PEMBAHASAN

Hasil primer-BLAST menunjukkan bahwa, selain untuk mendominasi alel varian,

pasangan primer ini mampu memperkuat suatu luas jumlah varian alel yang umum
ditemukan di antara anggota
dari Enterobacteriaceae.
Dalam penelitian ini, two multiplex real-time PCR untuk mendeteksi cepat gen yang
mengkode berbagai -laktamase, termasuk TEM dan SHV -laktamase, ESBL (CTXM-kelompok 1 dan 2), AmpC -laktamase
(CMY, ACC) dan carbapenemases (Oxa-48, VIM, NDM, IMP, KPC). Alat tes yang
dikembangkan dalam penelitian ini menunjukkan kemampuan mendeteksi semua
penentu genetik yang telah diidentifikasi sebelumnya , untuk isolat menggunakan
metode molekuler lain, seperti PCR konvensional dan -laktamase gen (blaCTX-Mlike, blaTEM-like, blaSHV-like dan blaCMY-like) yang sebelumnya tidak diuji
identifikasi dan deteksi gen -laktamase yang berbeda secara bersamaan dapat
dilakukan dalam waktu kurang dari 2 jam. Keragaman varian alel dari setiap target
gen -laktamase penelitian ini tinggi, tetapi ada varian alel beberapa yang lebih
sering ditemukan pada bakteri Gram-negatif, seperti KPC-2, KPC-3, NDM-1, CTX-M15, CMY-2, VIM-1, VIM-2, IMP-1, IMP-2, OXA- 48, SHV-12, TEM-1, dan ACC-1. Semua
varian alel dapat dideteksi menggunakan alat tes ini. Namun, secara sporadis
terjadi varian, seperti CTX-M-8, tidak bisa diperkuat oleh primer digunakan dalam
penelitian ini karena perbedaan dalam urutan gen dibandingkan dengan gen
blaCTX-M lainnya sebagai hasil dari asal yang berbeda. Demikian pula, Oxa-1, Oxa-2
dan Oxa-9 enzim, yang memiliki urutan asam amino yang sangat berbeda
dibandingkan dengan Oxa-48 carbapenemase, tidak terdeteksi menggunakan
primer Oxa-48-seperti dalam penelitian ini. Oxa-1, Oxa-2 dan Oxa-9 adalah enzim
yang berspektrum luas di Enterobacteriaceae tetapi hanya memiliki kontribusi kecil
untuk fenotip resistensi -laktam karena kebanyakan terjadi dalam kombinasi
dengan -laktamase lainnya, seperti CTX-MTYPE ESBL atau carbapenemases (NDM,
Oxa-48, VIM, KPC). Keterbatasan utama dari tes adalah bahwa enzim CTX-M-9
kelompok (CTX-M-9, CTX-M14, CTX-M-16, CTX-M-27) tidak bisa terdeteksi, yang lain umum, kelompok enzim

dalam keluarga CTX-M.

Kecepatan yang dihasilkan berupa puncak lelehan yang sangat dekat satu sama lain
(blaIMP-seperti - Tm 80,1 C, blaOXA-48-seperti Tm 81,6 C, blaVIM-seperti - Tm
90,3 C dan blaKPC-seperti - Tm 91,6 C) yang akan sulit dideteksi karena
rendahnya sensitivitas instrumen real-time PCR. Selain itu, produk PCR yang
dihasilkan dalam uji multipleks yang lebih besar dari 300 bp, yang tidak dianggap
lebih untuk tes real-time PCR berdasarkan (mis blaKPC - 785 bp, blaGES - 594 bp
dan blaVIM - 382 bp). Pengujian juga tidak memiliki sebuah IAC, yang merupakan
komponen penting dari semua tes diagnostik, tes ini tidak hanya dihasilkan
tumpang tindih puncak (IMP-1 dan IMP-2, GES dan VIM-2, Oxa-23-seperti dan Oxa48seperti, VIM-1 dan NDM), yang hampir tidak dapat dipisahkan jika strain yang diuji
untuk memiliki kedua gen. Kelemahan lain dari pengujian adalah bahwa panel 2 dari
uji kekurangan suatu IAC. Selanjutnya, uji saat ini tidak memerlukan penggunaan
probe neon dual-label atau high end real-time instrumen PCR, seperti ABI 7500,
CFX96TM, atau LightCycler 480 yang diperlukan oleh kit komersial. Sebagai
gantinya,
tes ini memiliki persyaratan sederhana oligonukleotida, realtime PCR Master mix
dengan resolusi tinggi mencair pewarna dan dasar real-time instrumen PCR.
Kesimpulannya, dua real-timemelt tes kurva PCR multipleks dikembangkan dalam
penelitian ini, dapat digunakan untuk deteksi simultan dari sepuluh gen laktamase umum dan global tersebar di bakteri Gram-negatif yang memberikan
resistensi terhadap berbagai sefalosporin dan carbapenems.