Practica 1: Factores que influyen en las

separaciones cromatografcas.

1) Resultados.
a) Polaridad del
disolvente
Disolvente
AcOEt

R
S
R
S
R
S

AcOEt:
Hexano (1:1)
AcOEt:
Hexano (7:3)

b) Volumen de
muestra

Rf

0.74
0.92
0.39
0.92
0.19
0.80

Ancho de la
Banda(mm)
3

2
4

c) Concentracin de
la Muestra
g/mL

Disolvente

Rf

Asimetra (Si
o No)
No

CH3OH

Si

10

Si

b) Efecto del Volumen de Rojo

de Metilo en Acetonitrilo en un
volumen de 1, 2 y 4 L con
una concentracin de 1,0.5 y
0.23 mg/mL respectivamente
en una fase movil de
AcOEt:Hexano (1:1)

Clculos:
a)
AcOEt :
RfRojo=

RfSudan=

d`)Efecto de la presencia de
otros analitos como agua,
Sal y Azcar en una fase
mvil de AcOEt:Hexano
(1:1)

0.34

Otros
Analitos
H2O

H2O

0.42

Sal

0.

CH3OH

0.45

Azcar

0.

a) Efecto de Polaridad del

disolvente en Muestras de Rojo de
Metilo (R) y Sudan (S) en
Acetonitrilo.
Cromatograma 1 : AcOEt
Cromatograma 2 :AcOEt/Hexano
1:1
Cromatograma 3: AcOEt/Hexano
7:3

d) Efecto de Matriz

2.9
=0.74
3.9
3.6
=0.92
3.9

Efecto de la concentracin
de la muestra en una
muestra de rojo de metilo en
acetonitrilo con 1 ,5 y 10
mg/mL respectivamente en
una fase mvil de AcOEt:
Hexano (1:1)

d) Efecto de la natura
disolvente sobre rojo d
en Acetonitrilo, Ag
Metanol, en una fase m
AcOEt: Hexano (1:1)

c)

d) Efecto de la natur

wb
Asimetra: Wa

mg/mL=

Rf Rojo=

del disolvente.

0.3
=1
0.3

(simetra)

AcOEt/Hexano (1:1)

1.5
=0.39
3.8

0.

mg/mL=

RfCH3CN=

1.7
=0.42
4.0

RfH2O=

0.5
=1.66
0.3

1.5
=0.34
4.0

RfCH3OH=

1.8
=0.45
4.0

(coleo)
Rf Sudan=

3.5
=0.92
3.8

AcOEt/Hexano (7:3)

5 mg/mL=
(coleo)

0.7
=2.33
0.3

d`) Otros analitos

RfH2O=

1.3
=0.
3.8

35

Efecto de la polaridad del disolvente:

ya que es disuelto casi completamente el colorante,

por tanto no afectando en la determinacin; a
La placa est formada por una capa de gel de
0.8 diferencia del agua y metanol, los cuales1.5son
slice, una sustancia muy polar, y por lo tanto,
=0.19
=0.37
Rf Rojo=
sal=
4.1 compuestos de carcter ms polar, lo Rf
4.0
cual provoca
atraer en mayor medida a componentes ms
que el analito no sea disuelto en estos disolventes,
polares.
La polaridad del eluyente es un factor que consigue3.3 provocando que la interaccin con la fase
1.8
=0.80
Rf Sudan
=
una=0.46
que los componentes se muevan ms rpido
o ms
RfAzucar= 3.9
4.1 estacionaria se vea afectada obteniendo
mancha ms tenue, lo que quiere decir que al no
lento en una cromatografa. Es decir, para un
estar disueltos tanto el disolvente y el analito por
eluyente con mayor polaridad como el AcOEt ste
completo, estos tienden a competir por los sitios
estar ms atrado por el soporte y los
activos de la silica,obteniendo as una mala
componentes sern ms libres para moverse
determinacin.(Ver imagen d )
mejor, por lo que, al revelar la placa, los
componentes saldrn ms alejados de la lnea
a) Presencia de otros analitos.
base. Por la misma razn, con un eluyente menos
polar en este caso Hexano, ste casi no
El analito rojo de metilo, fue disuelto en agua,
interacciona con el soporte polar, y los compuestos
sacarosa y cloruro de sodio,respectivamente;en el
tendrn una mayor interaccin con el soporte, por
caso del agua, se obtuvo un Rf mucho menor que
lo que su velocidad ser ms pequea y al terminar
en las otras muestras (Rf=0.35) debido a que el
la cromatografa, se habrn desplazado muy poco
analito no presentaba un compuesto que afectara
a partir de la lnea base.
su adsorcin en la fase estacionaria, pero en el
Las muestras de Rojo de metilo sus Rf disminuyen
caso del NaCl (Rf=0.37) al presentarse una
considerablemente (0.74-0.19) a comparacin del
sustancia afectora,repercute en la interaccin con la
Sudan (0.92-0,80) lo que indica que el rojo de
fase tanto mvil como estacionaria; de igual manera
metilo es ms polar que el sudan (Ver imagen a).
en el caso de sacarosa (Rf=0.46),el analito se ve
afectado, puesto que el factor que lo afecta
Efecto del volumen de la muestra
presenta un carcter no polar ,de manera que el
En este experimento no se cambi la polaridad del
equilibrio que se posea entre el analito con ambas
solvente por lo tanto la elucin fue la misma para
fases, se ve afectado disminuyendo as la afinidad
las tres muestras debido a que se encontraban en
del analito con sus fases, provocando una valor de
la misma concentracin sin embargo se observa
razn de frentes mayor. (Ver imagen d`)
que a medida que aumentamos el volumen de la
Conclusiones:
muestra aumenta el ancho de la banda teniendo
A mayor polaridad mayor desplazamiento de
3,5 y 7 mm respectivamente esto es debido a que
la muestra
el analito tendr mayor superficie de contacto con
El Ancho de la banda es directamente
la fase estacionaria formando mayor dimetro de
proporcional al volumen de muestra
mancha (Ver imagen b).
aplicado.

