Anda di halaman 1dari 17

POTENSI ANTIKANKER KOMBINASI FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOL AKAR PASAK BUMI (Eurycoma longifolia Jack) DENGAN DOXORUBICIN TERHADAP EKSPRESI INTERLEUKIN-10 PADA TIKUS BETINA GALUR SPRAGUE DAWLEY YANG DIINDUKSI DMBA

SKRIPSI

BETINA GALUR SPRAGUE DAWLEY YANG DIINDUKSI DMBA SKRIPSI Oleh: Gika Idfi Nugrahani 12023227 FAKULTAS FARMASI

Oleh:

Gika Idfi Nugrahani

12023227

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS AHMAD DAHLAN YOGYAKARTA

2016

i

POTENSI ANTIKANKER KOMBINASI FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOL AKAR PASAK BUMI (Eurycoma longifolia Jack) DENGAN DOXORUBICIN TERHADAP EKSPRESI INTERLEUKIN-10 PADA TIKUS BETINA GALUR SPRAGUE DAWLEY YANG DIINDUKSI DMBA

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat dalam Mencapai Derajat Sarjana Farmasi (S. Farm) Program Studi
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat dalam
Mencapai Derajat Sarjana Farmasi (S. Farm)
Program Studi Ilmu Farmasi
Universitas Ahmad Dahlan
Yogyakarta
Oleh:
Gika Idfi Nugrahani
12023227

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS AHMAD DAHLAN YOGYAKARTA

2015

i

HALAMAN PENGESAHAN SKRIPSI ii

HALAMAN PENGESAHAN SKRIPSI

ii

Lampiran 2

PERNYATAAN TIDAK PLAGIAT

Saya yang bertanda tangan di bawah ini:

Nama

: Gika Idfi Nugrahani

NIM

: 12023227

Email : gikaidfi33@gmail.com

Fakultas

: Farmasi

Program Studi: Farmasi

Judul tugas akhir : Potensi Antikanker Kombinasi Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Akar Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack) dengan Doxorubicin terhadap Ekspresi IL-10 pada Tikus Betina Galur Sprague Dawley yang Diinduksi DMBA

Dengan ini menyatakan bahwa:

1. Hasil karya yang saya serahkan ini adalah asli dan belum pernah diajukan untuk mendapatkan gelar kesarjanaan baik di Universitas Ahmad Dahlan maupun di institusi pendidikan lainnya.

2. Hasil karya saya ini bukan saduran/terjemahan melainkan merupakan gagasan, rumusan, dan hasil pelaksanaan penelitian/implementasi saya sendiri, tanpa bantuan pihak lain, kecuali arahan pembimbing akademik dan narasumber penelitian.

3. Hasil karya saya ini merupakan hasil revisi terakhir setelah diujikan yang telah diketahui dan disetujui oleh pembimbing.

4. Dalam karya saya ini tidak terdapat karya atau pendapat yang telah ditulis

atau dipublikasikan orang lain, kecuali yang digunakan sebagai acuan dalam naskah dengan menyebutkan nama pengarang dan dicantumkan dalam daftar pustaka. Pernyataan ini saya buat dengan sesungguhnya. Apabila di kemudian hari terbukti ada penyimpangan dan ketidakbenaran dalam pernyataan ini maka saya bersedia

menerima sanksi akademik berupa pencabutan gelar yang telah diperoleh karena karya saya ini, serta sanksi lain yang sesuai dengan ketentuan yang berlaku di Universitas Ahmad Dahlan.

iii

Yogyakarta, 11 April 2016

yang sesuai dengan ketentuan yang berlaku di Universitas Ahmad Dahlan. iii Yogyakarta, 11 April 2016 Gika

Gika Idfi Nugrahani

iv

iv

PERNYATAAN

Yang bertandatangan di bawah ini:

Nama

: Gika Idfi Nugrahani

NIM

: 12023227

Program Studi

: S1 Farmasi

Fakultas

: Farmasi

Judul Penelitian

: Potensi Antikanker Kombinasi Fraksi Etil Asetat Ekstrak

Etanol Akar Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack) dengan

Doxorubicin Terhadap Ekspresi Interleukin-10 pada Tikus

Betina Galur Sparague Dawley yang Diinduksi DMBA

Menyatakan dengan sebenar-benarnya bahwa penelitian ini adalah hasil karya

sendiri dan sepanjang pengetahuan saya tidak bersifat materi yang dipublikasikan

atau ditulis orang lain atau digunakan untuk menyelesaikan studi di perguruan

tinggi lain kecuali pada bagian-bagian tertentu yang saya ambil sebagai acuan.

