PENGARUH ESTER ASAM LEMAK TAK JENUH

TESTOSTERON TERHADAP NEURAL, PARAMETER

PERILAKU DAN HORMONAL TIKUS JANTAN
DALAM UJI FORMALIN

MAKALAH
Disusun untuk Memenuhi Tugas Kelompok
pada Mata Kuliah Endokrin Semester Enam
yang Diampu oleh Dr. Enny Yusuf Wachidah Yuniwarti, MP
dan Dra. Tyas Rini Saraswati, MKes

OLEH:
M. Adnan Jafar Alfian
Adhitya Naufal Pribadhi

(24020113130072)
(24020113140077)

JURUSAN BIOLOGI
FAKULTAS SAINS DAN MATEMATIKA
UNIVERSITAS DIPONEGORO
SEMARANG
2016

KATA PENGANTAR
Puji dan syukur penulis panjatkan ke hadirat Tuhan Yang Maha Esa karena
berkat limpahan Rahmat dan Karunia-Nya sehingga penulis dapat menyusun
makalah ini tepat pada waktunya. Makalah ini membahas tentang Pengaruh Ester
Asam Lemak Tak Jenuh Testosteron Terhadap Neural, Parameter Perilaku Dan
Hormonal Tikus Jantan Dalam Uji Formalin
Dalam penyusunan makalah ini, penulis berterima kasih kepada dosen
pengampu mata kuliah Endokrinologi Ibu Dr. Enny Yusuf Wachidah Yuniwarti,
MP dan Dra. Tyas Rini Saraswati, MKes beserta semua pihak yang membantu
dalam kelancaran penulisan karya ilmiah ini.
Penulis menyadari bahwa makalah ini masih jauh dari kesempurnaan baik
dari bentuk penyusunan maupun materinya. Kritik konstruktif dari pembaca
sangat penulis harapkan untuk penyempurnaan makalah selanjutnya.
Semoga makalah ini dapat bermanfaat bagi semua pembaca.

Semarang, 11 April 2016

Penulis

DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR..............................................................................................ii
DAFTAR ISI...........................................................................................................iii
BAB I PENDAHULUAN........................................................................................1
1.1.

Latar Belakang..........................................................................................1

1.2.

Tujuan........................................................................................................3

BAB II ISI................................................................................................................4
2.1.

Bahan dan Metode.....................................................................................4

2.2.

Hasil Penelitian........................................................................................10

2.3.

Pembahasan.............................................................................................16

BAB III PENUTUP...............................................................................................20

3.1.

Kesimpulan..............................................................................................20

DAFTAR PUSTAKA.............................................................................................21

BAB I
PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Testosteron (T) semakin dikenali sebagai modulator proses SSP
(Sistem Saraf Pusat) selain berkaitan dengan reproduksi. Kadar serum T
yang cukup diperlukan oleh laki-laki dan perempuan untuk pertumbuhan
sel, penyembuhan, pemeliharaan massa otot dan tulang, serta pemeliharaan
reseptor SSP opioid, pembatas darah-otak dan aktifitas dopaminnorepinefrin. Fungsi penting lainnya terlibat dalam modulasi dan terjadinya
nyeri. Memang, banyak studi menunjukkan bahwa testosteron dan
metabolitnya dapat mempengaruhi penyebab nyeri melalui kedua sinyal
yang cepat dan lambat. Bukti tidak langsung dari tindakan ini adalah fakta
bahwa perempuan menderita sindrom nyeri kronis lebih dari laki-laki yang
terkena dan ada korelasi negatif antara kadar T dan nyeri, yaitu nyeri yang
lebih rendah pada subyek dengan kadar T yang lebih tinggi. Kami telah
melaporkan efek menguntungkan dari terapi penggantian testosteron pada
pasien yang terkena penyakit kronis yang diberikan hipogonadisme dengan
asumsi kronis opioid. Dalam penelitian eksperimental, testosteron
ditunjukkan menjadi analgesik dalam berbagai tes nociceptive. Selain itu,
sebuah penelitian terbaru pada manusia menunjukkan kemampuan T untuk
memodulasi penurunan hambatan jalur nyeri pada wanita.
Testosteron adalah penyedia androgen pada pria maupun wanita. Hal
ini dianggap sebagai pro-hormon karena kebanyakan dari tindakantindakannya tergantung pada enzim yang hadir dalam sel: 5-reduktase
menguranginya menjadi dihidrotestosteron (DHT) yang bertindak seperti T
pada reseptor androgen (AR); aromatase aromatizes menjadi estradiol (E2)
yang bekerja pada reseptor estrogen (ER dan ER). Kedua AR dan ER
secara luas didistribusikan ke seluruh CNS, misalnya sumsum tulang
belakang, hippocampus dan target hipotalamus untuk tindakan hormon

