Anda di halaman 1dari 6

Introduction

Terdapat banyak keuntungan yang membuat TLC (Thin Layer Chromatography) kompetitif
dibandingkan kromatografi cair, diantaranya :
(1) TLC sangat nyaman dan sederhana. Tersedia
bahkan pengguna

atau

secara

komersil

dan

praktikan yang kurang berpengalaman dapat

pemisahan berkualitas tinggi ini.


(2) Peralatan yang diperlukan untuk TLC lebih murah dan

siap

pakai,

melakukan

dapat

dengan

mudah dibentuk di laboratorium masing-masing.


(3) TLC sudah bersertifikat dalam banyak industry, terutama farmasi. TLC
dapat dengan
mudah digunakan untuk
menentukan analit
yang berbeda secara
kuantitatif .
(4) TLC mengkonsumsi jumlah pelarut yang jauh lebih kecil dibandingkan dengan HPLC.
Oleh

karena itu, TLC lebih murah dalam hal perlengkapan yang diperlukan dan

yang lebih utama yaitu lebih ramah lingkungan.


(5) Berbagai macam sampel yang diterapkan secara bersamaan

ke piring TLC tunggal,

maka TLC dalam praktek sering lebih cepat daripada LC


(6) Setelah pemisahan TLC, lipid dapat dengan mudah dibedakan oleh pewarnaan,
Misalnya, dengan pewarna yang mengikat khusus untuk karakteristik
gugus-gugus fungsional seperti amino atau residu karbohidrat.
Ini adalah keuntungan yang signifikan dibandingkan dengan HPLC dimana "pos
derivatisasi kolom"ini biasanya lebih sulit.
(7) TLC juga dapat digunakan untuk analisis sampel yang "mencurigakan"

yang dengan

mudah dapat merusak sistem HPLC. Analisis ini penting dalam kimia pangan dimana
campuran atau senyawa yang tidak diketahui ini harus di identifikasi.
Di dalam kajian lipid, TLC secara klasik digunakan untuk pemisahan, identifikasi dan penentuan
kuantitatif dari lipid. Dengan kedatangan teknik automated multiple development (AMD),
semua prosedur diatas mulai dari pencampuran pelarut, pengembangan dan pengeringan
dilakukan secara otomatis.

Cara mengekstrak lipid dari sampel biologis

Langkah utama dalam menganalisis lipid biasanya adalah dengan mengekstrak lipid dari
sumbernya. Hal ini terdengar sangat umum tetapi sebenarnya langkah ini titik paling penting
karena tidaklah mudah untuk mengekstrak lipid karena lipid-lipid yang akan di ekstrak berikatan
kimia dengan material biologis lainnya.
Gliserofosfolipid
Telah dibahas mengenai analisis fosfolipase (phospolipase, PL) dengan menggabungkan
TLC/MALDI. Namun, terdapat pula dua metode berbeda yang baru-baru ini diungkapkan, di
mana salah satunya yaitu pendekatan dengan laser inframerah (IR laser) dan gliserol sebagai
matriksnya. Pendekatan ini memiliki keuntungan yang cukup berarti pada data kuantitatif untuk
beberapa jenis PL yang dapat diperoleh, tetapi juga menghasilkan kerugian yaitu kelimpahan
aduksi gliserol (dan terhadap aduksi NaCl minor) pada PL dapat dilacak dan mempersulit
interpretasi dari spektra yang terekam. Maka, pendekatan lain menggunakan laser N2 siap pakai
dan DHB standar sebagai matriksnya.
Salah satu contoh dari pemisahan ekstrak kuning telur dan beberapa ion positif MALDI
spektrometri massa ditunjukkan pada gambar berikut

Gambar 1. Perluasan daerah pada ekstrak kuning telur terpisah oleh TLC dan ion positif
spektrometri massa MALDI-TOF yang berkorespondensi dengan posisi pada pelatnya.

Dalam konteks data tersebut, terdapat dua aspek yang harus ditekankan. Yaitu even low limpahan
lipid (seperti fosfatidilinositol (PI) yang menyusun kurang dari 1% PL dari kuning telur) dapat
dengan mudah dideteksi. Batas deteksi sekitar 400 pmol.
Kedua, yaitu ketergantungan pada posisi di mana tembakan sinar laser mengenai titik yang
berkorespondensi pada beberapa fraksi lipid, berefek pada perolehan spektrum massa yang
berbeda. Ini sangat jelas untuk fraksi PE di mana residu asil lemak terpendek dan terpanjang
dapat dibedakan. Ini mengindikasikan bahwa perubahan komposisi asil lemak hanya berefek
kecil pada sifat migrasi dari PL. Perbedaan ini tidak dapat diselesaikan dengan inspeksi manual
dari pelat TLC. TLC/MALDI juga cenderung cepat dan membiarkan rasterasi dari jalur TLC
dalam sekian menit. Metode ini telah berhasil diaplikasikan pada campuran lipid yang lebih
kompleks seperti ekstrak dari sel punca (stem cells)

