m. k.

DASAR TEKNOLOGI MIKROBIAL

TIN 232/1 (2-0)

PROSES HILIR
(Downstream Process)

Dosen : Liesbetini Hartoto

DEPARTEMEN TEKNOLOGI INDUSTRI
PERTANIAN
FATETA IPB
2011

RANAH PROSES HILIR

PROSES HULU
PROSES HILIR

Bahan baku
residu
Persiapan bahan
broth

Fermentasi
Sterilisasi

Penanganan/pembuangan
Residu
filtrat
Pemisahan
Isolasi produk
biomassa
Penanganan/
pembuangan
biomassa
Pembuangan/daur
ulang (recycle)
Pemanfaatan/pembuangan

Downstream after the fermentation process

DIAGRAM ALIR BIOPROSES

Substrat
Pengaturan pH
Penambahan garam
mineral, Sumber C
dan N dll

Energi
Aerasi
Pengukuran
& pengontrolan

Persiapan media
fermentasi

Sterilisasi

Fermentasi

Analisis Pendahuluan
H2O
Teknologi Pencampuran

Inokulum

CO2 dan gas lain

Panas

Pemisahan Biomassa dan

cairan kultur

Biomassa

Isolasi Produk

Residu Fermentasi

Purifikasi Produk &

Formulasi

Residu Fermentasi

Produk Akhir

Pembuangan Residu

Proses hilir : sulit perlu teknik yang tepat dan biaya tinggi

20 60 % total biaya produksi

Cara menurunkan biaya :

1.
Meningkatkan konsentrasi produk yg dihasilkan
- teknologi kultivasi
- rekayasa genetika
2. Proses hilir dibuat lebih efisien

KRITERIA PEMILIHAN
METODE PROSES HILIR

Lokasi produk (intra/ekstraseluler)

Konsentrasi produk dalam cairan kultivasi (broth)
Sifat-sifat kimia dan fisik produk (ukuran partikel, kelarutan,
densitas, difusifitas, muatan dll)
Penggunaan produk pangan, farmasi dll
Standar tingkat kemurnian minimal yang ditentukan
Adanya senyawa pengotor (mis. pigmen) dalam cairan
kultivasi
Harga jual produk

KARAKTERISTIK BIO-PRODUK
1.Konsentrasi rendah dan campuran kompleks
(sel, komponen medium & produk metabolik)
Konsentrasi (g/l)
- PST
30-50
- Etanol
70-120
- Camp.aseton/butil alkohol/etanol
18-20
- Asam organik
40-100
- Antibiotika (Penisilin G)
10-30
- Enzim
2 -5
- Vitamin B-12
0.02
- Riboflavin
10-15
2. Lokasi Produk (intraseluler/ekstraseluler)
3. Labil/sensitif thd pH, suhu, kekuatan ion dll

4. Tidak stabil
pH, suhu, kekuatan ion, jenis pelarut yang digunakan,
dirusak mikroba kontaminan dll
dapat dihindari dengan pendinginan 5oC tapi biayanya
tinggi

5. Gravitas Spesifik partikel hampir sama / kental

menyulitkan sentrifugasi / presipitasi
6. Sel m.o compressible (dapat dimampatkan & lengket)
menyulitkan filtrasi karena terbentuk kerak

TAHAPAN UMUM PROSES HILIR

Cairan Kultivasi/Fermentasi
1.

2.

3.
4.

Pemisahan sel m.o/ partikel tidak larut

(filtrasi, sentrifugasi, sedimentasi)
Isolasi primer
isolasi produk dari cairan kultivasi
pemekatan ( belum murni)
(ekstraksi dengan pelarut, presipitasi, ultrafiltrasi)
Purifikasi
penghilangan, kontaminan
(fractional presipitation, khromatografi)
Isolasi produk tahap akhir
sesuai formulasi/
aplikasi akhir atau distribusi/transportasi
= Polishing

drum/spray drying, pengeringan

beku (freeze drying), kristalisasi

PROSES HILIR IDEAL

Diperoleh

produk berkualitas tinggi

Proses cepat & efisien
Investasi peralatan tidak mahal
Biaya operasi rendah

Pemilihan proses hilir harus tepat

KLASIFIKASI METODE PEMISAHAN

Prinsip pemisahan

Metode
pemisahan

Ukuran partikel
(m)

