MAKALAH TEKNIK UJI HAYATI

PEPSIN ASSAY ONE OF THE EASIEST APPROACH FOR PRE

SCREENING OF HIV- PROTEASE INHIBITOR

OLEH :

KELOMPOK 1
RIANA ZULFA

(1510248235)

ROMI HABIBI

(1510248241)

DOSEN PEMBIMBING : Dr. Hilwan Yuda Teruna, MS

PROGRAM STUDI MAGISTER KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS RIAU
PEKANBARU
2016

KATA PENGANTAR
Alhamdulillah penulis ucapkan kepada Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat
dan karuniaNya sehingga penulis dapat menyelesaikan Makalah Teknik Uji Hayati yang
berjudul Pepsin assay one of the easiest approach for pre screening of HIV- protease
inhibitor. Penulisan makalah ini diambil dari hasil penelitian Singh, dkk. (2013).
Penulis menyadari masih banyak kekurangan yang terdapat dalam penulisan makalah
ini. Oleh karena itu, penulis mengharapkan kritik dan saran yang bersifat membangun demi
kesempurnaan tugas ini. Semoga tugas ini dapat memberikan manfaat bagi perkembangan
ilmu pengetahuan.

Pekanbaru, April 2016

Penulis

ABSTRAK
HIV dengan cepat menjadi salah satu virus yang mematikan dunia, salah satu masalah
terbesar dalam menyembuhkan AIDS adalah HIV dapat dengan mudah mengembangkan
resistensi terhadap obat yang tersedia. HAART (Terapi antiretroviral) adalah satu-satunya
harapan bagi pasien AIDS sampai sekarang, yang dapat meningkatkan masa hidup dari
pasien AIDS dengan mempertahankan viral load di bawah 50 / ml. Dalam serum darah, di
mana kita menggunakan kombinasi dari tiga sampai lima obat menargetkan tahapan yang
berbeda dari siklus replikasi HIV. Inhibitor HIV-protease adalah bagian yang tak
terpisahkan dari terapi ini. Ada kebutuhan besar screening agen anti-HIV dari kimia serta
sumber daya alam. Tetapi proses ini tidak mudah karena membutuhkan uang dalam jumlah
yang besar untuk bahan kimia yang diperlukan, serta laboratorium yang canggih canggih.
Pada penelitian ini peneliti telah mengembangkan pengganti dari masalah ini hingga batas
tertentu, yaitu "Pepsin Assay", ini adalah pengganti dari HIV protease, keduanya
merupakan keluarga Aspartyl dari enzim dan berbagi urutan di situs aktif. Jadi peneliti
berharap bahwa pengembangan pengujian ini akan meningkatkan program skrining
inhibitor HIV-protease.
Kata kunci: inhibitor HIV-protease, HAART, Pepstatine A, STI, AIDS, Sel CD4+

DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR..............................................................................................................i
ABSTRAK.............................................................................................................................ii
DAFTAR ISI.........................................................................................................................iii
BAB I.

PENDAHULUAN...............................................................................................1
1.1. Latar Belakang.............................................................................................1
1.2. Tujuan Penulisan..........................................................................................3

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA......................................................................................4
2.1. HIV...............................................................................................................4
2.2. Obat Antiretroviral.......................................................................................4
2.3. Protease Inhibitor (Pis)................................................................................5
2.4. Zingiber officinale (Jahe).............................................................................5

BAB III

METODE PENELITIAN....................................................................................6
3.1. Alat...............................................................................................................6
3.2. Bahan............................................................................................................6
3.3. Persiapan Ektrak Tanaman...........................................................................6
3.4. Prosedur........................................................................................................6

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN...........................................................................8

4.1. Hasil.............................................................................................................8
4.2. Pembahasan..................................................................................................9

BAB V

KESIMPULAN.................................................................................................11

DAFTAR PUSTAKA...........................................................................................................12