Apabila terbukti pernyataan ini tidak benar, sepenuhnya menjadi tanggung jawab

saya.

Yogyakarta, 09 Februari 2016

v

Yang menyatakan

benar, sepenuhnya menjadi tanggung jawab saya. Yogyakarta, 09 Februari 2016 v Yang menyatakan Gika Idfi Nugrahani

Gika Idfi Nugrahani

12023227

HALAMAN PERSEMBAHAN

HALAMAN PERSEMBAHAN Karya ini ku persembahkan untuk: Allah SWT yang Maha Pengasih dan Pemurah Atas izin

Karya ini ku persembahkan untuk:

Allah SWT yang Maha Pengasih dan Pemurah

Atas izin dari Nya skripsi ini dapat terselesaikan, rasa syukur atas semua kemudahan dan petunjuk yang telah diberikan oleh Nya.

Kedua orang tuaku, Bapak Tugino dan Ibu Ikah Imtikhanah

Terima kasih selalu memberikan doa disetiap sujudmu, dukungan, nanormal, dan motivasi serta segala kasih sayang yang senantiasa mengalir setiap detiknya. Semoga Allah SWT memberikan kenormalan dan rahmat-Nya kepada kita semua.

Adikku, Gina Isna Nafisa

Terimakasih atas pengertian dan dukungannya.

Sahabat-sahabat seperjuangan, Jetli, Titik, Fitri, Melinda, Asahi, Amar, Ahya, Farih, Fatin, Ema, Amar, Okta, Hanif, Ikhsan, Anas, Kak Fuad, Kak Ambon, dan HW UAD, alamamater 86, Kelas C 2012, FKK B 2012, tim hibah pasca Balqis, Dwi, Yeni, Dian, Septi, Nopia, Anggi, Cici, Luthfi

Terimakasih telah menemaniku dikala suka maupun duka.

Dosen Pembimbingku Ibu Dr. Laela Hayu Nurani, M.Si., Apt

yang telah meluangkan waktu untuk berbagi ilmu dan membimbingku dengan sabar selama ini sehingga bisa menyelesaikan skripsi ini.

Semua penderita kanker di dunia

Dosen Farmasi UAD dan Almamaterku

vi

KATA PENGANTAR

Assalamu’alaikum Wr.Wb. Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat, hidayah dan karunia-Nya sehingga skripsi yang berjudul Potensi Antikanker Kombinasi Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Akar Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack) dengan Doxorubicin Terhadap Ekspresi IL-10 Pada Tikus Betina Galur Sprague Dawley (SD) yang Dipapar DMBAini dapat diselesaikan. Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat dalam mencapai derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Program Studi Farmasi, Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan Yogyakarta. Penelitian ini merupakan salah satu bagian proyek hibah tim pascasarjana Universitas Ahmad Dahlan yang berjudul Potensi Efek Antikanker Kombinasi Fraksi Etil Asetat Akar Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack) dengan Obat Kemoterapi Kanker yang diketuai oleh Dr. Laela Hayu Nurani, M.Si., Apt. Kanker payudara merupakan salah satu penyebab kematian tertinggi di dunia. Penggunaan jangka panjang agen kemoterapi doxorubicin sering menimbulkan berbagai efek samping yang tidak diinginkan salah satunya adalah penurunan sistem imun. Oleh karena itu dibutuhkan suatu agen ko-kemoterapi untuk mengurangi toksisitasnya. Akar pasak bumi diketahui memiliki zat aktif eurycomanone sebagai antikanker dengan mekanisme imunomodulator. Penelitian

ini bertujuan untuk mengetahui efek ko-kemoterapi fraksi etil asetat ekstrak etanol akar pasak bumi dengan doxorubicin dilihat dari ekpresi IL-10 pada hewan uji yang diinduksi DMBA. Tersusunnya skripsi ini tidak lepas dari bantuan, dorongan, bimbingan, serta nasihat, dari berbagai pihak untuk itu penulis mengucapkan terima kasih kepada:

