Pembunuhan khusus yang ditujukan interleukin-13 (IL-13) reseptor yang

mengekspresikan kanker payudara oleh IL-13 fusioncytotoxin di model hewan

penyakit manusia
Koji Kawakami, Mariko Kawakami, and Raj K. Puri
Laboratorium Molekuler Tumor Biologi , Divisi Seluler dan
Gene Terapi , Pusat Evaluasi dan Penelitian Biologis ,
Food and Drug Administration , Bethesda , MD
Abstrak
Interleukin - 13 reseptor ( IL - 13R ) rantai A2 mengikat IL - 13 dengan afinitas tinggi
dan dapat menginternalisasi setelah mengikat ligan . kita telah mengeksploitasi ini
milik rantai IL - 13RA2 oleh receptortargeted Terapi kanker payudara . Penelitian
sebelumnya telah menunjukkan bahwa secara in vivo intratumoral (itu ) transfer gen
rantai ini diikuti oleh IL - 13 cytotoxin [ terdiri dari ( IL13 - PE38QQR ) ] Terapi IL 13 dan Pseudomonas eksotoksin menyebabkan regresi tumor manusia yang didirikan
pada model xenografted . Sel karsinoma payudara tidak mengungkapkan Rantai IL 13RA2 dan tahan terhadap efek antitumor dari IL - 13 cytotoxin . Untuk menentukan
apakah rantai IL - 13RA2 bisa membuat sensitivitas kanker payudara untuk IL - 13
cytotoxin , kami disuntikkan IL - 13RA2 plasmid di S.C. Tumor yang ditetapkan oleh
T.I. rute, diikuti oleh sistemik atau T.I. Administrasi cytotoxin IL - 13 Pendekatan
Kombinasi ini menunjukkan mendalam aktivitas antitumor terhadap tumor payudara
manusia di xenografted tikus imunodefisiensi . Menariknya , ada infiltrasi dominan
sel-sel inflamasi dalam regresi tumor , yang diidentifikasi sebagai makrofag
memproduksi oksida nitrat ( NO ) dan sel-sel pembunuh alami . Peran parsial dari
diinduksi nitrat oksida sintase ( iNOS ) makrofag positif dikonfirmasi oleh in vivo
makrofag penipisan eksperimen . Kimia serum , hematologi , dan organ histologi dari
tikus diperlakukan tidak menunjukkan luar biasa toksisitas yang dihasilkan dari terapi
kombinasi . diambil bersama-sama , transfer gen lokal IL - 13RA2 diikuti oleh
IL - 13 terapi cytotoxin reseptor - ditargetkan dapat diterapkan aman dan efektif untuk
pengobatan payudara local kanker.
Pengantar
Kanker payudara adalah kanker yang paling umum pada wanita . Saya T
Diperkirakan bahwa pada tahun 2002 saja , 205.000 baru pasien ( termasuk 1.500
laki-laki) yang didiagnosis di Amerika Serikat dan sekitar 40.000 pasien meninggal
dari ini Penyakit ( 1 ) . Meskipun berbagai agen yang ditargetkan termasuk Herceptin
telah menunjukkan aktivitas antitumor pada kanker payudara , sekali menyebar ,
menyembuhkan jarang ( 2 , 3 ) . Dengan demikian , pendekatan baru diperlukan
untuk memberantas penyakit ini lebih awal . Dalam beberapa tahun terakhir ,
interleukin - 13 ( IL - 13 ) telah menerima banyak perhatian karena telah ditemukan
untuk memainkan peran utama dalam keganasan dan penyakit inflamasi termasuk
paru

asma ( 4-7 ) . Akibatnya , membran plasma reseptor untuk IL - 13 ( IL - 13R ) telah

dipelajari dengan penuh semangat ( 8-12 ) . Mirip dengan anggota lain dari tipe I
sitokin reseptor superfamili , IL - 13R juga telah ditemukan ada sebagai beberapa
jenis ( 13-18 ) . Jenis 1 IL - 13R terdiri dari IL - 13Ra1 ( juga dikenal sebagai IL 13RaV ) , IL - 13Ra2 ( juga dikenal sebagai IL - 13Ra ) , dan IL - 4RA ( juga dikenal
sebagai IL - 4RH ) rantai, sedangkan tipe 2 IL - 13R terdiri dari IL - 13Ra1 dan ILRantai 4RA . IL - 13Ra1 rantai bentuk kompleks dengan IL - 4RA rantai untuk
mengaktifkan jalur sinyal JAK - STAT diinduksi oleh IL - 4 atau IL - 13 ( 14 , 19-22 )
. Kedua tipe 1 dan tipe 2 IL - 13R adalah terbukti dinyatakan pada berbagai jenis sel
tumor ( 11 , 13 , 15-17 , 23-25 ) . IL - 13Ra2 rantai mengikat IL - 13 dengan 50kali
afinitas tinggi dari IL - 13Ra1 rantai ( 26 , 27 ) . meskipun Rantai IL - 13Ra2 belum
terbukti untuk menengahi setiap aktivitas biologis , telah ditunjukkan untuk
memainkan peran dalam ligan mengikat dan internalisasi ( 27-30 ) . dalam murine
sistem , rantai IL - 13Ra2 ditampilkan berfungsi sebagai umpan reseptor karena
domain ekstraseluler yang dibelah dan protein terdeteksi dalam serum dan urin ( 31 ) .
Untuk menargetkan IL - 13R , kami telah mengembangkan antikanker baru agen
terapi ,rekombinan IL - 13 cytotoxin ( IL13- PE38QQR ) , yang terdiri dari IL - 13
dan bermutasi bentuk pendek dari Pseudomonas eksotoksin ( PE ) ( 18 , 32 ) . IL13PE38QQR telah terbukti memiliki antitumor kuat Kegiatan in vitro ( 18 , 23-25 ,
32 ) , dan in vivo ( 25 , 33 , 34 ) . Meskipun IL13 - PE38QQR sangat sitotoksik untuk
mengetik 1 IL- 13R - mengekspresikan sel kanker termasuk glioma , sel ginjal
karsinoma , AIDS terkait sarkoma Kaposi , dan kepala dan kanker leher , tipe 2 tumor
IL - 13R - mengekspresikan memiliki sensitivitas terbatas IL13 - PE38QQR ( 18 ,
34 ) .karena Perbedaan antara tipe 1 dan tipe 2 IL - 13R adalah Kehadiran rantai IL 13Ra2 ,kita hipotesis bahwa jika sel-sel kanker yang diperoleh rantai ini , mereka
mungkin menjadi sensitif terhadap IL13 - PE38QQR . Hipotesis kami adalah benar
karena sel-sel kanker transfected dengan rantai IL - 13Ra2 ex vivo menunjukkan
respon dramatis untuk IL13 - PE38QQR in vitro dan in vivo ( 34 -36 ) . Selain itu,
kami memiliki menegaskan bahwa dalam transfer gen plasmid - dimediasi vivo IL 13Ra2 peka tumor prostat dan kepala dan leher untuk IL - 13 terapi cytotoxin
berikutnya ( 37 ) . pendekatan ini mungkin menawarkan harapan baru untuk
penargetan kanker payudara Karena massa tumor payudara lokal dapat disuntikkan
melalui kulit , pendekatan baru dapat diuji di mana tumor Sel-sel dapat peka dengan
intratumoral (itu ) administrasi gen yang tepat diikuti oleh ditargetkan agen terapi
dengan rute sistemik atau lokal . Oleh karena itu , dalam penelitian ini , kami meneliti
efek transfer gen IL - 13Ra2 pada
sitotoksisitas IL13 - PE38QQR pada sel kanker payudara secara in vitro dan in vivo .
Didirikan tumor payudara manusia disuntik dengan vektor encoding IL - 13Ra2
cDNA untuk menentukan in vivo ekspresi gen , vektor migrasi ke organ lain , dan
memeriksa aktivitas antitumor pendekatan kombinasi transfer gen dan IL - 13 terapi
cytotoxin . hasil kami menunjukkan bahwa pendekatan ini in vivo memaksa ekspresi
IL - 13Ra2 diikuti dengan terapi IL13 - PE38QQR bias memediasi aktivitas antitumor
dramatis dalam model hewan kanker payudara manusia lokal .