BAB I
PENDAHULUAN
I.1. Latar Belakang
Sejumlah laboratorium di dunia terlibat aktif dalam penelitian anti-HIV yang dapat
mengganggu berbagai tahap siklus replikasi HIV. Masih tidak terdapat penyembuhan dan
vaksin untuk AIDS. Tetapi pengobatan dengan kombinasi dari dua analog nukleosida (NRTI)
dan protease inhibitor (triple atau terapi kombinasi) telah digunakan sejak 1994 dan sangat
sukses menghentikan replikasi virus dan perkembangan AIDS. Hal ini didukung dengan
banyak bukti penelitian dalam mendukung keberhasilan kombinasi terapi ini.
Terapi ini dikenal sebagai terapi antiretroviral (HAART), namun tingkat virus pada
plasma mencapai ambang batas sehingga tidak terdeteksi (contoh < 50x / ml.). HAART
masih dapat menghilangkan virus sepenuhnya dari pasien AIDS. Adanya virus laten dalam
sel memori CD4+ yang istirahat, sehingga pengobatan membutuhkan waktu yang lebih lama,
lama waktu istirahat mengakibatkan virus bertambah dalam beberapa hari ke level aslinya,
tapi lama paparan obat tertentu menyebabkan perkembangan perlawanan terhadap obat yang
diberikan, beberapa peneliti menunjukkan bahwa istirahat jangka pendek dalam pengobatan
hampir selalu menyebabkan meningkatnya virus yang dapat kembali ditekan dengan HAART
sehingga respon imun terhadap HIV meningkatkan. Terapi ini juga disebut pengobatan
gangguan terstruktur (STI). Ada banyak masalah lain dengan kemoterapi konvensional yang
disediakan untuk pengobatan AIDS, uji klinis senyawa ini untuk pasien AIDS menunjukkan
efek samping yang serius. Jadi ada kebutuhan besar untuk pengembangan atau penyaringan
senyawa berbeda yang memiliki aktivitas anti HIV dengan efek toksik yang minimum, yang
berhubungan dengan jalur yang berbeda dari infeksi HIV yang membuktikan pentingnya
mencegah perkembangan penyakit. Tampaknya strategi yang lebih baik untuk menemukan
antivirus yang baru dengan sitotoksisitas kecil adalah dengan bahan alami. Banyak review
tanaman obat yang menunjukkan pentingnya produk alami dalam menyembuhkan berbagai
penyakit yang sangat mengancam seperti kanker, AIDS dan lain-lain.
Selama dekade terakhir, para peneliti antivirus juga telah terlalu banyak kembali ke
obat-obatan rakyat tradisional, seringnya 'Cocktail' dari produk alami, untuk menguak dasar
ilmiah dari efek pemulihannya. Baru-baru ini ulasan yang diterbitkan berasal dari tanaman
senyawa anti-HIV, yang berfungsi untuk menguak fakta bahwa tanaman obat yang dipilih
dengan aktivitas inhibitor HIV tersebar luas di alam.

HIV-protease adalah bagian yang tak terpisahkan dari terapi HAART, yang berperan
penting dalam siklus replikasi HIV. HIV protease pertama kali diusulkan sebagai target
potensial AIDS terapi oleh Kramer dkk. 1986. Setelah itu menunjukkan bingkai dari mutasi
di wilayah protease gen untuk mencegah pembelahan gen Gag-Pol dan Gag prekursor
protein, yang merupakan proses penting untuk pematangan struktural dan fungsional protein
virus. Penyumbatan protease HIV mengarah pada pembentukan virion non infeksi dewasa.
Senyawa memiliki kemampuan untuk menghambat protease ini telah dipelajari secara
intensif selama dekade terakhir dan banyak laporan telah dipublikasikan, Alterman, M (2001)
memberikan ringkasan komprehensif desain dan sintesis HIV-1 inhibitor protease. Saquinavir
adalah orang pertama yang menyetujui protease inhibitor dan telah digunakan klinis sejak
1995, sekarang ada enam klinis yang menyetujui protease inhibitor yang tersedia di pasaran,
meskipun inhibitor dipasar sangat selektif tetapi menyebabkan efek samping seperti
lipodistrofi, hiperlipidemia, timbulnya mutan resisten pada penggunaan jangka panjang dari
obat tertentu karena mungkin ada permintaan konstan protease invibitor HIV yang baru.
Sekarang komunitas ilmu kedokteran kembali mengekstraksi sumber daya alam seperti
plants, herbal , alga laut dan banyak organisme lain untuk senyawa-senyawa bioaktif yang
dapat menyembuhkan begitu banyak gangguan pada manusia dan infeksi patogenik termasuk
AIDS dan kanker. Pada penelitian ini peneliti mengembangkan pendekatan tidak langsung
untuk skrining HIV protease inhibitor dari produk alami.
HIV-Protease
Enzim seperti HIV-protease merupakan katalis alami, protease adalah enzim yang
mengkatalisis pembelahan peptida atau protein. Dasar pada adanya karakteristik signature
urutan asam amino Asp-Thr-Gly. Disarankan oleh Toh, dkk pada tahun 1985 bahwa protease
dari HIV mungkin berasal dari kelas protease aspartat.