gonad yang terlibat dalam berbagai aspek modulasi nyeri. Secara khusus,
hippocampus sebagian besar terlibat dalam gairah, belajar dan memori dan
dapat memainkan peran penting dalam modulasi nyeri, seperti yang
ditunjukkan oleh pendekatan eksperimental yang berbeda di kedua hewan
dan subyek manusia. ER diketahui terlibat dalam fungsi-fungsi ini; memang
ER dan ER memiliki banyak efek meningkatkan pada plastisitas saraf,
perilaku yang berhubungan dengan kesadaran dan suasana hati, dan proses
degeneratif.
Akibat penuaan atau iatrogenik penyebab, kadar testosteron secara
substansial menurun dan pasien hipogonadisme mungkin mengalami gejala
defisiensi androgen termasuk disfungsi seksual, suasana hati dysphoric
(kecemasan, mudah marah dan depresi), menurunnya kesehatan, kelelahan
fisik, perubahan kognisi, kehilangan memori insomnia, keluhan arthritis,
dan sakit. Peningkatan kadar gonadotropin, tetapi tidak sex steroid, secara
signifikan berhubungan dengan nyeri muskuloskeletal pada pria. Penelitian
terbaru juga menunjukkan tindakan positif dari T pada kontrol berat badan
pada pasien obesitas. Senyawa testosteron biasanya didasarkan pada T
diesterifikasikan dengan molekul yang berbeda. Salah satu persiapan jangka
panjang yang paling sering digunakan adalah T diesterifikasikan dengan
asam lemak jenuh (FA) undecanoate untuk mendapatkan testosteron
undecanoate (TN). Namun, asam lemak jenuh diesterifikasikan dengan T
dapat dihidrolisis dan mengikuti jalur metabolisme yang mungkin
berkontribusi terhadap penyakit jantung. Oleh karena itu, kami telah
menjelajahi kemungkinan untuk menciptakan zat baru di mana T
diesterifikasi dengan asam lemak tak jenuh. Ester ini juga bisa memiliki
efek menguntungkan pada gangguan kronis, termasuk pencegahan
hiperkolesterolemia, aterosklerosis dan penyakit inflamasi.
Reseptor estrogen tersebar luas di otak. Aksi neuroprotektif reseptor
dirangkum dalam sebuah tinjauan terbaru dimana fokusnya adalah astrosit
disamping efek yang dikenal pada neuron. Dalam astrosit, estrogen secara
aktif disintesis dari testosteron melalui aromatase. Proses ini dapat sangat
meningkatkan dengan adanya cedera melalui peningkatan aktivitas

aromatase. Kami telah menunjukkan modulasi kuat aromatase oleh morfin

pada percobaan in vitro pada astrosit. Atas dasar itulah peneliti melakukan
penelitian tentang Pengaruh Ester Asam Lemak Tak Jenuh Testosteron
Terhadap Neural, Parameter Perilaku Dan Hormonal Tikus Jantan Dalam
Uji Formalin.
1.2. Tujuan
Tujuan utama dari penelitian ini adalah untuk meneliti saraf, efek
perilaku dan hormonal dari kadar testosteron supraphysiological yang dipicu
dengan injeksi subkutan sintesis T ester baru (testosteron-oleat: TO,
testosteron-linoleat: TL, testosteron-eicosapentaenoic acid: TEPA) ke gonad
tikus dengan memperhatikan testosteron undecanoate yang tersedia secara
komersial (Testosteron Nebido, TN), yang digunakan sebagai senyawa
acuan. Kami meneliti efek dari berbagai perlakuan T ester terhadap perilaku
spontan dan induksi formalin, kadar testosteron dan dihidrotestosteron
(DHT) plasma, dan tingkat ER dan ER di hippocampus, hipotalamus dan
sumsum tulang belakang.

BAB II
ISI
2.1. Bahan dan Metode
2.1.1. Subjek
Tiga puluh enam tikus jantan Wistar Han (Harlan-Nissan,
Milan, Italia), dengan berat awal 200-225 gram, dua ekor
ditempatkan setiap kandang plastik dengan alas serbuk gergaji.
Setiap kandang, hewan dipisahkan dengan dinding kaca transparan
berlubang untuk interaksi sosial parsial. Kandang disimpan pada
suhu kamar 21C 1c, kelembaban relatif 60% 10% dan pada 12/
12 h cahaya/ siklus gelap (cahaya dimatikan jam 7:00 pagi). Hewan
diberi pakan dan air ad libitum.
2.1.2. Prosedur Penelitian
Percobaan dilakukan selama masa aktif tikus 09:30 a.m.
-12:30 p.m. di ruang khusus dengan penerangan lampu merah dan
noise latar belakang putih. Prosedur eksperimen telah disetujui
oleh komite etika dari Universitas Siena dan Lembaga Nasional
untuk percobaan hewan hidup. Dalam semua percobaan, perhatian
diberikan terhadap peraturan untuk menangani hewan laboratorium
dari Petunjuk Komunitas Dewan Eropa (86/609 / EEC) dan
pedoman etika bagi penelitian percobaan rasa sakit pada hewan
hidup yang dikeluarkan oleh Komite ad hoc dari Asosiasi
Internasional untuk Studi Rasa Sakit. Upaya khusus yang dibuat
untuk meminimalkan penderitaan hewan dan untuk mengurangi
jumlah hewan yang digunakan.
Satu minggu setelah bahan uji datang, tikus-tikus itu diacak
tiap satu kelompok eksperimen (n = 6 per kelompok) sesuai dengan
substansi akan mereka menerima: T-undecanoate (TN, Nebido,
Bayer), T-oleat (TO) , Linoleat (TLT-eicosapentaenoic acid
(TEPA). Semua obat dilarutkan dalam minyak almond manis
(minyak, transport, Laboratorio Farmaceutico Veneto Farve, Italia)
4