Bahan dan Metode

Rekombinan sitokin , cytotoxin , dan Cell Budaya Rekombinan IL - 13 manusia dan
IL - 13 cytotoxin ( IL13- PE38QQR ) diproduksi dan dimurnikan untuk homogenitas
dalam laboratorium kami ( 18 , 32 , 38 ) . Payudara manusia baris sel kanker ( BT 20 , MDA - MB - 231 , MCF - 7 , SK - BR - 3 , dan ZR - 75-1 ) yang dibeli dari
Koleksi American Type Culture ( Manassas , VA ) dan dipelihara dalam budaya
sesuai dengan
spesifikasi pemasok . In Vitro Media cDNA encoding manusia IL - 13Ra2 ( 16 , 26 )
atau IL - 13Ra1 ( 19 ) rantai dikloning ke dalam ekspresi mamalia pME18S vektor
menggunakan XhoI dan situs XbaI , dan urutan dari mengapit daerah persimpangan
yang diverifikasi oleh langsung sequencing ( 39 ) . Membangun yang dihasilkan
diperluas di Escherichia coli dan dimurnikan menggunakan endotoksin bebas endo
Mega kit gratis ( QIAGEN Inc , Valencia , CA ) . pME18S vektor plasmid didorong
oleh promotor SV40 . plasmid DNA ( 12 Ag / 100 - mm hidangan budaya ) yang
transfected ke Sel semiconfluent menggunakan GenePORTER transfeksi reagen
( Gene Therapy Systems, San Diego , CA ) sesuai instruksi produsen. Secara singkat ,
sel-sel ( 2 106 / 100 - mm piring) diinkubasi dengan DNA - Gene- PORTER
campuran selama 5 jam di DMEM diikuti oleh 20 h inkubasi dalam DMEM segar
mengandung 20 % janin sapiserum dan 24 tambahan jam dalam medium dengan 10
% janinserum sapi .RT - PCRUntuk mendeteksi ekspresi mRNA dalam sel atau
tumordikembangkanpada tikus , RNA total diisolasi menggunakan Trizolreagen ( Life
Technologies , Inc , Grand Island , NY ) , makaRT - PCR dilakukan dengan
menggunakan primer spesifik seperti yang dijelaskan( 13 ) . Campuran PCR pertama
kali diinkubasi selama 10 menit pada 94jCdan diperkuat 35 siklus di 94jC selama 45
s , 54jC selama 30 s , danmemanjang di 72jC selama 55 s .Protein Sintesis
Penghambatan AssaySintesis protein yang disebabkan oleh penghambatan IL 13cytotoxin diuji seperti yang dijelaskan sebelumnya ( 40 ) . biasanya ,104 sel
dikultur dalam rangkap empat di leucinefreemenengah dengan atau tanpa berbagai
konsentrasiIL13 - PE38QQR untuk 20-22 jam pada 37jC . Kemudian , 1 Aci dari[ 3H
] leusin ( NEN Penelitian Produk , Boston , MA )adalahditambahkan ke setiap baik
dan diinkubasi untuk tambahan 4 jam .Sel dipanen dan radioaktivitas dimasukkanke
dalam sel diukur dengan plat ah counter ( Wallac ,Gaithersburg , MD ) .Payudara
manusia Kanker xenografTikus telanjang athymic berusia 4 minggu ( sekitar 20 g
dalam tubuhberat badan ) yang diperoleh dari Frederick Cancer CenterHewan
Fasilitas ( National Cancer Institute , Frederick ,MD ) . Perawatan hewan adalah
sesuai dengan pedoman model tumor payudara didirikan pada tikus telanjang oleh
S.C. injeksi MDA - MB - 231 atau MCF - 7 sel tumor ( 5 106 ) di 150 Al PBS ke
panggul . Tumor teraba dikembangkan dalam waktu 3-4 hari . Dua diameter tegak
lurus tumor hati-hati diukur dengan kaliper Vernier . Secara umum, lima atau enam
tikus yang digunakan untuk masing-masing kelompok . Dalam Vivo IL - 13Ra2
GeneTransfer andTreatment Tikus imunodefisiensi dengan tumor yang ditetapkan
adalah disuntikkan T.I. dengan 25 Ag IL - 13Ra2 cDNA encoding vector dicampur
dengan 20 mM N- ( 1- [ 2,3 - dioleoyloxy ] propil ) -N , N , N - trimetilamonium

klorida ( DOTAP ) : kolesterol ( 1 : 1 rasio molar ) liposome ( 41 , 42 ) . DOTAP