Ini dikonfirmasi melalui

penghambatan Pepstatine A, suatu aspartat protease inhibitor selektif dan dengan mutagenesis
terarah dari situs aktif Asp-25, yang menyebabkan penghapusan aktivitas katalitik. Protease
aspartat adalah kelompok yang memiliki karakteristik yang baik dari enzim yang dapat
ditemukan pada vertebrata, tanaman, selain pada jamur, contoh protease dari kelas aspartat
protease adalah Pepsin, Cathepsin D, Renin, Chymosin, Penicillopepsin dan Rhizopus pepsin;
yang semuanya adalah dua enzim domain dengan lebih dari 300 residu panjang dan
mengandung urutan Asp-Thr- Gly di setiap domain yang membentuk situs aktif, yang
mengatur reaksi pembelahan karena urutan protease HIV tidak lebih dari 99 residu asam
amino dan hanya berisi satu yang dibutuhkan disetiap rangkaian Asp-Thr-Gly menunjukkan
2

bahwa sisi aktif dari protease HIV adalah homodimer dari 198 asam amino. Hipotesis ini
kemudian dikonfirmasi oleh penentuan X-ray kristalografi. HIV-protease dan pepsin berbagi
urutan Asp-Thr-Gly, secara keseluruhan memiliki kesamaan struktur primer, penghambatan
oleh pepstatine A dan dinonaktifkan oleh mutasi yang diduga situs aktif aspartat karena
semua data menunjukkan bahwa pepsin merupakan bagian dari protease HIV pada kelompok
aspartat. Jadi pepsin assay dapat digunakan untuk pre-screening HIV protease inhibitor.
Maria dkk (2004) juga menggunakan assay sistem untuk screening HIV-protease inhibitor
dari Rapseed hydrolysate protein. Sebuah studi komputasi rinci tentang HIV-1 Protease
inhibitor dilakukan oleh Wesley Schaal.
I.2. Tujuan Penulisan
Penulisan tugas ini bertujuan untuk mempelajari dan memahami penelitian yang
dilakukan oleh Singh dkk. (2013) tentang pepsin assay one of the easiest approach for
prescreening of HIV- protease inhibitor.

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. HIV
HIV merupakan singkatan dari Human Immunodeficiency Virus, yaitu virus penyebab
AIDS atau Acquired Immunodeficiency Syndrome. HIV termasuk ke dalam genus Lentivirus,
yang mana termasuk ke dalam famili Retroviridae. Infeksi virus tersebut pada manusia akan
menyebabkan menurunnya sistem imun secara progresif yang menjadi penyebab terjadinya
berbagai macam infeksi oleh agen oportunistik, bahkan akan berlanjut ke kematian akibat
infeksi tersebut.
Secara klinis, infeksi HIV dapat dibagi menjadi tiga tahap. Tahap pertama disebut
infeksi akut. Pada tahap ini terjadi penyebarluasan virus di dalam tubuh, yang terjadi selama
1-4 minggu pertama setelah infeksi. Respon imun tubuh akan terinduksi, kemudian akan
timbul gejala-gejala klinis yang terkait dengan infeksi primer. Tahap ini ditandai dengan
menurunnya jumlah CD4 T sel, serta kenaikan nilai viral copy dalam plasma akibat tingginya
produksi virus. Pasien yang terinfeksi kemudian masuk ke tahap kedua, yaitu memasuki
periode laten atau tahap kronis infeksi HIV. Lamanya periode laten dipengaruhi oleh
beberapa faktor, salah satunya yaitu usia. Selama periode laten, HIV mulai aktif dalam organ
limfoid, dimana virus dalam jumlah besar berada dalam jaringan dendritik sel folikuler.
Jaringan sekitar organ limfoid akan terinfeksi dan virus akan terakumulasi dalam jaringan
tersebut sebagai virus bebas. Tahap terakhir dari infeksi HIV adalah AIDS yang ditandai
dengan infeksi oportunistik akibat kerusakan sistem imun. Hal ini disebabkan oleh jumlah
CD4 sel T yang menurun dan semakin meningkatnya aktivitas virus.
2.2. Obat Antiretroviral
Antiretroviral