Ukuran partikel

- Fiberfiltrasi
- Mikrofiltrasi

> 200 10
20 0.5

Ukuran molekul

Ultrafiltrasi
Hiperfiltrasi
Gel Khromatografi
- Dialisis

2 0.005
0.008 0.00025
2 0.0003

- Kristalisasi

< 0.0002

Suhu

0.002 0.00025

KLASIFIKASI METODE PEMISAHAN

Prinsip
pemisahan

Metode
pemisahan

Ukuran partikel
(m)

Kelarutan

-Adsorbsi
-Ekstraksi

< 0.002

Muatan listrik

-Elektroforesis
-Elektrodialisis
-Pertukaran ion

2 0.02
0.02 0.00025
0.02 0.00025

Bobot jenis
(densitas)

-Sedimentasi
-Dekantasi
-Sentrifugasi
-Ultra
sentrifugasi

> 1000
1000 5
1000 0.5
2 0.02

FILTRASI
Pemisahan partikel tersuspensi dari cairan/gas
Menggunakan medium filter berpori yang menahan
partikel (=retentat), tetapi melewatkan cairan/gas (=filtrat)
Proses umum untuk semua skala operasi
.
slurry
.
Filter cake

-- - - - - - - filtrat

filter

PERALATAN FILTRASI
1.

Rotary Vacuum Drum Filter

- drum bersekat yang dilapisi filter kain/logam

dimasukkan tangki cairan kultivasi (bagian yg

terendam 35%)
- filter dilapisi filter aid
(contoh : tanah diatomeae)
- kecepatan berputar
0.1-10 rotasi/menit
Umpan
- vakum dijalankan
melalui pipa drainasi
filtrat terkumpul melalui pipa
di bag dalam drum

Produk

Filtrat

PERALATAN FILTRASI
1.

Rotary Vacuum Drum Filter

- filter cake (kerak) dipotong dengan pisau produk
- penggunaan :
* enzim ekstraseluler
* sel khamir & kapang dll

untuk volume besar &

proses sinambung

2. Leaf Filter
- dapat dioperasikan seperti vacuum/presure filter
- selama filtrasi tidak diputar akhir filtrasi diputar
untuk pembuangan padatan
- Filter aid (tanah diatomeae dll) ditambah pada umpan
- dapat digunakan secara tertutup

Leaf Filter

3. Filter Press
- plate & frame berseri tiap plate dilapisi filter
sederhana dan murah
- Broth ditekan dg tekanan ( 20 bar) padatan
tertahan di bag dlm bejana & filtrat dikeluarkan melalui
saluran pada permukaan plate
- digunakan untuk suspensi yang sulit di-filter (kental)
- tidak memerlukan filter aid
- operasi batch (curah)
- waktu penghilangan cake pembersihan & pemasangan
alat lebih lama

Filter Plate

Filter Press

SENTRIFUGASI
Diperlukan bila :
1)
Pemisahan dgn filtrasi sulit (perbedaan densitas sel & produk
kecil) dan mahal
2)
Sel dan bahan tersuspensi lain harus bebas dari filter aid
3)
Diperlukan pemisahan dgn standar higiene tinggi

Dasar pemikiran :
Pemisahan berdasarkan perbedaan densitas antara
padatan dan cairan & ukuran partikel dan viskositas cairan
medium yang dipercepat dgn gaya sentrifugal
Partikel padatan mengalami akselerasi (percepatan) yang
berbeda

Centrifus : peralatan yang digerakkan dengan motor

contoh berotasi sekitar sumbu, menggunakan
gaya yang tegak lurus thd sumbu.
-Prinsip kerja alat : sedimentasi (Hukum Stokes)
pemisahan partikel bahan berdasarkan perbedaan
densitas
- Faktor yg mempengaruhi laju sedimentasi :
* perbedaan densitas antara sel dgn cairan
* diameter sel
* viskositas cairan
- Sentrifus batch kapasitasnya terbatas tidak cocok untuk
skala besar
- Sentrifus yg digunakan untuk pemisahan sel biasanya
dioperasikan secara sinambung atau semi sinambung

