POTENSI ANTIKANKER KOMBINASI

FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOL

AKAR PASAK BUMI (Eurycoma longifolia Jack) DENGAN
DOXORUBICIN TERHADAP EKSPRESI INTERLEUKIN-10
PADA TIKUS BETINA GALUR SPRAGUE DAWLEY
YANG DIINDUKSI DMBA

SKRIPSI

Oleh:
Gika Idfi Nugrahani
12023227

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS AHMAD DAHLAN
YOGYAKARTA
2016

POTENSI ANTIKANKER KOMBINASI

FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOL
AKAR PASAK BUMI (Eurycoma longifolia Jack) DENGAN
DOXORUBICIN TERHADAP EKSPRESI INTERLEUKIN-10
PADA TIKUS BETINA GALUR SPRAGUE DAWLEY
YANG DIINDUKSI DMBA

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat dalam

Mencapai Derajat Sarjana Farmasi (S. Farm)
Program Studi Ilmu Farmasi
Universitas Ahmad Dahlan
Yogyakarta

Oleh:
Gika Idfi Nugrahani
12023227

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS AHMAD DAHLAN
YOGYAKARTA
2015

HALAMAN PENGESAHAN SKRIPSI

ii

Lampiran 2
PERNYATAAN TIDAK PLAGIAT
Saya yang bertanda tangan di bawah ini:
Nama
: Gika Idfi Nugrahani
NIM
: 12023227
Email : gikaidfi33@gmail.com
Fakultas
: Farmasi
Program Studi : Farmasi
Judul tugas akhir : Potensi Antikanker Kombinasi Fraksi Etil Asetat Ekstrak
Etanol Akar Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack) dengan
Doxorubicin terhadap Ekspresi IL-10 pada Tikus Betina Galur
Sprague Dawley yang Diinduksi DMBA
Dengan ini menyatakan bahwa:
1. Hasil karya yang saya serahkan ini adalah asli dan belum pernah diajukan
untuk mendapatkan gelar kesarjanaan baik di Universitas Ahmad Dahlan
maupun di institusi pendidikan lainnya.
2. Hasil karya saya ini bukan saduran/terjemahan melainkan merupakan
gagasan, rumusan, dan hasil pelaksanaan penelitian/implementasi saya
sendiri, tanpa bantuan pihak lain, kecuali arahan pembimbing akademik dan
narasumber penelitian.
3. Hasil karya saya ini merupakan hasil revisi terakhir setelah diujikan yang
telah diketahui dan disetujui oleh pembimbing.
4. Dalam karya saya ini tidak terdapat karya atau pendapat yang telah ditulis
atau dipublikasikan orang lain, kecuali yang digunakan sebagai acuan dalam
naskah dengan menyebutkan nama pengarang dan dicantumkan dalam
daftar pustaka.
Pernyataan ini saya buat dengan sesungguhnya. Apabila di kemudian hari terbukti
ada penyimpangan dan ketidakbenaran dalam pernyataan ini maka saya bersedia
menerima sanksi akademik berupa pencabutan gelar yang telah diperoleh karena
karya saya ini, serta sanksi lain yang sesuai dengan ketentuan yang berlaku di
Universitas Ahmad Dahlan.
Yogyakarta, 11 April 2016

Gika Idfi Nugrahani

iii

iv

PERNYATAAN

Yang bertandatangan di bawah ini:

Nama

: Gika Idfi Nugrahani

NIM

: 12023227

Program Studi

: S1 Farmasi

Fakultas

: Farmasi

Judul Penelitian

: Potensi Antikanker Kombinasi Fraksi Etil Asetat Ekstrak

Etanol Akar Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack) dengan
Doxorubicin Terhadap Ekspresi Interleukin-10 pada Tikus
Betina Galur Sparague Dawley yang Diinduksi DMBA

Menyatakan dengan sebenar-benarnya bahwa penelitian ini adalah hasil karya

sendiri dan sepanjang pengetahuan saya tidak bersifat materi yang dipublikasikan
atau ditulis orang lain atau digunakan untuk menyelesaikan studi di perguruan
tinggi lain kecuali pada bagian-bagian tertentu yang saya ambil sebagai acuan.
Apabila terbukti pernyataan ini tidak benar, sepenuhnya menjadi tanggung jawab
saya.