(ARV)

adalah

obat

yang

menghambat

replikasi

Human

Immunodeficiency Virus (HIV). Pengobatan infeksi HIV dengan antiretroviral digunakan

untuk memelihara fungsi kekebalan tubuh mendekati keadaan normal, mencegah
perkembangan penyakit, memperpanjang harapan hidup dan memelihara kualitas hidup
dengan cara menghambat replikasi virus HIV. Karena replikasi aktif HIV menyebabkan
kerusakan progresif sistem imun, menyebabkan berkembangnya infeksi oportunistik,
keganasan (malignasi), penyakit neurologi, penurunan berat badan yang akhirnya mendorong
ke arah kematian.
2.3.

Protease Inhibitor (PI)

4

Protease inhibitors (PI), bekarka berdasarkan pengenalan rankaian asam amino dan
pembelahan protein HIV. PI pada HIV berguna untuk mencegah pembelahan gen Gag-Pol
dan Gag prekursor protein dalam sel yang terinfeksi secara akut dan kronis, menahan
pematangan dengan menghambat kerja enzim protease sehingga mencegah pembentukan
sehingga dengan cara demikian membloking aktivitas inveksi virion yang baru muncul. Aksi
utama dari Protease inhibitor HIV adalah mencegak gelombang infeksi berikutnya. Golongan
ini terdiri dari : Saquinavir, Ritonavir, Nelfinavir, Amprenavir.
2.4. Zingiber officinale (Jahe)
Jahe merupakan tanaman obat dan rempah berupa tumbuhan rumpun berbatang semu
dan merupakan rimpang dari tanaman bernama ilmiah Zingiber officinale Rosc. Jahe berasal
dari Asia Pasifik yang tersebar dari India sampai Cina. Oleh karena itu kedua bangsa ini
disebut-sebut sebagai bangsa yang pertama kali memanfaatkan jahe terutama sebagai bahan
minuman, bumbu masak dan obat-obatan tradisional yang antara lain untuk mengobati
penyakit rematik, asma, stroke, sakit gigi, diabetes, sakit otot, tenggorokan, kram, hipertensi,
mual, demam dan infeksi.
Kandungan senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada tanaman jahe terutama
golongan flavonoida, fenolik, terpenoida, dan minyak atsiri. Adanya kandungan ini diduga
merupakan golongan senyawa bioaktif yang dapat menghambat pertumbuhan bakeri. Hasil
penelitian farmakologi menyatakan bahwa senyawa antioksidan alami dalam jahe cukup
tinggi dan sangat efisien dalam menghambat radikal bebas superoksida dan hidroksil yang
dihasilkan oleh sel-sel kanker, dan bersifat sebagai antikarsinogenik, non-toksik dan
nonmutagenik pada konsentrasi tinggi.

BAB III
5

METODE PENELITIAN
3.1.

Alat

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah spektrofotometer - Karry 100, Sigma
table centrifuge untuk 14000 rpm, Rami untuk 8000 rpm, Micropipette 5-40 l, 400-200 l,
200-1000 l, Eppendorff (1,75ml), Mixer grinder,alu dan mortar, Electronic balance.
3.2.

Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah enzim pepsin (Himedia),

Hemoglobin (Himedia), Ekstrak tanaman, Natrium Asetat Trihidrat (NaC 2H9O5) (Qualigens),
Natrium Klorida (NaCl) ( Himedia), Asam Asetat, Asam Trikloro Asetat (TCA)(Sdfine) dan
bahan tanaman percobaan.
3.3.

Persiapan Ektrak Tanaman

Banyak

tanaman

yang

dipilih

untuk

penelitian

ini,

seperti

Aspargus

recemosus, Zingiber officinele, Aloe barbadensis, tanaman yang memberikan hasil lebih
signifikan. Bagian yang segar bahan tanaman diambil, dicuci dengan di bawah air keran,
masing-masing diambil 5 g , Potong menjadi potongan-potongan kecil, digerus dalam lesung
dan alu, 10 mL destilat water ditambahkan pada tanaman yang telah halus, Centrifuge selama
30 menit pada 8000 rpm. Supernatan dikumpulkan dan pallet dibuang, lalu supernatan
digunakan sebagai ekstrak mentah dari tanaman.
Assay Pepsin untuk penghambatan aktivitas Enzim: pepsin memiliki kemiripan cukup
dekat dalam aktivitas proteolitik dengan HIV-1protease salah satu enzim kunci dari siklus
hidup HIV-1 karena keduanya dari keluarga enzim Aspartat. Jadi di sini kita menggunakan
enzim ini sebagai pengganti dari HIV-1 protease untuk memeriksa aktivitas anti HIV ekstrak
tanaman.
3.4.