A mayor concentracin mayor asimetra en

Efecto de la concentracin de la muestra.
la mancha.
Se observa que a una concentracin baja de
La interaccin analito-fase estacionaria
1mg/mL, la mancha presenta cierta simetra pero
depende de la afinidad del analito por la fase
conforme se incrementa la concentracin, la
Mvil.
asimetra va siendo mayor y esto se debe a que se

Se presenta una competencia entre analitos.

est favoreciendo el fenmeno de coleo, el cual se
debe a un excesivo alargamiento de la mancha, ya
Referencias:
que se es ms difcil la elucin del sistema

Harris D.C..Anlisis qumico cuantitativo.3ra ed.

cromatogrfico porque la composicin del analito
Editorial Reverte S.A.Barcelona.Espaa.pp.88-89
provoca una saturacin de los sitios activos de la
(2007)
fase estacionaria ya no habiendo tanta interaccin,

Douglas A. Skoog, Principios de anlisis instrumental,

6ta Ed, Cengage Learning, Mxico, D.F.pp-830-340.
causando as que el corrimiento no sea uniforme.

Yves Cohen, Anlisis Qumicos Farmacuticos de

(Ver imagen c)
Efecto de Matriz.
b) Efecto de la naturaleza del disolvente de
la muestra
El compuesto rojo de metilo es de carcter no
polar, por lo que en el disolvente de acetonitrilo al
ser un compuesto medianamente polar el
corrimiento de la muestra resulta ser el ideal

Medicamentos, Editorial Noriega Uthea, Mxico

D.F.pp.413-422
Olgun LP y Rodrguez HM.Mtodos de
Biotecnologia.Cromatografia de Gases.
[Internet].MxicoUniversidad Nacional Autnoma de
Mxico;2004t [actualizado 8 Jun 2004 - citado 28 Feb
2016].Disponible
en:http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/cromato
grafia_de_gases.pdf

Cuestionario:
a) Defina brevemente los siguientes trminos:
Tipos de interacciones moleculares: Son las interacciones que existen entre
el analito con la fase mvil y fase estacionaria.
-Fuerzas de Van der Waals.
-Enlaces por puentes de hidrogeno.
-Complejos de transferencia de carga.

- Fuerzas de dispersin de London

Resolucin: La resolucin de una columna constituye una medida cuantitativa
de su capacidad para separar dos solutos.
Coeficiente de particin: Constante de equilibrio que describe la distribucin
de un soluto entre dos fases.
Asimetra de pico: La asimetra o deformacin del frente se presenta cuando
se introduce demasiada muestra en una columna, algunos picos
cromatogrcos son no ideales y presentan deformacin hacia la cola o hacia
el frente.
Efecto de matriz: El efecto matriz consiste en una disminucin o aumento de
la respuesta instrumental del analito debido a la presencia de otros
componentes.
b) Aplicaciones de la cromatografa en el anlisis ambiental
Por medio de cromatografa de gases determinar qumicos de
pesticidas y herbicidas hasta hidrocarburos aromticos polinucleares
(PAHs).
Para determinar compuestos orgnicos de inters ambiental en
distintas muestras de aguas, sedimentos y lodos.
c) Mecanismos de separacin en cromatografa
Separacin por adsorcin: La cromatografa de adsorcin utiliza
una fase estacionaria adsorbente polar (esencialmente slice o
alumina) y una fase mvil poco polar, incluso no polar.
Separacin por reparto: diferente solubilidad en fases estacionaria y
mvil (componentes con polaridad media o alta)
Separacin por exclusin: La separacin se hace en base al
tamao efectivo de las molculas.La separacin se produce porque
solo las molculas pequeas pueden entrar en los poros donde se
protegen de la fase mvil que fluye, por tanto las molculas ms
grandes fluyen primero.
Separacin por intercambio inico: La cromatografa inica (IC) se
reere a los mtodos modernos y ecientes para separar y determinar
iones en columnas con relativamente baja capacidad de intercambio
inico o aninico.