Anda di halaman 1dari 9

Inhibitor 2

Senyawa 1, 3, 6, 9, 14, 16, dan 28 yang ditemukan inhibitor kompetitif dari tikus porfobilinogen
synthase dengan konstanta inhibisi mulai 0,96-73,04 mM. Senyawa 7, 10, 12,13, 15, 17, 18, dan
26 yang ditemukan inhibitor enzim ireversibel. Untuk inhibitor ireversibel, inhibitor longgar
mengikat ditemukan untuk memberikan inaktivasi kuat. Gugus amino dan karboksil grup analog
yang ditemukan menjadi penting bagi mereka mengikat enzim. Penelitian ini meningkatkan
pemahaman kita tentang situs aktif porfobilinogen synthase.

Ada beberapa perbedaan antara synthase PBG ini dalam hal persyaratan logam mereka,
parameter kinetik, optima pH, inaktivasi oleh inhibitor dan kerentanan terhadap oksidasi. Hal ini
sering mengklaim bahwa hampir semua PBG synthase memerlukan kation divalen untuk
kegiatan dengan enzim hewan menggunakan seng dan tanaman enzim menggunakan
magnesium. Perwakilan dari kedua seng dan magnesium kelas ada di beberapa bakteri [12]. The
PBG synthase manusia dapat mengadopsi non aditif majelis kuaterner yang berbeda (bentuk
morpheein), yang merupakan tetramer tinggi aktivitas, sebuah heksamer aktivitas rendah, dan
dua konformasi dimer struktural yang berbeda [13,14].
Struktur beberapa PBG Sintase dikomplekskan dengan inhibitor 4,7-dioxo asam sebasat, 5fluorolaevulinic, dan beberapa analog bisubstrate telah dipecahkan pada resolusi tinggi [22-24].
Inhibitor ini membentuk dua basis Schiff di situs aktif melibatkan Lys210 serta Lys263 dalam
ragi PBG synthase. Bukti struktural yang baik lysines invarian membentuk basis Schiff dengan
beberapa inhibitor menunjukkan bahwa katalis melibatkan mekanisme Schiff-base ganda.

Untuk membedakan antara dua proposal mekanistik utama, diasam mengandung tujuh atom
karbon (yang menunjukkan bahwa pembentukan ikatan C-C terjadi pertama) atau diasam berisi
sepuluh atom karbon (menyarankan pembentukan ikatan C-N terjadi pertama) diuji sebagai
inhibitor untuk E. coli PBG synthase [27]. The diasam analog yang mengandung sepuluh atom
karbon telah ditemukan untuk menjadi penghambat baik kompetitif atau ireversibel untuk E. coli
PBG synthase, yang mendukung Jordan mekanisme. Namun, studi nanti senyawa ini
menunjukkan bahwa beberapa Sintase PBG dari sumber daya manusia dan lainnya tidak
dihambat oleh senyawa ini [22,28].
Jenis inhibisi inhibitor reversibel ditentukan oleh plot ganda timbal balik dari 1 / V vs 1 / [S].
Nilai-nilai Ki dari inhibitor kompetitif PBG sintase ditentukan oleh Dixon Plot [49]. Koktail
reaksi terkandung buffer, enzim, dan inhibitor, yang diinkubasi pada 37? C selama 10 menit.
Kemudian reaksi dimulai dengan menambahkan substrat. Jika jenis penghambatan inhibitor tidak
kompetitif, mereka IC50 nilai ditentukan bukan nilai-nilai Ki untuk membandingkan potensi
inhibitor.

Semua di atas analog substrat sintetik diuji untuk interaksi mereka dengan tikus PBG synthase
sebagai inhibitor. Beberapa analog substrat yang ditemukan menjadi inhibitor enzim reversibel,
dan konstanta inhibisi mereka (Ki atau IC50) diringkas dalam Tabel 2. Jika jenis penghambatan
inhibitor tidak kompetitif, nilai IC50 ditentukan bukan nilai Ki untuk membandingkan potensi
inhibitor.