Yogyakarta, 09 Februari 2016

Yang menyatakan

Gika Idfi Nugrahani

12023227

HALAMAN PERSEMBAHAN

Karya ini ku persembahkan untuk:

Allah SWT yang Maha Pengasih dan Pemurah
Atas izin dari Nya skripsi ini dapat terselesaikan, rasa syukur atas semua
kemudahan dan petunjuk yang telah diberikan oleh Nya.
Kedua orang tuaku, Bapak Tugino dan Ibu Ikah Imtikhanah
Terima kasih selalu memberikan doa disetiap sujudmu, dukungan, nanormal, dan
motivasi serta segala kasih sayang yang senantiasa mengalir setiap detiknya.
Semoga Allah SWT memberikan kenormalan dan rahmat-Nya kepada kita semua.
Adikku, Gina Isna Nafisa
Terimakasih atas pengertian dan dukungannya.
Sahabat-sahabat seperjuangan, Jetli, Titik, Fitri, Melinda, Asahi, Amar,
Ahya, Farih, Fatin, Ema, Amar, Okta, Hanif, Ikhsan, Anas, Kak Fuad, Kak
Ambon, dan HW UAD, alamamater 86, Kelas C 2012, FKK B 2012, tim
hibah pasca Balqis, Dwi, Yeni, Dian, Septi, Nopia, Anggi, Cici, Luthfi
Terimakasih telah menemaniku dikala suka maupun duka.
Dosen Pembimbingku Ibu Dr. Laela Hayu Nurani, M.Si., Apt
yang telah meluangkan waktu untuk berbagi ilmu dan membimbingku dengan
sabar selama ini sehingga bisa menyelesaikan skripsi ini.
Semua penderita kanker di dunia
Dosen Farmasi UAD dan Almamaterku

vi

KATA PENGANTAR
Assalamualaikum Wr.Wb.
Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT yang telah
melimpahkan rahmat, hidayah dan karunia-Nya sehingga skripsi yang berjudul
Potensi Antikanker Kombinasi Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Akar Pasak Bumi
(Eurycoma longifolia Jack) dengan Doxorubicin Terhadap Ekspresi IL-10 Pada
Tikus Betina Galur Sprague Dawley (SD) yang Dipapar DMBA ini dapat
diselesaikan.
Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat dalam mencapai derajat Sarjana
Farmasi (S.Farm) pada Program Studi Farmasi, Fakultas Farmasi Universitas
Ahmad Dahlan Yogyakarta. Penelitian ini merupakan salah satu bagian proyek
hibah tim pascasarjana Universitas Ahmad Dahlan yang berjudul Potensi Efek
Antikanker Kombinasi Fraksi Etil Asetat Akar Pasak Bumi (Eurycoma longifolia
Jack) dengan Obat Kemoterapi Kanker yang diketuai oleh Dr. Laela Hayu Nurani,
M.Si., Apt.
Kanker payudara merupakan salah satu penyebab kematian tertinggi di
dunia. Penggunaan jangka panjang agen kemoterapi doxorubicin sering
menimbulkan berbagai efek samping yang tidak diinginkan salah satunya adalah
penurunan sistem imun. Oleh karena itu dibutuhkan suatu agen ko-kemoterapi
untuk mengurangi toksisitasnya. Akar pasak bumi diketahui memiliki zat aktif
eurycomanone sebagai antikanker dengan mekanisme imunomodulator. Penelitian
ini bertujuan untuk mengetahui efek ko-kemoterapi fraksi etil asetat ekstrak etanol
akar pasak bumi dengan doxorubicin dilihat dari ekpresi IL-10 pada hewan uji yang
diinduksi DMBA.
Tersusunnya skripsi ini tidak lepas dari bantuan, dorongan, bimbingan, serta
nasihat, dari berbagai pihak untuk itu penulis mengucapkan terima kasih kepada:
1. Dr. Laela Hayu Nurani, M.Si., Apt. Selaku Dosen Pembimbing Utama yang

telah memberikan bimbingan, pengarahan, dan semangat dari awal penulisan

skripsi hingga terselesaikannya skripsi ini.
2. Dr. Nurkhasanah, M.Si., Apt Sebagai Dosen Penguji I yang telah memberikan
pengarahan dan saran untuk penyusunan skripsi ini.
vii

