Informe de Prctica de Laboratorio II

LABORATORIO DE ANLISIS
INSTRUMENTAL

FACULTAD
DE
CIENCIAS EXACTAS Y
NATURALES

Evaluacin de colorantes sintticos usados en la industria de alimentos por espectroscopia de

Ultravioleta - Visible
Moreno Gordon Luisa Fernanda, Valencia Ortiz Luisa Fernanda.
Fecha de presentacin

06/04/2016

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Resumen
La espectrometra UV-VIS una herramienta til para las determinaciones cuantitativas en diversas reas. Esto es debido a su versatilidad, precisin y
sensibilidad. Por tanto, la espectrometra UV-VIS puede usarse para determinar la concentracin de una solucin. Para la determinacin de colorantes
sintticos en una matriz alimentaria es importante conocer que los colorantes son un tipo de aditivo alimentario, utilizados para recuperar el color de
los alimentos, durante su almacenamiento o tras los tratamientos tecnolgicos a que se vean sometidos. El objetivo de esta prctica fue identificar y
cuantificar colorantes por espectroscopa de Ultravioleta Visible en gaseosa manzana Postobon, obteniendo mediante la ecuacin de mnimos
cuadrados una concentracin de 7,195g/mL y grficamente mediante la curva de calibracin 7,00g/mL de Rojo Ponceau 4R.

Palabras Clave: Colorantes; Gaseosa manzana Postobon; Rojo Ponceau 4R; Concentracin; Curva de calibracin; Espectrometra
UV VIS.
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1.

Introduccin

La espectrometra UV-VIS es probablemente la herramienta

ms til para las determinaciones cuantitativas en diversas
reas. Esto es debido a su versatilidad, precisin y sensibilidad.
Se puede utilizar para la determinacin directa de un gran
nmero de especies orgnicas, inorgnicas y bioqumicas con
precisin en concentraciones bastante bajas; es decir, de 10-4 a
10-5 incluso inferior. Sumado a esto, la conveniencia de
realizar una determinacin y su razonable selectividad hacen
que sea un mtodo de eleccin para determinaciones
cuantitativas (Ref-[1]).
La espectroscopia UV-VIS se apoya en la ley de Lambert Beer
que establece una relacin directamente proporcional a la
absorbancia.
Para la determinacin de colorantes sintticos en una matriz
alimentaria es importante conocer que los colorantes son un
tipo
de
aditivo
alimentario
(sustancia
aadida
intencionadamente a los alimentos y bebidas para mejorar
alguno de sus atributos) utilizados para recuperar el color de
los alimentos, durante su almacenamiento o tras los
tratamientos tecnolgicos a que se vean sometidos (Ref-[2]).
De acuerdo al Art. 3.4.3 del Reglamento Bromatolgico
Nacional (Ref-[3]), los colorantes pueden ser naturales,
artificiales o minerales. Siendo especficamente de nuestro
inters en este artculo, los colorantes artificiales en gaseosa
manzana Postobon.
Los colorantes artificiales son compuestos qumicos obtenidos
por sntesis, no identificados en productos de origen vegetal.
Ejemplos de stos son el amarillo tartrazina o el rojo allura.
Tambin existen algunos minerales, incluyendo metales, que
pueden usarse para dar color a los alimentos (Ref-[4]).

Figura No. 1
Muestra problema: gaseosa manzana Postobon.

En las siguientes secciones se expondr el procedimiento y

los resultados para la identificacin y cuantificacin de
colorantes por espectroscopa de Ultravioleta Visible en
gaseosa manzana Postobon.
2.

Materiales y Mtodos

Materiales
Beaker de 50 y 100mL
Varilla de agitacin
Pipetas

Matraz aforado de 5, 25 y 50 mL
Gotero
Plancha de calentamiento
Espectrofotmetro
Soluciones de colorantes a 50g/mL en HCl 0.1N
Celdas espectrofotomtricas

Reactivos
cido actico
Gaseosa manzana Postobon
3.