1. Dr. Laela Hayu Nurani, M.Si., Apt. Selaku Dosen Pembimbing Utama yang telah memberikan bimbingan, pengarahan, dan semangat dari awal penulisan skripsi hingga terselesaikannya skripsi ini.

2. Dr. Nurkhasanah, M.Si., Apt Sebagai Dosen Penguji I yang telah memberikan pengarahan dan saran untuk penyusunan skripsi ini.

vii

3. Dr. Kintoko, S.F., M.Sc., Apt sebagai Dosen Penguji II yang telah memberikan pengarahan dan saran untuk penyusunan skripsi ini.

4. Drs. Kasiyarno, M. Hum. selaku Rektor Universitas Ahmad Dahlan Yogyakarta.

5. Dr. Dyah Aryani Perwitasari, M.Si., Ph.D., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan

6. Ibu Imaniar Noor Faridah, M.Si., Apt. selaku Dosen wali yang senantiasa memberikan bimbingan dan nanormal akademik.

7. Bapak dan Ibu Dosen Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan yang telah memberikan bekal ilmunya kepada penulis selama proses studi.

8. Bapak Yunadir di Laboratorium Patologi Anatomi FK UGM, atas kerjasama beliau dalam pembuatan preparat mikroskopik

9. Keluarga besar Bapak Tugino dan Ibu Ikah Imtikhanah yang dengan penuh kasih sayang dan kesabaran telah memberikan segala bentuk dukungan moril dan materiil kepada penulis untuk menyelesaikan studi.

10. Dian, Septi, Balqis, Anggi, Cici, Fitri, Yeni, Nopia, Dwi, Melinda dan Lutfi , terima kasih atas kerjasama, bantuan dan motivasi kalian.

11. Teman-teman angkatan 2012, khususnya kelas C & FKKB Fakultas Farmasi

UAD, almamater 86, HW UAD, dan berbagai pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu yang telah membantu sehingga skripsi ini dapat terselesaikan. Semoga Allah SWT memberikan balasan yang lebih baik atas semua yang telah diberikan kepada penulis. Penulis menyadari bahwa dalam penulisan skripsi

ini masih jauh dari kesempurnaan. Dengan kerendahan hati, penulis berharap semoga hasil penelitian ini dapat memberikan manfaat bagi perkembangan ilmu farmasi khususnya dan ilmu pengetahuan pada umumnya, bagi penyusun maupun pembaca. Wassalamu’alaikum, Wr., Wb.

viii

Yogyakarta, 11 April 2016

umumnya, bagi penyusun maupun pembaca. Wassalamu’alaikum, Wr., Wb. viii Yogyakarta, 11 April 2016 Gika Idfi Nugrahani

Gika Idfi Nugrahani

x
x

DAFTAR TABEL

Tabel I. Berat rendemen ekstrak etanol akar pasak bumi

33

Tabel II. Perbandingan R f standar, fraksi etil asetat ekstrak etanol akar pasak bumi dan ekstrak etanol akar pasak bumi

36

Tabel III. Persen Rata-rata Ekspresi IL-10 pada Masing-masing Kelompok Hewan Uji Aktivitas Ko-Kemoterapi Fraksi Etil Asetat Akar Pasak Bumi dengan Doxorubicin

39

xi

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Metabolisme metabolit DMBA yang menyebabkan imunosupresif (Gao et al., 2007)

Gambar 2.

Struktur Kimia Doxorubicin (Bruton et al., 2005)

Gambar 3.