3. Dr. Kintoko, S.F., M.Sc., Apt sebagai Dosen Penguji II yang telah memberikan
pengarahan dan saran untuk penyusunan skripsi ini.
4. Drs. Kasiyarno, M. Hum. selaku Rektor Universitas Ahmad Dahlan
Yogyakarta.
5. Dr. Dyah Aryani Perwitasari, M.Si., Ph.D., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Ahmad Dahlan
6. Ibu Imaniar Noor Faridah, M.Si., Apt. selaku Dosen wali yang senantiasa
memberikan bimbingan dan nanormal akademik.
7. Bapak dan Ibu Dosen Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan yang telah
memberikan bekal ilmunya kepada penulis selama proses studi.
8. Bapak Yunadir di Laboratorium Patologi Anatomi FK UGM, atas kerjasama
beliau dalam pembuatan preparat mikroskopik
9. Keluarga besar Bapak Tugino dan Ibu Ikah Imtikhanah yang dengan penuh
kasih sayang dan kesabaran telah memberikan segala bentuk dukungan moril
dan materiil kepada penulis untuk menyelesaikan studi.
10. Dian, Septi, Balqis, Anggi, Cici, Fitri, Yeni, Nopia, Dwi, Melinda dan Lutfi ,
terima kasih atas kerjasama, bantuan dan motivasi kalian.
11. Teman-teman angkatan 2012, khususnya kelas C & FKKB Fakultas Farmasi
UAD, almamater 86, HW UAD, dan berbagai pihak yang tidak dapat disebutkan
satu persatu yang telah membantu sehingga skripsi ini dapat terselesaikan.
Semoga Allah SWT memberikan balasan yang lebih baik atas semua yang
telah diberikan kepada penulis. Penulis menyadari bahwa dalam penulisan skripsi
ini masih jauh dari kesempurnaan. Dengan kerendahan hati, penulis berharap
semoga hasil penelitian ini dapat memberikan manfaat bagi perkembangan ilmu
farmasi khususnya dan ilmu pengetahuan pada umumnya, bagi penyusun maupun
pembaca.
Wassalamualaikum, Wr., Wb.
Yogyakarta, 11 April 2016

Gika Idfi Nugrahani

viii

ix

DAFTAR TABEL
Tabel I. Berat rendemen ekstrak etanol akar pasak bumi ............................
Tabel II. Perbandingan Rf standar, fraksi etil asetat ekstrak etanol akar
pasak bumi dan ekstrak etanol akar pasak bumi.............................
Tabel III. Persen Rata-rata Ekspresi IL-10 pada Masing-masing Kelompok
Hewan Uji Aktivitas Ko-Kemoterapi Fraksi Etil Asetat Akar Pasak
Bumi dengan Doxorubicin .............................................................

