ABSTRAK hipofisis-gonad memainkan peran penting dalam mengatur gametogenesis di

vertebrata. Dalam kebanyakan kasus, gonadotropin bertindak melalui biosintesis hormon

steroid gonad
yang pada gilirannya memediasi berbagai tahap gametogenesis. Serangkaian penelitian di
laboratorium kami menggunakan
beberapa spesies ikan teleost sebagai hewan percobaan telah memberikan informasi baru
tentang
regulasi endokrin dari gametogenesis. termasuk pertumbuhan oosit, pematangan oosit.
spermatogenesis
dan pematangan sperma. Artikel ini secara singkat ulasan temuan kami pada identifikasi
steroid
mediator yang terlibat dalam setiap proses gametogenesis, dan situs dan mekanisme kerja
dari
mediator. pengamatan ini secara kolektif menunjukkan kesesuaian menggunakan ikan teleost
sebagai
model valid untuk memeriksa pengaruh hormonal pada gametogenesis. Model tersebut juga
bisa memiliki
aplikasi dan validitas untuk vertebrata pada umumnya.
Pengenalan
Hal ini juga ditetapkan bahwa dalam vertebrata, gonadotropin adalah
hormon utama untuk mengatur gametogenesis. Namun saya tampaknya
yang gonadotropin tidak bertindak secara langsung. tetapi bekerja melalui
gonad biosintesis 01 hormon steroid yang pada gilirannya menengahi
berbagai tahap gametogenesis. Selama beberapa tahun terakhir,
Serangkaian penelitian di laboratorium kami menggunakan beberapa spesies ikan
hewan percobaan telah memberikan informasi baru tentang
Peraturan hormonal dari gametogenesis. Ini ulasan artikel singkat
hasil kami di hormonal peraturan 01 pertumbuhan oosit, oosit
pematangan, spermatogenesis, dan sperma pematangan pada ikan (Gambar, 1).
gonadotropin
Studi terbaru menunjukkan bahwa pituitaries ikan, seperti yang 01
vertebrata lainnya, mengeluarkan dua jenis gonadotropin. dua yang berbeda
gonadotropin karbohidrat, ditunjuk sebagai GTH-I dan GTH-li,
telah diisolasi dan dikarakterisasi dari pituitaries pemijahan
sohib salmon, Oncorhynchus keta (Suzuki et al, 1988a, b;. Kawauchi
et al., 1989). Setiap gonadotropin ini terdiri 01 a. dan ~
subunit, subunit B memiliki urutan asam amino identitas
31%. GTH-I dan GTH-Ii juga telah dimurnikan di coho salmon,

Oncorhynchus kisutch, (Swanson et al., 1991) dan mereka

chemicaliy mirip dengan gonadotropin sohib salmon. Kedua GTHI dan GTH-II yang
steroidogenik (Suzuki et al., 1988c), dan hanya berbeda
di potensi relatif mereka. kadar plasma dari GTH-I menunjukkan peningkatan diperpanjang
selama vitellogenesis / spermatogenesis. dan penurunan pada saat pemijahan. Di sisi lain,
tingkat plasma
GTH-II terus-menerus rendah sepanjang viteliogenesis /
spermatogenesis dan meningkat secara dramatis atthe waktu pemijahan
di akhir musim gugur, Diambil logether, disarankan bahwa selain
untuk mendirikan peran 01 GTH-Ii selama pematangan gonad akhir,
GTH-I mungkin playa peran selama viteliogenesis dan spermatogenesis.
Dalam ulasan ini, para gonadotropin jangka diambil untuk merujuk pada
glikoprotein. kaya pematangan gonadotropin atau GTH-II.
Peraturan hormon pertumbuhan oosit (vitelogenesis)
Oosit vertebrata nonmammalian tumbuh sementara ditahan di
profase meiosis pertama. Peristiwa utama yang bertanggung jawab untuk
besar pertumbuhan 01 oosit ikan terjadi terutama selama
fase pembangunan disebut vitellogenesis, dan melibatkan
penyerapan dan kemasan dari plasma hepatically berasal
pendahulu. vitellogenin. menjadi protein kuning, Estrogen, estradiol-17 ~ di
kebanyakan kasus, diproduksi oleh ovarium di bawah pengaruh
gonadotropin, dimasukkan ke dalam sistem pembuluh darah dan merangsang
sintesis hati dan sekresi olvitellogenin (Gbr. 2). Injeksi
dengan ekstrak hipofisis atau berbagai persiapan gonadotropin
menginduksi sintesis estradiol-17B dan vitellogenesis berikutnya.
kadar plasma ot estradiol-17 ~ dan viteliogenesis yang positif
berkorelasi dan peningkatan secara paralel. Eksogen estrogen bisa
menginduksi sintesis vitellogenin di hati dan penampilan di
plasma.
Vitellogenin secara selektif diambil dari aliran darah dengan
mengembangkan oosit (Wallace, 1985). reseptor vitellogenin yang ditandai di membran oosit
terisolasi dari coho salmon
(Stifanl el al., 1990), nila, Oreochromis niloticus (Chan et al ..
1991) dan rainbow trout, Oncorhynchus mykiss (Lancaster dan

Tyler, 1991; Le Menn dan Nunez Rodriguez, 1991). saturasi dan

Scatchard analisis mengungkapkan hanya satu kelas dari situs mengikat. Di
nila, jumlah dan afinitas binding ini sangat meningkatkan
dari previtellogenic ke tahap vitellogenik, dan tetap
tidak berubah sampai tahap preovulasi pada saat afinitas
binding juga tertinggi.
Beberapa hormon. seperti gonadotropin, tiroksin,
triiodothyronine. insulin, dan hormon pertumbuhan, telah terlibat
dalam mengatur oosit grow1h, meskipun peran setiap ot ini
hormon telah belum ditentukan. GTH-I, tapi tidak GTH-II,
merangsang penyerapan vitro dari vitellogenin ke folikel ovarium dari
utuh vitellogenik rainbow trout, serta in vitro penggabungan
vitellogenin oleh folikel sebagian gundul (Tyler, 1991). menggunakan
oosit folikel bebas dari rainbow trout, kami telah menunjukkan bahwa insulin
dan tiroksin secara signifikan meningkatkan vitellogenin penyerapan (Shibata et
al., 1993). Sebaliknya, tidak sohib salmon GTH-I atau GTH-II adalah
efektif. oocy1es matang menggabungkan hanya 1/15 dari vitellogenin.
Insulin juga tidak memiliki ettect pada oocy1es matang. Ini adalah hipotesis
dari temuan ini bahwa diamati sebelumnya stimulasi
serapan vitellogenin ke folikel utuh atau oosit sebagian gundul
dari rainbow trout kemungkinan besar dimediasi oleh tindakan
gonadotropin pada folikel ovarium.
produksi estradiol-1713
The teleost ovarium terdiri dari oogonia, oosit, dan sekitarnya
sel folikel, jaringan pendukung atau stroma, dan pembuluh darah dan saraf
jaringan. Dengan grow1h dari oosit, sel-sel folikel berkembang biak dan
membentuk lapisan follicular terus menerus (lapisan sel granulosa).
Bersamaan dengan itu, stroma sekitarnya ikat elemen jaringan
juga menjadi terorganisir untuk membentuk lapisan luar yang berbeda dari
follicularenveiope (lapisan teka). Oleh karena itu, oosit vitellogenik,
seperti yang vertebrata lainnya, terdiri dari dua sel utama
lapisan, lapisan sel teka luar dan lapisan sel granulosa dalam
yang terpisah satu sama lain oleh ruang bawah tanah yang berbeda
selaput. Lapisan teka mengandung fibroblast, serat kolagen,

dan kapiler, dan, dalam beberapa spesies, sel-sel teka khusus

(Nagahama, 1983). Sebuah teknik diseksi sederhana untuk memisahkan
folikel ovarium dari salmonids menjadi dua lapisan sel, teka dan
lapisan granulosa, telah membuat possibie untuk menjelaskan peran masing-masing
layer dan gonadotropin dalam proses keseluruhan produksi steroid
(Kagawa et al., 1982). Kami dalam studi vilro menunjukkan bahwa teka
dan lapisan sel granulosa bekerja sama dalam produksi steroid
mediator dari oosit grow1h dan pematangan (lihat di bawah).
Sebuah model tipe dua-sel dalam producfion dari folikel estradiol-17B
telah diusulkan. Dalam model ini, lapisan sel teka, di bawah
pengaruh gonadotropin, mengeluarkan substrat androgen
(Mungkin testosteron) yang berdifusi ke dalam lapisan sel granulosa
mana aromatase terlokalisir eksklusif (Kagawa el al., 1985;
Nagahama, 1987b; Adachi el al., 1990). Pembatasan ot distribusi
testosteron dan estradiol-17B dikonfirmasi imunohistokimia di tollicles ovarium vitellogenik
dari rainbow trout
(Schulz, 1986). Kami telah menemukan bahwa lapisan sel teka dari
Amago salmon (Oncorhynchus rhodurus) dan sel granulosa
Lapisan dari trout pelangi bisa menghasilkan efek yang sama seperti yang telah
dilaporkan menggunakan kombinasi teka ot dan lapisan sel granulosa
dari spesies yang sama. Kebalikan penggunaan salmon Amago
granulosa dan rainbow trout lapisan sel teka juga efektif. Ini
Temuan menunjukkan bahwa mungkin ada sedikit spesifisitas spesies ot masing-masing
lapisan sel tersebut antara salmonids (Nagahama, 1987b). Namun,
model tipe dua-sel yang dijelaskan di atas tampaknya tidak valid
untuk heleroclitus Fundulus (killitish) dan medaka, Oryzias lalipes.
Dalam spesies ini, di mana sel-sel teka khusus tidak jelas dalam
lapisan teka, sel-sel folikel (sel granulosa) adalah situs utama
sintesis steroid dan produksi estradiol-17B tidak
membutuhkan keterlibatan dua jenis sel (Onitake dan Iwamatsu,
1986; Petrino et al., 1989).
Gonadotropin bekerja pada lapisan sel teka untuk merangsang testosteron
produksi melalui adenyl reseptor-mediated makan adenilat-cAMP
sistem. Penelitian lebih baru menunjukkan bahwa lainnya

molekul sinyal intraseluler termasuk kalsium, kalmodulin.

pro1ein kinase C, dan asam arakidonat yang terlibat dalam produksi testosteron
gonadotropininduced oleh folikel preovulasi utuh
ikan mas, Carassius auralus (Van Der Kraak, 1990, 1991; Van Der
Kraak dan Chang, 1990). Sangat menarik untuk dicatat kehadiran
gonadotropin reseptor di sel granulosa ot Amago salmon
folikel vitellogenik. ditemukan bahwa spesies ini gonadotropin
dan beberapa agen yang dikenal untuk meningkatkan tingkat cAMP intraseluler
gagal meningkatkan aktivitas aromatase pada lapisan granulosa sama sekali
tahap perkembangan. Namun demikian, aktivitas aromatase pada
lapisan sel granulosa nyata meningkat selama vitellogenesis.
Dengan demikian, mekanisme ot aktivasi salmon Amago
granulosa sistem aromatase sel tidak diketahui pada saat ini.