diperoleh 1 mg/ml larutan untuk diberikan kepada hewan dengan

dosis 1 mg/Kg/mati sesuai dengan penentuan terbaru berdasarkan
berat badan hewan. Kelompoknya adalah:. NAIVE (tanpa subtansi
yang diberikan) dan OIL, TN, TO, TL dan TEPA (semua diinjeksi
subkutan dengan zat yang relevan).
Semua hewan diberi perlakuan dari hari 1 sampai hari 7 (7
hari). Perlakuan terdiri dari injeksi subkutan disalah satu subtansi
di punggung hewan. Setelah injeksi, tikus itu kembali ke kandang.
Untuk mengevaluasi kemungkinan perubahan dalam perilaku
spontan dan cemas setelah 5 hari perlakuan, semua tikus dikenai
uji lapangan terbuka (OF) selama 30 menit dan untuk peningkatan
ditambah tes labirin selama 5 menit pada hari 5. Pada hari 6, semua
tikus yang dikenai uji formalin untuk mengevaluasi efek dari
tanggapan pengobatan terhadap stimulus nociceptive: setelah
menerima injeksi subkutan formalin encer (50 l, 5%) di kaki
dorsal belakangnya, mereka ditempatkan di lapangan terbuka dan
tingkah laku mereka direkam selama 60 menit. Hari berikutnya
sampai hari terakhir perlakuan subkutan (hari 8), hewan-hewan itu
dibius dan perfusi jaringan dan pengumpulan darah.
2.1.3. Uji Lapangan Terbuka
Tes ini dilakukan untuk mempelajari efek induksi perlakuan
pada perilaku umum. Subyek diuji dalam suatu lapangan terbuka
setelah 5 hari pengobatan. Kedua subjek dari setiap kandang yang
bersamaan diangkut ke ruang eksperimental (disertakan dengan
lampu merah dan noise backround putih) dan ditempatkan di
lapangan terbuka identik terdiri dari persegi kandang Plexiglass (50
50 cm, tinggi 40 cm). Selama uji (30 menit), perilaku spontan
direkam dan dianalisis dalam enam periode 5 menit. Perilaku
spontan dianggap adalah: membesarkan frekuensi (berapa kali
hewan berdiri dengan kaki depan), durasi perawatan diri (waktu
yang dihabiskan mencuci atau menggaruk wajah atau tubuh),
durasi bergerak (waktu yang dihabiskan mengendus dan

menjelajahi lingkungan), durasi duduk siaga (waktu yang

dihabiskan bergerak dalam posisi siaga), mendekam (waktu yang
dihabiskan bergerak dalam posisi tidur seperti); aktivitas bergerak
juga dievaluasi dengan menghitung persimpangan bagian dalam
(jumlah kali hewan melintasi kotak internal) dan silang luar
(jumlah kali hewan melintasi kotak eksternal).
2.1.4. Peningkatan Penambahan Labirin (Hari ke 5)
Penambahan labirin terdiri dari dua lengan terbuka (50 10
cm) dan dua lengan tertutup (tinggi 501040 cm) saling
berhadapan pada 50 cm di atas lantai. Pada awal pengujian, tikus
ditempatkan di pusat peningkatan penambahan labirin dan
kemudian dibiarkan bebas menjelajahi selama 5 menit. Ruang
pengujian itu tenang dan menyala dengan lampu merah redup. Tes
ini dilakukan segera setelah tes OF. Waktu hewan menghabiskan
waktu menjelajahi lengan terbuka dianggap untuk analisis statistik.
2.1.5. Uji Formalin (Hari ke 6)
Untuk evaluasi efek perlakuan induksi terhadap peradangan
persisten nyeri, kedua subjek dari kandang bersamaan diangkut ke
ruang percobaan pada hari 6. Mereka dikendalikan dan injeksi
subkutan dengan larutan formalin (5% di 0,9% NaCl dalam jarum
suntik mikro) pada tepat permukaan dorsal kaki belakang. Setelah
injeksi, tikus ditempatkan di lapangan terbuka selama 60 menit.
Untuk penilaian intensitas nyeri dan efek perilaku pengobatan,
spontan dan formalin, perilaku direkam selama 60 menit dan
dianalisis dalam dua belas periode 5 menit. perilaku yang dianalisis
adalah:
1)

Tanggapan penginduksian formalin: durasi menjilati (waktu

yang dihabiskan menjilati kaki yang telah disuntik); Durasi
meregangkan (waktu yang dihabiskan dengan kaki menahan
lantai, tertekuk dekat dengan tubuh); frekuensi gerakan kaki
(jumlah fase lengkungan kaki).