II.

CURVA DE
PATRONES

CALIBRACIN

DE

LOS

La solucin de Rojo Ponceau 4R tena una concentracin de

50g/mL. El intervalo de concentracin dado para este
colorante fue entre 0,40-40g/mL. A partir de este intervalo se
eligieron 5 concentraciones para la preparacin de los
patrones (Figura No.2), las cuales fueron: 0,40g/mL
10g/mL 20g/mL 30g/mL 40g/mL respectivamente.

Procedimiento Experimental

3.1 EXTRACCIN DE COLORANTES SINTTICOS

EN BEBIDAS NO ALCOHLICAS
Se procedi a tomar 20mL de la muestra y se calent hasta
ebullicin para eliminar el dixido de carbono presente, se dej
en reposo hasta que la solucin se enfri, se tomaron 5mL de
esta y se registr su pH. Se procedi a pasar la solucin a un
baln aforado de 10mL y se afor con agua destilada estril
(Figura No. 1).
3.2 CARACTERIZACIN DE LOS COLORANTES
POR ESPECTROSCOPIA DE ULTRAVIOLETAVISIBLE
3.2.1

OBTENCIN DEL BARRIDO ESPECTRAL

Se procedi a adquirir un espectro de la muestra problema en

la regin del visible (390-700 nm), utilizando como blanco de
referencia HCl 0,1N; se compararon las absorbancias mximas
de diferentes colorantes con la obtenida en la muestra
problema y se determin el colorante presente en la muestra.
Los colorantes de referencia fueron: Tartrazina, Rojo Ponceau
4R y Azul Brillante.
3.2.2

4.
I.

CONSTRUCCIN DE LA CURVA DE
CALIBRACIN

Se prepararon 5 mL de un conjunto de 5 estndares

de
diferente
concentracin
del
colorante
seleccionado.
Se realiz la curva de calibracin de absorbancia
frente a concentracin para los patrones del colorante
seleccionado, a la longitud de onda determinada.
Se obtuvo la absorbancia de la muestra problema.
Se procesaron los datos y se determin la
concentracin del colorante en la muestra.

Figura No. 2
Patrones de Rojo Ponceau 4R preparados a diferentes concentraciones.

Con estos datos se pudieron hallar los volmenes de los

patrones a partir de la Frmula No. 1.
C1V1=C2V2

(Frmula No. 1)

Despejando V1, se obtiene que:

V 1=(C 2 V 2)/C 1
(Frmula No. 2)

V 1,1=

0,40 g /mL 5 mL
= 0,04 mL
50 g /mL

Resultados y Anlisis de resultados

BARRIDO ESPECTRAL

Se compararon las absorbancias mximas de los colorantes de

referencia (Tartrazina, Rojo Ponceau 4R y Azul Brillante) con
la obtenida en la muestra problema y se determin que el
colorante presente en la muestra problema fue el Rojo Ponceau
4R con una longitud de onda de 503nm.

V 1,2=

V 1,3=

10 g /mL 5 mL
= 1,0 mL
50 g /mL

20 g /mL 5 mL
= 2,0 mL
50 g / mL
2

x=

30 g/mL 5 mL
V 1,4=
= 3,0 mL
50 g/mL

V 1,5=

yb
m

(Formula No. 4)

Dnde:

y= 0,149

40 g/ mL 5 mL
= 4,0 mL
50 g/ mL

b= 0,0015
m= 0,0205

x=

Despus de preparar los patrones se procedi a realizar la curva

de calibracin en el espectrofotmetro a una longitud de onda
de 503nm, obteniendo las absorbancias de los patrones como
se muestra en la Tabla No. 1.

0,1490,0015
0,0205

x=7,195 g /mL
Tambin se determin la concentracin de la muestra
problema grficamente (Grfico No. 1) obteniendo como
resultado 7,0g/mL.

Tabla No. 1
Absorbancias de los patrones a 503 nm.

