c
 

Debido a su amplia distribución en la naturaleza, las Pseudomonadaceae fueron observadas en

los inicios históricos de la microbiología. El nombre genérico c
 creado para estos
organismos estaba definida en términos relativamente vagos en 1894, como el género de
bacteria gram negativa, bacilos con flagelo polar. Poco después, un gran número de especies
eran asignadas al género. Las Pseudomonadaceae eran aisladas de un variado número de
nichos ecológicos de modo que un grandísimo número de especies recibían el nombre del
género. Nuevas metodologías y la aparición de abordajes basados en los estudios de
macromoléculas conservadas entre diversos organismos, han reclasificado a muchas especies.

Pseudomonas es un género de bacilos rectos o ligeramente curvados, Gram negativos, oxidasa

positivo, aeróbicos estrictos aunque en algunos casos pueden utilizar el nitrato como aceptor
de electrones. La Pseudomonas aeruginosa ha estado aumentando como un reconocido
patógeno oportunista emergente en la relevancia clínica. Varios estudios epidemiológicos
diferentes indican además que la resistencia a antibióticos ha venido incrementando entre
muestras clínicas.

Los miembros de este género generalmente son móviles gracias a uno o más flagelos polares
que poseen, son catalasa positivos y no forman esporas. Algunas especies sintetizan una
cápsula de exopolisacáridos que facilita la adhesión celular, la formación de biopelículas y
protege de la fagocitosis, de los anticuerpos o del complemento aumentando así su
patogenicidad.

Otras características que tienden a ser asociadas con las especies de Pseudomonas con algunas
excepciones incluye la secreción de pioverdina (fluorescein), un sideróforo fluorescente de
color amarillo verdoso bajo condiciones limitadas de hierro. Algunas especies pueden producir
otros sideróforos, tales como la piocianina por la Pseudomonas aeruginosa y tioquinolobactina
por Pseudomonas fluorescens. Las especies de Pseudomonas son típicamente oxidasa
positivas, con ausencia de formación de gas a partir de glucosa, son hemolíticas (en agar
sangre), prueba del indol negativas, rojo de metileno negativas y Voges Proskauer negativas

Los objetivos del siguiente informe son:

SV Aislar en Agar nutritivo y Agar cetrimide colonias de pseudomonas.

SV ~onocer las características que presentan las colonias en los dos tipos de Agar.
SV •ealizar la coloración gram, e identificar la morfología de las pseudomonas.
SV ¬dentificar las cepas de pseudomonas en pruebas bioquímicas.


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c
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c 


SV 

: se utiliza para aislamiento de microorganismos poco exigentes, en lo

que se refiere a requerimientos nutritivos, no contiene inhibidores en su desarrollo, el
agregado de cloruro de sodio permite el enriquecimiento con sangre de carnero.


SV 
se utiliza para el aislamiento selectivo de c
 
   a
partir de muestras clínicas y otros materiales.

El Agar cetrimide, contiene la peptona que sirve como fuente de nitrógeno, y el glicerol se
utiliza como fuente de carbono y energía. La producción de piocianina se estimula mediante el
cloruro de magnesio y el sulfato potásico en el medio. La cetrimide (bromuro de cetil trimetil
amonio) es un compuesto de amonio cuaternario que inhibe una amplia variedad de otros
organismos, incluidos otras determinadas especies de c
  y organismos
relacionados. Agar cetrimide, nos permite observar la pigmentación, puede estar formado
también por Agar nutritivo más glutamato monosodico que es el ajinomoto.

En la práctica de laboratorio se observo que en Agar cetrimide se logró identificar las

pseudomonas aeruginosa, tornando un color azul verdoso, debido a que estas cepas producen
pigmentos llamados piocianina. El otro tipo de cepa fue c
  

debido a la
coloración verde fluorescente, la cual producen pigmentos llamados pioverdina.

ElVolor característico a frutas se debe por la producción del &aminocetofenona

c
 ¬ !¬ :

La Pseudomonas, no fermentan glucosa, sucrosa, lactosa, por eso es que T¬ resultó negativo,
no producen ¬ndol, utilizan el citrato como fuente de carbono (citrato '), no tienen la enzima
ureasa (urea &). No suele fermenta, otras cepas de pseudomonas pueden producir acido,
aunque no gas, en presencia de glucosa. Licua rápidamente la gelatina.