dibeli dari Avanti Polar Lipid ( Albaster , AL ) dan kolesterol dari Sigma - Aldrich ( St
Louis , MO ) . Campuran masing-masing lipid
( 20 mM ) dilarutkan dalam 10 ml kloroform dan dikeringkan dalam berputar labu
alas bulat di bawah vakum . Lipid kering Film ini terhidrasi dalam 5 % larutan
glukosa ( 5 ml ) selama 30 menit dan dibubarkan oleh vortexing kuat . The terhidrasi
suspensi disonikasi di 4jC selama 1 jam dalam jenis cup tanduk sonikator
( Vibracell , Sonics & Bahan Inc , Danbury , CT ) dan diekstrusi berturut-turut
melalui 0,45 , 0,22 , dan 00:01 filter jarum suntik steril untuk menghasilkan liposom
unilamellar di Konsentrasi lipid dari 30 mg / ml . Dalam S.C. tumor xenografted ,
suntikan vektor ( total volume 50 Al / injection ) yang dilakukan dari hari 4 sampai 6
setelah implantasi tumor . Biasanya suntikan dibuat di bagian atas dan bawah tumor .
Tikus kemudian diberi suntikan IL13 - PE38QQR atau eksipien baik i.p. ( 500 Al /
tikus ) atau T.I. ( 30 Al / tumor ) 2 hari setelah pemberian vektor terakhir .
Imunohistokimia
Imunohistokimia dilakukan dengan menggunakan Vector yang ABC peroksidase kit
( Vector Laboratories , Burlingame , CA ) sesuai dengan instruksi produsen. S.C.
tumor Sampel diambil pada 3 hari setelah IL13 - PE pengobatan ( hari 15 ) dan
fixedwith 10 % formalin atau snap frozenwithOCT majemuk. Bagian - parafin
tertanam yang deparaffinized dengan perlakuan xylene dan dicuci dengan alkohol
( 100-50 % ) dan
PBS . Slide diinkubasi dengan antibodi ( pada konsentrasi dari 0,4-1 Ag / ml )
terhadap makrofag murine ( F4 / 80 ; Caltag Laboratories , Burlingame , CA ) , sel
NK ( NK1.1 ; Caltag Laboratories ) , atau diinduksi nitrat oksida sintase ( iNOS )
( M19 ; Santa Cruz Bioteknologi , Santa Cruz , CA ) atau Kontrol isotipe ( 0,4-1 Ag /
ml ) selama 18 jam pada 4jC . slide yang kemudian dikembangkan menggunakan
DAB substrat biotin peroksidase reagen ( Vector Laboratories ) dan counterstained
dengan hematoxylin . Tes imunohistokimia dilakukan 2-3 kali secara independen
dengan hasil yang sama dan slide yang dinilai oleh dua penulis ( K.K. dan M.K. ) .
Untuk tes immnofluorescent , bagian beku yang diwarnai dengan antibodi
monoklonal anti - manusia IL- 13Ra2 ( Diaclone , Besancon , Prancis ) atau co diwarnai dengan F4 / 80 dan M19 . Slide yang tetap dalam aseton di 20jC untuk 5
menit dan udara kering . Spesifik mengikat diblokir oleh pengobatan dengan 10 %
serum selama 1 jam diikuti dengan inkubasi dengan antibodi atau kontrol isotipe .
Bagian yang kemudian diinkubasi selama 1 jam dengan antibodi sekunder yang
memiliki baik isothiocyanate tetramethylrhodamine atau FITC tag . Setelah tiga
mencuci dengan PBS , slide dikeringkan dan berlapis dengan Vectashield
antifluorescence memudar pemasangan
menengah ( Vector Laboratories ) dan kaca penutup . slide dipandang di Olympus
IX70 fluoresensi mikroskop menggunakan filter yang sesuai ( Olympus Optical Co ,
Tokyo , Jepang ) . Gambar dikumpulkan dari set tiga berturut-turut bagian optik
tunggal dengan menggunakan INSIGHT SPOT V 3.2 software ( Diagnostik

Instrumen , Sterling Heights , MI ) . makrofag Deplesi Dalam penipisan makrofag

vivo dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya ( 37 ) . Karagenan ( tipe II ;
Sigma- Aldrich , Inc ) dilarutkan dalam PBS steril pada 5 mg / ml . Larutan
dipanaskan sampai 56jC untuk memastikan lengkap solubilisasi . Tikus ( n = 7 /
kelompok) dirawat oleh i.p. injeksi 200 Al ( 1 mg ) karagenan pada hari 3 , 7 , dan 14
setelah implantasi tumor . Tikus kontrol menerima 200 Al steril PBS . Analisis
Statistik Ukuran tumor dihitung dengan mengalikan panjang dan lebar tumor pada
hari tertentu .Signifikansi statistic tumor regresi dihitung dengan uji t Studen .
Hasil
Sel Kanker Payudara Acquire Peningkatan Sensitivitas terhadap IL-13 cytotoxin
setelah IL-13Ra2 Rantai Gene transfer di Vitro Pertama kita menentukan ekspresi IL13Ra2 mRNA sebelum dan setelah transfer gen rantai IL-13Ra2 pada kanker
payudara
baris sel. Seperti ditunjukkan dalam Gambar. 1A, baris sel kanker payudara empat
(BT-20, MDA-MB-231, SK-BR-3, dan ZR-75-1) tidak konstitutif mengekspresikan
mRNA untuk rantai IL-13Ra2. MCF-7 garis sel mengekspresikan mRNA untuk rantai
IL-13Ra2; Namun, Intensitas band ini lebih lemah dibandingkan dengan kontrol
positif
(Garis sel PM-RCC). PM-RCC adalah garis sel karsinoma sel ginjal yang telah
terbukti untuk mengekspresikan IL-13Ra2 rantai (13). Pada Saat baris sel kanker
payudara yang secara sementara transfected (untuk 2 hari) dengan IL-13Ra2 cDNA,
tingkat berlimpah IL-13Ra2 Ekspresi mRNA dapat dideteksi. Menggunakan
pengendalian vektor atau baris sel IL-13Ra2-transfected, penghambatan sintesis
protein aktivitas IL13 PE38QQR diperiksa in vitro. Sebagai ditunjukkan pada
Gambar. 1B, IL13-PE38QQR menyebabkan penghambatan sederhana sintesis protein
dalam empat baris sel kanker payudara transfected dengan vektor hanya pada
konsentrasi tertinggi (1000 ng / ml) obat kecuali bahwa garis MCF-7 sel
menunjukkan sensitivitas moderat untuk IL13-PE38QQR karena sel-sel ini
menyatakan rendahnya tingkat IL-13Ra2 mRNA. Di kontras, ketika sel-sel
transfected dengan IL-13Ra2 cDNA, peningkatan kepekaan terhadap IL13-PE38QQR
diamati pada empat dari lima baris sel. Pada ZR-75-1 sel, efek IL-13Ra2 transfer gen
sangat minim, karena IL13-PE38QQR menyebabkan penghambatan lebih tinggi dari
sintesis protein hanya pada tertinggi Konsentrasi (1000 ng / ml) obat. The IC50 (yang
Konsentrasi protein yang dibutuhkan untuk menghambat protein sintesis sebesar
50%) meningkat dari> 1000-100 ng / ml di MDA-MB-231, 130-8,5 ng / ml di MCF7, dari> 1000 52 ng ml / SK-BR-3, dan 1000-320 ng ml / di ZR- 75-1 garis sel,
masing-masing. Menggunakan MCF-7 garis sel, kami juga menegaskan bahwa
aktivitas penghambatan sintesis protein IL13-PE38QQR dalam sel IL-13Ra2transfected
diblokir
oleh kelebihan IL-13 (2 Ag), menunjukkan bahwa aktivitas
dimediasi oleh
molekul ini bersifat spesifik (data tidak ditampilkan). Sebuah cytotoxin tidak relevan
(IL4-PE) Apakah Tidak Menengahi Protein Sintesis Penghambatan di SK-BR-3
Kanker
Payudara
CellsTransfectedwith
IL-13Ra2
Rantai