xi

33
36

39

DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Metabolisme metabolit DMBA yang menyebabkan imunosupresif
(Gao et al., 2007) ..........................................................................
Gambar 2. Struktur Kimia Doxorubicin (Bruton et al., 2005) ........................
Gambar 3. Tanaman Akar Pasak Bumi (Anonim, 2008) ................................
Gambar 4. Struktur Kimia Eurycomanone (Chan et al., 2004) ......................
Gambar 5. Kerangka berfikir penelitian..........................................................
Gambar 6. Rancangan Penelitian Potensi Antikanker Kombinasi Fraksi til
Asetat Ekstrak Etanol Akar Pasak Bumi terhadap Ekspresi IL-10
pada Tikus Betina Galur SD yang Dipapar DMBA. ....................
Gambar 7. Rumus Perhitungan Ekspresi IL-10 ..............................................
Gambar 8. Profil kromatografi lapis tipis UV 366 nm dengan elusi dari bawah
ke atas pada skala 1-8 cm, a. Standar kuersetin, b. Fraksi larut etil
asetat akar pasak bumi, c. Ekstrak etanol akar pasak bumi ..........
Gambar 9. Foto Mikroskopi Hasil Pengecatan Imunohistokimia IL-10. ........
Gambar 10. Ekspresi IL-10 Kombinasi Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Akar
Pasak Bumi dan Doxorubicin pada Tikus Betina Galur SD yang
Diinduksi DMBA ..........................................................................

xii

7
10
13
14
20

21
30

35
38

41

DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran
Lampiran
Lampiran
Lampiran

1. Surat Ethical Clearance................................................................

2. Surat Izin Penelitian......................................................................
3. Hasil Determinasi Akar Pasak Bumi ............................................
4. Proses Pembuatan Fraksi etil asetat ekstak etanol akar pasak
bumi ..............................................................................................
Lampiran 5. Perhitungan rendemen ekstrak etanol akar pasak bumi
(Eurycoma longifolia Jack) ..........................................................
Lampiran 6. Perhitungan Dosis DMBA, Doxorubicin dan Fraksi Etil Asetat
Ekstrak Etanol Akar Pasak Bumi..................................................
Lampiran 7. Prosedur Pembuatan Blok Parafin dan Pengecatan IHC ..............
Lampiran 8. Hasil Pengecatan Imunohistokimia dengan Antibodi IL-10 ........
Lampiran 9. Data ekspresi IL-10 tikus SD yang diinduksi DMBA oleh
pengaruh fraksi etil asetat ekstrak etanol akar pasak bumi ...........
Lampiran 10. Hasil Pengolahan data Menggunakan SPSS ................................