Kami juga menyelidiki mekanisme aktivasi aromatase di

awal folikel vitellogenik dari medaka, spesies di mana
urutan peristiwa seperti vitellogenesis, oosit pertumbuhan. meiosis
pematangan, dan ovulasi dapat diberi batas waktu akurat (Sakai ef al.,
1987). Menggunakan model ini, kami telah menunjukkan progresif
peningkatan aktivitas aromatase, dinilai secara tidak langsung dengan konversi testosteron
eksogen untuk estradiol ~ 17B, di folikel vitellogenik
terisolasi antara 28 dan 20 jam sebelum pemijahan (Sakai et
Al"
1988),
Dalam spesies ini, aktivitas aromatase nyata ditingkatkan oleh
hamil mare serum gonadotropin (PMSG) setelah 18 jam inkubasi
folikel dari vitellogenik diisolasi pada 32 jam sebelum pemijahan, tindakan ini
PMSG yang menirukan oleh forskolin dan dbcAMP yang dikenal
untuk meningkatkan tingkat sel cAMP ot, ini efek meningkatkan PMSG,
forskolin dan dbcAMP pada aromatisasi benar-benar dihambat oleh
aktinomisin 0 dan cycloheximide, hasil ini menunjukkan bahwa
PMSG menginduksi aktivitas aromatase pada medaka folikel vitellogenik
melalui siklase adenilat ~ sistem cAMP, Selanjutnya aksi ini

PMSG tergantung pada baik transkripsi dan translasi

proses (Nagahama et al., 1991).
pematangan oosit
Sebuah periode pertumbuhan oosit diikuti oleh proses yang disebut oosit
pematangan yang terjadi sebelum ovulasi dan merupakan lor prasyarat
pembuahan sukses. Pematangan oosit didefinisikan sebagai
reinitiation dan penyelesaian pembelahan meiosis pertama, selanjutnya
pengembangan menjadi metafase II. Pada beberapa spesies seperti ikan mas, yang
Acara pertama terlihat dari pematangan oosit adalah migrasi
germinal vesikel (GV) ke arah tiang hewan dan sering digunakan sebagai
indikator terjadinya pematangan oosit. Mekanisme
Proses ini melibatkan perubahan dalam jaringan cytoskeletal seperti
distribusi mikrotubulus (Lessman et
Al"
1988; Jiang et al.,
tidak dipublikasikan). Setelah migrasi GV, beberapa proses
terjadi pada inti dan sitoplasma oosit, termasuk
rincian dari vesikel germinal (GVBD) (yang menunjukkan
akhir profase I), kondensasi kromosom, pembentukan
dari spindle, dan ekstrusi tubuh polar pertama (yang menandai
selesainya meiosis I) (Masui dan Clarke, 1979; Goetz, 1983;
Nagahama, 1987c). Studi dari laboratorium kami dan lain-lain telah
menunjukkan bahwa di teleosts, seperti dalam amfibi. pematangan oosit adalah
diatur oleh tiga mediator utama, yaitu, gonadotropin,
pematangan ~ merangsang hormon (MIH), dan pematangan ~ mempromosikan
Faktor (MPF) (Nagahama, 1987c; Redding dan Patino, 1993) (Gambar.
3).
mediator utama dari pematangan oosit - gonadotropin
Studi in vitro inkubasi telah menunjukkan bahwa gonadotropin
menginduksi pematangan meiosis di postvitellogenic folikel tertutup
oosit ikan, tetapi tidak pada oosit defolliculated (Goetz, 1983;
Nagahama, 1987c). Cyanoketone, inhibitor spesifik 3B ~ hidroksi ~
", 5 ~ steroid dehydrogenase, benar-benar dihapuskan kematangan yang
efek gonadotropin (Young et

Al"
1982; Deman ada dan Goetz,
1987). Secara bersama-sama, temuan ini menunjukkan bahwa gonadotropin
memicu pematangan dengan merangsang sel-sel folikel untuk mensintesis ", 4 ~
steroid yang bekerja langsung pada oosit menyebabkan pematangan.
mediator sekunder dari pematangan oosit - hormon Maturationinducing (MIH)
Sejumlah penelitian telah dilakukan untuk menguji efek dari
berbagai steroid pada induksi pematangan oosit in vitro (lihat
ulasan, Jalabert, 1976; Iwamatsu, 1978; Fostier et al, 1983.;
Goetz, 1983; Nagahama et al, 1983.; Greeley et al., 1986; Canario
dan Scott, 1988; Trant dan Thomas, 1988). Di antara C18, C19,
dan C21 steroid diuji sejauh ini, steroid C21 selalu
dilaporkan memiliki maturatlon lebih kuat ~ merangsang aktivitas dari
Hormon dan gametogencsis injish 219
dua kelompok lainnya steroid. The MIH dari pagi lalu salmon adalah
dimurnikan dan ditandai dari media yang belum matang tapi fullgrown folliculated oosit telah
diinkubasi dengan sebagian dimurnikan
salmon gonadotropin (Nagahama dan Adachi, 1985). Di antara 20
Fraksi dipisahkan dengan fase terbalik cair kinerja tinggi
kromatografi, aktivitas pematangan-inducing hanya ditemukan di
satu fraksi yang memiliki waktu retensi bertepatan persis dengan
17a, 20B ~ dihidroksi ~ 4 ~ pregnen ~ 3 ~ satu (17 , 20B ~ DP). kemurnian dan
karakterisasi akhir dari fraksi aktif ini telah dikonfirmasi lebih lanjut
dengan kromatografi lapis tipis dan spektrometri massa dengan otentik
17a, 20B ~ DP. Plasma tingkat 17a, 20B ~ DP yang ditemukan menjadi tinggi
hanya dalam matang dan ovulasi Amago betina salmon dan sangat
rendah atau nondetectable (kurang dari 30 pg / ml) pada wanita selama
periode yang tersisa oftheir hidup (Young et al .. 1983a) .ltwas juga menemukan
bahwa di antara steroid diuji, 17 , 20B ~ DP adalah yang paling efektif
inducer dari GVBD di Amago salmon oosit postvitellogenic
(Nagahama et al., 1983). 17 , 20B ~ DP demikian diidentifikasi sebagai
alami MIH di Amago salmon (Nagahama, 1987a).
Furtherstudies dari laboratorium kami dan yang lain menunjukkan bahwa 17a, 20B ~
fungsi DP sebagai umum MIH ke beberapa ikan teleost lainnya

termasuk sebagian besar spesies dari salmonids (Jalabert, 1976; Goetz, 1983;
Yamauchi et at .. 1984; Canario dan Scott, 1988).
Baru-baru ini, 17a, 20B, 21 ~ trihidroksi ~ 4 ~ pregnen ~ 3 ~ satu (20B ~
S) telah diidentifikasi sebagai MIH alami dari Atlantik
croaker, ikan perciform laut (Trant et al .. 1986; Trant dan
Thomas, 1989a). dalam spesies ini, 20B ~ S ditemukan menjadi salah satu
paling steroid ampuh untuk mendorong GVBD in vitro (Trant dan Thomas,
1988). Paparan jatuh tempo folikel ovarium untuk HCG in vitro sangat
peningkatan produksi mereka 2GB.S, dengan seiring bertambahnya
tingkat pematangan oosit in vitro. Selanjutnya, in vitro produksi
dan tingkat plasma dari 17a, 20B ~ DP selama periode oosit
pematangan yang sangat Jow di spesies ini (Trant dan Thomas,
1989b). Hasil ini sangat mendukung hipotesis bahwa 20B ~ S adalah alami, MIH utama
dalam croaker Atlantic. Keterlibatan
20B-S di induksi pematangan oosit juga disarankan dalam
terkait erat spesies. tutul Seatrout, Cynoscion nebolusus
(Thomas dan Trant. 1989). Namun, 208-S tidak tampak
terlibat dalam induksi pematangan oosit di salmonids, karena
tidak ada bukti untuk kehadiran sejumlah besar ini
steroid dalam darah salmonids perempuan menjalani pematangan atau
ovulasi (Scott dan Canario, 1987).
17a, 20B-DP produksi
Menggunakan teknik inkubasi terisolasi salmonid folikel
persiapan mirip dengan yang digunakan untuk studi tentang folikular
produksi estradiol-178, tipe model dua sel telah diusulkan,
untuk pertama kalinya dalam vertebrata apapun, untuk produksi folikular
MIH. Dalam model ini, lapisan sel teka menghasilkan 17ahydroxyprogesterone yang
melintasi lamina basal dan
dikonversi ke 17a, 208-DP oleh lapisan sel granulosa mana
gonadotropin bertindak untuk meningkatkan aktivitas 208-hidroksisteroid
dehidrogenase (208-HSD), enzim kunci yang terlibat dalam
konversi 17a-hydroxyprogesteroneto 17a, 208-DP (Young et
al .. 1986; Nagahama, 1987a, b).
Langkah pertama ot efek merangsang gonadotropin di teka

