Deteksi Lipid

(Metode
Kualitatif)

METODE KELARUTAN

Dalam uji ini, kelarutan lipid sangat

ditentukan oleh sifat kepolaran pada pelarut

Lipid memiliki sifat nonpolar sehingga hanya

akan larut pada pelarut nonpolar.

METODE KETIDAKJENUHAN

Digunakan untuk mengetahui asam lemak

yang diuji termasuk kategori asam lemak
jenuh atau tak jenuh.

Menggunakan pereaksi Iod Hubl sebagai

indikator perubahan.

Prosedur:

1)

Asam lemak yang diuji ditambah kloroform, kemudian tabung

dikocok sampai seluruh bahan larut.

2)

Teteskan secara perlahan pereaksi Iod Hubl ke dalam tabung

sambil dikocok dan mengamati perubahan warna yang terjadi
terhadap campuran.

3)

Reaksi positif yang terjadi pada ketidakjenuhan asam lemak

ditandai dengan timbulnya warna merah asam lemak, lalu
warna kembali lagi ke warna awal kuning bening.
Warna merah yang kembali pudar menandakan bahwa
terdapat banyak ikatan rangkap pada rantai hidrokarbon asam
lemak (ikatan rangkap menandakan tak jenuh)

SAMPEL YANG DIUJI DENGAN METODE

KEJENUHAN

METODE KETENGIKAN

Pengujian ini digunakan untuk melihat lipid mana yang sudah

tengik atau belum akibat oksidasi lipid.

Prosedur:
1.

2.

3.

4.

5.

6.

Minyak yang akan diuji dicampurkan dengan HCl, selanjutnya

sebuah kertas saring dicelupkan ke larutan floroglusinol.
Setelah itu, kertas digantungkan di dalam erlenmeyer yang berisi
minyak yang diuji.
Serbuk CaCO3 dimasukkan ke dalam erlenmeyer dan segera
ditutup.
HCl akan menyumbangkan ion hidrogennya yang dapat memecah
unsur lemak sehingga terbentuk lemak radikal bebas dan
hidrogen radikal bebas.
Kedua bentuk radikal ini bersifat sangat reaktif dan pada tahap
akhir oksidasi akan dihasilkan peroksida.
Jika terbentuk larutan merah muda, maka tengik. Jika putih, tidak
tengik.

METODE ACROLEIN

Pengujian akrolein digunakan untuk menguji

keberadaan gliserin atau lemak.

Ketika lemak dipanaskan setelah ditambahkan

agen pendehidrasi (KHSO4) yang akan menarik air,
bagian gliserol akan terdehidrasi ke dalam bentuk
aldehid tidak jenuh atau dikenal sebagai akrolein
(CH2=CHCHO).

Acrolein memiliki bau seperti lemak terbakar dan

ditandai dengan asap putih.

Deteksi Lipid
(Metode
Kuantitatif)

ANGKA PEROKSIDA

Penggunaan angka Peroksida berguna untuk

menentukan tingkat derajat kerusakan pada lemak
dan minyak yang dikenal dengan tingkat Ketengikan.

Prosedur:
1.

2.

3.

4.

Timbang kurang lebih 5,0 gbahan sample dalam 250 ml

tabung reaksi Erlenmeyer bertutup dan tambahkan 30 ml
larutan asam asetat-alkohol-khloroform (20:20:55).
Goyangkan larutan sampai bahan terlarut semua. Tambahkan
1 ml larutan jenuh KI.
Diamkan selama 1/2 jam di tempat gelap dengan sesekali
digoyang kemudian tambahkan 50 ml aquades.
Titrasilah dengan 0,02 N larutan tio sulfat sampai warna
kuningnya hampirhilang. Tambahkan 0,5 ml larutan indikator
kanji. Lanjutan titrasi sampai warna biru menghilang.

