Anda di halaman 1dari 7

LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA

Pengaruh Inhibitor Terhadap Aktifitas Enzim

Oleh :
Kelompok 4 - Offering C
Desy Ratna Sugiarti

(130331614749)

Rita Nurdiana

(130331614740)*

Sikya Hiswara

(130331614743)

Yuslim Nasru S.

(130331614748)

UNIVERSITAS NEGERI MALANG


FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
JURUSAN KIMIA
APRIL 2016

A. Tujuan Percobaan
Setelah mengikuti percobaan ini, mahasiswa diharapkan :
1) Mampu memahami pengaruh inhibitor terhadap aktifitas enzim.
2) Mampu menjelaskan peristiwa inhibisi kompetitif terhadap aktifitas enzim.
B. Dasar Teori
Enzim adalah biomolekul berupa protein yang berfungsi sebagai katalis dalam
suatu reaksi kimia organik. Enzim memiliki tiga karakteristik, yaitu yang Pertama, fungsi
dasar enzim adalah untuk meningkatkan laju reaksi. Kebanyakan reaksi seluler terjadi sekitar
satu juta kali lebih cepat daripada mereka tanpa adanya enzim. Kedua, sebagian besar enzim
bertindak secara khusus dengan hanya satu reaktan (disebut substrat) untuk menghasilkan
produk. Karakteristik ketiga dan yang paling luar biasa adalah bahwa enzim diatur dari
keadaan aktivitas rendah ke aktivitas yang tinggi dan sebaliknya.
Enzim bekerja dengan cara menempel pada permukaan molekul zat-zat yang bereaksi
sehingga mempercepat proses reaksi. Percepatan reaksi terjadi karena enzim menurunkan
energi pengaktifan yang dengan sendirinya akan mempermudah terjadinya reaksi. Enzim
mengikat molekul substrat membentuk kompleks enzim substrat yang bersifat sementara dan
lalu terurai membentuk enzim bebas dan produknya
Kerja enzim dipengaruhi oleh beberapa faktor, diantaranya adalah substrat, suhu,
keasaman, kofaktor dan inhibitor. Tiap enzim memerlukan suhu dan pH(tingkat keasaman)
optimum yang berbeda-beda karena enzim adalah protein yang dapat mengalami perubahan
bentuk jika suhu dan keasaman berubah. Di luar suhu atau pH yang sesuai, enzim tidak dapat
bekerja secara optimal atau strukturnya akan mengalami kerusakan. Kerja enzim juga
dipengaruhi oleh beberapa jenis molekul, salah satunya adalah inhibitor.
Inhibitor merupakan suatu senyawa yang dapat menghambat atau menurunkan laju
reaksi yang dikatalisis oleh enzim. Inhibitor dibedakan menjadi 2 yaitu inhibitor tidak dapat
balik dan inhibitor dapat balik. Inhibitor irreversibel atau tidak dapat balik mengikat sisi aktif
enzim melalui reaksi yang tidak dapat balik, sehingga inhibitor tidak dapat dipisahkan dari
sisi aktif enzim. Keadaan ini menyebabkan enzim tidak dapat mengikat substrat atau inhibitor
merusak beberapa komponen (gugus fungsi) pada sisi katalitik molekul enzim. Sedangakan
inhibitor reversibel atau dapat balik, bekerja dengan mengikat sisi aktif enzim melalui reaksi
reversibel dan inhibitor ini dapat dipisahkan atau dilepaskan kembali dari ikatannya. Inhibitor

dapat balik terdiri dari tiga jenis, yaitu inhibitor yang bekerja secara kompetitif, nonkompetitif, dan un-kompetitif.
Dalam suatu campuran reaksi, inhibitor kompetitif akan mengikat sisi aktif enzim
karena memiliki struktur tiga dimensi yang sama dengan substrat. Enzim yang telah mengikat
inhibitor tidak dapat bereaksi dengan substrat untuk menghasilkan produk. Sedangkan enzim
yang telah berikatan dengan substrat tidak dapat berikatan dengan inhibitor, akan tetapi
menghasilkan hasil mengikuti reaksi kimia berikut ini :