lapisan sel aktivasi reseptor-dimediasi adenilat siklase dan

pembentukan cAMP, situs utama aksi mungkin terjadi pada
langkah steroidogenik antara kolesterol dan pregnenolon
melibatkan sistem enzim kolesterol rantai samping belahan dada
(Kanamori dan Nagahama, 1988a, b).
Aksi gonadotropin pada perangkat tambahan 208-HSD di
sel granulosa yang menirukan oleh forskolin, oleh dbcAMP, tapi tidak
dbcGMP, dan oleh dua inhibitor phosphodiesterase (Nagahama et
al .. 1985a: Kanamori dan Nagahama, 1988b). Selanjutnya,
gonadotropin dan forskolin menyebabkan akumulasi cepat cAMP
dengan tingkat maksimum pada 30-60 menit. Temuan ini konsisten
dengan pandangan bahwa cAMP adalah utusan kedua gonadotropin
tindakan dalam sel granulosa.
Dalam percobaan in vitro utilizingboth inhibitor sintesis protein
(Cycloheximide dan puromycin) dan RNA sintesis inhibitor
(Aktinomisin D, Cordycepin dan-amanitin) telah mengungkapkan bahwa
gonadotropin dan cAMP induksi aktivitas 208-HSD di granulosa
lapisan sel tergantung pada aktivasi RNA baru ot dan protein
perpaduan. Studi tentu saja waktu kami lebih lanjut menunjukkan bahwa de novo
sintesis dari 208-HSD in vitro dalam menanggapi gonadotropin dan
dbcAMP terjadi, dan terdiri dari gen peristiwa transkripsi dalam
pertama 6 jam paparan ot untuk gonadotropin dan dbcAMP dan
Peristiwa transkripsi 6-9 h affer eksposur ke gonadotropin dan
cAMP (Nagahama et al., 1985b). Secara bersama-sama, hasil ini
menunjukkan bahwa gonadotropin menyebabkan sintesis de novo dari 208-HSD di sel
salmon granulosa am lalu melalui mekanisme
tergantung pada sintesis RNA.
pergeseran steroidogenik terjadi dalam sel folikel segera
sebelum pematangan oosit
Kapasitas folikel utuh untuk menghasilkan estradiol-178 di
Menanggapi gonadotropin meningkat rangsangan selama oosit
pertumbuhan, namun dengan cepat menurun berkaitan dengan kemampuan
oosit matang dalam menanggapi gonadotropin (Kagawa et
di"

1983). produksi testosteron oleh persiapan lapisan teka

diperoleh setiap bulan selama pertumbuhan oosit dan pematangan memiliki
mengungkapkan bahwa kapasitas thecallayerto menghasilkan testosteron
dalam menanggapi gonadotropin secara bertahap meningkat selama kursus
pertumbuhan oosit dan puncak selama periode postvitellogenic: ini
kapasitas lapisan sel teka dikelola oleh periode oosit
pematangan dan ovulasi (Kanamori et at .. 1988). aromatase
Kegiatan di lapisan sel granulosa meningkat selama vitellogenesis dan
menurun dengan cepat dalam hubungan dengan kemampuan oosit untuk
jatuh tempo dalam menanggapi gonadotropin (Young etat, 1983b:. Kanamori
et a /., 1988). penurunan aktivitas aromatase ini tampaknya
bertepatan dengan penurunan kemampuan folikel utuh untuk menghasilkan
estradiol-17B dalam menanggapi gonadotropin. Sejak testosteron
produksi dalam lapisan sel teka tidak menurun selama waktu ini,
mengurangi produksi estradiol-178 oleh folikel postvitellogenic adalah
karena. sebagian, untuk penurunan aktivitas aromatase dalam sel granulosa
lapisan.
Segera sebelum pematangan oosit, folikel ovarium utuh
ikan salmonid memperoleh peningkatan kemampuan untuk menghasilkan 17a, 208-DP
dalam menanggapi gonadotropin. lapisan sel teka tidak mengembangkan
kemampuan untuk menghasilkan 17C1-hidroksiprogesteron dalam menanggapi
gonadotropin sampai segera sebelum pematangan oosit. Meskipun
lapisan sel granulosa pertama memperoleh kemampuan untuk mengkonversi eksogen
17C1-hidroksiprogesteron ke 17a, 208-DP dalam menanggapi
gonadotropin sekitar 2 bulan sebelum pematangan oosit, sebuah
peningkatan endogen 20 aktivitas B-HSD di sel granulosa terjadi
selama pematangan oosit. Dengan demikian, penurunan C17-20 lyase andi
Kegiatan dehidrogenase atau 178-hidroksisteroid dalam sel teka dan
peningkatan 208-HSD di sel granulosa muncul untuk menjadi besar
faktor yang bertanggung jawab forthe peningkatan pesat dalam 17a, 208-DP produksi
oleh folikel utuh selama pematangan oosit.
Karena Shiff steroidogenik dari estradiol-178 untuk 17a, 208-DP
terjadi dalam hubungan dengan meningkatnya konsentrasi
gonadotropin. penting untuk menyelidiki peristiwa molekuler

dimana pergeseran diatur oleh gonadotropin. Langkah pertama

terhadap penjelasan masalah ini adalah identifikasi dan
karakterisasi klon cDNA encoding enzim steroidogenik
bertanggung jawab untuk estradiol-178 dan 17a, 208-DP biosintesis. Kami
memiliki sisipan cDNA full-length baru-baru ini terisolasi dan kloning
melengkapi mRNA mengkode kolesterol rainbow trout
rantai samping belahan dada sitokrom (P-450scc) (Takahashi et al ..
1993), 38-hidroksisteroid dehidrogenase (38-HSD) (Sakai et al.,
1993), 17a-hydroxylaseiC17-20 lyase sitokrom (P-450c17)
(Sakai et at., 1992), dan aromatase sitokrom (P-450arom)
(Tanaka et al .. 1992b). Sisipan cDNA dikonfirmasi
mengkodekan setiap enzim steroidogenik dengan memperkenalkan ke
COS-1 monyet sel tumor ginjal nonsteroidogenic. Untortunately,
tidak seperti kebanyakan otthe enzim steroidogenik ovarium, 208-HSD cDNA
belum kloning dalam spesies hewan. Karena itu. sebagai pertama
langkah, kita mengisolasi cDNA encoding babi testis 208-HSD, karena
persiapan puritied dari 208-HSD hanya tersedia di babi (Nakajin
et al., 1988). Menggunakan oligonukleotida sintetik disimpulkan dari
urutan asam amino sebagian ditentukan, kita memiliki, untuk pertama
waktu, terisolasi dan kloning cDNA encoding 208-HSD dari babi
testis cDNA library (Tanaka et al., 1992a). CDNA berisi
terbuka reading frame diprediksi untuk mengkodekan 289 residu asam amino.
Mengejutkan itu memiliki 85% homologi asam amino dengan karbonil manusia
reduktase. Kami sekarang menggunakan klon cDNA ini untuk mengisolasi cDNA
encoding rainbow trout 20B-HSD dari ovarium rainbow trout
cDNA library.
Translate

Showing translation for The mRNA levels of P.450scc, 38.HSD, and P-450c17 are barely
detected in the follicles during the mid-vitellogenic stage, and abundant in follicles during the
post vitellogenic stage and oocyte maturation (Takahashi et al., 1993; Sakai et al.,
1992,1993). The P-450arom RNA transcripts are present in the ovary during active

vitellogenesis, but are absent in the ovary in the stage of oocyte maturation or in the ovary
containing postovulatory follicles (Tanaka et al., 1992b). These results are consistent with the
rapid decrease in aromatase activity in the granulosa cell layers during the postovulatory
period (Young et al.. 1983b). It is thus concluded that the ability of the granulosa cells to
produce estradiol-17B is regulated by the amount of the RNA transcripts present (Tanaka
etal., 1992b). Our preliminary results indicate that forskolin induced 17a,20B-DP production
is accompanied by a dramatic decrease in P-450arom mRNA levels by granulosa cells
isolated trom postvitellogenic follicles. A 2- to 3-fold increase in P-450scc and 3B-HSD
mRNAs and a slight decrease in P-450c17 mRNA are also observed during the forskolininduced 17a,20B-DP production (Tanaka and Nagahama, unpublished). Our preliminary
Northern hybridization analysis using the pig 20B-HSD cDNA as a probe has revealed that
20B-HSD mRNA transcripts are low in granulosa cells prior to oocyte maturation, but
markedly increased during natural and gonadotropin-induced oocyte maturation. Site of MIH
action Previous in vitro studies in fish have shown that the mechanism of action involved in
the steroid-stimulation of oocyte maturation has special characteristics not typical of the
classic steroid mechanism of action (Dettlaff and Skoblina, 1969; Jalabert, 1976; DeMan no
and Goetz, 1987). We also found that 17a,20B-DP is ineffective in inducing oocyte
maturation when microinjected into fully grown immature oocytes of goldfish, but was
effective when applied externally. Taken together, these in vitro results suggest that the site of
MIH action in inducing meiotic maturation in fish oocytes is at or near the oocyte surface.
More direct evidence for the existence of MIH receptors in oocyte plasma membranes has
been obtained by binding studies using labelled MIH. We have identified and characterized
specific binding of ['H)17a,20B-DP to plasma membranes prepared from defolliculated
oocytes of rainbow trout (Yoshikuni et al., 1993). Scatchard analysis reveals two different
binding sites: a high affinity binding site with a Kd at 18 nM and a 6max of 0.2 pmolesl mg
protein and a low affinity binding site with a Kd 01 0.5 ~M and a 6max of 1 pmolefmg
protein. Maneckjee et al. (1989) also reported 17a,20B-DP binding activity in the zona
radiata-oocyte membrane complex of rainbow trout and brook trout, Salvelinus fontinalis.
Recently, we also described a specific 17a,20B-DP receptor for 17a,20B-DP in the oocyte
cortices of the Japanese flounder, Paralichthys olibaceus (Yoshikuni et a/., unpublished). This
17a,20B-DP binding increases and reaches an equilibrium within 1 h. Scatchard analysis
reveals a single binding site with a Kd of 63 nM and a 6max of 25 fmoleslcortex. The
17a,20B-DP receptor is present in oocyte cortices from both postvitellogenic oocytes (500600 ~m in diameter) and ovulated eggs, but not in those from either mid-vitellogenic oocytes
(425-500 11m) or earlyvitellogenic oocytes 425 ~m). The binding 01 20B-S to plasma
membranes from the ovaries of spotted seatrout was also characterized (Patino and Thomas,
1990a). Scatchard analyses suggest a single class of high affinity (Kd, 1O~'oM), low.capacity
(1 0~13-1 0~12 molfg ovary) binding sites for 20-S. A specilic binding site for 20B-S exists
in plasma membranes from spotted seatrout ovaries (Palino and Thomas, 1990b). The
concentrations of 20B-S receptors in ovarian plasma membranes are three times higher in
seat rout undergoing oocyte Hormones and gametogencsis in fish 221 maturation than in
vitelJogenic females. This increase in receptor concentrations in fish collected during their
natural spawning cycle is similar to that previously observed in seatrout undergoing final
maturation following LHRH injections (Thomas and Patino, 1991). These observations
suggest that changes in the concentration of MIHreceptors in the ovaries are of physiological
importance during natural oocyte maturation. Similarly. a specific progesterone (a proposed
MIH of amphibian oocytes) receptor has been demonstrated on the surface of Xenopus
oocytes (Sadler and Maller, 1982). Taken together, these observations emphasize that the
action of maturation-inducing steroid on the oocyte is rather novel in the light of conventional
concept fhat steroids act through cytosolic or nuclear receptors. Clearly, further work is