2)

Perilaku spontan: perilaku yang sama yang dianalisis dalam

uji lapangan terbuka dianggap, yaitu membesarkan frekuensi,
perawata diri, gerakan, durasi duduk siaga dan berjongkok;
aktivitas bergerak (penghitungan persilangan dalam dan
persilangan luar).

2.1.6. Pengumpulan Jaringan (Hari ke 8)

Dua puluh empat jam setelah perlakuan terakhir dilakukan
pada Hari ke 7, tikus dibius dengan natrium pentobarbital (> 100
mg / kg i.p.) dan perut dibuka untuk mengumpulkan darah. Tikustikus itu kemudian diperfusi intracardial dengan phosfat buffered
saline (PBS, sekitar 300 ml) untuk exsanguination dari CNS.
Sumsum tulang belakang, hipotalamus dan hipokampus kemudian
dikumpulkan. Jaringan dibagi menjadi bagian-bagian, segera
dibekukan dalam nitrogen cair dan disimpan pada -80C untuk
analisis western blot dan isolasi RNA.
2.1.7.
Ekstraksi RNA dan Quantitative Real-Time Polymerase
Chain Reaction (qRT-PCR)
RNA total dari hipotalamus, hipokampus dan sumsum
tulang belakang diekstraksi dan dimurnikan dengan miRNeasy
Mini kit (Qiagen, Valencia, CA) mengikuti instruksi yang telah
tersedia. Konsentrasi RNA ditentukan dengan NanoDrop ND-100
spektrofotometer. qRT-PCR dilakukan untuk memantau tingkat
ekspresi gen dari ER dan ER. Lima ratus nanogram RNA yang
di reverse transkripsi dengan kit iScript Syntesis cDNA (Bio-Rad)
selama 5 menit pada 25C, 30 menit pada 42C dan 5 menit pada
85C. Satu mikroliter cDNA diperkuat oleh RT-PCR menggunakan
Opticon II (Bio-Rad) dan SsoFast Evagreen Master Mix (Bio-Rad)
sesuai dengan instruksi yang ada. Empat puluh siklus PCR
dilakukan menggunakan suhu pendinginan dari 56C untuk ER
dan 58C untuk ER. Primer secara khusus dirancang antara dua
ekson yang berdekatan dan disintesis oleh MWG. Tingkat mRNA

untuk setiap gen yang dinormalisasi dengan yang Cyclophilin dan

ekspresi gen dianalisis menggunakan metode Ct.
Urutan primer adalah:
1) ER
Forward: AATTCTGACAATCGACGCCAG;
Reverse: GTGCTTCAACATTCTCCCTCCTC.
2) ER
Forward: AAAGCCAAGAGAAACGGTGGGCAT;
Reverse: GCCAATCATGTGCACCAGTTCCTT.
3) Cyclofilin
Forward: ACACGCCATAATGGCACTGG;
Reverse: ATTTGCCATGGACAAGATGCC.
2.1.8. Western Blot
Hipotalamus, hipokampus dan sumsum tulang belakang
sampel jaringan yang homogen (menggunakan penghomogen
jaringan) di buffer RIPA-B (20 mmol / l buffer natrium fosfat , 150
mmol / l NaCl, 5 mmol / l EDTA, 1% Triton X-100, dan 0,5%
natrium deoksikolat) dilengkapi dengan satu tablet yang lengkap,
Mini EDTA bebas cocktail inhibitor protease (Diagnosa Roche,
Mannheim, Jerman) dan natrium orthovanadate (1 mmol / l, pH
7.4). The homogenates diperjelas dengan sentrifugasi pada 15.000
g selama 15 menit pada 4C dan siap untuk analisis imunoblot.
Konsentrasi total protein ditentukan melalui protokol uji
protein Bio-Rad Dc (Bio-Rad, Hercules, CA). Diikuti dengan
analisis spektrofotometri menggunakan TECAN Genios plate
reader dan software Magellan versi 4.0. Jumlah protein yang sama
(50 mg) di loading dengan baik, lalu dipisahkan pada gel SDSPAGE (10% gradient gel; Bio-Rad, Hercules, CA) dan ditransfer
ke membran nitroselulosa (Millipore, Bedford, MA). Membran
dihalangi dengan 3% susu dan diinkubasi semalam pada suhu 4C
dengan antibodi primer: antibodi ER kelinci poliklonal (1: 500;
Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) dan antibodi ER
8

