1. Program studi Farmasi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A Yani Km 36, Banjarbaru, 70713, Indonesia 2. Program studi Biologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A Yani Km 36, Banjarbaru, 70713, Indonesia 3. Laboratorium Mikrobiologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A Yani Km 36, Banjarbaru, 70713, Indonesia E-mail : fitriramdhana@gmail.com
Abstrak Sterilisasi adalah proses membunuh semua mikroorganisme termasuk spora bakteri pada benda yang telah didekontaminasi dengan tepat. Sterilisasi pada praktikum ini menggunakan metode uap panas basah (otoklaf) dan metode panas kering (oven). Teknik aseptis sangat berperan untuk menghindarkan mikroorganisme dari kontaminan yang dapat menghambat pertumbuhan mikroba Pemindahbiakan secara aseptis dilakukan dari biakan menuju media agar miring. Melalui praktikum ini dapat diketahui tujuan utama sterilisasi adalah (1) untuk mencegah inflasi pada manusia, hewan dan tumbuhan, (2) untuk mencegah makanan dan lain-lain menjadi rusak, (3) untuk mencegah gangguan kontaminasi terhadap mikroorganisme, (4) untuk mencegah kontaminasi bahan-bahan yang dipakai. Selain itu, melalui praktikum ini juga diketahui bahwa teknik aseptis memperhatikan beberapa hal yaitu (1) letak pengerjaan, (2) kebersihan tempat pengerjaan, (3) penggunaan antiseptik, (4) penanganan paska-pekerjaan, (5) penanganan peralatan, (6) pencegahan kontaminasi. (7) persiapan yang tepat, (8) penggunaan sarung tangan dan (9) higienisitas.
Abstract Sterilization is the process of killing all microorganisms including bacterial spores on objects that had been decontaminated properly. Sterilization in this lab using wet steam (autoclaving) and dry heat method (oven). Aseptic technique was instrumental to prevent microorganisms from the contaminants that can inhibit the growth of microbes in aseptic Pemindahbiakan performed from the culture to the media for oblique. Through this lab can know the main goal of sterilization is (1) to prevent inflation in humans, animals and plants, (2) to prevent food and others become damaged, (3) to prevent interference with contamination of microorganisms, (4) to prevent contamination of materials used. In addition, through this lab is also known that the technique of aseptic attention to several things: (1) the location of the work, (2) the cleanliness of the place of work, (3) the use of antiseptics, (4) the handling of post-employment, (5) handling equipment, (6 ) prevention of contamination, (7) the right preparation, 8 ) the use of gloves and ( 9 ) hygienisity. Keywords : sterilization technique, microbiology
1.
Pendahuluan
Sterilisasi yaitu proses membunuh semua mikroorganisme termasuk spora bakteri pada benda yang telah didekontaminasi dengan tepat [1]. Tujuan sterilisasi adalah untuk memusnahkan semua bentuk kehidupan mikroorganisme patogen termasuk spora, yang mungkin telah ada pada peralatan kedokteran dan perawatan yang dipakai [2]. Sterilisasi dilakukan di
dalam praktikum mikrobiologi bertujuan agar sebelum
melakukan praktikum, alat-alat yang digunakan telah ter-sterilisasi agar tidak ada mikroba yang mengkontaminasi dalam praktikum yang akan dilakukan, karena akan sangat berpengaruh terhadap hasil praktikum yang akan dikerjakan [3]. Pekerjaan di laboratorium mikrobiologi selalu menggunakan teknik aseptik untuk mencegah
kontaminasi mikroorganisme dan mencegah kontaminasi ruangan dan personil dengan mikroorganisme [4]. Teknik aseptis digunakan sepanjang kegiatan berlangsung, baik alat, bahan, lingkungan sekitar maupun praktikannya. Teknik aseptis sangat berperan untuk menghindarkan mikroorganisme dari kontaminan yang dapat menghambat pertumbuhan mikroba [5]. Mikroba memiliki karakteristik serta ciri yang berbeda dalam persyaratan pertumbuhannya. Karakteristik persyaratan pertumbuhan mikroba inilah yang menyebabkan bermacam-macamnya media penunjang pertumbuhan mikroba [6]. Dalam melakukan kegiatan tersebut diperlukan keahlian dan keterampilan khusus. Hal inilah yang melatar belakangi dilaksanakannya praktikum ini.
2.