necessary to fully characterize steroid receptors on oocyte membranes. Acquirement of

oocytes to mature in response to hormonal stimulation It has been reported that intralollicular
oocytes 01 several teleosts develop the ability to undergo GV6D in response to hormonal
stimulation immediately priorto the final oocyte maturation stage. For example, medaka
follicles acquire the ability to undergo maturation in response to gonadotropin 28 h before the
expected time of spawning (Sakai et al., 1987). In oocytes at kisu (Sillago japonica,
Kobayashi et al.. 1988), dragonet (Repomucenus beniteguri, Zhu et al.. 1989) and Atlantic
croaker (Patino and Thomas, 1990b,c), there is a stage in which they can undergo oocyte
maturation in vitro in response to gonadotropin stimulation but not to MIH. However, these
oocytes become sensitive to MIH if exposed to gonadotropin in vitro. These results suggest
that gonadotropin is responsible for the induction of maturational competence of oocytes.
Furthermore, HCG-induced maturational competence was inhibited by cycloheximide and
actinomycin 0 (Patino and Thomas, 1990c). Thomas and Patino (1991) examined the
relationship between 20B-S receptor concentrations and the development of maturational
competence using an ovarian incubation system. Treatment of spotted seat rout ovarian
follicles with gonadotropin causes a two-fold increase in 20B-S receptor concentrations and,
concomitantly, full-grown oocytes acquire the ability to mature in response to 20B-S.ln
contrast, 20B-S treatment does not induce an increase in receptor concentrations or the
development of oocyte maturational competence. Similarly, in vitro treatment of Japanese
flounder follicles with HCG also causes a three-fold increase in 17a,20B-DP receptor
concentrations. Moreover, this HCG-induced elevation in receptor concentrations is
accompanied by the appearance of maturational competence in the follicle-enclosed oocytes
(Yoshikuni etal., unpublished). Taken together, these results suggest that a gonadotropininduced increase in MIH receptor concentrations is responsible for the development of oocyte
maturational competence in seatrout and the Japanese flounder, and is not mediated by
increases in the production 01 the MIH.
Translate instead The mRNA levels of P.450scc, 38.HSD, and P-450c17 are barely detected
in the follicles during the mid-vitellogenic stage, and abundant in follicles during the
postvitellogenic stage and oocyte maturation (Takahashi et al., 1993; Sakai et al., 1992,1993).
The P-450arom RNA transcripts are present in the ovary during active vitellogenesis, but are
absent in the ovary in the stage of oocyte maturation or in the ovary containing postovulatory
follicles (Tanaka et al., 1992b). These results are consistent with the rapid decrease in
aromatase activity in the granulosa cell layers during the postovulatory period (Young et al..
1983b). It is thus concluded that the ability of the granulosa cells to produce estradiol-17B is
regulated by the amount of the RNA transcripts present (Tanaka etal., 1992b). Our
preliminary results indicatethatforskolininduced 17a,20B-DP production is accompanied by a
dramatic decrease in P-450arom mRNA levels by granulosa cells isolated trom
postvitellogenic follicles. A 2- to 3-fold increase in P-450scc and 3B-HSD mRNAs and a
slight decrease in P-450c17 mRNA are also observed during the forskolin-induced 17a,20BDP production (Tanaka and Nagahama, unpublished). Our preliminary Northern
hybridization analysis using the pig 20B-HSD cDNA as a probe has revealed that 20B-HSD
mRNA transcripts are low in granulosa cells prior to oocyte maturation, but markedly
increased during natural and gonadotropin-induced oocyte maturation. Site of MIH action
Previous in vitro studies in fish have shown that the mechanism of action involved in the
steroid-stimulation of oocyte maturation has special characteristics not typical of the classic
steroid mechanism of action (Dettlaff and Skoblina, 1969; Jalabert, 1976; DeMan no and
Goetz, 1987). We also found that 17a,20B-DP is ineffective in inducing oocyte maturation
when microinjected into fully grown immature oocytes of goldfish, but was effective when
applied externally. Taken together, these in vitro results suggest that the site of MIH action in
inducing meiotic maturation in fish oocytes is at or near the oocyte surface. More direct

evidence for the existence of MIH receptors in oocyte plasma membranes has been obtained
by binding studies using labelled MIH. We have identified and characterized specific binding
of ['H)17a,20B-DP to plasma membranes prepared from defolliculated oocytes of rainbow
trout (Yoshikuni et al., 1993). Scatchard analysis reveals two different binding sites: a high
affinity binding site with a Kd at 18 nM and a 6max of 0.2 pmolesl mg protein and a low
affinity binding site with a Kd 01 0.5 ~M and a 6max of 1 pmolefmg protein. Maneckjee et
al. (1989) also reported 17a,20B-DP binding activity in the zona radiata-oocyte membrane
complex of rainbow trout and brook trout, Salvelinus fontinalis. Recently, we also described a
specific 17a,20B-DP receptor for 17a,20B-DP in the oocyte cortices of the Japanese flounder,
Paralichthys olibaceus (Yoshikuni et a/., unpublished). This 17a,20B-DP binding increases
and reaches an equilibrium within 1 h. Scatchard analysis reveals a single binding site with a
Kd of 63 nM and a 6max of 25 fmoleslcortex. The 17a,20B-DP receptor is present in oocyte
cortices from both postvitellogenic oocytes (500-600 ~m in diameter) and ovulated eggs, but
not in those from either mid-vitellogenic oocytes (425-500 11m) or earlyvitellogenic oocytes
425 ~m). The binding 01 20B-S to plasma membranes from the ovaries of spotted seatrout
was also characterized (Patino and Thomas, 1990a). Scatchard analyses suggest a single class
of high affinity (Kd, 1O~'oM), low.capacity (1 0~13-1 0~12 molfg ovary) binding sites for
20-S. A specilic binding site for 20B-S exists in plasma membranes from spotted seatrout
ovaries (Palino and Thomas, 1990b). The concentrations of 20B-S receptors in ovarian
plasma membranes are three times higher in seat rout undergoing oocyte Hormones and
gametogencsis in fish 221 maturation than in vitelJogenic females. This increase in receptor
concentrations in fish collected during their natural spawning cycle is similar to that
previously observed in seatrout undergoing final maturation following LHRH injections
(Thomas and Patino, 1991). These observations suggest that changes in the concentration of
MIHreceptors in the ovaries are of physiological importance during natural oocyte
maturation. Similarly. a specific progesterone (a proposed MIH of amphibian oocytes)
receptor has been demonstrated on the surface of Xenopus oocytes (Sadler and Maller, 1982).
Taken together, these observations emphasize that the action of maturation-inducing steroid
on the oocyte is rather novel in the light of conventional concept fhat steroids act through
cytosolic or nuclear receptors. Clearly, further work is necessary to fully characterize steroid
receptors on oocyte membranes. Acquirement of oocytes to mature in response to hormonal
stimulation It has been reported that intralollicular oocytes 01 several teleosts develop the
ability to undergo GV6D in response to hormonal stimulation immediately priorto the final
oocyte maturation stage. For example, medaka follicles acquire the ability to undergo
maturation in response to gonadotropin 28 h before the expected time of spawning (Sakai et
al., 1987). In oocytes at kisu (Sillago japonica, Kobayashi et al.. 1988), dragonet
(Repomucenus beniteguri, Zhu et al.. 1989) and Atlantic croaker (Patino and Thomas,
1990b,c), there is a stage in which they can undergo oocyte maturation in vitro in response to
gonadotropin stimulation but not to MIH. However, these oocytes become sensitive to MIH if
exposed to gonadotropin in vitro. These results suggest that gonadotropin is responsible for
the induction of maturational competence of oocytes. Furthermore, HCG-induced
maturational competence was inhibited by cycloheximide and actinomycin 0 (Patino and
Thomas, 1990c). Thomas and Patino (1991) examined the relationship between 20B-S
receptor concentrations and the development of maturational competence using an ovarian
incubation system. Treatment of spotted seat rout ovarian follicles with gonadotropin causes a
two-fold increase in 20B-S receptor concentrations and, concomitantly, full-grown oocytes
acquire the ability to mature in response to 20B-S.ln contrast, 20B-S treatment does not
induce an increase in receptor concentrations or the development of oocyte maturational
competence. Similarly, in vitro treatment of Japanese flounder follicles with HCG also causes
a three-fold increase in 17a,20B-DP receptor concentrations. Moreover, this HCG-induced

elevation in receptor concentrations is accompanied by the appearance of maturational