La Pseudomonas aeruginosa es oxidasa&positiva y se puede identificar rápidamente mediante

el test de la oxidasa de Kovac.
  ¬


SV e logró aislar la cepa de pseudomonas tanto en Agar nutritivo como Agar cetrimide.
SV En Agar nutritivo, solo se observa la forma de las colonias características, mientras que
en el Agar cetrimide se observa la coloración.
SV En Agar cetrimide se logró identificar las pseudomonas aeruginosas, tornando un color
azul verdoso, y c
  "

 debido a la coloración verde fluorescente.
SV En las pruebas bioquímicas, la característica principal es la T¬, que por lógica siendo
Pseudomonas aerobias, no fermentaran, por lo tanto T¬ negativo.

#

#
¬ 


 

c$

¬ 

Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La reacción de la oxidasa
se debe a la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidación del citocromo
que es reducido por el oxígeno molecular que produce agua o peróxido de hidrógeno según la
especie bacteriana. El oxígeno actúa por tanto como aceptor final de electrones en la cadena
transportadora de electrones. Por lo general, el sistema citocromooxidasa sólo se encuentra
en los organismos aerobios, algunos anaerobios facultativos y, excepcionalmente, en algún
microaerófilo (¯
 
 ), pero los anaerobios estrictos carecen de actividad oxidasa.
Asímismo, la presencia de oxidasa va ligada a la producción de catalasa, ya que ésta degrada el
peróxido de hidrógeno que se produce como consecuencia de la reducción del oxígeno y cuya
acumulación es tóxica.

La prueba de la oxidasa se usa sobre todo para

SV ¬dentificar todas las especies de p

  (')

SV Diferenciar c
 de los miembros oxidasa negativos de las Enterobacterias.

El reactivo de la oxidasa más recomendado es la solución acuosa al 1% de diclorhidrato de

tetrametil&&fenilendiamina (reactivo de Kovacs). Es menos tóxico y mucho más sensible que el
correspondiente compuesto dimetilo (reactivo de Gordon y McLeod), pero es más caro. Este
reactivo tiñe las colonias oxidasa positivas de color lavanda que vira gradualmente a púrpura&
negruzco intenso.

•ealización de la prueba:

1.V Método en placa directa

SV Agregar directamente & gotas de reactivo a algunas colonias. No inundar toda la

placa y no invertirla.
SV Observar los cambios de color. ~on el reactivo de Kovacs la reacción se produce en
unos 1&15 segundos, mientras que con el de Gordon y McLeod es dentro de los 1&
minutos.

.V Método indirecto sobre papel

SV ~olocar un trozo de papel de filtro de xcm aproximadamente en una placa de Petri.

SV Agregar & gotas del reactivo de Kovacs en el centro del papel.
SV Extender con el asa de siembra una colonia sobre el papel impregnado.
SV La reacción de color positiva se produce a los 5&1 segundos.





&
c%¬ 
c¬
  c%c
  c

La capacidad para producir pigmentos como pioverdina (fluoresceína) y piocianina es una

característica importante para la identificación de especies de c
 . Algunas de ellas
elaboran sólo fluoresceína (ej. c ' 

 ) y otras ambos pigmentos (ej. c '
  ). La
piocianina solamente es producida por c ' 
   aunque no todas las cepas de esta
especie la producen. e han diseñado medios de cultivo que potencian la elaboración de uno
de los pigmentos e inhiben la formación del otro.

c

El medio King A (o Pseudomonas Agar P) potencia la elaboración de piocianina mientras que el

King  (o Pseudomonas Agar F) potencia la elaboración de fluoresceína e inhibe parcialmente
la de piocianina. Estos pigmentos son solubles en agua y difunden al medio. La piocianina es un
pigmento azul&verde mientras que la fluoresceína es amarillo&verdoso y fluorescens cuando es
expuesto a la luz UV (l=54 nm). Existen pigmentos amarillo&verdosos producidos por algunas
especies de Pseudomonas que no fluorescen.

¬

 

Observar al UV, la producción de pigmento azul&verdoso en el medio King A y la de pigmento

amarillo&verdoso, en el King .
~ontroles:
SV c
 
  : King A '
SV c( 

 : King A &
SV c) 

 : King  '
SV c* 
 : King  #

+
V    
   
 c  ¬   ! 

"#

El aspecto en el T¬, sería negativo, debido a que las pseudomonas no fermentan, ya que son

aerobias estrictas.

V     
  c 






 #

Las Enterobacterias son oxidasa positiva, y las pseudomonas no, las Enterobacterias son T¬

positivo, fermentadoras de glucosa y lactosa, ¬M positivo, mientras que las pseudomonas no.