JUrnal
OA adalah metabolit sekunder yang terkenal karena aktivitas penghambatan terhadap serin /
treonin protein fosfatase 1 (PP1) dan 2A (PP2A). OA mengikat PP1 dan PP2A dengan Kd 150
nM dan 30 pM, masing-masing, 3 dan pameran kanker mempromosikan activity.4 Sebagai
fosfatase protein sangat dilestarikan enzim, 5 sangat diperlukan untuk banyak proses transduksi
sinyal fisiologis penting, 6 pertanyaan yang telah diajukan tentang mengapa H. okadai
terakumulasi OA dan apakah protein fosfatase di H. okadai ditargetkan oleh OA.

Inhibitor 5
Mengetahui selektivitas inhibitor kinase untuk target mereka adalah penting untuk memprediksi
dan menafsirkan efek inhibitor dalam penelitian dan pengaturan klinis. Namun, selektivitas
inhibitor kinase jarang dinilai di bagian penting dari kinome tersebut. Kemajuan teknologi
terbaru telah menyebabkan pengembangan metode untuk profil sasaran selektivitas kinase
terhadap fraksi yang cukup besar dari 518 protein manusia kinase 7.8. Dalam banyak kasus,
bagaimanapun, metode ini mengukur mengikat molekul kecil untuk kinase, daripada
penghambatan fungsional aktivitas katalitik. Kemampuan tes ini untuk memprediksi hambatan
fungsional sehingga tetap tidak diketahui penting.

Senyawa menunjukkan pola selektivitas yang diinginkan diidentifikasi dan kemudian kimia
dioptimalkan. Pendekatan paralel ini diperkirakan untuk mengidentifikasi inhibitor baru yang tak
terduga untuk kinase menarik dan mengungkapkan inhibitor multitargeted, yang aktivitas

penghambatan difokuskan ke arah sejumlah kecil target kinase spesifik daripada menuju target
utama tunggal 11.12. Memang, inhibitor multitargeted menantang untuk mengidentifikasi oleh
target-sentris layar konvensional 13.
Kami menggunakan uji enzimatik tinggi-throughput untuk melakukan layar paralel skala besar
dari 178 inhibitor kinase dikenal terhadap sebuah panel 300 protein kinase dalam rangkap dua.
Tujuan kami adalah untuk mengidentifikasi baru chemotypes inhibitor untuk target kinase
spesifik dan untuk mengungkapkan kekhususan target panel besar inhibitor kinase. Senyawa
yang diuji merupakan senyawa penelitian yang digunakan secara luas dan agen klinis
menargetkan semua keluarga kinase utama. Kumpulan data yang dihasilkan, untuk pengetahuan
kita yang terbesar dari jenisnya yang tersedia dalam domain publik, terdiri hasil yang dihasilkan
dari> 100.000 tes fungsional independen mengukur penghambatan berpasangan dari enzim
tunggal dengan senyawa tunggal.

Sistematis, analisis kuantitatif dari hasil mengungkapkan kinase yang biasa dihambat oleh
banyak senyawa, kinase yang tahan terhadap penghambatan molekul kecil, dan tak terduga
kegiatan off-target banyak kinase inhibitor yang umum digunakan. Selain itu, kami melaporkan
lead potensial, untuk kinase yatim yang beberapa inhibitor saat ini ada dan titik awal untuk
pengembangan multi kinase inhibitor ditargetkan.