competence in the follicle-enclosed oocytes (Yoshikuni etal., unpublished). Taken together,
these results suggest that a gonadotropin-induced increase in MIH receptor concentrations is
responsible for the development of oocyte maturational competence in seatrout and the
Japanese flounder, and is not mediated by increases in the production 01 the MIH.
Tingkat mRNA dari P.450scc, 38.HSD, dan P-450c17 adalah
hampir tidak terdeteksi dalam folikel selama tahap pertengahan vitellogenik,
dan melimpah di folikel selama tahap post vitellogenik dan
pematangan oosit (Takahashi et al, 1993;.. Sakai et al, 1992,1993). Transkrip RNA P450arom yang hadir dalam ovarium
selama vitellogenesis aktif, namun tidak hadir dalam ovarium di panggung
dari pematangan oosit atau di ovarium yang mengandung postovulatory
folikel (Tanaka et al., 1992b). Hasil ini konsisten dengan
penurunan cepat dalam aktivitas aromatase pada lapisan sel granulosa
selama periode postovulatory (Young et al .. 1983b). Dengan demikian
menyimpulkan bahwa kemampuan sel granulosa untuk memproduksi estradiol-17B diatur
oleh jumlah transkrip RNA hadir
(Tanaka et al., 1992b). Hasil awal kami menunjukkan bahwa forskolin diinduksi 17a,
produksi 20B-DP disertai dengan dramatis
penurunan tingkat mRNA P-450arom oleh sel granulosa terisolasi
trom folikel postvitellogenic. Peningkatan 2 sampai 3 kali lipat dalam P-450scc
dan 3B-HSD mRNA dan sedikit penurunan dalam P-450c17 mRNA yang
juga mengamati selama 17a forskolin-diinduksi, 20B-DP produksi
(Tanaka dan Nagahama, tidak dipublikasikan). awal Northern kami
analisis hibridisasi menggunakan babi 20B-HSD cDNA sebagai probe memiliki
mengungkapkan bahwa 20B-HSD mRNA transkrip yang rendah granulosa
sel sebelum pematangan oosit, namun meningkat tajam selama
alami dan gonadotropin-induced pematangan oosit.
Situs aksi MIH
Sebelumnya dalam studi vitro pada ikan telah menunjukkan bahwa mekanisme
tindakan yang terlibat dalam steroid-stimulasi pematangan oosit
memiliki karakteristik khusus yang tidak khas dari steroid klasik
mekanisme aksi (Dettlaff dan Skoblina, 1969; Jalabert, 1976;
Deman ada dan Goetz, 1987). Kami juga menemukan 17a itu, 20B-DP adalah
tidak efektif dalam mendorong pematangan oosit saat microinjected ke
dewasa oosit matang dari ikan mas, tapi efektif bila
diterapkan secara eksternal. Secara bersama-sama, ini hasil in vitro menunjukkan
bahwa situs aksi MIH dalam menginduksi pematangan meiosis pada ikan
oosit adalah pada atau dekat permukaan oosit.
lebih banyak bukti langsung untuk keberadaan reseptor MIH di
membran oosit plasma telah diperoleh oleh studi mengikat
menggunakan label MIH. Kami telah mengidentifikasi dan ditandai spesifik
pengikatan [ 'H) 17a, 20B-DP ke membran plasma dibuat dari
oosit defolliculated dari rainbow trout (Yoshikuni et al., 1993).
analisis Scatchard mengungkapkan dua situs mengikat yang berbeda: tinggi
afinitas tempat pengikatan dengan Kd pada 18 nM dan 6max 0,2 pmolesl
mg protein dan afinitas situs pengikatan rendah dengan Kd 01 0,5 ~ M dan
a 6max dari 1 protein pmolefmg. Maneckjee et al. (1989) juga
melaporkan 17a, 20B-DP mengikat aktivitas di zona radiata-oosit
kompleks membran rainbow trout dan ikan trout sungai, Salvelinus

fontinalis. Baru-baru ini, kami juga menggambarkan 17a tertentu, 20B-DP

reseptor untuk 17a, 20B-DP di korteks oosit dari Jepang
flounder, Paralichthys olibaceus (Yoshikuni et a /., tidak dipublikasikan).
17a ini, 20B-DP mengikat meningkat dan mencapai keseimbangan
dalam 1 jam. analisis Scatchard mengungkapkan situs mengikat tunggal dengan
Kd dari 63 nM dan 6max dari 25 fmoleslcortex. The 17a, 20B-DP
reseptor hadir dalam korteks oosit dari kedua postvitellogenic
oosit (500-600 ~ m dengan diameter) dan ovulasi telur, tapi tidak di
mereka baik dari pertengahan vitellogenik oosit (425-500 11m) atau oosit earlyvitellogenic
425 ~ m).
Pengikatan 01 20B-S untuk membran plasma dari ovarium
melihat Seatrout juga ditandai (Patino dan Thomas,
1990a). Scatchard analisis menunjukkan satu kelas dari afinitas tinggi
(Kd, 1O ~ 'OM), low.capacity (1 0 ~ 13-1 0 ~ 12 molfg ovarium) situs mengikat
untuk 20-S. Sebuah situs mengikat specilic untuk 20B-S ada di plasma
membran dari ovarium tutul Seatrout (Palino dan Thomas,
1990b). Konsentrasi reseptor 20B-S dalam plasma ovarium
membran tiga kali lebih tinggi di kursi kemenangan menjalani oosit
Hormon dan gametogencsis pada ikan 221
pematangan dari pada wanita vitelJogenic. Peningkatan reseptor ini
konsentrasi pada ikan yang dikumpulkan selama siklus pemijahan alami mereka
mirip dengan yang sebelumnya diamati pada Seatrout menjalani akhir
pematangan berikut suntikan LHRH (Thomas dan Patino, 1991).
pengamatan ini menunjukkan bahwa perubahan konsentrasi
MIHreceptors di ovarium fisiologis penting selama
pematangan oosit alami. Demikian pula. progesteron tertentu (a
diusulkan MIH oosit amfibi) reseptor telah
menunjukkan pada permukaan oosit Xenopus (Sadler dan
Maller, 1982). Secara bersama-sama, pengamatan ini menekankan bahwa
aksi steroid pematangan-inducing pada oosit agak
novel dalam terang konsep konvensional fhat steroid bertindak melalui
sitosol atau reseptor nuklir. Jelas, pekerjaan lebih lanjut diperlukan untuk
sepenuhnya ciri reseptor steroid pada membran oosit.
Perolehan oosit matang dalam menanggapi rangsangan hormonal
Telah dilaporkan bahwa intralollicular oosit 01 beberapa
teleosts mengembangkan kemampuan untuk menjalani GV6D dalam menanggapi
stimulasi hormonal segera priorto oosit pematangan akhir
tahap. Misalnya, folikel medaka memperoleh kemampuan untuk menjalani
pematangan dalam menanggapi gonadotropin 28 jam sebelum diharapkan
waktu pemijahan (Sakai et al., 1987). Pada oosit di Kisu (Sillago
japonica, Kobayashi et al .. 1988), dragonet (Repomucenus
beniteguri, Zhu et al .. 1989) dan croaker Atlantic (Patino dan
Thomas, 1990b, c), ada tahap di mana mereka dapat menjalani
pematangan oosit in vitro dalam menanggapi rangsangan gonadotropin
tetapi tidak untuk MIH. Namun, oosit ini menjadi sensitif terhadap MIH
jika terkena gonadotropin in vitro. Hasil ini menunjukkan bahwa
gonadotropin bertanggung jawab untuk induksi pematangan
kompetensi oosit. Selanjutnya, pematangan HCG-diinduksi
kompetensi dihambat oleh cycloheximide dan aktinomisin 0
(Patino dan Thomas, 1990c). Thomas dan Patino (1991) meneliti

hubungan antara konsentrasi reseptor 20B-S dan

pengembangan kompetensi pematangan menggunakan ovarium
sistem inkubasi. Pengobatan tutul kursi kekalahan folikel ovarium
dengan gonadotropin menyebabkan peningkatan dua kali lipat dalam 20B-S reseptor
konsentrasi dan, bersamaan, oosit penuh tumbuh memperoleh
kemampuan untuk dewasa dalam menanggapi kontras 20B-S.ln, pengobatan 20B-S
tidak menyebabkan peningkatan konsentrasi reseptor atau
pengembangan kompetensi oosit pematangan. Demikian pula, in vitro
pengobatan folikel flounder Jepang dengan HCG juga menyebabkan
peningkatan tiga kali lipat dalam 17a, konsentrasi reseptor 20B-DP.
Selain itu, ini elevasi HCG-diinduksi dalam konsentrasi reseptor
disertai dengan munculnya kompetensi kematangan di
oosit folikel-tertutup (Yoshikuni dkk., tidak dipublikasikan). diambil
bersama-sama, hasil ini menunjukkan bahwa gonadotropin-diinduksi
peningkatan konsentrasi reseptor MIH bertanggung jawab untuk
pengembangan kompetensi oosit pematangan di Seatrout dan
flounder Jepang, dan tidak dimediasi oleh kenaikan
produksi 01 MIH.
mediator tersier pematangan oosit - faktor Maturationpromoting (MPF)
Dalam studi sebelumnya, Dettlaff et al. (1977) melaporkan MPF-seperti
aktivitas di sturgeon, Acipenser stellatus. oosit. Namun. ini
Kegiatan tidak detecfed di hadapan 01 cycloheximide, sebuah
sintesis protein inhibitor. faktor sehingga pretranslational hulu
Kegiatan MPF dari benar tidak dikecualikan. Untuk menentukan apakah aktivitas MPF hadir
dalam oosit ikan matang, kita diekstraksi MPF
aktivitas dari human chorionic gonadotropin (HCG) -injected dewasa
oosit ikan mas dan melahirkan secara alami oosit ikan mas (Nagahama
dan Yamashita, 1988). Ini oosit matang hancur oleh
ultrasentrifugasi pada 100, OOOxg selama 1 jam dalam buffer yang mengandung
inhibitor fosfatase dan EGT A. Setelah sentrifugasi, lima
lapisan utama yang diperoleh, dari sentripetal ke kutub sentrifugal, adalah:
supernatan, lapisan hijau, kuning, korion, dan alveoli kortikal. Itu
Lapisan hijau diperkaya dengan organel seluler seperti
mitokondria dan retikulum endoplasma. Kegiatan MPF masing-masing
lapisan ditentukan menggunakan Xenopus oosit injeksi
pengujian kadar logam. Kegiatan MPF terlokalisasi dalam supernatan dan hijau
lapisan; injeksi dari lapisan hijau disebabkan lisis sel. MPF
Kegiatan itu juga diambil dari oosit matang in vitro oleh
17a, 20 ~ -dP, tetapi bukan dari oosit dewasa atau oosit diaktifkan.
Kegiatan MPF diekstrak dari ikan juga efektif bila disuntikkan
menjadi oosit ikan dewasa dalam kondisi protein terhambat
perpaduan. oosit yang disuntikkan matang lebih cepat dari oosit
diinduksi untuk dewasa dengan inkubasi dengan 17a, 20B-DP: GVBD50 adalah
sekitar 2,5 jam dalam pematangan MPF-diinduksi, tapi sekitar 6 jam ketika
diinduksi oleh 17a, 20B-DP. GVBD biasanya terjadi di pusat
oosit MPF-disuntikkan, karena pergerakan GV ke
hewan kutub tidak terjadi. migrasi GV selalu terjadi di
oosit matang secara alami, in vivo dengan HCG, atau in vitro oleh 17 (, (, 20BDP. Dengan
demikian, aktivitas MPF pasca-translasi hadir dalam matang
mas dan ikan mas oosit.