Tanaman Akar Pasak Bumi (Anonim, 2008)

Gambar 4.

Struktur Kimia Eurycomanone (Chan et al., 2004)

Gambar 5.

Kerangka berfikir penelitian

Gambar 6. Rancangan Penelitian Potensi Antikanker Kombinasi Fraksi til

Asetat Ekstrak Etanol Akar Pasak Bumi terhadap Ekspresi IL-10 pada Tikus Betina Galur SD yang Dipapar Gambar 7. Rumus Perhitungan Ekspresi IL-10 Gambar 8. Profil kromatografi lapis tipis UV 366 nm dengan elusi dari bawah ke atas pada skala 1-8 cm, a. Standar kuersetin, b. Fraksi larut etil asetat akar pasak bumi, c. Ekstrak etanol akar pasak bumi

Gambar 9.

Gambar 10. Ekspresi IL-10 Kombinasi Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Akar

Pasak Bumi dan Doxorubicin pada Tikus Betina Galur SD yang Diinduksi DMBA

Foto Mikroskopi Hasil Pengecatan Imunohistokimia IL-10

xii

7

10

13

14

20

21

30

35

38

41

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat Ethical Clearance

53

Lampiran 2. Surat Izin Penelitian

54

Lampiran 3. Hasil Determinasi Akar Pasak Bumi

55

Lampiran 4. Proses Pembuatan Fraksi etil asetat ekstak etanol akar pasak bumi

57

Lampiran 5. Perhitungan rendemen ekstrak etanol akar pasak bumi (Eurycoma longifolia Jack)

58

Lampiran 6. Perhitungan Dosis DMBA, Doxorubicin dan Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Akar Pasak Bumi

59

Lampiran 7. Prosedur Pembuatan Blok Parafin dan Pengecatan IHC

61

Lampiran 8. Hasil Pengecatan Imunohistokimia dengan Antibodi IL-10

63

Lampiran 9. Data ekspresi IL-10 tikus SD yang diinduksi DMBA oleh pengaruh fraksi etil asetat ekstrak etanol akar pasak bumi

67

Lampiran 10. Hasil Pengolahan data Menggunakan SPSS

68

xiii

DAFTAR SINGKATAN

APC

: Antigen Presenting Cell

CD4+/CD8+

: Cluster of Differentiation 4/Cluster of Differentiation 8

DAB

: Diaminobenzidine tetrachloride

DMBA

: 7,2-Dimetilbeza(a)ntrasen

DNA

: Deoxyribonucleic Acid

IFNγ

: Interferon γ

IL-2

: Interleukin-2

IL-12

: Interleukin-12

IL-14

: Interleukin-14

KLT

: Kromatografi Lapis Tipis

mEH

: microsomal Epoxide Hydrolase

NK

: Natural Killer

PAH

: Policyclic Aromatic Hidrocarbons

PBS

: Phosphate Buffered Saline

R f

: Retardation Factor

RNA

: Ribonucleic Acid

SD

: Sprague Dawley

TRAIL

: tumour-necrosis-factor-a-related apoptosis-inducing ligand

xiv

INTISARI

Kanker payudara merupakan salah satu penyebab kematian tertinggi di dunia. Salah satu faktor penyebanya yaitu karsinogen DMBA. Pengobatan kanker menggunakan doxorubicin memiliki efek samping imunosupresi melalui penurunan proliferasi limfosit sehingga produksi IL-10 menurun. Fraksi etil asetat ekstrak etanol akar pasak bumi memiliki potensi sebagai imunomodulator melalui peningkatan proliferasi limfosit sehingga IL-10 dapat meningkat. Tujuan dari penelitian ini yaitu mengetahui kombinasi fraksi etil asetat ekstrak etanol akar pasak bumi (APB) dengan doxorubicin terhadap ekspresi IL-10 pada tikus betina galur SD yang diinduksi DMBA. Akar pasak bumi diekstraksi menggunakan etanol 70% kemudian difraksinasi menggunkan etil asetat dan diuji KLT. Sebanyak 56 hewan uji dibagi menjadi 8 kelompok, yaitu I. normal; II. APB 100 mg/kgBB; III. doxorubicin 1,12 mg/kgBB; IV. DMBA 20 mg/kgBB; V. DMBA dan doxorubicin; VI. DMBA dan APB; VII. DMBA, APB dan doxorubicin; dan VIII. APB dan doxorubicin. Pemberian DMBA dua kali sepekan selama lima pekan pertama secara p.o, doxorubicin dua kali sepekan selama lima pekan dimulai pekan keenam secara i.p, dan APB setiap hari selama sepuluh pekan dimulai pekan keenam. Ekspresi IL-10 pada organ payudara diamati dengan metode imunohistokimia pada pekan ke enam belas.