Prosedur Pengujian
Untuk pengujian, peneliti menggunakan pepsin 50 g, 800 g hemoglobin (substrat)

dan dan konsentrasi yang berbeda dari masing-masing ekstrak diambil di 500 l dari
campuran reaksi. Campuran diinkubasi selama 20 menit pada suhu 370C. Setelah diinkubasi,
700 l dari 5% TCA ditambahkan untuk menghentikan reaksi, setelah beberapa menit
disentrifugasi pada 14000 rpm selama 5 menit dan supernatan yang diperoleh dikumpulkan.
Densitas optik (DO) diikur dengan spektrofotometri pada 280 nm.

Blanko berbeda

digunakan untuk kedua kontrol positif dan negatif serta untuk sampel. Untuk kontrol positif
6

diambil enzim dan substrat dan dikuti prosedur di atas, dan untuk kontrol negatif (tanpa
ekstrak) digunakan pepstatin A sebagai inhibitor yang dikenal oleh Pepsin dan HIV-Protease.
Dan untuk pengujian sampel diambil ekstrak pada tempat pepstain. Peneliti mengambil tiga
tanaman untuk studi yang memberikan hasil yang hampir sama dengan beberapa
pengulangan, sehingga pengujian ini memberikan hasil yang dapat diproduksi kembali.
Beberapa percobaan dilakukan untuk mendapatkan aktivitas optimum enzim:
Parameter - kisaran optimum
pH : 2- 4
suhu inkubasi : 370C
Masa inkubasi : 20 menit
Sentrifugasi : 14000 rpm
Volume reaksi : 500 L

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1. Hasil
Scanning dari larutan Hemoglobin yang dilakukan pada kisaran panjang gelombang
150 sampai 650 nm. Memberikan tiga puncak, pertama di 206 nm, kedua 280 dan ketiga pada
410 nm (Gambar 4.1). Puncak tertinggi di 206 nm menunjukkan kemungkinan besar
kehadiran dari sejumlah besar ikatan peptida pada protein Hemoglobin, puncak pada 280
karena kehadiran asam amino tirosin dan triptofan dan puncak pada 410 nm mungkin
disebabkan karena adanya Heam grup pada protein. Tapi pada penelitian ini peneliti memilih
puncak pada 280 nm sebagai pengamatan.
Gambar

4.1.

Scanning dari
hemoglobin

menunjukkan

tiga

puncak pada 206

nm, 280

nm dan 410 nm
Peneliti

juga

melakukan

percobaan

untuk

melihat kinetika enzim pepsin; Pada Gambar 4.2 terdapat garis lurus pada peningkatan
konsentrasi hemoglobin dalam kisaran diatas 200- 800 g. Setelah itu peneliti melakukan
assay penghambatan enzim, diambil tiga ekstrak sampel tanaman yaitu Asparagus sp. ,
Zingibersp. dan Alovera sp. dan aktivitas dari enzim yang diamati dan digunakan papestatin
A sebagai kontrol negatif.

Gambar

4.2.