Perhitungan bilangan peroksida:

Ket:

Bil. Peroksida = kadar dalam ppm

ml tio = volume titar tio sulfat
N = kenormalam tio sulfat
0,008 = mg setara O2
100 = 100%

BILANGAN ASAM LEMAK BEBAS (FFA)

Bilangan Asam Lemak Bebas atau bilangan FFA

(free fatty acids) adalah nilai yang menunjukkan
jumlah asam lemak bebas yang terdapat di dalam
lemak setelah mengalami proses hidrolisis.

Penggunaan dari metode ini bertujuan untuk

mengukur tingkat efisiensi reaksi yang dilakukan
dan mengetahui tingkat kerusakan minyak
(rancidity).

Semakin tinggi asam lemak bebas yang

terkandung, semakin tinggi tingkat kerusakan
minyak.

Perhitungan bilangan FFA:

Ket:
V =
N =
M =
m =

volume titran yang digunakan (ml)

normalitas titran (N)
bobot molekul asam lemak
bobot sampel (gram)

BILANGAN PENYABUNAN

Bilangan penyabunan dinyatakan sebagai

banyaknya ( mg ) KOH yang dibutuhkan untuk
menyabunkan satu gram lemak atau minyak.

Bilangan penyabunan dapat digunakan untuk

menentukan berat molekul lemak atau minyak.

Bil penyabunan besar = BM kecil (minyak tersebut

memiliki asam lemak dengan rantai karbon pendek)

Bil penyabunan kecil = BM besar (minyak tersebut

memiliki asam lemak dengan rantai karbon panjang)

Prosedur:

1)

5 gram sampel ditimbang kemudian ditambah dengan

larutan KOH 0,1 N sebanyak 20 ml. Mulut erlenmeyer
kemudian ditutup dengan alumunium foil dan
dipanaskan selama jam.

2)

Setelah jam buka penutup dan dinginkan, lalu

tambahkan 2 tetes indikator PP dan titrasi dengan HCl
0,5 N hingga berubah warna jadi ungu.

3)

Membuat pengujian blanko dengan memasukkan larutan

KOH 0,1 N 50 ml ke erlenmeyer, ditambah indikator PP 3
tetes, dan dititrasi dengan HCl 0,5 N sampai warna jadi
kekuningan.

Perhitungan bilangan penyabunan:

Ket:
Tb = Volume HCl untuk titrasi Blanko
Ts = Volume HCl untuk titrasi Sample
BM = Berat molekul larutan KOH

BILANGAN ESTER

Bilangan ester merupakan suatu ukuran kadar ester

yang terdapat dalam minyak/lemak.

Bilangan ester adalah bilangan yang menyatakan

berapa mg KOH yang diperlukan untuk
menyabunkan ester yang terdapat dalam 1 gram
lemak/minyak.

BILANGAN ASAM

Bilangan asam merupakan ukuran jumlah asam lemak

bebas yang dihitung berdasarkan berat molekul pada
asam lemak.
Prosedur:
1.

2.

3.

Timbang lebih kurang 20 gram sampel, masukan kedalam

tabung Erlenmeyer. tambahkan 50 ml alkohol netral95%.
Kemudian tutup, panaskan sampai mendidih untuk
melarutkan asam lemakbebasnya.
Setelah dingin, larutan lemak dititrasi dengan 0,1 N larutan
KOH standar hingga terbentuk warna merah mudasetelah
ditambahkan indikator Phenolphalein (PP)
Apabila cairan yang dititrasi berwarna gelap
dapatditambahkanpelarut yang cukup banyak dan atau
dipakai indikator Bromothymol-bluesampai berwarna biru.

Perhitungan bilangan asam:

Ket:

ml KOH = volume KOH

N KOH = kenormalam KOH
BM KOH = Berat Molekul KOH

BILANGAN ASAM THIOBARBITURAT

(TBA)

Bilangan Asam TBA digunakan untuk

menghitung massa monoaldehid pada lemak
tengik.

BILANGAN IODIN

Bilangan ini menunjukan banyaknya asam lemak

tak jenuh dalam lemak, baik dalam bentuk bebas
maupun dalam bentuk ester-nya disebabkan sifat
asam lemak tak jenuh yang sangat mudah
menyerap iodium.