Kami juga memeriksa sintesis protein penghambatan aktivitas suatu cytotoxin tidak
relevan, IL4 (38-37) -PE38KDEL, yang terdiri dari lingkaran permutasi IL-4
danbentuk mutasi dari PE (43) sel, di SK-BR-3 transfected dengan vektor saja atau
IL-13Ra2. Penelitian sebelumnya telah menunjukkan bahwa SK-BR-3 sel yang
sensitif terhadap hal ini IL-4 cytotoxin (44). Sebagai ditunjukkan pada Gambar. 2,
IL4 (38-37) -PE38KDEL hanya cukup dimediasi sintesis protein penghambatan
dalam sel transfecteddengan vektor atau IL-13Ra2 (panel kanan, IC50> 1000 ng /
ml),
sementara IL13-PE38QQR menunjukkan sintesis protein yang mendalam
Kegiatan penghambatan pada sel IL-13Ra2-transfected dibandingkan sel vektortransfected (panel kiri; IC50 = 52 ng / ml).Sel PM-RCC digunakan sebagai kontrol
positif (data tidak ditunjukkan) dan ditemukan untuk menjadi sensitif terhadap IL13PE38QQR dan IL4 (38-37) -PE38KDEL seperti sebelumnya dilaporkan (23, 45).
Data ini mengkonfirmasi bahwa IL13-Pemediated sintesis inhibisi protein pada
payudara sel kanker adalah IL-13Ra2 tertentu. Dalam Vivo intratumoral Plasmid
Suntikan Menghasilkan IL-13Ra2 Rantai Expressionin BreastTumorsSubcutaneously
Xenografted di NudeMice Untuk menilai kegigihan IL-13Ra2 ekspresi gen rantai in
vivo, MDA-MB-231 tumor yang tumbuh di panggul dari tikus telanjang yang T.I.
disuntik dengan vektor plasmid encoding IL-13Ra2 cDNA atau vektor saja. plasmid
dicampur dengan liposom disuntik pada hari 4 sampai 6 setelah implantasi tumor
(total tiga suntikan). tumor yang selanjutnya direseksi pada berbagai titik waktu
setelah plasmid injeksi dan dikenakan RT-PCR dan imunofluoresensi mikroskop
analisis untuk ekspresi gen IL-13Ra2. Seperti ditunjukkan dalam Gambar. 3A, tingkat
optimal IL-13Ra2 mRNA Ekspresi jelas sampai hari 17, yang kemudian menghilang
hari 21. Hasil ini dikonfirmasi oleh mikroskop imunofluoresensi menggunakan
antibodi monoklonal rantai IL-13Ra2 (Gambar. 3B). Protein rantai IL-13Ra2
Ekspresi diamati pada hari ke 7 (sel positif dalam seluruh Bagian yang 20-30%),
mengalami penurunan sebesar 17 hari (sel positif kurang dari 10%), dan tidak
terdeteksi pada hari 25. Dalam kontrol tumor disuntik dengan vektor saja, tidak ada
sel-sel positif terdeteksi dari hari 7 hingga 25. Hasil ini menunjukkan bahwa ekspresi
gen rantai IL-13Ra2 pada tumor payudara dipertahankan hingga 11-14 hari di lokasi
tumor setelah tiga saya t. suntikan plasmid. IL-13Ra2 Trasgene Ekspresi di Vital
Organ setelah Suntikan intratumoral dari PlasmidVector
In vivo T.I. suntikan IL-13Ra2 encoding plasmid mungkin menyebabkan migrasi dan
ekspresi transgen di jauh penting organ yang menghasilkan toksisitas organ ketika
tikus ini sistemik diobati dengan IL13-PE. Untuk menguji kemungkinan ini, hewan
bantalan MDA-MB-231 tumor yang T.I. disuntik dengan IL-13Ra2 encoding plasmid
pada hari 4, 5, dan 6 setelah implantasi tumor dan organ-organ vital termasuk hati,
paru-paru, ginjal, limpa, jantung, dan darah serta tumor di berbagai hari dipanen dan
dianalisis. total RNA diekstraksi dari sampel tersebut dianalisis untuk IL-13Ra2
Ekspresi mRNA. Seperti ditunjukkan dalam Gambar. 4, IL-13Ra2 mRNA terdeteksi
pada semua organ kecuali dalam sel darah pada hari ke-7, sebagaimana dinilai oleh
sensitif RT-PCR. Meskipun RT-PCR tidak uji kuantitatif, tingkat IL-13Ra2 mRNA