Gambar 1 skala besar analisis interaksi kinase-inhibitor. (a) Distribusi sasaran dimaksudkan
perpustakaan inhibitor, oleh keluarga kinase. (b) Distribusi kinase di panel skrining diwakili oleh
titik biru pada dendrogram mewakili kinome manusia (kinome ilustrasi diadaptasi dan
direproduksi courtesy Cell Signaling Teknologi berdasarkan ref. 33). (c) Tebar plot aktivitas
kinase di ulangan 1 vs meniru 2 untuk setiap kinase inhibitor pasangan yang> 20%
penghambatan aktivitas kinase diamati. (d) dua arah analisis pengelompokan hirarki dari kinaseinhibitor peta interaksi seluruh disajikan sebagai peta panas aktivitas kinase. Sebuah sepenuhnya
berlabel, versi resolusi tinggi dari peta panas ini disajikan dalam Tambahan Gambar 2, sebagai
tabel data di Tambahan Tabel 3 dan melalui Kinase Inhibitor Sumber Daya (KIR) alat online
Ctrl, kontrol.

INHIBITOR4
The asetamido dan karboksamido diganti 3- (1H-indazol-3-il) benzenesulfonamide adalah
inhibitor TTK ampuh. Namun, mereka menampilkan kemampuan sederhana untuk melemahkan
pertumbuhan sel kanker; sifat fisikokimia mereka, dan parameter farmakokinetik petugas, tidak

seperti obat. Dengan menghilangkan kelompok 3-sulfonamide polar dan mencangkok


heterosiklik di 4 posisi cincin fenil, inhibitor poten dengan paparan lisan diperoleh.
Struktur co-kristal X-ray dan model mengikat disempurnakan diperbolehkan untuk struktur
dipandu pendekatan. Optimasi sistematis mengakibatkan inhibitor TTK baru yaitu, 3- (4(heterosiklil fenil) -1H-indazole-5-karboksamida Senyawa menggabungkan 3-hidroksi-8azabicyclo [3.2.1] Octan-8-il sistem bisiklik. Yang ampuh (TTK IC50 <10 nM, HCT116 GI50
<0,1 M), ditampilkan rendah aktivitas dari target (> 500X) dan stabilitas mikrosomal (T1 / 2> 30
menit). Sebuah subset diuji di tikus PK dan xenograft tikus model manusia kanker. Senyawa 75
(CFI-401870) rekapitulasi fenotip TTK RNAi, menunjukkan penghambatan pertumbuhan tumor
pada dosis oral dan terpilih untuk evaluasi praklinis.

TTK telah menerima banyak perhatian dari laboratorium tertarik dalam pengembangan inhibitor
molekul kecil target kanker potensial ini. Struktur perwakilan diberikan dalam Bagan 1. Fitur
struktural yang paling umum yang tergabung dalam inhibitor ini adalah 2- (phenylamino) motif
-pyrimidine ditemukan di AZ 3146,26 Reversine, 27 medium MPS 1-IN-2 dan yang analog 1
(metoksi-Mps1- IN-2, Gambar 1), 28 2 (NMS-P715), 29 dan inhibitor.30 Genentech
Inhibitor TTK telah ditunjukkan untuk menargetkan sel PTEN-kekurangan lebih akut, mungkin
mengeksploitasi aneuploidi yang mendasari mereka dan instability.17 genom Selain perannya
dalam mitosis, TTK telah terlibat dalam the Hedgehog, 19 EGFR20 dan kerusakan DNA jalur
sinyal. TTK mengontrol respon kerusakan DNA dan stabilitas genom oleh fosforilasi sindrom
helikase Bloom (BLM), 21 Chk2 di G2 / M pos pemeriksaan 22 dan c-ABL setelah stress.2
oksidatif.
TTK telah menerima banyak perhatian dari laboratorium tertarik dalam pengembangan inhibitor
molekul kecil target kanker potensial ini. Struktur perwakilan diberikan dalam Bagan 1. Fitur
struktural yang paling umum yang tergabung dalam inhibitor ini adalah motif 2- (phenylamino)
pirimidin ditemukan di AZ 3146,26 Reversine, 27 medium MPS 1-IN-2 dan yang analog 1
(metoksi-medium MPS 1-IN -2, Gambar 1), 28 2 (NMS-P715), 29 dan inhibitor.30 Genentech