Besarnya pengaruh inhibitor kompetitif ditentukan oleh konsentrasi inhibitor,


konsentrasi substrat dan afinitas relatif substrat dan inhibitor terhadap enzim. Pada
konsentrasi enzim tertentu konsentrasi substrat lebih rendah daripada inhibitor maka inhibitor
lebih mampu berkompetisi mengikat enzim dibandingkan substrat. Sebaliknya jika
konsentrasi substrat lebih tinggi maka inhibitor akan lebih sulit berkompetensi dalam
mengikat substrat. Berdasarkan hal tersebut maka pengaruh inhibisi ini, jelas dapat diatasi
dengan jumlah substrat yang berlebih.
Sebagai contoh inhibitor kompetitif dalah malonat yang menghibisi reaksi yang
dikatalis oleh enzim suksinat dehidrogenase. Pada daur asam sitrat, suksinat dehidrogenase
mengkatalis oksidasi suksinat menjadi fumarat dengan mengubah C jenuh pada suksinat
menjadi tidak jenuh atau berikatan rangkap. Reaksinya adalah sebagai berikut :
COOCH2

COO+ E-FAD

CH

CH2

CH

COO-

COO-

+ E-FADH2

Malonat memiliki struktur yang mirip dengan suksinat yang dapat berikatan dengan pusat
aktif enzim suksinat dehidrogenase membentuk kompleks EI sehingga tidak terbentuk
fumarat.

C. Alat dan Bahan


1) Alat
-

Tabung reaksi

Pipet tetes

Batang pengaduk

Gelas ukur

2) Bahan
-

Metilen blue 0,05%

Homogenat hati

Buffer fosfat 0,1 M (pH 7,4)

Minyak parafin

Natrium suksinat 0,1 M

H2O

Natrium malonat 0,1 M

D. Analisa Prosedur
No.
Prosedur percobaan
1.
Disiapkan 5 tabung reaksi. Tabung 1-4
dimasukkan metilen biru 0,05%
sebanyak 0,5 mL.

2.

3.
4.

5.

6.
7.
8.

Ditambahkan H2O pada semua tabung


reaksi masing-masing sebanyak 3 mL,
2,8 mL, 2,6 mL, 0,6 mL dan 6 mL.
Ditambahkan buffer fosfat 0,1 M pH 7,4
pada semua tabung.
Ditambahkan natrium suksinat 0,1 M
pada tabung reaksi 1-3 sebanyak 2 mL,
tabung 4 sebanyak 4 ml dan tabung 5
tidak ditambahkan
Ditambahkan natrium malonat 0,1 M
pada tabung reaksi 2-4 berturut-turut
sebanyak 0,2 mL; 0,4 mL; 0,4 mL.
Ditambahkan 2,5 mL homogenat hati
pada masing-masing tabug.
Diaduk dengan segera dan perlahan
Ditambahkan beberapa minyak parafin
untuk menutup permukaan larutan.

Analis prosedur
Metilen biru sebagai indikator telah
terjadinya pengoksidasian suksinat
menjadi fumarat oleh enzim suksinat
dehidrogease. Mekanismenya melalui
reaksi redoks, metilen biru akan tereduksi
menjadi bewarna coklat muda dan suksinat
akan teroksidasi
Untuk melarutkan senyawa-senyawa yang
akan dicampurkan
Untuk mempertahankan pH pada pH
optimum kerja enzim
Sebagai substrat yang nantinya mengikat
sisi aktif dari enzim suksinat
dehidrogenase
Sebagai inhibitor kompetitif atau yang
menghambat kerja dari enzim suksinat
dehidrogenase
Sebagai sumber enzim suksinat
dehidrogenase
Agar reaksi tidak hanya terjadi pada bagian
tertentu dari reagen saja
untuk menghindari kontak udara bebas
degan larutan karena parafin memiliki
massa jenis yang lebih ringan daripada air
sehingga akan terbentuk lapisan parafin di
atas lapisan larutan ,sehingga dengan
adanya parafin , oksigen dari udara bebas
tidak akan masuk ke dalam larutan karena
metilen biru tereduksi, secara cepat dapat

9.

Di inkubasi semua tabung pada


penangas air pada suhu 380C. Diamati
perubahan warna pada tiap tabung
setiap 5 menit.

teroksidasi kembali dengan kehadiran


oksigen udara
Untuk mengoptimalkan reaksi,
untuk mengetahui laju reaksi yang paling
cepat dan paling lambat untuk merubah
warna biru menjadi warna seperti larutan
standar.