De acuerdo al Grfico No. 1, la curva de calibracin es lineal

demostrando de esta manera que cumple con la ley de
Lambert Beer ya que a mayor concentracin hubo mayor
absorbancia.
III.

CONCENTRACIN
PROBLEMA

DE

LA

1.

Se sac la medida de tendencia central la cual fue 0,149 y a

partir de la Formula No. 3 se hall la concentracin de la
muestra problema la cual fue de 7,195g/mL.

Despejando x:

5.

Cuestionario

MUESTRA

Se procedi a medir por triplicado en el espectrofotmetro la

absorbancia de la muestra problema obteniendo como
resultado las siguientes absorbancias: 0,101 0,149 0,179.

y= mx + b

Grfico No. 1
Curva de calibracin de los patrones (Absorbancia vs. Concentracin).

(Formula No. 3)

Cules son los colorantes naturales y artificiales

utilizados por la industria alimentaria en Colombia?
Estn todos permitidos por nuestra legislacin?
Indicar la cantidad mxima en que deben entrar en la
preparacin de los alimentos.
Los colorantes permitidos por la resolucin nmero
10593 de (16 de julio de 1985) y los usados
comnmente por la industria alimentaria (Ref-[5]) se
presentan a continuacin:
NATURALES
Alcanna,Alcannina,
Ancusina u Orkane
Antocianinas

Color

Index

Color

Index

75530

BP
M
BP
M

Carotenos

Color

Index

Acidobeta-apo-8'carotenico
Beta-apo-8'-carotenal

Color

Index

Color

Index

40820

Cantaxantina

Color

Index

40850

Xantofilas

Color

Index

Achiole o Anato

Color

Index

75120

Azafran, Crocinay
Crocetina
Clorofila

Color

Index

75100

Color

Index

75810

Complejo de cobre y
clorofila
Complejo de cobre y
clorofila
y sus sales sdicas y
potsicas
Ribofiavina y Riboflavina5-fosfato de sodio
Rojo de remolacha y
betanina
Cochinilla,CarminyAcido
Carmico
Curcuma y Curcumina

Color

Index

Color

Index

75130

BP
M
BP
M

BN
Rojos
Amaranto
o FD y C
rojo N2
Azorrubin
a
a
carmoisin
a
Eritrosina
0FD y C
Rojo No3
Rojo
Allora 0
FD Y C
Rojo
No.40
Rojo
Cochinilla
A 0 Punz6
4R

BP
M
BP
M
BP
M
BP
M
BP
M
BP
M
BP
M
BP
M

Color

Index

BP
M

Color

Index

BP
M

Color

Index

Color

Index

75470

Verdes
Verde
rpido
FCF

BP
M
BP
M

Marrn
Marrn
HT

ARTIFICIALES
Amarillos
Amarillo
de
quinolena

Color

Amarillo
Ocaso
FCF
Amarillo
N6
Tartazina
o FDyC
Amarillo
N5

Color

Index

15985

200mg/kg

Color

Index

19140

100mg/kg

Color

Index

42090

100mg/kg

Azules
Azul
brillante
FCFyC
Azul N1
Indigo
Carmin
FD y C
Azul N2
Negros
Negro
Brillante

Index

47005

Index

73015

Index

28440

16185

300mg/kg

Color

Index

14720

300mg/kg

Color

Index

45430

300mg/kg

Color

Index

16035

BPM

Color

Index

16255

200mg/kg

Color

Index

42053

100mg/kg

Color

Index

20285

50mg/kg

Ultravioleta visible:
Carboxilo 204nm
Nitro 280 nm

100mg/kg

300mg/kg

Caracterizar los grupos funcionales a travs de los

espectros de I.R y U.V de los colorantes aislados y los
de referencia. Indicar la longitud de onda
predominante para caracterizarlos cualitativa y
cuantitativamente.
Infrarrojo cercano:
Aislado: Rojo ponceau
-OH (enlace de hidrogeno) 3100-3200 cm-1
-Sulfonamidas y sulfonatos 1370-1300 1180-1140 cm-1
Freferemcia: Tartrazina, Rojo ponceau, Azul brillante,
Verde FCF
-cidos Carboxlicos 1725-1700 cm-1
-OH (enlace de hidrogeno) 3100-3200 cm-1

3.
Color

Index

50mg/kg

2.