Centrifugation properties of different cell types

Bacteria
Small cell size
Resilient
Yeast cells
Large cells
Resilient
Filamentous fungi
Mycelial
Resilient
Cultured animal cells
Large cells
Very fragile

High

speed required
Low cell damage
Lower

speed required
Low cell damage
Lower

speed required
High water retention in
pellet
Very

susceptible to damage

Industrial centrifuges
bowls, motor drives, cooling jackets
& sludge collection vessels

Tubular bowl

Chamber
Disc
Faktor akselerasi
Tubular centrifuge
13000 17000 g
Chamber centrifuge
6000 11000 g
Disc-stack centrifuge
5000 15000 g

Properties of industrial centrifuges

Tubular

- High centrifugal force

Good

dewatering
Easy to clean
Chamber
Large

solids capacity
Good dewatering
Bowl cooling possible
Disc

type

Solids

discharge
No foaming
Bowl cooling possible

Limited

solids capacity

Foams
Difficult

to recover protein

No

solids discharge
Cleaning difficult
Solids recovery difficult
Poor

dewatering
Difficult to clean

ISOLASI PRODUK
ekstraseluler langsung diekstraksi
Produk
intraseluler pemecahan sel
1. Metode fisika-mekanika
- liquid shear (high-pressure homogenizer)
- solid shear (ekstrusi dg tekanan pd sel mo beku (-25 0C)
- pengadukan dg abrasives (glass ballotini)
- pembekuan & pencairan (kristal es merusak sel)

2. Metode Kimia
- Deterjen (e.g. sodium lauril sufat, Tween, Triton X-100)
- Kejutan osmotik (perubahan mendadak kons. garam)
- Perlakuan dengan alkali (untuk enzim yg tahan alkali)
- Perlakuan dengan enzim (e.g lysozime) kondisi lunak
tapi mahal & purifikasi kompleks

Cell disruption (for intracellular enzymes)

Sonication
Use

of high frequency sound waves to disrupt cell walls

and membranes
Can

be used as continuous lysis method

Better suited to small (lab-scale) operations
Can damage sensitive proteins

Pressure

cells

Apply high pressure to cells; cells fracture as pressure

is abruptly released
Readily

adapted to large-scale and continuous operations

Industry standard (Manton-Gaulin cell disruptor)

Enzymic

lysis

Certain enzymes lyse cell walls

Lysozyme

for bacteria; chitinase for fungi

Only useful on small laboratory scale

ISOLASI PRODUK
1. Ekstraksi Cairan-cairan
Pemisahan komponen suatu cairan dengan penggunaan
pelarut yang dapat melarutkan komponen tersebut
Penentuan jenis pelarut nilai koefisien partisi atau
distribusi (K)

K=

Konsentrasi solut dalam ekstrak

Konsentrasi solut dalam rafinat

K > 0.5 pemisahan lebih mudah ekstraksi 1 tahap

K < 0.1 Ekstraksi bertahap :
- Concurrent (aliran searah)
- Counter Current (aliran berlawanan arah)

Peralatan Ekstraksi dgn Pelarut :

Skala Kecil (Lab) :
separating funnel

Skala Industri :
centrifugal contactors,
spray columns,
pulsed columns
dan mixer-settlers.

Mixer-settler

ISOLASI PRODUK

2.

Destilasi
Untuk pengambilan cairan/pelarut (produk kultivasi, e.g
etanol, aseton, butanol dll )

Tahapan :
a.
Evaporasi pemisahan pelarut dari cairan kultivasi
b.
Pemisahan uap cairan untuk memisahkan pelarut
yang lebih volatil dan kurang volatil
c.
Kondensasi uap untuk mendapatkan pelarut kembali