E. Data Pengamatan
Tabung Metilen biru H2O ( mL)
Buffer fosfat
Natrium
0,05%
0,1 M pH 7,4 suksinat 0,1 M
1
0,5 ml
3,0
2 mL
2 mL
2
0,5 ml
2,8
2 mL
2 mL
3
0,5 ml
2,6
2 mL
2 mL
4
0,5 ml
0,6
2 mL
4 mL
5
6,0
2 mL
Ditambahkan 2,5 mL homogenat hati dan beberapa tetes minyak parafin
waktu
Tabung 1
Tabung 2
Tabung 3
Tabung 4
T= 0
Biru (-)
Biru (-)
Biru
Biru
T= 5
Biru (--)
Biru (--)
Biru (-)
Biru (-)
T= 10
Biru (---)
Biru (--)
Biru (-)
Biru (-)
T= 15
Biru (----)
Biru (--)
Biru (-)
Biru (-)
T= 20
Biru (-----)
Biru (---)
Biru (--)
Biru (-)
T= 25
Biru (------)
Biru (-----)
Biru (--)
Biru (--)
T= 30
Biru (------)
Biru (-----)
Biru (---)
Biru (--)
T= 35
Biru (------)
Biru (------)
Biru (----)
Biru (--)
T= 40
Biru (------)
Biru (------)
Biru (-----)
Biru (----)
T= 45
Biru (------)
Biru (------)
Biru (------)
Biru (-----)
T=50
Biru (------)
Biru (------)
Biru (------)
Biru (------)
T=55
Biru (------)
Biru (------)
Biru (------)
Biru (------)
T=60
Biru (------)
Biru (------)
Biru (------)
Biru (------)
Keterangan :
Biru (-) = warna biru sedikit pudar
Biru (------) = warna biru hilang

Natrium
malonat 0,1 M
0,2 mL
0,4 mL
0,4 mL
Tabung 5
Coklat muda
Coklat muda
Coklat muda
Coklat muda
Coklat muda
Coklat muda
Coklat muda
Coklat muda
Coklat muda
Coklat muda
Coklat muda
Coklat muda
Coklat muda

F. Pembahasan
Pada percobaan ini dilakukan uji pengaruh inhibitor terhadap aktifitas enzim dengan
substrat natrium suksinat dan inhibitor natrium malonat. Inhibitor natrium malonat dipilih
karena natrium malonat memiliki struktur yang hampir sama dengan natrium suksinat yang
dapat berkompetisi dengan natrium suksinat untuk berikatan dengan pusat aktif enzim
suksinat dehidrogenase. Enzim suksinat dehidrogenase diperoleh dari homogenat hati sapi.
Hati sapi ini harus dihomogenatkan agar semua enzim yang terdapat dalam hati sapi tersebut
dapat terekstrak. Kemudian homogenat harus disimpan dalam keadaan dingin agar enzim
yang berada dalam homogenat hati tidak rusak. Untuk mengetahui pengaruh inhibitor
terhadap aktivitas enzim dilakukan variasi perlakuan pada 5 tabung reaksi dengan satu tabung
sebagai larutan standart.

Mula-mula dimasukkan 0,5 ml metilen biru pada tabung 1-4. Penambahan metilen
biru ini berfungsi sebagai indikator pengoksidasian suksinat menjadi fumarat oleh enzim
suksinat dehidrogenase. Mekanismenya melalui reaksi redoks sederhana, ketika substrat
suksinat mengikat sisi aktif enzim suksinat dehidrogenase maka akan teroksidasi dan
terbentuk fumarat yang ditandai dengan tereduksinya metilen biru dari berwarna biru menjadi
tidak berwarna dengan reaksi sebagai berikut :