MPF dari oosit matang pada ikan mas diinduksi GVBD saat
disuntikkan ke oosit Xenopus dan sebaliknya. Hal ini juga menunjukkan
sebelumnya bahwa ikan mas MPF diinduksi pematangan dewasa
oosit dari laut, Asterina pectinifera (Kishimoto, 1988).
Temuan ini konsisten dengan gagasan bahwa MPF mirip
antara vertebrata dan invertebrata (Kishimoto, 1988).
pemurnian MPF dan karakterisasi
Meskipun upaya di beberapa laboratorium, kemajuan dalam MPF
pemurnian telah sangat lambat sampai sangat baru-baru. terobosan
dalam pemurnian dicapai oleh Lohka et al. (1988), yang dimurnikan
XenopusMPF sekitar 3.000 kali lipat; fraksi MPF ini terkandung
dua protein dominan, dengan massa molekul relatif 34 dan
45 kDa, masing-masing. Mantan protein telah diidentifikasi sebagai
Xenopus homolog dari protein fisi ragi yang dikode oleh gen
(Cdc2 +), yang diperlukan forthe G2 / M transisi dalam siklus sel mitosis
(Gautier et al., 1988). Produk dari gen cdc2 + adalah 34 kDa
serine / treonin protein kinase, p34cdc2 ditunjuk orcdc2 kinase.
Komponen lain dari Xenopus MPF, protein 45 kDa, memiliki
diidentifikasi sebagai Xenopus B-tipe cyclin (Gautier et al., 1990).
Mirip MPF juga telah dimurnikan di laut (Labbe et al.,
1989a, b).
Kami baru-baru ini dimurnikan dan ditandai MPF (Yamashita et al.,
1992a) dan histon H1 kinase (Yamashita et al., 1992b) dari
1 OO, OOOxg supernatan dari hancur, natu, sekutu ovulasi, yang tidak dibuahi
Telur ikan mas menggunakan empat langkah kromatografi termasuk Q_
Sepharose Fast-Flow, P13 ' "" - afinitas Sepharose, Mono S, dan
Superose 12. aktivitas MPF dari berbagai fraksi selama pemurnian
ditentukan oleh Xenopus oosit uji injeksi mikro.
Analisis dengan SDS-gel poliakrilamid (PAGE) menunjukkan bahwa
kebanyakan fraksi aktif setelah Mono S berisi empat protein, dengan
massa molekul 33, 34, 46, dan 48 kDa. Ketika aktif
Fraksi setelah Mono S yang diterapkan untuk Superose 12, MPF dielusi sebagai
puncak tunggal dengan berat molekul yang jelas dari sekitar 100 kDa.
SDS-PAGE dari fraksi aktif setelah Superose 12 mengungkapkan
empat protein yang sama seperti yang diperoleh setelah Mono S, menunjukkan bahwa
protein ini membentuk kompleks (es) dari sekitar 100 kDa di asli mereka
bentuk. Persiapan akhir dimurnikan lebih dari 1, ODD kali lipat dengan
pemulihan sekitar 1%.
Disarankan dari perbandingan komponen
dimurnikan ikan mas MPF dengan orang-orang dari Xenopus MPF bahwa di antara empat
protein yang ditemukan dalam ikan mas MPF, protein the34-kDa, dan protein 46- dan 48-kDa
sesuai dengan cdc2 kinase dan cyclin B dari Xenopus
MPF, masing-masing. Untuk sepenuhnya ciri empat protein ini, kita
klon cDNA terisolasi encoding homolognya ikan MPF- terkait
protein, termasuk cdc2 kinase (Kajiura et al., 1993), Cdk2 kinase
(Hirai et al., 1992b), cyelin A (Katsu et al., Tidak dipublikasikan), dan cyclin
B (Hirai et al., 1992a) dari perpustakaan cDNA oosit ikan mas.
Monoclonalantibodies againstthe C-terminal urutan ikan mas
cdc2 kinase (Kajiura et al., 1993), hamparan unik 16 amino
asam (EGVPSTAIREISLLKE, disebut urutan PSTAIR) yang

sempurna dilestarikan di cdc2 kinase dan homolognya yang dari ragi

manusia (Yamashita et al., 1991), urutan C-terminal
ikan mas Cdk2 kinase (Hirai et al., 1992b), dan E.coli-diproduksi fulllength ikan mas cyelin
A (Katsu et al., tidak dipublikasikan) dan B (Hirai et
al., 1992a) dibesarkan.
Antibodi monoklonal yang digunakan untuk mengkarakterisasi
ikan mas murni MPFwhich mengandung 33-, 34-, 46- dan 48-kDaproteins.
Kedua protein 33- dan 34-kDa diakui oleh antibodi antiPSTAIR, menunjukkan bahwa mereka
adalah cyclin-dependent
kinase. Antibodi anti-cdc2 C-terminal bereaksi dengan 34-kDa,
tapi bukan protein 33-kDa. Yang terakhir ini diakui dengan anticdk2 C-terminal antibodi
(Hirai et al., 1992b). The 46- dan 48-kDa
protein diakui oleh panjang anti-penuh cyclin B antibodi, tetapi
tidak oleh anti-cyclin A antibodi (Yamashita et al, 1992a;. Katsu et
al., tidak dipublikasikan). Hal ini disimpulkan dari temuan ini bahwa ikan mas MPF
adalah kompleks cdc2 kinase (34-kDa) dan cyclin B (46- dan 48-kDa).
aktivasi MPF
Telah dilaporkan bahwa pada oosit matang dari Xenopus dan
bintang laut, cdc2 kinase membentuk kompleks dengan cyclin Bas pra-MPF. Sebaliknya,
oosit ikan mas dewasa mengandung aktif 35.kDa
cdc2 kinase tapi tidak ada cyclin B, dan oosit matang mengandung kedua
35-kDa tidak aktif dan 34-kDa kinase cdc2 aktif dan cyclin B
(Hirai et a /, 1 992a;.. Katsu et al, 1993). Munculnya 34-kDa aktif cdc2 kinase bertepatan
dengan munculnya cyclin 8
hanya betore GVBD. Anti-cyclin B immunobiots dari p13 ' ""
endapan dan anti-cdc2 immunoblots kinase anti-cyclin B
immunoprecipitates menunjukkan bahwa pengikatan cdc2 kinase dan
cyclin B bertepatan dengan munculnya cyclin B dan 34-kDa
aktif cdc2 kinase. The cyclin B yang muncul selama oosit
pematangan diberi label dengan 35S-metionin (Hirai et a /., 1992a),
mendemonstrasikan de novo sintesis selama pematangan oosit. pada
ather tangan, anti-cyclin immunoprecipitates B dari oosit matang
ekstrak kadang-kadang mengandung 35.kDa aktif cdc2 kinase (Hirai
et al., 1992a), dan 35-kDa cdc2 kinase, serta 34-kDa
bentuk, dapat mengikat cyclin B dalam sistem sel-bebas (Yamashita et a /.,
tidak dipublikasikan). Oleh karena itu, kemungkinan besar bahwa 35-kDa tidak aktif
cdc2 kinase mengikat de novo disintesis cyclin B pada awalnya, maka adalah
cepat diubah menjadi bentuk aktif 34-kDa (Gambar. 4).
Hasil sebelumnya menunjukkan bahwa penampilan ot cyclin B
diperlukan dan cukup untuk menginduksi pematangan oosit in
ikan mas. Untuk mengkonfirmasi bahwa penampilan cyclin B cukup untuk
merangsang pematangan oosit, E. coli diproduksi panjang fult ikan mas
cyclin B protein disuntikkan ke oosit matang. bahkan di bawah
kondisi sintesis protein menghambat, disuntikkan cyclin B menginduksi
pematangan oosit dalam 1 jam setelah injeksi dalam tergantung dosis
cara. Pengenalan ikan mas cyclin B ke ikan mas dewasa
ekstrak oosit juga disebabkan cdc2 aktivasi kinase, bersamaan
dengan pergeseran massa molekul dari cdc2 kinase dari 35-ke 34-kDa, seperti yang
ditemukan pada oosit matang dengan 17a, 20B-DP.
Phosphoamino analisis asam menunjukkan bahwa treonin (THR)