kelinci poliklonal (1: 500; Santa Cruz Biotechnology , Santa Cruz,

CA). Inkubasi antibodi primer dengan inkubasi selama 1 jam pada
suhu kamar dengan antibodi sekunder lobak dikonjugasikan
dengan peroxidase (1: 3000; Bio-Rad kambing anti-kelinci). Blotblot divisualisasikan dengan peningkatan larutan kemiluminesensi
(HRP deteksi kemiluminesens kit, Bio-Rad) selama 5 menit dan
terpapar Film X-ray (Thermo ilmiah, Pierce Bioteknologi,
Rockford, IL, USA) selama 5 - 20 menit. protein yang diloading
bersamaan dipastikan dengan pewarnaan blots dengan 10% (v/v)
larutan Ponceau S (2% Ponceau S di 30% trikloroasetat acid / 30%
asam sulfosalicylic, Sigma Chemical Co).
2.1.9. Determinasi Hormon
Sampel darah diambil dari vena perut dengan jarum suntik
yang ditambahkan EDTA. Darah disentrifugasi (3000 g selama 10
menit pada 4C) untuk memperoleh plasma kemudian sampel
dibekukan pada suhu 20C sampai pengujian dilakukan. Pengujian
ADVIA Centaur, sebuah uji imun kompetitif menggunakan
teknologi chemiluminescent langsung, digunakan untuk mengukur
testosteron (T) dan dihidrotestosteron (DHT) tingkat plasma.
koefisien variasi pengujian intra dan pengujian inter adalah
masing-masing 5% dan 8% untuk semua penentuan.
2.1.10. Analisis Statistik
Data respon sakit diolah dengan analisis varians (ANOVA)
dengan faktor perlakuan (lima tingkatan: OIL, TN, TO, TL, TEPA)
dan Waktu (dua belas interval 5-menit), sedangkan tingkah laku
spontan dicatat selama tes formalin dan uji lapangan terbuka
dianalisis sebagai nilai total dari masing-masing perilaku dengan
faktor perlakuan (lima tingkatan: OIL, TN, TO, TL, TEPA).
Kemudian ditambah labirin, hormon, western blot dan data RTPCR yang diproses oleh dengan one-way ANOVA dengan faktor
perlakuan (lima tingkatan: OIL, TN, TO, TL, TEPA), diikuti oleh
uji Bonferroni post-hoc. GraphPad Prism Versi 4.0 (GraphPad

10

Software, Inc., San Diego, CA) digunakan dan tingkat signifikansi

yang ditentukan pada (*) p <0,05.

2.2. Hasil Penelitian

Berat dan kondisi fisik umum dari setiap tikus diperiksa selama fase
percobaan. Tidak ada perubahan berat badan yang abnormal atau tanda-tanda
gangguan fisik sewaktu diamati.
2.2.1.

Pengaruh Perlakuan pada Reseptor Estrogen (ER dan ER)

Tingkat mRNA
Tingkat mRNA dari ER dan ER ditentukan secara kuantitatif
RT-PCR pada sampel hipotalamus dan hipokampus. Dalam Gambar
1, data digambarkan sebagai perubahan kali lipat terhadap tingkat naif
(ekspresi gen=1).
Untuk ekspresi gen ER di hipokampus (Gambar 1 (A)), efek
yang signifikan dari perlakuan (F4,19 = 2,244, p = 0,0002) adalah
karena perbedaan antara kelompok: TN menunjukkan tingkat yang
lebih tinggi daripada OIL (p <0,01), TO (p <0,05) dan TL (p <0,001);
Selain itu, TEPA memiliki tingkat lebih tinggi dari TL (p <0,05). Di
hipotalamus (Gambar 1 (B)), efek yang signifikan Perlakuan (F4,29 =
6.300, p = 0,0012) disebabkan karena tingkat yang lebih rendah di TO
dan TL dari pada OIL (p <0,01 untuk keduanya).
Untuk ekspresi gen ER di hipokampus (Gambar 1 (C)), TL
memiliki tingkat lebih tinggi dari OIL (p <0,05) (Perlakuan: F 4,29 =
3,421, p = 0,0231). Tidak ada pengaruh yang signifikan dari perlakuan
yang ditemukan hipotalamus (F4,29 = 2,2431, p = 0,0931) (Gambar 1
(D)).

10

11

2.2.2. Pengaruh Perlakuan pada tingkat SSP ER dan Er

Kami melakukan analisis western blot untuk membuktikan
efek perlakuan pada protein ER dan Er di hipotalamus,
hipokampus dan sumsum tulang belakang. Di hipotalamus dan
hipokampus, ekspresi ER terdeteksi sebagai sebuah pita ER
berukuran panjang sebesar 66 kDa dan pita imunoreaktif lain
sebesar 52 KDa, sebagaimana yang telah dilaporkan. Tidak ada
tingkat protein ER terdeteksi yang ditemukan pada sumsum
tulang belakang.
One-way ANOVA menunjukkan tidak ada pengaruh yang
signifikan dari perlakuan di tingkat ER pada hippocampus ( F4,12 =
1,441, p = 0,3053, Gambar 2 (A)) atau di hipotalamus (F4,13 =
3,316, p = 0,0625, Gambar 2 (B)).
Di daerah SSP yang sama, ekspresi protein ER terdeteksi
sebagai suatu pita tunggal sebesar 55 kDa.
Ada pengaruh yang signifikan dari perlakuan di tingkat
ER pada sumsum tulang belakang (F 4,16 = 3,466, p = 0,0421,
Gambar 3 (A)) disebabkan oleh tingkat yang lebih rendah pada
hewan yang diperlakuan TEPA atau OIL (p < 0,05).