tampaknya menurun pada hari 9, menghilang hari 11, dan pada hari 13 dan
seterusnya, tidak ada ekspresi transgen terdeteksi adalah diamati dalam setiap organ.
BreastTumors Xenografted di Hewan Apakah Rentan dalam Vivo IL-13Ra2
GeneTransfer Diikuti oleh sistemik IL-13 CytotoxinTherapy Karena tumor payudara
S.C. tumbuh pada tikus telanjang yangmampu mengekspresikan IL-13Ra2 chain oleh
T.I. injeksi plasmid, kami dievaluasi aktivitas antitumor dari IL13-PE dalam dua
payudara model tumor. Kami mengembangkan MDA-MB-231 dan MCF-7 tumor di
kedua sisi-sisi kanan dan kiri dari tikus telanjang. Hewan kemudian menerima T.I.
suntikan baik vektor hanya di sebelah kanan sayap tumor atau IL-13Ra2 plasmid
pada tumor sayap kiri pada hari 4, 5, dan 6. MDA-MB-231 hewan tumor-bearing
yang kemudian diobati dengan i.p. IL13-PE38QQR [25 atau 50 Ag / kg dua kali
sehari (bid) selama 5 hari] dari hari 8 sampai hari 12. Tumor disuntik dengan vektor
saja (sisi kanan) hanya menunjukkan respon yang terbatas terhadap pengobatan IL13
PE38QQR. Seperti ditunjukkan dalam Gambar. 5A, hari 39, pertumbuhan tumor
dalam kontrol (eksipien hanya disuntikkan; 182 mm2) dan IL13-PE38QQRtreated
hewan tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan dalam ukuran tumor pada 25
Ag / kg i.p. memperlakukan kelompok (162mm2, P = 0,09). Regresi tumor sederhana
namun bermakna secara statistik diamati pada 50 Ag / kg diperlakukan tikus
(136mm2, P <0,0006 pada hari ke 39). Tumor disuntik dengan IL-13Ra2 rantai
plasmid (kiri sayap) mulai mundur selama masa pengobatan di Hewan IL13PE38QQR-diobati. Pada tikus diobati dengan 25 Ag / dosis kg IL13-PE38QQR,
regresi
lengkap
tumor tidak diamati; Namun, rata-rata ukuran tumor diukur pada hari 39 (88 mm2)
adalah 49% berkurang dibandingkan untuk mengontrol tumor (174 mm2) (P <0,001).
hewan menerima 50 Ag / dosis kg IL13-PE38QQR menunjukkan tumor yang lebih
baik Tanggapan termasuk hilangnya lengkap tumor di dua dari lima tikus hari 39 (rata
rata ukuran tumor 14 mm2; P <0,0005 dibandingkan dengan kontrol).
MCF-7 tikus yang menderita tumor diobati dengan rendah dosis i.p. Administrasi
IL13-PE38QQR [5, 15, atau 25 Ag / kg dua kali sehari (bid) selama 5 hari] dari hari 8
sampai 12 dan 15 melalui 19, setelah vektor hanya injeksi (kanan
sayap) atau IL-13Ra2 encoding plasmid (sayap kiri) injeksi saya t. pada hari 4, 5, dan
tumor kontrol 6. Vector hanya injeksi (sayap kanan) tumbuh 86 mm2 hari 37, dan 5
atau 15 Ag / kg dosis pengobatan IL13-PE38QQR tidak mempengaruhi tumor
pertumbuhan (Gambar. 5B). Dua puluh lima mikrogram per kilogram Dosis IL13PE38QQR pengobatan menunjukkan sederhana efek pada menangkap pertumbuhan
tumor. Sebaliknya, tumor menerima transfer gen vivo rantai IL-13Ra2 oleh injeksi
plasmid (sayap kiri) merespon dengan baik terhadap Efek antitumor dari IL13PE38QQR. Lima mikrogram per kilogram IL13-PE38QQR dosis tidak menunjukkan
antitumor efek; Namun, setelah 15 atau 25 Ag / kg dosis (bid? 10 hari) dari i.p.
Administrasi-PE38QQR IL13, pertumbuhan Tumor IL-13Ra2 bertarget yang
mendalam terhambat di semua tikus. Pada hari terakhir percobaan (hari 37), berarti
ukuran tumor adalah 42% (15 Ag / kg dosis; 49 mm2) atau 75%
(25 Ag / kg dosis; 21 mm2) lebih kecil dibandingkan dengan kontrol tumor (84 mm2)
(P <0,0005 pada kedua dosis). hasil ini menunjukkan bahwa IL13-PE38QQR dapat
menunjukkan antitumor yang signifikan aktivitas tumor payudara setelah gen in vivo

IL-13Ra2 transfer. Dalam Vivo IL-13Ra2 Gene transfer Diikuti oleh intratumoral IL13 cytotoxin Pengobatan Menunjukkan Lengkap Regresi Kanker Payudara xenograf
di Tikus Kami kemudian menilai efek antitumor dari T.I. tata usaha dari IL13PE38QQR setelah in vivo IL-13Ra2 encoding suntikan plasmid. Kita lagi
mengembangkan tumor di kedua panggul kanan dan kiri dari tikus telanjang. Mirip
dengan eksperimental prosedur pada Gambar. 5, binatang menerima baik vektor
hanya suntikan (sayap kanan) atau IL-13Ra2 encoding plasmid suntikan (sayap kiri)
T.I. pada hari 4, 5, dan 6. MDA-MB- 231 atau MCF-7 hewan yang menderita tumor
yang kemudian diobati dengan T.I. IL13-PE38QQR [100 atau 250 Ag / kg sehari (qd)
selama 5 hari] dari hari 8 sampai hari ke 12. Dosis dipilih untuk percobaan ini
didasarkan pada kami sebelumnya Temuan bahwa dosis tinggi IL13-PE38QQR dapat
diadministrasikan T.I. tanpa toksisitas organ dan menunjukkan lebih baik respon
antitumor (25, 33, 34, 36-38). Seperti ditunjukkan dalam Gambar. 6 A, T.I.
administrasi IL-13PE38QQR dalam vektor hanya injeksi MDA-MB-231 tumor
(sayap kanan) menunjukkan aktivitas antitumor sederhana di kedua 100 dan 250 Ag /
kg dosis kelompok. Berarti ukuran tumor dari 250 Ag / kelompok dosis kg pada hari
ke 39 adalah 88 mm2, yang merupakan 52% lebih kecil dari eksipien hanya
disuntikkan tumor kontrol (182 mm2) (P <0,0005). Di Sebaliknya, IL-13Ra2
encoding
plasmid
disuntikkan
tumor
(kiri sayap) menunjukkan peningkatan yang sangat sensitif terhadap antitumor yang
efek IL13-PE38QQR. Selama T.I. yang pengobatan dengan IL13-PE38QQR, semua
tumor drastis kemunduran. Pada siang hari 12, semua 12 tumor diobati dengan baik
100 atau 250 Ag / kg Dosis yang benar-benar tak terlihat dan nonpalpable. beberapa
tumor muncul dan perlahan-lahan tumbuh lagi; Namun, dengan Hari 39, ukuran
tumor rata-rata adalah 86% (24 mm2, 100 Ag / kg dosis) atau 93% (12 mm2, 250 Ag
/ kg dosis) lebih kecil dibandingkan untuk mengontrol (P <0,0005 di kedua dosis).
Salah satu dari lima hewan di 100 Ag / kg dosis dan tiga dari lima tikus dalam 250
Ag / kg dosis menunjukkan regresi lengkap tumor ditetapkan mereka.
Kami juga diperlakukan MCF-7 tumor tikus xenografted dengan protokol yang sama
dari transfer gen IL-13Ra2 diikuti olehnya Administrasi IL13-PE38QQR [100 Ag /
kg sehari (qd) untuk 5 hari]. Seperti ditunjukkan dalam Gambar. 6B, IL13-PE38QQR
menunjukkan beberapa efek antitumor dalam vektor tumor hanya disuntikkan (kanan
panggul). Berarti ukuran tumor pada kelompok perlakuan adalah 55 mm2 dengan
Hari 37, yaitu 36% lebih sedikit dibandingkan dengan kontrol (86 mm2; P <0,0005).
Mirip dengan MDA-MB-231 tumor, MCF-7 tumor disuntik dengan IL-13Ra2
encoding plasmid (kiri sayap) yang sangat sensitif terhadap IL13-PE38QQR
pengobatan. Sebagai hasil dari pengobatan IL13-PE38QQR, lima dari enam tumor
benar-benar menghilang pada hari ke-14. Meskipun dua tumor kambuh, tiga dari
enam hewan tetap bebas tumor-in sayap kiri mereka dengan akhir percobaan (hari
37). Ukuran tumor rata-rata pada hari 37 adalah 8 mm2, yang 93% lebih kecil
dibandingkan dengan kontrol (P <0,0005). Data ini menunjukkan bahwa IL-13Ra2
T.I. suntikan diikuti oleh saya t. Terapi IL13-PE38QQR menyebabkan regresi
tergantung
dosis
tumor payudara manusia xenografted pada tikus telanjang. Antitumor Kegiatan IL-13
cytotoxin di MCF-7 Tumor Apakah Khusus untuk di Vivo Gene-Ditransfer IL-13Ra2