Kinetika enzim (Pepsin) menjaga

konsentrasi
Konstan

Gambar 4.3. Warna biru diagram batang (C) menunjukkan aktivitas enzim dalam tanpa
inhibitor apapun, negligible bar (I) menunjukkan penghambatan maksimum dengan
keberadaan inhibitor pepsin alami (Papestatin A). Ex1, Ex2 dan Ex3 bar menunjukkan
aktivitas enzim dengan adanya ektrak tanaman yang berbeda yaitu Asparagus
racemosus, Zingiber officinale, Aloe barbadensis dan bar biru tengah menunjukkan
perbandingan aktivitas enzim dengan adanya ekstrak tanaman dengan kontrol secara
bersamaan.
4.2. Pembahasan
Penelitian ini bertujuan untuk mengembangkan sistem assay untuk pre screening dari
HIV-1 protease inhibitor dari ekstrak tanaman mentah, seperti penelitian sebelumnya
menunjukkan bahwa pepsin memiliki banyak persamaan dengan HIV protease pada struktur
dan juga fungsi, jadi kita bisa menggunakannya sebagai pengganti HIV protease yang lebih
murah. Banyak kelompok penelitian telah mengembangkan berbagai jenis sistem assay
dengan pepsin. Di sini peneliti menggunakan parameter yang berbeda sesuai dengan
kebutuhan peneliti. Mekanisme dasar pada pengujian ini adalah bahwa ketika melakukan
reaksi dengan mencampur enzim dan substrat dalam vial reaksi dan membiarkan inkubasi
selama beberapa menit, kemudian enzim akan memotong pepsin substrat hemoglobin
menjadi potongan-potongan kecil setelah inkubasi peneliti menambahkan TCA (Asam Tri
Chloro Acetic) untuk menghentikan reaksi dan secara bersamaan partikel protein besar juga
9

bisa diendapkan dalam campuran reaksi dengan disentrifugasi pada 14000 rpm. Penggunaan
absorbansi pada 280 nm, dikarenakan adanya asam amino triptofan dan tirosin yang
dimasukkan kedalam peptida yang dapat larut dari hemoglobin. Dalam percobaan, telah
digunakan ekstrak tumbuhan mentah untuk menguji efek penghambatannya dalam sistem
assay ini. Dan peneliti mengamati efek penghambatan dengan ekstrak mentah dari zingiber
yang memiliki sifat obat, hal ini ditunjukkan pada Gambar 4.3 yang menunjukkan efek yang
signifikan pada aktivitas enzimatik dari pepsin, sementara untuk ekstrak yang lain
(asparagus racemosus, aloe barbadensis) aktivitas enzimatik dari pepsin tidak terpengaruh.
Paptsetin A telah diambil sebagai kontrol, dimana inhibitor alami enzim ini menunjukkan
sekitar 99% mampu bertindak sebagai penghambat aktivitas enzim ini. Selain itu penggunaan
ekstrak tanaman akan menghilangkan kemungkinan efek toksik pada sistem manusia. Hasil
dari penelitian ini akan direproduksi dan peneliti berharapan bahwa sistem pengujian ini akan
mendorong program pra screening HIV-1 protease.

BAB V
KESIMPULAN
Kesimpulan yang diperoleh dari peneitian ini adalah menunjukkan bahwa inhibitor alami
(pepstatin A) sekitar 99% mampu bertindak sebagai penghambat aktivitas enzim pepsin. Jika
dibandingkan dengan ketiga tanaman, ekstrak dari zingiber sp.
memiliki sifat obat terhadap HIV karena memiliki

adalah tanaman yang

efek yang signifikan pada aktivitas

enzimatik dari pepsin. sehingga diharapkan mampu menghambat aktivitas HIV-protease,

10

karena kedua enzim tersebut memiliki sifat dan fungsi yang sama. sehingga ekstrak dari
tanaman Zingiber sp.dapat dijadikan sebagai sumber untuk senyawa antiviral baru yang dapat
berguna dalam perjuangan melawan HIV.

DAFTAR PUSTAKA
Anuya, A., A, Rege., Abhay S. 2014. Chowdhary Evaluation of Shilajit as Putative HIVProtease Inhibitor. International Journal of Advanced Research . 2 (1) :154-157.
Rege A., Dahake, R., Roy S., Chowdhary, A. 2015. Screening of Natural Products for AntiHIV Potential: An In vitro Approach. Immuno Virology. 1(1) : 001-007.
Sigalingging, D.S. 2009. Efen Samping Penggunaan Obat Antiretrovirus Di Rongga Mulut
Pasien HIV/AIDS. Skripsi. FKG-USU.
11

Singh, K.P., Khumar, A., Prasad, R. Pepsin Assay One of the Easiest Approach for Pre
Screening Of HIV- Protease Inhibitor. Journal of Pharmaceutical and Scientific
Innovation. 2(1) : 53-56.
Singh, K.P., Upadhyay, B., Prasad, R., Kumar, A. 2010. Screening Of Adhatoda Vasica Nees
As A Putative Hiv-Protease Inhibitor. Journal of Phytology. 2(4): 7882.

12