fosforilasi dari 34-kDa cdc2 kinase dan serin

fosforilasi cyclin B terkait dengan aktivasi. Itu
fosforilasi yang sama ditemukan pada oosit matang oleh 17a, 20BDP. Cyclin B-diinduksi
aktivasi cdc2 kinase tidak diamati ketika
treonin fosforilasi cdc2 kinase dan serin
fosforilasi ofcyclin B dihambat oleh inhibitor protein kinase,
meskipun pengikatan 35-kDa cdc2 kinase cyclin B terjadi
bahkan di hadapan inhibitor. Sebaliknya, cdc2 kinase adalah
diaktifkan dengan siklin mutan yang tidak menjalani serin fosforilasi
selama aktivasi. Situs otthreonine fosforilasi pada cdc2
kinase dipetakan ke residu Thr161. Temuan ini menunjukkan bahwa
yang Thrl61 fosforilasi cdc2 kinase, tapi tidak serin
fosforilasi cyclin B, diperlukan untuk cdc2 kinase (MPF)
aktivasi pada oosit ikan mas.
Baru-baru ini kami telah mengisolasi klon cDNA encoding ikan mas
homolog
p40M015, subunit katalitik dari protein kinase yang
telah ditunjukkan untuk mengaktifkan cdc2 kinase melalui fosforilasi
ofThrl6t, dari cDNA library ikan mas oosit (Onoe et al .. 1993).
Northern dan Western blot mengungkapkan bahwa kedua p40M015
mRNA dan protein yang sudah ada dalam ikan mas dewasa
oosit dan tidak muncul untuk menunjukkan perubahan terukur
selama hormon yang diinduksi pematangan (Onoe et a / .. 1993; Onoe,
tidak dipublikasikan). Dengan demikian, disarankan agar p40M015 mungkin itu sendiri
diatur oleh asosiasi subunit dan / atau fosforilasi protein.
Preferensi substrat
p40M015 juga perlu ditentukan.
Pada oosit Xenopus, defosforilasi treonin (ThrI4)
dan tirosin (Tyr15) diperlukan untuk aktivasi cdc2 kinase (Malter,
1991). Namun, diragukan fhat tirosin (Tyr15)
defosforilasi cdc2 kinase merupakan prasyarat untuk aktivasi
selama ikan mas pematangan oosit, karena aktivasi tidak dihambat oleh vanadat, inhibitor
protein fosfatase umum
digunakan untuk menghambat aktivitas cdc25 yang dephosphorylates tirosin
(Tyrt 5) ofcdc2 kinase, sehingga menghambat aktivasi. Selanjutnya,
antibodi anti-phosphotyrosine tidak bereaksi silang dengan 35-kDa cdc2 kinase, serta bentuk
34-kDa, yang mengikat cyclin
B. Juga, sebuah antibodi yang diakui bentuk dephosphorylated
dari Tyr15 bereaksi silang dengan kedua 34- dan 35-kDa cdc2 kinase.
Oleh karena itu, 35-kDa cdc2 kinase ditemukan di matang goidfish
oosit mungkin telah de terfosforilasi pada Thr14 dan Tyr15
dan fosforilasi treonin (ThrI61) mungkin hanya diperlukan
untuk aktivasi. Secara bersama-sama, itu sangat disarankan
17a, 20B-DP menginduksi oosit untuk mensintesis Cyc / di B, yang pada gilirannya
mengaktifkan sudah ada 35-kDa cdc2 kinase melalui treonin nya
(Thr161) fosforilasi, memproduksi 34-kDa cdc2 aktif kinase.
Mekanisme ini aktivasi MPF pada ikan ternyata berbeda dari
mereka di Xenopus dan bintang laut, di mana cyclin B hadir dalam
oosit matang dan membentuk kompleks dengan cdc2 kinase (preMPF).
Struktur teleost testis

Testis dari teleosts, seperti yang ot vertebrata lainnya, terdiri

dari (tubular) kompartemen interstitial dan lobular. interstitium
antara lobulus terdiri dari sel-sel interstitial (sel Leydig), tibroblasts,
dan pembuluh darah dan limfe. Berbagai enzim yang terlibat dalam steroid
sintesis hormon telah dibuktikan oleh histokimia di
sel-sel Leydig dari sejumlah teleosts. Sel-sel ini memiliki
ultrastructural fitur yang biasa ditemukan di sel steroid yang memproduksi
seperti agranular retikulum endoplasma dan mitokondria dengan
tubular krista (Nagahama, 1983). The lobular (tubular) komponen
dari testis teieost mengandung dua jenis sel: sel germinal dan berbeda
sel somatik liningthe pinggiran lobulus, sel Sertoli. Ini masih
sel whetherSertoli pasti dapat menghasilkan steroid. ultrastructural
Bukti umumnya tidak menunjukkan steroid tor kapasitas sintetis
celis ini. Namun, spesies tertentu tampaknya memiliki beberapa
fitur histokimia dan ultrastructural sesuai untuk
steroidogenesis (Nagahama, 1983).
produksi steroid selama spermatogenesis
Dalam sejumlah spesies teleost, seperti dalam spesies teleost lainnya,
kadar plasma testosteron dan 11-ketotestosterone tinggi
selama tahap spermatogenesis dan cepat menurun
Aher timbulnya spermiation (Fostier ef al, 1983;. Ueda ef al ..
1983a), Dalam studi Inkubasi vifro pada 11-ketotestosterone
produksi dengan fragmen testis pada tahap perkembangan yang berbeda
telah mengungkapkan bahwa kapasitas fragmen untuk menghasilkan ini
steroid dalam menanggapi gonadotropin tinggi selama tahap-tahap selanjutnya
spermatogenesis dan cepat menurun setelah onset
spermiation (Sakai ef ai "1989). Hasil ini menunjukkan bahwa
androgen yang terlibat dalam spermatogenesis di salmon Amago.
Peraturan hormonal spermatogenesis
Spermatogenesis pada ikan teleost berlangsung dalam testis
kista dibentuk oleh sel-sel Ser10li. Dalam setiap kista pengembangan sel germinal
terjadi serentak (Grier, 1981; Billard ef al .. 1982; Nagahama,
1983; Callard. 1991) .Dalam belut Jepang laki-laki dibudidayakan. anguilla
japonica. satu-satunya sel germinal hadir dalam testis adalah tipe A dan
Jenis awal B spermatogonium yang spermatogonium primitif yang
belum mulai berkembang biak. Dengan demikian, studi menggunakan hewan-hewan ini
dapat memberikan keuntungan besar atas penggunaan yang sangat
sistem spermatogenik kompleks dalam vertebrata yang lebih tinggi. Tunggal
injeksi HCG untuk laki-laki ini disebabkan spermatogenesis dalam
18days (Miura ef al., 1991a). Dalam waktu 1 hari aherthe HCG injection.
sel Leydig dan sel-sel Ser10ii yang nyata diaktifkan. Kemudian
(3 hari setelah injeksi HCG). spermatogonium mulai proliferasi.
dan tipe B spermatogonium muncul. Berikut kira-kira 10
mitosis. spermatogonium mulai meiosis. spermatosit
dengan kompleks synaptonemal pertama kali muncul di testis 12 hari setelah
injeksi. Spermatid dan spermatozoa yang diamati Aher 18
hari.
Sebuah serum bebas. sistem kultur organ rumus kimia untuk belut
testis telah dikembangkan, dan digunakan untuk mengetahui pengaruh

HCG dan berbagai hormon steroid pada induksi

spermatogenesis in vitro. Budaya fragmen testis media
mengandung HCG diinduksi seluruh proses spermatogenesis
dari spermatogonium premitotic ke spermatozoa dalam waktu 24 hari
(Miura Al_ ef. 1991c). spermatogenesis HCG-induced ini
disertai dengan aktivasi ditandai sel Ser10li dan Leydig
sel, terjadi priorto awal proliferasi spermatogonium.
aktivasi sel Leydig ditandai dengan fitur ultra
produksi steroid aktif. Fur1hermore. penambahan HCG untuk
media kultur yang mengandung fragmen testis diinduksi ditandai,
peningkatan pesat dalam produksi 11-ketotestosterone. hasil ini
menunjukkan bahwa gonadotropin memicu spermatogenesis di Jepang
belut. dan selanjutnya menunjukkan bahwa efek ini dari gonadotropin dimediasi
melalui tindakan sel somatik testis, mungkin melalui
produksi 11-ketotestosterone oleh sel Leydig. saran ini
dikonfirmasi oleh eksperimen budaya organ menunjukkan bahwa
11-ketotestosterone dapat menginduksi semua tahapan spermatogenesis
termasuk spermatogonium proliferasi, pembelahan meiosis dan
spermiogenesis di vifrowithin 21 hari (Miura ef al., 1991d) (Gambar. 5).
11-ketotestosterone juga menyebabkan aktivasi sitologi ditandai
sel Ser10li, tetapi tidak sel Leydig. menunjukkan bahwa aksi 11-ketotestosterone pada
spermatogenesis dimediasi melalui
Tindakan sel Ser10li. Ini adalah sistem hewan pertama di mana
Seluruh proses spermatogenesis telah diinduksi oleh hormon
manipulasi in vitro.
Aktivin B: mediator potensi gonadotropin-diinduksi
spermatogenesis
Seperti dijelaskan di atas, perubahan morfologi sel germinal.
sel Leydig. dan sel Ser10li yang pertama terlihat satu hari Aher HCG
pengobatan. Kami telah menggunakan hibridisasi subtraktif untuk mengidentifikasi
gen yang diekspresikan secara berbeda di testis belut di 24 jam pertama
setelah pengobatan HCG in vivo, yang akhirnya menyebabkan
spermatogenesis. Satu up-diatur cDNA diisolasi dari
perpustakaan cDNA subtraktif berasal dari mRNA yang diekstrak dari
mengontrol testis dan testis satu hari setelah suntikan tunggal HCG.
Dari urutan asam amino dideduksi nya. klon ini diidentifikasi
sebagai coding untuk subunit aktivin B. Nukleotida urutan belut
aktivin B cDNA adalah 3_3 kb. Sebuah kodon metionin pada nukleotida 1572
memulai reading frame panjang terbuka menentukan protein dari 395
asam amino. Menggunakan analisis blot Utara dan hibridisasi in situ
teknik, kami menguji perubahan berurutan di transkrip
testis aktivin B selama spermatogenesis HCG-diinduksi. Tidak
transkrip untuk aktivin B yang ditemukan di testis sebelum injeksi HCG.
Sebaliknya. 3.3 transkrip kb mRNA untuk aktivin B yang menonjol
di testis satu hari setelah injeksi.
Konsentrasi transkrip mulai berkurang tiga hari setelah
injeksi. diikuti oleh penurunan tajam fur1her oleh sembilan hari. Itu
aktivin B mRNA ekspresi HCG tergantung pada testis dikonfirmasi oleh hibridisasi in situ
menggunakan RNA digoksigenin-Iabeled
menyelidiki; sinyal dibatasi untuk sel Serfoli di testis diobati dengan

HCG untuk satu fo tiga hari.

