Targeting 6-Phosphofructosa-2-kinase (PFKFB3) as

A therapeutic Strategy Against Cancer

Brian F. Clem1 , Julie O'Neal1 , Gilles Tapolsky2, Amy L. Clem1 , Yoannis
Imbert Fernandez1 , Daniel A. Kerr II1 , Alden C. Klarer1 , Rebecca
Redman1 , Donald M. Miller1 , John O. Trent1 , Sucheta Telang1 , and
Jason Chesney

Dosen Pengampu : Prof. Dr. M. Nurhalim

Shahib, dr.

OLEH :
NENI ANGGRAENI
(130120150011)

MAGISTER ILMU KEDOKTERAN DASAR

UNPAD
2016

PENDAHULUAN
Karakteristik sel neoplasma adalah meningkatnya penggunaan dan
metabolisme glukosa untuk survive dan berpoliferasi.
Hal ini menjadi dasar gambaran diagnosis, yang dideteksi berdasarkan
emisi sinar gamma yang diemisikan secara tidak langsung oleh deoxy 2fluoro-D- Glukosa yang dimetabolisme oleh sel tumor. (FDG-PET imaging)
Mekanisme meningkatnya penggunaan dan metabolisme glukosa pada
sel tumor merupakan respon pertahanan dari hipoksia melalui faktor
transkripsi (HIF-1), terjadinya perubahan genetika seperti peningkatan
dari c-MYC yg dapat meningkatkan ekspresi transporter glukosa dan
enzim-enzim yg berperan dlm glikolisis (PFK-1, Piruvat kinase, dan LDH).

PENDAHULUAN

Ekspresi protein PFKFB-3 meningkat pada kebanyakan tipe tumor dan

delesi heterogen gen pfkfb3 menurunkan konsentrasi F26BP, penggunaan
glukosa, aliran glikolisis menjadi laktat.

PENDAHULUAN
3-(3-pyridinyl)-1-(4-pyridinyl)-2-propen-1-one (3PO) merupakan antagonis
PFKFB3 dapat menurunkan secara cepat F26BP, penggunaan glukosa,
dan sekresi laktat yg diikuti dengan penurunan jumlah ATP dan NADH dan
dapat menahan progresi sel cycle pada sel jurkat T sel leukimia.
Senyawa ini terbukti mempunyai aktivitas anti tumor pada mencit, namun
perlu diketahui mengenai farmakokinetik dan potensi senyawa ini dalam
melawan aktivitas enzim PFKFB3 sebelum diujikan pada manusia.
Pada penelitian ini, dilakukan sintesis derivat dari 3PO
Dan identifikasi mengenai sebuah inhibitor PFKFB 3 yg baru yaitu PFK15
yg mempunyai kemampuan sebagai anti tumor dan dapat menurunkan
penggunaan FDG dan kadar F26BP dari tumor xenografted,
mendemonstrasikan mampu menjadi agen anti neoplasma dan
mempunyai efek pro-apoptosis

METOD
E

Rekombinan PFKFB3 Assay

Sel line dan Sel kultur
Viabilitas Sel
Pengukuran F26BP
Pengukuran Penggunaan deoxy-Dglucose
ATP assay
Flow Cytometry
Penelitian Farmakokinetik
FDG-PET Imaging
Xenograft

HASIL
Identifikasi kemampuan Beberapa Molekul Kecil
sebagai antagonis PFKFB3
Mensintesis 73 derivat buatan dari 3PO dan menentukan
kemampuannya dalam mengahmbat aktivitas dari protein
rekombinan PFKFB3.
PFK15 lebih kuat menghambat aktivitas PFKFB3 dari pada 3PO.
Hal ini mungkin dikarenakan interaksi cincin quinolinyl
dengan residu ADP/Atp yg merupakan sisi yang akan
berikatang dengn PFKFB3.
Penentuan aktivitas terhadap 96 kinase. Dgn hasill PFK15
secara signifikan tidak menghambat aktivitas 96 kinase, PFK-1,
hexokinase, Phospoglucoseisomerase, PFKFB4. hal ini
membuktikan bahwa PFK-15 hanya bekerja spesifik terhdap
PFKFB3.

HASIL

Identifikasi Molekul
Kecil sebagai
antagonis PFKFB3

HASIL
Inhibisi oleh 3PO & PFK15 terhadap
perkembangan sel kanker, F26BP, Penggunaan
Glukosa, dan ATP
3P
O

60 Cell Line
Secara
invitro

H522 paling
sensitif

3P
O

Vs

PFK15

Sel H522 & Sel

Jurkat
IC50 = H522 : 5,57 M (3PO), 0,72 M
(PFK15)
IC50 = Jurkat : 7,2 M (3PO), 2,42 M
(PFK15)

HASIL
Efek Inhibisi oleh 3PO & PFK15

-Heksokinas
e

INHIBITO
R

F26BP

HASIL
Efek Inhibisi oleh 3PO & PFK15

HASIL
Efek Inhibisi oleh 3PO & PFK15

Jurkat Sel Leukimia

Sel H225 adenocarsinoma

paru

HASIL
Efek Inhibisi oleh 3PO & PFK15

Jurkat Sel Leukimia

Sel H225 adenocarsinoma

paru

HASIL

3PO & PFK15

menyebabkan
terjadinya
apoptosis pada
Jurkat T sel
leuikimia

HASIL

3PO & PFK15

menyebabkan
terjadinya
apoptosis pada
Jurkat T sel
leuikimia

HASIL
Pengujian profil farmakokinetik 3PO & PFK15

Cl
(mL/min/K
g)

T
(Hr)

C max
AUC
(ng/mL) (ng/hr/mL)

Mikroso
m
(min)

3PO

2312

0,3

113

36

1,9

PFK1
5

46,2

5,1

3053

1804

2,9

HASIL
PFK15 Menekan Pertumbuhan sel LLC

Bod
y

Mice diinjeksi dengan suspensi sel LLC. Diukur masa tumor

(mikrokapiler) dan berat badan tikus

HASIL
PFK15 Menekan Pertumbuhan sel LLC
Pengamatan metastase LLC ke paru-paru mencit

HASIL
PFK15 Menekan Pertumbuhan sel LLC
Terjadi penurunan konsentrasi
F26BP

HASIL
PFK15 Menekan Pertumbuhan sel LLC
Terjadi peningkatan jumlah sel yang mengekspresikan
CC3

HASIL
PFK15 Menekan Penggunaan F-FDG oleh LLC
PFK15 dapat mengurangi penggunaan glukosa

HASIL
PFK15 Mempunyai aktivitas Anti-Tumor yg Dapat
Digunakan Sebagai Agen Kemoterapi
Membandingkan aktivitas anti-tumor PFK15 dgn beberapa agen antitumor yg telah ditetapkan oleh FDA

HASIL
PFK15 Mempunyai aktivitas Anti-Tumor yg Dapat
Digunakan Sebagai Agen Kemoterapi

KESIMPULAN

Penelitian ini menjelaskan tentang inhibitor PFKFB yg baru dengan

profil farmakokinetik yg dapat diterima, efek kerja pada
metabolisme, dan mempunyai aktivitas anti-tumor pada mencit
model kanker.
Dgn adanya kemampuan anti tumor ini diharapakan adanya
penelitian lebih lanjut mengenai PFK15 sbg anti-tumor melalui
peneltian Clinical trials.