Selanjutnya ditambahkan air, kemudian ditambahkan buffer fosfat 0,1 M pada pH 7,4
bertujuan untuk menjaga kondisi pH larutan , karena enzim suksinat dehidrogenase bekerja
maksimum pada pH 7,4. Kemudian dimasukkan natrium suksinat 0,1 M sebagai substrat.
Setelah itu ditambahkan natrium malonat sebagi inhibitor kompetitif. Kemudian ditambahkan
beberapa tetes minyak parafin untuk metilen biru tidak teroksidasi kembali. selanjutnya di
inkubasi pada penangas air pada suhu 380C. Kemudian diamati warnanya untuk mengetahui
laju reaksi mana yang paling cepat untuk merubah warna biru menjadi warna seperti larutan
standar.
Untuk tabung 1,2, dan 3 volume natrium suksinat dibuat sama yaitu sebanyak 2 ml
sedangkan natrium malonat dibuat bervariasi yaitu 0; 0,2 ml; dan 0,4 ml. Hasil pengamatan
menunjukkan waktu yang diperlukan untuk hilangnya warna biru berturut-turut adalah 25
menit, 35 menit dan 45 menit. Pada tabung pertama hilangnya warna biru paling cepat karena
tidak terdapat inhibitor yang menghalangi substrat untuk berikatan dengan sisi aktif enzim.
Pada tabung kedua waktu yang diperlukan untuk menghilangkan warna biru lebih lama dari
tabung pertama, hal ini disebabkan adanya inhibitor malonat yang menempel pada sisi aktif
enzim yang menyebabkan sisi aktif enzim tidak dapat bereaksi dengan dengan suksinat,
sehingga reaksi oksidasi tidak dapat berlangsung. Pada tabung 3 waktu yang diperlukan
untuk menghilangkan warna biru lebih lambat dibandikan tabung 2, hal ini disebabkan karena
volume malonat yang ditambahkan pada tabung 3 lebih banyak dibandingkan tabung 2,

sehingga lebih banyak inhibitor yang menempel pada sisi aktif enzim, yang menyebabkan
reaksi oksidasi suksinat menjadi fumarat lebih lambat.
Pada tabung ke 3 dan ke 4, volume natrium suksinat dibuat berbeda yaitu 2ml dan
4ml, sedangkan natrium malonat volumenya dibuat sama yaitu 0,4 ml. Hasil pengamatan
menunjukkan waktu yang diperlukan untuk menghilangkan warna biru pada tabung ke-3
yaitu 45 menit dan pada tabung ke-4 yaitu 50 menit. Seharusnya waktu yang diperlukan oleh
tabung 4 lebih sedikit, karena volume substrat yang ditambhkan lebih banyak dibandingkan
tabung 3. Kesalahan ini mungkin disebakan ketika mengocok larutan terlalu keras sehingga
enzim mengalami kerusakan. Untuk tabung ke-5 digunakan sebagai standar warna sebagai
pembanding dengan tabung 1-4.
Natrium malonat memiliki struktur dan muatan yang sama dengan substrat normal
natrium suksinat, tetapi natrium malonat tidak dapat didehidrogenasi oleh enzim.
NaOOCCH2COONa
(natrium malonat)
NaOOCCH2CH2COONa
(natrium suksinat)
Besarnya pengaruh inhibitor kompetitif ditentukan oleh konsentrasi inhibitor,
konsentrasi substrat dan afinitas relatif substrat dan inhibitor terhadap enzim. Pengaruh
inhibitor kompetitif dapat diatasi dengan substrat berlebih. (Susanti, 2013)
G. Kesimpulan
1. Natrium malonat sebagai inhibitor berpengaruh terhadap aktifitas enzim suksinat
dehidrogenase yang terdapat di dalam homogenat hati yakni inhibitor dapat
menghambat kerja enzim suksinat dehidrogenase dengan mengikat sisi aktif enzim.
2. Peristiwa yang terjadi pada inhibisi kompetitif terhadap aktifitas enzim ialah enzim
yang telah mengikat inhibitor tidak dapat berekasi dengan substrat untuk
menghasilkan produk, sedangkan enzim yang telah berikatan dengan subtrat tidak
dapat berikatan dengan inhibitor, akan tetapi menghasilkan hasil mengikuti reaksi
kimia berikut ini:

H. Daftar Pustaka
Imana. 2014. Pengaruh Inhibitor terhadap Aktivitas Enzim. Online.
https://www.scribd.com/doc/209491801/Laporan-Suksinat-Dehidrogenase
diakses pada 5 april 2016)
Tim Dosen Biokimia UM.2015. Petunjuk Praktikum Biokimia Umum. Malang:
Universitas Negeri Malang.
Vika. 2015. Pengaruh Inhibitor terhadap Aktivitas Enzim. Online.
(https://www.scribd.com/doc/261089534/pengaruh-inhibitor-terhadap-aktivitasenzim, diakses pada 5 april 2016.