Color

Color

(Ref-[6])

Cmo utilizar la espectroscopa infrarroja (IR) en la

identificacin de colorantes empleados en la
preparacin de alimentos?

La identificacin de colorantes empleados en la

preparacin de alimentos por la tcnica espectroscpica
infrarroja (tcnica basada en la absorcin de la radiacin
IR por las molculas en vibracin) se hace similar a la
del UV- Visible, la diferencia radica en que esta trabaja
con un intervalo alrededor de 7 a 15, adems para la
preparacin de la muestra es necesario trabajar su
dilucin con CCl4 o CS2 o preferiblemente con nhexano o n-heptano por cuestiones de toxicidad para el
analista.
La espectrometra de infrarrojo es ms utilizada para
anlisis cualitativos (para el anlisis de compuestos
puros). Pero tambin se realizan anlisis cuantitativos en
el infrarrojo ya que los espectros vibratorios tambin
obedecen la ley de Lambert-Beer (Ref-[7]).
4.

Por qu es tan importante controlar la concentracin

de los colorantes sintticos utilizados en la preparacin
de alimentos?
Porque las altas concentraciones de colorantes sintticos
pueden ser txicas y adems pueden generar
consecuencias nefastas en la salud de los consumidores,
tales como ansiedad, alergias, crisis de asma, migraas,
problemas de visin, tumores en los riones y en las
glndulas suprarrenales, y cncer (Ref-[8]).

5.

Adems de los colorantes, qu otro tipo de aditivos se

suministran en los alimentos? Cul es la legislacin
que sobre ellos existe en el pas?
Adems de colorantes
de acuerdo a su funcin
tecnolgica existen otros aditivos alimentarios, tales
como: conservantes, antioxidantes, edulcorantes,
estabilizantes, reguladores de pH y potenciadores de
sabor.
En Colombia, la normatividad para aditivos est regida
por la resolucin 00206 del 27 de julio del 2009 del
Ministerio de Proteccin Social, la cual establece los
requisitos que deben tener los aditivos en el pas, aunque
es importante mencionar que esta es una modificacin
del decreto principal 002106 de 1983 (Ref-[9]).

6.

Conclusiones

Se logr determinar la concentracin de Rojo Ponceau

4R en una muestra de gaseosa manzana Postobon a
503 nm, la cual fue de 7,195g/mL. Grficamente
mediante una curva de calibracin e interpolando la
muestra problema se obtuvo una concentracin de
7,0g/mL.
Un nmero de factores pueden afectar el espectro de
absorcin del Rojo Ponceau 4R. Estos incluyen
polaridad del disolvente, pH, temperatura, fuerza
inica y las interferencias de otras especies
absorbentes. Por lo tanto esencial para una fiable
determinacin cuantitativa, que las condiciones de la

7.

medicin se elijan de manera que haya un efecto

mnimo de estos factores.
La curva de calibracin aportada por la solucin
madre indica que hay una relacin directa entre la
concentracin y la absorbancia, es decir, hay un
cumplimiento de la ley de Lambert Beer.
Para que la ley de Beer se cumpla, las soluciones a
utilizar deben ser homogneas, sin impurezas o
precipitados, y adems de esto debe ser y la luz
utilizada debe ser monocromtica.
El conocer el adecuado uso del espectrofotmetro
permiti obtener en el laboratorio resultados con alta
calidad analtica en las mediciones que son emitidas
por este.

Bibliografa:

Textos
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West, Holler & Crouch; 8va. Edicin; 2005.
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