xiii

53
54
55
57
58
59
61
63
67
68

DAFTAR SINGKATAN
APC

: Antigen Presenting Cell

CD4+/CD8+ : Cluster of Differentiation 4/Cluster of Differentiation 8

DAB

: Diaminobenzidine tetrachloride

DMBA

: 7,2-Dimetilbeza(a)ntrasen

DNA

: Deoxyribonucleic Acid

IFN

: Interferon

IL-2

: Interleukin-2

IL-12

: Interleukin-12

IL-14

: Interleukin-14

KLT

: Kromatografi Lapis Tipis

mEH

: microsomal Epoxide Hydrolase

NK

: Natural Killer

PAH

: Policyclic Aromatic Hidrocarbons

PBS

: Phosphate Buffered Saline

Rf

: Retardation Factor

RNA

: Ribonucleic Acid

SD

: Sprague Dawley

TRAIL

: tumour-necrosis-factor-a-related apoptosis-inducing ligand

xiv

INTISARI
Kanker payudara merupakan salah satu penyebab kematian tertinggi di
dunia. Salah satu faktor penyebanya yaitu karsinogen DMBA. Pengobatan kanker
menggunakan doxorubicin memiliki efek samping imunosupresi melalui
penurunan proliferasi limfosit sehingga produksi IL-10 menurun. Fraksi etil asetat
ekstrak etanol akar pasak bumi memiliki potensi sebagai imunomodulator melalui
peningkatan proliferasi limfosit sehingga IL-10 dapat meningkat. Tujuan dari
penelitian ini yaitu mengetahui kombinasi fraksi etil asetat ekstrak etanol akar pasak
bumi (APB) dengan doxorubicin terhadap ekspresi IL-10 pada tikus betina galur
SD yang diinduksi DMBA.
Akar pasak bumi diekstraksi menggunakan etanol 70% kemudian
difraksinasi menggunkan etil asetat dan diuji KLT. Sebanyak 56 hewan uji dibagi
menjadi 8 kelompok, yaitu I. normal; II. APB 100 mg/kgBB; III. doxorubicin 1,12
mg/kgBB; IV. DMBA 20 mg/kgBB; V. DMBA dan doxorubicin; VI. DMBA dan
APB; VII. DMBA, APB dan doxorubicin; dan VIII. APB dan doxorubicin.
Pemberian DMBA dua kali sepekan selama lima pekan pertama secara p.o,
doxorubicin dua kali sepekan selama lima pekan dimulai pekan keenam secara i.p,
dan APB setiap hari selama sepuluh pekan dimulai pekan keenam. Ekspresi IL-10
pada organ payudara diamati dengan metode imunohistokimia pada pekan ke enam
belas.
Hasil penelitian menunjukkan fraksi etil asetat ekstrak etanol akar pasak
bumi mengandung senyawa eurycomanone dengan Rf 0.55. Hasil ekspresi IL-10
pada masing-masing kelompok yaitu I (38.726.00), II (41.619.31), III
(29.877.36), IV (25.314.63), V (28.796.38), VI (31.246.92), VII (35.795.49),
dan VIII (36.577.74). Ekspresi IL-10 kemudian dianalisis statistik menggunakan
uji ANOVA. Kelompok IV dan V memiliki perbedaan yang signifikan dengan
kelompok I, namun tidak ada perbedaan signifikan (p<0.05) antara kelompok VII
dengan kelompok normal.
Kesimpulan penelitian ini yaitu kombinasi fraksi etil asetat ekstrak etanol
akar pasak bumi dengan doxorubicin tidak meningkatkan ekspresi IL-10 secara
signifikan pada tikus betina galur SD yang diinduksi DMBA.
Keyword: kanker payudara,DMBA, doxorubicin, akar pasak bumi, IL-10

xv

ABSTRACT
Breast cancer is one of the causes of death in the world. One factor that causes
cancer is carcinogen DMBA. Treatment of cancer using doxorubicin has the side
effect of immunosuppression through the reduction of lymphocyte proliferation
resulting in the production of IL-10 decreased. Ethyl acetate fraction of ethanol
extract of the pasak bumi roots has potential as immunomodulators through
increased proliferation of lymphocytes and IL-10 can be increased. The purpose of
this research is to know the combination of ethyl acetate fraction of ethanol extract
of the pasak bumi roots (APB) with doxorubicin against IL-10 expression in DMBA
induced SD female rats.
The pasak bumi roots extracted using 70% ethanol and then fractionated using
the ethyl acetate and tested TLC. A total of 56 test animals were divided into eight
groups, namely I. normal; II. APB 100 mg / kg; III. doxorubicin 1.12 mg / kg; IV.
DMBA 20 mg / kg; V. DMBA and doxorubicin; VI. DMBA and APB; VII. DMBA,
APB and doxorubicin; and VIII. APB and doxorubicin. DMBA induced twice
weekly during the first five weeks in p.o, doxorubicin twice a week for five weeks
starting the sixth week i.p, and APB every day for ten weeks starting the sixth week.
Expression of IL-10 in breast organ observed by immunohistochemical methods at
sixteenth week.
The results showed ethyl acetate fraction of ehanolic extract of pasak bumi
roots containing eurycomanone with Rf 0.55. The results of the expression of IL-10
in each group is I (38.72 6.00), II (41.61 9:31), III (29.87 7:36), IV (25.31
4.63), V (28.79 6:38), VI ( 31.24 6.92), VII (35.79 5:49), and VIII (36.57
7.74). Expression of IL-10 then statistically analyzed using ANOVA test. Group IV
and V have a significant difference (p<0.05) with the normal group, but no
significant difference (p>0.05) between groups VII with the normal group.
The conclusion of this research is combination of ethyl acetate fraction of
ethanolic extract of the pasak bumi roots with doxorubicin did not increase the
expression of IL-10 significantly in DMBA induced SD female rats.
Keyword: breast cancer, DMBA, doxorubicin, the pasak bumi roots, IL-10

xvi