Rantai Untuk menilai apakah peningkatan aktivitas antitumor dari IL13PE38QQR adalah karena transfer gen rantai IL-13Ra2, kami juga disuntikkan IL13Ra1 rantai encoding plasmid ke dalam MCF-7 yang tumor, bukan IL-13Ra2 rantai
encoding plasmid. Plasmid vektor encoding IL-13Ra1, IL-13Ra2, atau vektor hanya
T.I. tikus yang disuntik menerima i.p. administrasi IL13- PE38QQR (25 Ag / kg dua
kali sehari selama 10 hari). Seperti ditunjukkan dalam Gambar. 7, tumor disuntik
dengan IL-13Ra2 cDNA merespon sangat baik untuk IL13-PE38QQR. Pada siang
hari 37, berarti ukuran tumor di tikus secara signifikan lebih kecil (19 mm2)
dibanding kontrol (P <0,0005). Di sisi lain, IL-13Ra1 cDNA-disuntikkan tumor tidak
menunjukkan regresi yang signifikan jika dibandingkan untuk vektor tumor hanya
disuntikkan. Berarti ukuran tumor di ini hewan (76 mm2) mirip dengan mengontrol
hari 37 (P = 0,9). Hasil ini menunjukkan bahwa IL13-PE38QQR-dimediasi tumor
membunuh dalam pendekatan terapi ini benar-benar IL-13Ra2 rantai tertentu.
Infiltrasi selular ke SiteWas Tumor Observed setelah IL-13R Target Terapi Kanker
Payudara di Nude Tikus Meskipun 20-30% dari sel-sel tumor yang transfected
dengan IL-13Ra2 rantai setelah in vivo T.I. suntikan, tumor payudara Pertumbuhan
itu mendalam ditangkap oleh sistemik atau IL13- Pengobatan PE38QQR. Temuan ini
menunjukkan bahwa lainnya Mekanisme (s) mungkin ada untuk efek antitumor
penonton untuk tumor untransfected. Untuk menyelidiki hal ini, S.C. tikus yang
menderita tumor xenografted MDA-MB-231 diperlakukan bawah protokol yang sama
seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 5A. Tumor yang direseksi pada hari 15,
bagian disiapkan, dan dikenakan H & E pewarnaan dan imunohistokimia untuk
menyusup
sel.
Tumor kontrol disuntik dengan vektor saja diikuti oleh IL13-PE38QQR (ip 50 Ag /
kg dosis) injeksi tidak menunjukkan regresi tumor atau tumor necrosis yang dinilai
H & E (Gambar. 8A). Di sisi lain, tumor necrosis pusat jelas diamati setelah dosis
yang sama (50 Ag / kg) dari i.p. IL13-PE38QQR injeksi setelah transfer gen IL13Ra2
(Gambar. 8B). Di bawah lebih tinggi perbesaran (Gambar. 8C), infiltrasi sel-sel
inflamasi diamati di persimpangan antara nekrosis dan daerah tumor yang tersisa.
Tidak ada infiltrasi sel-sel inflamasi diamati pada tumor kontrol disuntik dengan
vektor saja. untuk mengkarakterisasi sel-sel ini, kami melakukan pewarnaan
imunohistokimia
dari blok jaringan yang sama seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 8, B dan C.
Melalui percobaan ini, kami mengamati jumlah moderat penanda makrofag (F4 / 80)
sel positif (Gambar. 8D). Beberapa makrofag juga diwarnai dengan pembuat untuk
iNOS (M19) (Gambar. 8E). Lemah sel NK1.1 positif juga ditemukan di lokasi tumor
(data tidak ditampilkan). untuk mengkonfirmasi apakah iNOS diproduksi oleh
makrofag, kami costained bagian beku dari blok jaringan tumor yang sama
dengan F4 / 80 dan M19 antibodi dan dinilai oleh fluoresensi mikroskop. Serupa
dengan hasil yang ditunjukkan pada Gambar. 8, D dan E, bagian tumor yang diwarnai
dengan antibodi makrofag (red;. Gambar 8F) dan iNOS (hijau;. Gambar 8G).
Kedua penanda ditemukan bersama-melokalisasi dalam yang sama sel, seperti yang
dinilai oleh image merger (Gambar. +8 H). karena iNOS adalah enzim diinduksi
diperlukan untuk menghasilkan oksida nitrat (NO), data ini menunjukkan bahwa