11

12

2.2.3. Data Perilaku

2.2.3.1. Lapangan Terbuka (30 min)
One way ANOVA diaplikasikan pada total tingkah
laku spontan yang dicatat selama uji lapangan terbuka
dengan faktor perlakuan (lima tingkatan: OIL, TN, TO, TL,
TEPA, lihat Tabel 1). Ada pengaruh yang signifikan dari
perlakuan pada durasi merawat diri (F5,30 = 3,232, p =
0,02), karena TO menunjukkan nilai yang lebih tinggi
daripada OIL (p <0,01), TN (p <0,01) dan TL (p <0,01).
Durasi

mendekam

berbeda

secara

signifikan

antar

kelompok (F5,30 = 2,804, p = 0,034): TO lebih tinggi dari

OIL dan TEPA (p <0,01 dan p <0,04, masing-masing) dan
TL lebih tinggi dibandingkan OIL (p <0,01). Duduk
waspada dan durasi bergerak dan frekuensi mengasuh tidak
terpengaruh oleh perlakuan.
Aktivitas bergerak

juga

dievaluasi

dengan

menghitung dari persimpangan internal dan eksternal.

Namun, perlakuan memiliki dampak yang signifikan hanya
pada persimpangan internal yang (F 5,30 = 2,73, p = 0,038):
TL menunjukkan persimpangan internal yang lebih rendah
dari OIL dan TN (p <0,004, p <0,05, masing-masing)
2.2.3.2.

sementara TEPA lebih rendah dibandingkan OIL (p <0,03).

Penambahan labirin

12

13

One way ANOVA diterapkan pada waktu yang

dihabiskan oleh hewan untuk berjelajah tidak ditemukan
2.2.3.3.

adanya perbedaan yang signifikan antar kelompok.

Uji Formalin

1) Respon Pemberian Nyeri

Respon pemberian formalin dianalisis dengan
pengulangan pengukuran ANOVA yang diterapkan
untuk setiap respon nyeri (menjilat, meregangkan dan
sentakan kaki yang disuntik) dengan faktor perlakuan
(lima tingkatan: OIL, TN, TO, TL, TEPA) dan waktu
(dua belas 5- min interval).
2) Mengais-ngais
Ada kecenderungan

yang

kuat

terhadap

perlakuan yang signifikan interaksi waktu (F 44,275 =

1,3914, p = 0.060). analisis post-hoc mengungkapkan
beberapa signifikansi yang perlu digaris bawahi
sehubungan respon saraf. Secara khusus, TO memiliki
tingkat lebih rendah dari OIL pada 20 dan 50 menit (p
<0,01 dan p <0,03, masing-masing), sedangkan TN
lebih tinggi dari OIL 35-45 min (p <0,04 dan p <0,01,
masing-masing) (Gambar 4 (A)).
3) Menjilat
Durasi menjilat hanya

dipengaruhi

oleh

perlakuan pada fase pertama (0 - 5 menit) (F 4,25 = 32,98,

p = 0,038) disebabkan oleh tingkat yang lebih tinggi
pada OIL daripada TN (p <0,01), TO (p <0,04) dan TL
13

14

(p <0,004). Tidak ada perbedaan yang signifikan antar

kelompok yang ditemukan di tahap kedua (Gambar 4
(B)).
4) Flexing
Pengulangan

pengukuran

ANOVA

tidak

ditemukan adanya perbedaan yang signifikan antar

kelompok di meregangkan durasi (Gambar 4 (C)).

14

15

2.2.4. Tingkat hormon Plasma

Efek
perlakuan

pada

tingkat

testosteron

dan

dihidrotestosteron plasma diperiksa pada akhir percobaan. One

way ANOVA tidak ditemukan adanya perbedaan yang signifikan
antar kelompok (Gambar 5).