Prinsip dasar metode ini adalah asam lemak tidak

jenuh mampu mengikat iodin dan membentuk
senyawa yang jenuh.

Gliserida dengan tingkat kejenuhan yang tinggi

akan mengikat iodin dalam jumlah yang banyak.
Semakin tinggi bilangan iodin semakin rendah titik
cairnya. Hal ini disebabkan gliserida tidak jenuh

Deteksi Lipid
(Metode
Instrumentasi)

Metode Instrumentasi memiliki tiga

prinsip kerja yaitu :

Digunakan dalam pengukuran kemampuan

memantulkan radiasi gelombang
elektromagnetik
Dapat menentukan sifat fisik
Digunakan dalam pengukuran kemampuan
adsorbsi radiasi gelombang
elektromagnetik

GAS CHROMATOGRAPHY (GC)

Metode ini merupakan metode analisis secara kuantitatif dan

kualitatif yang digunakan untuk menganalisis senyawa-senyawa
organik.

Tahap-tahap prinsip kerja GC pada pengujian lipid :

Tahap Ekstraksi
Memperoleh asam lemak dengan metode soxhet dan ditimbang 0.020.03 gram dalam bentuk minyak
Pembentukan Metil Ester (Metilasi)
Membentuk senyawa turunan dari asam lemak menjadi metil
esternya (proses derivatisasi)
Identifikasi Asam Lemak
Menginjeksi metil ester ke kromatografi gas, lalu jenis dan jumlah
asam lemak dapat diidentifikasi dengan membandingkan peak
kromatogram sample dengan standard yang telah diketahui
konsentrasinya

Perhitungan konsentrasi asam lemak:

Ket:

ml KOH = volume KOH

N KOH = kenormalam KOH
BM KOH = Berat Molekul KOH

HIGH PERFORMANCE LIQUID

CHROMATOGRAPHY (HPLC)

Prinsip dasar metode ini digunakan untuk

memisahkan lipida non-volatil dan labil yang memiliki
berat molekul tinggi.

Biasanya digunakan pada suhu ruang dan sering

dipakaiuntuk isolasi dan mengukur kadar (kuantitasi)
kolesterol dan kolesteryl ester.

Identifikasi HPLC pada lemak terbagi menjadi dua

yaitu :

HPLC asam lemak

HPLC gliserida

HPLC Asam Lemak:

Asam lemak jenuh dan tak jenuh dapat dipisahkan

sebagai metil ester
Asam lemak dengan gugus OH dapat dideteksi
254 nm tanpa derivatisasi

HPLC Gliserida:

Banyak dilakukan pemisahan trigliserida

berdasarkan jumlah atom c
Terdapat hubungan liner antara log waktu retensi
dengan atom C kejenuhan
Setiap tambahan ikatan rangkap 2 atom
memperpendek waktu retensi

REFERENSI

[1] Wildan, Farihah. 2016. PENENTUAN BILANGAN PEROKSIDA DALAM

MINYAK NABATI DENGAN CARA TITRASI. [ONLINE] Available at:
http://webcache.googleusercontent.com/search?q=cache:EMoyWUKy
XbsJ:balitnak.litbang.pertanian.go.id/index.php%3Foption%3Dco
m_phocadownload%26view%3Dcategory%26id%3D67:3%26download%3D
63:3%26Itemid%3D1+&cd=2&hl=id&ct=clnk
. [Accessed 20 February 2016].

[2] Abdullah, Ilyas. 2016. Penentuan Angka Penyabunan CPO (Crude

Palm Oil) | Ilyas Abdullah - Academia.edu. [ONLINE] Available at:
https://www.academia.edu/9258116/Penentuan_Angka_Penyabunan_CPO
_Crude_Palm_Oil_
. [Accessed 20 February 2016].

[3] Lehninger AL. 1982. Dasar-Dasar Biokimia Jilid I. Maggy

Thenawijaya, penerjemah. Jakarta: Erlangga. Terjemahan dari: Principles
of Biochemistry.

[4] Skoog, Douglas A., Donald M. West, F. James Holler. 1991.