 1,161
g dikalium hidrogen fosfat dengan aduades dalam labu ukur 100 mL dan genapkan
hingga tanda batas (larutan II). Campurkan 94,4 mL larutan I dan 5,6 mL larutan II.
Cek pH dan atur pH hingga dicapai pH 5,6.
Larutan dapar fosfat 0,1 M pH 7,5: Larutkan 13,6 g kalium dihidrogen fosfat dalam
900 mL aquades. Cek pH dan atur pH hingga dicapai pH 7,5 dengan larutan kalium
hidroksida 300 g/L, encerkan hingga 1000 mL dengan aquades.

Larutan pati larut 1%: larutkan 1 g pati larut dengan aquadest dalam labu ukur 100
mL
(konsentrasi 10 mg/mL).
- Larutan HCl 10%: masukkan 10 mL HCl pekat ke dalam labu ukur 100 mL yang telah
berisi 50 mL aquades, genapkan volume hingga 100 mL dengan aquades.

d Pembuatan kurva standar pati (duplo)


1 Tabung reaksi diisi 5 mL larutan stok, 3,5 mL dapar fosfat 0,1 M pH 5,6 dan 1,5
2

aquades.
Ambil campuran reaksi (variasi volume, lihat tabel) dan pindahkan ke tabung reaksi

lain berisi 3 mL HCl 10% untuk menghentikan reaksi.


Tambahkan 3 mL indikator (larutan iodin-kalium iodida).

4
5

Absorbansi dibaca pada 620 nm.


Buat blanko. Blanko dibuat dengan komposisi yang sama dengan campuran reaksi,

e
1
2

kecuali tanpa penambahan indikator.


Ekstraksi enzim amilase
Sampel dihaluskan dengan blender.
Ditambahkan buffer asetat 0,2 M dengan pH 5 (untuk setiap 1 ml sampel ditambah 5

3
4
5
6

ml).
Disimpin selama 10 menit, sekali-kali dikocok.
Disaring dengan menggunakan kapas.
Filtrat disentrifugasi selama 20 menit dengan kecepatan 2000 rpm pada suhu 5C.
Supernatan (ekstrak enzim) yang dihasilkan diukur volumenya dan ditempatkan ke
dalam wadah steril untuk dianalisis.
(Suarni & Raut, 2007)

f
1

Uji aktivitas amilase


Diambil 5 ml larutan stok dicampurkan dengan 3 ml buffer fospat dengan pH 5,6 dan

2
3

1,5 ml ekstrak enzim.


Larutan diinkubasi selama 15 menit pada suhu 37C.
Setelah itu, 1 ml campuran reaksi dipindahkan ke dalam tabung tes lain yang

mengandung 3 ml 10% HCl yang ditambahkan dengan 3 ml indikator.


Absorbansi dibaca pada 620 nm.
(Afiukwa, 2009)

REAKSI
IO3- + 5I- + 6H+

3I3- + 3H2O

I2- + Amilum I2- amilum


ALAT BAHAN
ALAT
1
2
3
4
5
6
7
8

Alat penghalus
Alat penyaring
Beaker glass
Batang pengaduk
Gelas ukur
Labu ukur
Pipet tetes
Rak tabung reaksi

9 Spatel
10 Spektrofotometri
11 Tabung reaksi
BAHAN
1
2
3
4
5
6

Aquades
HCl
Kalium dihidrogen sulfat
Larutan iodin
Larutan kalium iodida
Sampel (Wortel)