Diambil bersama-sama. tindings ini menunjukkan urutan berikut
ef induksi hormonal spermatogenesis pada belut.
Gonadotropin merangsang sel Leydig untuk menghasilkan 11-ketotestosterone. yang, pada
gilirannya, mengaktifkan sel-sel Sertoli untuk
menghasilkan aktivin B. Aktivin B kemudian bertindak pada spermatogonia untuk
menginduksi
mitosis yang mengarah ke pembentukan spermatosit.
produksi steroid selama pematangan testis akhir
17a, 20B-DP telah dilaporkan tinggi dalam plasma atau
serum beberapa spesies ids salmon selama spermiation (Scott
dan Baynes, 1982; Ueda dkk., 1983a, b, 1984). Selain itu,
kapasitas fragmen testis untuk menghasilkan 17a, 20B-DP rendah
selama spermatogenesis dan meningkat tajam pada saat
spermiation (Ueda et ai, 1983b; Sakai et
Al"
1989). Dengan demikian, berbeda
pergeseran jalur steroidogenik dari androgen ke 17a, 20B-DP
tampaknya terjadi di testis dari Amago salmon sekitar onset
dari spermiation (Sakai et al., tidak dipublikasikan). Hasil ini menunjukkan
bahwa 17a, 20B-DP berperan dalam proses testis akhir atau
pematangan sperma dalam beberapa teleosts.
Menggunakan tiga persiapan testis yang berbeda (testis utuh
fragmen, fragmen testis sperma bebas dan sperma
persiapan), kami meneliti peran somatik testis dan
unsur sel benih dalam produksi testis gonadotropin-induced
dari 17a, 20B-DP (Ueda et al., 1984). fragmenfs testis utuh
menghasilkan sejumlah besar 17a, 20B-DP dalam menanggapi gonadotropin
atau 17a-hidroksiprogesteron. Gonadotropin tidak merangsang
17a, 20B-DP produksi oleh salah satu fragmen testis sperma bebas
atau persiapan sperma, tapi nyata dirangsang 17ahydroxyprogesterone produksi oleh
fragmenfs testis sperma bebas.
Baik fragmen testis sperma bebas atau persiapan sperma
saja yang mampu menghasilkan 17a, 20B-DP dalam menanggapi
gonadotropin. 17a-Hidroksiprogesteron nyata dirangsang
17a, 20B-DP produksi persiapan sperma, buf bukan dengan persiapan testis spermIree.
Akhirnya, 17a, 20B-DP diidentifikasi sebagai
satu-satunya metabolit utama saat persiapan sperma diinkubasi
dengan [ "C] 17a-hidroksiprogesteron.
Hasil ini menunjukkan bahwa lokasi 17a, produksi 20B-DP adalah
sperma, tetapi produksinya tergantung pada penyediaan prekursor
steroid (mungkin 17a-hidroksiprogesteron) yang diproduksi oleh
sel somatik testis di bawah pengaruh gonadotropin. Itu
Hasil penelitian juga menunjukkan bahwa distribusi 20B-HSD di testis dari
spermiating rainbow trout terbatas hanya untuk sperma. Baru-baru ini,
Asahina et al. (1990) melaporkan bahwa terisolasi sperma dari fhe umum
ikan mas mengandung 20a-HSD. Sebaliknya, Loir (1988) melaporkan bahwa di
spermiating pelangi trout berbagai persiapan sel testis
sebagian besar tanpa sperma mensekresikan 17a, 20B-DP terlepas dari
gonadotropin stimulasi.

Spermiation
Meskipun spermatozoa ikan di testis sudah selesai
dua divisi meiosis, mereka mungkin tidak subur. Sebagai contoh, salmonid
spermatozoa di testis yang imotil, dan memperoleh motilitas mereka
selama perjalanan melalui saluran sperma (Morisawa dan Morisawa,
1986). Selanjutnya, spermiation, yang merupakan prasyarat untuk sukses
fertilisasi, umumnya terjadi pada teleosts segera sebelum atau
selama pemijahan hasil period.The dijelaskan di atas menunjukkan kemungkinan keterlibatan
dari 17a, 20B-DP dalam proses, dari spermiation. Ini sangat
didukung oleh penelitian kami menunjukkan bahwa suntikan tunggal
gonadotropin untuk non-spermiating Amago salmon diinduksi dewasa sebelum waktunya
spermiation 1-2 bulan sebelum periode spermiation normal,
bersamaan-dengan peningkatan yang ditandai dalam kadar plasma dari 17c..t, 20BDP.
Demikian pula, dua suntikan berturut 17Cl, 20B-DP disebabkan
dewasa sebelum waktunya spermiation, tapi respon terhadap 17a, 20B-DP adalah dari
skala yang lebih kecil daripada gonadotropin. testosteron dan tidak pula
ll-ketotestosterone efektif (Ueda et al .. 1985). dianggap
togefher, hasil ini memberikan bukti yang menunjukkan 17a itu, 20BDP adalah mediator
steroid testis dari gonadotropin-diinduksi
spermiation di id salmon. Saran serupa juga telah
dibuat untuk ikan mas (Kobayashi et al., 1986).
sperma motilitas
Dalam ikan salmonid seperti masu salmon, Oncorhynchus masou,
sperma di testis dan saluran sperma tidak motil. Jika saluran sperma
sperma diencerkan dengan air segar, maka untuk pertama kalinya, mereka mendapatkan
motilitas. Jika testis sperma diencerkan dengan air segar, namun, mereka
tidak akan menjadi motil. Dengan demikian, dua proses yang terpisah yang terlibat
dalam induksi motilitas sperma pada id salmon. Salah satunya adalah akuisisi
kemampuan motil ketika bergeser dari testis ke saluran sperma, dan
lainnya adalah inisiasi motilitas bila diencerkan dengan air segar. Di awal musim kawin,
namun, sperma dari saluran sperma tidak
mendapatkan motilitas bahkan ketika mereka diencerkan dengan air tawar. Ini
karakteristik, yaitu periode di mana sperma menjadi
motil, membuat masu salmon sistem yang baik untuk mempelajari
mekanisme endokrinologis terlibat dalam akuisisi sperma
motilitas.
Efek dari dua suntikan intramuskular setiap hari berturut-turut
tiga hormon steroid pada perolehan motilitas sperma di masu
salmon selama musim kawin awal diperiksa (Miura et
al., 1991 b). Suntikan 17a, 20B-DP signifikan mengangkat
persentase sperma motil dan durasi motilitas sperma. Di
Sebaliknya, dua steroid lainnya menunjukkan tidak berpengaruh signifikan terhadap
motilitas sperma. efek stimulasi yang sama 17a, 20B-DP pada sperma
motilitas yang diamati pada belut Jepang (Miura ef al., 1991 e).
Hasil suggestthat 17a, 20 B-DP terlibat dalam akuisisi
motilitas sperma di masu salmon dan belut.
Wethen meneliti efek dari 17a, 20B-DP pada pengembangan
motilitas sperma in vitro. Dalam hal ini, saluran sperma imotil
spermatozoa tidak mengembangkan motilitas ketika mereka diinkubasi di
plasma mani buatan pada pH 7,4 yang mengandung berbagai dosis

17a, 20B-DP, menunjukkan 17a itu, 20B-DP tidak memiliki tindakan langsung pada
pengembangan motilitas sperma. Percobaan berikutnya adalah
dirancang untuk menentukan dampak dari suntikan hormon pada pH
plasma mani di saluran sperma, karena kami menemukan bahwa pH
plasma mani dari laki-laki masu salmon selama pembibitan awal
musim, ketika spermatozoa dalam saluran sperma masih imotil,
secara signifikan lebih rendah (pH 7,4-7,5) dibandingkan dengan saluran sperma
laki-laki selama musim kawin aktif (pH 8,5). Kedua SGA dan
17a, 20B-DP signifikan meningkatkan pH dari saluran sperma dari
7,4-8,0. Sebaliknya, suntikan ini tidak meningkatkan pH
testis. Baik 11-ketotestosterone atau suntikan testosteron
yang efektif dalam meningkatkan pH dari testis atau sperma saluran.
Secara kolektif, hasil ini menunjukkan bahwa aksi 17a, 20B-DP
pada akuisisi motilitas sperma dimediasi melalui peningkatan
pH dari saluran sperma.
Pada percobaan berikutnya. pengaruh pH pada akuisisi
motilitas sperma diselidiki. Ketika imotil spermatozoa
dikumpulkan dari testis diinkubasi dalam plasma mani buatan
dari berbagai pH, spermatozoa tersebut diperoleh kapasitas untuk motilitas
dalam plasma mani buatan pH lebih tinggi dari 7,8. Selanjutnya,
spermatozoa diinkubasi di kisaran pH 8,0-9,0, yang sama
pH kisaran af yang akuisisi motilitas sperma terjadi, memiliki
signifikan peningkatan kadar cAMP. Imotil testis spermatozoa
juga diperoleh motilitas ketika diinkubasi dengan dbcAMP, tapi tidak dengan
dbcGMP (Miura ef al., tidak dipublikasikan).
Secara bersama-sama, temuan yang dijelaskan di atas membawa kita untuk menyimpulkan
Berikut urutan untuk akuisisi motilitas sperma di masu
ikan salmon; gonadotropin merangsang testis untuk menginduksi produksi
dari 17a, 20B-DP, yang bertindak untuk meningkatkan pH saluran sperma, ini pada gilirannya
meningkatkan cAMP dalam sperma yang memungkinkan akuisisi motilitas sperma
(Gambar. 6).
Kesimpulan
Artikel ini menyajikan gambaran saat ini regulasi hormonal
gametogenesis pada teleosts. mediator steroid pertumbuhan oosit,
pematangan oosit, spermatogenesis, dan pematangan sperma memiliki
telah diidentifikasi dalam beberapa spesies teleost, khususnya di salmonids.
Dalam kedua perempuan dan laki-laki, pergeseran steroidogenik yang terjadi
segera sebelum oosit dan pematangan sperma tampaknya
langkah prasyarat untuk pertumbuhan sel-sel germinal untuk memasuki tahap akhir
pematangan. switch ini membutuhkan kompleks dan terintegrasi
jaringan regulasi gen yang melibatkan sel-kekhususan, hormonal
regulasi, dan pola perkembangan. pusat upaya kami saat ini
pada kloning dan sekuensing gen yang mengkode beberapa
enzim steroidogenik bertanggung jawab untuk estradiol-17B, 11-ketotestosterone dan 17a,
20B-DP biosintesis. Kami kemudian akan
menyelidiki bagaimana gonadotropin dan faktor lainnya bertindak atas gonad
sel somatik untuk menghidupkan dan mematikan ekspresi spesifik ini
gen pada waktu tertentu selama berbagai tahap gametogenesis.
mediator non-steroid lainnya yang mengatur gametogenesis ikan
juga telah ditentukan. Ini termasuk MPF (mediator

17a, aksi 2013-DP pada pematangan oosit) dan aktivin B (mediator

dari 11-ketotestosterone tindakan pada spermatogenesis). temuan ini
pada teleosts mungkin salah satu contoh terbaik didokumentasikan dari
peran hormon steroid dalam regulasi gametogenesis di
vertebrata, dan tentunya akan memberikan dasar untuk studi di
tingkat molekul regulasi hormonal pembangunan sel germinal
dan pematangan.