Tugas III Matakuliah Bioteknologi

Tahapan Pembuatan Tanaman Transgenik dengan

Agrobacterium Mediated Transformation of Tobacco
1. Bacterial Suspension Preparation
- Bakteri agrobakterium dibiakkan di media agar yang mengandung kanamycin dan
hygromycin. Koloni bakteri yang tumbuh kemudian diinokulasikan ke dalam YEP
cair yang mengandung kanamycin.
- Dikocok dengan shaker selama semalam.
2. Explant Preparation
- Daun tembakau diambil dari tanaman yang berumur 1 bulan. Daun tembakau
dipotong-potong selebar 3-5 mm menggunakan gunting steril.
- Potongan daun tembakau ditampung dalam botol steril yang berisi HgCl2 dan Tween
20 kemudian dikocok selama 3 menit (sterilisasi).
- Daun tembakau dipindahkan ke tissu steril pada cawan petri untuk menyerap HgCl2.
3. Preculture
- Potongan daun tembakau dikultur selama 2 hari di dalam media precultur.
- Diinkubasi dalam cawan petri dibawah cahaya pada suhu 25oC.
4. Co-cultivation
- Kokultivasi potongan daun tembakau dengan Agrobacterium
dilakukan dengan menanam potongan daun tersebut dengan
Agrobacterium selama 10-20 menit
- Potongan daun dikeringkan dengan tissu steril dalam cawan petri
lalu ditransfer ke dalam media kokultur
- Diinkubasi selama 2 hari pada suhu 25oC
5. Selection
- Setelah 2 hari, eksplan dicuci dengan akuades steril yang mengandung cefotaxime.
- Explant dikeringkan dengan tissu steril dan dipindahkan ke media seleksi hingga
tumbuh akar.
6. Rooting
- Setelah proses seleksi, akar akan tumbuh dan dipindahkan ke dalam botol yang berisi
media seleksi yang baru (rooting medium).
- Setelah 2-3 minggu, akan didapatkan tanaman tembakau yang sempurna dalam botol.