15

16

2.3. Pembahasan
Hasil utama dari penelitian ini menunjukkan bahwa ekspresi ER RNA
dan tingkat protein sensitif terhadap perlakuan dengan ester testosteron,
meskipun berbeda dalam dua jenis ER. Ester T yang digunakan dalam
penelitian ini diperoleh dengan menggabungkan molekul T dengan asam
lemak tak jenuh yang menyajikan derajat yang berbeda dari ketidakjenuhan
yang dimiliki oleh keluarga asam lemak dominan: oleat, linoleat dan asam
eicosapentaenoic (EPA). Senyawa ini (T-oleat, T-linoleat dan T-EPA) yang
ditemukan stabil dan tidak beracun dalam fibroblas dan astrosit. Jadi
memungkinkan untuk melakukan in vivo pada tikus jantan. Dalam subjek ini,
tingkah laku spontan dan testosteron dan tingkat plasma DHT tidak signifikan
dipengaruhi oleh perlakuan, hal ini menunjukkan bahwa semua senyawa yang
dimetabolisme tanpa campur tangan yang jelas dengan sistem saraf dan
endokrin. Namun, perubahan penting yang diamati pada ekspresi ER RNA
dan tingkat protein Otak, menunjukkan kemungkinan efek jangka panjang
pada fungsi kognitif.
Estrogen dikenal untuk mengatur perhatian, belajar dan memori, tetapi
juga memiliki tindakan saraf mampu menangkal peradangan atau cedera otak
lainnya. Selain itu, ada usulan yang kuat bahwa estrogen memainkan peran
kunci dalam terjadinya sakit dan modulasi baik melalui ER dan ER
reseptor. Semenjak diketahui testosteron adalah sumber utama estrogen di
otak (neuron dan astrosit harus mempunyai P450 Arom untuk mengubah T
menjadi estradiol), memahami bagaimana testosteron yang beredar dapat
mengatur ekspresi reseptor estrogen penting. Bahkan perubahan dalam
ketersediaan protein ER dan ER dalam neuron sensorik dapat
mempengaruhi sensitivitas mereka terhadap estrogen. Dalam penelitian ini,
kami meneliti kadar protein ER dan mRNA pada hipotalamus, hipokampus
dan sumsum tulang belakang menggunakan regulasi baik isoform ER sebagai
parameter untuk respon estrogen (dalam hal ini untuk estrogen yang
diproduksi secara lokal) dan untuk menyelidiki modulasi setelah dilakukan
manipulasi hormonal.

16

17

Setiap perlaukan memiliki pengaruh yang kuat dan independen

terhadap transkripsi dan ekspresi dari kedua reseptor estrogen. Sementara TN
meningkat ER pada hipokampus, TL tidak hanya diblokir pada peningkatan
ini, tetapi cenderung menurunkan ER di daerah otak ini. Menariknya ER
menunjukkan efek yang sama sekali berbeda karena tingkat yang lebih tinggi
berada pada kelompok TL. Di hipotalamus, ER yang mengalami penurunan
pada kelompok TO dan TL, sementara ER tidak mengalami perubahan.
Perubahan serupa juga ditemukan pada tingkat protein ER.
Penggunaan seluruh jaringan bisa menutupi perubahan induksi-T pada
gen dan protein ekspresi yang neuron-spesifik, misalnya T mungkin berbedabeda mengatur gen dan ekspresi protein tergantung pada jenis neuron/sel.
Namun demikian, hasilnya sangat konsisten, menunjukkan bahwa FA yang
berbeda melekat pada molekul T berbeda sehingga mempengaruhi interaksi
dengan sel. Menariknya, tingkat transkripsi tinggi tidak diterjemahkan ke
dalam peningkatan ekspresi protein, dan sebaliknya. Meskipun pola ekspresi
protein sering cocok dengan pola ekspresi mRNA, ada contoh di mana tingkat
protein ER tidak berkorelasi dengan ekspresi ER mRNA.
Estrogen menggunakan efek mereka melalui mekanisme genomik dan
non-genomik; bahkan aktivasi mereka mengubah ekspresi gen tertentu dan
neurotransmitter dalam neuron sensorik. Baru-baru ini menunjukkan bahwa
terjadi aktivasi astrosit setelah cedera atau hasil peradangan dalam
peningkatan ekspresi ER dan de novo ekspresi aromatase. Di sumsum tulang
belakang, ER ditemukan memediasi efek pro-nociceptive estradiol pada
pemrosesan sinyal visceral melalui aktivasi jalur MAPK. Selanjutnya, ER
knockout tikus menunjukkan respon nociceptive lebih rendah dari jenis tikus
liar. Temuan ini sangat menarik dengan mengingat ini hasil awal
menunjukkan bahwa zat modulasi ER dan ER positif dapat memodulasi
rasa nyeri atau peradangan pada umumnya.
Telah terbukti bahwa ekspresi ER diatur oleh estrogen di otak sebagai
umpan balik auto-regulasi. Selain itu, Patisaul et al. (1999) menjelaskan
bahwa ekspresi ER dan ER mRNA diatur oleh estrogen pada daerah khusus
di otak tikus. Mekanisme molekuler yang mendasari regulasi ekspresi ER