Metode Praktikum
Sterilisasi dengan metode uap panas basah. Otoklaf
diisi dengan air hingga dasar yang berlubang lalu diletakkkan di atas tungku kompor gas kemudian dinyalakan. Mulut labu erlenmeyer ditutup rapat dengan kertas yang di dalamnya terdapat media yang akan disterilkan. Medium yang akan disterilkan dimasukkan ke dalam otoklaf, kemudian ditutup dengan mengeraskan sekrupnya. Pipa pengatur tempat keluar uap air dibiarkan tetap terbuka hingga semua udara terdesak keluar kemudian ditutup hingga tekanan uap di dalam otoklaf naik sampai 2 atm dan suhu 121 C, selama 15-30 menit. Setelah sterilisasi selesai, ditunggu autoklaf hingga dingin sebelum dibuka, dan keran air pun dibuka secara perlahan-lahan. Sterilisasi dengan metode kering. Alat-alat gelas yang akan disterilisasi dibungkus dengan kertas bekas lalu dimasukkan ke dalam oven. Pengaturan suhu oven adalah 170-180 C selama 1,5-2 jam. Pemindahbiakan secara aseptis. Alkohol 70 % disemprotkan pada alas tempat bekerja dan pada tangan. Tabung reaksi berisi koloni dan media miring diletakkan pada tangan kiri. Jarum ose dicelupkan pada alkohol 70 % lalu dipijarkan hingga menyala, dilakukan sebanyak 3 kali. Mulut tabung reaksi berisi koloni dibuka dan dilewatkan pada api, lalu koloni diambil dengan menempelkan jarum ose dan diaduk sedikit pada koloni, serta dipindahkan ke media miring. Pemindahannya pun juga tidak jauh-jauh dari bunsen. Kapas pada tabung reaksi dilepas, baru ditanamkan okulan ke media miring dengan metode penggoresan zigzag, setelah itu mulut tabung reaksi dilewatkan pada api dan ditutup kembali.
3.
Hasil dan Pembahasan
Tujuan utama sterilisasi adalah (1) untuk mencegah
inflasi pada manusia, hewan dan tumbuhan, (2) untuk mencegah makanan dan lain-lain menjadi rusak, (3) untuk mencegah gangguan kontaminasi terhadap mikroorganisme, (4) untuk mencegah kontaminasi bahan-bahan yang dipakai [7]. Sterilisasi kering merupakan sterilisasi dengan udara panas [8]. Alat yang digunakan adalah oven. Cara ini umum dilakukan untuk mensterilkan peralatan gelas seperti cawan petri, tabung reaksi, dan alat-alat gelas lainnya. Prinsip kerja dari alat ini lebih sederhana yaitu pintu oven dibuka dan semua alat-alat yang akan disterilkan disusun rapi [9]. Setelah itu pintu oven ditutup, suhu diseting pada angka 160-180C selama 12 jam. Keuntungan dari pemanasan kering adalah tidak adanya uap air yang membasahi bahan atau alat yang disterilkan [10]. Sterilisasi basah atau sterilisasi panas lembab dapat diterapkan dengan cara pemanasan menggunakan uap air dengan tekanan(autoklaf) pada suhu yang tinggi [11]. Sterilisasi basah ini biasanya digunakan pada alatalat yang tidak tahan panas, pada sterilisasi basah ini menggunakan suhu 121 C selama 15-30 menit pada autoklaf [12]. Proses pemindahan mikroba secara aseptik sangat membutuhkan ketelitian yang tinggi. Teknik aseptis ditujukan untuk menjaga sterilitas ketika menangani pengkulturan mikroorganisme untuk mencegah kontaminasi terhadap kultur mikroorganisme yang diinginkan. Dasar penggunaan teknik aseptik adalah adanya banyak partikel yang mengandung mikroorganisme yang mungkin dapat masuk ke dalam alat laboratorium atau mengendap di area kerja. Pertumbuhan mikroba ini tidak diinginkan dan dapat mempengaruhi atau mengganggu hasil dari suatu percobaan. Penggunaan tehnik aseptik meminimalisir partikel yang digunakan terhadap agen pengontaminasi [13]. Ada beberapa aturan umum yang harus diperhatikan dalam tehnik aseptis, yaitu pertama letak meja kerja, sebaiknya jauh dari sesuatu yang dapat menciptakan aliran udara, misalnya tidak ada jendela yang terbuka, tidak dekat dengan pintu yang selalu dibuka-tutup dan jauh dari lalu-lintas orang lain. Kedua, kebersihan meja kerja, harus bersih dari kotoran dan benda-benda yang tidak akan digunakan. Kotoran seringkali sulit dibersihkan pada sudut-sudut ruang. Ketiga, antiseptik, mengusap meja kerja dengan antiseptik atau senyawa pembersih lain sebelum digunakan. Di sebagian besar laboratorium umumnya menggunakan etanol 70% untuk membersihkannya. Sediakan etanol pada posisi selalu dekat dengan meja [14].