Dalam Karakterisasi Analisis kinetik vitro dari TTK inhibitor 75 (Pendukung Informasi)
menegaskan potensi (Ki = 0,7 0,5 nM) dan sifat kompetitif ATP dari pengikatan (yaitu KmApp
meningkat dengan dosis). Namun, variasi Vmax selama rentang konsentrasi menunjukkan
kinetika campuran untuk inhibitor ini. Senyawa 75 diuji terhadap sebuah panel yang luas kinase
manusia dan hasilnya ditampilkan sebagai peta panas pada Gambar 5. senyawa itu secara
substansial lebih selektif dari sunitinib dan sebanding dengan imatinib, yang diukur dengan
jumlah kinase dari target hit. Setengah konsentrasi hambat maksimal ditentukan bagi mereka
kinase yang paling poten menghambat (Tabel 8).

Inhibitor 3
Abstark
Novel diganti inhibitor piridin-berasal dari monocarboxylate transporter 1 (MCT1), target
muncul untuk terapi kanker, dilaporkan. Aktivitas senyawa ini sebagai inhibitor transportasi
laktat dikonfirmasi menggunakan alat tes transportasi 14C-laktat, dan potensi mereka terhadap
MCT1-mengekspresikan sel tumor manusia didirikan menggunakan tes MTT. Empat senyawa
yang paling ampuh menunjukkan aktivitas antikanker substansial (EC50 37-150 nM) vs MCT1mengekspresikan sel limfoma Raji manusia.
Banyak inhibitor MCT1 lemah (yaitu, mereka efektif pada tinggi tingkat mikromolar) telah
dijelaskan, termasuk -siano-4- hydroxycinnamate, 10,11 stilbene disulfonat, 12 Phloretin, 13
dan flavonoids.14 terkait Coumarin diturunkan inhibitor kovalen MCT juga baru-baru ini
disclosed.15,16 Penghambat MCT1 yang dikenal paling kuat adalah pyridazinones pyrrolo dan
thienopyrimidine diones (misalnya, senyawa 1-2, Gambar 1).
Senyawa ini, dan untuk pengetahuan kita semua inhibitor MCT1 belum dijelaskan, dual inhibitor
MCT1 / MCT2. MCT2 memiliki homologi urutan yang sangat tinggi dengan MCT1, namun
kemungkinan memiliki peran lebih rendah daripada MCT1 dan MCT4 untuk transportasi
monocarboxylate pada kanker manusia berdasarkan studi ekspresi. Namun, penghambatan
MCT2 mungkin memainkan peran dalam potensi efek off-target agen saat ini yang bisa timbul
dari memblokir transportasi laktat dalam sel normal.
Peningkatan inhibitor MCT1 bisa diakses dengan melakukan tambahan hubungan aktivitas
struktur (SAR) studi sekitar perancah 1. Memang, menuju tujuan ini kami telah membuat
beberapa perbaikan dalam strategi sintetis asli Astrazeneca untuk 1,25 Namun, pendekatan yang
lebih diinginkan adalah untuk mencari perancah alternatif untuk MCT1 penghambatan yang
mudah disintesis dan yang dapat membentuk kontak transporter yang sama seperti yang
dilakukan senyawa 1-2. Kami dianggap [6,6] sistem cincin heterosiklik sebagai alternatif untuk
[6,5] sistem cincin hadir dalam senyawa 1-2, mengharapkan perbedaan SAR dan mungkin
mendukung rantai samping dan substituen yang positif akan mengubah sifat fisik MCT1 yang
dihasilkan inhibitor.

Inhibitory

Pengukuran harian sekresi HBsAg Gambar. 4C) mengkonfirmasi bahwa efek dari ribozimdan
vektor kontrol mengikuti tren yang sama dengan waktu. Efek penghambatan lebih rendah dalam
katalis aktifvektor, dan seperti efek pada ekspresi EGFR, pHBx: Rz21651 menghambat sekresi
HBsAg lebih efektif daripada pHBx: Rz11
Efek penghambatan ribosom pada sekresi HBsAg kurang ditandai dari penghambatan mereka
ekspresi EGFR yang dapat dideteksi in situ. Namun, korelasi antara efek dari masing-masing
urutan ribozim encoding pada HBsAg sekresi dan ekspresi EGFP menunjukkan bahwa dalam
deteksi situ ekspresi EGFP menggunakan vektor yang kami jelaskan adalah indeks ekspresi gen
HBV.