ISOLASI PRODUK
3. Khromatografi
Isolasi & pemurnian metabolit dengan konsentrasi
rendah
a. Khromatografi Adsorbsi
contoh : untuk antibiotika streptomisin
Adsorbsi senyawa oleh fase padat (absorban). Pemisahan
terjadi karena setiap senyawa diadsorbsi dengan kekuatan
berbeda-beda
senyawa yang diikat paling kuat akan dielusi paling
akhir
Contoh absorban : karbon aktif, Mg oksida, Al oksida,
Al (OH)3, silikat gel

b. Khromatografi Penukar Ion

contoh : untuk antibiotika
Pertukaran antara ion pada fase cair dan fase padat yang
reversible tanpa mengubah strukturnya
Fase padat resin penukar ion
Contoh :
R-COONa+ + streptomycin R-COOstreptomicin+ + NaOH
(resin)
(resin)
R-COOstreptomicin+ + HCl R-COOH + streptomicin+Cl
(resin)
(resin)
Regenerasi Resin : R-COOH + NaOH R-COONa+ + H2O

c. Khromatografi Filtrasi Gel

contoh : untuk vaksin
Pemisahan berdasarkan atas ukuran molekul.
Mol kecil berdifusi ke dalam gel lebih cepat, sehingga
dielusi paling akhir
d. Khromatografi Afinitas
contoh : untuk enzim
- Pemisahan berdasarkan struktur kimia atau fungsinya
interaksi spesifik antara pasangan molekul-molekul
biologis :
a. enzim - substrat
b. enzim - inhibitor
c. antigen - antibodi

POLISHING
(Penyelesaian)
KRISTALISASI
pemisahan padatan dari larutan (teknik pemurnian
senyawa padatan)
- Prinsip : pembentukan padatan kristal dari larutan lewat
jenuh (supersaturated)
Contoh : Produksi asam sitrat
Produksi asam amino ( asam glutamat, lisin)
Produksi asam MSG

Widely used
crystallizer type
(Swenson Draft tube)

http://www.tkk.fi/Units/ChemEng/research/Crystallization/SwenDTB.gif

PENGERINGAN
Agar memudahkan penanganan dan pengangkutan
harus dijaga viabilitas, aktivitas & nilai gizi produk
Sebelum pengeringan dapat disentrifugasi/filtrasi
kadar air produk berkurang, sehingga pengeringan lebih
cepat
Spray drying
Cara pengeringan cairan menggunakan udara panas
cairan dipompa melalui atomizer, sehingga dihasilkan
tetesan halus ke dalam bejana pengering powder

Spray drying

:http://class.fst.ohio-state.edu/.../14Spraydrying.htm

Contoh : Proses Hilir Ragi Roti

Cairan kultivasi S. cerevisiase
Centrifugasi
Pasta Ragi
Rotary Vacuum Filter
(pengeringan)
Tepung Ragi Roti

Filtrat

Proses Hilir Asam Sitrat

Cairan kultivasi A. niger
Rotary Filter

A
Evaporasi

miselium mo

Filtrat + Ca(OH)2

Kristalisasi
Sentrifugasi

Rotary Filter

Kalsium sitrat
Pengeringan
(+) H2SO4
Rotary Filter

Asam sitrat
A

CaSO4

Asam Sitrat

Proses Hilir Penisilin

Cairan kultivasi
Rotary vacuum Filter

Miselia mo

Ekstraksi dg centrifugal extractor

(pelarut : amil asetat/butil asetat)
Evaporasi & Kristalisasi

Re-ekstraksi dg air
(+buffer)
Pengeringan
(vacuum Drier)

Penisilin

Contoh : Formulasi Enzim Deterjen

Protease alkalin dari Bacillus sp

Bentuk awal : dry powder pekerja alergi & gangguan kulit

Formulasi : enkapsulasi :
- debu tak beterbangan
- partikel larut cepat
- tak menghasilkan bau & warna
- daya simpan lebih baik, melindungi thd komponen lain
contoh pemutih (bleaching agent )

Proses Enkapsulasi Protease

Cairan

fermentasi (broth) filtrasi presipitasi enzim

filtrasi pengeringan disaring powder

Formulasi :
enzim powder dicampur aditif penstabil etoxylated-C18-fatty
alcohol terbentuk bola lalu dilapis (minyak parafin atau
PEG) agar tidak berdebu selama penanganan