Summary and outlook


Diperkirakan bahwa lipid akan menjadi suatu perhatian atau kajian khusus seiring dengan
meningkatnya jumlah penyakit yang mana penyakit tersebut berkaitan dengan komposisi lipid
yang mempengaruhi jaringan dan/atau cairan tubuh seperti darah.
Terdapat banyak metode untuk menganalisis lipid berbasis metode kromatografi dan
spektroskopi. Diantara semua metode yang ada, metode HPTLC sering dianggap sebagai metode
tradisional karena banyak metode lain yang lebih mutakhir dan lebih modern. Namun, HPTLC
sudah bisa dikategorikan sangat baik karena metode ini fleksibel dan cakap untuk menganalisis
lemak.
HPTLC merupakan alat yang sangat kuat dan dapat diterapkan untuk

analisis semua

jenis lipid yang relevan, baik secara fisiologis dan diagnostic dari senyawa yang tidak polar
seperti cholesteryl esters atau triasilgliserol hingga senyawa sangat polar seperti poliphosphoinositides. HPTLC diakui sebagai metode yang memiliki kelebihan dalam hal hemat
waktu, dan ekonomis. HPLTC ini dianggap sebagai metode yang menghasilkan kesalahan
minimum.

Kelebihan

ini akan mempercepat pekerjaan analisis yang biasanya tidak mungkin

didapatkan dengan

menggunakan

teknik kromatografi paralel lainnya.

HPTLC

juga diterapkan untuk sampel yang "mencurigakan" (misalnya dari makanan) yang
mungkin dengan mudah mengganggu bahkan merusak kolom HPLC sedangkan tidak hal nya
pada kolom HPTLC. Karena jumlah metode pewarnaan yang banyak, bahkan komponen minor
dari senyawa

campuran kompleks dapat diidentifikasi meskipun masih ada

upaya yang lebih untuk meningkatkan metode pewarnaan yang bahkan lebih kuat
yang dapat meningkatkan analisis data kuantitatif. Masalah
penting lainnya adalah pergantian pelarut yang tidak ramah lingkungan seperti hidrokarbon
terklorinasi dengan pelarut yang ramah lingkungan untuk mengurangi tingkat toksisitas.
Namun, HPTLC lebih ramah lingkungan karena volume pelarut yang dibutuhkan jauh lebih
kecil dibandingkan dengan jumlah pelarut yang dibutuhkan pada metode HPLC.
Terdapat

beberapa

sejarah yang signifikan di

yang dikenal sejak sekitar tahun

1938.

Salah

1975 ketika HPTLC diperkenalkan

satu kemajuan besar dicapai pada tahun

yang memungkinkan kinerja pemisahan dengan

kualitas yang lebih

tinggi dan sensitivitas tinggi. Penyempurnaan lebih

jauh dicapai dengan pengenalan


2001 yang dikatakan

sejarah planar kromatografi. TLC

lapisan kromatografi

bahwa

dalam pemisahan

ultra-tipis

(UTLC) di tahun

sampelnya lebih presisi.

Saat

ini, berbagai macam pra-pelapisan plat TLC tersedia secara komersial, di produksi lebih banyak
dan, waktu

pemisahan

yang

lebih

singkat dibandingkan

dengan plat buatan

sendiri. Pada dekade pertama abad ke-21, berfokus pada pengembangan metode deteksi yang
lebih efektif.
Meskipun hal ini tidak dibahas dalam tinjauan ini, optik metode seperti inframerah (IR),
Raman-spektroskopi laser
sangat berguna untuk mengevaluasi struktur kompleks analyte. Bahkan
pendekatan yang lebih kuat adalah menggunakan spektrometri massa dan ini
penting topik telah baru-baru ini telah dikaji.
Meskipun banyak metode komersial yang tersedia, diharapkan dalam ini bidang memiliki
kemajuan yang signifikan. Sejauh ini, pada dasarnya terdapat metode berbasis
(a)ekstraksi analit
(b)metode

desorbsi yang

di piringan TLC. Tentu saja, pemilihan

dapat mengkarakterisasi analit langsung


metode yang paling sesuai

tergantung pada masalah analitisnya dan sesuai

dengan

instrumentasi

tersedia. Sampai saat ini, metode yang didasarkan pada ekstraksi


data kuantitatif yang lebih dapat

diandalkan, sementara

yang
memberikan

metode

desorpsi MS

biasanya memberikan resolusi yang lebih tinggi. Sebagai contoh, lipid dengan komposisi gugus
asil yang berbeda dapat diidentifikasi dalam satu tempat di piringan TLC. Ini jelas membuka
dimensi baru yang membuat HPTLC sangat kompetitif terhadap metode LC/MS.
Itu adalah salah satu tujuan dari review ini untuk menggambarkan aplikasi potensial
dari HPTLC mengenai analisis lipid. Diharapkan bahwa semua jenis lipid alami dapat dianalisis
oleh TLC.
Dengan,demikian, setiap pengguna potensial harus memutuskan apakah dia ingin mengg
unakanTLC atau HPLC sebagai metode pilihan mereka walaupun kedua metode menyediakan
data atau hasil yang sama.