Kami sebelumnya menunjukkan efek penghambatan 10- 23 DNAzyme (dribs dan drabs) dengan
substrat-pengakuan domain dari tujuh deoksinukleotida masing-masing pada ekspres.
Ketika masing-masing DNAzymes yang cotransfected di AD293 sel dengan HBX-EGFP
ekspresi fusion plasmid mengandung HBX-EGFP gen fusi, DrzHBVX- 7, DrzHBVX-8 dan DRZ
HBX-9 semua mengurangi ekspresi HBX-EGFP, tingkat HBX-EGFP mRNA yang juga
mengurangi secara dramatis oleh DNAzymes. Selain itu, kekhususan dan efisiensi efek
penghambatan oleh DNAzymes ini juga ditunjukkan. Semua hasil menunjukkan bahwa
DNAzyme bisa menghambat ekspresi gen HBV X in vitro, yang berguna untuk mengembangkan
strategi untuk terapi gen penyakit hati yang disebabkan oleh HBV.

Penghambatan HIV-1 Ekspresi Gen oleh DNA Novel Enzim Target untuk Cleaved HIV-1 RNA
TAR: Efektivitas potensial terhadap Semua HIV-1 Isolat

Penghambatan angiogenik Dimediasi oleh DNAzyme Itu Targetkan Vascular Endothelial


Faktor pertumbuhan Receptor 21
Satu target potensial untuk terapi DNAzyme adalah angiogenesis tumor padat. Telah diakui
bahwa pertumbuhan dan metastasis tumor padat membutuhkan angiogenesis gigih dan bahwa
induksi angiogenesis adalah komponen diskrit fenotip tumor (10). VEGF dan reseptor serumpun
yang (VEGFR 1 dan 2) merupakan faktor penting
dalam keseimbangan antara aktivasi dan inhibisi angiogenesis. Beberapa laporan menunjukkan
utilitas terapi gen antiangiogenic pada model tikus yang menderita tumor (11, 12) telah
menunjukkan aktivitas antitumor sederhana. Saat ini, tidak ada antisense dan hanya satu
ribozyme terapi angiogenik menargetkan VEGFR dalam uji klinis (13, 14). Akibatnya, strategi
terapi gen dan oligonukleotida baru dan operator yang menargetkan angiogenesis penting untuk
menentukan pendekatan ditingkatkan. Dalam studi ini, kami menjelajahi penggunaan DNAzyme
sintetis menargetkan transkrip VEGFR2 sebagai alat potensial untuk menghambat angiogenesis
tumor. The VEGFR2 DNAzyme ditemukan untuk membelah substrat secara efisien, untuk
menghambat proliferasi sel endotel dengan penurunan seiring VEGFR2 mRNA, dan untuk
menghambat pertumbuhan tumor in vivo.
Singkatnya, ini adalah studi pertama yang menunjukkan penghambatan pertumbuhan tumor in
vivo dengan RNA-membelah DNAzyme. DNAzyme ini, menargetkan VEGFR2, menunjukkan
aktivitas antitumor yang lebih tinggi daripada kontrol ODN, yang mengindikasikan potensi
keuntungan sebagai biokatalis dalam terapi oligonukleotida. Untuk memperpanjang manfaat dari

DNAzyme untuk terapi sistemik, salah satu pendekatan yang kita mengejar adalah
pengembangan operator endosomolytic lebih efisien dan spesifik (40, 41).
Meskipun tantangan dalam pengiriman sistemik ODNs, selektif, pertumbuhan penghambatan
sifat VEGFR2 DNAzyme menunjukkan bahwa DNAzymes mungkin menjadi tambahan yang
berharga untuk armamentarium terapi antiangiogenic.