Hasil penelitian menunjukkan fraksi etil asetat ekstrak etanol akar pasak bumi mengandung senyawa eurycomanone dengan R f 0.55. Hasil ekspresi IL-10 pada masing-masing kelompok yaitu I (38.72±6.00), II (41.61±9.31), III (29.87±7.36), IV (25.31±4.63), V (28.79±6.38), VI (31.24±6.92), VII (35.79±5.49), dan VIII (36.57±7.74). Ekspresi IL-10 kemudian dianalisis statistik menggunakan uji ANOVA. Kelompok IV dan V memiliki perbedaan yang signifikan dengan kelompok I, namun tidak ada perbedaan signifikan (p<0.05) antara kelompok VII dengan kelompok normal. Kesimpulan penelitian ini yaitu kombinasi fraksi etil asetat ekstrak etanol akar pasak bumi dengan doxorubicin tidak meningkatkan ekspresi IL-10 secara signifikan pada tikus betina galur SD yang diinduksi DMBA.

Keyword: kanker payudara,DMBA, doxorubicin, akar pasak bumi, IL-10

xv

ABSTRACT

Breast cancer is one of the causes of death in the world. One factor that causes cancer is carcinogen DMBA. Treatment of cancer using doxorubicin has the side effect of immunosuppression through the reduction of lymphocyte proliferation resulting in the production of IL-10 decreased. Ethyl acetate fraction of ethanol extract of the pasak bumi roots has potential as immunomodulators through increased proliferation of lymphocytes and IL-10 can be increased. The purpose of this research is to know the combination of ethyl acetate fraction of ethanol extract of the pasak bumi roots (APB) with doxorubicin against IL-10 expression in DMBA induced SD female rats. The pasak bumi roots extracted using 70% ethanol and then fractionated using the ethyl acetate and tested TLC. A total of 56 test animals were divided into eight groups, namely I. normal; II. APB 100 mg / kg; III. doxorubicin 1.12 mg / kg; IV. DMBA 20 mg / kg; V. DMBA and doxorubicin; VI. DMBA and APB; VII. DMBA, APB and doxorubicin; and VIII. APB and doxorubicin. DMBA induced twice weekly during the first five weeks in p.o, doxorubicin twice a week for five weeks starting the sixth week i.p, and APB every day for ten weeks starting the sixth week. Expression of IL-10 in breast organ observed by immunohistochemical methods at sixteenth week. The results showed ethyl acetate fraction of ehanolic extract of pasak bumi roots containing eurycomanone with R f 0.55. The results of the expression of IL-10 in each group is I (38.72 ± 6.00), II (41.61 ± 9:31), III (29.87 ± 7:36), IV (25.31 ± 4.63), V (28.79 ± 6:38), VI ( 31.24 ± 6.92), VII (35.79 ± 5:49), and VIII (36.57 ± 7.74). Expression of IL-10 then statistically analyzed using ANOVA test. Group IV and V have a significant difference (p<0.05) with the normal group, but no significant difference (p>0.05) between groups VII with the normal group. The conclusion of this research is combination of ethyl acetate fraction of ethanolic extract of the pasak bumi roots with doxorubicin did not increase the expression of IL-10 significantly in DMBA induced SD female rats.

Keyword: breast cancer, DMBA, doxorubicin, the pasak bumi roots, IL-10

xvi