makrofag NO-memproduksi mungkin, sebagian, berpartisipasi dalam in vivo IL13Ra2 transfer gen dan IL-13 terapi cytotoxin untuk kanker payudara. MakrofagDepletedMice Dipamerkan Kurang Sensitivitas untuk IL-13Ra2 Gene transfer Diikuti
oleh IL-13 CytotoxinTherapi Untuk menilai apakah memproduksi NO-makrofag
memiliki berdampak pada mekanisme regresi tumor, macrophagedepleted
tikus telanjang yang digunakan untuk mengevaluasi antitumor yang aktivitas transfer
gen IL-13Ra2 diikuti oleh IL-13 pengobatan cytotoxin. Tikus yang diberi suntikan
MDA-MB- 231 sel kanker payudara S.C. (hari 0) diberi suntikan karagenan pada hari
3, 7, dan 14. Tiga IL-13Ra2 cDNA suntikan (pada hari 4, 5, dan 6) dan T.I. IL-13
cytotoxin Pengobatan (50 Ag / kg, sekali sehari selama 5 hari dari hari 7 melalui 11)
dilakukan. Seperti ditunjukkan dalam Gambar. 9, IL-13pengobatan cytotoxin
menyebabkan regresi tumor di kedua kontrol dan kelompok makrofag-habis; Namun,
tingkat regresi tumor pada tikus makrofag-habis sedikit kurang dibandingkan dengan
tikus kontrol. Oleh penghentian percobaan (hari 42), berarti ukuran tumor
pada tikus macrophage-habis lebih besar (115 F 34 mm2) dibandingkan dengan tikus
undepleted (79 F 33 mm2) (P <0,065). Hasil ini mengkonfirmasi bahwa makrofag
menyusup ke dalam kemunduran tumor selama transfer gen IL-13Ra2 diikuti
dengan terapi cytotoxin IL-13 memainkan beberapa peran dalam antitumor yang
mekanisme.Penilaian Toksisitas di MiceTreated dengan intratumoral IL-13Ra2Encoding Plasmid Diikuti oleh lokal atau IL13-PE sistemik Administrasi
Kami mengumpulkan darah dan organ utama (jantung, hati, paru-paru, ginjal, dan
limpa) dari tikus yang menerima T.I. IL-13Ra2 plasmid diikuti dengan pengobatan
IL13-PE38QQR baik ip (50 Ag / kg dua kali sehari selama 5 hari di MDA-MB-231
tikus xenografted) atau T.I. (250 Ag / kg sehari selama 5 hari di MDA-MB-231 tikus
xenografted) pada hari 14 dan 22 setelah implantasi tumor. Seperti terlihat pada Tabel
1, serum darah Analisis kimia menunjukkan tidak ada perubahan yang luar biasa
dalam
parameter dalam semua tikus diuji kecuali elevasi kecil dehidrogenase laktat dalam
beberapa kelompok. Demikian pula, tidak ada perubahan hematologi yang diamati
(data tidak ditampilkan). Toksisitas organ dinilai dengan pemeriksaan histologi.
Sedikit fokus tubular nekrosis dan sel hipertrofi adalah diamati pada ginjal dari tikus
yang diobati dengan T.I.IL13- PE38QQR, tapi, semua organ-organ lain yang bebas
dari segala bukti toksisitas (data tidak ditampilkan). organ dari tikus kontrol yang
tidak diobati tidak menunjukkan bukti toksisitas. Semua tikus yang diobati ditoleransi
terapi yang sangat baik tanpa toksisitas terlihat.
Diskusi
Rantai IL-13Ra2 telah ditunjukkan untuk memainkan peran yang unik dalam biologi
tumor. Hal ini diekspresikan dalam berbagai primer kultur sel tumor dan sel tumor
(13, 15-18, 25, 34),sedangkan sel normal termasuk sel limfoid, endotel
sel, dan astrosit (13, 15, 17, 26) tidak mengungkapkan atau mengungkapkan
rendahnya tingkat rantai reseptor sitokin ini. baru-baru Penelitian telah menunjukkan
bahwa ekspresi IL-13Ra2 rantai pada payudara tertentu dan baris sel kanker pankreas
mengakibatkan menjadi kehilangan tumorigenicity sedangkan sel-sel tumor kontrol

dimodifikasi dibentuk memperbesar nodul tumor ketika disuntikkan pada tikus

imunodefisiensi (46). Dalam studi lain, Terabe et al. (47) telah menunjukkan bahwa
bentuk larut rantai IL-13Ra2 (5) dapat memodulasi lingkungan kekebalan dan
menggeser Th2 fenotipe ke Th1 fenotip dominan. Pergeseran ini menyebabkan
menjadi perlawanan dari 15-12RM sel yang diturunkan kekambuhan tumor. Dengan
demikian, penyelidikan lebih lanjut dari peran Rantai IL-13Ra2 dalam imunologi
tumor dan penargetan memiliki menjadi sangat penting. Dalam penelitian ini, kami
menyelidiki apakah IL-13Ra2 rantai dapat ditargetkan in vivo oleh protein fusi IL-13
untuk
theraphy kanker payudara. Sebagai rantai IL-13Ra2 mengikat IL-13 dengan
afinitas tinggi dan setelah mengikat kompleks ligan-reseptor terinternalisasi dalam
sel, kami hyphothesized bahwa IL-13 cytotoxin akan memiliki aktivitas antitumor
kuat terhadap IL-13Ra2-mengekspresikan sel kanker in vivo (28, 35). Saya T.
administrasi plasmid encoding rantai IL-13Ra2 menghasilkan dalam ekspresi gen IL
13Ra2 dan protein untuk dalam waktu lama (> 17 hari dari implantasi tumor) sebagai
ditentukan oleh RT-PCR dan studi imunofluoresensi (Gambar. 3). Meskipun studi
imunofluoresensi tidak kuantitatif, kami memilih metode ini karena secara komersial
antibodi yang tersedia untuk IL-13Ra2 tidak bekerja di Western analisis blot. Ketika
tikus yang menderita tumor diberi suntikan IL-13Ra2 plasmid T.I. diikuti oleh IL-13
cytotoxin administrasi oleh i.p. atau T.I. rute, dramatis pengurangan tumor didirikan
diamati. Akan Tetapi, tumor disuntik dengan kontrol vektor plasmid terus tumbuh
dengan penuh semangat tanpa tanda-tanda respon tumor. Jumlah Menariknya, hanya
sebatas sel tumor payudara (20-30%) tampaknya transfected dengan IL-13Ra2 chain
oleh plasmid-dimediasi transfer gen; Namun, dramatis regresi tumor diamati.
Mekanisme respon tumor dramatis dapat dikaitkan dengan penonton efek sekarat sel
tumor untuk berdampingan tumor layak, atau infiltrasi '' sel efektor '' di lokasi tumor
akibat IL-13Ra2 transfer gen dan IL-13 terapi cytotoxin. Ini '' sel efektor '' mungkin
memediasi sitotoksisitas langsung atau tidak langsung sel tumor sisa. Meskipun kami
tidak mengamati Efek pengamat langsung in vitro (data tidak ditampilkan), infiltrasi
sel makrofag termasuk diamati in vivo. Makrofag tersebut berspekulasi untuk
menghasilkan NO sebagai mereka positif untuk ekspresi iNOS. pengamatan ini
menunjukkan
bahwa
transfer
gen
IL-13Ra2
in
vivo
diikuti
oleh IL-13 hasil administrasi cytotoxin dalam sel langsung kematian sel-sel tumor IL13Ra2-transfected, dan sebagian perekrutan sel imun bawaan yang menghilangkan ''
nontransfected '' sel tumor. Peran NO-memproduksi makrofag diteliti lebih lanjut
oleh in vivo penipisan makrofag dengan pemberian karagenan. Kami Hasil
menunjukkan bahwa IL-13 pengobatan cytotoxin disebabkan regresi tumor di kedua
kontrol dan makrofag-habis IL-13Ra2 kelompok plasmid-disuntikkan; Namun, sejauh
mana
regresi tumor pada tikus makrofag-habis itu sedikit kurang dibandingkan dengan
kontrol tikus (Gambar. 9). Oleh karena itu, menyarankan bahwa pendekatan ini dapat
memediasi regresi tumor oleh dua mekanisme independen: kematian sel secara
langsung dan Kematian bagian sel dimediasi oleh aktivasi kekebalan bawaan.
Respon imun bawaan adalah salah satu mekanisme kunci penolakan atau
penghapusan kanker in vivo (48, 49), dan studi tambahan saat sedang berlangsung di