Keempat, selesai bekerja, sebaiknya meja kerja
dikosongkan dari peralatan dan bersihkan lagi. Semua peralatan yang digunakan harus steril. Sebaiknya semua peralatan yang telah disterilisasi diberi label. Jika menemukan alat yang sepertinya telah disterilisai tapi masih ragu terhadap sterilitasnya maka sebaiknya jangan digunakan. Bungkus peralatan baik alat steril sekali pakai atau bukan [14]. Kelima, pengaturan peralatan, alat-alat di meja kerja diatur sedemikian rupa sehingga meminimalisir pergerakan tangan. Alat-alat yang biasanya digunakan dengan tangan kanan (jarum inokulum, filler, pipet) letakkan disebelah kanan begitu juga sebaliknya (rak tabung, cawan petri, erlenmeyer) terkecuali untuk tangan kidal. Di bagian tengah meja kerja disediakan ruang lapang untuk bekerja. Keenam, membakar mulut atau bagian tepi dari suatu alat, ini dapat membunuh mikroorganisme yang menempel [15]. Ketujuh, persiapan yang matang, segala peralatan dan bahan yang dibutuhkan telah disiapkan sepenuhnya. Semua bahan dan alat untuk prosedur tertentu telah dipersiapkan di meja kerja. Jangan sampai meninggalkan meja kerja untuk mengambil sesuatu yang terlupa atau tertinggal. Perhitungkan semua yang diperlukan beserta cadangannya. Kedelapan, memakai sarung tangan dan ganti secara berkala. Sarung tangan membantu melindungi dari tumpahan biakan atau bahan kimia berbahaya. Tidak menggunakan sarung tangan dirasa tidak bermasalah jika materi dan bakteri yang diteliti dipastikan tidak berbahaya. Kesembilan, mencuci tangan sebelum dan sesudah bekerja. Cuci tangan dengan desinfektan atau sabun bila tidak ada desinfektan. Cuci tangan dapat membilas mikroorganisme yang ada di tangan [15.]
4.
Kesimpulan
Prinsip dasar sterilisasi peralatan dan bahan
yang umum digunakan di laboratorium mikrobiologi didasarkan pada jenis alat dan jenis media yang akan digunakan. Teknik aseptik dan prosedur penggunaan peralatan didasarkan pada jenis biakan dan media biakan yang akan digunakan. Sterilisasi dengan metode kering (dry hot
air) dilakukan menggunakan otoklaf dan
uap panas basah (moist wet heat) dilakukan menggunakan oven suhu tinggi.
Daftar Acuan [1] I. S. Arie. Penggunaan Alat Sterilisasi Air Minum Dengan Menggunakan Ultra Violet (UV) Dalam skala Rumah Tangga. Jurnal Penelitian. 2(2) 1826. [2] E. C. S. Chan, M. J. Pelczar, R.D. Reid. Microbiology. Mc Graw Hill. New York. 2008. p. 288-290. [3] C. Helena, N. Barnes, J. Sue. Biology 5th Ed.. Worth Publisher Inc. New York. 2006. p. 124127. [4] Dwidjosaputro. Alat Laboraturium. Gajah Mada University Press. Yogyakarta. 2004. p. 81-83. [5] J. F. Anderson. Infectious but Nonpathogenic Isolate of Borrelia burgdorferi. J. Clinical Microbiology. 28 (2009). 2693-2699. [6] Khasani. Prosedur alat-alat Kimia. Liberty. Yogyakarta. 2002. p. 54-56.
[7] R.M. Atlas. Handbook Of Microbiological Media
5th Edition. CRC Press. USA. 1986. p. 344-346. [8] M. T. Madigan, J.M. Martinko. 2000. Biology of Microorganisms. Prentice Hall. New Jersey. p. 301-303. [9] R. F. S. Oram, J. H. Paul. Biology Living System. Glencoe Division Mc Millan Company. Waterpille. 2011. p. 65-67. [10] Panji, et al 1995. Metode Pada Beberapa Macam Bahan Pembawa Inokulum. Jurnal Penelitian Bioteknologi Perkebunan Vol 2 (1) 12-15. Bogor: Pusat Penelitian Bioteknologi Perkebunan. [11] G. H. Schlegel. Mikrobiologi Umum. Gajah Mada University Press. Yogyakarta. 2007. p. 45-47. [12] Sutedjo. Mikrobiologi Tanah. Rineka Cipta. Jakarta. 1991. p. 17-18. [13] J. Parker. Handbook Brock Biology of Microorganism. Mc Graw Hill. New York. 2008. p. 229-235. [14] M. Machmud. Teknik Penyimpanan dan Pemeliharaan Mikroba. Balai Penelitian Bioteknologi Tanaman Pangan. Bogor. 2008. p. 120-121. [15] L. Caray. Aseptic Technique. Mc Graw Hill. New York. 2013. p. 124-125.
Dokumen Serupa dengan Mikrobiologi-Sterilisasi & Teknik Aseptis