17

18

oleh testosteron belum dijelaskan. Namun, karena aromatase merupakan

enzim kunci untuk sintesis estrogen dari androgen dan bertanggung jawab
untuk mengendalikan rasio androgen/estrogen, ada kemungkinan bahwa
regulasi pelepasan protein ER hadir dalam beberapa kelompok perlakuan
kami mungkin karena peningkatan bioseintesis estrogen lokal yang dihasilkan
dari testosteron yang beredar. Dalam neuron hipokampus, produksi estrogen
mediasi aromatase tampaknya terlibat dalam auto/mekanisme umpan balik
parakrin untuk mengatur ER dan ER ekspresi. Sangat mungkin bahwa
estrogen menginduksi proteolisis mediasi proteasome ER dan ER, sebuah
sistem yang bertanggung jawab untuk degradasi kebanyakan protein dalam
sel mamalia. Cepatnya degradasi protein estrogen dapat menjelaskan
penurunan cepat dari protein ER dengan perlakuan testosteron tanpa
perubahan pada tingkat ER mRNA. Dengan kata lain, testosteron dapat
bertindak pasca-transcriptionally untuk mengatur pelepasan kadar protein
ER dan ER. Mekanisme ini saat ini tidak diketahui. Meskipun demikian,
ada kemungkinan testosteron mengaktifkan proteolisis dengan menginduksi
ekspresi kinase yang mengaktifkan jalur proteasome ubiquitin.
Sementara aksi molekul hormon steroid yang dimediasi oleh reseptor
telah dipelajari secara ekstensif di otak dan pada jaringan perifer, jauh lebih
sedikit yang diketahui tentang mekanisme molekuler yang mengatur ekspresi
reseptor hormon steroid sendiri. Namun, mekanisme yang mendasari regulasi
ER oleh testosteron mungkin melibatkan transkripsi yang berbeda dan / atau
peristiwa pasca-transkripsi yang kemungkinan akan menjadi sel dan jaringan
spesifik seperti jenis kelamin tertentu. Asam lemak tak jenuh ganda (PUFA)
yang telah dikenal dan banyak dimanfaatkan karena berbagai efek biologis
mereka, khususnya yang berkaitan dengan sistem kardiovaskular.
Berdasarkan bukti terbaru, kami memiliki hipotesis bahwa aksi analgesik
menunjukkan testosteron akan diperkuat oleh suplementasi testosteron
dengan asam lemak tak jenuh ganda (PUFA) (n - 3). karena asam lemak n - 3
dapat memodulasi jalur metabolisme inflamasi. Kami menggunakan uji
formalin karena memudahkan kuantifikasi intensitas nyeri tanpa gangguan
eksternal. Setelah disuntikkan pada kaki, iritasi yang disebabkan respon rasa

18

19

nyeri yang dapat dengan mudah diukur. Dengan demikian, model ini dapat
digunakan untuk mengevaluasi modulasi kondisi inflamasi dengan perlakuan
testosteron. Respon induksi formalin menunjukan efek analgesik yang
berbeda dari perlakuan tergantung pada T-ester yang digunakan: TO dan TL
yang analgesik baik dari segi mengais-ngais dan menjilat, sementara tidak ada
penurunan respon ini hadir dalam kelompok TN.
Oleh karena itu, ester baru ini melibatkan asam lemak tak jenuh yang
penting bisa memainkan peran dalam perlakuan nyeri kronis, karena tidak
hanya efek anti-inflamasi tetapi juga kemampuan mereka untuk
meningkatkan stabilitas dan farmakokinetik testosteron. Untuk alasan ini,
kombinasi dari n - 3 PUFA dengan testosteron bisa mewakili pendekatan yang
menarik dalam terapi hormon pengganti.

19

BAB III
PENUTUP
3.1. Kesimpulan
Tingkah laku dan respon kesakitan ditemukan selama uji formalin,
hormon (Testosteron dan dihidrotestosteron, DHT) yang ditemukan dalam
darah, sedangkan reseptor estrogen (ER dan ) yang terdeteksi pada tingkat
genom dan proteomik dalam hippocampus, hipotalamus dan sumsum tulang
belakang. Di hippocampus, tingkat ER dan ER mRNA meningkat seiring
dengan perlakuan TN dan TL (T-oleat) sehubungan dengan OIL, sedangkan di
hipotalamus TO dan TL mengalami penurunan pada tingkat ER mRNA.
Pada tingkat proteomik, TO, TL dan TEPA menurunkan kadar ER di
hipotalamus, sedangkan TEPA menurunkan ER di sumsum tulang belakang,
hippocampus dan hipotalamus. Tidak ada efek dari perlakuan terhadap
tingkah laku, sedangkan kelompok TO dan TL menunjukkan perilaku
kesakitan rendah (frekuensi mengais dan durasi menjilati) daripada kelompok
OIL. Perlakuan tidak berpengaruh terhadap kadar T dan DHT dalam plasma.
Hasil ini jelas menunjukkan kemungkinan rasa sakit dan ER modulasi oleh Tester.

20

DAFTAR PUSTAKA
Petroni, A., et al. 2014. Effects of Unsaturated Fatty Acid Esters of Testosterone
on Neuronal, Behavioral and Hormonal Parameters in Male Rats Subjected
to the Formalin Test. Open Journal of Endocrine and Metabolic Diseases
(SciRes). Vol 4 Halaman 167-179

21