Kinesin Spindle Protein (KSP) Inhibitor. 9. Penemuan (2S) -4- (2,5-Difluorophenyl) -N - [(3R,
4S) - 3-fluoro-1-methylpiperidin-4-il] -2- (hidroksimetil) N-metil 2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirol-1karboksamida (MK-0731) untuk Pengobatan Kanker taxane-Refractory
Penghambatan protein kinesin spindle (KSP) adalah mekanisme baru untuk pengobatan kanker
dengan potensi untuk mengatasi keterbatasan yang terkait dengan agen sitotoksik saat ini
bekerja. Disini, kami menggambarkan C2- hidroksimetil dihydropyrrole KSP inhibitor (11) yang
menghindari saluran hERG mengikat dan miskin dalam potensi vivo, isu-isu yang terbatas
senyawa awal dari program kami. Namun, pengenalan kelompok C2-hidroksimetil disebabkan
11 menjadi substrat untuk penghabisan seluler oleh P-glikoprotein (PGP). Memanfaatkan
pengetahuan yang dikumpulkan dari inhibitor KSP sebelumnya, kami menemukan bahwa?
-fluorination Termodulasi pKa dari piperidin nitrogen dan mengurangi PGP penghabisan, tetapi
senyawa yang dihasilkan (14) yang dihasilkan metabolit beracun in vivo. Pendirian fluor dalam
strategis, posisi metabolik jinak oleh sintesis N-metil 3-fluoro-4- (aminomethyl) piperidin urea
menyebabkan senyawa 30 yang memiliki optimal in vitro dan profil metabolik. Majemuk 30
(MK-0731) baru-baru ini belajar di fase I uji klinis pada pasien dengan taxane tumor padat tahan
api.

Inhibitor KSP memiliki beberapa keunggulan dibandingkan dengan racun spindle tradisional
sebagai agen kemoterapi. Sejak mekanisme kerjanya hanya mempengaruhi sel-sel membagi,
inhibitor KSP tidak diharapkan untuk menyebabkan neuropati perifer, efek samping dikaitkan
dengan gangguan jaringan tubulin dalam neuron dan menyebabkan penghentian taxane atau
Vinca pengobatan alkaloid dalam beberapa patients.6 Selain itu, inhibitor KSP dapat efektif
dalam sel-sel kanker yang tahan api untuk spindle racun karena berlebih dari P-glikoprotein
(PGP) atau tubulin mutations.10 Akhirnya, KSP inhibitor yang larut dalam air akan menghindari
rezim dosis berat yang digunakan untuk administrasi taxane, sebuah berair kendaraan yang
memerlukan premedikasi untuk mencegah toksisitas kendaraan terkait.
Dalam serangkaian publikasi terakhir, kami diungkapkan penelitian kami

upaya yang dimulai dengan screening tinggi-throughput (HTS) hit dan memuncak dalam desain
yang kuat dan selektif KSP inhibitor 1 dan 2 (Bagan 1) 0,13 Meskipun senyawa ini
menggambarkan bahwa sintesis yang larut dalam air inhibitor KSP dengan aktivitas antimitosis
di garis sel PGP-overexpressing layak, 1 memiliki miskin aktivitas in vivo dalam uji xenograft
mouse, 14 sedangkan 2 dan senyawa terkait menunjukkan tingkat yang tidak dapat diterima
afinitas untuk manusia eter-a-go-go gen terkait (hERG) channel.13b Disini, kami
mengungkapkan seri baru inhibitor C2-hidroksimetil dihydropyrrole KSP diperoleh hibridisasi 1
dan 2. ini baru seri mengatasi masalah yang terkait dengan senyawa kami sebelumnya dan
menyebabkan calon klinis untuk pengobatan kanker taxane-tahan api. struktural yang
membentuk kedua lysines invarian Schiff basis dengan beberapa inhibitor menunjukkan bahwa
katalis melibatkan mekanisme Schiff-dasar ganda.