laboratorium kami dengan jelas memahami mekanisme yang terlibat dalam hal ini
Pendekatan terapi. Keamanan pendekatan kami T.I. injeksi plasmid diikuti dengan
pemberian cytotoxin IL-13 lokal atau sistemik juga diselidiki. T.I. The plasmid
injeksi mungkin menyebabkan penyerapan vektor oleh sirkulasi darah dan migrasi ke
organ vital sehingga menjadi racun yang tidak diinginkan. Pada kenyataannya, kita
diamati IL-13Ra2 ekspresi mRNA dalam organ vital (hati, ginjal, dan limpa) setelah
tiga T.I. suntikan vektor. mRNA Ekspresi bertahan di ginjal dan limpa hingga 5 hari
setelah injeksi plasmid (hari 11 dari implantasi tumor). Di sisi lain, ekspresi mRNA
pada tumor bertahan setidaknya 7 hari setelah injeksi plasmid (hari 13). Sebagai tes
imunofluoresensi organ vital untuk IL-13Ra2 ekspresi tidak dapat diandalkan
diselidiki, kami melakukan Penelitian toksisitas yang luas untuk memeriksa apakah
Transfer gen IL-13Ra2 diikuti oleh sistemik atau IL-13 injeksi cytotoxin dimediasi
toksisitas organ vital. Histologik pemeriksaan organ vital tidak menunjukkan
Perubahan terdeteksi kecuali dalam ginjal dari tikus yang menerima tiga T.I. IL13Ra2 cDNA suntikan diikuti oleh T.I. IL-13 administrasi cytotoxin. Sampel ginjal
menunjukkan sedikit nekrosis fokal dan hipertrofi sel. Namun, semua
hewan tetap sehat sepanjang eksperimental periode. Hematologi dan serum darah
hasil kimia juga menunjukkan tidak ada perubahan parameter yang luar biasa
termasuk Tingkat CPK, AST, ALT, bilirubin total, dan kreatinin. Ini pengamatan
menunjukkan bahwa T.I. injeksi plasmid mungkin bermigrasi ke ginjal dan
mengakibatkan menjadi beberapa protein IL-13Ra2 ekspresi, mendorong kerentanan
terhadap IL-13 cytotoxinmediated sitotoksisitas tapi secara keseluruhan organ utama
lainnya tetap utuh tanpa ada kerusakan terdeteksi. Ini hasilnya sesuai dengan
penelitian kami sebelumnya di mana IL-13 cytotoxin di 100 Ag kg? 1 hari? 1 dosis
selama
7
hari
tidak
menyebabkan perubahan kimia serum darah atau toksisitas organ (50). Dengan
demikian, ada kemungkinan bahwa pendekatan kami dapat diterapkan aman untuk
terapi kanker payudara di klinik Karena kanker payudara dini dapat menjadi penyakit
lokal, adalah mungkin bahwa gen IL-13Ra2 dapat disuntikkan di bawah
bimbingan USG sehingga meningkatkan kepekaan terhadap administrasi cytotoxin
IL-13 lokal atau sistemik. Akan Tetapi, pada kanker payudara stadium lanjut, nodul
tumor yang diselingi dalam jaringan ikat melimpah, dan tidak jelas bagaimana
transfeksi IL-13Ra2 diikuti dengan terapi cytotoxin akan menimbulkan efek
bystander signifikan dengan infiltrasi makrofag atau dengan mekanisme lain. Oleh
karena
itu,
tambahan
strategi perlu dirancang untuk transfer gen dalam infiltrasi tumor. Salah satu
pendekatan yang mungkin bisa berhati-hati suntikan IL-13Ra2 plasmid dalam
beberapa lesi diikuti dengan terapi cytotoxin IL-13 lokal atau sistemik. strategi ini
mungkin tidak hanya menghilangkan sel-sel kanker payudara beban dan mengurangi
risiko '' tumpah-over '' sel kanker lainnya organ selama mastektomi bedah diperlukan
atau lumpectomy tetapi juga dapat memberikan dampak kuratif tambahan terapi
kanker payudara. Namun demikian, karena dengan ini kami menunjukkan buktiprinsip bahwa pendekatan kami mungkin strategi yang berguna untuk terapi kanker
payudara yang efektif, lebih lanjut Studi praklinis harus direncanakan secara hati-hati.
akhirnya, Strategi pengobatan ini akan berguna untuk tidak hanya payudara kanker

tetapi juga untuk lokal lain dan '' diakses '' kanker seperti ovarium, prostat, kepala dan
leher,
dan
glioma ganas.